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高活性蚓激酶干粉的制备方法
    【技术领域】

    本发明涉及一种利用蚯蚓制取蚓激酶的方法，特别是一种高活性蚓激酶干粉的制备方法。背景技术

    从中医文献记载来看，蚯蚓有多种药理作用，如降压、平喘、解热、利尿、镇静抗惊厥、通络、杀精、兴奋子宫、溶栓解毒生肌、抗过敏、抗菌及抗癌等。采用鲜活蚯蚓为原料，提取的具有生物活性的蛋白酶，一般称为蚓激酶。蚓激酶具有降解血液中的纤维蛋白，改善血小板聚集等功能，具有显著的抗凝、纤溶、抗血栓及溶血栓作用，适应于心脑血管病的预防和治疗。目前利用蚯蚓生产蚯蚓干粉和蚓酸酶的方法很多，如中国专利局2000年4月12日公告的《活性地龙干粉的制备方法》专利申请，授权公告号为CN1051229C。该专利申请公开了一种制备地龙干粉的方法，该方法是通过将鲜活蚯蚓冼净后冻成冰块，然后放在盐水溶液中溶解，并自溶搅拌成浆，得到的匀浆液至少进行一次离心处理后，将上清液进行预过滤灭菌和超过滤浓缩后得干粉，该方法主要目的是提供了一种能彻底去除蚯蚓粪便及有害元素，充分保留蚯蚓有效成份，但该方法制成的蚯蚓干粉的成份是蚯蚓地混合成份，不是单一成份，并且其产品的活性较低。发明内容

    本发明方法具有工艺路线短，设备投资小，易于工业化生产的特点，该方法制取的蚓激酶具有活性高，以脲激酶为对照活性高达260uk/mg，生产收率可达3.5％左右。

    本发明是通过以下技术方案实现的：

    一种高活性蚓激酶干粉的制备方法，其特征在于：

    a.将鲜活蚯蚓漂洗干净，沥干水后，加入鲜活蚯蚓1-4倍的盐水混合，搅拌成浆；

    b.将搅拌成浆状的蚯蚓液进行离心分离10-30分钟，将上清液收集后待用；

    c.将离心分离出的沉淀加入盐水洗涤后，进行离心分离10-30分钟后，收集上清液；

    d.将步骤b和c收集的上清液混合后，加入聚丙烯酸钠溶液，在0°-4℃静置6-24小时后，离心分离10-30分钟，并收集上清液；

    e.在收集的上清液中加入聚丙烯酸钠溶液，在0°-4℃静置6-24小时后，进行离心分离10-30分钟，并收集沉淀物；

    f.将沉淀物溶于水中，用膜分离方法超滤；

    g.将超滤后的滤液经低温干燥后，即得蚓激酶干粉。

    加入盐水的浓度为0.75-2％；加入聚丙烯酸钠溶液的浓度为0.5-40％。低温干燥优选真空冷冻干燥。具体实施方式

    取100kg鲜活蚯蚓，将鲜活蚯蚓用清水漂洗干净，沥干水份后，加1％浓度的盐水100kg与洗净沥干水份的鲜活蚯蚓混合，同时放入带搅拌的容器中搅拌成浆状，然后将浆状的蚯蚓液放入离心机中离心分离10分钟后，将上清液收集后待用；将离心分离出的沉淀再加入1％浓度的适量盐水，将沉淀洗涤物进行洗涤后，再次进行离心分离15分钟，收集上清液；将以上收集的上清液混合后，加入浓度为10％的聚丙烯酸钠溶液，在4℃静置24小时后，进行离心分离，离心分离时间为15分钟并收集上清液；在收集的上清液中再加入浓度为10％的聚丙烯酸钠溶液，在4℃静置12小时后，进行离心分离，并收集沉淀物；将沉淀物溶于清水中，用膜分离方法超滤；将超滤后的超滤液经真空冷冻干燥后，即经钴60照射灭菌后，得蚓激酶干粉即为成品。