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本发明涉及一种完全运行于负压状态的三级生物安全柜的负压方法,是通过以下步骤实现的:在进风处使初效空气预过滤器下游即形成与外部空气的压差,压差在-5-10Pa之间;气流透过中效空气预过滤器后与外部空气的压差在-80Pa-100Pa;生物操作实验舱内部及回风格栅与管道的气压至少维持在-200Pa压差;透过第一级外排超级高效空气过滤器的气流压差达到-280Pa-300Pa;透过第二级外排超级高效空气过滤。