一种千金子组织培养的快速繁殖方法.pdf

摘要
申请专利号：	CN201410540537.7	申请日：	2014.10.14
公开号：	CN104304014A	公开日：	2015.01.28
当前法律状态：	公开	有效性：	审中
法律详情：	公开
IPC分类号：	A01H4/00	主分类号：	A01H4/00
申请人：	南京帝道农业科技有限公司
发明人：	刘东锋; 杨成东
地址：	211225 江苏省南京市溧水区白马镇工业集中区
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内容摘要

本发明研究了一种千金子组织培养的快速繁殖方法，包括种子的消毒、无菌苗的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导等步骤，本发明方法所制备的千金子方便、快捷，能够快速的得到千金子幼苗，具有广阔的应用前景。

权利要求书

1.   一种千金子组织培养的快速繁殖方法，包括种子的消毒、无菌苗的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导，其主要步骤如下：
（1）取千金子饱满的种子，进行消毒处理；
（2）取步骤（1）消毒处理过的千金子种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度40μmol·m^-2·s^-1，光照时间12h/d；
（3）取步骤（2）长出的无菌苗长约5cm左右时，取子叶为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基MS+2,4-D1.0mg/L+KT0.2mg/L，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度20μmol·m^-2·s^-1，光照时间8h/d；
（4）取步骤（3）诱导出来的愈伤组织接入分化培养基MS+IAA0.1-0.2mg/L+TDZ1.5-2.0mg/L，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度45μmol·m^-2·s^-1，光照时间14h/d；
（5）取步骤（4）分化出来的芽苗长约3cm接入生根培养基1/3MS+2,4-D0.1-0.2mg/L+1%AC，附加蔗糖20g/L，琼脂7.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度100μmol·m^-2·s^-1，光照时间18h/d。

2.   按照权利要求1所述的一种千金子组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（1）中千金子种子的消毒方法为挑取饱满的千金子种子，剥去种子外壳，在70%的酒精中浸泡10min，0.1%的升汞消毒11min，然后用无菌水冲洗干净，无菌滤纸吸干。

3.   按照权利要求1所述的一种千金子组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（5）生根培养基中附加了AC，可以促进生根和防止愈伤化。

说明书

一种千金子组织培养的快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及千金子组织培养的快繁方法，属于植物栽培技术领域。
背景技术
千金子，别称续随子、打鼓子、一把伞，大戟科，EuphorbialathyrisL，一年生草本，高30～90厘米。秆丛生，上部直立，基部膝曲，具3-6节，光滑无毛。叶鞘大多短于节间，无毛；叶舌膜质，多撕裂，具小纤毛；叶片条状披针形，无毛，常卷折。花序圆锥状，分枝长，由多数穗形总状花序组成；小穗含3-7花，成2行着生于穗轴的一侧，常带紫色；颖具1脉，第二颖稍短于第一外稃；外稃具3脉，无毛或下部被微毛。颖果长圆形。幼苗淡绿色；第一叶长2-2．5毫米，椭圆形，有明显的叶脉，第二叶长5-6毫米；7-8叶出现分蘖和匍匐茎及不定根。为害作物：危害水稻、豆类、棉花等多种作物生态环境：生于向阳山坡。野生或栽培。资源分布：分布于黑龙江、吉林、辽宁、河北、山西、江苏、浙江、福建、台湾、河南、湖南、广西、四川、贵州、云南等地。种子含脂肪油48%-50%，油中含多种脂肪酸，主要有油酸89.2%，棕榈酸，辛、温；有毒。功能主治：逐水消肿，破血消症。用于水肿，痰饮，积滞胀满，二便不通，血瘀经闭；外治顽癣，疣赘。用种子进行常规种植。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种千金子的快速繁殖方法，由该方法所制备的千金子更加方便、快捷，能够快速的得到千金子幼苗，具有广阔的应用前景。
本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的：
挑取饱满的千金子种子，剥去种子外壳，在70%的酒精中浸泡10min，0.1%的升汞消毒11min，然后用无菌水冲洗干净，无菌滤纸吸干，消毒处理过的千金子种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度40μmol·m^-2·s^-1，光照时间12h/d，长出的无菌苗长约5cm左右时，取子叶为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基MS+2,4-D1.0mg/L+KT0.2mg/L，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度20μmol·m^-2·s^-1，光照时间8h/d，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基MS+IAA0.1-0.2mg/L+TDZ1.5-2.0mg/L，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度45μmol·m^-2·s^-1，光照时间14h/d，分化出来的芽苗长约3cm接入生根培养基1/3MS+2,4-D0.1-0.2mg/L+1%AC，附加蔗糖20g/L，琼脂7.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度100μmol·m^-2·s^-1，光照时间18h/d，30天后统计生根率。
采用本发明制备的千金子成活率高，周期短，产量大，污染小，利于大规模种植。
下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1
挑取饱满的千金子种子，剥去种子外壳，在70%的酒精中浸泡10min，0.1%的升汞消毒11min，然后用无菌水冲洗干净，无菌滤纸吸干，消毒处理过的千金子种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度40μmol·m^-2·s^-1，光照时间12h/d，长出的无菌苗长约5cm左右时，取子叶为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基MS+2,4-D1.0mg/L+KT0.2mg/L，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度20μmol·m^-2·s^-1，光照时间8h/d，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基MS+IAA0.1mg/L+TDZ1.5mg/L，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度45μmol·m^-2·s^-1，光照时间14h/d，分化出来的芽苗长约3cm接入生根培养基1/3MS+2,4-D0.1mg/L+1%AC，附加蔗糖20g/L，琼脂7.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度100μmol·m^-2·s^-1，光照时间18h/d，30天后统计生根率，生根率95%。
实施例2
挑取饱满的千金子种子，剥去种子外壳，在70%的酒精中浸泡10min，0.1%的升汞消毒11min，然后用无菌水冲洗干净，无菌滤纸吸干，消毒处理过的千金子种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度40μmol·m^-2·s^-1，光照时间12h/d，长出的无菌苗长约5cm左右时，取子叶为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基MS+2,4-D1.0mg/L+KT0.2mg/L，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度20μmol·m^-2·s^-1，光照时间8h/d，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基MS+IAA0.2mg/L+TDZ2.0mg/L，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度45μmol·m^-2·s^-1，光照时间14h/d，分化出来的芽苗长约3cm接入生根培养基1/3MS+2,4-D0.2mg/L+1%AC，附加蔗糖20g/L，琼脂7.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度100μmol·m^-2·s^-1，光照时间18h/d，30天后统计生根率，生根率93%。
实施例3
挑取饱满的千金子种子，剥去种子外壳，在70%的酒精中浸泡10min，0.1%的升汞消毒11min，然后用无菌水冲洗干净，无菌滤纸吸干，消毒处理过的千金子种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度40μmol·m^-2·s^-1，光照时间12h/d，长出的无菌苗长约5cm左右时，取子叶为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基MS+2,4-D1.0mg/L+KT0.2mg/L，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度20μmol·m^-2·s^-1，光照时间8h/d，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基MS+IAA0.2mg/L+TDZ2.0mg/L，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度45μmol·m^-2·s^-1，光照时间14h/d，分化出来的芽苗长约3cm接入生根培养基1/3MS+2,4-D0.1mg/L+1%AC，附加蔗糖20g/L，琼脂7.5g/L，pH5.8，温度25℃，相对湿度80%，光照强度100μmol·m^-2·s^-1，光照时间18h/d，30天后统计生根率，生根率92%。

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1、10申请公布号CN104304014A43申请公布日20150128CN104304014A21申请号201410540537722申请日20141014A01H4/0020060171申请人南京帝道农业科技有限公司地址211225江苏省南京市溧水区白马镇工业集中区72发明人刘东锋杨成东54发明名称一种千金子组织培养的快速繁殖方法57摘要本发明研究了一种千金子组织培养的快速繁殖方法，包括种子的消毒、无菌苗的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导等步骤，本发明方法所制备的千金子方便、快捷，能够快速的得到千金子幼苗，具有广阔的应用前景。51INTCL权利要求书1页说明书2页19中华人民共和。

2、国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书2页10申请公布号CN104304014ACN104304014A1/1页21一种千金子组织培养的快速繁殖方法，包括种子的消毒、无菌苗的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导，其主要步骤如下（1）取千金子饱满的种子，进行消毒处理；（2）取步骤（1）消毒处理过的千金子种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度40MOLM2S1，光照时间12H/D；（3）取步骤（2）长出的无菌苗长约5CM左右时，取子叶为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基MS2,4D10MG/L。

3、KT02MG/L，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度20MOLM2S1，光照时间8H/D；（4）取步骤（3）诱导出来的愈伤组织接入分化培养基MSIAA0102MG/LTDZ1520MG/L，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度45MOLM2S1，光照时间14H/D；（5）取步骤（4）分化出来的芽苗长约3CM接入生根培养基1/3MS2,4D0102MG/L1AC，附加蔗糖20G/L，琼脂75G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度100MOLM2S1，光照时间18H/D。2按照权利要求1所述的一种千金。

4、子组织培养的快速繁殖方法，其特征在于步骤（1）中千金子种子的消毒方法为挑取饱满的千金子种子，剥去种子外壳，在70的酒精中浸泡10MIN，01的升汞消毒11MIN，然后用无菌水冲洗干净，无菌滤纸吸干。3按照权利要求1所述的一种千金子组织培养的快速繁殖方法，其特征在于步骤（5）生根培养基中附加了AC，可以促进生根和防止愈伤化。权利要求书CN104304014A1/2页3一种千金子组织培养的快速繁殖方法技术领域0001本发明涉及千金子组织培养的快繁方法，属于植物栽培技术领域。背景技术0002千金子，别称续随子、打鼓子、一把伞，大戟科，EUPHORBIALATHYRISL，一年生草本，高3090厘米。。

5、秆丛生，上部直立，基部膝曲，具36节，光滑无毛。叶鞘大多短于节间，无毛；叶舌膜质，多撕裂，具小纤毛；叶片条状披针形，无毛，常卷折。花序圆锥状，分枝长，由多数穗形总状花序组成；小穗含37花，成2行着生于穗轴的一侧，常带紫色；颖具1脉，第二颖稍短于第一外稃；外稃具3脉，无毛或下部被微毛。颖果长圆形。幼苗淡绿色；第一叶长225毫米，椭圆形，有明显的叶脉，第二叶长56毫米；78叶出现分蘖和匍匐茎及不定根。为害作物危害水稻、豆类、棉花等多种作物生态环境生于向阳山坡。野生或栽培。资源分布分布于黑龙江、吉林、辽宁、河北、山西、江苏、浙江、福建、台湾、河南、湖南、广西、四川、贵州、云南等地。种子含脂肪油485。

6、0，油中含多种脂肪酸，主要有油酸892，棕榈酸，辛、温；有毒。功能主治逐水消肿，破血消症。用于水肿，痰饮，积滞胀满，二便不通，血瘀经闭；外治顽癣，疣赘。用种子进行常规种植。发明内容0003本发明所要解决的技术问题是提供一种千金子的快速繁殖方法，由该方法所制备的千金子更加方便、快捷，能够快速的得到千金子幼苗，具有广阔的应用前景。0004本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的挑取饱满的千金子种子，剥去种子外壳，在70的酒精中浸泡10MIN，01的升汞消毒11MIN，然后用无菌水冲洗干净，无菌滤纸吸干，消毒处理过的千金子种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30G/L，琼脂65G。

7、/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度40MOLM2S1，光照时间12H/D，长出的无菌苗长约5CM左右时，取子叶为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基MS2,4D10MG/LKT02MG/L，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度20MOLM2S1，光照时间8H/D，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基MSIAA0102MG/LTDZ1520MG/L，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度45MOLM2S1，光照时间14H/D，分化出来的芽苗长约3CM接入生根培养基1/3MS2,4D0102MG/L1AC，附。

8、加蔗糖20G/L，琼脂75G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度100MOLM2S1，光照时间18H/D，30天后统计生根率。0005采用本发明制备的千金子成活率高，周期短，产量大，污染小，利于大规模种植。0006下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。具体实施方式说明书CN104304014A2/2页40007实施例1挑取饱满的千金子种子，剥去种子外壳，在70的酒精中浸泡10MIN，01的升汞消毒11MIN，然后用无菌水冲洗干净，无菌滤纸吸干，消毒处理过的千金子种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30G/L，琼脂65。

9、G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度40MOLM2S1，光照时间12H/D，长出的无菌苗长约5CM左右时，取子叶为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基MS2,4D10MG/LKT02MG/L，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度20MOLM2S1，光照时间8H/D，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基MSIAA01MG/LTDZ15MG/L，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度45MOLM2S1，光照时间14H/D，分化出来的芽苗长约3CM接入生根培养基1/3MS2,4D01MG/L1AC，附加蔗糖20。

10、G/L，琼脂75G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度100MOLM2S1，光照时间18H/D，30天后统计生根率，生根率95。0008实施例2挑取饱满的千金子种子，剥去种子外壳，在70的酒精中浸泡10MIN，01的升汞消毒11MIN，然后用无菌水冲洗干净，无菌滤纸吸干，消毒处理过的千金子种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度40MOLM2S1，光照时间12H/D，长出的无菌苗长约5CM左右时，取子叶为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基MS2,4D10MG/LKT02MG/L，附加蔗糖30G/L，琼脂。

11、65G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度20MOLM2S1，光照时间8H/D，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基MSIAA02MG/LTDZ20MG/L，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度45MOLM2S1，光照时间14H/D，分化出来的芽苗长约3CM接入生根培养基1/3MS2,4D02MG/L1AC，附加蔗糖20G/L，琼脂75G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度100MOLM2S1，光照时间18H/D，30天后统计生根率，生根率93。0009实施例3挑取饱满的千金子种子，剥去种子外壳，在70的酒精中浸泡10MIN，01的。

12、升汞消毒11MIN，然后用无菌水冲洗干净，无菌滤纸吸干，消毒处理过的千金子种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度40MOLM2S1，光照时间12H/D，长出的无菌苗长约5CM左右时，取子叶为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基MS2,4D10MG/LKT02MG/L，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度20MOLM2S1，光照时间8H/D，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基MSIAA02MG/LTDZ20MG/L，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度45MOLM2S1，光照时间14H/D，分化出来的芽苗长约3CM接入生根培养基1/3MS2,4D01MG/L1AC，附加蔗糖20G/L，琼脂75G/L，PH58，温度25，相对湿度80，光照强度100MOLM2S1，光照时间18H/D，30天后统计生根率，生根率92。说明书CN104304014A。

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