针对植物病原体的无毒性/致病性蛋白的抗体 本发明在政府支持下完成，由美国农业部给予资助，许可号为86-CRCR-1-2234,58-43YR-5-3和58-7B30-3-465。政府在本发明中拥有一定权利。
【发明背景】
无毒性(avr)基因已在许多不同的微生物植物病原体中得到确定，并被预测将在病毒和昆虫中发现。avr基因最初在1942年(Flor,1942)由Flor描述并被证明或暗示存在于至少27种不同的植物寄主/寄生物系统中，包括锈菌、黑粉菌、腥黑穗病，霉病，疮痂病，线虫，昆虫，细菌，病毒，以及甚至其它植物所引起的疾病(Day,1974)。
avr基因经常是致病性基因。与毒性相反，害虫和病原体应携带无毒性的编码基因的想法一直是个谜，并且已提出了解释此谜的几种不同的有效假说(Gabriel和Rolfe,1990)。近期工作已表明avr基因的整个家族也是致病性的(pth)基因(Swarup等，1991,1992；Yang等，1994；Gabriel等，1993)。此黄单胞菌avr/pth基因家族包括目前已克隆和测序的最大数目的avr基因。
黄单胞菌avr/pth基因家族的全体成员编码具有细胞核定位信号(NLSs)的蛋白(Yang和Gabriel,1995)。这些基因已被证实对几种不同黄单胞菌的致病性是必不可少的。基因编码的NLSs的功能是指导蛋白质进入植物细胞核。其它已知avr/pth基因的已发表的推测肽序列的综述公开了这些基因也编码假定的NLSs。其中最著名的是真菌病原体黄枝胞的avr4(Joosten等，1996)，来自解淀粉欧文氏菌的hrpN(Wei等，1992)，以及来自丁香假单胞菌的hrpZ家族(致病型syringae,glycinea和西红柿；Preston等，1995)。携带NLSs的原型Avr/Pth蛋白是PthA和Avrb6，其代表了黄单胞菌avr/pth基因家族。最近，使用pthA和avrb6证明，柑桔蛀孔(pthA)和棉枯萎病症状分别需要这些基因编码的NLSs(Yang和Gabriel,1995和Gabriel实验室，未发表的)。此外，在发表的avr Bs3(Bonas等，1989)，avrXal(Hopkins等，1992)DNA序列以及在Florida大学本实验室对avrB4,pthB,pthC,pthP和pthN的工作中得到的所有未发表的DNA序列中，可以观察到几乎相同的NLSs。实际上，在所测的黄单胞菌avr/pth基因家族的全体成员中，NLS编码区域是保守的。已发表的和本实验室未发表的研究表明亚洲柑桔蛀孔病需要pthA或同源物(Swarup等，1992),False柑桔蛀孔病需要pthB或同源物，墨西哥Lime cancrosis需要pthC或同源物，细菌性的杨树蛀孔病需要pthC或同源物，以及普通的豆枯萎病需要pthP或同源物(Yang等，1996)。已知avrXa7也是黄单胞菌avr/pth基因家族的一个成员，并且它有助于水稻黄单胞菌的致病性(稻的细菌枯萎病；Leach等，1996)。通过我们对pthA和avrb6工作结果的扩展，好象在所有已知的avr/pth基因为致病性所需或有助于致病性(柑桔蛀孔，棉枯萎病，稻的细菌枯萎病，杨树蛀孔，和普通细菌枯萎病的所有形式)例子中，都需要从病原体中输出，输入植物细胞和运输到植物细胞核。此外，攻击其寄主的许多，如果不是最多的微生物，真菌，病毒以及甚至昆虫害虫的致病性似乎归功于蛋白被导入植物细胞核的必要步骤。
De Wit等(WO 91/15585,1991)描述了保护植物抵抗病原体的方法，此方法通过将编码特异引发蛋白的无毒性基因的多聚核苷酸序列整合到包含相应抗性基因的植物基因组中。无毒性基因以使基因表达仅发生在病原体感染植物的位置的方式调控。De Wit方法的目的是通过提供无毒性基因和使其转录和翻译成活性的蛋白产物来激活植物防御反应。在De Wit方法中没有说明或建议无毒性基因或其产物将被阻遏或干扰。相反地，本发明的目的是在无毒性基因产物有助于条件致病性的情况下抑制或阻遏无毒性基因产物的正常功能。
已描述了编码有效地抗特异靶病毒的抗体的基因在植物中的转移。Tavladoraki等(1993)首先证实了在植物中抗病毒疾病抗体的有效用途。但是，在本领域中没有说明或建议针对在植物中表达对植物病原体无毒性或致病性蛋白免疫反应的抗体。
如抗体所表现的，核酸和蛋白常具有相同地高亲和性和分子特异性水平的与其它分子结合的能力。一种全新的遗传技术正在围绕从大的随机序列库中分离极其稀少的具特异配体结合特征(与抗体相似)的核酸序列的能力而发展。所用方法是重复选择和扩增方案，有时称作SELEX(指通过指数富集的配体的系统演化；参考Tuerk&Gold[1990]；Gold[1995])。所要筛选的具特异配体结合特征的分子被称为“aptamers”(来自拉丁语aptus，装配；参考Szostak,J.W.1992)。虽然术语aptamer最初用来描述核酸分子，但是它也同样适用于蛋白(参考Tuerk&Gold,1990；Colas等，1996)。
描述了能够抑制蛋白功能的编码RNA或蛋白aptemers(能与靶蛋白高亲和性结合)的基因(Conrad等[1996]；Colas等[1996])。对于靶蛋白结合的特异性，aptemers的功能与抗体功能相似。Aptemers未在植物中表达并且在本领域中没有说明或建议针对结合植物病原体无毒性或致病性蛋白的aptamers在植物内表达。
发明简述
主题发明涉及植物中表达的抗体，其中抗体对植物病原体和害虫的avr/pth初级(蛋白)基因产物免疫反应。这些基因编码的Avr/Pth蛋白典型地包括NLSs，其在指导蛋白进入植物细胞核中起重要作用。Avr/Pth蛋白从侵入的病原体中活跃地输出，输入到植物细胞质，并运输到植物细胞核。通过与已表达的抗Avr/Pth抗体结合，Avr/Pth蛋白易失活，因而阻断植物中疾病产生的必要步骤。
主题发明也涉及编码抗体或aptemers的核苷酸分子，抗体和aptemers结合到Avr/Pth蛋白或含NLSs的蛋白上。
主题发明也涉及保护植物不受致病生物侵害的方法。avr/pth基因或编码NLSs基因的表达在植物中提供了对包括任何细菌，真菌，病毒，昆虫或致病性所需的其它生物的病原体的抗性。
主题发明还涉及用编码本发明的抗Avr/Pth和aptemers的抗体多聚核苷酸分子转化的植物和植物组织。本发明的另一方面是表达抗Avr/Pth或抗Avr/Pth aptemers抗体的植物和植物组织。附图简述
图1表示用兔多克隆抗PthA抗血清标记的黄单胞菌细胞粗溶物的Western印迹。泳道1，柑橘黄单胞菌株3213(Gabriel等，1989)；泳道2,3213,Xcl.2(pthA∷npt-sac)的标志-封闭衍生物(Yang等，1995)；泳道3，野油菜黄单胞菌3048(Gabriel等，1989)；泳道4，转接合子3048/pZit 45(PthA
+)(Swarup等，1992)。星号表示PthA或其截断的衍生物。泳道1中粗粗的顶端条带是双重的。序列简述
SEQ ID No.1是根据主题发明可以使用的PCR引物。
SEQ ID No.2是根据主题发明可以使用的PCR引物。
SEQ ID No.3是根据主题发明可以使用的PCR引物。
SEQ ID No.4是根据主题发明可以使用的PCR引物。
SEQ ID No.5是根据主题发明可以使用的PCR引物。
SEQ ID No.6是根据主题发明可以使用的PCR引物。
SEQ ID No.7是根据主题发明可以使用的PCR引物。
SEQ ID No.8是根据主题发明可以使用的PCR引物。发明详述
主题发明涉及与avr/pth基因的蛋白产物免疫反应的抗体。典型地，avr/pth基因产物具有细胞核定位信号(NLSs)，其功能是指导基因产物进入植物细胞核。主题发明的抗体结合到由aptamers与avr/pth基因编码的Avr/Pth蛋白上并使其失活，于是阻止蛋白运输到植物细胞核。主题发明的抗体和aptamers也可以用于纯化Avr/Pth蛋白或用于鉴定Avr/pth蛋白的免疫组织学研究。发明范围内所包含的avr/pth基因产物包括所有病毒，微生物，昆虫，真菌和植物来源的avr/pth基因。
通过用Avr/Pth蛋白，或其片段，或NLS肽免疫接种合适的寄主动物，可以产生抗Avr/Pth或抗NLS抗体。在优选的实施方案中，用纯化的全长Avr/Pth蛋白免疫接种动物。另一方面，可以用对应全长蛋白的氨基，羧基或中间部份免疫接种动物。可以从合适的病原体如黄单胞菌中纯化或克隆蛋白或肽，或者用肽合成仪或相同方式合成蛋白或肽。也可以针对含NLS氨基酸模式如：K-R/K-X-R/K的肽产生抗体(Yang,Y.和Gabriel,D.W.,1995)。
根据标准方法从免疫接种动物的抗体分泌细胞中产生杂交瘤。产生杂交瘤和单克隆抗体的方法在本领域内众所周知(Kohler和Milstein,1995)。筛选产生与Avr/Pth蛋白和/或NLS肽反应的抗体的杂交瘤。为了确定抗体结合到蛋白的哪个区域，可用限制酶处理克隆的avr/pth基因产生不同的基因片段。这些可能对应基因的5’,3’，或中间区域的片段可以被亚克隆、表达和用干抗体筛选程序。优选地，筛选对蛋白具有最高结合亲合性的抗体。
使用标准分子生物学技术从所选的杂交瘤中克隆编码本发明的抗Avr/Pth抗体的多聚核苷酸序列。典型地，从所挑选的杂交瘤中分离mRNA并且逆转录成cDNA。在优选的实施方案中，通过使用聚合酶链反应(PCR)和对免疫球蛋白可变轻链和重链区特异的PCR引物，从所选的杂交瘤的cDNA序列扩增编码抗体的多聚核苷酸序列。然后，克隆的抗体基因序列被整合到合适的表达载体中并用来转化植物或植物组织。在本领域中用异源基因转化植物的方法是众所周知的。在优选的实施方案中，用几种不同抗体基因转化植物或植物组织，这样植物能够产生抗体和能结合到选自Avr/Pth蛋白氨基，羧基和中间区域的位点上。根据主题发明转化的植物中所用表达系统可选择诱导型地或组成型地表达抗Avr/Pth抗体。植物中表达的抗体也在此处称为“植物抗体”。转化的植物可以通过植物产生的主要抗体的作用防止表达avr/pth基因的病原生物入侵，其中“植物抗体”结合到avr/pth基因的蛋白产物上，由此抑制蛋白产物的功能。
主题发明的抗体可以使用存在合适融合伙伴细胞系的任何动物，从杂交瘤中制备。在列举的实施方案中，用小鼠淋巴细胞产生杂交瘤。其它动物比如大鼠、猴、绵羊、兔，山羊和猪也可以用来产生杂交瘤。
此处所用术语“抗体”是指结合到抗原或半抗原的抗原决定基上的免疫球蛋白或其片段。在本发明的优选实施方案中，抗体是二价的并至少包含免疫球蛋白可变轻链(V
L)和可变重链(V
H)。主题发明也包括抗体的单价形式。
此处所用术语“aptamer”是指具有与靶蛋白分子高度亲和性和特异性结合能力的核苷酸或蛋白。
至今所测出的黄单胞菌avr/pth基因家族的每个成员的预测氨基酸序列同一性大于95％；因此，根据主题发明可以容易地制备能结合多数，如果不是全部，avr/pth基因家族的蛋白的抗体。任何黄单胞菌Avr/Pth蛋白和进入植物细胞的其它致病性蛋白可被抗体抑制并且是在本发明范围内。本发明包括的Avr/Pth蛋白可以包括，但不限于，AvrB4,Avrb6,Avrb7,AvrBs3,AvrXa7,AvrXa10,AvrB101,AvrB102,PthA,PthB,PthC,PthN,PthPC和PthP。
本发明的另一方面是含编码本发明抗体或aptamers的核苷酸序列的多聚核苷酸分子。多聚核苷酸分子可以由RNA或DNA组成。优选地，多聚核苷酸分子由DNA组成。主题发明多聚核苷酸分子可以整合到合适的多聚核苷酸载体中，如克隆或表达载体，所有这些对本领域技术人员是众所周知的。本领域技术人员可以选择载体，使得植物中主题多聚核苷酸序列转化和表达达到最大程度。
主题发明也涉及抵抗对植物致病的生物保护植物的方法。此处所提供的方法包含使植物具有产生抗体或aptamers的能力，此抗体或aptamers有结合到和抑制侵入生物产生的蛋白的功能，此蛋白对在植物中由侵入生物致病或产生疾病是必不可少的。在优选实施方案中，用编码抗体或aptamer的多聚核苷酸分子转化植物，此抗体或aptamer能结合到病原生物avr/pth基因编码的Avr/Pth蛋白上。在一个实施方案中，用编码不同抗体和/或aptamers的多个不同多聚核苷酸分子转化植物，此抗体和/或aptamers具有对靶蛋白的不同的结合特异性。
主题发明的另一方面是用编码主题发明的抗体和/或aptamers的多聚核苷酸分子转化的植物或植物组织。任何转化植物或植物组织，使异源DNA整合到植物基因组中并在植物细胞中表达该DNA产生主题抗体或aptamer的方法都在本发明范围内的。主题发明的植物包括单子叶和双子叶品种。一般的本领域技术人员能够容易地选择和利用对特定的植物类型和品种最适合的克隆和转化方法。本发明范围内的植物组织可举例为，但不限于，原生质，植物细胞，植物种子和籽苗组织。
以下是说明用于实施主题发明的材料和方法的实施例。这些实施例不应认为是限制并不准备作为本发明的材料和方法所有可能的修改的详细记述。实施例1抗体的制备
克隆到pET-19b表达载体(Novagen,Inc.,Madison,WI)的pthA编码的蛋白产物被纯化用作免疫原，产生结合到Avr/Pth蛋白上的抗体。pET-19b载体产生具有10个组氨酸残基的N-末端前导序列的翻译的基因融合产物，这些组氨酸残基作为亲和纯化“标记”。通过使用掺入了不移动的二价阳离子(Ni
++)的支持树脂，“组氨酸结合”树脂(Novagen)的亲和层析法纯化PthA蛋白。来自亲和柱的蛋白洗脱液在制备SDS聚丙烯酰胺凝胶上通过蛋白电泳进一步纯化，从凝胶上切下大约130kDa条带并电洗脱蛋白。来自制备SDS/PAGE凝胶的电洗脱蛋白用来制备对PthA蛋白特异的抗体。
用纯化的PthA蛋白免疫接种兔子以产生抗PthA的多克隆抗体。对于Western印迹，黄单胞菌细胞在PYGM培养液中生长，离心收获细胞并在样品缓冲液(50mM Tris-HCl,pH6.8,10％甘油，2％SDS,0.1％溴酚蓝)中煮沸2分钟。裂解物在11,600xg离心5分钟，在8％SDS-聚丙烯酰胺凝胶上电泳，并且分离的蛋白转移到硝酸纤维素滤膜上。膜用抗PthA抗体探测并用碱性磷酶酶偶联的羊抗-兔抗体(Sigma Chemical Co.)显色。图1表示用兔抗PthA多克隆的抗体标记的黄单胞菌细胞裂解物的Western印迹。
在另一个实施方案中，使用如上描述的纯化的组氨酸标记的PthA蛋白，可以产生抗pthA基因产物的5’端，3’端和重复单位的鼠单克隆抗体。小鼠杂交瘤先与PthA蛋白的不同部分反应来筛选。从原始启动子到StuⅠ位点的pthA5’端已在pET-196中克隆和表达；它编码240个氨基酸的推测的肽。分别编码660个氨基酸和260个氨基酸的推测肽的从StuⅠ到HincⅡ位点的pthA基因的中部部分和自HincⅡ的3’端，也可以分别克隆到合适的pET载体中并表达的融合的翻译产物。这三种组氨酸标记基因融合体可在大肠杆菌或其他合适的宿主中表达并且从中获得粗提蛋白制品。然后将蛋白制品用于ELISA检测来筛选分泌与融合蛋白免疫反应的抗体的杂交瘤。选择性地，蛋白制品在“组氨酸结合”树脂上纯化，然后用于抗体筛选。通过ELISA筛选显示了对PthA蛋白的或氨基，或羧基或中间区域有强烈反应的抗体来分离和克隆编码抗体的DNA序列。实施例2编码抗体的和aptamer的DNA序列的制备
根据ELISA和Western印迹筛选结果，产生与PthA蛋白的或氨基，或羧基，或中间区域反应的单克隆抗体的杂交瘤可以用来作为抗体基因的来源，此抗体基因用来转化植物或植物组织。将使用的方法遵从Danielsson&Borrebaeck(1992)的方法，在此引用作为参考。
所挑选的杂交瘤细胞系在培养基中生长并用Ultraspec RNA分离系统(Biotecx Labs,Houston)提取全部RNA。分光光度计定量RNA后，用逆转录酶和寡(dT)引物合成mRNAs的cDNA拷贝。然后，使用结合下列PCR引物的聚合酶链反应(PCR)扩增对应于免疫球蛋白(Ig)mRNA轻链和重链的特异cDNA，这些PCR引物已设计用来扩增小鼠特异的抗体基因(下面的引物序列是从5’到3’表示；限制位点下面划线)：
扩增可变重链(V
H)保守区的引物：
5’引物(SEQ ID NO.1)
(C/G)AG GT(C/G)(A/C)A(A/G)CTG CAG(C/G)AG TC(A/T)GG 3′
PstⅠ
3’引物(SEQ ID NO.2)
TGA GGA GAC GGT GAC CGT GGT CCC TTG GCC CC 3′
BstEⅡ
扩增可变轻链(VL)保守区的引物
5’引物(SEQ ID NO.3)
GAC ATC GAG CTC ACC CAG TCT CCA 3′
SacⅠ
3’引物(SEQ ID NO.4)
CCG TTT CAG CTC GAG CTT GGT CCC 3′
XhoⅠ
可选择的3’引物(SEQ ID No.5和SEQ ID NO.6)
(如果用第一个3’引物没有获得PCR产物时可使用)
5′CCC GAA TTC TTA GAT CTC CAG CTT GGT CCC 3′(SEQ ID NO.5)
5′CCC AAG CTT GAC ATT GTG ACC CAG TCT CCA 3′(SEQ ID NO.6)
用标准PCR方法扩增抗体cDNA。优选将表达的抗体基因形成二价分子。二价抗体片段在细菌中克隆和表达(Holliger等，1993)。构建二价抗体片段使得可变重链区的羧基末端直接与轻链的氨基末端融合；因此，这两个末端自联是不可能的。在V
H和V
L片段的第一次PCR扩增后，由PCR测序确定片段末端的正确DNA序列。用以正确序列信息为基础的引物进行第二次PCR扩增。引物也可以掺入特异的限制内切酶位点以简化到pET-226(Novagen,Madison,Wisconsin)转录/表达载体中的克隆，以及提供Kozak保守序列，一个阅读框架内ATG翻译起始位点和一个终止密码子：第2轮V
H 5’引物(SEQ ID NO.7)5′TCG GAT CCG GAA ACC ATG(C/G)AG GT(C/G)(A/C)A(A/G)CTG CAG(C/G)AGTC(A/T)GG 3′
BamHⅠ Kozak PstⅠ第2轮V
L3’引物(SEQ ID NO.8)5′TCC CCG GGT ACC TCA CCG TTT CAG CTC GAG CTT GGT CC3′
SmaⅠ KpnⅠ *** XhoⅠ***翻译终止密码子最初PCR扩增所用的相同的V
H3’和V
L5’引物也可用于第2轮PCR扩增。
线型V
H-载体-V
L构建体经Klenow补平和平末端联接形成最终的闭环分子。然后BamHⅠ到XhoⅠ限制性片段可以重新克隆到合适的表达载体中并根据已知技术用于转化植物。例如，Bam HⅠ到XhoⅠ限制性片段可以克隆到大肠杆菌表达载体pET-226中，形成阅读框架内融合体，此融合体编码一个peIB前导序列(用于从大肠杆菌中输出)和一个蛋白羧基末端(用于蛋白纯化)聚组氨酸标记。在pET-226中产生基因融合后，可用NdeⅠ/XhoⅠ将包括pel B前导序列的整个构建体重新克隆到pQY29.2中，于是提供一个前导序列，此序列允许小的抗Avr/Pth抗体肽输出到植物细胞壁。为了为任何克隆的细菌基因提供植物启动子，本实验室构建了载体pQY29.2(Yuan和Gabriel，未发表)。在这方面，含植物启动子和转录终止子和聚腺苷酸信号的任何合适的载体同样相当好地满足。载体pQY29.2在一个ATG翻译起始密码子和来自花椰菜花叶病毒的35s启动子的下游带有一个为克隆插入的开放阅读框架的多接头。一个胭脂碱合成酶的3’转录终止子和聚腺苷酸信号位于多接头的另一侧。载体被设计将与携带一个功能GUS报告基因的第2个质粒pGN 100(Bogusz等，1990)融合，并最终与第3个质粒pGA472(An等，1985)融合并提供用于植物转化的一个新霉素抗性基因和T-DNA的左右边界。用标准方法通过细菌接合将最后的构建体从大肠杆菌转移到根癌土壤杆菌株AGL1(Lazo等，1991)中。因为在pQY29.2上BamHⅠ和KpnⅠ位点是单一的，扩增的VH和VL多聚核苷酸可以以相对于pQY29.2质粒的启动子和胭脂碱合成酶的3’转录终止子正确的方向插入。具有移动pel B前导序列的pQY29.2载体内多聚核苷酸构建体也可以制备和用来转化植物。
像Turk&Gold(1990)；Szosbak(1992)；Gold(1995)；Colas等(1996)和Conrad等(1996)所描述的，生产和挑选aptamers的方法在本领域已是众所周知；每个方法在此引入作为参考。实施例3 用编码抗Avr/Pth抗体的DNA转化植物
使用标准材料和方法，用编码免疫反应的抗Avr/Pth抗体或aptamers的多聚核苷酸分子转化植物和植物组织。例如，根癌土壤杆菌已被广泛用来用异源DNA转化植物(Smith等，1995所述)。异源DNA被整合到根癌土壤杆菌的Ti-质粒中并且质粒重新导回细菌中。然后典型地通过在植物或植物组织的伤口部位接种，用细菌感染要转化的植物。然后将含异源DNA的Ti质粒转移到植物细胞核中，在细胞核中已转移的DNA整合进寄主细胞基因组中。
植物和植物组织也可以用如异源DNA的原生质摄取的方法(Lorz等，1985)和通过用高速的已包被将导入植物的DNA的微粒颗粒轰击(Klein等，1998)来转化植物和植物组织，颗粒轰击方法特别适合和广泛适用于单子叶植物转化，特别是禾本科植物的转化。
应当理解此处所描述的实施例和实施方案仅仅是为了说明的目的，各种最佳方案，修改方案或根据其的变化将被提议给相关领域的技术人员并且包括在此申请的精神和范围内以及附加的权利要求范围内。
此处全文引用下列参考文献作为参考。参考文献
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PCT专利号.91/15585，发表于1991年10月17日。
序列表(1)基本信息
(ⅰ)申请信息人
(A)申请人名称：University of Florida
(B)街名：223 Grinter Hall
(C)城市：Gainesville
(D)州/省名：Florida
(E)国家：US
(F)邮政编码(ZIP):32611
(G)电话：(352)392-8929
(H)传真：(352)392-6600
(ⅱ)发明名称：抑制植物害虫和病原体的材料和方法
(ⅲ)序列数目：8
(ⅳ)联系地址
(A)联系人：Saliwanchik&Saliwanchik
(B)街名：2421 N.W.41st street,Suite A-1
(C)城市：Gainesville
(D)州名：Florida
(E)国家：USA
(F)邮政编码(ZIP):32606
(ⅴ)计算机可读形式
(A)介质类型：软盘
(B)计算机：IBM PC兼容机
(C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS
(D)软件：PatentIn Release#1.0，版本#1.25
(ⅵ)目前申请资料：
(A)申请号：US
(B)申请日：1996年3月22日
(C)分类
(ⅷ)律师/代理信息
(A)名称：Lloyd,Jeff
(B)登记号：35,589
(C)参考/著录号：UF-159C1
(ⅸ)电信信息
(A)电话：(352)375-8100
(B)电传：(352)372-5800(2)关于SEQ ID NO:1的信息
(ⅰ)序列特征
(A)长度：22个碱基
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：DNA(合成)
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:1NAGGTNNANC TGCAGNAGTC NGG 23(2)关于SEQ ID NO:2的信息
(ⅰ)序列特征
(A)长度：32个碱基
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：DNA(合成)
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:2TGAGGAGACG GTGACCGTGG TCCCTTGGCC CC 32(2)关于SEQ ID NO:3的信息
(ⅰ)序列特征
(A)长度：24个碱基
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：DNA(合成)
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:3GACATCGAGC TCACCCAGTC TCCA 24(2)关于SEQ ID NO:4的信息
(ⅰ)序列特征
(A)长度：24个碱基
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：DNA(合成)
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:4CCGTTTCAGC TCGAGCTTGG TCCC 24(2)关于SEQ ID NO:5的信息
(ⅰ)序列特征
(A)长度：30个碱基
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：DNA(合成)
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:5
CCCGAATTCT TAGATCTCCA GCTTGGTCCC 30(2)关于SEQ ID NO:6的信息
(ⅰ)序列特征
(A)长度：30个碱基
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：DNA(合成)
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:6CCCAAGCTTG ACATTGTGAC CCAGTCTCCA 30(2)关于SEQ ID NO:7的信息
(ⅰ)序列特征
(A)长度：41个碱基
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：DNA(合成)
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:7TCGGATCCGG AAACCATGNA GGTNNANCTG CAGNAGTCNG G 41(2)关于SEQ ID NO:8的信息
(ⅰ)序列特征
(A)长度：38个碱基
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：DNA(合成)
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:8
TCCCCGGGTA CCTCACCGTT TCAGCTCGAG CTTGGTCC 38