一种复合辅酶药的制备方法及其复合辅酶药和临床的用途.pdf

本发明涉及一种复合辅酶药的制备方法及其复合辅酶药和临床的用途，属于医药技术领域，本发明的复合辅酶药，其辅酶成分含有辅酶A(CoA)、辅酶I(NAD)、谷胱苷肽(GSH)，腺三磷(ATP)其特征在于，还含有黄素单核苷酸(FMN)、黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)、腺二磷(ADP)、腺一磷(AMP)、腺苷蛋氨酸(SAM)。本发明通过改变已有的复合辅酶的生产工艺，使得原复合辅酶药物产品中的辅酶物质从原有的四种增加到九种；该复合辅酶能保护肝细胞、心肌细胞等多种细胞，维持或恢复其正常代谢，使它能用于心脏、肝脏手术，肝损伤恢复，射线或化疗引起的细胞损伤恢复等临床治疗。

1、  一种复合辅酶药制备方法，包括以下步骤：
1)将新鲜酵母加5-8倍PH值为PH3.0～5.0、0.01M～0.03M醋酸缓冲溶液制成酵母细胞悬液；
2)用高压均质机在70～150Mpa压力破碎酵母细胞的细胞壁，破碎时温度维持在0℃～20℃；
3)将破碎后的酵母细胞悬液冷冻离心，冷冻离心条件为0℃～5℃，速度为20000～35000CPM，时间30～60分钟，得到清液；
4)用活性炭吸附滤出液，用含2.0～3.5％氨的40％乙醇溶液洗脱；
5)采用离子交换层析：将解析液调PH7.5-9.0，上阴离子交换柱，用PH8.0～9.0，0.01～0.03M磷酸缓冲液溶液洗脱；
6)洗脱液经截流分子量为5000-10000超滤；
7)超滤液经纳滤或反渗透去H₂O，浓缩至原体积1/5-1/10，调PH2.5～3.5，加5～10倍体积，-10℃～-20℃冷丙酮，收集沉淀；
9)沉淀溶于水后除菌灌封、冻干。

2、  如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述新鲜酵母菌为新鲜的啤酒酵母、面包酵母、食用酵母或白地霉之一种。

3、  采用如要求1所述制备方法的复合辅酶药，其辅酶成分含有辅酶A、辅酶I、谷胱苷肽、腺三磷，其特征在于，还含有黄素单核苷酸、黄素腺嘌呤二核苷酸、腺二磷、腺一磷、腺苷蛋氨酸。

4、  如权利要求3所述的复合辅酶，其特征在于，所述辅酶成分的浓度如下：
FAD                 2～20ug/ml
FMN                 2～20ug/ml
ADP                 0.1～0.5mg/ml
AMP                 0.1～0.5mg/ml
SAM                 1～20ug/ml
CoA                 100～300U/ml、
NAD                 0.1～0.5mg/ml、
ATP                 0.1～2.5mg/ml
GSH                 1～5mg/ml

5、  如权利要求3所述的的复合辅酶，其特征在于所述辅酶中ATP、ADP、AMP的比例是E：
E = ATP + 1 / 2 ADP ATP + ADP + AMP = 0.30 ~ 0.95 ]]>之间

6、  一种如权利要求3所述的复合辅酶不但用于急慢性肝炎、原发性血小板减少性紫癜、血小板减少症，作为冠状动脉硬化、慢性动脉炎、心肌梗塞、肾功能衰弱引起的少尿、尿毒症的辅助治疗药，还用于心脏手术、心肌缺氧、脑缺氧、农药中毒、放射线病的治疗药物，及心肌细胞、肝脏细胞和神经细胞的缺氧损伤、物理和化疗损伤的保护药物。

一种复合辅酶药的制备方法及其复合辅酶药和临床的用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，特别涉一种新的复合辅酶药的制备方法及一种新型复合辅酶药和临床的新用途。
背景技术
70年代研制出一种注射用复合辅酶冻干粉针剂，它是一种从酵母菌(啤酒酵母、食用酵母和白地霉)中提取，含有辅酶A(CoA)、辅酶I(NAD)，ATP和谷胱甘肽的天然辅酶复合制剂。长期以来用于治疗急慢性肝炎、原发性血小板减少性紫癜、血小板减少症，对冠状动脉硬化、慢性动脉炎、心肌梗塞、肾功能衰弱引起的少尿、尿毒症等可作为辅助治疗药。
酵母是单细胞真核生物，其细胞中含有糖、脂肪、蛋白质、核酸等生物物质代谢(合成和分解)必须的各种辅酶。但由于原生产工艺使用了加热破壁，真空减压浓缩，透析等老生产工艺，导致多种辅酶失活及降解破坏，从而影响了其辅酶种和临床应用地范围。
发明内容
本发明的目的是为克服已有技术的不足之处，提出一种新的复合辅酶药的制备方法及其复合辅酶药和临床的用途，通过改变已有的复合辅酶的生产工艺，使得原复合辅酶药物产品中的辅酶物质从原有的四种增加到九种；该复合辅酶能保护多种细胞免受缺氧损伤，维持或恢复其正常代谢，使它能用于心脏、肝脏手术，肝损伤恢复，射线或化疗引起的细胞损伤恢复等临床治疗。
本发明提出的一种复合辅酶药制备方法，包括以下步骤：
1)将新鲜酵母加5-8倍PH值为PH3.0～5.0、0.01M～0.03M醋酸缓冲溶液制成酵母细胞悬液；
2)用高压均质机在70～150Mpa压力破碎酵母细胞的细胞壁，破碎时温度维持在0℃～20℃；
3)将破碎后的酵母细胞悬液冷冻离心，冷冻离心条件为0℃～5℃，速度为20000～35000CPM，时间30～60分钟，得到清液；
4)用活性炭吸附滤出液，浓缩用含2.0～3.5％氨的40％乙醇溶液洗脱；
5)采用离子交换层析：将解析液调PH7.5-9.0，上阴离子交换柱，用PH8.0～9.0，0.01～0.03M磷酸缓冲液溶液洗脱；
6)洗脱液经截流分子量为5000-10000超滤；
7)超滤液经纳滤或反渗透去H₂O，浓缩至原体积1/5-1/10，调PH2.5～3.5，加5～10倍体积，-10℃～-20℃冷丙酮，收集沉淀；
9)沉淀溶于水后除菌灌封、冻干。
采用上述制备方法的复合辅酶药，其辅酶成分含有辅酶A(CoA)、辅酶I(NAD)、谷胱苷肽(GSH)，腺三磷(ATP)其特征在于，还含有黄素单核苷酸(FMN)、黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)、腺二磷(ADP)、腺一磷(AMP)、腺苷蛋氨酸(SAM)。
上述的复合辅酶不但用于急慢性肝炎、原发性血小板减少性紫癜、血小板减少症，作为冠状动脉硬化、慢性动脉炎、心肌梗塞、肾功能衰弱引起的少尿、尿毒症的辅助治疗药，还用于心脏手术、心肌缺氧、脑缺氧、农药中毒、放射线病的治疗药物及各种组织细胞的缺氧损伤、物理和化学损伤的保护药物。
本发明的特点及效果：
本发明的制备方法使用了高压均质机破碎细胞代替原来的加热破壁；使用超滤技术代替原来的透析法；使用反透析和纳滤代替原来的真空减压浓缩；使得原复合辅酶药物产品中的辅酶物质从原有的四种增加到九种，并经动物实验表明新复合辅酶能保护多种细胞免受缺氧、自由基损伤，维持或恢复其正常代谢，使它能用于心脏、肝脏手术，肝损伤恢复，射线、化疗和手术引起的细胞损伤恢复等临床治疗。
具体实施方式
实施例1：
新鲜面包酵母加5倍PH4.0 0.01M醋酸缓冲溶液制成酵母细胞悬液；用高压均质机在100Mpa压力破碎酵母细胞，维持细胞悬液20℃以下；5℃条件下将破碎后的酵母细胞悬液冷冻离心，速度为20000CPM离心60分钟得清液；活性炭吸附，用含2％氨的40％氨乙醇溶液解吸，解吸液调PH8.0，上Ambrite IRC50离子交换柱，用PH8.5，0.02M磷酸液冲液洗脱；洗脱液用截流分子量8000的超滤器超滤，滤出液经纳滤浓缩去H₂O，浓缩至原体积1/10，调PH3.5，加5倍体积，-10℃冷丙酮沉淀，收集沉淀，溶于无热原水中，除菌灌封、冻干。
测定各有机成分的浓度，除菌封冻干。
产品分析结果：