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1、10申请公布号CN102091107A43申请公布日20110615CN102091107ACN102091107A21申请号201110058021522申请日20110309A61K36/23200601A61P43/00200601A61P25/24200601A61P35/00200601A61P39/06200601A61P25/28200601A61P17/0220060171申请人桂林普兰德生物科技有限公司地址542500广西壮族自治区桂林市恭城县燕新工业区72发明人吕光政叶勇蒙汉富74专利代理机构桂林市华杰专利商标事务所有限责任公司45112代理人罗玉荣54发明名称一种酶法提取。
2、积雪草总苷的方法57摘要本发明提供一种酶法提取积雪草总苷的方法，先对积雪草内源性酶进行灭活后，进行酶法提取，提取速率快，工艺条件温和，提取率高，不仅有助于保持药效成分的原有性质，而且降低能耗。利用膜分离纯化浓缩可以有效避免有机溶剂残留物，过程中产生的废水少，且分离出积雪草总苷纯度高，提取率高。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页CN102091113A1/1页21一种酶法提取积雪草总苷的方法，包括加入纤维素酶酶解提取，过滤，浓缩和微波干燥步骤，其特征是在纤维素酶酶解提取前，增设了灭活积雪草内源性酶，并继续保温提取的步骤。2根据权利要求1所述的一。
3、种酶法提取积雪草总苷的方法，其特征是所述灭活积雪草内源性酶，并继续保温提取的步骤是在提取器中先加入积雪草干草5倍量的水，并将水升温到100，再将积雪草原料投入提取器中进行内源性酶灭活，温度控制在95100，灭活30MIN后继续保温100提取60MIN，再收集提取液。权利要求书CN102091107ACN102091113A1/3页3一种酶法提取积雪草总苷的方法技术领域0001本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种酶法提取积雪草总苷的方法。背景技术0002积雪草【CENTELLAASIATICALURBAN】为双子叶植物伞形科【UMBELLIFERAE】的干燥全草或带根全草。广泛分布于长江流域以南。
4、各地，是广东民间地区常用中草药，我国医学上用积雪草外用及内服治病已有两千多年历史。积雪草性寒、味苦、辛，具有清热利湿、活血止血、解毒消肿之功效。全草主含三萜类，多炔烯烃类，挥发油类等成分。三萜类主要成分包括积雪草苷ASIATICOSIDE，分子式C48H78O19，分子量95915CASNO16830152、羟基积雪草苷MADECASSOSIDE，分子式C48H78O20，分子量97512CASNO34540222、多米诺积雪草苷TERMINOLOSIDE，分子式C48H78O20，分子量97512CASNO125265681。他们属于乌苏烷型的五环三萜皂苷，是积雪草药理活性的主要成分，其结构。
5、式分别如下00030004研究表明，积雪草总苷具有抗增生、抗纤维化、抗抑郁、抗癌、抗氧化和改善智力等功效，此外，积雪草苷对皮肤创伤、消除瘢痕等有明显的疗效。因此，高效地提取分离积雪草总苷及积雪草苷产品对积雪草产业化及积雪草资源具有重要的意义。0005目前，从积雪草中提取分离积雪草总苷及积雪草苷的工艺有一些文献和专利报道，专利2008103031519公开了一种积雪草甙及其制备方法，采用水或低碳醇热渗滤、热回流和超声提取；专利2007101571804公开了一种利用大孔吸附树脂制备积雪草总苷的方法，采用乙醇浸泡提取；专利2007100612173公开了一种积雪草提取物及其制备方法，采用乙醇浸泡提。
6、取；专利2009101527177公开了积雪草总皂苷的提取方法及其在医药领域中的应用，采用乙醇超声提取。浸泡和渗滤的提取方法需要溶剂的倍量大，提取时间长，生产效率低。热回流提取，需要提供大量的热能，增大了生产的能耗，同时也大大增加了生产成本。超声提取提取效率较高，需要增大设备的投入。0006也有文献报道用酶提取积雪草中的积雪草苷，方法直接采用纤维素酶在40，PH60进行酶解提取。但由于积雪草原料本身含有内源性酶，该酶在低温的水溶液中对积雪草总苷有破坏或降解作用，使积雪草总苷的含量降低。说明书CN102091107ACN102091113A2/3页4发明内容0007针对现有技术的不足，本发明的目。
7、的是提供一种酶法提取积雪草总苷的方法。本方法提取速率快，工艺条件温和，提取率高，不仅有助于保持药效成分的原有性质，而且降低能耗。0008一种酶法提取积雪草总苷的方法，包括加入纤维素酶酶解提取，过滤，浓缩，微波干燥步骤，与现有技术不同的是在酶解提取前，增设了灭活积雪草内源性酶，并继续保温提取的步骤。0009一种酶法提取积雪草总苷的方法包括如下具体步骤00101在提取器中加入积雪草干草5倍量的水，先将水升温到100，再将积雪草原料投入提取器中对积雪草中的内源性酶进行灭活，温度控制在95100，灭活后继续保温100提取60MIN，收集提取液；00112在提取器中再加入积雪草干草15倍量的水，将水温度。
8、控制在4050，PH调到60，加入纤维素酶，使水液中酶活力达到2040U/ML，酶解15小时，收集提取液；00123合并提取液，过滤，将滤液进行多级膜分离除去杂质、浓缩；00134将积雪草总苷浓缩液用真空微波干燥，微波压力008MPA，温度60以下，粉碎得到积雪草总苷粉。0014步骤1的积雪草原料中内源性酶灭活时间是30MIN，为使热能被有效利用，所以继续保温100进行提取60MIN，0015本方法提取分离的积雪草总苷，其积雪草总苷的含量为3060，积雪草总苷提取率达到99以上。0016本方法采用酶法提取积雪草总苷的方法，纤维素酶可以对积雪草细胞中的纤维素进行降解并破坏细胞壁网状结构，使细胞内。
9、有效成分最大限度释放出来，从而提高积雪草总苷提取率。0017本发明的优点在于00181本发明采用高温对积雪草内源性酶进行灭活，有效的保护了有效成分不被降解或破坏，极大的提高了积雪草苷的提取率，简化了操作工序；00192利用纤维素酶对积雪草细胞中的纤维素进行降解，破坏细胞壁，使细胞中的积雪草总苷最大限度的释放出来，酶法提取速率快，工艺条件温和，提取率高；00203本发明的实施，改变了传统提取的高能耗、高成本、低效率积雪草总苷的方法，灭活后继续保温提取，既起到了灭活的目的，并使热能得到充分利用。具体实施方式0021下面通过实施例对本发明作进一步说明。0022实施例10023称取积雪草干草50KG，。
10、在提取器中250L纯水，加热到100，加热后将积雪草干草投入提取罐内进行积雪草内源性酶灭活，灭活过程中，提取罐内温度控制在95100，灭活30MIN后继续保温100提取60MIN，收集提取液；再在提取罐内加入750L纯水，将水温度控制在4050，PH调到60，加入纤维素酶，使水液中酶活力达到2040U/ML，酶解15小时，将提取液排出，收集提取液；合并提取液，将提取液先过分子量1500DALTON的膜分离，说明书CN102091107ACN102091113A3/3页5截留出去溶液中可溶性蛋白、大分子有机物，收集滤出液；滤出液再采用分子量800DALTON的膜分离，除去溶液中铁、钙、镁等小分子。
11、无机物及小分子有机物，同时可滤除水分起到浓缩的作用，操作压力005020MPA；再用真空微波干燥压力008MPA，温度60以下干燥，粉碎即得。0024经检测，积雪草总苷含量为585，原料积雪草总苷提取率为992。利用膜分离纯化浓缩可以有效避免有机溶剂残留物，过程中产生的废水少，且分离出纯度高的积雪草总苷，同时节约了能耗。0025实施例20026称取积雪草干草500KG，在提取器中2500L纯水，加热到100，加热后将积雪草干草投入提取罐内进行积雪草内源性酶灭活，灭活过程中，提取罐内温度控制在95100，灭活30MIN后继续保温100提取60MIN，收集提取液；在提取罐内加入7500L纯水，将水温度控制在4050，PH调到60，加入纤维素酶，是水液中酶活力达到2040U/ML，酶解15小时，将提取液排出，放出提取液；合并提取液，过滤，将滤液先过分子量1500DALTON的膜分离，截留出去溶液中可溶性蛋白、大分子有机物，收集滤出液；滤出液再采用分子量800DALTON的膜分离，除去溶液中铁、钙、镁等小分子无机物及小分子有机物，同时可滤除水分起到浓缩的作用，操作压力005020MPA；再用真空微波干燥压力008MPA，温度60以下干燥，粉碎即得。0027经检测，积雪草总苷含量为594，原料积雪草总苷提取率为996。说明书CN102091107A。