可溶性IL17RA/RC融合蛋白以及相关方法.pdf

可溶性IL-17RA/RC融合蛋白以及相关方法
背景技术
细胞因子是介导多种生物学效应的可溶性小蛋白质，所述生物学效应包括对多种细胞类型的生长和分化的调节(参见例如，Arai et al.，Annu.Rev.Biochem.59：783(1990)；Mosmann，Curr.Opin.Immunol.3：311(1991)；Pauland Seder，cell 76：241(1994))。属于细胞因子的蛋白质包括白细胞介素、干扰素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子和其他的调节性分子。例如，人类白细胞介素-17是一种刺激白细胞介素-6、胞内粘附分子1、白细胞介素-8、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和前列腺素E2的表达的细胞因子，它还参与了CD34+造血前体选择成熟为嗜中性粒细胞的过程(Yao et al.，J.Immunol.155：5483(1995)；Fossiez et al.，J.Exp.Med.183：2593(1996))。
结合细胞因子的受体通常由一种或多种膜内在蛋白质构成，它们以高亲和力结合细胞因子，并将这一结合事件通过某些受体亚基的胞质部分传导至细胞。基于各种细胞因子受体的胞外配体结合结构域的相似性，可以将各种细胞因子受体分为几类。
已经证实的一些细胞因子及其受体的体内活性，表明了其他的细胞因子、细胞因子受体、细胞因子激动剂和细胞因子拮抗剂具有临床应用前景，并且也表明需要这些其他的细胞因子、细胞因子受体、细胞因子激动剂和细胞因子拮抗剂。例如，已经证实的促炎细胞因子家族的体内活性，表明了促炎分子的拮抗剂具有多种临床应用前景，并且也表明需要这些促炎分子的拮抗剂。
附图说明
图1A和1B是人类IL-17RCx1(SEQ ID NO：2)的外显子结构的示意图。对于密码子被外显子/内含子接头剪接的那些氨基酸，已除去接头部分以将完整的密码子包含在内。
图2A和2B是人类IL-17RCx4(SEQ ID NO：166)的外显子结构的示意图。
图3是人类IL-17RA(SEQ ID NO：21)的外显子结构的示意图。
图4A和4B是本文所述的位于SEQ ID NO：157和158中的一种本发明优选的可溶性多肽的外显子结构的示意图。这一可溶性多肽既包括来自人类IL-17RA(SEQ ID NO：21)的外显子，也包括来自人类IL-17RCx1(SEQ IDNO：2)的外显子。
图5是使用实施例34所述方法进行的一种典型测定的结果的示意图。该图是用Prizm软件程序生成的。Y值代表标准化的MFI值，所述标准化过程是将只有配体的孔的MFI值设为最大值(100％)，将没有配体/没有可溶性受体的对照孔的MFI值设为最小值(0％)，由此表示配体与细胞的结合百分比。用软件计算了每条曲线的IC50值。
图6显示了在移植物抗宿主疾病(GVHD)的小鼠模型中使用mIL-17RA-Fc进行治疗的效力。将受体小鼠(C57BL/6×DBA/2F1)分至各处理组中(PBS或mIL-17RA-Fc)。通过腹膜内注射(每次注射150μg)，从而对鼠进行IL-17RA-Fc治疗，在-1天时进行第一次注射，之后每隔一天注射一次，直至第15天。在第0天时，将来源于B6小鼠的8×10⁷个供体脾淋巴细胞通过静脉内注射至受体小鼠(C57BL/6×DBA/2F1(BDF1)；每组n＝10)体内。每周对小鼠的体重变化监测3次，体重变化是这一模型中疾病恶化的特征性指标。在IL-17R-Fc治疗组的小鼠中，体重下降并不严重(由空心三角形表示)，并且显著小于PBS对照组的体重下降(由实心方块表示)(p＜0.05)。
具体实施方式
本发明通过提供促炎细胞因子IL-17A和IL-17F的拮抗剂满足了上述需要。具体而言，所述促炎细胞因子IL-17A和IL-17F具有高度的序列相似性，并具有许多共同的生物学性质，而且都由激活的T细胞产生。它们都作为可促进各种自身免疫性和炎性疾病进程的因子，所述疾病包括类风湿性关节炎和哮喘。事实上在一些人类疾病的小鼠模型中，能够抑制IL-17A功能的试剂显著降低了疾病的发病率和严重程度。IL-17A通过与其同源受体(cognate receptor)IL-17受体(IL-17R)相互作用而介导其效应，但是还未识别到IL-17F的受体。以前我们已经报道了IL-17RC是IL-17A和IL-17F二者的受体，并且以相近的高亲和力与二者结合。另一方面，IL-17R以高亲和力与IL-17A结合，但仅以非常低的亲和力与IL-17F结合。与上述报道相一致的是，已显示可溶形式的IL-17R在表达任一种受体的细胞中阻断IL-17A的结合和信号传导，但是它不会干扰IL-17F与IL-17RC的结合或IL-17F对IL-17RC的作用。
既然有人已经提出IL-17A干预可以作为对一些自身免疫性疾病的有效疗法，那么使用能够阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17A和/或IL-17F的活性的本发明的拮抗剂应该能够比仅靶向这两种细胞因子之一的疗法更具优势，所述本发明的拮抗剂包括可溶性的IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA受体。除了相关组合物和方法之外，本发明还提供了上述拮抗剂用于炎性疾病的用途。
A)综述
免疫相关疾病和炎性疾病是相当复杂并且通常互相关联的多种生物途径的表现或结果，所述生物途径在正常生理条件下对于下述过程非常重要：对损害或损伤的应答，对损害或损伤的修复，以及对于外来生物体产生先天或后天的防御。当上述正常生理途径导致附加的损害或损伤时就会发生疾病或病症，所述损害或损伤可能直接与应答的强度相关，或作为异常调节或过度刺激的结果，或作为自身的反应，或是上述方式的组合。
虽然上述疾病的发生通常会涉及多个步骤的途径，并通常会涉及多种不同的生物系统/途径，但是对上述一种或多种途径中的关键点进行干预仍可具有缓解性或治疗性效果。治疗性干预可以通过拮抗有害过程/途径或刺激有利过程/途径而进行。
已经知道并已广泛地研究过许多免疫相关疾病。这类疾病包括免疫介导的炎性疾病(例如类风湿性关节炎、免疫介导的肾脏疾病、肝胆管疾病、炎性肠病(IBD)、银屑病和哮喘)、非免疫介导的炎性疾病、传染性疾病、免疫缺陷性疾病、瘤形成等。
T淋巴细胞(T细胞)是哺乳动物的免疫应答的一个重要部分。T细胞识别由主要组织相容性复合物(MHC)中的基因编码的自身分子(self-molecule)相关的抗原。所述抗原与MHC分子一起展现于抗原呈递细胞、病毒感染的细胞、癌症细胞、移植物等的表面。T细胞系统会清除这些可能对宿主哺乳动物的健康产生威胁的发生改变的细胞。T细胞包括辅助T细胞和细胞毒性T细胞。辅助T细胞在识别到抗原呈递细胞上的抗原-MHC复合物后会大量增殖。辅助T细胞还分泌多种细胞因子，即淋巴因子，它们在B细胞、细胞毒性T细胞和多种参与免疫应答的其他细胞的激活中起关键性作用。
在体液和细胞介导的免疫应答中的一个关键事件是辅助T细胞的激活和克隆扩增。辅助T细胞的激活过程起始于T细胞受体(TCR)-CD3复合物与抗原呈递细胞表面上的抗原-MHC的相互作用。这一相互作用介导了生物化学级联事件并导致IL-2的高亲和性受体(有时是IL-4的高亲和性受体)的表达，所述生物化学级联事件诱导静息的辅助T细胞进入细胞周期(G0期转变至G1期)。激活的T细胞经过增殖和分化周期，成为记忆细胞或效应细胞。
除了通过TCR介导的信号之外，T细胞的激活还涉及由抗原呈递细胞释放的细胞因子诱导的或通过与抗原呈递细胞和T细胞上的膜结合分子的相互作用诱导的另外的共刺激。另外，抗原呈递细胞表面上表达的B7分子与T细胞表面上表达的CD28和CTLA-4分子之间的相互作用也导致T细胞的激活。激活的T细胞表达更多数量的细胞粘附分子，例如ICAM-1、整联蛋白、VLA-4、LFA-1、CD56等等。
在混合淋巴细胞培养物或混合淋巴细胞反应物(MLR)中的T细胞增殖是一种化合物刺激免疫系统的能力的公认指标。在多种免疫应答中，炎症细胞浸润受伤或感染的位置。迁移细胞可为嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞或淋巴细胞，它们都可通过受影响组织的组织学检查而确定。参见CurrentProtocols in Immunology，ed.John E.Coligan，1994，John Wiley & Sons，Inc。
可通过抑制免疫应答治疗免疫相关疾病。使用能抑制有免疫刺激活性的分子的可溶性受体和/或中和抗体对于治疗免疫介导疾病和炎性疾病将是有利的。可以应用能抑制免疫应答的分子(直接应用蛋白质或通过使用抗体激动剂)来抑制免疫应答，并由此缓解免疫相关疾病。
白细胞介素-17(IL-17A)已被识别为松鼠猴(Saimiri)亲T淋巴细胞疱疹病毒(HSV)编码的蛋白质的细胞直系同源物(参见Rouvier et al.，J.Immunol.，150(12)：5445-5456(1993)；Yao et al.，J.Immunol.，122(12)：5483-5486(1995)和Yao et al.，Immunity，3(6)：811-821(1995))。后续的鉴定研究显示，这一蛋白是能在多种外周组织中诱导促炎应答的有效细胞因子。IL-17A是一种大小约为32kDa的由二硫键连接的同二聚体细胞因子，它仅由CD4⁺激活的记忆T细胞合成和分泌(参见Fossiez et al.，Int.Rev.Immunol.，16：541-551(1998)的综述)。特别地，IL-17被合成为一种带有一个19至23个残基的N端信号序列的155个氨基酸的前体多肽，并且以由二硫键连接的同二聚体糖蛋白的形式分泌。Il-17A公开于WO9518826(1995)、WO9715320(1997)和WO9704097(1997)以及美国专利No.6,063,372。
虽然IL-17A的组织分布范围很窄，但是它却被发现对多种类型的细胞都具有多重生物学活性。已经发现IL-17A能够刺激多种细胞因子的产生。它诱导粘附细胞例如成纤维细胞、角质形成细胞、上皮细胞和内皮细胞分泌IL-6、IL-8、IL-12、白血病抑制因子(LIF)、前列腺素E2、MCP-1和G-CSF。IL-17A还能够诱导ICAM-1的表面表达、T细胞的增殖和CD34⁺人类祖细胞的生长以及分化为嗜中性粒细胞。IL-17A还参与骨代谢，并且它还被证明在以激活的T细胞的存在和TNF-α的产生为特征的病理性疾病中起重要作用，所述病理性疾病例如类风湿性关节炎和骨植入物的松动(Van Bezooijen et al.，J.Bone Miner.Res.14：1513-1521(1999))。已发现来自类风湿性关节炎患者的滑液组织的激活T细胞分泌的IL-17A数量高于来自正常个体或骨关节炎患者的量(Chabaud et al.，Arthritis Rheum.42：963-970(1999))。表明这种促炎细胞因子会积极地促进类风湿性关节炎中的滑液炎症。除了IL-17A的促炎作用外，它似乎还通过另一种机制参与类风湿性关节炎的病理学。例如，已显示IL-17A可以诱导破骨细胞分化因子(ODF)的mRNA在成骨细胞中的表达(Kotake et al.，J.Clin.Invest.，103：1345-1352(1999))。ODF刺激祖细胞分化为破骨细胞，破骨细胞是参与骨吸收的细胞。
由于类风湿性关节炎患者的滑液中IL-17A的水平显著增高，因此IL-17A诱导的破骨细胞形成似乎在类风湿性关节炎的骨吸收中起关键作用。IL-17A还被认为在某些其他自身免疫性障碍例如多发性硬化中起关键作用(Matusevicius et al.，Mult.Scler.，5：101-104(1999))。另外还显示，在人类巨噬细胞中，IL-17A通过胞内信号传导刺激Ca²⁺流入和[cAMP]的减少(Jovanovic etal.，J.Immunol.，160：3513(1998))。用IL-17A处理成纤维细胞会诱导NF-κB的激活(Yao et al.，Immunity，3：811(1995)，Jovanovic et al.，见上文)，而用IL-17A处理巨噬细胞会激活NF-κB和促细胞分裂剂激活的蛋白激酶(Shalom-Barek et al.，J.Biol.Chem.，273：27467(1998))。
此外，IL-17A还与参与骨和软骨生长的哺乳动物细胞因子样因子7具有序列相似性。与IL-17A多肽具有序列相似性的其他蛋白质有人类胚胎来源白细胞介素相关因子(EDIRF)和白细胞介素-20。
与IL-17A的多种作用相一致的是，发现IL-17A的细胞表面受体广泛表达于许多组织和细胞类型中(Yao et al.，Cytokine，9：794(1997))。虽然根据人类IL-17A受体(IL-17R)的氨基酸序列(866个氨基酸)预计该蛋白具有一个单跨膜结构域和一个525个氨基酸的长胞内结构域，但是该受体序列是独特的，并不类似于来自细胞因子/生长因子受体家族的任何受体的序列。将这一发现与IL-17A本身与其他已知蛋白不相似这一认识相结合，表明IL-17A及其受体可能属于一个信号传导蛋白和受体的新家族。已经证实IL-17A的活性是通过结合其独特的细胞表面受体而被介导的，其中以前的研究显示将T细胞与可溶形式的IL-17A受体多肽相接触会抑制由PHA、伴刀豆球蛋白A和抗TCR单克隆抗体诱导的T细胞增殖和IL-2的产生(Yao et al.，J.Immunol.，155：5483-5486(1995))。因此，人们对于识别和表征与已知细胞因子受体特别是IL-17A受体具有同源性的新多肽具有浓厚的兴趣。
IL-17F的表达模式似乎与IL-17A的相似，以至于它仅包括激活的CD4+T细胞和单核细胞(Starnes et al.J.Immunol.167：4137-4140(2001))。已经证实IL-17F在成纤维细胞中诱导G-CSF、IL-6和IL-8(Hymowitz et al，EMBO J.20：5322-5341(2001))，在内皮细胞中诱导TGF-β(Starnes et al.J.Immunol.167：4137-4140(2001))。最近报道了一种由树突细胞产生的细胞因子IL-23可以——主要在记忆T细胞中——介导IL-17A和IL-17F的产生(Aggarwal et al.J.Biol.Chem.278：1910-1914(2003))。
此外，在患关节炎和哮喘的个体体内均显示出IL-17A和IL-17F二者的过表达或上调(参见Moseley et al.Cytokine Growth Factor Rev 14：155-174(2003)的综述)。对于关节炎而言，上述细胞因子作用方式的特征为风湿性关节炎和骨关节炎相关的软骨和关节损伤。例如，已经证实在关节软骨移植物中，IL-17A和IL-17F会通过释放软骨蛋白聚糖糖胺聚糖和胶原片段并同时抑制新的蛋白聚糖和胶原的合成来增强基质的降解(Cai et al.Cytokine 16：10-21(2001)；Attur et al Arthritis Rheum 44：2078-2083(2001))。
与IL-17A相似，已显示在小鼠体内IL-17F的过表达也会增加肺嗜中性粒细胞的募集，并导致Th1相关细胞因子在肺中的表达增加，所述Th1相关细胞因子包括IL-6、IFN-γ、IP-10和MIG(Starnes et al.J.Immunol.167：4137-4140(2001))。在遭受变应原攻击的哮喘患者的T细胞中IL-17F也会上调(Kawaguchiet al J.Immunol 167：4430-4435(2001))，还发现IL-17F能诱导NHBE中IL-6和IL-8的产生。与IL-17A不同的是，IL-17F似乎在体外能够抑制血管发生(Starnes et al.J.Immunol.167：4137-4140(2001))。
在多种人类组织中用RNA印迹都检测不到IL-17F的mRNA，但发现它在激活CD4+T细胞和单核细胞后会显著地被诱导。同样，在小鼠中，发现Th2细胞和肥大细胞(mast cell)在被激活时会表达IL-17F。(参见Dumont，ExpertOpin.Ther.Patents 13(3)(2003))。与IL-17A类似，在小鼠中也发现IL-17F的表达可被IL-23上调。
IL-17细胞因子/受体家族似乎代表了细胞因子网络中的一个独特的信号传导系统，这个系统可以为免疫应答和炎症应答的处理提供一种新的手段。因此，本发明基于对新的IL-17家族受体IL-17RC以及它与IL-17A和IL-17F二者相结合的能力的发现。
起初是在使用生物信息学手段寻找与IL-17RA相关的蛋白质时识别出了IL-17RC，并且是通过编码IL-17受体相关蛋白IL-17RC的cDNA识别出它的。虽然IL-17RC与能结合IL-17家族典型成员IL-17A的IL-17受体(IL-17RA)具有明显的相似性，而且也识别了IL-17细胞因子家族的五个其他成员，但是之前并未报道IL-17RC的特异性配体。然而如2005年6月10日提交的公布号为No.20060002925的美国专利申请No.11/150,533所述，IL-17A和IL-17F被识别为IL-17RC的特异性配体。具体而言，使用被编码人类IL-17RA(hIL-17RA)或IL-17RC(hIL-17RC)的构建体稳定转染的幼仓鼠肾细胞(BHK)识别了上述配体。使用针对hIL-17RA的单克隆抗体或针对hIL-17RC的多克隆抗血清，通过FACS分析确证了受体在表面的表达。为评估细胞因子的结合，使用了生物素化形式的人类IL-17A、C、D、E和F，以及荧光染料缀合的链亲和素，通过流式细胞术检测细胞因子与被转染细胞的结合。结果清楚地显示稳定转染的表达hIL-17RA的BHK细胞不出所料地明显结合人类IL-17A(hIL-17A)，而用空表达载体转染的细胞不能与所测试的任何IL-17家族成员相结合。还观察到了人类IL-17F(hIL-17F)与hIL-17RA转染细胞的相对较弱的结合，但是所测试的IL-17家族的其他成员没有明显的结合。还检测了其他IL-17家族成员与hIL-17RC转染细胞的结合，注意到这些细胞都表现出与hIL-17F的明显结合。此外，观察到这些细胞与hIL-17A明显结合，但是不与hIL-17C、D或E结合。上述数据证明hIL-17RC是hIL-17F和hIL-17A二者的共同受体。
此外，还检测了各种细胞因子浓度下的荧光水平，以确定hIL-17A和F对于hIL-17RA和hIL-17RC的相对亲和力。通过比较各种细胞因子在其转染体上的平均荧光强度，注意到hIL-17A与hIL-17RA的结合要比hIL-17F强得多，但是看起来两种细胞因子与hIL-17RC转染细胞的结合都同样好。值得关注的是，细胞因子与同时表达两种受体的细胞的结合看起来是加和性的，没有协同性的迹象。
接着，通过尝试与未标记的细胞因子的竞争性结合，研究了这种结合的特异性。将固定浓度的生物素化细胞因子和浓度逐渐增加的未标记细胞因子与转染的BHK细胞一起培养，并通过FACS定量分析结合的生物素化物质的量。结果显示hIL-17A和F与hIL-17RC的结合都是特异性的，因为浓度逐渐增加的未标记细胞因子会干扰生物素化物质的结合。事实上，未标记的hIL-17A和F可以有效地与生物素化形式的这两种细胞因子相互竞争结合hIL-17RC转染细胞，这表明这两种细胞因子以相近的亲和力与hIL-17RC结合，并且它们的结合位点纵使不同也是有所重叠的。未标记的hIL-17A也能与生物素化的hIL-17A和F有效地竞争结合hIL-17RA转染细胞，而未标记的hIL-17F表现出基本上不能与hIL-17A竞争结合hIL-17RA。这表明虽然hIL-17F表现出结合hIL-17RA的特异性，但是这种相互作用的亲合度似乎比hIL-17A和hIL-17RA之间的相互作用要弱得多。
进行了饱和结合研究以测量hIL-17A和F与hIL-17RC和hIL-17R结合的亲和力。在饱和结合条件下，将稳定表达hIL-17RA或hIL-17RC的BHK细胞系与碘化的hIL-17A或F一起培养，以测定每种细胞因子对于每种受体的亲和常数。hIL-17A以相近的亲和力与hIL-17RA和hIL-17RC结合(表1)。具体而言，如方法部分中所述，使用被所示受体转染的BHK细胞来测定对于hIL-17A和hIL-17F的K_d值。结果显示的是来自三次平行实验测定的平均K_d值。
表1

¹表示hIL-17RC的x1剪接变体。
此外，hIL-17F对hIL-17RC的亲和力与hIL-17A对这一受体的亲和力相当接近(见上表1)。然而与使用生物素化细胞因子所得到的结果相一致的是，hIL-17F对hIL-17RA的亲和力比其他同样条件测得的亲和力低了将近1000倍。这表明虽然hIL-17A和F以相近的亲和力与hIL-17RC结合，但是它们对hIL-17RA的亲和力却迥然不同。
hIL-17RC以高亲和力结合hIL-17A和F的这一观察结果表明，表达hIL-17RC的细胞对于hIL-17A和F应有相等的应答能力。另一方面，由于hIL-17RA以高亲和力结合hIL-17A，而与hIL-17F的相应亲和力要低约1000倍，这表明表达hIL-17RA的细胞在生理条件下可能只对hIL-17A有应答。在之前的研究中已显示出hIL-17RA的表达十分广泛，但是也报道了其在造血细胞中的表达较高，而在其他组织中较低。因此检测了hIL-17RC的表达，以确定各表达模式中的重叠程度。RNA印迹分析显示，hIL-17RC在腺组织例如肾上腺、前列腺、肝脏和甲状腺中表达水平较高，而在造血组织中没有可检测的表达。
为进一步研究这些受体在造血细胞中的表达，还用多参数FACS分析检测了生物素化hIL-17A和F与外周血单核细胞(PBMC)的结合。结果显示hIL-17A几乎与所检测的所有PBMC亚群都结合，而hIL-17F与任何上述亚群都没有可检测的结合。这一结果与hIL-17RA以高亲和力结合hIL-17A但不结合hIL-17F的能力相符，而且与在PBMC中检测不到hIL-17RC的mRNA的结果也相符。总之，上述数据表明IL-17RC优先在非造血组织中表达，而IL-17RA优先在造血细胞中表达。
hIL-17A和F与hIL-17RC转染细胞的高亲和力结合表明可溶形式的hIL-17RC可能是一种有效的治疗手段。这类分子可能是这两种细胞因子的有效拮抗剂。为直接检验上述推断，以Fc-融合蛋白的形式产生了可溶形式的人类hIL-17RC，并测试了它抑制hIL-17A和F的结合的能力。然后将上述效果与用可溶形式的hIL-17RA获得的结果进行比较。在结合反应中使用了浓度逐渐增加的hIL-17RC-Ig或hIL-17RA-Ig，并使用FACS分析来评估可溶性受体对于生物素化细胞因子与稳定转染的BHK细胞的结合的影响。可溶性hIL-17RC以基本相同的程度抑制与hIL-17A和F的结合，而IL-17R家族的另一成员hIL-17RD的Fc-融合蛋白却没有作用。另一方面，可溶性hIL-17RA有效地阻断了hIL-17A的结合，但是对hIL-17F的结合基本没有作用。在检测hIL-17A与造血细胞的结合时也得到了相似的结果。这一结合可以被hIL-17RA-Ig和hIL-17RC-Ig有效地阻断，但不会被hIL-17RD-Ig阻断。上述数据与亲和力测量所得到的结果相一致，表明可溶性受体与它们的膜锚定形式的作用相同。
作为评估人类hIL-17RC-Ig与hIL-17A和F结合的能力的另一种方式，使用Biacore分析评估了可溶性受体对这些细胞因子的亲和力。可溶性hIL-17RC以高亲和力结合hIL-17A和F(表2)，这为将这一试剂在体内用作hIL-17A和F两者效果的拮抗剂的想法提供了额外的支持。具体而言，将可溶性受体捕获到芯片上，并如下所述地进行结合实验。ND＝没有可检测的结合。
表2

由于人类的剪接变体非常多，因此我们仅针对这些分子的一个亚群进行了初始实验。被选择用于这一分析的那些分子也不尽相同，有的含有外显子7，有的不含有外显子7，但是与小鼠的相应分子不同的是所有的剪接变体都含有整个外显子8。存在于小鼠外显子8序列中部的隐藏剪接受体并不存在于人类外显子8中。然而，所测试的其他剪接变体可以含有或不含有hIL-17RC外显子12。这些变体被命名为hIL-17RCx1(在外显子组成上与上述的小鼠x1相同)、hIL-17RCx4(在外显子组成上与上述的小鼠x4相同)、hIL-17RCx2和hIL-17RCx7。另外，在293F细胞中短暂表达这些剪接变体，并测试了它们结合生物素化的小鼠和人类IL-17A和F的能力，测试结果总结于表3中。
表3

¹表示完全包含于转录物中的外显子。
²(+)表示可检测的明显的细胞因子结合，所述结合是根据FACS所测荧光的显著增加而评估的。(-)表示荧光没有明显的变化。
与之前的实验结果相一致的是，hIL-17RCx1可以与hIL-17A和F两者结合，但是不与任一种小鼠细胞因子结合。hIL-17RCx4也可以与这两种人类细胞因子结合，与其小鼠相应分子类似，它可以结合mIL-17F但不结合mIL-17A。hIL-17RCx2和x7不能结合测试的四种细胞因子中的任一种，但是它们在转染细胞的表面有显著的表达，因为针对hIL-17RC的多克隆抗血清能染色CD8⁺细胞(数据未示出)。上述结合实验的结果在稳定转染的BHK细胞中也得到了很好的重复。总之，上述数据支持了下述结论：IL-17RC蛋白的关键部分是结合人类细胞因子所必需的。
多种出版物都涉及IL-17A，也有较少的出版物涉及IL-17F，并认为它们会加重小鼠体内的胶原诱导关节炎(CIA)和人类类风湿性关节炎的疾病进程和严重程度。检测了被胶原免疫而诱发CIA的小鼠的关节和引流淋巴结(DLN)中的mIL-17A和F两者的表达。通过实时PCR进行的分析清楚地证实，与未免疫的对照相比，在患病小鼠的上述两种组织中这两种细胞因子均上调，清楚地表明表达与疾病相关。此外，还在相同组织中检测了mIL-17RA和mIL-17RC的相对表达。然而，在这种情况下，并没有发现任一受体的表达与疾病之间的可重复的相关性。而且，DLN与非造血组织(后足)相比，表达水平有明显的差异。与前述研究人类受体表达的实验结果相一致，发现mIL-17RA在造血组织中的表达更高，mIL-17RC在非造血组织中的表达更高。这一数据表明mIL-17A和mIL-17F表达的表现形式与疾病相关，也表明这两种必需受体在患病组织和正常组织中都有，还表明中和这些细胞因子可能是防止疾病发展的有效疗法。
因此，证明IL-17A和F的同源受体为IL-17RC。值得注意的是，hIL-17RC以相似的亲和力结合hIL-17A和F。由于这两个IL-17家族成员具有55％的序列同一性，因此它们具有共同的受体可能也并不意外。然而，hIL-17RA与hIL-17A结合的亲和力很高，但是与hIL-17F结合的亲和力要低将近1000倍，这表明在生理条件下hIL-17RA不会结合hIL-17F。这暗示着表达hIL-17RC的细胞应该对hIL-17A和F都产生应答，而仅表达hIL-17RA的细胞应该仅对IL-17A有应答。这一差异可能会影响这些细胞因子对不同组织的作用。通过表达分析，显示虽然IL-17RA的表达十分广泛，但是它在造血细胞中的表达更高，而IL-17RC倾向于在非造血组织中表达而不在造血细胞中表达。与此一致的是人类外周血单核细胞的所有亚群都结合hIL-17A，但都不结合hIL-17F。而且，这表明非造血组织将会对IL-17A和F都有应答，而造血细胞将仅对IL-17A有应答。
对于细胞因子与不同IL-17RC剪接变体结合的这一检测发现了受体中的细胞因子结合所必需的两部分，这两部分在小鼠和人类细胞因子的结合特性上有细微的差异。而且，不论所检测的受体种类，对于细胞因子而言这些结合特性都是一致的。如表3中的数据所示，由于hIL-17A和F仅结合人类x1变体和人类x4变体，因此，外显子12和整个外显子8都是这些细胞因子结合IL-17RC所必需的。上述所有同种型都含有整个外显子8和外显子12，但是它们在是否含有外显子7方面有所差异。这表明外显子7不是结合人类细胞因子所必需的。
从现有信息似乎可以明显看出生成IL-17A和IL-17F两者功能的拮抗剂的重要性，现有信息表明IL-17A和F的表达与多种自身免疫性和炎性疾病的进程都有很强的关联性。这两种细胞因子可诱导其他炎性细胞因子和趋化因子以及基质金属蛋白酶，它们会加重自身免疫性关节炎中的胶原和骨损伤。这一试剂可以作为与hL-17A和F有关的类风湿性关节炎和其他炎性疾病的有效疗法。
因此，开发了可溶形式的人类IL-17RC作为IL-17A和IL-17F两者的拮抗剂。这些可溶性IL-17RC多肽是有治疗效果的。然而，由于各种因素，可溶性IL-17RC很难由现有技术中可用的多种不同生产系统分泌。而且分泌的量也不足以满足工业生产的需要。因此，在本领域中需要开发能够被足量表达和分泌的IL-17A和IL-17F的拮抗剂，所述的表达量和分泌量能够被放大至用于工业生产。
因此，本发明通过提供可被表达和分泌的IL-17A和IL-17F拮抗剂满足了上述需要。具体而言，本发明基于开发和发现了多种非天然存在的可溶性分子或可溶性多肽，所述非天然存在的可溶性分子或可溶性多肽能够结合、拮抗和/或阻断IL-17A和IL-17F与其同源受体的结合。所述可溶性多肽包括IL-17RC的一部分。所述可溶性多肽还可同时包括IL-17RC的一部分和IL-17RA的一部分(“IL-17RC/IL-17RA”)。
图4A和4B以及SEQ ID NO：157和158描述了一种这样的优选实施方案。这种可溶性多肽包括人类IL-17RA(SEQ ID NO：21)的外显子1-6和人类IL-17RCx1(SEQ ID NO：2)的外显子8-16。更具体而言，这种可溶性多肽是与Fc分子融合的，所述Fc分子例如SEQ ID No：157和158中包含的Fc5。然而，本领域技术人员可以容易地认识到，可以使用任何Fc分子以及能导致形成二聚体的任何其他分子。
因此，IL-17F和IL-17A活性的拮抗剂，例如本发明的IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA可溶性受体，可用于炎性疾病的治疗性疗法，特别是作为IL-17F和IL-17A两者的拮抗剂单独或结合用于治疗与这些分子有关的疾病。此外，IL-17A和IL-17F活性的拮抗剂，例如本发明的可溶性受体，可用于其他炎性疾病的治疗性疗法，例如在下列疾病的治疗中可以(单独地或共同地)结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17F和IL-17A，所述疾病例如：银屑病、特应性和接触性皮炎、IBD、IBS、结肠炎、内毒素血症、关节炎、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、成人呼吸系统疾病(ARD)、感染性休克、多器官功能衰竭，炎性肺损伤例如哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、气道高反应性、慢性支气管炎、过敏性哮喘、细菌性肺炎、银屑病、湿疹，以及炎性肠病例如溃疡性结肠炎和克罗恩病(Crohn′s disease)、幽门螺旋杆菌(helicobacter pylori)感染、由于腹膜炎症(即由于感染、损伤等)引起的腹膜内粘连和/或脓肿、系统性红斑狼疮(SLE)、多发性硬化、系统性硬化病、肾病综合征、器官同种异体移植物排斥、移植物抗宿主疾病(GVHD)、肾、肺、心脏等器官的移植排斥、链球菌细胞壁(SCW)诱发的关节炎、骨关节炎、牙龈炎/牙周炎、疱疹性间质角膜炎、包括前列腺癌、肾癌、结肠癌、卵巢癌、宫颈癌、白血病的癌症、血管发生、再狭窄和川崎病。
细胞因子受体亚基以多结构域结构为特征，包括一个配体结合结构域和一个通常参与信号转导的效应结构域。多聚体细胞因子受体包括单体、同二聚体(例如，PDGF受体αα和ββ同种型，红细胞生成素受体，MPL[血小板生成素受体]和G-CSF受体)、每一亚基都具有配体结合结构域和效应结构域的异二聚体(例如PDGF受体αβ同种型)和由具有不同功能亚基构成的多聚体(例如IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7和GM-CSF受体)。一些受体亚基是多种受体所共有的。例如，AIC2B亚基是IL-3和GM-CSF受体所共有的组成部分，它本身不能结合配体，但包括一个胞内信号转导结构域。许多细胞因子受体基于其结构和功能都可被归入四个相关家族中的一个。例如I型造血受体的特征在于具有一个包括保守半胱氨酸残基和WSXWS基序的结构域。在某些造血受体中还存在以二硫键环为特征的其他结构域，包括蛋白激酶结构域、纤连蛋白III型结构域和免疫球蛋白结构域。细胞因子受体结构的综述可参见Urdal，Ann.Reports Med.Chem.26：221-228，1991和Cosman，Cytokine 5：95-106，1993。通常认为在促使生物体获得新生物功能的选择压力下，在已有受体基因的复制过程中会产生新的受体家族成员，导致产生多基因家族。因此家族成员就会含有祖先基因的残留痕迹，可以利用这些特征来分离和识别其他的家族成员。
因此，本发明涉及IL-17A和IL-17F的拮抗剂，所述拮抗剂能够通过每一种配体对应的一种或多种受体阻断每一种配体的结合和/或信号传导。
在优选的实施方案中，这类拮抗剂是基于图1-4所示的IL-17RC的多肽结构。基于是否含有一些特定的外显子，IL-17RC受体具有许多种剪接变体。如下所述，这些外显子中有一些是配体(IL-17A和/或IL-17F)结合所必需的。
本发明部分地基于这一发现：IL-17RC和IL-17家族的其他成员例如IL-17RA(SEQ ID NO：21)之间具有相似的结构(“结构域”)。具体而言，识别了三个结构域：
1)结构域1(SEQ ID NO：159和160)包括IL-17RC的外显子8-10。这对应于IL-17RCx1(SEQ ID NO：2)的氨基酸残基193-276和IL-17RCx4(SEQ IDNO：166)的氨基酸残基208-291。
2)结构域2(SEQ ID NO：161和162)包括IL-17RC的外显子11-13。这对应于IL-17RCx1(SEQ ID NO：2)的氨基酸残基277-370和IL-17RCx4(SEQ IDNO：166)的氨基酸残基292-385。
3)结构域3(SEQ ID NO：163和164)包括IL-17RC的外显子14-16。这对应于IL-17RCx1(SEQ ID NO：2)的氨基酸残基371-447和IL-17RCx4(SEQ IDNO：166)的氨基酸残基386-462。
因此，本发明涉及基于图1所示外显子的不同组合的可溶性IL-17RC多肽。具体而言，这些可溶性多肽的实例包括：
1)变体1210(SEQ ID NO：67和68)，它包括人类IL-17RCx1的外显子1-6和8-16，并通过连接物(SEQ ID NO：176和177)融融合有Fc10(SEQ ID NO：174和175)。变体1210还具有来自otPA(示于SEQ ID NO：178的多肽序列)的一个前原信号肽(pre-pro signal peptide)。也可以使用Fc5或本领域已知的任何等同物代替Fc10。
2)变体1390(SEQ ID NO：69和70)，它包括人类IL-17RCx1的外显子1-6和8-16，并融合有Fc10(SEQ ID NO：174和175)。变体1390还具有一个天然信号序列。也可以使用Fc5或本领域已知的任何等同物代替Fc10。
3)变体1341(SEQ ID NO：71和72)，它包括鼠类IL-17RA的外显子1-6和人类IL-17RCx1的外显子8-16，并通过连接物(SEQ ID NO：176和177)融合有Fc10(SEQ ID NO：174和175)。变体1341还具有来自鼠类IL-17RA(SEQ IDNO：181)的一个信号肽。也可以使用Fc5或本领域已知的任何等同物代替Fc10。
4)变体1342(SEQ ID NO：73和74)，它包括人类IL-17RCx1的外显子8-16，通过连接物(SEQ ID NO：176和177)融合有Fc10(SEQ ID NO：174和175)。变体1342还具有来自otPA(示于SEQ ID NO：178的多肽序列)的一个前原信号肽。也可以使用Fc5或本领域已知的任何等同物代替Fc10。
5)变体S1(SEQ ID NO：77和78)，它包括人类IL-17RCx1的外显子1-7，并融合有Fc5(SEQ ID NO：179和180)。变体S1还具有天然信号序列。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
6)变体S2(SEQ ID NO：81和82)，它包括人类IL-17RCx1的外显子1-8，并融合有Fc5(SEQ ID NO：179和180)。变体S2还具有天然信号序列。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
7)变体S3(SEQ ID NO：85和86)，它包括人类IL-17RCx1的外显子1-9，并融合有Fc5(SEQ ID NO：179和180)。变体S3还具有天然信号序列。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
8)变体S4(SEQ ID NO：89和90)，它包括人类IL-17RCx1的外显子1-10，并融合有Fc5(SEQ ID NO：179和180)。变体S4还具有天然信号序列。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
9)变体S5(SEQ ID NO：93和94)，它包括人类IL-17RCx1的外显子1-11，并融合有Fc5(SEQ ID NO：179和180)。变体S5还具有天然信号序列。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
10)变体S6(SEQ ID NO：97和98)，它包括人类IL-17RCx1的外显子14-16，并融合有Fc5(SEQ ID NO：179和180)。变体S6还具有天然信号序列。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
11)变体S7(SEQ ID NO：101和102)，它包括人类IL-17RCx1的外显子11-16，并融合有Fc5(SEQ ID NO：179和180)。变体S7还具有天然信号序列。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
12)变体S10(SEQ ID NO：105和106)，它包括人类IL-17RCx1的外显子7-16，并融合有Fc5(SEQ ID NO：179和180)。变体S10还具有天然信号序列。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
13)变体S11(SEQ ID NO：109和110)，它包括人类IL-17RCx1的外显子1-7和14-16，并融合有Fc5(SEQ ID NO：179和180)。变体S11还具有天然信号序列。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
14)变体S12(SEQ ID NO：113和114)，它包括人类IL-17RCx1的外显子1-7和11-16，并融合有Fc5(SEQ ID NO：179和180)。变体S12还具有天然信号序列。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
15)变体S13(SEQ ID NO：117和118)，它包括人类IL-17RCx1的外显子1-13和人类IL-17RA的外显子7-9，并融合有Fc5(SEQ ID NO：179和180)。变体S13还具有天然信号序列。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
16)变体S14(SEQ ID NO：121和122)，它包括鼠类IL-17RA的外显子1-6、人类IL-17RCx1的外显子8-13和鼠类IL-17RA的外显子7-9，并融合有Fc5(SEQ IDNO：179和180)。变体S13还具有天然信号序列。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
17)变体1407(SEQ ID NO：139和140)，它包括人类IL-17RA的外显子1-10和人类IL-17RCx1的外显子8-16，并融合有Fc5(SEQ ID NO：179和180)。变体1407还具有来自人类IL-17RA的天然信号肽。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
18)变体1459(SEQ ID NO：151和152)，它包括人类IL-17RCx1的外显子1-6和8-16，并融合有Fc5(SEQ ID NO：179和180)，并具有一个Leu21Ala的置换(与IL-17RCx1相比)。变体1459还具有来自otPA(多肽序列示于SEQ ID NO：178)的一个前原信号肽。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
19)变体1454(SEQ ID NO：157和158)包括人类IL-17RA的外显子1-6和人类IL-17RCx1的外显子8-16，与Fc5(SEQ ID NO：179和180)融合。变体1454还具有来自人类IL-17RA的天然信号肽。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。变体1454多肽的成熟形式示于SEQ ID NO：183，它由SEQ IDNO：182所示的核酸分子编码。可以使用其他分泌信号序列代替人类IL-17RA信号序列以用于在真核细胞中的表达，所述其他分泌信号序列包括例如：人类IL-17RC信号序列(例如SEQ ID NO：2的氨基酸残基1-20)、otPA前原信号序列(SEQ ID NO：178)、人类生长激素信号序列(SEQ ID NO：168和169)以及人类CD33信号序列(SEQ ID NO：172和173)。任选地，可以切除或缺失变体1454的C端的氨基酸残基(SEQ ID NO：183的残基658(Lys))。
上述变体仅代表了有限数目的本发明实施方案。本领域技术人员基于本申请特别是其中附图1-4的教导，不必进行过多的实验就能够容易地设计和测试其他的IL-17RC变体和/或IL-17RC/IL-17RA变体。例如，可以用于代替上文公开的信号肽的其他信号肽包括：人类生长激素信号肽(SEQ ID NO：168和169)、鼠类免疫球蛋白重链可变区(VH 26-10)(SEQ ID NO：170和171)或人类CD33(SEQ ID NO：172和173)。
除其他发明以外，本发明提供了本发明的可溶性受体的新用途。这些可溶性受体可以仅基于IL-17RC(命名为“IL-17RC”或“可溶性IL-17RC”或”sIL-17RC”，这些命名在本文中可以互换使用)，或可以基于IL-17RA与IL-17RC相组合的部分(“IL-17RC/IL-17RA”、“杂合RC/RA”、“RC/RA”、“IL-17RA/RC”或其任何变体，例如变体1454，这些命名在本文中可以互换使用)。本发明还提供可用于人类炎性疾病和自身免疫性疾病的可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽片段和融合蛋白。本发明的可溶性受体可用于阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17F和/或IL-17A的活性，以用于治疗下述炎症和炎性疾病，例如银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、内毒素血症、IBD、IBS、结肠炎、哮喘、同种异体移植物排斥、免疫介导的肾病、肝胆管疾病、多发性硬化、动脉粥样硬化、肿瘤生长加快或退行性关节疾病，以及本文公开的其他炎性疾病。
SEQ ID NO：1提供了一种示例性的编码人类IL-17RC(“IL-17RCx1”)的核苷酸序列；它所编码的多肽示于SEQ ID NO：2。IL-17RC是IL-17A(SEQ IDNO：13和14)和IL-17F(SEQ ID NO：15和16)的共同受体。IL-17RC可以以单体、同二聚体或异二聚体的形式起作用。优选地，IL-17RC以同二聚体形式作为IL-17A和/或IL-17F的受体。如本申请所述，单体受体或同二聚体受体均可只含有IL-17RC，或者可含有其他IL-17家族受体例如IL-17RA的部分(“IL-17RC/IL-17RA”)。因此，本发明包括这样的可溶性受体，所述可溶性受体包括IL-17RC与IL-17RA、IL-17RE或任何其他IL-17家族受体相组合的部分。IL-17RC还可以作为IL-17相关细胞因子的异二聚体受体的亚基。例如，IL-17RC可以与IL-17RA或另一种IL-17样受体形成异二聚体。IL-17RC公开于同为本申请人所有的美国专利申请No.10/458,647和同为本申请人所有的国际申请公布WO 01/04304中，这两篇文献均通过援引的方式全文纳入本文。对编码IL-17RC(SEQ ID NO：1)的人类cDNA克隆的分析揭示了一个编码692个氨基酸(SEQ ID NO：2)的开放读码框，该开放读码框中包括一个约20个氨基酸残基(SEQ ID NO：2的氨基酸残基1至20)的推定的信号序列、一个大约431个氨基酸残基(SEQ ID NO：2的氨基酸残基21-452；SEQ ID NO：3)的胞外配体结合结构域、一个约20个氨基酸残基(SEQ ID NO：2的氨基酸残基453-473)的跨膜结构域和一个大约203个氨基酸残基(SEQ ID NO：2的氨基酸残基474至677)的胞内结构域。此外，SEQ ID NO：22代表了一个配体结合结构域。
SEQ ID NO：165也显示了编码人类IL-17RC的一种变体(命名为“IL-17RCx4”)的另一个示例性核苷酸序列，它所编码的多肽示于SEQ IDNO：166。预计的信号肽为SEQ ID NO：165的残基1-60和SEQ ID NO：166的残基1-20；胞外结构域为SEQ ID NO：165的残基61-1401和SEQ ID NO：166的残基21-467；跨膜结构域为SEQ ID NO：165的残基1402-1464和SEQ ID NO：166的残基468-488；胞内结构域为SEQ ID NO：165的残基1465-2121和SEQ ID NO：166的残基489-707。
SEQ ID NO：4也显示了编码人类IL-17RC的一种变体(命名为“IL-17RC-1”)的另一个示例性核苷酸序列，它所编码的多肽示于SEQ IDNO：5。IL-17RC-1公开于同为本申请人所有的美国专利申请No.10/458,647和同为本申请人所有的国际申请公布WO 01/04304中，这两篇文献均通过援引的方式全文纳入本文。序列分析显示IL-17RC-1为一种截短形式的受体多肽。也就是说，IL-17RC-1缺少SEQ ID NO：2的氨基酸残基1-113。SEQ ID NO：10表示含有IL-17RC的N末端部分的IL-17RC-1多肽的氨基酸序列。
对IL-17RC和IL-17RC-1的氨基酸序列进行比较，也发现这两种多肽分别代表不同的剪接变体。IL-17RC的氨基酸序列包括一个17个氨基酸的区段(SEQID NO：2的氨基酸残基339至355)，而IL-17RC-1没有这一区段；IL-17RC-1在氨基酸479之后包括一个13个氨基酸的区段(SEQ ID NO：5的氨基酸残基350至362)，而IL-17RC没有这一区段。SEQ ID NO：11显示了一种含有上述两个氨基酸区段的多肽，而SEQ ID NO：12显示了一种不含有上述13个氨基酸区段和17个氨基酸区段的多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO：23也显示了编码人类IL-17RC的一种变体(命名为“IL-17RC-6”)的又一个示例性核苷酸序列，它所编码的多肽示于SEQ IDNO：24。IL-17RC-6与SEQ ID NO：2所示的IL-17RC相比含有一个25个氨基酸残基的缺失。具体而言，IL-17RC-6不含有SEQ ID NO：2的氨基酸残基94至氨基酸残基118。对编码IL-17RC-6(SEQ ID NO：23)的人类cDNA克隆的分析显示，它含有一个大约427个氨基酸残基(SEQ ID NO：24的氨基酸残基1-427)的胞外配体结合结构域、一个大约20个氨基酸残基(SEQ ID NO：24的氨基酸残基428-448)的跨膜结构域和一个大约218个氨基酸残基(SEQ ID NO：24的氨基酸残基449至667)的胞内结构域。
SEQ ID NO：25显示了编码鼠类IL-17RC的一种变体的一个示例性核苷酸序列，它所编码的多肽示于SEQ ID NO：26。鼠类IL-17RC是鼠类IL-17A(SEQID NO：17和18)和鼠类IL-17F(SEQ ID NO：19和20)的共同受体。对编码IL-17RC(SEQ ID NO：25)的鼠类cDNA克隆进行的分析揭示了一个大约449个氨基酸残基(SEQ ID NO：27)的胞外配体结合结构域。另外，SEQ ID NO：28代表了一个配体结合结构域。
SEQ ID NO：29显示了编码鼠类IL-17RC的一种变体的另一个示例性核苷酸序列，它所编码的多肽示于SEQ ID NO：30。
IL-17RC基因位于染色体3p25-3p24，如下所述，这一区域与多种障碍和疾病相关。
RNA印迹分析显示，IL-17RC基因在甲状腺、肾上腺、前列腺和肝脏组织中有很强的表达，在心脏、小肠、胃和气管组织中表达较弱。相反地，它在脑、胎盘、肺、骨骼肌、肾脏、胰腺、脾脏、胸腺、睾丸、卵巢、结肠、外周血白细胞、脊柱、淋巴结和骨髓中表达极少或不表达。上述观察结果显示IL-17RC序列可以用于区分各种不同的组织。
如下所述，本发明提供包括与参照氨基酸序列具有至少70％、至少80％、或至少90％、或大于95％，例如96％、97％、98％或大于99％或更高的同一性的氨基酸序列的分离多肽，所述参照氨基酸序列为SEQ ID NO：2的氨基酸残基21-692，其中所述分离的多肽可以特异性地结合这样一种抗体，所述抗体能特异性结合含有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的多肽。本发明还提供包括与参照氨基酸序列具有至少70％、至少80％或至少90％同一性的氨基酸序列的分离多肽，所述参照氨基酸序列选自：(a)SEQ ID NO：2的氨基酸残基21至452，(b)SEQ ID NO：10的氨基酸残基21至435，(c)SEQ ID NO：2的氨基酸残基21至677和(d)SEQ ID NO：2的氨基酸残基1至692，其中所述分离的多肽可以特异性地结合这样一种抗体，所述抗体能特异性结合由SEQ ID NO：2的氨基酸序列或SEQ ID NO：10的氨基酸序列构成的多肽。示例性多肽包括含有SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12的氨基酸序列的多肽。
本发明还提供包括胞外结构域的分离的多肽，其中所述胞外结构域包括氨基酸序列SEQ ID NO：2的氨基酸残基21至452或者氨基酸序列SEQ ID NO：10的氨基酸残基21至435。这类多肽还可包括位于所述胞外结构域羧基末端位置的跨膜结构域，其中所述跨膜结构域包括SEQ ID NO：2的氨基酸残基453至473。这些多肽还可包括位于所述跨膜结构域羧基末端位置的胞内结构域，其中所述胞内结构域包括SEQ ID NO：2的氨基酸残基474至677或者SEQ IDNO：10的氨基酸残基457至673，任选地，这类多肽还可包括位于所述胞外结构域氨基末端位置的信号分泌序列(signal secretory sequence)，其中所述信号分泌序列包括氨基酸序列SEQ ID NO：2的氨基酸残基1至20。
本发明还包括IL-17RC多肽的变体，其中所述多肽变体的氨基酸序列与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少70％同一性、至少80％同一性、至少90％同一性、至少95％同一性或大于95％的同一性，并且其中多肽变体的氨基酸序列与SEQ ID NO：2的氨基酸序列之间的任何差异都是由一个或多个保守性氨基酸置换导致的。
此外，本发明还提供上文公开的能与IL-17F(例如SEQ ID NO：16所示的人类IL-17F多肽序列)结合的分离的多肽。人类IL-17F多核苷酸序列示于SEQ IDNO：15。小鼠IL-17F多核苷酸序列示于SEQ ID NO：19，其相应的多肽示于SEQID NO：20。本发明还提供上文公开的能与IL-17A(例如SEQ ID NO：14所示的人类IL-17A多肽序列)结合的分离的多肽。人类IL-17A多核苷酸序列示于SEQ IDNO：13。小鼠IL-17A多核苷酸序列示于SEQ ID NO：17，其相应的多肽示于SEQID NO：18。
本发明还提供下述的分离的多肽和表位，所述分离的多肽和表位包括氨基酸序列SEQ ID NO：2或3的至少15个连续的氨基酸残基。示例性多肽包括：含有SEQ ID NO：2或3或者由SEQ ID NO：2或3组成的多肽，含有SEQ ID NO：2或3或者由SEQ ID NO：2或3组成的多肽的抗原性表位，或者含有SEQ ID NO：2或3或者由SEQ ID NO：2或3组成的多肽的功能性IL-17A或IL-17F结合片段。此外，本发明还提供上文公开的能结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17F或IL-17A的活性的分离的多肽。
本发明还包括IL-17RC多肽变体，其中所述多肽变体的氨基酸序列与SEQID NO：2的氨基酸残基具有至少70％同一性、至少80％同一性、至少90％同一性、至少95％同一性或大于95％的同一性，例如96％、97％、98％或大于99％或更高的同一性，并且其中多肽变体的氨基酸序列与SEQ ID NO：2的相应氨基酸序列之间的任何差异都是由一个或多个保守性氨基酸置换导致的。这类保守性氨基酸置换在本文中有述。此外，本发明还提供上文公开的能结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17F或IL-17A的活性的分离的多肽。
本发明还提供药物组合物，所述药物组合物包括可药用载体和至少一种这类表达载体或包括这类表达载体的重组病毒。本发明还包括药物组合物，所述药物组合物包括可药用载体和本文所述的多肽或抗体。
本发明还提供了融合蛋白，所述融合蛋白包括IL-17RC多肽和免疫球蛋白部分。在这类融合蛋白中，免疫球蛋白部分可为免疫球蛋白重链恒定区，例如人类Fc片段。本发明还包括编码这类融合蛋白的分离的核酸分子。
参考下文的具体描述可以更清楚地认识到本发明的上述方面和其他方面。此外，下文引用了多种参考文献，它们都以援引的方式全文纳入本文。
B)定义
在下文的说明中广泛使用了多种术语。现提供下述定义以便理解本发明。
本文所使用的“核酸”或”核酸分子”指多核苷酸，例如脱氧核糖核(DNA)或核糖核酸(RNA)、寡核苷酸、通过聚合酶链式反应(PCR)生成的片段，和通过任何连接反应、裂解反应、内切酶作用和外切酶作用生成的片段。核酸分子可由天然存在的核苷酸单体构成(例如DNA和RNA)，或者可由天然存在的核苷酸的类似物构成(例如天然存在的核苷酸的α对映体形式)，或由它们的组合构成。经修饰的核苷酸可以在其糖部分和/或嘧啶碱基或嘌呤碱基部分被修饰。糖修饰包括例如用卤素、烷基、胺基和叠氮基取代一个或多个羟基，或者将糖官能化为醚或酯。此外，整个糖部分都可以被其立体上和电子上相似的结构所取代，例如氮杂糖和碳环糖类似物。碱基部分的修饰的实例包括烷基化的嘌呤和嘧啶、酰基化的嘌呤或嘧啶或其他公知的杂环取代。核酸单体可以通过磷酸二酯键相连接或者通过这类键的类似物相连接。磷酸二酯键的类似物包括硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸硒酰酯(phosphoroselenoate)、磷酸二硒酰酯(phosphorodiselenoate)、硫代苯胺磷酸酯(phosphoroanilothioate)、酰苯胺磷酸酯(phosphoranilidate)，氨基磷酸酯等等。术语“核酸分子”还包括所谓的“肽核酸”，所述肽核酸包括与聚酰胺主链相连的天然存在的或经修饰的核酸碱基。核酸可为单链核酸或双链核酸。
术语“核酸分子的互补体”指的是具有与参照核苷酸序列反向互补的核苷酸序列的核酸分子。例如，序列5’ATGCACGGG 3’与5’CCCGTGCAT 3’互补。
术语“简并核苷酸序列”指的是与编码一种多肽的参照核酸分子相比具有一个或多个简并密码子的核苷酸序列。简并密码子具有不同的核苷酸三联体，但是却编码相同的氨基酸残基(即GAU和GAC三联体均编码Asp)。
术语“结构基因”指的是这样一种核酸分子，它会被转录为信使RNA(mRNA)，该信使RNA随后被翻译为特定多肽的特征性氨基酸序列。
“分离的核酸分子”为未整合在生物体基因组DNA中的核酸分子。例如，从细胞的基因组DNA中分离出来的编码生长因子的DNA分子就是一种分离的DNA分子。分离的核酸分子的另一个实例为未整合在生物体基因组中的化学合成的核酸分子。从特定物种中分离的核酸分子要小于该物种染色体的完整DNA分子。
“核酸分子构建体”为一种单链或双链的经过人类干预而被修饰、从而含有以自然界中不存在的排列方式组合并连接的核酸区段的核酸分子。
“线性DNA”是指具有游离的5’和3’末端的非环状DNA分子。线性DNA可以从例如质粒的闭合环状DNA分子通过酶消化或物理破坏来制备。
“互补DNA(cDNA)”为从mRNA模板通过反转录酶制备生成的单链DNA分子。通常，使用与mRNA的一部分互补的引物来启动反转录。本领域技术人员还使用术语“cDNA”来指由这种单链DNA分子及其互补DNA链组成的双链DNA分子。术语“cDNA”还指从RNA模板合成的cDNA分子的克隆。
“启动子”为指导结构基因的转录的核苷酸序列。通常，启动子位于基因的5’非编码区，接近结构基因的转录起始位点。具有启动转录功能的启动子中的序列元件通常以共有核苷酸序列为特征。这些启动子元件包括：RNA聚合酶结合位点、TATA序列、CAAT序列、分化特异性元件(DSE；McGehee et al.，Mol.Endocrinol.7：551(1993))、环AMP应答元件(CRE)、血清应答元件(SRE；Treisman，Seminars in Cancer Biol.1：47(1990))、糖皮质激素应答元件(GRE)，以及其他转录因子的结合位点，例如CRE/ATF(O′Reilly et al.，J.Biol.Chem.267：19938(1992))、AP2(Ye et al.，J.Biol.Chem.269：25728(1994))、SP1、cAMP应答元件结合蛋白(CREB；Loeken，Gene Expr.3：253(1993))和八聚体因子(综述可参见Watson et al.，eds.，Molecular Biology of the Gene，4th ed.(TheBenjamin/Cummings Publishing Company，Inc.1987)和Lemaigre和Rousseau，Biochem.J.303：1(1994))。如果启动子为一种诱导型启动子，那么转录速率会响应于诱导剂而提高。与此不同的是，如果启动子为组成型启动子，那么其转录速率就不受诱导剂的调节。还已知一些抑制型启动子。
“核心启动子”包括启动子功能所必需的核苷酸序列，包括TATA盒和转录起点。根据这一定义，核心启动子在缺少可增强活性或赋予组织特异性活性的特定序列时可能具有或不具有可检测的活性。
“调控元件”为调节核心启动子活性的核苷酸序列。例如，调控元件可包括能与下述的细胞因子结合的核苷酸序列，所述细胞因子可以使转录专一地或优先地在特定细胞、组织或细胞器中进行。这些类型的调控元件通常与以“细胞特异性”、“组织特异性”或“细胞器特异性”方式表达的基因相关联。
“增强子”是一种能提高转录效率的调控元件，所述转录效率的提高与增强子相对于转录起始位点的距离或方向没有关系。
“异源DNA”指的是并不天然存在于给定宿主细胞中的一种DNA分子或一群DNA分子。对于特定宿主细胞而言的异源DNA分子可以含有来源于宿主细胞物种的DNA(即内源DNA)，前提是宿主DNA与非宿主DNA(即外源DNA)相组合。例如，含有与包括转录启动子的宿主DNA区段有效连接的编码多肽的非宿主DNA区段的DNA分子就被认为是异源DNA分子。反过来，异源DNA分子可以包括与外源启动子有效连接的内源基因。作为另一实例，如果一种包括来源于野生型细胞的基因的DNA分子被引入缺少该野生型基因的突变体细胞中，则这种DNA分子也被认为是异源DNA。
“多肽”为氨基酸残基通过肽键连接形成的聚合物，包括天然形成的多肽和合成多肽。少于约10个氨基酸残基的多肽一般被称为“肽”。
“蛋白质”是包含一个或多个多肽链的大分子。蛋白质也可能含有非肽组分例如糖类基团。产生蛋白质的细胞可能将糖类取代基和其他非肽类取代基引入到所述蛋白质中，并且根据不同细胞类型可能会引入不同的取代基。本文中定义的蛋白质是根据它们的氨基酸主链结构定义的；通常并不特别指明例如糖类基团等取代基，但是它们可以存在。
由非宿主DNA分子编码的肽或多肽为“异源”肽或多肽。
“克隆载体”为能够在宿主细胞中自主复制的核酸分子，例如质粒、粘粒或噬菌体。克隆载体通常含有一个或少数几个限制性内切核酸酶识别位点，从而可以以确定性方式插入核酸分子而不丧失载体基本的生物学功能，也可以插入编码标记基因的核苷酸序列，所述标记基因适用于识别和筛选被所述克隆载体转化的细胞。标记基因通常包括能够提供四环素抗性或氨苄青霉素抗性的基因。
“表达载体”为编码能够在宿主细胞中表达的基因的核酸分子。通常，表达载体包括一个转录启动子、一个基因和一个转录终止子。基因的表达通常处于启动子的控制之下，这样的基因被称为与启动子“有效连接”。类似地，如果一个调控元件能够调节一个核心启动子的活性，则称该调节元件与该核心启动子“有效连接”。
“重组宿主”为含有异源核酸分子例如克隆载体或表达载体的细胞。在本文中，重组宿主的一个实例为通过表达载体产生IL-17RC的细胞。相反地，IL-17RC可以由IL-17RC的“天然来源”的且不含有表达载体的细胞产生。
“整合转化体”为异源DNA被整合到细胞的基因组DNA中的重组宿主细胞。
“融合蛋白”为由包括至少两个基因的核苷酸序列的核酸分子所表达的杂合蛋白。例如，融合蛋白可以包括与一种可结合亲和基质的多肽相融合的IL-17RC多肽的至少一部分。这样的融合蛋白为使用亲和色谱分离大量IL-17RC提供了手段。
术语“受体”指的是可以与被称为“配体”的生物活性分子相结合的细胞相关蛋白。这种相互作用介导了配体对细胞的作用。受体可为膜结合受体、细胞溶质受体或核受体；单体受体(例如促甲状腺激素受体、β-肾上腺素能受体)或多聚体受体(例如PDGF受体、生长激素受体、IL-3受体、GM-CSF受体、G-CSF受体、红细胞生成素受体和IL-6受体)。膜结合受体的特征在于具有多结构域结构，包括胞外配体结合结构域和通常参与信号转导的胞内效应结构域。在某些膜结合受体中，胞外配体结合结构域和胞内效应结构域位于构成完整功能性受体的分离的多肽上。
一般而言，配体与受体的结合会导致受体的构象变化，所述构象变化会引起效应结构域和细胞内其他分子之间的相互作用，这又会导致细胞代谢的变化。通常与受体-配体相互作用相关的代谢事件包括：基因转录、磷酸化、去磷酸化、环AMP产量提高、细胞钙的运动、细胞膜脂类的运动、细胞粘附、肌醇脂类的水解和磷脂的水解。
“可溶性受体”是不与细胞膜结合的受体多肽。可溶性受体通常为没有跨膜结构域和细胞质结构域、也没有其他连接方式例如通过糖基磷脂酰肌醇(gpi)与细胞膜相连的配体结合受体多肽。可溶性受体可包括附加的氨基酸残基，例如为便于纯化多肽而提供的亲和标签，或者用于提供多肽与底物的结合位点的亲和标签，或免疫球蛋白恒定区序列。许多细胞表面受体具有天然存在的可溶性对应物，它们是由蛋白水解产生的或由以其他方式剪接的mRNA翻译产生。可溶性受体可为单体、同二聚体、异二聚体或多聚体的形式，多聚体受体通常包括不多于9个亚基、优选地包括不多于6个亚基、最优选地包括不多于3个亚基。当受体多肽没有足够的跨膜和胞内多肽区段部分来分别提供膜锚定或信号转导时，就称所述受体多肽基本上没有跨膜和胞内多肽区段。细胞因子受体的可溶性受体通常包括胞外细胞因子结合结构域而不含跨膜结构域和胞内结构域。例如，代表性的可溶性受体包括SEQ ID NO：167(多核苷酸)和SEQ IDNO：21(多肽)表示的IL-17RA的可溶性受体。本领域技术人员完全能够确定已知细胞因子受体序列中哪一段序列包括胞外细胞因子结合结构域而不含跨膜结构域和胞内结构域。此外，本领域技术人员通过遗传密码子可以容易地确定编码这类可溶性受体多肽的多核苷酸。
术语“分泌信号序列”指的是编码这样一种肽的DNA序列，所述肽(“分泌肽”)作为一种较大多肽的一部分，指引所述较大多肽进入合成该多肽的细胞的分泌途径。所述较大多肽通常在所述分泌途径中被切割以除去分泌肽。
“分离的多肽”为基本上不含有夹杂的细胞组分的多肽，所述夹杂的细胞组分例如天然状态下与所述多肽共存的糖类、脂类或其他蛋白质性质的杂质。通常，分离的多肽制品所含有的所述多肽的纯度很高，即至少约80％纯度，至少约90％纯度、至少约95％纯度、高于95％纯度，例如96％、97％或98％或更高的纯度，或高于99％的纯度。显示某种具体蛋白制品含有分离多肽的一种方法是对所述蛋白质制品进行的十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳并对所述凝胶进行考马斯亮蓝染色之后，出现单一条带就表明所述制品含有分离的多肽。然而，术语“分离的”并不排除同一种多肽的不同物理形式的存在，例如二聚体形式或者糖基化或衍生化形式。
本文中使用的术语“氨基末端”和“羧基末端”指的是多肽中的位置。在上下文允许的情况下，在提及多肽的某一特定部分或序列时使用这些术语，用于表示接近的关系或相对位置。例如，位于多肽内的一段参考序列的羧基末端的某一段序列指的是所述序列接近所述参考序列的羧基末端，但并不一定是位于整个多肽的羧基末端。
术语“表达”指的是基因产物的生物合成。例如，对于结构基因而言，表达包括将所述结构基因转录为mRNA并将所述mRNA翻译为一个或多个多肽。
本文中使用的术语“剪接变体”指的是从一个基因转录而得的RNA的不同形式。剪接变体天然地是通过利用转录的RNA分子内的不同剪接位点而产生的，或者也有少数时候是利用独立转录的RNA分子之间的不同剪接位点产生，可能从一个相同基因会转录出几种mRNA。剪接变体可能编码具有不同氨基酸序列的多肽。本文中还使用术语“剪接变体”表示由基因转录而来的mRNA剪接变体所编码的多肽。
本文所使用的术语“免疫调节剂”包括细胞因子、干细胞生长因子、淋巴毒素、共刺激分子、造血因子等，还包括上述分子的合成类似物。
术语“互补体/抗互补体对”指的是在合适条件下形成非共价结合的稳定配对的不相同的部分。例如，生物素和亲和素(或链亲和素)为互补体/抗互补体对的典型成员。其他示例性的互补体/抗互补体对包括受体/配体对、抗体/抗原(或半抗原或表位)对、正义/反义多核苷酸对等等。在随后需要互补体/抗互补体对解离的情况下，互补体/抗互补体对的结合亲和力优选地小于10⁹M^-1。
“抗独特型抗体”为可与免疫球蛋白的可变区结构域结合的抗体。在本文中，抗独特型抗体可与抗IL-17RC抗体的可变区结合，因此抗独特型抗体可以模拟IL-17RC的表位。
“抗体片段”为抗体的一部分，例如F(ab’)₂、F(ab)₂、Fab’、Fab等等。不论结构如何，抗体片段都可以与完整抗体所识别的同一抗原相结合。例如，抗IL-17RC单克隆抗体片段可以与IL-17RC的表位结合。
术语“抗体片段”还包括能结合特异性抗原的合成多肽或基因工程生产的多肽，例如由轻链可变区组成的多肽、由重链和轻链可变区组成的“Fv”片段、轻链可变区和重链可变区通过肽连接物相连接的重组单链多肽分子(“scFv蛋白”)和由模拟高可变区的氨基酸残基组成的最小识别单位。
“嵌合抗体”为这样一种重组蛋白，它含有来源于啮齿动物抗体的可变结构域和互补决定区，而抗体分子的其余部分来源于人类抗体。
“人源化抗体”为这样一种重组蛋白，其中将单克隆抗体中的来源于鼠类免疫球蛋白的重链可变区和轻链可变区的鼠类互补决定区转移到人类可变结构域中。用于人类治疗用途的来源于鼠类抗体的人源化抗体(例如可以结合或中和人类蛋白的人源化抗体)的构建是在本领域技术人员的能力范围之内的。
本文所使用的“治疗剂”为与抗体部分缀合而产生可用于治疗的缀合物的分子或原子。治疗剂的实例包括药物、毒素、免疫调节剂、螯合剂、硼化合物、光活化剂或染料以及放射性同位素。
“可检测标记”为与抗体部分缀合而产生可用于诊断的分子的分子或原子。可检测标记的实例包括螯合剂、光活化剂、放射性同位素、荧光试剂、顺磁性离子或其他标记部分。
本文使用的术语“亲和标签”指的是这样一种多肽片段，它可以与另一多肽连接，从而使得可以纯化或检测所述另一多肽或者提供使所述另一多肽与底物结合的位点。原则上可以使用任何具有可获得的抗体或其他特异性结合物的肽或蛋白作为亲和标签。亲和标签包括多组氨酸链、蛋白A(Nilsson et al.，EMBO J.4：1075(1985)；Nilsson et al.，Methods Enzymol.198：3(1991))、谷胱甘肽S转移酶(Smith and Johnson，Gene 67：31(1988))、Glu-Glu亲和标签(Grussenmeyer etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：7952(1985))、P物质、FLAG肽(Hopp et al.，Biotechnology 6：1204(1988))、链亲和素结合肽或其他抗原性表位或结合结构域。总体上可参见Ford et al.，Protein Expession and Purification 2：95(1991)。编码亲和标签的DNA分子是可从供应商(例如Pharmacia Biotech Piscataway，NJ)处购买的。
“裸抗体”与抗体片段相对，表示未与治疗剂缀合的完整抗体。裸抗体包括多克隆抗体和单克隆抗体，以及某些重组抗体例如嵌合抗体和人源化抗体。
本文所使用的术语“抗体组分”包括完整抗体和抗体片段。
“免疫缀合物”为抗体组分与治疗剂或可检测标记形成的缀合物。
本文所使用的术语“抗体融合蛋白”指的是包括一种抗体组分和一种II-17RC多肽组分的重组分子。抗体融合蛋白的实例包括这样一种蛋白，所述蛋白包括IL-17RC的胞外结构域，还包括Fc结构域或抗原结合区域。
“目标多肽”或“目标肽”为包括至少一个表位、并且在目标细胞(例如肿瘤细胞或携带传染物抗原的细胞)上表达的氨基酸序列。T细胞识别由主要组织相容性复合物分子呈递的针对目标多肽或目标肽的肽表位，并通常裂解目标细胞，或将其他免疫细胞募集至目标细胞的位置，由此杀死目标细胞。
“抗原性肽”为与主要组织相容性复合物分子结合而形成MHC-肽复合物的肽，所述MHC-肽复合物可被T细胞识别并由此诱发针对T细胞进行呈递后的细胞毒性淋巴细胞应答。因此，抗原性肽能够结合合适的主要组织相容性复合物分子并诱发细胞毒性T细胞应答，例如针对结合或表达抗原的目标细胞的细胞裂解或特异性细胞因子的释放。抗原性肽可以结合抗原呈递细胞或目标细胞上的I类或II类主要组织相容性复合物分子。
在真核细胞中，RNA聚合酶II催化结构基因的转录从而产生mRNA。可以设计核酸分子以使其包括RNA聚合酶II模板，在所述模板中RNA转录物具有与特定mRNA的序列互补的序列。所述RNA转录物被称为“反义RNA”，编码该反义RNA的核酸分子被称为“反义基因”。反义RNA分子能够结合mRNA分子，导致mRNA翻译的抑制。
“特异性针对IL-17RC的反义寡核苷酸”或“IL-17RC反义寡核苷酸”为具有下述序列的寡核苷酸：(a)所述序列能够与IL-17RC基因的一部分形成稳定的三螺旋，或(b)所述序列能够与IL-17RC基因的mRNA转录物的一部分形成稳定的双螺旋。
“核酶”为具有催化中心的核酸分子。该术语包括RNA酶、自剪接RNA、自切割RNA和执行上述催化功能的核酸分子。编码核酶的核酸分子被称为“核酶基因”。
“外部引导序列”为能引导内源性核酶RNA酶P结合特定种类胞内mRNA并导致mRNA被RNA酶P切割的核酸分子。编码外部引导序列的核酸分子被称为“外部引导序列基因”。
术语“变体IL-17RC基因”指的是编码具有修饰形式的SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽的核酸分子。这类变体包括天然存在的IL-17RC基因的多态性，以及含有氨基酸序列SEQ ID NO：2的保守性氨基酸置换的合成基因。IL-17RC基因的其他变体形式为含有本文所述的核苷酸序列的插入或缺失的核酸分子。可以通过例如在严格条件下，测定一种基因是否与具有核苷酸序列SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：4的核酸分子或其互补核酸分子杂交，从而识别变体IL-17RC基因。
或者，可以通过序列比较识别变体IL-17RC基因。如果在比对最大相符性时两个氨基酸序列的氨基酸残基相同，就称这两个氨基酸序列具有“100％的氨基酸序列同一性”。类似地，如果在比对最大相符性时两个核苷酸序列的核苷酸基相同，就称这两个核苷酸序列具有“100％的核苷酸序列同一性”。序列比较可以使用标准软件程序进行，例如由DNASTAR(Madison，Wisconsin)生产的LASERGENE生物信息学软件包中所含有的软件。其他通过测定最优比对而比较两个核苷酸或氨基酸序列的方法是本领域技术人员公知的(参见，例如，Peruski and Peruski，The Internet and the New Biology：Tools for Genomic andMolecular Research(ASM Press，Inc.1997)Wu et al.(编著)，“InformationSuperhighway and Computer Databases of Nucleic Acids and Proteins”见于Methods in Gene Biotechnology第123-151页(CRC Press，Inc.1997)和Bishop(编著)，Guide to Human Genome Computing，第2版(Academic Press，Inc.1998))。下文将描述用于测定序列同一性的具体方法。
无论使用什么具体方法来识别变体IL-17RC基因或变体IL-17RC多肽，都可以根据变体基因或由变体基因编码的多肽与抗IL-17RC抗体特异性结合的能力，而从功能上表征所述基因或多肽。还可以使用本文所述的生物学或生物化学测定方法，根据变体IL-17RC基因或变体IL-17RC多肽与配体例如IL-17A和/或IL-17F结合的能力，而从功能上表征所述基因或多肽。
本文中使用的术语“等位基因变体”指的是位于相同染色体基因座上的某一基因的任何两种或多种变化形式。等位基因变体天然地通过突变产生，并可能导致群体中的表型多态性。基因突变可能是沉默的(编码的多肽没有改变)，或者可能所编码的多肽的氨基酸序列有所改变。本文中使用的术语等位基因变体还指的是由基因的等位基因变体编码的蛋白质。
术语“直系同源物”指的是从一个物种获得的多肽或蛋白是从另一不同物种获得的多肽或蛋白的功能类似物。直系同源物之间的序列差异是物种形成的结果。
“旁系同源物”是由一种生物产生的不同但结构相关的蛋白质。认为旁系同源物是通过基因复制产生的。例如，α-珠蛋白、β-珠蛋白和肌红蛋白彼此之间互为旁系同源物。
本发明包括IL-17RC基因的功能性片段。在本发明的上下文中，IL-17RC基因的“功能性片段”指的是编码IL-17RC多肽的一部分的核酸分子，所述多肽的一部分为本文所述的结构域或至少能特异性地结合抗IL-17RC抗体。
由于标准分析方法的不准确性，聚合物的分子量和长度都被理解为近似值。当这类值被表示为“大约”X或“近似”X时，应理解的是X表示的值应为实际值±10％。
C)IL-17RA和IL-17RC多核苷酸或基因的制备
使用基于SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：4的多核苷酸探针，通过筛选人类cDNA文库或基因组文库，可以获得编码人类IL-17RA或IL-17RC基因的核酸分子或编码本发明的任何可溶性多肽的多核苷酸。上述技术上公知的标准技术，可以使用市售的克隆试剂盒完成。例如参见Ausubel et al.(编著)，ShortProtocols in Molecular Biology，第3版，John Wiley & Sons 1995；Wu et al.，Methods in Gene Biotechnology，CRC Press，Inc.1997；Aviv and Leder，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 69：1408(1972)；Huynh et al.，“Constructing and ScreeningcDNA Libraries in λgt10 andλgt11”见于DNA Cloning：A Practical ApproachVol.I，Glover(编著)，第49页(IRL Press，1985)；Wu(1997)，第47-52页。
使用核苷酸序列基于IL-17RA或IL-17RC基因或cDNA的核苷酸序列的寡核苷酸引物，通过聚合酶链式反应(PCR)，也可以获得编码人类IL-17RA或IL-17RC基因的核酸分子。在下述文献中提供了用PCR筛选文库的一般性方法：例如，Yu et al.，“Use of the Polymerase Chain Reaction to Screen PhageLibraries”见于Methods in Molecular Biology，Vol.15：PCR Protocols：CurrentMethods and Applications，White(编著)，Humana Press，Inc.，1993。此外，在下述文献中描述了使用PCR分离相关基因的技术：例如，Preston，“Use ofDegenerate Oligonucleotide Primers and the Polymerase Chain Reaction toClone Gene Family Members”见于Methods in Molecular Biology，Vol.15：PCRProtocols：Current Methods and Applications，White(编著)，Humana Press，Inc.1993。或者，可通过使用互为引物(mutually priming)的长寡核苷酸和本文所述的核苷酸序列合成核酸分子，来获得IL-17RA或IL-17RC基因(参见例如，Ausubel(1995))。使用聚合酶链式反应的已知技术能够合成至少两千个碱基长度的DNA分子(Adang et al.，Plant Molec.Biol.21：1131(1993)；Bambot et al.，PCR Methods and Applications 2：266(1993)，Dillon et al.，“Use of the PolymeraseChain Reaction for the Rapid Construction of Synthetic Genes”见于Methods inMolecular Biology，Vol.15：PCR Protocols：Current Methods and Applications，White(编著)，第263-268页(Humana Press，Inc.1993)和Holowachuk et.al.，PCR Methods Appl.4：299(1995))。关于多核苷酸合成的综述可以参见例如，Glick and Pasternak，Molecular Biotechnology，Principles and Applications ofRecombinant DNA(ASM Press 1994)；Itakura et al.，Annu.Rev.Biochem.53：323(1984)和Climie et al.，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 87：633(1990)。
D)IL-17RA或IL-17RC基因变体的制备
本发明提供了多种编码本文公开的IL-17RA或IL-17RC多肽的核酸分子，包括DNA和RNA分子。本领域技术人员应容易地认识到，由于遗传密码子的简并性，这些多核苷酸分子中可能有许多种序列变体。此外，本发明还提供了分离的可溶性单体、同二聚体、异二聚体和多聚体形式的受体多肽，它们包括与SEQ ID NO：2的受体多肽基本上同源的IL-17RC的至少一部分。因此，本发明考虑到了包括SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：4的简并核苷酸的编码IL-17RA或IL-17RC多肽的核酸分子以及它们的RNA等价物。
本领域技术人员应容易地认识到，由于遗传密码子的简并性，这些多核苷酸分子中可能有许多种序列变体。SEQ ID NO：7为涵盖编码SEQ ID NO：2的IL-17RC多肽的所有核酸分子的简并核苷酸序列。本领域技术人员应认识到，通过将SEQ ID NO：7中的T替换为U，SEQ ID NO：7的简并序列还提供了编码SEQ ID NO：2的所有RNA序列。因此，本发明考虑到了包SEQ ID NO：1的核苷酸154至核苷酸2229的编码IL-17RC多肽的核酸分子，以及它们的RNA等价物。类似地，通过将SEQ ID NO：6中的T替换为U，SEQ ID NO：6的IL-17RC-1简并序列也提供了编码SEQ ID NO：5的所有RNA序列。
表4示出了表示简并核苷酸位置的单字母编码。“解析”是用编码字母表示的核苷酸。“互补体”表示的是互补核苷酸的编码。例如，编码Y表示C或T，其互补体R表示A或G，A与T互补，G与C互补。
表4

  核苷酸  解析  互补体  解析  A  A  T  T  C  C  G  G  G  G  C  C  T  T  A  A  R  A|G  Y  C|T  Y  C|T  R  A|G  M  A|C  K  G|T  K  G|T  M  A|C  S  C|G  S  C|G  W  A|T  W  A|T  H  A|C|T  D  A|G|T  B  C|G|T  V  A|C|G  V  A|C|G  B  C|G|T  D  A|G|T  H  A|C|T  N  A|C|G|T  N  A|C|G|T
表5示出了对于某给定氨基酸而言涵盖所有可能密码子的简并密码子。
表5
  氨基酸  单字母编码  密码子  简并密码子  Cys  C  TGC TGT  TGY  Ser  S  AGC AGT TCA TCC TCG  TCT  WSN  Thr  T  ACAACC ACG ACT  ACN  Pro  P  CCA CCC CCG CCT  CCN  Ala  A  GCAGCC GCG GCT  GCN  Gly  G  GGA GGC GGG GGT  GGN  Asn  N  AAC AAT  AAY  Asp  D  GAC GAT  GAY  Glu  E  GAAGAG  GAR  Gln  Q  CAA CAG  CAR  His  H  CAC CAT  CAY  Arg  R  AGA AGG  CGA  CGC  CGG CGT  MGN  Lys  K  AAA AAG  AAR  Met  M  ATG  ATG  Ile  I  ATAATCATT  ATH  Leu  L  CTA CTC CTG CTT TTA  TTG  YTN  Val  V  GTAGTC GTG GTT  GTN  Phe  F  TTC TTT  TTY  Tyr  Y  TACTAT  TAY  Trp  W  TGG  TGG  Ter  ·  TAA TAG TGA  TRR  Asn|Asp  B  RAY  Glu|Gln  Z  SAR  任意  X  NNN
本领域普通技术人员应当理解的是，由于简并密码子代表编码某一氨基酸的所有可能的密码子，在确定简并密码子的过程中会引入一定的不确定性。例如，丝氨酸的简并密码子(WSN)在有些情况下可能编码精氨酸(AGR)，精氨酸的简并密码子(MGN)在有些情况下可能编码丝氨酸(AGY)。编码苯丙氨酸和亮氨酸的密码子之间也存在类似的关系。因此，简并序列所涵盖的一些多核苷酸可能编码变体氨基酸序列，但是本领域普通技术人员可以参照SEQ ID NO：6的氨基酸序列容易地识别这类变体序列。可以如本文所述容易地对变体序列进行功能性测试。
不同的物种可能表现出“偏好密码子使用”。总体而言可参见Grantham etal.，Nucl.Acids Res.8：1893(1980)；Haas et al.Curr.Biol.6：315(1996)、Wain-Hobson et al.，Gene 13：355(1981)；Grosjean and Fiers，Gene 18：199(1982)；Holm，Nuc.Acids Res.14：3075(1986)；Ikemura，J.Mol.Biol.158：573(1982)；Sharp and Matassi，Curr.Opin.Genet.Dev.4：851(1994)；Kane，Curr.Opin.Biotechnol.6：494(1995)和Makrides，Microbiol.Rev.60：512(1996)。本文所使用的术语“偏好密码子使用”或”偏好密码子”在本领域中是指在某一物种的细胞中最通常使用的蛋白质翻译密码子，因此偏好编码每种氨基酸的可能密码子(见表5)中的一种或几种密码子。例如，ACA、ACC、ACG或ACT都可能编码氨基酸苏氨酸(Thr)，但是在哺乳动物细胞中ACC是最常用的密码子；在其他物种例如昆虫细胞、酵母、病毒或细菌中，可能会偏好使用不同的Thr密码子。可以使用多种本领域已知的方法在本发明的多核苷酸中引入某一特定物种的偏好密码子。将偏好密码子序列引入重组DNA中可以例如通过使蛋白在特定细胞类型或物种中更有效地翻译，从而提高蛋白质的产量。因此，本文公开的简并密码子序列可以作为在本领域常用的和本文公开的各种细胞类型和物种中优化多核苷酸表达的模板。可以测试和优化含有偏好密码子的序列在各种物种中的表达，并如本文所公开地进行功能测试。
可以通过多种方法分离编码IL-17RA或IL-17RC的cDNA，例如可以使用完整人类cDNA的或部分人类cDNA或基于所公开序列的一组或多组简并探针来进行探测。还可以利用本文公开的代表性人类IL-17RA或IL-17RC序列设计引物，使用聚合酶链式反应来克隆cDNA。此外，可以使用cDNA文库转化或转染宿主细胞，并用针对IL-17RA或IL-17RC多肽的抗体来检测目的cDNA的表达。
本领域技术人员应认识到，SEQ ID NO：1所公开的序列代表的是人类IL-17RC的一个等位基因，预计也会存在等位基因变体和替代剪接。可以通过使用标准技术探测来自不同个体的cDNA文库或基因组文库，从而克隆这一序列的等位基因变体。本文公开的核苷酸序列的等位基因变体，包括含有沉默突变的等位基因变体和突变导致氨基酸序列改变的等位基因变体，以及作为本文公开的氨基酸序列的等位基因变体的蛋白质，都在本发明的范围之内。通过替代方式剪接的mRNA产生仍保留IL-17RC多肽性质的cDNA分子，以及由这些cDNA和mRNA编码的多肽，也包括在本发明的范围之内。可以通过使用本领域已知的标准技术探测来自不同个体或组织的cDNA文库或基因组文库，从而克隆这些序列的等位基因变体和剪接变体。
使用上述方法，本领域普通技术人员可以制备多种编码包括IL-17RC受体亚基的一部分或其等位基因变体、并保留野生型IL-17RC受体的配体结合性质的可溶性受体的多肽，所述IL-17RC受体亚基的一部分与SEQ ID NO：1或SEQID NO：4基本同源，或编码SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：5的全部序列或其片段或其等位基因变体。这类多肽还可以包括本文总体公开的其他多肽区段。
在本发明的某些实施方案中，分离的核酸分子可以在严格条件下与包括本文公开的核苷酸序列的核酸分子杂交。例如，所述核酸分子可以在严格条件下与包括SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：4的核苷酸序列的核酸分子杂交，或与包括与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：4互补的核苷酸序列的核酸分子杂交，或与它们的片段杂交。
一般而言，严格条件应选择为在确定的离子强度和pH值下比特定序列的热解链温度(Tm)低大约5℃。Tm为(在确定的离子强度和pH值下)50％的靶序列与完全匹配的探针杂交时的温度。在杂交后可以在严格条件下或在高度严格条件下洗涤核酸分子以除去未杂交的核酸分子。参见，例如，Sambrook et al.，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第2版(Cold Spring Harbor Press1989)；Ausubel et al.，(编著)，Current Protocols in Molecular Biology(John Wileyand Sons，Inc.1987)；Berger and Kimmel(编著)，Guide to Molecular CloningTechniques，(Academic Press，Inc.1987)；和Wetmur，Crit.Rev.Biochem.Mol.Biol.26：227(1990))。序列分析软件例如OLIGO 6.0(LSR；Long Lake，MN)和Primer Premier 4.0(Premier Biosoft International；Palo Alto，CA)以及一些因特网网站都是可用的工具，可以用于分析给定序列并基于用户确定的标准计算Tm。对于特定的多核苷酸杂交，本领域技术人员完全能够选择合适的杂交条件和洗涤条件。
本发明还提供与SEQ ID NO：2(IL-17RC)和SEQ ID NO：21(IL-17RA)多肽或它们的直系同源物多肽具有基本上相似的序列同一性的分离IL-17RA或IL-17RC多肽。本文所用的术语“基本上相似的序列同一性”指的是与SEQ IDNO：2所示序列或其直系同源物具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％，例如96％、97％、98％或大于95％的序列同一性的多肽。例如，IL-17RA或IL-17RC受体变体和直系同源物可以用于产生针对人类IL-17RA或IL-17RC的免疫应答和交叉反应的抗体。这类抗体可如本文所述的被人源化和被修饰，并用于治疗银屑病、银屑病关节炎、IBD、IBS、结肠炎、内毒素血症，以及用于本文所述的其他治疗性应用。
本发明还考虑到了可以用以下两种标准识别的IL-17RA或IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA变体核酸分子：一种标准是测定所编码的多肽与本文所述的任一氨基酸序列(例如：氨基酸序列SEQ ID NO：2(IL-17RC)、SEQ ID NO：21(IL-17RA)或SEQ ID NO：158和183(IL-17RC/IL-17RA))的相似性，另一种标准是杂交测定。所述变体包括下述核酸分子：(1)在严格洗涤条件下仍然能与具有本文所述核苷酸序列(例如IL-17RC的核苷酸序列SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：4(或其全长互补体)，或IL-17RC/IL-17RA的核苷酸序列SEQ ID NO：157(或其全长互补体))的核酸分子杂交的核酸分子，其中所述洗涤严格度等同于含0.1％SDS的0.5×-2×SSC，温度55-65℃；和(2)所编码的多肽与本文所述的氨基酸序列(例如氨基酸序列SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：158)具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％，或大于95％，例如96％、97％、98％或99％的序列同一性的核酸分子。或者，IL-17RC变体可被表征为下述核酸分子：(1)在高度严格洗涤条件下仍然能与具有本文所述核酸分子(例如核苷酸序列SEQID NO：1或SEQ ID NO：4(或其全长互补体)，或核苷酸序列SEQ ID NO：157(或其全长互补体))杂交的核酸分子，其中所述洗涤严格度等同于含0.1％SDS的0.1×-0.2×SSC，温度50-65℃；和(2)所编码的多肽与本文所述的氨基酸序列(例如氨基酸序列SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：158)具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或大于95％，例如96％、97％、98％或99％的序列同一性的核酸分子。
本发明提供了例如含有与SEQ ID NO：158的200-458氨基酸残基(它包括IL-17RC的外显子8-16)、或SEQ ID NO：158的32-458氨基酸残基(它包括IL-17A的外显子1-6以及IL-17RC的外显子8-16)、或SEQ ID NO：158的1-458氨基酸残基、或SEQ ID NO：158的32-690氨基酸残基或SEQ ID NO：158的1-690氨基酸残基的序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％和至少99.5％的序列同一性的分离的多肽，其中所述多肽能够结合IL-17A和/或IL-17F。在某些实施方案中，所述多肽不含有SEQ IDNO：158的1-690氨基酸残基或SEQ ID NO：158的1-458氨基酸残基。在某些实施方案中，所述多肽不是通过下述方法产生的：(a)培养已导入表达载体的细胞，所述表达载体含有有效连接的下列元件：转录启动子、编码含有SEQ IDNO：158的1-690氨基酸残基或SEQ ID NO：158的1-458氨基酸残基的多肽的DNA序列、以及转录终止子；以及(b)回收所表达的多肽。所述多肽还可在下列疾病的治疗中用于结合、阻断、减少、拮抗或中和IL-17A和/或IL-17F，所述疾病包括：银屑病、特应性皮炎和接触性皮炎、IBD、IBS、结肠炎、内毒素血症、关节炎、类风湿关节炎、莱姆病(Lyme disease)关节炎、银屑病关节炎、成人呼吸系统疾病(ARD)、脓毒性休克、多器官功能衰竭、炎性肺损伤例如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、气道高反应性、慢性支气管炎、过敏性哮喘、细菌性肺炎、银屑病、湿疹和炎性肠病例如溃疡性结肠炎和克罗恩病、幽门螺杆菌(helicobacter pylori)感染、由腹膜炎症(即感染、损伤等)导致的腹腔内粘连和/或脓肿、系统性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎、I型糖尿病、冠心病、中风、多发性硬化、系统性硬化症、硬皮病、肾病综合征、败血症、器官移植排斥反应、移植物抗宿主疾病(GVHD)、(例如肾、肺、心脏的)移植排斥反应、链球菌细胞壁(SCW)诱导的关节炎、骨关节炎、牙龈炎/牙周炎、单纯疱疹性角膜基质炎(herpetic stromal keratitis)、骨质疏松、神经炎、单纯疱疹性角膜基质炎、癌症包括前列腺癌、肾癌、结肠癌、卵巢癌、宫颈癌、白血病、癌症血管形成(如卵巢癌、宫颈癌和前列腺癌)、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、囊性纤维化、再狭窄和川崎病。
本发明提供了编码一种多肽的分离的核酸分子，所述被编码的多肽与SEQID NO：158的200-458氨基酸残基(它包括IL-17RC的外显子8-16)、SEQ IDNO：158的32-458氨基酸残基(它包括IL-17A的外显子1-6以及IL-17RC的外显子8-16)、或SEQ ID NO：158的1-458氨基酸残基、或SEQ ID NO：158的32-690氨基酸残基或SEQ ID NO：158的1-690氨基酸残基具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％和至少99.5％的序列同一性，其中所述多肽能够结合IL-17A和/或IL-17F。在某些实施方案中，所述被编码的多肽不含有SEQ ID NO：158的1-690氨基酸残基或SEQ IDNO：158的1-458氨基酸残基。在某些实施方案中，所述多肽不是通过下述方法产生的：(a)培养已导入表达载体的细胞，所述表达载体含有有效连接的下列元件：转录启动子、编码含有SEQ ID NO：158的1-690氨基酸残基或SEQ IDNO：158的1-458氨基酸残基的多肽的DNA序列、以及转录终止子；以及(b)回收所表达的多肽。所述多肽还可在下列疾病的治疗中用于结合、阻断、减少、拮抗或中和IL-17A和/或IL-17F，所述疾病包括：银屑病、特应性皮炎和接触性皮炎、IBD、IBS、结肠炎，内毒素血症，关节炎，类风湿关节炎，莱姆病关节炎，银屑病关节炎，成人呼吸系统疾病(ARD)、脓毒性休克、多器官功能衰竭、炎性肺损伤例如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、气道高反应性、慢性支气管炎、过敏性哮喘、细菌性肺炎、银屑病、湿疹和炎性肠病例如溃疡性结肠炎和克罗恩病、幽门螺杆菌感染、由腹膜炎症(即感染、损伤等)导致的腹腔内粘连和/或脓肿、系统性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎、I型糖尿病、冠心病、中风、多发性硬化、系统性硬化症、硬皮病、肾病综合征、败血症、器官移植排斥反应、移植物抗宿主疾病(GVHD)、(例如肾、肺、心脏的)移植排斥反应、链球菌细胞壁(SCW)诱导的关节炎、骨关节炎、牙龈炎/牙周炎、单纯疱疹性角膜基质炎、骨质疏松、神经炎、单纯疱疹性角膜基质炎、癌症包括前列腺癌、肾癌、结肠癌、卵巢癌、宫颈癌、白血病、癌症血管形成(如卵巢癌、宫颈癌和前列腺癌)、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、囊性纤维化、再狭窄和川崎病。
本发明还提供了编码一种多肽的分离的核酸分子，其中所述核酸分子能够在特定杂交条件下与SEQ ID NO：157的598-1374核苷酸(或其全长互补体)、SEQ ID NO：157的94-1374核苷酸(或其全长互补体)、SEQ ID NO：157的1-1374核苷酸(或其全长互补体)、SEQ ID NO：157的94-2070核苷酸(或其全长互补体)或SEQ ID NO：157的1-2070核苷酸(或其全长互补体)杂交，所述特定杂交条件为：在杂交溶液(5×SSC(1×SSC为0.15M氯化钠和0.015M柠檬酸钠)、0.02％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.1％N-十二烷基肌氨酸钠、1％封闭试剂)中于62℃预杂交1小时，然后用2×SSC，0.1％SDS在室温下严格洗涤两次，每次5分钟，再在62℃下用0.5×SSC，0.1％SDS洗涤15分钟；其中所述被编码的多肽能够结合、阻断、减少、拮抗或中和IL-17A和/或IL-17F。所述被编码的多肽还可用于治疗银屑病、特应性皮炎和接触性皮炎、IBD、IBS、结肠炎、内毒素血症、关节炎、类风湿关节炎、莱姆病关节炎、银屑病、关节炎、成人呼吸系统疾病(ARD)、脓毒性休克、多器官功能衰竭、炎性肺损伤例如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、气道高反应性、慢性支气管炎、过敏性哮喘、细菌性肺炎、银屑病、湿疹和炎性肠病例如溃疡性结肠炎和克罗恩病、幽门螺杆菌感染、由腹膜炎症(即感染、损伤等)导致的腹腔内粘连和/或脓肿、系统性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎、I型糖尿病、冠心病、中风、多发性硬化、系统性硬化症、硬皮病、肾病综合征、败血症、器官移植排斥反应、移植物抗宿主疾病(GVHD)、(例如肾、肺、心脏的)移植排斥反应、链球菌细胞壁(SCW)诱导的关节炎、骨关节炎、牙龈类/牙周炎、单纯疱疹性角膜基质炎、骨质疏松、神经炎、单纯疱疹性角膜基质炎、癌症包括前列腺癌、肾癌、结肠癌、卵巢癌、宫颈癌、白血病、癌症血管形成(如卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌)、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、囊性纤维化、再狭窄和川崎病。
本发明还提供了含有SEQ ID NO：183的1-426氨基酸残基、SEQ ID NO：183的1-657氨基酸残基或SEQ ID NO：183的1-658氨基酸残基的分离的多肽。任选地，所述多肽还可包括免疫球蛋白部分，例如免疫球蛋白重链恒定区。所述免疫球蛋白重链恒定区可以来源于例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgM、IgE或它们的衍生物。所述免疫球蛋白重链恒定区可以具有抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(“ADCC”)和/或补体依赖性细胞毒性(“CDC”)。所述免疫球蛋白重链恒定区可为例如：Fc5、Fc10、SEQ ID NO：183的427-657氨基酸残基和SEQ ID NO：183的427-658氨基酸残基。所述多肽还可任选地包括分泌信号序列，例如人类IL-17RA(例如SEQ ID NO：184和185)、人类IL-17RC(例如SEQ ID NO：2的1-20氨基酸残基)、otPA前原信号肽(SEQ ID NO：178)、人类生长激素(SEQ ID NO：168和169)以及人类CD33(SEQ ID NO：172和173)。所述多肽可在培养的细胞中被重组表达，所述细胞例如原核细胞(例如大肠杆菌)和真核细胞(例如，哺乳动物细胞例如中国仓鼠卵巢细胞和酵母细胞例如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris))。
本发明还提供了编码含有SEQ ID NO：183的1-426氨基酸残基的多肽的分离的核酸分子。所述核酸分子可为例如SEQ ID NO：182的核苷酸序列。任选地，所述被编码的多肽还可包括免疫球蛋白部分，例如免疫球蛋白重链恒定区。所述免疫球蛋白重链恒定区可以来源于例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgM、IgE或它们的衍生物。所述免疫球蛋白重链恒定区可以具有抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(“ADCC”)和/或补体依赖性细胞毒性(“CDC”)。所述免疫球蛋白重链恒定区可为例如：Fc5、Fc10、SEQ ID NO：183的427-657氨基酸残基和SEQ ID NO：183的427-658氨基酸残基。所述被编码的多肽还可任选地包括分泌信号序列，例如人类IL-17RA(例如SEQ ID NO：184和185)、人类IL-17RC(例如SEQ ID NO：2的1-20氨基酸残基)、otPA前原信号肽(SEQ IDNO：178)、人类生长激素(SEQ ID NO：168和169)以及人类CD33(SEQ IDNO：172和173)。所述被编码的多肽可在培养的细胞中被重组表达，所述细胞例如原核细胞(例如大肠杆菌)和真核细胞(例如，哺乳动物细胞例如中国仓鼠卵巢细胞和酵母细胞例如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris))。
本发明还提供了一种表达载体，所述载体含有有效连接的下列元件：a)转录启动子；b)编码一种多肽的DNA区段，所述被编码的多肽含有SEQ IDNO：183的1-426氨基酸残基；以及c)转录终止子。所述被编码的多肽还可包括免疫球蛋白部分。所述免疫球蛋白重链恒定区可以来源于例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgM、IgE或它们的衍生物。所述免疫球蛋白重链恒定区可以具有抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(“ADCC”)和/或补体依赖性细胞毒性(“CDC”)。所述免疫球蛋白重链恒定区可为例如：Fc5、Fc10、SEQ IDNO：183的427-657氨基酸残基和SEQ ID NO：183的427-658氨基酸残基。所述被编码的多肽还可任选地包括分泌信号序列，例如人类IL-17RA(例如SEQ IDNO：184和185)、人类IL-17RC(例如SEQ ID NO：2的1-20氨基酸残基)、otPA前原信号肽(SEQ ID NO：178)、人类生长激素(SEQ ID NO：168和169)以及人类CD33(SEQ ID NO：172和173)。所述被编码的多肽可在培养的细胞中被重组表达，所述细胞例如原核细胞(例如大肠杆菌)和真核细胞(例如，哺乳动物细胞例如中国仓鼠卵巢细胞和酵母细胞例如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris))。本发明还提供了一种产生多肽的方法，包括：培养已被导入本文所述的表达载体的细胞，其中所述细胞表达由所述DNA区段编码的多肽；以及回收所述表达的多肽。
本发明还提供了一种组合物，所述组合物包含含有SEQ ID NO：183的1-426氨基酸残基的多肽以及可药用的载体。任选地，所述多肽还可包括免疫球蛋白部分，例如免疫球蛋白重链恒定区。所述免疫球蛋白重链恒定区可以来源于例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgM、IgE或它们的衍生物。所述免疫球蛋白重链恒定区可以具有抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(“ADCC”)和/或补体依赖性细胞毒性(“CDC”)。所述免疫球蛋白重链恒定区可为例如：Fc5、Fc10、SEQ ID NO：183的427-657氨基酸残基和SEQ ID NO：183的427-658氨基酸残基。
本发明还提供了一种治疗患有疾病的受试者的方法，所述方法包括给予所述受试者含有SEQ ID NO：183的1-426氨基酸残基的多肽，其中所述多肽能够结合、阻断、减少、拮抗或中和IL-17A和/或IL-17F的活性，并且其中所述疾病选自：银屑病、特应性皮炎和接触性皮炎、IBD、IBS、结肠炎、内毒素血症、关节炎、类风湿关节炎、莱姆病关节炎、银屑病关节炎、成人呼吸系统疾病(ARD)、脓毒性休克、多器官功能衰竭、炎性肺损伤例如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、气道高反应性、慢性支气管炎、过敏性哮喘、细菌性肺炎、银屑病、湿疹和炎性肠病例如溃疡性结肠炎和克罗恩病、幽门螺杆菌感染、由腹膜炎症(即感染、损伤等)导致的腹腔内粘连和/或脓肿、系统性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎、I型糖尿病、冠心病、中风、多发性硬化、系统性硬化症、硬皮病、肾病综合征、败血症、器官移植排斥反应、移植物抗宿主疾病(GVHD)、(例如肾、肺、心脏的)移植排斥反应、链球菌细胞壁(SCW)诱导的关节炎、骨关节炎、牙龈炎/牙周炎、单纯疱疹性角膜基质炎、骨质疏松、神经炎、单纯疱疹性角膜基质炎、癌症包括前列腺癌、肾癌、结肠癌、卵巢癌、宫颈癌、白血病、癌症血管形成(如卵巢癌、宫颈癌和前列腺癌)、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、囊性纤维化、再狭窄和川崎病。任选地，所述多肽还可包括免疫球蛋白部分，例如免疫球蛋白重链恒定区。所述免疫球蛋白重链恒定区可以来源于例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgM、IgE或它们的衍生物。所述免疫球蛋白重链恒定区可以具有抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(“ADCC”)和/或补体依赖性细胞毒性(“CDC”)。所述免疫球蛋白重链恒定区可为例如：Fc5、Fc10、SEQ ID NO：183的427-657氨基酸残基和SEQ IDNO：183的427-658氨基酸残基。
本发明还提供了一种治疗患有疾病的受试者的方法，所述方法包括给予所述受试者一种组合物，所述组合物包含含有SEQ ID NO：183的1-426氨基酸残基的多肽和可药用的载体，其中所述多肽能够结合、阻断、减少、拮抗或中和IL-17A和/或IL-17F的活性，并且其中所述疾病选自：银屑病、特应性皮炎和接触性皮炎、IBD、IBS、结肠炎、内毒素血症、关节炎、类风湿关节炎、莱姆病关节炎、银屑病关节炎、成人呼吸系统疾病(ARD)、脓毒性休克、多器官功能衰竭、炎性肺损伤例如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、气道高反应性、慢性支气管炎、过敏性哮喘、细菌性肺炎、银屑病、湿疹和炎性肠病例如溃疡性结肠炎和克罗恩病、幽门螺杆菌感染、由腹膜炎症(即感染、损伤等)导致的腹腔内粘连和/或脓肿、系统性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎、I型糖尿病、冠心病、中风、多发性硬化、系统性硬化症、硬皮病、肾病综合征、败血症、器官移植排斥反应、移植物抗宿主疾病(GVHD)、(例如肾、肺、心脏的)移植排斥反应、链球菌细胞壁(SCW)诱导的关节炎、骨关节炎、牙龈炎/牙周炎、单纯疱疹性角膜基质炎、骨质疏松、神经炎、单纯疱疹性角膜基质炎、癌症包括前列腺癌、肾癌、结肠癌、卵巢癌、宫颈癌、白血病、癌症血管形成(如卵巢癌、宫颈癌和前列腺癌)、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、囊性纤维化、再狭窄和川崎病。任选地，所述多肽还可包括免疫球蛋白部分，例如免疫球蛋白重链恒定区。所述免疫球蛋白重链恒定区可以来源于例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgM、IgE或它们的衍生物。所述免疫球蛋白重链恒定区可以具有抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(“ADCC”)和/或补体依赖性细胞毒性(“CDC”)。所述免疫球蛋白重链恒定区可为例如：Fc5、Fc10、SEQ ID NO：183的427-657氨基酸残基和SEQ ID NO：183的427-658氨基酸残基。
本发明还提供了能够与含有SEQ ID NO：183的1-426氨基酸残基、SEQ IDNO：183的1-657氨基酸残基和/或SEQ ID NO：183的1-658氨基酸残基的多肽特异性结合的抗体或抗体片段。所述抗体或抗体片段选自：多克隆抗体、鼠类单克隆抗体、来源于鼠类单克隆抗体的人源化抗体、抗体片段、中和抗体和人类单克隆抗体。任选地，所述抗体片段可为选自下列的片段：F(ab’)2、F(ab)2、Fab’、Fab、Fv、scFv和最小识别单位。本发明还提供了能够与本文所述的抗体或抗体片段特异性结合的抗独特型抗体。
本发明还提供了含有SEQ ID NO：183的1-426氨基酸残基和免疫球蛋白部分的融合蛋白。任选地，所述免疫球蛋白部分可为免疫球蛋白重链恒定区，例如SEQ ID NO：183的427-657氨基酸残基和SEQ ID NO：183的427-658氨基酸残基。本发明还提供了编码上述融合蛋白的分离的核酸分子，例如SEQ IDNO：182的1-1971核苷酸和SEQ ID NO：182的1-1974核苷酸。本发明还提供了含有上述融合蛋白和可药用载体的组合物。所述组合物可以用于治疗本文所述的一种或多种不同疾病。
序列同一性百分数可通过常规方法测定。参见例如，Altschul et al.，Bull.Math.Bio.48：603(1986)和Henikoff and Henikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89：10915(1992)。简而言之，使用空位开放罚分为10，空位延伸罚分为1，并使用表6所示的Henikoff和Henikoff(如上述文献)的“BLOSUM62”评分矩阵，将两个氨基酸序列进行比对以优化比对分数(用标准单字母编码表示氨基酸)。同一性百分数按下式计算：([相同匹配物的总数]/[较长序列的长度+为比对两序列而在较长序列中引入的空位数])(100)。
表6
   A  R  N  D   C  Q  E  G  H  I  L  K  M   F  P  S  T  W  Y  V
A  4
R  -1 5
N  -2 0  6
D  -2 -2 1  6
C  0  -3 -3 -3  9
Q  -1 1  0  0   -3 5
E  -1 0  0  2   -4 2  5
G  0  -2 0  -1  -3 -2 -2 6
H  -2 0  1  -1  -3 0  0  -2 8
I  -1 -3 -3 -3  -1 -3 -3 -4 -3 4
L  -1 -2 -3 -4  -1 -2 -3 -4 -3 2  4
K  -1 2  0  -1  -3 1  1  -2 -1 -3 -2 5
M  -1 -1 -2 -3  -1 0  -2 -3 -2 1  2  -1 5
F  -2 -3 -3 -3  -2 -3 -3 -3 -1 0  0  -3 0  6
P  -1 -2 -2 -1  -3 -1 -1 -2 -2 -3 -3 -1 -2 -4 7
S  1  -1 1  0   -1 0  0  0  -1 -2 -2 0  -1 -2 -1 4
T  0  -1 0  -1  -1 -1 -1 -2 -2 -1 -1 -1 -1 -2 -1 1  5
W  -3 -3 -4 -4  -2 -2 -3 -2 -2 -3 -2 -3 -1 1  -4 -3 -2 11
Y  -2 -2 -2 -3  -2 -1 -2 -3 2  -1 -1 -2 -1 3  -3 -2 -2  2  7
V  0  -3 -3 -3  -1 -2 -2 -3 -3 3  1  -2  1 -1 -2 -2 0  -3 -1 4
本领域技术人员了解有多种已知算法可以用于比对两个氨基酸序列。Pearson和Lipman的“FASTA”相似性搜索算法就是一种合适的蛋白质比对方法，可用于检测本文公开的氨基酸序列和一种推定的IL-17RC变体的氨基酸序列之间的同一性水平。FASTA算法描述于Pearson and Lipman，Proc.Nat’lAcad.Sci.USA 85：2444(1988)和Pearson，Meth.Enzymol.183：63(1990)。简而言之，FASTA首先在不考虑保守性氨基酸置换、插入或缺失的条件下，识别查询序列(例如SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3)和测试序列共有的、具有最高密度同一性(在ktup变量＝1时)或同一性对(在ktup变量＝2时)的区域，从而表征序列相似性。然后通过使用氨基酸置换矩阵比较所有配对的氨基酸的相似性，对具有最高密度同一性的十个区域进行再评分，并将各区域的末端“修剪”为仅包括那些对最高评分有贡献的残基。如果有一些区域的得分高于“阈(cutoff)”值(通过基于序列长度和ktup值预定的公式计算得出)，则检测修剪后的初始区域以确定这些区域是否参与形成有空位的近似比对。最后，使用改进的Needleman-Wunsch-Sellers算法(Needleman and Wunsch，J.Mol.Biol.48：444(1970)；Sellers，SIAM J.Appl.Math.26：787(1974))比对两个氨基酸序列的得分最高的区域，该算法中考虑了氨基酸插入和缺失。FASTA分析的示例性参数为：ktup＝1、空位开放罚分＝10、空位延伸罚分＝1以及置换矩＝BLOSUM62。可以如Pearson，Meth.Enzymol.183：63(1990)的附录2所述，通过修改评分矩阵文件(“SMATRIX”)，将上述参数引入FASTA程序中。
也可以使用上述公开的比值，将FASTA用于测定核酸分子的序列同一性。对于核苷酸序列比对而言，ktup值可为1至6、优选地为3至6、最优选地为3，其他参数的设置同上所述。
本发明包括这样的核酸分子：它所编码的多肽与本文公开的氨基酸序列相比含有保守性的氨基酸改变。例如，可获得如下变体：所述变体包括SEQ IDNO：2或21的一个或多个氨基酸的置换，其中用烷基氨基酸置换IL-17RA或IL-17RC氨基酸序列中的烷基氨基酸、用芳香族氨基酸置换IL-17RA或IL-17RC氨基酸序列中的芳香族氨基酸、用含硫的氨基酸置换IL-17RA或IL-17RC氨基酸序列中的含硫氨基酸、用含羟基的氨基酸置换IL-17RA或IL-17RC氨基酸序列中的含羟基氨基酸、用酸性氨基酸置换IL-17RA或IL-17RC氨基酸序列中的酸性氨基酸、用碱性氨基酸置换IL-17RA或IL-17RC氨基酸序列中的碱性氨基酸，或用二元单羧基氨基酸置换IL-17RA或IL-17RC氨基酸序列中的二元单羧基氨基酸。在常见氨基酸中，例如，“保守性氨基酸置换”可用下列各组内的氨基酸互相置换来说明：(1)甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸，(2)苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸，(3)丝氨酸和苏氨酸，(4)天冬氨酸和谷氨酸，(5)谷氨酰胺和天冬酰胺，以及(6)赖氨酸、精氨酸和组氨酸。BLOSUM62表为来源于蛋白质序列区段的约2,000次局部多重比对的氨基酸置换矩阵，代表了多于500组相关蛋白质的高度保守区域(Henikoff andHenikoff，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 89：10915(1992))。因此，可以使用BLOSUM62置换频率来确定可被引入到本发明氨基酸序列中的保守性氨基酸置换。虽然可以仅基于化学性质来设计氨基酸置换(如上所述的)，但是术语“保守性氨基酸置换”优选地指的是在BLOSUM62表中数值大于-1的那些置换。例如，如果某一氨基酸置换在BLOSUM62表中用数值为0、1、2或3表征，则该置换为保守性置换。根据这一系统，优选的保守性氨基酸置换在BLOSUM62表中的表征数值至少为1(例如1、2或3)，而更优选的保守性氨基酸置换在BLOSUM62表中的表征数值至少为2(例如2或3)。IL-17RC的具体变体可表征为与相应氨基酸序列(例如SEQ ID NO：2或21)具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或大于95％例如96％、97％、98％或99％或更高的序列同一性，其中所述氨基酸序列的变化来自于一个或多个保守性氨基酸置换。
例如可以通过用核苷酸代替SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：4所示的核苷酸，在IL-17RA或IL-17RC基因中引入保守性氨基酸改变。可以通过寡核苷酸定向诱变、接头分区诱变、使用聚合酶链式反应的诱变等方法(参见Ausubel(1995)；和McPherson(编著)，Directed Mutagenesis：A Practical Approach(IRLPress 1991))，获得这类“保守性氨基酸”变体。可通过与抗IL-17RC抗体特异性结合的能力来识别变体IL-17RC多肽。
本发明的蛋白质还可包括非天然存在的氨基酸残基。非天然存在的氨基酸包括但不限于：反式3-甲基脯氨酸、2，4-甲醇基脯氨酸、顺式4-羟基脯氨酸、反式4-羟基脯氨酸、N-甲基甘氨酸、别苏氨酸、甲基苏氨酸、羟基乙基半胱氨酸、羟基乙基高半胱氨酸、硝基谷氨酰胺、同型谷氨酰胺(homoglutamine)、六氢哌啶羧酸、噻唑烷羧酸、脱氢脯氨酸、3-和4-甲基脯氨酸，3，3-二甲基脯氨酸、叔-亮氨酸、正缬氨酸、2-氮杂苯丙氨酸、3-氮杂苯丙氨酸、4-氮杂苯丙氨酸和4-氟苯丙氨酸。在本领域中，一些用于将非天然存在的氨基酸残基引入蛋白质的方法是已知的。例如，可以使用这样一种体外系统，该系统中使用化学氨基酰化抑制物tRNA抑制了无义突变。合成氨基酸和氨基酰化tRNA的方法是本领域中已知的。通常，在一种含有大肠杆菌(E.coli)S30提取物和市售的酶类和其他试剂的无细胞系统中，进行含有无义突变的质粒的转录和翻译。通过色谱法纯化蛋白质。参见例如，Robertson et al.，J.Am.Chem.Soc. 113：2722(1991)、Ellman et al.，Methods Enzymol.202：301(1991)；Chung et al.，Science 259：806(1993)和Chung et al.，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 90：10145(1993)。
在第二种方法中，通过微注射突变mRNA和化学氨基酰化抑制物tRNA，在非洲蟾蜍(Xenopus)卵母细胞中进行翻译(Turcatti et al.，J.Biol.Chem.271：19991(1996))。在第三种方法中，在不含有所要取代的天然氨基酸(例如苯丙氨酸)而含所需的非天然存在的氨基酸(例如2-氮杂苯丙氨酸、3-氮杂苯丙氨酸、4-氮杂苯丙氨酸或4-氟苯丙氨酸)的培养基中培养大肠杆菌细胞。非天然存在的氨基酸就被引入蛋白质中而替代了其天然对应物。参见Koide et al.，Biochem.33：7470(1994)。可以通过体外化学修饰将天然存在的氨基酸残基转化为非天然存在的种类。可以将化学修饰与定点诱变相结合，以进一步扩展置换的范围(Wynn and Richards，Protein Sci.2：395(1993))。
可以用有限数量的非保守性氨基酸、不是由遗传密码子编码的氨基酸、非天然存在的氨基酸和非天然氨基酸置换IL-17RA或IL-17RC的氨基酸残基。
可以根据下述本领域已知的方法识别本发明多肽中的关键氨基酸，例如定点诱变或丙氨酸扫描(alanine-scanning)诱变(Cunningham and Wells，Science244：1081(1989)；Bass et al.，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 88：4498(1991)；Coombsand Corey，“Site-Directed Mutagenesis and Protein Engineering，”见于Proteins：Analysis and Design，Angeletti(编著)，第259-311页(Academic Press，Inc.1998))。在丙氨酸扫描诱变技术中，对分子中的每个残基位置都引入单个的丙氨酸突变，并测试所得的突变体分子的生物活性，从而识别分子活性的关键氨基酸残基。还可参见，Hilton et al.，J.Biol.Chem.271：4699(1996)。
虽然可以使用序列分析来进一步确定IL-17RA或IL-17RC配体结合区域，但是也可以通过结构的物理分析来测定对于IL-17RA或IL-17RC结合活性(例如IL-17RC与Il-17A或IL-17F的结合，以及IL-17RA与IL-17A的结合)起作用的氨基酸，所述结构的物理分析可通过例如下述的方法并结合对推定的接触位点氨基酸的突变而测定：核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和力标记。参见例如，de Vos et al.，Science 255：306(1992)，Smith et al.，J.Mol.Biol.224：899(1992)和Wlodaver et al.FEBS Lett.309：59(1992)。具体而言，识别了以下三个结构域：
1)结构域1(SEQ ID NO：159和160)包括IL-17RC的外显子8-10。这对应于IL-17RCx1(SEQ ID NO：2)的氨基酸残基193-276和IL-17RCx4(SEQ IDNO：166)的氨基酸残基208-291；
2)结构域2(SEQ ID NO：161和162)包括IL-17RC的外显子11-13。这对应于IL-17RCx1(SEQ ID NO：2)的氨基酸残基277-370和IL-17RCx4(SEQ IDNO：166)的氨基酸残基292-385；
3)结构域3(SEQ ID NO：163和164)包括IL-17RC的外显子14-16。这对应于IL-17RCx1(SEQ ID NO：2)的氨基酸残基371-447和IL-17RCx4(SEQ IDNO：166)的氨基酸残基386-462。
可以用已知的诱变方法和筛选方法制备多个氨基酸置换并进行测试，所述方法例如Reidhaar-Olson和Sauer(Science 241：53(1988))或Bowie和Sauer(Proc.Nat’lAcad.Sci.USA 86：2152(1989))中公开的方法。简而言之，以上著者公开的方法包括同时随机化多肽中的两个或多个位置、筛选功能性多肽，并随后对诱变的多肽测序以确定在每一位置上可以置换的图谱。其他可以使用的方法包括噬菌体展示(例如Lowman et al.，Biochem.30：10832(1991)；Ladner等人的美国专利No.5,223,409；Huse的国际申请公布WO 92/06204)和区域定向诱变(Derbyshire et al.，Gene 46：145(1986)和Ner et al.，DNA 7：127，(1988))。此外，可以将带有生物素或FITC标记的IL-17RC或IL-17RA用于IL-17RC配体的表达克隆。
还可以通过Stemmer，Nature 370：389(1994)；Stemmer，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 91：10747(1994)和国际申请公布WO 97/20078中公开的DNA改组技术，产生所公开的IL-17RC或IL-17RA核苷酸和多肽序列的变体。简而言之，通过将母体DNA随机片段化，然后使用PCR进行重新组装来进行体外同源重组，从而产生随机引入的点突变，以产生变体DNA分子。这一技术可以通过使用母体DNA分子的家族(例如来自不同物种的等位基因变体或DNA分子)进行改进，以在过程中引入另外的可变性。对所需活性的选择或筛选，接着进行另外的反复诱变和测定提供了序列的快速“进化”，这种进化是通过选择所需的突变并同时筛选掉有害的改变而实现的。
本文公开的诱变方法可以与高通量自动筛选方法相结合，以检测宿主细胞中克隆的诱变多肽的活性。可以使用现代化装置从宿主细胞中回收编码生物活性多肽或与抗IL-17RC或IL-17RA抗体结合的多肽的诱变DNA分子，并对其快速测序。这些方法使得可以迅速确定目的多肽中个别氨基酸残基的重要性，并可以应用于未知结构的多肽。
本发明还包括IL-17RC或IL-17RA多肽的“功能性片段”和编码这类功能性片段的核酸分子。这些功能性片段可以单独地或一起结合一个或多个配体(即IL-17A和IL-17F两者)。可以进行核酸分子的常规缺失分析，以获得编码IL-17RC或IL-17RA多肽的核酸分子的功能性片段。例如，可以用Bal31核酶来消化具有SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：4的核苷酸序列的DNA分子，以获得一系列嵌套缺失。然后将所述片段插入表达载体的合适的读码框中，分离所表达的多肽并测试其与抗IL-17RC抗体结合的能力。或者可以不使用外切核酸酶消化而使用寡核苷酸定向诱变，来引入缺失或者终止密码子来限定所需片段的产生。或者可以使用聚合酶链式反应来合成IL-17RC或IL-17RA基因的特定片段。
这一通用方法在Horisberger and Di Marco，Pharmac.Ther.66：507(1995)所总结的对于干扰素的一端或两端截短的研究中有所示例。此外，用于蛋白质功能性分析的标准技术在下述文献中有所描述：例如，Treuter et al.，Molec.Gen.Genet.240：113(1993)；Content et al.，“Expression and preliminarydeletion analysis of the 42kDa 2-5A synthetase induced by human interferon”见于Biological Interferon Systems，Proceedings of ISIR-TNO Meeting onInterferon Systems，Cantell(编著)，第65-72页(Nijhoff 1987)；Herschman，“TheEGF Receptor，”见于Control of Animal Cell Proliferation，Vol.1，Boynton et al.，(编著)第169-199页(Academic Press 1985)；Coumailleau et al.，J.Biol.Chem.270：29270(1995)；Fukunaga et al.，J.Biol.Chem.270：25291(1995)；Yamaguchiet al.，Biochem.Pharmacol.50：1295(1995)和Meisel et al.，Plant Molec.Biol.30：1(1996)。
本发明还考虑到了与本文公开的氨基酸序列相比具有氨基酸改变的IL-17RC或IL-17RA基因的功能性片段。可以如上所述地通过测定与所公开的核苷酸和氨基酸序列的同一性水平，基于结构来识别变体IL-17RC或IL-17RA基因。另一种基于结构识别变体基因的方法是测定一种编码潜在变体IL-17RC或IL-17RA基因的核酸分子是否能够与包括例如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：4的核苷酸序列的核酸分子杂交。
本发明还包括使用IL-17RC或IL-17RA多肽的功能性片段、IL-17RC和/或IL-17RA多肽的抗原性表位、带有表位的部分或配体结合部分，以及编码IL-17RC和/或IL-17RA多肽的这类功能性片段、抗原性表位、带有表位的部分或配体结合部分的核酸分子。使用这类片段来产生多肽，以用于产生能够结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17A和/或IL-17F的活性的可溶性受体或结合分子。本文定义的“功能性”IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽或其片段的特征是它们能够通过其诱导或抑制具体细胞功能的能力或与IL-17A和/或IL-17F特异性结合的能力，从而阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17A和/或IL-17F的炎症活性、增殖活性或分化活性。如上文所述，IL-17RA和IL-17RC都是以本文所述的独特细胞因子受体结构和结构域为特征的。因此，本发明还考虑了使用包括下述肽的融合蛋白：(a)包括一个或多个上述结构域的多肽分子；以及(b)包括一个或多个上述结构域的功能性片段。所述融合蛋白的其他多肽部分可以来自另一种细胞因子受体，例如IL-17样受体、IL-17RA、IL-17RE、IL-17RD，或来自可以促进所述融合蛋白分泌的非天然和/或非相关的分泌信号肽。
本发明还提供包括本文所述IL-17RC或IL-17RA多肽的配体结合部分的多肽片段或肽。这类片段或肽可包括IL-17RC或IL-17RA的与其各自配体(IL-17A和/或IL-17F)结合的部分。
对于IL-17RC或IL-17RA多肽(包括变体和融合蛋白)而言，本领域普通技术人员使用以上表1和表2所列出的信息，可以容易地产生编码该变体的完整简并多核苷酸序列。此外，本领域技术人员可以使用标准软件基于本文所述的核苷酸和氨基酸序列设计IL-17RC或IL-17RA变体。
E)IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA多肽的制备
本发明的多肽包括全长多肽；可溶性单体、同二聚体、异二聚体和多聚体形式的受体；全长受体；受体片段(例如配体结合片段和抗原性表位)、功能性片段、和融合蛋白，它们都可以根据常规技术在重组宿主细胞中产生。为了表达IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA基因，必须将编码所述多肽的核酸分子与控制表达载体中的转录表达的调控序列有效连接，然后再引入宿主细胞中。除了转录调控序列例如启动子和增强子之外，表达载体可以包括翻译调控序列和适于筛选带有表达载体的细胞的标记基因。
适于在真核细胞中产生外源蛋白质的表达载体通常含有：(1)编码细菌复制起点的原核DNA元件和抗生素抗性标记，以便于表达载体在细菌宿主中生长和对其进行筛选；(2)控制转录启动的真核DNA元件，例如启动子；和(3)控制转录物的加工的DNA元件，例如转录终止/多腺苷酸化序列。如上所述，表达载体还可以包含编码分泌序列的核苷酸序列，所述分泌序列指导异源多肽进入宿主细胞的分泌途径。例如，IL-17RC表达载体可包括IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA基因和来源于任何分泌基因的分泌序列。
本发明的IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA蛋白可在哺乳动物细胞中表达。合适的哺乳动物宿主细胞的实例包括非洲绿猴肾细胞(Vero；ATCCCRL 1587)、人类胚胎肾细胞(293-HEK；ATCC CRL 1573)、幼仓鼠肾细胞(BHK-21，BHK-570；ATCC CRL 8544，ATCC CRL 10314)、犬肾细胞(MDCK；ATCC CCL 34)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1；ATCC CCL61；CHO DG44(Chasin et al.，Som.Cell.Molec.Genet.12：555，1986))、大鼠垂体细胞(GH1；ATCC CCL82)、HeLa S3细胞(ATCC CCL2.2)、大鼠肝癌细胞(H-4-II-E；ATCC CRL 1548)、SV40转化的猴肾细胞(COS-1；ATCC CRL 1650)和鼠类胚胎细胞(NIH-3T3；ATCC CRL 1658)。
对于哺乳动物宿主而言，转录和翻译调节性信号可以来源于哺乳动物病毒，例如，腺病毒、牛乳头状瘤病毒、猿猴病毒等等，其中的调节性信号与具有高表达水平的特定基因相关。合适的转录和翻译调控序列还可来自哺乳动物基因，例如，肌动蛋白基因、胶原基因、肌球蛋白基因和金属硫蛋白基因。
转录调控序列包括足以指导RNA合成的起始的启动子区域。合适的真核细胞启动子包括：小鼠金属硫蛋白I基因的启动子(Hamer et al.，J.Molec.Appl.Genet.1：273(1982))、疱疹病毒的TK启动子(McKnight，Cell 31：355(1982))、SV40早期启动子(Benoist et al.，Nature 290：304(1981))、劳斯肉瘤病毒启动子(Gorman et al.，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 79：6777(1982))、巨细胞病毒启动子(Foecking et al.，Gene 45：101(1980))和小鼠乳腺瘤病毒启动子(总体参见，Etcheverry，“Expression of Engineered Proteins in Mammalian Cell Culture”见于Protein Engineering：Principles and Practice，Cleland et al.(编著)，第163-181页(John Wiley & Sons，Inc.1996)。
或者，如果原核启动子受真核启动子的调节，可以使用该原核启动子(例如噬菌体T3RNA聚合酶启动子)来控制哺乳动物细胞中的基因表达(Zhou etal.，Mol.Cell.Biol.10：4529(1990)和Kaufman et al.，Nucl.Acids Res.19：4485(1991))。
在某些实施方案中，将编码IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA可溶性受体多肽的DNA序列，或编码IL-17RC、IL-17RA或IL-17RC/IL-17RA多肽的片段的DNA序列与表达载体中的表达所需的其他遗传元件有效连接，所述其他遗传元件通常包括转录启动子和终止子。载体还通常含有一个或多个可筛选的标记和一个或多个复制起点，但是本领域技术人员应认识到，在某些系统中可筛选标记可以在另一载体中提供，并且可通过整合至宿主细胞基因组中来提供外源DNA的复制。启动子、终止子、可筛选标记、载体和其他元件的选择都是本领域技术人员能力范围之内的常规行为。许多这类元件都在文献中有述并可从供应商处商购。可溶性受体复合物的多个组分可以共同转染到各自的表达载体上，或者被包括在同一个表达载体中。表达蛋白质复合物中的多个组分的这类技术在本领域中是公知的。
可以使用各种标准技术将表达载体引入宿主细胞中，所述标准技术包括：磷酸钙转染、脂质体介导的转染、微注射介导的送递和电穿孔等等。可以筛选和扩增转染的细胞，以提供含有被稳定整合进宿主细胞基因组的表达载体的重组宿主细胞。用于将载体引入真核细胞的技术以及用显性可筛选标记筛选这类稳定转染体的技术在下列文献中有述：例如，Ausubel(1995)和Murray(ed.)，GeneTransfer and Expression Protocols(Humana Press 1991)。
例如，一种合适的可筛选标记为可提供新霉素抗生素抗性的基因。在这种情况下，要在存在新霉素类药物的条件下进行筛选，所述新霉素类药物例如G-418等等。还可以使用筛选系统来提高目的基因的表达水平，这一过程被称为“扩增”。扩增按照下述步骤进行：在存在低水平筛选药物的条件下培养转染体，然后逐渐增加筛选药物的量，以筛选能够高水平表达所引入基因的产物的细胞。一种合适的可扩增可筛选标记为二氢叶酸还原酶(DHFR)，它可提供对甲氨喋呤的抗性。也可以使用其他药物抗性基因(例如潮霉素抗性、多药物抗性、嘌呤霉素乙酰转移酶)。或者，可以使用可引入表型变化的标记，例如绿色荧光蛋白或细胞表面蛋白例如CD4、CD8、I类MHC和胎盘碱性磷酸酶，从而可通过例如FACS分选或磁珠分离技术的方法将转染细胞与未转染细胞相分离。
还可以通过使用病毒送递系统由培养的哺乳动物细胞产生本发明的多肽。可用于这一目的的示例性病毒包括：腺病毒、逆转录病毒、疱疹病毒、牛痘病毒和腺伴随病毒(AAV)。腺病毒为一种双链DNA病毒，它是目前研究最透彻的用于送递异源核酸的基因转运载体(综述可参见Becker et al.，Meth.Cell Biol.43：161(1994)和Douglas and Curiel，Science & Medicine 4：44(1997))。腺病毒系统的优势包括：可以容纳相对较大的DNA插入物、能够生长至高滴度、能够感染多种哺乳动物细胞类型和能够与含有不同启动子的多种现有载体相兼容。
通过缺失部分腺病毒基因组，可以容纳较大的异源DNA插入物(最高达7kb)。可以通过直接连接或通过使用共转染质粒的同源重组将这些插入物引入病毒DNA。一种方案是缺失病毒载体所必需的E1基因，这使得病毒不能在宿主细胞未提供E1基因的条件下进行复制。例如，腺病毒载体感染的人类293细胞(ATCC编号CRL-1573，45504，45505)可以作为粘附细胞或在悬浮培养中以相对高的细胞密度生长，以产生显著量的蛋白质(参见，Garnier et al.，Cytotechnol.15：145(1994))。
本发明的多肽还可以在其他高等的真核细胞中表达，所述高等真核细胞例如鸟类细胞、真菌细胞、昆虫细胞、酵母细胞或植物细胞。杆状病毒系统提供了将克隆的基因引入昆虫细胞的有效手段。合适的表达载体基于苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)多核型多角体病毒(AcMNPV)，并含有公知的启动子，例如：果蝇(Drosophila)热休克蛋白(hsp)70启动子、苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒立即早期基因启动子(ie-1)和延时早期39K启动子、杆状病毒p10启动子和果蝇金属硫蛋白启动子。另一种制备重组杆状病毒的方法使用了Luckow所述的基于转座子的系统(Luckow，et al.，J.Virol.67：4566(1993))。这一使用转运载体的系统以BAC-to-BAC试剂盒(Life Technologies，Rockville，MD)的形式出售。这一系统中使用了含有Tn7转座子的转运载体PFASTBAC(LifeTechnologies)，从而以被称为“bacmid”的大质粒的形式将编码多肽的DNA送递至大肠杆菌所含有的杆状病毒基因组中。参见，Hill-Perkins and Possee，J.Gen.Virol.71：971(1990)、Bonning，et al.，J.Gen.Virol.75：1551(1994)和Chazenbalk，and Rapoport，J.Biol.Chem.270：1543(1995)。此外，转运载体可包括在所表达多肽的C端或N端框内融合的编码表位标签的DNA，所述表位标签例如Glu-Glu表位标签(Grussenmeyer et al.，Proc.Nat’l Acad.Sci.82：7952(1985))。使用本领域已知的技术，将含有编码本发明多肽的基因的转运载体转化至大肠杆菌中，并针对bacmid进行筛选，含有被中断的lacZ基因的即表明为重组杆状病毒。然后使用常规技术分离含有bacmid DNA的重组杆状病毒基因组。
可以对示例性的PFASTBAC载体进行相当大程度的修饰。例如，可以除去多角体蛋白启动子并替换为杆状病毒碱性蛋白启动子(也被称为Pcor，p6.9或MP启动子)，所述杆状病毒碱性蛋白启动子在杆状病毒感染的较早期表达，并被证实有利于表达分泌蛋白(参见例如，Hill-Perkins and Possee，J.Gen.Virol.71：971(1990)、Bonning，et al.，J.Gen.Virol.75：1551(1994)和Chazenbalk andRapoport，J.Biol.Chem.270：1543(1995)。在这类转运载体构建体中可以使用长形式或短形式的碱性蛋白启动子。此外，可以用来源于昆虫蛋白的分泌信号序列替代天然分泌信号序列，从而构建转运载体。例如，可在构建体中使用来自蜕皮素葡萄糖基转移酶(EGT)、蜜蜂蜂毒肽(Invitrogen Corporation；Carlsbad，CA)或杆状病毒gp67(PharMingen：San Diego，CA)的分泌信号序列来代替天然IL-17RC分泌信号序列。
使用重组病毒或bacmid来转染宿主细胞。合适的昆虫宿主细胞包括：来源于IPLB-Sf-21的细胞系、草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)蛹卵巢细胞系例如Sf9(ATCC CRL 1711)、Sf21AE和Sf21(Invitrogen Corporation；San Diego，CA)，以及果蝇施耐德(Schneider)-2细胞和来源于甘兰尺蠖(Trichoplusia ni)的HIGH FIVEO细胞系(Invitrogen)(美国专利No.5,300,435)。可以使用市售的无血清培养基来培养和维持细胞。合适的培养基为用于Sf9细胞的Sf900II ^TM(LifeTechnologies)或ESF 921^TM(Expression Systems)；以及用于甘兰尺蠖细胞(T.ni)的Ex-cellO405^TM(JRH Biosciences，Lenexa，KS)或Express FiveO^TM(LifeTechnologies)。当使用重组病毒时，接种密度大约为2-5×10⁵个细胞，细胞由接种密度生长至1-2×10⁶个细胞时加入重组病毒储液，感染复数(MOI)为0.1至10，更通常地接近3。
用于在杆状病毒系统中生产重组蛋白的成熟技术在下列文献中给出：Methods in Molecular Biology，第7卷：Gene Transfer and Expression Protocols，Murray(编著)，第147-168页，Bailey等人的“Manipulation of BaculovirusVectors”(The Humana Press，Inc.1991)；DNA Cloning 2：Expression Systems，第2版，Glover et al.(编著)，第205-244页，Patel等人的“The baculovirusexpression system”(Oxford University Press 1995)；Ausubel(1995)，第16-37至16-57页；Richardson(编著)，Baculovirus Expression Protocols(The HumanaPress，Inc.1995)和Protein Engineering：Principles and Practice，Cleland et al.(编著)，第183-218页，Lucknow的“Insect Cell Expression Technology”(JohnWiley & Sons，Inc.1996)。
还可以使用真菌细胞(包括酵母细胞)来表达本文所述的基因。用于这一目的的特别受关注的酵母物种包括：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)和甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)。用于在酵母中的表达的合适启动子包括：来自GAL1(半乳糖)、PGK(磷酸甘油酸酯激酶)、ADH(醇脱氢酶)、AOX1(醇氧化酶)、HIS4(组氨醇脱氢酶)等的启动子。已经设计出了许多酵母克隆载体并且它们都是容易获得的。这类载体包括：基于YIp的载体例如YIp5、YRp载体例如YRp17、YEp载体例如YEp13，以及YCp载体例如YCp19。用外源DNA转化酿酒酵母(S.cerevisiae)细胞并由此生产重组多肽的方法公开于下列文献：例如，Kawasaki的美国专利No.4,599,311、Kawasaki等人的美国专利No.4,931,373、Brake的美国专利No.4,870,008、Welch等人的美国专利No.5,037,743和Murray等人的美国专利No.4,845,075。通过由可筛选标记确定的表型筛选转化的细胞，所述可筛选标记通常为药物抗性或能够在缺少特定营养物(例如亮氨酸)的条件下生长的能力。一种合适的用于酿酒酵母的载体系统为由Kawasaki等人(美国专利No.4,931,373)公开的POT1载体系统，该系统使得可以通过在含葡萄糖的培养基上的生长来筛选转化的细胞。其他可用于酵母的合适的启动子和终止子包括来源于糖酵解酶基因(参见例如Kawasaki的美国专利No.4,599,311、Kingsman等人的美国专利No.4,615,974和Bitter的美国专利No.4,977,092)和醇脱氢酶基因的启动子和终止子。还可参见美国专利No.4,990,446、5,063,154、5,139,936和4,661,454。
用于其它酵母的转化系统也是本领域已知的，所述其他酵母包括：多形汉森酵母(Hansenula polymorpha)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、脆壁克鲁维酵母(Kluyveromycesfragilis)、玉蜀黍黑粉菌(Ustilago maydis)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)、季氏毕赤酵母(Pichia guillermondii)和麦芽糖假丝酵母(Candida maltosa)。参见例如，Gleeson et al.，J.Gen.Microbiol.132：3459(1986)和Cregg的美国专利No.4,882,279。可以根据McKnight等人的美国专利No.4,935,349的方法使用曲霉(Aspergillus)细胞。Sumino等人的美国专利No.5,162,228中公开了转化产黄顶孢霉(Acremonium chrysogenum)的方法。Lambowitz的美国专利No.4,486,533中公开了转化链孢霉(Neurospora)的方法。
例如，下列文献公开了使用甲醇毕赤酵母作为宿主生产重组蛋白的用途：Raymond的美国专利No.5,716,808、Raymond的美国专利No.5,736,383、Raymond et al.，Yeast 14：11-23(1998)和国际申请公布WO 97/17450、WO97/17451、WO 98/02536和WO 98/02565。用于转化甲醇毕赤酵母的DNA分子通常应制备为双链环形质粒形式，并优选地在转化前进行线性化。为了在甲醇毕赤酵母中生产多肽，质粒中的启动子和终止子可为甲醇毕赤酵母基因的启动子和终止子，例如甲醇毕赤酵母的醇利用基因(AUG1或AUG2)。其他可用的启动子包括二羟基丙酮合酶(DHAS)、甲酸脱氢酶(FMD)和过氧化氢酶(CAT)基因的启动子。为帮助DNA整合进入宿主染色体，优选地将质粒的整个表达区段加在宿主DNA序列两端的侧翼。一种可用于甲醇毕赤酵母的合适的可筛选标记为甲醇毕赤酵母ADE2基因，该基因编码磷酸核糖基-5-氨基咪唑羧化酶(AIRC；EC 4.1.1.21)，并且可以使得ade2宿主细胞在缺少腺嘌呤的条件下生长。对于需要尽量减少甲醇使用的大规模工业工艺而言，可以使用缺失了两种甲醇利用基因(AUG1和AUG2)的宿主细胞。为了产生分泌蛋白，宿主细胞可为空泡蛋白酶基因(PEP4和PRB1)缺陷型细胞。使用电穿孔来帮助将含有编码目的多肽的DNA的质粒引入甲醇毕赤酵母细胞。使用指数衰减脉冲电场，通过电穿孔转化甲醇毕赤酵母细胞，所述电场的场强为2.5至4.5kV/cm，优选地为约3.75kV/cm，时间常数(t)为1至40毫秒，最优选地为约20毫秒。
还可以将表达载体引入植物原生质体、完整的植物组织或分离的植物细胞中。将表达载体引入植物组织的方法包括用根瘤土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)直接感染植物组织或将植物组织与根瘤土壤杆菌共培养、微粒介导的送递、DNA注射和电穿孔等等。参见例如，Horsch et al.，Science 227：1229(1985)，Klein et al.，Biotechnology 10：268(1992)和Methods in Plant MolecularBiology and Biotechnology，Glick et al.(编著)，第67-88页，Miki等人的“Procedures for Introducing Foreign DNA into Plants”(CRC Press，1993)。
或者，编码本发明多肽的基因也可以在原核宿主细胞中表达。可用于在原核宿主中表达IL-17RC多肽的合适启动子是本领域技术人员公知的，包括能够识别T4、T3、Sp6和T7聚合酶的启动子、λ噬菌体的P_R和P_L启动子、大肠杆菌的trp启动子、recA启动子、热休克启动子、lacUV5启动子、tac启动子、lpp-lacSpr启动子、phoA启动子和lacZ启动子、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)的启动子、芽孢杆菌(Bacillus)的噬菌体的启动子、链霉菌(Streptomyces)的启动子、λ噬菌体的int启动子、pBR322的bla启动子和氯霉素乙酰转移酶基因的CAT启动子。关于原核启动子的综述可参见Glick，J.Ind.Microbiol.1：277(1987)，Watson et al.，Molecular Biology of the Gene，4th Ed.(Benjamin Cummins 1987)，和Ausubel etal.(1995)。
合适的原核宿主包括大肠杆菌和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilus).合适的大肠杆菌菌株包括：BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、BL21(DE3)pLysE、DH1、DH4I、DH5、DH5I、DH5IF′、DH5IMCR、DH10B、DH10B/p3、DH11S、C600、HB101、JM101、JM105、JM109、JM110、K38、RR1、Y1088、Y1089、CSH18、ER1451和ER1647(参见例如，Brown(编著)，Molecular Biology Labfax(Academic Press 1991))。合适的枯草芽孢杆菌菌株包括：BR151、YB886、MI119、MI120和B170(参见例如，DNA Cloning：A Practical Approach，Glover(编著)中Hardy的“Bacillus Cloning Methods”(IRL Press 1985))。
当在例如大肠杆菌的细菌中表达本发明的多肽时，多肽可能通常以不可溶颗粒的形式保留在细胞质中，或者可能通过细菌分泌序列定向至周质空间。对于前一种情况，可以裂解细胞、回收颗粒并且使用例如异硫氰酸胍或尿素使其变性。然后通过稀释变性液(例如用含有尿素和还原型和氧化型谷胱甘肽的溶液进行透析，然后再用缓冲盐溶液进行透析)使变性的多肽重新折叠并二聚化。对于后一种情况，可以通过破碎细胞(例如超声破碎或渗透压破碎)使得周质空间中的内容物释放并回收蛋白质，从而以从周质空间中回收可溶性和功能性形式的多肽，这样就无需进行变性和重新折叠。
在原核宿主中表达蛋白质的方法是本领域技术人员公知的(参见例如，DNA Cloning 2：Expression Systems，第2版，Glover et al.(编著)，第15页，Williams等人的“Expression of foreign proteins in E.coli using plasmid vectorsand purification of specific polyclonal antibodies”(Oxford University Press1995)；Monoclonal Antibodies：Principles and Applications，第137页，Ward等人的“Genetic Manipulation and Expression of Antibodies”(Wiley-Liss，Inc.1995)和Protein Engineering：Principles and Practice，Cleland et al.(编著)，第101页，Georgiou的“Expression of Proteins in Bacteria”(John Wiley & Sons，Inc.1996))。
例如Ausubel(1995)中提供了用于将表达载体引入细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞和植物细胞的标准方法。
在哺乳动物细胞系统中表达外源蛋白质和回收所产生的外源蛋白质的通用方法在例如Protein Engineering：Principles and Practice，Cleland et al.(编著)，第163页，Etcheverry的“Expression of Engineered Proteins in Mammalian CellCulture”(Wiley-Liss，Inc.1996)中给出。回收由细菌系统产生的蛋白质的标准方法在例如DNA Cloning 2：Expression Systems，第2版，Glover et al.(编著)，第59-92页，Grisshammer的“Purification of over-produced proteins from E.colicells”(Oxford University Press 1995)中给出。从杆状病毒系统中分离重组蛋白的成熟方法在Richardson(编著)，Baculovirus Expression Protocols(The HumanaPress，Inc.1995)中有所描述。
或者，可以使用完全固相合成法、局部固相合成法、片段缩合法或经典的溶液合成法来合成本发明的多肽。这些合成方法是本领域技术人员公知的(参见例如，Merrifield，J.Am.Chem.Soc.：2149(1963)；Stewart et al.，“Solid PhasePeptide Synthesis”(第2版)，(Pierce Chemical Co.1984)；Bayer and Rapp，Chem.Pept.Ptot.3：3(1986)；Atherton et al.，Solid Phase Peptide Synthesis：APractical Approach(IRL Press 1989)；Fields and Colowick，“Solid-Phase PeptideSynthesis，”Methods in Enzymology第289卷(Academic Press 1997)和Lloyd-Williams et al.，Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides andProteins(CRC Press，Inc.1997))。完全化学合成策略的一些修改策略，例如“天然化学连接”和“表达的蛋白质连接”也是本领域中的标准方法(参见例如，Dawson et al.，Science 266：776(1994)；Hackeng et al.，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA94：7845(1997)；Dawson，Methods Enzymol.287：34(1997)；Muir et al，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95：6705(1998)和Severinov and Muir，J.Biol.Chem.273：16205(1998))。
本发明的肽和多肽包括SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：21的至少6个、至少9个或至少15个连续氨基酸残基。例如，多肽可包括SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：5和/或SEQ ID NO：21的至少6个、至少9个或至少15个连续氨基酸残基。在本发明的某些实施方案中，所述多肽包括上述氨基酸序列的20、30、40、50、100或更多个连续残基。编码这类肽和多肽的核酸分子可用作聚合酶链式反应的引物和探针。
此外，本发明的多肽及其片段在高等真核细胞中可以以单体、同二聚体、异二聚体或多聚体的形式表达。可以使用这类细胞来产生至少含有IL-17RC多肽的一部分(“含IL-17RC的受体”或“含IL-17RC的受体多肽”)或IL-17RC和IL-17RA两者结合的一部分(以单体、同二聚体或异二聚体的形式)的IL-17RC单体、同二聚体、异二聚体和多聚体受体多肽，或者可以使用这类细胞作为筛选系统中的测试细胞。在本发明的一个方面，由培养的细胞产生至少包括IL-17RC或IL-17RA的胞外结构域的配体结合部分的本发明的多肽，并且所述细胞被用于筛选所述受体的配体，所述配体包括天然配体IL-17F以及IL-17A，或者甚至包括天然配体的激动剂和拮抗剂。总而言之，这一方法包括将编码受体的cDNA或基因与其表达所需的其他遗传元件(例如转录启动子)相结合，然后将所得的表达载体插入至宿主细胞中。选择表达该DNA并产生功能性受体的细胞并将其用于多种筛选系统中。可在相同的细胞中表达单体、同二聚体、异二聚体和多聚体受体复合物的每一组分。此外，单体、同二聚体、异二聚体和多聚体受体复合物的组分还可以与跨膜结构域或其他膜融合部分相融合，以使得可以如上所述地组装复合物并筛选转染体。
为测定本发明的多肽，适用于表达IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA受体或已知能结合IL-17A或IL-17F的其他受体并转导受体介导的信号的哺乳动物细胞(例如表达IL-17R的细胞)，包括能表达可与IL-17RC形成功能性复合物的其他受体亚基的细胞。还优选使用与待表达的受体来自于同一物种的细胞。在一个优选的实施方案中，细胞的增殖依赖于外部提供的造血生长因子。这一类型中优选的细胞系为人类TF-1细胞系(ATCC保藏号CRL-2003)和AML-193细胞系(ATCC保藏号CRL-9589)，它们是GM-CSF依赖性人类白血病细胞系，这一类型中优选的细胞系还有BaF3(Palacios和Steinmetz，Cell 41：727-734，(1985))，它是IL-3依赖性鼠类前B细胞系(pre-B cell line)。其他细胞系包括BHK细胞、COS-1细胞和CHO细胞。可以对合适的宿主细胞进行基因工程改造，以使其产生目的细胞应答所需的必需受体亚基或其他细胞组分。这一方法的优势在于：由于可对细胞系进行基因工程改造使其表达来源于任何物种的受体亚基，因此就克服可来源于物种特异性的潜在限制。可以克隆人类受体cDNA的物种直系同源物并用于来自相同物种的细胞系中，例如在BaF3细胞系中使用小鼠cDNA。因此，可以对依赖于造血生长因子(例如GM-CSF或IL-3)的细胞系进行基因工程改造，使其变得依赖于另一种通IL-17RC或IL-17RA受体起作用的细胞因子，例如IL-17F或IL-17A。
在筛选测定中使用表达功能性受体的细胞。本领域已知有多种合适的测定方法。这些测定方法基于对目标细胞中的生物应答的检测。一种这类的测定方法为细胞增殖测定。分别在存在或不存在测试化合物的条件下培养细胞，并检测细胞增殖，所述检测细胞增殖的方法例如测量氚化胸腺嘧啶的掺入，或者基于3-(4，5-二甲基噻唑2-基)-2，5-二苯基四唑溴(MTT)的代谢降解的比色测定(Mosman，J.Immunol. Meth.65：55-63，(1983))。另一种测定形式是用经过进一步基因工程改造而表达报告基因的细胞。将报告基因与能响应受体相关途径的启动子元件相连接，所述测定检测报告基因的转录的激活。这一方面的优选的启动子元件为血清应答元件即SRE。参见例如Shaw et al.，Cell 56：563-572，(1989)。一种优选的这类报告基因为萤光素酶基因(de Wet et al.，Mol.Cell Biol.7：725，(1987))。使用本领域已知的方法(例如Baumgartner et al.，J.Biol.Chem.269：29094-29101，(1994)；Schenborn and Goiffin，Promega_Notes 41：11，1993)通过发光检测萤光素酶基因的表达。萤光素酶活性测定试剂盒可从例如PromegaCorp.，Madison，WI商购。这一类型的目标细胞系可以用来筛选化学物质库、限制条件细胞培养基、真菌培养肉汤、土壤样本、水样本等等。例如，可以用一系列限制条件细胞培养基样本测定目标细胞以识别产生配体的细胞。然后用阳性细胞产生哺乳动物表达载体中的cDNA文库，将所述文库分为多个混合份(pool)，转染至宿主细胞中并进行表达。然后测定来自转染细胞的培养基样本，再次分成多个混合份，再次转染，传代，并再次测定阳性细胞，以分离编码配体的克隆的cDNA。
本发明提供的另一种筛选方法包括使用杂合的受体多肽。这种杂合多肽分为两大类。在第一类中，IL-17RC的胞内结构域连接另一受体的配体结合结构域。第二类杂合受体多肽包括IL-17RC的胞外(配体结合)结构域(SEQ IDNO：3)和IL-17RA(SEQ ID NO：21)以及另一受体(优选为造血细胞因子受体)的胞内结构域和一个跨膜结构域。所述第二类的本发明受体的杂合的单体、同二聚体、异二聚体和多聚体在已知能够对所述的另一受体转导的信号进行应答的细胞中表达。总之，这两类杂合受体使得可以识别用于开发检测IL-17F或II-17A的测定方法的应答细胞类型。此外，这类细胞还可以用于在存在IL-17F或IL-17A的条件下，在竞争型测定中测定本发明的可溶性受体拮抗剂。在这类测定中，存在本发明的可溶性受体时，增殖或IL-17F或IL-17A的信号转导活性的降低表明本发明的可溶性受体具有拮抗活性。此外，IL-17RC-可溶性受体结合测定是一种基于细胞的测定方法，它还可被用于评估一种可溶性受体是否能够结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17F或IL-17A的活性。
本发明提供了一种表达载体，所述表达载体含有有效连接的下列元件：a)转录启动子；b)编码多肽的DNA区段，其中所述被编码的多肽含有与SEQ IDNO：158的33-458氨基酸残基具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述多肽能够结合IL-17A和/或IL-17F；以及c)转录终止子。所述DNA区段还可编码分泌信号序列。所述DNA区段还可编码免疫球蛋白部分，例如免疫球蛋白重链恒定区，例如SEQ ID NO：158的459-690氨基酸残基。任选地，所述表达载体可被导入培养的细胞，例如大肠杆菌或中国仓鼠卵巢细胞，其中所述细胞表达由所述DNA区段编码的多肽。本发明的另一个实施方案为一种生产多肽的方法，包括：培养已被导入权利要求13的表达载体的细胞，其中所述细胞表达由所述DNA区段编码的多肽；以及回收所述表达的多肽。
本发明还提供了一种组合物，所述组合物包括含有与SEQ ID NO：158的33-458氨基酸残基具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的分离的多肽以及可药用的载体。所述多肽还可含有免疫球蛋白部分(例如免疫球蛋白重链恒定区，例如来自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或它们的变体或突变体的Fc区域，SEQID NO：175的1-232氨基酸残基，以及SEQ ID NO：158的459-690氨基酸残基)。
本发明还提供了一种治疗患有由于IL-17A和/或IL-17F活性所引起、维持或恶化的疾病的受试者的方法，所述方法包括给予所述受试者含有与SEQ IDNO：158的33-458氨基酸残基具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的分离的多肽，其中所述多肽能够结合、阻断、减少、拮抗或中和IL-17A和/或IL-17F，并且所述疾病选自：银屑病、特应性皮炎和接触性皮炎、IBD、IBS、结肠炎、内毒素血症、关节炎、类风湿关节炎、莱姆病关节炎、银屑病关节炎、成人呼吸系统疾病(ARD)、脓毒性休克、多器官功能衰竭、炎性肺损伤例如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、气道高反应性、慢性支气管炎、过敏性哮喘、细菌性肺炎、银屑病、湿疹和炎性肠病例如溃疡性结肠炎和克罗恩病、幽门螺杆菌感染、由腹膜炎症(即感染、损伤等)导致的腹腔内粘连和/或脓肿、系统性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎、I型糖尿病、冠心病、中风、多发性硬化、系统性硬化症、硬皮病、肾病综合征、败血症、器官移植排斥反应、移植物抗宿主疾病(GVHD)、(例如肾、肺、心脏的)移植排斥反应、链球菌细胞壁(SCW)诱导的关节炎、骨关节炎、牙龈炎/牙周炎、单纯疱疹性角膜基质炎、骨质疏松、神经炎、癌症包括前列腺癌、肾癌、结肠癌、卵巢癌、宫颈癌、白血病、癌症血管形成(如卵巢癌、宫颈癌和前列腺癌)、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、囊性纤维化、再狭窄和川崎病。
F)IL-17RC，IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA融合蛋白和缀合物的制备
IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA类似物的一个大类是具有本文公开的氨基酸序列的突变氨基酸序列的变体。IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA类似物的另一个大类由如下所述的抗独特型抗体及其片段提供。此外，含有抗独特型可变结构域的重组抗体也可被用作类似物(参见例如，Monfardini et al.，Proc.Assoc.Am.Physicians 108：420(1996))。由于抗独特型IL-17RC抗体的可变结构域类似于IL-17RC，因此这些结构域可提供IL-17RC结合活性。生产抗独特型催化抗体的方法是本领域技术人员已知的(参见例如，Joron et al.，Ann.N Y Acad.Sci. 672：216(1992)、Friboulet et al.，Appl.Biochem.Biotechnol.47：229(1994)和Avalle et al.，Ann.N Y Acad.Sci.864：118(1998))。
识别IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA类似物的另一种方法使用了组合文库。构建和筛选噬菌体展示文库和其他组合文库的方法在下列文献中有述：例如，Kay et al.，Phage Display of Peptides and Proteins(Academic Press1996)；Verdine的美国专利No.5,783,384、Kay等人的美国专利No.5,747,334和Kauffman等人的美国专利No.5,723,323.
IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA多肽可用于体内和体外用途。例如，可将可溶形式的IL-17RC加入到细胞培养基中，以抑制由培养细胞产生的IL-17RC配体(即IL-17F和/或IL-17A)的作用。
可以使用IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA的融合蛋白来表达和分离相应的多肽。如下所述，特定的IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA融合蛋白还具有诊断用途和治疗用途。一种类型的融合蛋白包括能导向由重组宿主细胞产生的IL-17RC多肽的肽。为指导IL-17RC多肽进入真核宿主细胞的分泌途径，在IL-17RC表达载体中提供了分泌信号序列(也被称为信号肽、前导序列、前原序列或前序列)。虽然分泌信号序列可来源于IL-17RC，合适的信号序列也可以来源于另一种分泌蛋白或完全从头合成。将分泌信号序列与IL-17RC编码序列有效连接，以使得这两个序列处于正确的读码框中，并且它们的位置使得可以指导新合成的多肽进入宿主细胞的分泌途径。分泌信号序列通常位于编码目的多肽的核苷酸序列的5’端，但是某些分泌信号序列也可以位于目的核苷酸序列的其他位置(参见例如，Welch等人的美国专利No.5,037,743；Holland等人的美国专利No.5,143,830)。
虽然由哺乳动物细胞产生的IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA的分泌信号序列(例如美国专利No.5,641,655所述的组织型纤溶酶原激活物信号序列)可用于相应多肽在重组哺乳动物宿主中的表达，但是对于酵母细胞中的表达而言还是优选使用酵母的信号序列。合适的酵母信号序列的实例为来源于酵母交配外激素α-因子(由MFα1基因编码)、转化酶(由SUC2基因编码)或酸性磷酸酶(由PHO5基因编码)的那些酵母信号序列。参见例如，Romanos etal.，“Expression of Cloned Genes in Yeast”见于DNA Cloning 2：A PracticalApproach，第2版，Glover and Hames(编著)，第123-167页(Oxford UniversityPress 1995)。
可以通过表达编码胞外结构域(例如含有整个SEQ ID NO：3或其一部分或非人类受体的相应区域的多肽)的截短型DNA，来制备本发明的可溶性受体多肽。优选地，所制备的胞外结构域多肽形式基本上不含有跨膜多肽区段和胞内多肽区段。为了指导受体结构域从宿主细胞的输出，将受体DNA与编码分泌肽例如t-PA分泌肽的另一DNA区段相连接。为了便于纯化分泌的受体结构域，可以在受体多肽上融合一段C端延伸序列，例如多组氨酸标签、P物质、Flag^TM肽(Hopp et al.，Biotechnology 6：1204-1210，(1988)；可购自Eastman Kodak Co.，New Haven，CT)或其他具有可获得的抗体或特异性结合物的多肽或蛋白。
在另一种方法中，IL-17RC、IL-17RA或IL-17RC/IL-17RA的受体胞外结构域或其部分可以与免疫球蛋白重链恒定区一起融合表达，所述免疫球蛋白重链恒定区通常为Fc片段，它含有两个恒定区结构域和一个铰链区域，但是不含有可变区(参见，Sledziewski，AZ等人的美国专利No.6,018,026和5,750,375)。本发明的可溶性多肽包括这类融合蛋白。SEQ ID NO：64显示了一种这类融合蛋白。这类融合蛋白通常以多聚体分子的形式分泌，其中所述Fc的各部分彼此之间以二硫键连接，并且两个受体多肽在排布上彼此十分接近。这种类型的融合蛋白可用于从溶液中亲和纯化同源配体，可用作体外测定工具在体外通过特异性滴定配体而阻断、抑制或减少信号，并且可作为体内拮抗剂(通过肠胃外给药以结合循环系统中的配体并将配体从循环系统中清除)。为了纯化配体，可在有利于受体-配体结合的条件下(通常接近生理条件的温度、pH和离子强度)，向含有配体的样本(例如限定条件的细胞培养基或组织提取物)中加入IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA-Ig嵌合体。然后通过使用蛋白A的混合物分离嵌合配体复合物，蛋白A被固定于固相载体(例如不可溶性树脂微球)上。然后使用常规化学技术(例如盐梯度或pH梯度)洗脱配体。或者，可将嵌合体本身结合在固相载体上，然后如上所述地进行结合和洗脱。可在体内使用嵌合体来调节炎性应答包括急性期应答，例如血清淀粉样蛋白A(SAA)、C反应性蛋白(CRP)等等。通过肠胃外途径(例如通过肌内、皮下或静脉内注射)给予具有高结合亲和力的嵌合体。循环系统中的分子结合配体，并被通过正常生理过程从循环系统中清除。为了在测定中使用，可通过Fc区域将嵌合体与载体相结合，并用于ELISA方法中。
为辅助分离本发明的多肽，优选地采用使用了配体结合受体(或抗体、互补体/抗互补体对中的一个)或其结合片段和市售的生物传感器装置(BIAcore，Pharmacia Biosensor，Piscataway，NJ)的测定系统。将这类受体、抗体、互补体/抗互补体对中的一个或其片段固定于受体芯片的表面。这种装置的使用公开于Karlsson，J.Immunol. Methods 145：229-40，1991和Cunningham and Wells，J.Mol.Biol.234：554-63，1993。使用胺或巯基化学方法，将受体、抗体、互补体/抗互补体对中的一个或其片段共价连接至葡聚糖纤维上，所述葡聚糖纤维联结至流通池中的金膜上。使测试样本流过该池。如果在样本中存在配体、表位或互补体/抗互补体对中的另一个，它们就会分别与固定化的受体、抗体或互补体/抗互补体对中的一个相结合，导致介质的折射率发生改变，这可通过金膜的表面等离子共振(plasmon resonance)的变化而进行检测。这一系统可以测定结合速率和解离速率，由此可以计算亲和力并评估结合的化学计量学。或者，可以使用SELDI(TM)技术(Ciphergen，Inc.，Palo Alto，CA)分析配体/受体的结合。
配体结合受体多肽还可以用于本领域已知的其他测定系统。这些系统包括用于测定结合亲和力的Scatchard分析(参见Scatchard，Ann.NY Acad.Sci.51：660-72，1949)和测热法测定(Cunningham et al.，Science 253：545-48，1991；Cunningham et al.，Science 245：821-25，1991)。
本发明还提供了多种其他的多肽融合体和含有一个或多个多肽融合体的相关多聚体蛋白。例如，可以如美国专利No.5,155,027和5,567,584所公开的那样，以与二聚化蛋白相融合的形式制备可溶性IL-17RC、IL-17RA或IL-17RC/IL-17RA受体多肽。在这方面优选的二聚化蛋白包括免疫球蛋白恒定区结构域，例如IgGγ1和人类κ轻链。可以在经过基因工程改造的细胞中表达本发明的免疫球蛋白可溶性融合体，以产生多种多聚体IL-17RC、IL-17RA或IL-17RC/IL-17RA受体类似物。可将本发明的可溶性多肽与辅助结构域相融合，以使它们靶向于特定的细胞、组织或大分子(例如胶原或表达IL-17F或IL-17A的细胞)。本发明的多肽可以与两个或多个部分相融合，所述部分例如用于纯化的亲和标签，以及靶向结构域。多肽融合体还可以包括一个或多个切割位点，特别是在结构域之间的切割位点。参见，Tuan et al.，Connective TissueResearch 34：1-9，1996.
在细菌细胞中，经常需要以融合蛋白的形式表达异源蛋白以减弱所表达蛋白的毒性、增加其稳定性和增加其回收率。例如，可以以包括谷胱甘肽S-转移酶多肽的融合蛋白的形式表达IL-17RC(或任何本发明的多肽)。谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白通常为可溶性的，并且可以使用固化谷胱甘肽柱容易地将其从大肠杆菌裂解物中纯化。在类似的方法中，可以使用直链淀粉树脂柱分离含有麦芽糖结合蛋白多肽的IL-17RC融合蛋白，可以使用IgG-Sepharose纯化含有截短型蛋白A基因的C末端的融合蛋白。在细菌细胞中以融合蛋白的形式表达异源多肽的成熟技术在例如Williams et al.，“Expression of Foreign Proteins in E.coli Using Plasmid Vectors and Purification of Specific Polyclonal Antibodies，”见于DNA Cloning 2：A Practical Approach，第2版，Glover and Hames(编著)，第15-58页(Oxford University Press 1995)中有所描述。此外，也可以使用市售的表达系统。例如，PINPOINT Xa蛋白质纯化系统(Promega Corporation；Madison，WI)提供的方法使用了包括亲和素的树脂来分离包括在表达过程中被生物素化的多肽的融合蛋白。
可以用于分离由原核细胞或真核细胞表达的异源多肽的肽标签包括：多组氨酸标签(它对镍螯合树脂具有亲和力)、c-myc标签、钙调蛋白结合蛋白(可使用钙调蛋白亲和色谱法分离)、P物质、RYIRS标签(它可与抗RYIRS抗体结合)、Glu-Glu标签和FLAG标签(它可与抗FLAG抗体结合)。参见例如，Luo et al.，Arch.Biochem.Biophys.329：215(1996)；Morganti et al.，Biotechnol.Appl.Biochem.23：67(1996)和Zheng et al.，Gene 186：55(1997)。编码这类肽标签的核酸分子可从例如Sigma-Aldrich Corporation(St.Louis，MO)商购。
另一种形式的融合蛋白包括本发明的多肽和免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区通常为Fc片段，它含有两个或三个恒定区结构域和一个铰链区域，但是不含有可变区。例如，Chang等人的美国专利No.5,723,125描述了一种包括人类干扰素和人类免疫球蛋白Fc片段的融合蛋白。干扰素的C端与Fc片段的N端通过一个肽连接物部分相连接。肽连接物的一个实例为主要含有T细胞惰性序列的肽，它是无免疫活性的。一种示例性的肽连接物具有下述氨基酸序列：GGSGG SGGGG SGGGG S(SEQ ID NO：9)。在这种融合蛋白中，一种示例性的Fc部分为人类γ4链，该链在溶液中稳定并且没有或几乎没有补体激活活性。因此，本发明考虑到了包括IL-17RC部分或IL-17RC和IL-17R部分以及人类Fc片段的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA融合蛋白，其中所述IL-17RC部分的C端与Fc片段的N端通过肽连接物相连接，例如包括SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：21的氨基酸序列的至少一部分的肽。IL-17RC和IL-17RA的部分均可为胞外结构域或其任意片段。例如，融合蛋白可包括SEQ ID NO：3的氨基酸和一个Fc片段(例如人类Fc片段)(SEQ IDNO：64)。这类融合蛋白的另一实例为变体1454(SEQ ID NO：157和158)，所述变体包括与Fc5融合的人类IL-17RA的外显子1-6和人类IL-17RCx1的外显子8-16(SEQ ID NO：179和180)。变体1454还具有来自人类IL-17RA的天然信号肽。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
在另一个变化方案中，本发明的融合蛋白包括一个IgG序列、一个与所述IgG序列的氨基末端共价连接的IL-17RC、IL-17RA或IL-17RC/IL-17RA部分和与所述IL-17RC或IL-17RA部分的氨基末端共价连接的信号肽，其中所述IgG序列由下列元件以下述顺序组成：铰链区域、CH₂结构域和CH₃结构域。因此，所述IgG序列不含有CH₁结构域。这些部分可以显示本文所述的生物活性，例如能够结合IL-17A和/或IL-17F。生产包括抗体部分和非抗体部分的融合蛋白的通用技术描述于LaRochelle等人的EP 742830(WO 95/21258)。
包括IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA部分和Fc部分的融合蛋白可被用作例如体外测定工具。例如，可以使用IL-17RC-免疫球蛋白融合蛋白来检测生物样本中是否存在IL-F，其中使用IL-17RC部分结合配体，使用大分子(例如使用蛋白A或抗Fc抗体)将融合蛋白结合到固相载体上。可以使用这类系统识别能够干扰IL-17家族配体(例如IL-17F或IL-17A和IL-17F两者)与其受体的结合的拮抗剂和激动剂。
本发明还提供多种其他的多肽融合体。例如，可以将能产生目的生物学功能(例如结合IL-17A)的整个结构域或其一部分和来自细胞因子受体家族的另一成员(即IL-17RA)的等同功能性结构域与IL-17RC的一部分相融合，以产生不同的分子(即IL-17RC/IL-17RA)。可以在重组宿主细胞中表达多肽融合体，以产生多种这样的融合类似物。IL-17RC、IL-17RA或IL-17RC/IL-17RA多肽可以与两个或多个部分或结构域相融合，例如与用于纯化的亲和标签和靶向结构域相融合。多肽融合体还可以包括一个或多个切割位点，特别是在结构域之间的切割位点。参见例如，Tuan et al.，Connective Tissue Research 34：1(1996)。
可以利用本领域技术人员已知的方法，通过制备融合蛋白的每个组成部分并用化学方法将它们缀合在一起来制备融合蛋白。或者，可以使用已知技术产生位于合适读码框内的编码融合蛋白的各个组成部分的多核苷酸，并用本文所述的方法表达该多核苷酸。对融合蛋白进行酶切割和化学切割的通用方法描述于例如Ausubel(1995)第16-19至16-25页中。
还可通过对结构进行物理分析来表征IL-17RC和/或IL-17RA结合结构域，所述的结构物理分析可用对配体激动剂的推定的接触位点氨基酸的突变并结合例如下列的技术来测定：核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和标记。参见例如，de Vos et al.，Science 255：306(1992)，Smith et al.，J.Mol.Biol.224：899(1992)和Wlodaver et al.，FEBS Lett.309：59(1992)。
本发明还考虑到了经化学修饰的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA组合物，其中所述多肽与聚合物相连接。示例性的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽为不含有功能性跨膜结构域的可溶性多肽，例如由SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：21的氨基酸残基组成的多肽。通常，所述聚合物为水溶性的，以使得所述缀合物不会在例如生理环境的水性环境中沉淀。合适的聚合物的实例为经过修饰而具有单个反应基团的聚合物，例如用于酰基化反应的活性酯或用于烷基化反应的醛。这样就可以控制聚合的程度。活性醛的实例为聚乙二醇丙醛或其单(C1-C10)烷氧基或芳氧基衍生物(参见例如，Harris等人的美国专利No.5,252,714)。聚合物可为直链聚合物或支链聚合物。此外，也可以使用聚合物的混合物生产IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA缀合物。
用于治疗的本发明缀合物可以包括可药用的水溶性聚合物部分。合适的水溶性聚合物包括聚乙二醇(PEG)、单甲氧基PEG、单(C1-C10)烷氧基PEG、芳氧基PEG、聚(N-乙烯基吡咯酮)PEG、三氟代乙烷磺酰基(tresyl)单甲氧基PEG、PEG丙醛、碳酸双琥珀酰亚胺酯PEG、丙二醇同聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙烯多元醇(例如丙三醇)、聚乙烯醇、葡聚糖、纤维素或其他基于糖类的聚合物。合适的PEG的分子量为约600至约60,000，包括例如，5000、12000、20000和25000。IL-17RC缀合物还可以包括这类水溶性聚合物的混合物。
IL-17RC缀合物的一个实例包括IL-17RC部分(或IL-17RC/IL-17RA部分)和连接到该IL-17RC部分的N端的聚烷基氧化物部分。PEG是一种合适的聚烷基氧化物。例如，IL-17RC(或IL-17RC/IL-17RA)可通过一个被称为“聚乙二醇化”的过程而被PEG修饰。可通过本领域已知的任何聚乙二醇化反应来进行IL-17RC的聚乙二醇化(参见例如，EP 0154316、Delgado et al.，Critical Reviewsin Therapeutic Drug Carrier Systems 9：249(1992)、Duncan and Spreafico，Clin.Pharmacokinet.27：290(1994)和Francis et al.，Int J Hematol 68：1(1998))。例如，可通过有反应性的聚乙二醇分子的酰基化反应或烷基化反应来进行聚乙二醇化。在另一种方法中，通过缩合活化的PEG而形成IL-17RC缀合物，在活化的PEG中，PEG的末端羟基或氨基基团被活化的连接物所取代(参见例如，Karasiewicz等人的美国专利No.5,382,657)。
通过酰基化的聚乙二醇化通常需要使PEG的活化酯衍生物与IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽反应。活化的PEG酯的实例为酯化为N-羟基琥珀酰亚胺的PEG。本文所使用的术语“酰基化”包括在IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA和水溶性聚合物之间的下述类型的键：酰胺、氨基甲酸酯和氨基甲酸乙酯等等。通过酰基化制备聚乙二醇化的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的方法通常可包括下述步骤：(a)使IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽与PEG(例如PEG的醛衍生物的活化酯)反应，反应条件应使得一个或多个PEG基团连接到IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA上，和(b)获得反应产物。通常，应根据已知参数和所需结果确定用于酰基化反应的优化的反应条件。例如，PEG：IL-17RC(或PEG：IL-17RC/IL-17RA)的比值越大，则多聚乙二醇化的IL-17RC(或IL-17RC/IL-17RA)产物的百分比越高。
通过酰基化产生的聚乙二醇化产物通常为多聚乙二醇化产物，其中的赖氨酸ε-氨基基团通过酰基连接基团而被聚乙二醇化。连接键的一个实例为酰胺。通常，所得的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA应为至少95％单聚乙二醇化、双聚乙二醇化或三聚乙二醇化，但是根据反应条件可形成一些高度聚乙二醇化的产物种类。可以使用标准纯化方法将聚乙二醇化的产物种类与未缀合的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽相分离，所述标准方法例如透析、超滤、离子交换色谱和亲和色谱等等。
通过烷基化的聚乙二醇化通常包括使PEG的末端醛衍生物在存在还原剂的条件下与IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA反应。PEG基团可通过-CH₂-NH基团连接到多肽上。
通过还原性烷基化产生单聚乙二醇化产物的衍生作用利用了可进行衍生作用的不同类型的伯胺基团的反应活性的差异。通常，进行反应的pH值使得可以利用赖氨酸残基的ε-氨基基团与蛋白质N端残基的α氨基之间的pKa值的差异。通过这种选择性衍生作用，可以控制含有活性基团例如醛基的水溶性聚合物与蛋白质的连接。与聚合物的缀合主要发生在蛋白质的N末端，而对其他活性基团(例如赖氨酸侧链氨基)则没有显著的修饰。本发明提供了IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA单聚合物缀合物的基本均一的制剂。
用于产生基本均一的单聚合物IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA缀合物分子群体的还原性烷基化可包括下述步骤：(a)在还原性烷基化条件和合适的pH值条件下，使IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽与活性聚乙二醇反应，所述合适的pH值条件允许对IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA氨基末端的α-氨基基团进行选择性修饰，和(b)获得反应产物。用于还原性烷基化的还原剂应在水溶液中稳定，并且仅能还原在还原性烷基化的初始过程中产生的Schif碱。示例性的还原剂包括硼氢化钠、氰基硼氢化钠、二甲胺硼烷、三甲胺硼烷和吡啶硼烷。
对于基本均一的单聚合物IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA偶联物的群体而言，还原性烷基化反应条件应使得水溶性聚合物部分能够选择性连接到IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的N端。这样的反应条件通常可提供针对赖氨酸氨基基团和N端的α-氨基基团之间的pKa的差异。pH值还会影响所使用的聚合物与蛋白质的比例。通常，如果pH较低，则需要聚合物远多于蛋白质的量，因为此时N末端α基团的反应活性较低、需要更多的聚合物以获得最优化的反应条件。如果pH值较高，则聚合物：IL-17RC(或聚合物：IL-17RC/IL-17RA)的比例就不需要很大，因为此时可以获得反应活性较高的基团。通常，pH值应在3至9之间或在3至6之间。这一方法可以用于制备含有IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的同二聚体、异二聚体或多聚体可溶性受体缀合物。
需要考虑的另一因素为水溶性聚合物的分子量。通常，聚合物的分子量越高，能连接到蛋白质上的聚合物分子的数目就越少。对于聚乙二醇化反应而言，典型的分子量为约2kDa至约100kDa、约5kDa至约50kDa、或约12kDa至约25kDa。水溶性聚合物与IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的摩尔比通常应为1∶1至100∶1。通常，对于多聚乙二醇化，水溶性聚合物与IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的摩尔比应为1∶1至20∶1；对于单聚乙二醇化，水溶性聚合物与IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的摩尔比应为和1∶1至5∶1。
用于生产包括多肽和水溶性聚合物部分的缀合物的通用方法是本领域中已知的。参见例如，Karasiewicz等人的美国专利No.5,382,657；Greenwald等人的美国专利No.5,738,846；Nieforth et al.，Clin.Pharmacol.Ther.59：636(1996)；Monkarsh et al.，Anal.Biochem.247：434(1997))。这一方法可用于制备含有IL-17RC的同二聚、异二聚或多聚可溶性受体缀合物。
本发明考虑了包括本文所述的肽或多肽，例如可溶性受体或抗体的组合物。这类组合物还可包括载体。所述载体可为常规的有机载体或无机载体。载体的实例包括：水、缓冲液、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、麻油和玉米油等等。
G)IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽的分离
本发明的多肽可被纯化至相对于杂质大分子(特别是其他蛋白质和核酸)有至少约80％的纯度、至少约90％的纯度、至少约95％的纯度、或大于95％，例如96％、97％、98％或大于99％的纯度，并且不含有感染性物质和热原。本发明的多肽还可被纯化至药用级纯度，即大于99.9％的纯度。在某些制品中，纯化的多肽基本上不含有其他多肽，特别是不含有动物来源的其他多肽。
可以使用分级分离方法和/或常规纯化方法以获得从天然来源(例如人类组织来源)纯化出的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA制品、合成的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽和从重组宿主细胞中纯化出的重组IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽和IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽融合体。通常，可以使用硫酸铵沉淀法和酸或促溶剂萃取法来对样本进行分级分离。示例性的纯化步骤可包括羟基磷灰石、分子筛、FPLC和反相高效液相色谱。合适的色谱介质包括衍生化的葡聚糖、琼脂糖、纤维素、聚丙烯酰胺和特制硅胶等等。PEI、DEAE、QAE和Q衍生物也是合适的。示例性色谱介质包括苯基、丁基或辛基基团衍生化的介质，例如苯基-Sepharose FF(Pharmacia)、Toyopearl丁基650(Toso Haas，Montgomeryville，PA)、辛基-Sepharose(Pharmacia)等等；或者聚丙烯酸树脂例如Amberchrom CG 71(Toso Haas)等等。合适的固相载体包括玻璃珠、基于硅胶的树脂、基于纤维素的树脂、琼脂糖微球、交联琼脂糖微球、聚苯乙烯微球、交联聚丙烯酰胺树脂等等在其使用条件下不可溶的载体。可以用反应性基团对这些载体进行修饰，所述反应性基因使得蛋白质可以通过氨基基团、羧基基团、巯基基团、羟基基团和/或糖部分与载体连接。
偶联化学方法的实例包括溴化氰活化、N-羟基琥珀酰亚胺活化、环氧化物活化、巯基活化、酰肼活化和用于碳二亚胺偶联化学法的羧基和氨基衍生物。上述和其他固体介质都是本领域公知并广泛使用的，均可从供应商处商购。用于多肽分离和纯化的具体方法的选择是常规的设计问题，并且部分地取决于所选择载体的性质。参见例如，Affinity Chromatography：Principles&Methods(Pharmacia LKB Biotechnology 1988)和Doonan，Protein Purification Protocols(The Humana Press 1996)。
用于IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA分离和纯化的其他变化方法可由本领域技术人员设计得出。
还可以利用特定的性质分离本发明的多肽。例如，可以使用固定化金属离子吸附色谱(IMAC)来纯化富含组氨酸的蛋白质，包括那些带有组氨酸标签的蛋白质。简而言之，首先使凝胶负载二价金属离子以形成螯合物(Sulkowski，Trends in Biochem.3：1(1985))。基于所使用的金属离子，富含组氨酸的蛋白质将以不同的亲和力吸附在这一基质上，然后可用竞争性洗脱、降低pH或使用强螯合剂的方法将它们洗脱下来。其他纯化方法包括使用凝集素亲和色谱和离子交换色谱纯化糖基化蛋白(M.Deutscher，(编著)，Meth.Enzymol.182：529(1990))。在本发明的另外的实施方案中，可以构建目的多肽和亲和标签(例如麦芽糖结合蛋白，免疫球蛋白结构域)的融合体以便于纯化。此外，也可以利用本发明的可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽(例如含有IL-17RC的可溶性受体)的配体结合性质进行纯化，例如，可以使用亲和色谱方法，先将IL-17F配体结合在柱上，将含有IL-17RC的受体与柱结合，然后再使用标准色谱方法进行洗脱。
也可以通过如上所述的化学合成方法制备IL-17RC、IL-17RA或IL-17RC/IL-17RA多肽或其片段。这些多肽可为单体或多聚体形式；糖基化或非糖基化形式；聚乙二醇化或非聚乙二醇化形式；并且可以含有或不含有起始的甲硫氨酸残基。
H)针对IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA蛋白的抗体的制备
例如使用IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA表达载体的表达产物或从天然来源分离的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA作为抗原，可以获得针对IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的抗体。特别有用的抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗体可以与IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA“特异性结合”。当抗体具有下述两种性质的至少一种时认为抗体是特异性结合抗体：(1)抗体以阈值水平的结合活性结合IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA，和(2)抗体与IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的相关多肽没有明显的交叉反应。
对于第一种性质而言，当抗体与IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽、肽或表位的结合亲和力(Ka)为10⁶M^-1或更高、优选地为10⁷M^-1或更高、更优选地为10⁸M^-1或更高、最优选地为10⁹M^-1或更高时，认为抗体是特异性结合抗体。抗体的结合亲和力可以由本领域技术人员容易地测定，例如可通过Scatchard分析测定(Scatchard，Ann.NY Acad.Sci.51：660(1949))。对于第二种性质而言，例如，当抗体可通过标准蛋白质印迹分析检测到IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA，但是检测不到已知多肽时，认为抗体与相关多肽分子没有明显的交叉反应。已知相关多肽的实例包括已知的细胞因子受体。
可以使用携带抗原性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA表位的肽和多肽来产生抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗体。本发明的携带抗原性表位的肽和多肽含有SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5或本文公开的另一氨基酸序列中所含的至少9个或15至约30个氨基酸的序列。然而，含有本发明的氨基酸序列的更大部分的肽或多肽，含有本发明的多肽的30至50个氨基酸或最多至含有本发明多肽的整个氨基酸序列的任何长度的肽或多肽，也可以用于诱导与IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA结合的抗体。需要选择携带表位的肽的氨基酸序列以使得所述肽在水性溶剂中基本可溶(即所述序列包括相对多的亲水性残基，而通常应避免含有疏水性残基)。此外，也可能需要含有脯氨酸残基的氨基酸序列以用于产生抗体。
例如，可使用Jameson-Wolf的方法(Jameson and Wolf，CABIOS 4：181，(1988))，利用LASERGENE公司(DNASTAR；Madison，WI)的PROTEAN程序(3.14版)，来识别IL-17RC中的潜在抗原性位点。在所述分析中使用默认的参数。
Jameson-Wolf方法通过结合六个进行蛋白质结构预测的主要子程序，预测潜在的抗原决定簇。简而言之，首先使用Hopp-Woods方法(Hopp et al.，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 78：3824(1981))来识别代表最高的局部亲水性的区域的氨基酸序列(参数：平均七个残基)。在第二步中，使用Emini方法(Emini et al.，J.Virology 55：836(1985))来计算表面概率(参数：表面决定阈值(0.6)＝1)。第三步，使用Karplus-Schultz方法(Karplus and Schultz，Naturwissenschaften 72：212(1985))来预测主链的柔性(参数：柔性阈值(0.2)＝1)。在所述分析的第四步和第五步中，对数据应用Chou-Fasman方法(Prediction of Protein Structure and thePrinciples of Protein Conformation，Fasman(编著)，第549-586页，Chou的“Prediction of Protein Structural Classes from Amino Acid Composition”(Plenum Press 1990))和Garnier-Robson方法(Garnier et al.，J.Mol.Biol.120：97(1978))进行二级结构的预测(Chou-Fasman参数：构象表＝64种蛋白质；α区域阈值＝103；β区域阈值＝105；Garnier-Robson参数：α和β决定常数＝0)。在第六个子程序中，结合了柔性参数和亲水性/溶剂趋近性因子以确定表面轮廓值，并命名为“抗原性指数”。最后，对抗原性指数应用峰扩展函数，所述函数通过分别附加各自峰值的20％、40％、60％或80％对主要表面峰值进行扩展以补偿因表面区域相对于内部区域的流动性所产生的附加自由能。然而，由于螺旋区域可能柔性较小，因此这种计算方法不适用于位于螺旋区域中的任何主要峰。可以使用Hopp/Woods亲水性曲线来确定SEQ ID NO：3中潜在抗原性最强的区域(Hopp et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.78：3824-3828，1981；Hopp，J.Immun.Meth.88：1-18，1986和Triquier et al.，Protein Engineering 11：153-169，1998)。所述曲线基于一个滑动的六残基窗口。不考虑被掩盖的G、S和T残基以及暴露的H、Y和W残基。此外，例如使用DNASTAR Protean程序(DNASTAR，Inc.，Madison，WI)，通过Jameson-Wolf曲线图预测的SEQ ID NO：3中的IL-17RC抗原性表位作为优选的抗原性表位，并且本领域技术人员可以确定该抗原性表位。所述抗原性表位包括：(1)SEQ ID NO：3的氨基酸残基73至氨基酸残基82；(2)SEQ ID NO：3的氨基酸残基95至氨基酸残基104；(3)SEQ ID NO：3的氨基酸残基111至氨基酸残基119；(4)SEQ ID NO：3的氨基酸残基179至氨基酸残基186；(5)SEQ ID NO：3的氨基酸残基200至氨基酸残基205；(6)SEQ ID NO：3的氨基酸残基229至氨基酸残基236；(7)SEQ ID NO：3的氨基酸残基264至氨基酸残基268；和(8)SEQ ID NO：3的氨基酸残基275至氨基酸残基281。本发明考虑了抗原性肽X至Y的任一种用于产生抗IL-17RC抗体的用途，或作为工具筛选或识别本发明的中和性单克隆抗体的用途。本发明还考虑了包括抗原性肽X至Y的至少一种的多肽。本发明考虑了本文所述的任何抗原性肽或表位用于产生针对IL-17RC的抗体的用途，以及用于识别和筛选中和性的抗IL-17RC单克隆抗体的用途，所述抗IL-17RC单克隆抗体可以结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17F和/或IL-17A的活性(单独地或结合地)。
此外，合适的抗原还包括如下所述的IL-17RC或IL-17RC/IL-17R多肽，所述IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽包括上文公开的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的细胞因子结合结构域或胞外结构域以及另一种细胞因子的胞外结构域，例如I类或II类细胞因子受体结构域，例如可形成可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA异二聚体或多聚体多肽等等的结构域。
可以使用本领域技术人员公知的方法制备如下所述的多克隆抗体，所述多克隆抗体针对重组IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA蛋白或者针对从天然来源分离的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA。参见例如，Immunochemical Protocols(Manson编著)，第1-5页，Green等人的“Production of Polyclonal Antisera”(Humana Press 1992)和DNA Cloning 2：Expression Systems，第2版，Glover etal.(编著)，第15页，Williams等人的“Expression of foreign proteins in E. coliusing plasmid vectors and purification of specific polyclonal antibodies”(Oxford University Press 1995)。可通过使用佐剂来增加IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽的免疫原性，所述佐剂例如alum(氢氧化铝)或弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂。可用于免疫的多肽也包括融合体多肽，例如IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA或其一部分与免疫球蛋白多肽或与麦芽糖结合蛋白融合形成的融合体。多肽免疫原可为全长分子或其一部分。如果多肽部分为“半抗原类型”，则优选地将该部分与大分子载体(例如钥孔戚血蓝素(KLH)、牛血清清蛋白(BSA)或破伤风类毒素)相连接或结合以用于免疫。
虽然多克隆抗体通常是在动物体内产生，例如在马、牛、狗、鸡、大鼠、小鼠、兔、豚鼠、山羊或绵羊体内产生，但是本发明的抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗体也可以来源于类入灵长类抗体。在狒狒体内产生可用于诊断和治疗的抗体的通用技术可参见例如，Goldenberg等人的国际专利申请公布WO 91/11465和Losman et al.，Int.J.Cancer 46：310(1990)。
或者，可以产生抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的单克隆抗体。针对特定抗原的啮齿类单克隆抗体可通过本领域技术人员已知的方法获得(参见例如，Kohler et al.，Nature 256：495(1975)；Coligan et al.(编著)，Current ProtocolsinImmunology，Vol.1，第2.5.1-2.6.7页(John Wiley&Sons 1991)[“Coligan”]；DNA Cloning 2：Expression Systems，第2版，Glover et al.(编著)，第93页，Picksley等人的“Production of monoclonal antibodies against proteins expressedin E.coli”(Oxford University Press 1995))。
简而言之，单克隆抗体可通过下述步骤获得：用含有IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA基因表达产物的组合物注射小鼠，取血清样本以确认抗体的产生，取出脾脏以获得B-淋巴细胞，将B-淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤细胞，克隆杂交瘤细胞，筛选产生针对抗原的抗体的阳性克隆，培养产生针对抗原的抗体的克隆，以及从杂交瘤细胞培养物中分离抗体。
此外，本发明的抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗体也可以来源于人类单克隆抗体。人类单克隆抗体可由转基因小鼠获得，所述转基因小鼠经过基因工程改造而能够针对抗原性刺激进行应答从而产生特异性的人类抗体。在这种技术中，将人类重链和轻链基因座元件引入小鼠品系中，所述小鼠品系来源于在内源性重链和轻链基因座中含有定向中断的胚胎干细胞系。转基因小鼠可以合成特异性针对人类抗原的人类抗体，所述小鼠可以用于产生分泌人类抗体的杂交瘤细胞。由转基因小鼠获得人类抗体的方法在例如Green et al.，Nature Genet.7：13(1994)，Lonberg et al.，Nature 368：856(1994)和Taylor et al.，Int.Immun.6：579(1994)中有所描述。
可以使用多种成熟技术从杂交瘤细胞培养物中分离和纯化单克隆抗体。这类分离技术包括使用蛋白A Sepharose的亲和色谱、分子筛色谱和离子交换色谱(参见例如，Coligan第2.7.1-2.7.12页以及第2.9.1-2.9.3页；Methods inMolecular Biology，Vol.10，第79-104页，Baines等人的″Purification ofImmunoglobulin G(IgG)″(The Humana Press，Inc.1992))。
对于特定用途可能需要制备抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗体的片段。这类抗体片段可通过例如对抗体的蛋白酶促水解而获得。可通过使用常规方法对完整抗体进行胃蛋白酶消化或木瓜蛋白酶消化，而获得抗体片段。例如，抗体片段的产生可通过使用胃蛋白酶对抗体进行酶促切割以提供被称为F(ab’)₂的5S片段而实现。还可以使用巯基还原试剂对这一片段进一步切割，从而产生3.5S的Fab’单价片段。任选地，在切割反应中可以使用巯基封闭基团，所述巯基是由于二硫键断裂而产生的。或者，使用胃蛋白酶的酶促切割可直接产生两个单价的Fab片段和一个Fc片段。上述方法在例如下述的文献中有所描述：Goldenberg的美国专利No.4,331,647，Nisonoff et al.，Arch Biochem.Biophys.89：230(1960)；Porter，Biochem.J.73：119(1959)、Edelman et al.，Methods inEnzymology Vol.1，第422页(Academic Press 1967)和Coligan，第2.8.1-2.8.10页和第2.10.-2.10.4页。
也可以使用其他切割抗体的方法，例如分离重链以形成单价的轻链-重链片段、对片段进行进一步切割，或者其他酶技术、化学技术或遗传技术，只要所得的片段能够与可被完整抗体识别的抗原相结合即可。
例如，Fv片段包括V_H和V_L链的联合体。这种联合可能是非共价的，例如在Inbar et al.，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 69：2659(1972)中有所描述。或者，可变链可以以分子间二硫键的形式连接，或通过例如戊二醛的化学试剂相交联(参见例如，Sandhu，Crit.Rev.Biotech.12：437(1992))。
Fv片段可包括通过肽连接物相连接的V_H和V_L链。可通过构建包括由寡核苷酸连接的编码V_H和V_L结构域的DNA序列的结构基因，从而制备这种单链抗原结合蛋白(scFv)。将所述结构基因插入到表达载体中，然后将所述表达载体引入宿主细胞例如大肠杆菌中。重组宿主细胞合成由肽连接物桥连两个V结构域的单链多肽。用于产生scFv的方法在例如Whitlow et al.，Methods：ACompanion to Methods in Enzymology 2：97(1991)中有所描述(也可参见，Bird etal.，Science 242：423(1988)；Ladner等人的美国专利No.4,946,778；Pack et al.，Bio/Technology 11：1271(1993)和Sandhu，见上文)。
例如，可通过在体外使淋巴细胞与IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽相接触并在噬菌体或类似载体中筛选抗体展示文库来获得scFV(例如通过使用固定化或被标记的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA蛋白质或肽)。可通过筛选展示于例如大肠杆菌的细菌或展示于噬菌体(噬菌体展示)上的随机肽文库，从而获得编码具有潜在IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽结合结构域的多肽的基因。编码多肽的核苷酸序列可通过多种方法获得，例如可通过随机诱变和随机多核苷酸合成来获得。可以使用这些随机肽展示文库对能与已知靶标相互作用的肽进行筛选，所述已知靶标可为蛋白质或肽，例如配体或受体、生物大分子或合成大分子或者有机物质或无机物质。创建和筛选这种随机肽展示文库的技术是本领域已知的(Ladner等人的美国专利No.5,223,409、Ladner等人的美国专利No.4,946,778、Ladner等人的美国专利No.5,403,484、Ladner等人的美国专利No.5,571,698和Kay et al.，Phage Display of Peptides and Proteins(Academic Press，Inc.1996))，并且随机肽展示文库和用于筛选这类文库的试剂盒可从例如下列的供应商处商购，例如CLONTECH Laboratories，Inc.(Palo Alto，CA)，Invitrogen Inc.(San Diego，CA)，New England Biolabs，Inc.(Beverly，MA)，和Pharmacia LKB Biotechnology Inc.(Piscataway，NJ)。可以使用本文公开的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA序列来筛选随机肽展示文库，以识别可以结合IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的蛋白质。
抗体片段的另一种形式为编码单链互补决定区(CDR)的肽。CDR肽(“最小识别单位”)可通过构建编码目的抗体的CDR的基因而获得。可通过例如使用聚合酶链式反应从产生抗体的细胞的RNA来合成可变区，从而制备这类基因(参见例如，Larrick et al.，Methods：ACompanion to Methods in Enzymology 2：106(1991)；Monoclonal Antibodies：Production，Engineering and ClinicalApplication，Ritter et al.(编著)，第166页，Courtenay-Luck的“GeneticManipulation of Monoclonal Antibodies”(Cambridge University Press 1995)和Monoclonal Antibodies：Principles and Applications，Birch et al.，(编著)，第137页，Ward等人的“Genetic Manipulation and Expression of Antibodies”(Wiley-Liss，Inc.1995))。
或者，抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗体可来源于“人源化”的单克隆抗体。人源化单克隆抗体是通过将来自小鼠免疫球蛋白重链和轻链可变区的小鼠互补决定区转移至人类可变区结构域中而产生的。然后将人类抗体的典型残基替换至鼠类相应物的框架区中。使用来源于人源化单克隆抗体的抗体组分避免了可能与鼠类恒定区的免疫原性相关的潜在问题。用于克隆鼠类免疫球蛋白可变结构域的通用技术在例如Orlandi et al.，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 86：3833(1989)中有所描述。用于产生人源化单克隆抗体的技术在例如下列的文献中有所描述：Jones et al.，Nature 321：522(1986)；Carter et al.，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 89：4285(1992)；Sandhu，Crit.Rev.Biotech.12：437(1992)；Singer et al.，J.Immun.150：2844(1993)；Sudhir(编著)，Antibody Engineering Protocols(Humana Press，Inc.1995)；Protein Engineering：Principles and Practice，Cleland et al.(编著)，第399-434页，Kelley的“Engineering TherapeuticAntibodies”(John Wiley&Sons，Inc.1996)和Queen等人的美国专利No.5,693,762(1997)。
此外，可以使用本领域已知的方法和本文所述的方法对本发明的抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17AA抗体或抗体片段进行聚乙二醇化。
可通过标准技术使用抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗体或抗体片段免疫动物，从而制备多克隆抗独特型抗体。参见例如Methods In Molecular Biology：Immunochemical Protocols，Manson(编著)，第1-12页，Green等人的“Production of Polyclonal Antisera”(Humana Press 1992)。还可参见Coligan，第2.4.1-2.4.7页。或者，可通过上述技术使用抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗体或抗体片段作为免疫原来制备单克隆抗独特型抗体。再或者，可以使用上述技术制备人源化抗独特型抗体或类人灵长类抗独特型抗体。制备抗独特型抗体的方法在例如下述的文献中有所描述：Irie，美国专利No.5,208,146、Greene等人的美国专利No.5,637,677和Varthakavi and Minocha，J.Gen.Virol.77：1875(1996)。
可将抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗体与可检测标记相缀合，以形成抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA免疫缀合物。合适的可检测标记包括例如放射性同位素、荧光标记、化学发光标记、酶标记、生物发光标记或胶体金。制备和检测这类带有可检测标记的免疫缀合物的方法是本领域技术人员公知的，并且将在下文更详细叙述。
可检测标记可为能通过放射自显影检测的放射性同位素。对本发明目的特别有用的同位素为³H、¹²⁵I、¹³¹I、³⁵S和¹⁴C。
抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA免疫缀合物还可以用荧光化合物进行标记。通过将免疫缀合物暴露在合适波长的光下，并检测产生的荧光，可以确定荧光标记抗体的存在。荧光标记化合物包括异硫氰酸荧光素、罗丹明、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、邻苯二醛和荧胺。
或者，可通过将抗体组分与化学发光化合物相偶联，而使抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA免疫缀合物带有可检测的标记。通过检测化学反应过程中产生的光的存在来确定带有化学发光标签的免疫缀合物的存在。化学发光标记化合物的实例包括鲁米诺、异鲁米诺、芳香族吖啶酯、咪唑、吖啶盐和草酸酯。
类似地，可以使用生物发光化合物来标记本发明的抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA免疫缀合物。生物发光是存在于生物系统中的一类化学发光反应，其中催化性蛋白提高了化学发光反应的效率。通过检测发光来确定生物发光蛋白的存在。可用于标记的生物发光化合物包括萤光素、萤光素酶和水母发光蛋白。
或者，可通过将抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗体组分与酶连接，而使抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA免疫缀合物带有可检测的标记。当抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA酶缀合物与合适的底物一起孵育时，酶部分与底物反应产生可检测的化学物质，所述检测可通过例如分光光度法、荧光法或目测法进行。可用于使多特异性免疫缀合物带有可检测标记的酶的实例包括：β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶和碱性磷酸酶。
本领域技术人员应当知晓能够根据本发明使用的其他合适的标记。可以使用本领域已知的标准技术将标记物部分结合到抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗体上。用于这方面的一般方法在下列文献中有所描述：Kennedy et al.，Clin.Chim.Acta 70：1(1976)；Schurs et al.，Clin.Chim.Acta 81：1(1977)，Shih et al.，Int′lJ.Cancer 46：1101(1990)；Stein et al.，Cancer Res.50：1330(1990)和Coligan，见上文。
此外，可使用与亲和素、链亲和素和生物素缀合的抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗体来增加免疫化学检测的便利性和通用性(参见例如，Wilchek et al.(编著)，“Avidin-Biotin Technology，”Methods In Enzymology，Vol.184(Academic Press 1990)和Methods In Molecular Biology，Vol.10，Manson(编著)，第149-162页，Bayer等人的“Immunochemical Applications of Avidin-BiotinTechnology”(The Humana Press，Inc.1992)。
用于进行免疫测定的方法是公知的。参见例如，Monoclonal Antibodies：Production，Engineering，and Clinical Application，Ritter and Ladyman(编著)，第180-208页，Cook和Self的“Monoclonal Antibodies in DiagnosticImmunoassays”(Cambridge University Press，1995)；Monoclonal Antibodies：Principles and Applications，Birch and Lennox(编著)，第107-120页，Perry的“The Role of Monoclonal Antibodies in the Advancement of ImmunoassayTechnology”(Wiley-Liss，Inc.1995)和Diamandis，Immunoassay(Academic Press，Inc.1996)。
本发明还考虑到了用于对IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA基因表达进行免疫诊断测定的试剂盒。这类试剂盒包括至少一个含抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗体或抗体片段的容器。试剂盒还可包括装有能指示IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗体或抗体片段的存在的一种或多种试剂的另一容器。这类指示试剂的实例包括可检测标记，例如放射性标记、荧光标记、化学发光标记、酶标记、生物发光标记和胶体金等等。试剂盒还可包括指导使用者使用IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗体或抗体片段检测IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA蛋白的方法。例如，文字说明书可能会说明包装内的抗体或抗体片段可用于检测IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA。文字资料可直接印在容器上，或者可以以包装套件的形式提供。
I)本发明的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽的治疗用途
具有可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA活性的氨基酸序列可通过结合配体IL-17A和IL-17F(单独地或共同地)，并因此阻止所述配体与内源性IL-17RC和/或IL-17RA受体的结合，从而可用于调节免疫系统。这类拮抗剂例如可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA还可以通过抑制IL-17A和/或IL-17F与内源性IL-17RC和/或IL-17RA受体的结合，从而可用于调节免疫系统。因此，本发明包括具有IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA活性的蛋白质、多肽和肽(例如可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽、IL-17RC或IL-17RA多肽片段、IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA类似物以及IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA融合蛋白)用于受试者的用途，所述受试者缺少足够量的所述多肽或产生了过量的IL-17A和/或IL-17F。本发明的多肽(例如可溶性IL-17RC和/或IL-17RC/IL-17RA)还可用于治疗产生过量IL-17A、IL-17F、IL-17RA或IL-17RC的受试者。合适的受试者包括哺乳动物，例如人类。例如，这类可溶性多肽可用于结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17A和IL-17F(单独地或共同地)，可用于治疗炎症和炎性疾病，例如银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、内毒素血症、IBD、IBS、结肠炎、哮喘、同种异体移植物排斥、免疫介导的肾脏疾病、肝胆管疾病、多发性硬化、动脉粥样硬化、肿瘤生长加速或退行性关节病，以及本文公开的其他炎性病症。
在优选的实施方案中，所述可溶性受体包括IL-17RC(SEQ ID NO：3)并可为单体、同二聚体、异二聚体或多聚体的形式，它们能够在体内结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17F和IL-17A(单独地或共同地)。如本文所述，针对这类IL-17RC单体、同二聚体、异二聚体或多聚体的抗体和结合多肽也可以用作IL-17RC活性的拮抗剂和IL-17A和IL-17F的拮抗剂(单独地或共同地)。
在其他优选的实施方案中，所述可溶性受体同时包括IL-17RC和IL-17RA的一部分。一种这样的优选实施方案为一种IL-17变体1454(SEQ ID NO：157和158)，它包括与Fc5(SEQ ID NO：179和180)融合的人类IL-17RA的外显子1-6和人类IL-17RCx1的外显子8-16。变体1454还具有来源于人类IL-17RA的天然信号肽。也可以使用Fc10或本领域已知的任何等同物代替Fc5。
此外，本文中还描述了多克隆和单克隆的抗IL-17F中和抗体能够在基于细胞的中和测定中结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17F和IL-17A的活性。针对对应于IL-17RC cDNA的mRNA的组织分布分析显示，IL-17RC基因的mRNA在甲状腺、肾上腺、前列腺和肝脏组织中有很强的表达，而在心脏、小肠、胃和气管组织中表达较弱。特别地，IL-17RC在非T细胞外周血细胞系包括单核细胞、B-细胞和髓系细胞中稳定地表达。而且，IL-17RC的mRNA在来源于皮肤的细胞系中有确信的表达。其他表达IL-17RC的细胞系为阵列上存在的所有5个大肠细胞系。相反地，在脑、胎盘、肺、骨骼肌、肾脏、胰腺、脾脏、胸腺、睾丸、卵巢、结肠、外周血白细胞、脊柱、淋巴结和骨髓中没有表达或几乎没有表达。IL-17RC所结合的配体(IL-17F和/或IL-17A)参与诱导炎性应答并促进炎性疾病，这是凭借它们能够增加炎性介质包括IL-1β、IL-6和TNF-α的产生，以及能够增加与嗜中性粒细胞的增殖、成熟和趋化相关的介质的产生的能力实现的(综述于Witowski et al.Cell.Mol.Life Sci.61：567-579(2004))。
因此，本发明的一个具体实施方案涉及可溶性IL-17RC多肽和可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽用作炎性疾病和免疫疾病或例如下述的疾病的拮抗剂的用途，所述疾病例如银屑病、银屑病关节炎、特应性皮炎、炎性皮肤病、类风湿性关节炎、IBD、IBS、克罗恩病、憩室病、哮喘、胰腺炎、I型糖尿病(IDDM)、胰腺癌、胰腺炎、格雷夫斯病(Graves disease)、结肠癌和肠癌、自身免疫性疾病、脓毒症、器官或骨髓移植；由于内毒素血症、创伤、手术或感染引起的炎症；淀粉样变；脾大；移植物抗宿主疾病；和炎症的抑制，免疫抑制，造血细胞、免疫细胞、炎性细胞或淋巴样细胞、巨噬细胞、T细胞(包括Th1和Th2细胞)的增殖的抑制，对病原体或抗原的免疫应答的抑制，或其他需要抑制IL-17F和/或IL-17A的疾病。
此外，可溶性IL-17RC和可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽可用于：
(1)阻断、抑制、减少、拮抗或中和通过IL-17RA或IL-17RC进行的信号传导，以用于治疗急性炎症，即由创伤、组织损伤、手术、脓毒症或感染导致的炎症，以及慢性炎性疾病例如哮喘、炎性肠病(IBD)、IBS、慢性结肠炎、脾大、类风湿性关节炎、复发性急性炎症发作(例如结核病)，以及用于治疗淀粉样变和动脉粥样硬化、卡斯特尔曼氏病(Castleman’s disease)、哮喘，以及其他与急性期应答的诱导相关的疾病。
(2)阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17RA或IL-17RC的信号传导，以阻断或抑制免疫细胞(例如淋巴细胞、单核细胞、白细胞)中的信号传导，用于治疗自身免疫性疾病，例如IDDM、多发性硬化(MS)、系统性红斑狼疮(SLE)、重症肌无力、类风湿性关节炎、IBS和IBD。使用本发明的多肽阻断、抑制、减少或拮抗通过IL-17RC和/或IL-17RA进行的信号传导，还可有益于胰腺、肾脏、脑垂体和神经细胞的疾病。可有益于IDDM、NIDDM、胰腺炎和胰腺癌。IL-17RC和/或IL-17RA可以作为癌症的治疗靶标，其中本发明的拮抗剂可抑制癌细胞生长并实现免疫介导的杀伤(Holliger P，and Hoogenboom，H：NatureBiotech.16：1015-1016，1998)。本发明的可溶性多肽还可用于治疗肾病，例如肾小球硬化症、膜性肾病、淀粉样变(该疾病也会影响除肾脏之外的其他组织)、肾动脉硬化症、各种起源的肾小球肾炎、肾脏的纤维增生性疾病以及与SLE、IDDM、II型糖尿病(NIDDM)、肾脏肿瘤和其他疾病相关的肾功能障碍。
(3)激动、增强、增加或启动通过IL-17RA或IL-17RC进行的信号传导，用于治疗自身免疫性疾病，例如IDDM、MS、SLE、重症肌无力、类风湿性关节炎、IBS和IBD。本发明的可溶性多肽可向淋巴细胞或其他免疫细胞传导信号，以使得它们分化、改变它们的增殖或改变细胞因子或细胞表面蛋白的产生，从而改善自身免疫。特别地，将T辅助细胞应答调制为另一种细胞因子分泌模式可能改变自身免疫性应答，从而缓解疾病(Smith JA et al.，J.Immunol.160：4841-4849，1998)。类似地，可以使用激动性可溶性多肽将信号传导至免疫细胞、消耗免疫细胞和改变免疫细胞，所述免疫细胞与哮喘、过敏性疾病和特应性疾病有关。通过IL-17RC和/或IL-17RA进行的信号传导可有益于胰腺、肾脏、脑垂体和神经细胞的疾病。可有益于IDDM、NIDDM、胰腺炎和胰腺癌。
本文所述的可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽可用于结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17F或IL-17A的活性(单独地或共同地)，可用于治疗如上所述的自身免疫性疾病、特应性疾病、NIDDM、胰腺炎和肾脏功能障碍。可溶形式的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA也可用于促进由Th细胞介导的抗体应答和/或促进淋巴细胞或其他免疫细胞产生IL-4或其他细胞因子。
本发明的可溶性多肽可用作IL-17A和/或IL-17F的拮抗剂。这种拮抗效果可通过直接中和或通过与IL-17A或IL-17F的结合实现。除了拮抗用途之外，本发明的可溶性受体可以结合IL-17F或IL-17A，并作为配体的运载蛋白将配体转运至体内不同的组织、器官和细胞中。这样，本发明的可溶性受体可以与能指导可溶性受体-配体复合物到达特异性位置(例如组织、特异性免疫细胞或肿瘤)的分子、多肽或化学部分相融合或相偶联。例如，可以通过IL-17F的作用诱导炎症和局部急性期应答蛋白，从而有益于急性感染或某些癌症。因此，本发明的可溶性受体可用于特异性指导IL-17A或IL-17F的作用。参见，Cosman，D.Cytokine 5：95-106，1993；and Fernandez-Botran，R.Exp.Opin.Invest.Drugs9：497-513，2000。
炎症反应是生物体防御侵入物质的一种保护性应答。炎症反应是一种涉及多种细胞介质和体液介质的级联事件。一方面，炎性应答的抑制可使宿主成为免疫妥协宿主；然而如果不进行检查，炎症可导致一些严重的并发症，包括慢性炎性疾病(例如银屑病、关节炎、类风湿性关节炎、多发性硬化、炎性肠病等等)、感染性休克和多器官功能衰竭。重要的是，这些不同的疾病状态都涉及相同的炎性介质。这些具有炎症特征的疾病对于人类的发病率和致死率有很大的影响。因此很显然的是，抗炎性蛋白质例如本发明的可溶性多肽对于多种人类和动物疾病有着重要的治疗前景，所述疾病包括从哮喘和变态反应到自身免疫和感染性休克。
1.关节炎
关节炎——包括骨关节炎、类风湿性关节炎和由损伤引起的关节炎等等——是很常见的炎性疾病，并且可以用抗炎性蛋白质例如本发明的可溶性多肽进行治疗。例如，类风湿性关节炎(RA)是一种影响整个身体的全身性疾病，它是最常见的一类关节炎。该疾病以关节滑膜的炎症为特征，会导致疼痛、僵硬、温热、发红和肿胀。炎症细胞释放能够消化骨和软骨的酶类。作为类风湿性关节炎的后果，发炎的关节膜(滑膜)会侵蚀并损坏骨和软骨，导致关节的退化、剧痛和其他生理反应。所涉及的关节将变形和弯曲，导致疼痛和运动能力丧失。
类风湿性关节炎(RA)是一种免疫介导疾病，其特征尤其在于炎症和随后的组织损伤，导致严重的失能和致死率上升。在风湿性关节的局部会产生多种细胞因子。许多研究证实IL-1和TNF-α这两种原型促炎细胞因子在滑液炎症和进行性关节损坏的机理中起了重要作用。事实上，对患有RA的患者给予TNF-α和IL-1的抑制剂可使得炎症的临床指标和生理指标得到显著改善，并减少骨侵蚀和软骨损坏的放射性指标。然而，虽然具有上述有益效果，但是有相当百分比的患者对于这些药物没有反应，这表明在关节炎的病理生理学中还涉及其他的介质(Gabay，Expert.Opin.Biol.Ther.2(2)：135-149，2002)。其中一种介质可能为IL-17A或IL-17F，这样看来，能结合IL-17F或IL-17A或抑制IL-17F或IL-17A活性的一类分子，例如可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA，就可能作为有价值的疗法以减轻类风湿性关节炎和其他关节炎疾病中的炎症。
本领域中已知有一些类风湿性关节炎的动物模型。例如，在胶原诱导的关节炎(CIA)模型中，小鼠会发生与人类类风湿性关节炎十分类似的慢性炎性关节炎。由于CIA的免疫学特征和病理学特征都与RA相似，因此可将这一模型作为筛选潜在的抗人类炎症的化合物的理想模型。CIA模型是一种公知的小鼠模型，它依赖于依次发生的免疫应答和炎性应答。免疫应答包括B-细胞和CD4+T-细胞的相互作用，所述相互作用响应于作为抗原给予的胶原，并导致产生抗胶原抗体。某些上述抗体与小鼠的天然胶原发生交叉反应并激活补体级联作用，导致产生炎症的介质，对于该介质的组织应答就导致了炎症期。使用CIA模型的一个优势在于已经知道了其发病机制的基本机理。已经识别了II型胶原上的相关T-细胞和B-细胞表位，也已经确定了与免疫介导的关节炎相关的多个免疫学参数(例如迟发型超敏反应和抗胶原抗体)和炎症参数(例如细胞因子、趋化因子和基质降解酶类)，因此就可将这些参数用于评估待测化合物在CIA模型中的效力(Wooley，Curr.Opin.Rheum.3：407-20，1999；Williams et al.，Immunol.89：9784-788，1992；Myers et al.，Life Sci.61：1861-78，1997；和Wang et al.，Immunol.92：8955-959，1995)。
一组研究显示抗小鼠IL-17抗体在小鼠CIA模型中相对于对照小鼠缓解了症状，这表明从概念上看本发明的可溶性多肽可以用于治疗人类疾病。无论是预防性给药还是在模型动物已经出现关节炎症状后给药，单次给予特异性抗小鼠IL-17的大鼠抗血清均能减轻动物体内的关节炎症状(Lubberts et al，ArthritisRheum.50：650-9。2004)。因此，可以使用IL-17RC-Fc或IL-17RC/IL-17RA-Fc来中和IL-17A和/或IL-17F，用于治疗特定的人类疾病，例如关节炎、银屑病、银屑病关节炎、内毒素血症、炎性肠病(IBD)、IBS、结肠炎和本文公开的其他炎性疾病。
将本发明的可溶性多肽(例如IL-17RC-Fc或其他IL-17RC/IL-17RA可溶性蛋白和融合蛋白)给予上述CIA模型小鼠，以评估它们作为IL-17F和IL-17A的拮抗剂以缓解疾病症状和改变疾病进程的用途。此外，结果显示本发明的可溶性多肽对IL-17F和/或IL-17A的抑制或中和作用为以下推论提供了证据：即其他的IL-17A或Il-17F拮抗剂也可以用于缓解疾病症状和改变疾病进程。而且，由于IL-17A和/或IL-17F诱导IL-1β和TNF-α的产生，而IL-1β和TNF-α又都参与类风湿性关节炎的发病机制和疾病进程，那么全身性或局部给予上述的可溶性多肽就有可能抑制RA中的炎性应答。出于示例而非限制的意图，以每只小鼠10-200μg的量注射IL-17RC-Fc(每周1至7次，注射最多持续但不限于4周，通过皮下、静脉内或肌内给药途径)可以显著减少疾病评分(后足评分、炎症或疾病的发生)。根据IL-17RC-Fc给药的开始时间(例如在胶原免疫之前给药或在胶原免疫时给药，或在第二次胶原免疫之后的任何时间点给药，包括在已经发生疾病的时间点给药)，IL-17RC可以有效地预防类风湿性关节炎和阻止疾病的进程。其他可能的疗法包括IL-17RC/IL-17RA多肽等等。
2.内毒素血症
内毒素血症是一种严重的疾病，它通常由传染物(例如细菌和其他传染性疾病致病物)、脓毒症、中毒性休克综合征或免疫妥协患者所经受的机会性感染等等所导致。可用于治疗的抗炎性蛋白质(例如本发明的可溶性多肽)可帮助预防和治疗人类和动物的内毒素血症。这些可溶性多肽可作为有价值的疗法，以减轻内毒素血症中的炎症和病理作用。
脂多糖(LPS)诱导的内毒素血症涉及许多在传染性疾病中产生病理作用的促炎性介质，LPS诱导的啮齿动物内毒素血症是一种被广泛使用和接受的用于研究促炎性药物或免疫调节剂的药理作用的模型，。LPS由革兰氏阴性细菌产生，是感染性休克的发病机制中的一种主要的致病因子(Glausner et al.，Lancet338：732，1991)。在实验中通过向动物单次注射LPS就可以有效地诱导类似休克的状态。由细胞响应于LPS所产生的分子可直接或间接地靶向于病原体。虽然上述生物应答可以保护宿主不受病原体的侵害，但是它们也会产生有害的作用。因此，由严重的革兰氏阴性细菌感染所导致的先天免疫的大规模刺激会导致细胞因子和其他分子过量产生，并会导致发生致命综合征即感染性休克综合征，该综合征的特征为发烧、低血压、弥散性血管内凝集和多器官功能衰竭(Dumitru et al.Cell 103：1071-1083，2000)。
LPS的这些毒性作用大多与巨噬细胞激活导致的多种炎性介质的释放有关。给予中和性抗TNF抗体可以预防LPS的毒性，这表明在这些介质中TNF似乎起了关键性作用(Beutler et al.，Science 229：869，1985)。已经证实，对C57Bl/6小鼠注射1μg的大肠杆菌LPS，在注射后约2小时就可以导致循环系统中IL-6、TNF-α、IL-1和急性期蛋白(例如SAA)的显著增加。LPS的毒性似乎是由上述细胞因子介导的，因为针对上述介质的被动免疫可使致死率降低(Beutler et al.，Science 229：869，1985)。用于预防和/或治疗感染性休克的潜在的免疫干预策略包括抗TNF mAb、IL-1受体拮抗剂、LIF、IL-10和G-CSF。
可以对上述LPS诱导的模型给予本发明的可溶性多肽，以评估IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA用于缓解症状和改变LPS诱导的疾病的进程的用途。此外，结果显示这些可溶性多肽对IL-17F或IL-17A的抑制作用为以下推论提供了证据：即其他的这类拮抗剂也可以用于缓解LPS诱导的模型的症状和改变疾病进程。所述模型显示出LPS注射诱导了IL-17F的产生，而所述可溶性多肽可用于治疗疾病。由于LPS诱导了可能与内毒素血症的病理学有关的促炎因子的产生，因此可以使用拮抗剂可溶性多肽中和IL-17F活性或中和其他促炎性因子，以减轻内毒素血症的症状，例如在内毒素性休克中所见的症状。
3.炎性肠病(IBD)
在美国大约有500,000人患有炎性肠病(IBD)，该疾病影响结肠和/或直肠(溃疡性结肠炎)，小肠和大肠(克罗恩病)。这些疾病的发病机制还不清楚，但是都与受影响组织的慢性炎症相关。本发明的可溶性多肽可作为有价值的疗法，以减轻IBD、UC和相关疾病的炎症和病理作用。
溃疡性结肠炎(UC)是一种大肠(通常被称为结肠)的炎性疾病，其特征在于结肠的粘膜或最内层衬膜的炎症和溃疡。这种炎症使得结肠经常排空从而导致腹泻。症状包括大便松散以及相关的腹部绞痛、发烧和体重减轻。虽然还不知道UC的确切病因，但是最近的研究表明机体的天然防御系统正在抵抗体内的被机体认为是外来的蛋白质(一种“自身免疫性反应”)。也许由于这些蛋白质类似于肠道内的细菌蛋白质，所以它们可能会启动或刺激炎性过程，而所述炎性过程会开始破坏结肠衬膜。由于结肠的衬膜被破坏，因而会形成溃疡并释放粘液、脓和血液。这一疾病通常从直肠部分开始，可能最终会蔓延至整个大肠。炎症的反复发作会导致肠壁增厚并使直肠部分产生瘢痕组织。在疾病严重时可能发生结肠组织坏死或脓毒症。溃疡性结肠炎的症状在严重程度上会有所不同，其发病可为渐发性或突发性的。许多因素(包括呼吸系统感染或应激)都可能引起发病。
虽然目前没有有效的治疗UC的疗法，但是已有的治疗方法都主要关注于抑制结肠衬膜的异常炎性过程。目前可用于治疗该疾病的治疗方法包括皮质类固醇免疫抑制剂(例如硫唑嘌呤、巯嘌呤和甲氨喋呤)和氨基水杨酸盐。然而，长期使用免疫抑制剂例如皮质类固醇和硫唑嘌呤会导致严重的副作用，包括骨骼变细、白内障、感染和对肝脏和骨髓的影响。对于现有疗法无效的患者而言，手术也是一种选择。手术包括切除整个结肠和直肠。
已经有几种可部分模拟溃疡性结肠炎的动物模型。最广泛使用的模型为2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇诱导的结肠炎模型，该模型是在结肠中诱导慢性炎症和溃疡。当通过直肠内滴注将TNBS注入易感小鼠的结肠时，它可以在结肠粘膜上诱导T细胞介导的免疫应答，在这种情况下可导致以整个大肠壁上的T细胞和巨噬细胞的稠密浸润为特征的大面积粘膜炎症。除了这种组织病理学特征之外还伴随有以下临床特征：进行性体重减轻(消耗)、血性腹泻、直肠脱垂和大肠壁增厚(Neurath et al.Intern.Rev.Immunol.19：51-62，2000)。
另一种结肠炎模型使用右旋糖酐硫酸酯钠(DSS)来诱导急性结肠炎，该疾病的表现为血性腹泻、体重减轻、结肠变短和伴有嗜中性粒细胞浸润的粘膜溃疡。DSS诱导的结肠炎的组织学特征为炎性细胞浸润至固有层中，并伴有淋巴样增生、灶性隐窝损伤和上皮溃疡。这些改变被认为是由于DSS对上皮的毒性作用和借助于固有层细胞的吞噬作用、以及产生TNF-α和IFN-γ而形成。虽然这一模型已被广泛使用，但是DSS的机理在人类疾病的相关度方面还有一些问题没有解决。DSS模型被认为是一种不依赖T细胞的模型，因为在T细胞缺陷型动物例如SCID小鼠中也观察到了相似症状。
可以对TNBS或DSS模型给予本发明的可溶性多肽，以评估它们用于缓解症状和改变胃肠道疾病进程的用途。此外，结果显示这些可溶性多肽对IL-17F和/或IL-17A的抑制或中和作用为以下推论提供了证据：即它们(或类似分子)也可以用于缓解结肠炎/IBD模型的症状和改变疾病进程。
4.银屑病
银屑病是一种超过七百万美国人都患有的慢性皮肤疾病。银屑病在新生皮肤细胞生长异常时发生，导致发炎、肿胀和因旧皮肤未能足够快的脱落而产生的鳞片状皮肤。斑块状银屑病是最常见的类型，其特征在于表面带有银白色的鳞片的发炎的皮肤块(“损伤”)。银屑病可能局限于少数斑块或者也可能涉及中度至较大面积的皮肤，最常出现的部位为头皮、膝部、肘部和躯干部。虽然看起来很明显，但是银屑病并不是一种接触传染的疾病。该疾病的发病机制包括受影响组织的慢性炎症。本发明的可溶性多肽可作为有价值的疗法，以减轻银屑病、其他炎性皮肤疾病、皮肤和粘膜变态反应和相关疾病的炎症和病理作用。
银屑病是一种T-细胞介导的皮肤炎性疾病，可引起相当程度的不适。这是一种目前无法治愈的疾病，并且可侵害所有年龄的人群。在欧洲和北美洲，有大约2％的人群患有银屑病。虽然患有轻度银屑病的个体通常可以使用局部药物控制疾病，但是全世界仍有超过一百万的患者需要紫外线治疗或全身性免疫抑制治疗。不幸的是，紫外线辐照治疗的不便和危险性以及许多疗法的毒性限制了这些疗法的长期使用。此外，患者通常会在停止免疫抑制疗法后的很短时间内复发银屑病，有些时候还会由反弹。
本发明的可溶性多肽可用于诊断系统中，以检测循环系统中的IL-17F或IL-17A水平，和检测与急性期炎性应答相关的IL-17F或IL-17A。在相关实施方案中，可以使用本发明的可溶性多肽检测循环系统中或局部作用的IL-17F或IL-17A多肽。配体或受体多肽水平的升高或降低可指示病理性疾病，包括炎症或癌症。已知IL-17F会诱导相关的急性期炎性应答。此外，对急性期蛋白质或分子(例如IL-17A或IL-17F)的检测可以作为某些疾病状态(例如哮喘、银屑病、类风湿性关节炎、结肠炎、IBD和IBS)的慢性炎性病症的指标。这类病症的检测可以有助于疾病的诊断，并可帮助医生选择合适的疗法。
除了本文所述的其他疾病模型之外，还可以使用重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠模型，在体内测量本发明的可溶性多肽对来源于人类银屑病损伤的炎性组织的活性。已经开发了一些人类细胞被植入免疫缺陷型小鼠的小鼠模型(统称为异种移植物模型)；参见例如，Cattan AR，Douglas E，Leuk.Res.18：513-22，1994和Flavell，DJ，Hematological Oncology14：67-82，1996。作为一种银屑病的体内异种移植物模型，将人类银屑病皮肤组织植入SCID小鼠模型中，并用合适的拮抗剂攻击。此外，也可以使用本领域中的其他银屑病动物模型来评估IL-17A和IL-17F拮抗剂，例如将人类银屑病皮肤移植物植入AGR129小鼠模型中，并用合适的拮抗剂攻击(例如参见，Boyman，O.et al.，J.Exp.Med.Onlinepublication#20031482，2004，该文献以援引的方式纳入本文)。本发明的能够结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17F或IL-17A和IL-17F两者的活性的可溶性多肽是优选的拮抗剂，其他的IL-17A和IL-17F拮抗剂也可以用于该模型中。类似地，可将来源于人类结肠炎、IBD、IBS、关节炎或其他炎性损伤的组织或细胞用于该SCID模型，以评估本文所述的IL-17A和IL-17F拮抗剂的抗炎性质。
可以通过将本发明的可溶性多肽给予带有人类炎性组织(例如银屑病损伤等等)的SCID小鼠或本文所述的其他模型，对设计用于使用本发明的可溶性多肽来消除、延缓或减轻炎症的疗法进行测试。使用本领域公知的方法测量被治疗人群中抗炎效果随时间的增加，从而测量疗法的效果并进行统计学评估。一些示例性方法包括但不限于：例如在银屑病模型中测量表皮厚度、真皮上层中炎性细胞的数量和角化不全的级别。这类方法是本领域已知的，并在本文有记载例如参见，Zeigler，M.et al.Lab Invest 81：1253，2001；Zollner，T.M.et al.J.Clin.Invest.109：671，2002；Yamanaka，N.et al.Microbio.l Immunol.45：507，2001；Raychaudhuri，S.P.et al. Br.J.Dermatol.144：931，2001；Boehncke，W.Het al.Arch.Dermatol.Res.291：104，1999；Boehncke，W.H et al..J.Invest.Dermatol.116：596，2001；Nickoloff，B.J.et al.Am.J.Pathol.146：580，1995；Boehncke，W.H et al.J.Cutan.Pathol.24：1，1997；Sugai，J.，M.et al.J.Dermatol.Sci.17：85，1998；和Villadsen L.S.et al.J.Clin.Invest.112：1571，2003。还可以使用例如流式细胞术(或PCR)的公知方法，测量样本中炎性细胞或损伤细胞的数量、IBD评分(体重减轻、腹泻、直肠出血、结肠长度)以及CIA和RA模型的足疾病评分和炎症评分，从而随时间监测炎症。例如，适用于在这类模型中检测的治疗策略包括使用下述药物基于阻断IL-17RC和/或IL-17RA与其相应配体的相互作用而进行的直接治疗，所述药物为可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA，或其他IL-17A和IL-17F拮抗剂(单独地或共同地)，或相关缀合物或拮抗剂。
银屑病为一种慢性炎性皮肤疾病，该疾病与增生性上皮角质形成细胞和浸润性单核细胞(包括CD4+记忆T细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)相关(Christophers，Int.Arch.Allergy Immunol.，110：199，1996)。目前认为环境中的抗原对于该疾病的发生和该疾病的病理学有重要的作用。然而，认为对自身抗原的耐受度下降介导了银屑病的病理学。树突细胞和CD4⁺T细胞被认为在下述的抗原呈递和识别过程中起重要作用，所述抗原呈递和识别过程介导了导致所述病理的免疫应答。我们最近基于CD4+CD45RB转移模型开发了一种银屑病模型(Davenport et al.，Internat.Immunopharmacol.，2：653-672)。将本发明的可溶性多肽给予小鼠。对疾病评分(皮肤损伤和炎性细胞因子)的抑制表明所述可溶性多肽对于银屑病的效力。
5.特应性皮炎.
AD是一种常见的慢性炎性疾病，其特征在于辅助T细胞亚类2(Th2)的过度活跃的细胞因子。虽然尚不知道AD的确切病因学，但是已知有多种因素与其相关，包括过度活跃的Th2免疫应答、自身免疫、感染、变应原和遗传倾向。该疾病的关键特征包括干燥病(皮肤干燥)、瘙痒症(皮肤瘙痒)、结膜炎、炎性皮肤损伤、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染、血液嗜酸粒细胞增多、血清IgE和IgG1水平升高和伴有T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、和嗜酸性粒细胞浸润的慢性皮炎。已经发现金黄色葡萄球菌的定殖或感染会加剧AD并使这种皮肤疾病转为永久性慢性疾病。
AD常见于患有哮喘和变应性鼻炎的患者中，并且通常为变应性疾病的初始表现。在西方国家中约有20％的人群患有这类变应性疾病，在发达国家的AD发病率因为未知的原因还在逐渐上升。AD通常起始于童年期，并经常可从青春期一直持续直至成年。目前针对AD的疗法包括：局部皮质激素治疗、口服环孢菌素A、非皮质类固醇免疫抑制剂例如他克莫司(油膏形式的FK506)和干扰素γ。虽然有多种针对AD的疗法，但是许多患者的症状并没有得到改善，或者他们对药物有不良反应，这就需要寻找其他更有效的治疗剂。本发明的可溶性多肽可用于中和IL-17F和IL-17A，用于治疗特定的人类疾病，例如特应性皮炎、炎性皮肤疾病和本文公开的其他炎性疾病。
6.哮喘
IL-17对于气道中的变应原诱导的T细胞激活和嗜中性粒细胞内流具有重要作用。IL-17的受体在气道中表达(Yao，et al.Immunity 3：811(1995))，在过敏性哮喘中，化学引诱物IL-8、GRO-□和由IL-17刺激的人类支气管上皮细胞(HBEC)和人类支气管成纤维细胞产生的巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)可以极大地诱导IL-17介导的嗜中性粒细胞募集(Yao，et al.J Immunol 155：5483(1995))；Molet，et al.J Allergy Clin Immunol 108：430(2001))。IL-17还刺激HBEC释放嗜中性粒细胞激活因子IL-6(Fossiez，et al，J Exp Med 183：2593(1996)和Linden，et al.Int Arch Allergy Immunol 126：179(2001))，并且已在体外证实IL-17可以与TNF-□协同作用而延长人类嗜中性粒细胞的存活时间(Laan，et al.Eur Respir J21：387(2003))。此外，IL-17能够通过增强涉及气道重塑的细胞因子的分泌，从而增强哮喘中的炎性应答，所述细胞因子例如促纤维变性(profibrotic)细胞因子IL-6和IL-11和炎性介质粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)(Molet，et al.J Allergy Clin Immunol108：430(2001))。
临床证据显示，哮喘的急性重度恶化与气道中嗜中性粒细胞的募集和激活相关，这样看来IL-17可能在哮喘中起了重要作用。患有轻度哮喘的患者表现出游离的可溶性IL-17A蛋白局部浓度的可检测的升高(Molet，et al.J AllergyClin Immunol 108：430(2001))，另外，通过使健康的人类志愿者暴露于封闭猪舍中以诱导发生严重的气道炎症时，该志愿者的支气管肺泡间隙中的游离的可溶性IL-17A蛋白浓度的表现出明显升高(Fossiez，et al，J Exp Med 183：2593(1996)和Linden，et al.Int Arch Allergy Immunol 126：179(2001))。此外，痰中的IL-17水平与个体气道高反应性的提高相关(Barczyk，et al.Respir Med97：726(2003)。
在气道高反应性的动物模型中，使致敏化的小鼠慢性吸入卵清蛋白可导致支气管嗜酸性粒细胞炎症，并可在发炎的肺组织和支气管嗜中性粒细胞中早期诱导IL-17mRNA的表达(Hellings，et al.Am J Respir Cell Mol Biol 28：42(2003)。抗IL-17单克隆抗体显著降低了支气管嗜中性粒细胞内流，但也显著提高了支气管肺泡灌洗液和血清中的IL-5水平，并且还加重了变应原诱导的支气管嗜酸性粒细胞内流，这表明IL-17A可能参与决定在如上所述的抗原攻击后的嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞累积的平衡(同上)。
在IL-17家族成员中，IL-17F与IL-17A的关系最近。由IL-17A介导的生物活性与由IL-17F介导的生物活性类似，其中IL-17F刺激IL-6、IL-8和G-CSF的产生(Hurst，et al.J Immunol 169：443(2002))。IL-17F还在内皮细胞中诱导IL-2、转化生长因子(TGF)-□和单核细胞趋化蛋白(MCP)的产生(Starnes，et al.JImmunol 167：4137(2001))。类似地，变应原攻击可以增加过敏性哮喘患者的局部IL-17F水平(Kawaguchi，et al.J Immunol 167：4430(2001))。将IL-17F基因送递至鼠类肺部可提高支气管肺泡间隙中的嗜中性粒细胞水平，而IL-17F基因的粘膜转移会增强Ag诱导的肺部嗜中性粒细胞水平和气道对乙酰甲胆碱的应答(Oda，et al.Am J Respir Crit Care Med 171：12(2005))。
除哮喘之外，还有一些慢性炎性气道疾病也以气道中的嗜中性粒细胞募集为特征，已有报道称IL-17在一些呼吸系统疾病的发病机制中起重要作用，所述呼吸系统疾病例如慢性阻塞性肺病(COPD)、细菌性肺炎和囊性纤维化病(Linden，et al.Eur Respir J 15：973(2000)，Ye，et al.Am J Respir Cell Mol Biol25：335(2001)，Rahman，et al.Clin Immunol 115：268(2005))。在体外炎症模型中，已显示抗IL-17A和/或抗IL-17F治疗性分子对慢性炎性气道疾病有治疗效果。IL-17F和/或IL-17A活性的拮抗剂，例如IL-17RC可溶性受体和其抗体(包括本发明的抗人类IL-17RC单克隆抗体和中和抗体)，抑制IL-17A和/或IL-17F诱导培养的HBEC或支气管成纤维细胞产生细胞因子和趋化因子的能力可以被用于度量这类拮抗剂防止因IL-17A和/或F刺激所直接导致的炎性介质的产生的效力。如果加入IL-17F和/或IL-17A活性的拮抗剂(例如本发明的可溶性多肽)可以显著降低炎性介质的产生和表达，那么就可以预计所述拮抗剂能够有效地治疗与慢性气道炎症相关的炎性症状。
7.肠易激综合征(“IBS”)
肠易激综合征表示以腹部疼痛或不适和异常排便习惯为特征的疾病。可以基于IBS患者的排便习惯可以将IBD患者分为三种主要的类群：主要为经常排便或大便松散的患者；主要为不经常排便或大便干硬的患者；以及排便习惯不定或大便正常的患者(Talley et al.，2002)。肠运动性的改变、上皮功能的异常、粪便和空气通过的异常以及应激都可能与症状相关，而内脏的超敏反应是大多数患者的重要特征。推测影响疼痛信号传导的遗传因素和传入信号的中枢处理的失调可能会使个体易于在接触特定环境后患上IBS。研究还证实，结肠中的炎性应答会增加平滑肌和肠道神经的敏感性，由此扰乱肠的感觉-运动功能(Collins et al.，2001)。IBS和IBD在临床上有交叉，在患者被确诊为IBD之前经常被报告表现出IBS样症状，而且已经确诊为IBD的患者在恢复期时出现IBS症状的情况比预计的要多。因此，这些疾病可能以高于预计的频率共存，或者可能IBS和IBD是存在与一个连续谱中不同端点的疾病。然而应该注意到的是，大多数IBS患者的结肠活检标本看起来是正常的。尽管如此，IBS还是显著地影响了相当多的个体(2000年在美国的患病个体大约有1600万)，导致的经济负担一共为17亿美元(2000年)。因此，在各种高发病率和造成高经济花费的肠胃疾病和病症中，IBS仅次于胃食管返流疾病(GERD)而排在第二位。但是与GERD不同的是，IBS的治疗现状并不令人满意(Talley et al.，2002；Farhadi et al.，2001；Collins et al.，2001)，说明治疗IBS的需求显然并未得到满足。
目前已提出的疾病模型都基于下述假设：中枢神经系统(CNS)或消化道的神经回路、免疫回路或神经免疫回路对中枢(精神上的)或外周(组织刺激、炎症、感染)系统中正常稳态的波动的反应性增强(Talley et al.，2002)。这种增强的反应性导致消化道运动性的失调、上皮功能(免疫和通透性)失调和内脏的超敏反应，这些反应又导致了IBS症状。
可能有多种不同分子在IBS的发病机制中起作用，包括刺激神经元的分子的作用和参与启动炎性过程的分子的作用。发明人掌握的多种的分子都已知与神经元的可能的活性相关，因为它们直接由神经元表达或者它们的受体在神经元上表达，所述内部分子包括IL-17D、IL-17B和IL-31。此外，有多个IL-17家族成员和相关分子与消化道炎症相关，所述成员包括IL-17A、IL-17F、IL-23和IL-31。
可以在疾病的动物模型中测试这些分子的体内抑制剂效力。已经提出了一些模拟IBS的关键特征的动物模型，这些模型中涉及靶向中枢的刺激(应激)和靶向外周的刺激(感染，炎症)。可以用于测定抑制剂治疗IBS的效力的体内动物模型的两个实例为：(i)主要模拟原发性CNS定向的IBS发病机制的模型(应激模型)，和(ii)主要模拟消化道定向的应激(即消化道炎症、感染或物理应激)的诱导物的模型。然而应当注意的是，在CNS或在胃肠(GI)道中发生的事件并不是相互独立的，IBS的症状很可能应归因于从CNS向GI的信号传导或从GI向CNS的信号传导之间的复杂的相互作用。
J)药物学制剂
为了用于药物用途，可使用常规方法将本发明的可溶性多肽配制为用于肠胃外送递特别是静脉内送递或皮下送递的制剂。静脉内给药可以通过以下方式进行：快速浓注、控释(例如使用微泵或其他合适技术)或通常为一小时至几小时内的输注。通常，药物制剂应包括造血蛋白以及可药用的载体，例如生理盐水、缓冲盐溶液或5％葡萄糖水溶液等等。制剂还可包括一种或多种赋形剂、防腐剂、助溶剂、缓冲剂或者防止容器表面的蛋白质损失的清蛋白等等。当使用这类结合疗法时，可将各细胞因子混合为单一的制剂或者各细胞因子可以以各独立的制剂形式给药。配制的方法是本领域公知的，并且公开于例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，Gennaro，ed.，Mack Publishing Co.，Easton PA，1990中，该文献通过援引纳入本文。治疗剂量通常应为0.1至100mg/kg患者体重/天，优选地为0.5-20mg/kg/天，精确的剂量可由临床医生根据现有的标准，并考虑待治疗疾病的性质和严重程度以及患者个体特征等等因素来确定。剂量的确定是在本领域普通技术人员能力范围之内的。通常应在化疗或骨髓移植后给予蛋白质，可给予最多达28天的时间段或给予至血小板计数达到＞20,000/mm³，优选地＞50,000/mm³为止。更通常地，蛋白质可被给予一周或更短时间，通常被给予一至三天。通常，本发明的可溶性多肽治疗有效量为足以使淋巴样细胞或骨髓祖细胞的增殖和/或分化在临床上产生显著增加的量，所述的增加表现为循环系统中成熟细胞(例如血小板或嗜中性粒细胞)水平的增加。因此，对血小板疾病的治疗可持续至血小板计数达到至少20,000/mm³、优选地为50,000/mm³为止。本发明的可溶性多肽还可以与其他细胞因子联合给药，所述细胞因子例如IL-3、IL-6和IL-11；干细胞因子；红细胞生成素；G-CSF和GM-CSF。在联合治疗方案中，其他细胞因子的日剂量通常为：EPO，150U/kg；GM-CSF，5-15lg/kg；IL-3，1-5lg/kg；和G-CSF，1-25lg/kg。与EPO联合的疗法例如可用于EPO水平较低的贫血患者。
通常，可溶性多肽的给药剂量会根据下列因素而变化：例如患者的年龄、体重、身高、性别、总体医学状况和病史。通常需要向受者提供的这类可溶性多肽的剂量范围为约1pg/kg至10mg/kg(药物量/患者体重)，但是根据情况也可以给予更低或更高的剂量。
将本发明的可溶性多肽给予受试者的给药途径可为：静脉内给药、动脉内给药、腹膜内给药、肌内给药、皮下给药、胸膜内给药、鞘内给药、通过局部导管的输注给药或者在损伤区直接注射给药。当通过注射给予治疗性蛋白质时，给药可以通过连续输注或单次或多次浓注的方式进行。
其他给药途径包括口服给药、粘膜给药、肺部给药和经皮给药。口服送递适用于聚酯微球、玉米蛋白微球，类蛋白质微球、聚腈基丙烯酸酯微球和基于脂类的系统(参见例如，Protein Delivery：Physical Systems，Sanders和Hendren(编著)，第255-288页，DiBase和Morrel的“Oral Delivery of MicroencapsulatedProteins”(Plenum Press 1997))。例如胰岛素鼻内给药的方式说明了鼻内送递的可行性(参见例如，Hinchcliffe and Illum，Adv.Drug Deliv.Rev.35：199(1999))。可以制备包括可溶性IL-17RC或抗IL-17RC抗体的干颗粒或液体颗粒，并在干粉分散器、液体溶胶发生器或喷雾器的帮助下用于吸入给药(例如，Pettit andGombotz，TIBTECH 16：343(1998)；Patton et al.，Adv.Drug Deliv.Rev.35：235(1999))。这一方法可通过AERX糖尿病控制系统得到说明，该系统为一种可以将气溶胶胰岛素送递至肺内的手控电子吸入器。研究显示，分子量大到48,000kDa的蛋白质可以在低频超声波的辅助下以治疗浓度穿过皮肤送递，这证明了经皮给药的可行性(Mitragotri et al.，Science 269：850(1995))。使用电穿孔的经皮送递提供了用于给予本发明的可溶性多肽的另一种方式(Potts et al.，Pharm.Biotechnol.10：213(1997))。
可以根据已知方法配制含有本发明的可溶性多肽的药物组合物，以制备其中治疗性蛋白和可药用载体组合形成混合物的可药用组合物。当一种组合物的给药可被接受该组合物的患者耐受时，就将该组合物称为“可药用载体”。可药用载体的一个实例为无菌磷酸盐缓冲液。其他合适的载体是本领域技术人员公知的。参见例如，Gennaro(编著)，Remington′s Pharmaceutical Sciences，第19版(Mack Publishing Company 1995)。
出于治疗目的，可以给予患者治疗有效量的本发明的可溶性多肽和可药用载体。当所给予的本发明的治疗性分子和可药用载体的组合的量产生显著的生理学作用时，就称该量为“治疗有效量”。如果一种药物的存在导致当接受给药的患者的生理状况发生可检测的改变时，就称该药物产生了显著的生理学作用。例如，如果一种用于治疗炎症的药物的存在减轻了炎性应答，就称该药物产生了显著的生理学作用。
含有本发明的可溶性多肽的药物组合物可以以液体形式、气溶胶形式或固体形式提供。液体形式的实例为可注射溶液和口服悬液。示例性的固体形式包括胶囊、片剂和控释形式。控释形式的实例为微量渗透泵和植入物(Bremer etal.，Pharm.Biotechnol.10：239(1997)；Drug Delivery Systems，Ranade andHollinger(编著)，第95-123页，Ranade的“Implants in Drug Delivery”(CRCPress 1995)；Protein Delivery：Physical Systems，Sanders and Hendren(编著)，第239-254页，Bremer等的“Protein Delivery with Infusion Pumps”(PlenumPress 1997)；Protein Delivery：Physical Systems，Sanders和Hendren(编著)，第93-117页，Yewey等人的“Delivery of Proteins from a Controlled ReleaseInjectable Implant”(Plenum Press 1997))。
脂质体提供了一种通过以下给药途径将治疗性多肽送递至受试者的方法：静脉内、腹膜内、鞘内、肌内、皮下，或口服给药、吸入给药或鼻内给药。脂质体是由被脂质双层包围的一个或多个水性区室组成的微囊(总体参见，Bakker-Woudenberg et al.，Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis.12(Suppl.1)：S61(1993)；Kim，Drugs 46：618(1993)和Drug Delivery Systems，Ranade和Hollinger(编著)，第3-24页，Ranade的“Site-Specific Drug Delivery Using Liposomes asCarriers”(CRC Press 1995))。脂质体在组成上与细胞膜类似，因此脂质体可以用于安全地给药并且是可生物降解的。根据制备方法的不同，脂质体可为单层的或多层的，脂质体的直径大小可为0.02μm至10μm以上。脂质体中可包封多种药物：分配于脂双层中的疏水性药物和分配于内部水性空间中的亲水性药物(参见例如，Machy et al.，Liposomes In Cell Biology And Pharmacology(JohnLibbey 1987)和Ostro et al.，American J.Hosp.Pharm.46：1576(1989))。此外，还可以通过改变脂质体的大小、脂双层的数目、液体组分以及改变脂质体的荷电特征和表面特性，从而控制被包封药物的治疗利用度。
脂质体可吸附在基本所有类型的细胞上，并缓慢释放所包封的药剂。或者，吸附的脂质体可被吞噬性细胞内吞。内吞作用之后脂质体脂质会在溶酶体内被降解而释放所包封的药物(Scherphof et al.，Ann.N.Y.Acad.Sci.446：368(1985))。在静脉内给药之后，小脂质体(0.1至1.0μm)通常被主要位于肝脏和脾的网状内皮系统的细胞摄取，而大于3.0μm的脂质体会在肺部沉积。可以利用这种网状内皮系统的细胞优先摄取较小脂质体的特性来将化学治疗剂送递到巨噬细胞和肝脏肿瘤中。
可以通过一些方法来绕过所述网状内皮系统，所述方法包括用大剂量的脂质体颗粒饱和或用药物手段选择性地使巨噬细胞失活(Claassen et al.，Biochim.Biophys.Acta 802：428(1984))。此外，已显示在脂质体膜中掺入糖脂衍生磷脂或聚乙二醇衍生磷脂可以显著地降低网状内皮系统的摄取(Allen et al.，Biochim.Biophys.Acta 1068：133(1991)；Allen et al.，Biochim.Biophys.Acta1150：9(1993))。
还可以通过改变磷脂组分或在脂质体中插入受体或配体，从而制备靶向于特定细胞成器官的脂质体。例如，已有人使用用高含量的非离子型表面活性剂制备的脂质体来靶向于肝脏(Hayakawa et al.，日本专利04-244,018；Kato et al.，Biol.Pharm.Bull.16：960(1993))。这些制剂通过下述过程制备：将大豆磷脂酰胆碱、α-生育酚和乙氧基氢化蓖麻油(HCO-60)在甲醇中混合；将混合物在真空中浓缩；然后将混合物在水中重溶。已显示使用二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)与大豆衍生化甾醇葡萄糖苷混合物(SG)和胆固醇(Ch)制备的脂质体制剂可以靶向于肝脏(Shimizu et al.，Biol.Pharm.Bull.20：881(1997))。
或者，可以在脂质体表面结合各种靶向配体，例如抗体、抗体片段、糖类、维生素类和转运蛋白。例如，可以用支链型半乳糖脂类衍生物修饰脂质体，以使其靶向于脱唾液酸糖蛋白(半乳糖)受体，该受体专一地在肝脏细胞的表面表达(Kato and Sugiyama，Crit.Rev.Ther.Drug Carrier Syst.14：287(1997)；Murahashi et al.，Biol.Pharm.Bull.20：259(1997))。类似地，Wu et al.，Hepatology27：772(1998)中已证明，使用脱唾液酸胎球蛋白标记脂质体可以减短脂质体的血浆半衰期，并显著提高肝细胞对脱唾液酸胎球蛋白标记的脂质体的摄取。另一方面，可以通过预先注射脱唾液酸胎球蛋白来抑制含有支链型半乳糖脂类衍生物的脂质体在肝脏中的累积(Murahashi et al.，Biol.Pharm.Bull.20：259(1997))。聚乌头酸化(polyaconitylated)人类血清清蛋白脂质体提供了使脂质体靶向于肝细胞的另一种手段(Kamps et al.，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 94：11681(1997))。此外，Geho等人的美国专利No.4,603,044描述了一种定向于肝细胞的脂质体囊泡送递系统，该系统特异性针对与肝脏的特化代谢细胞相关的肝胆管受体。
在一种更常用的组织靶向手段中，用特异性针对目标细胞上表达的配体的生物素化抗体对目标细胞进行预标记(Harasym et al.，Adv.Drug Deliv.Rev.32：99(1998))。在游离抗体被从血浆中清除之后，给予链亲和素缀合的脂质体。在另一种方法中，直接将靶向抗体连接到脂质体上(Harasym et al.，Adv.DrugDeliv.Rev.32：99(1998))。
可以使用标准的蛋白质微包封技术将多肽和抗体包封在脂质体内(参见例如，Anderson et al.，Infect.Immun.31：1099(1981)；Anderson et al.，Cancer Res.50：1853(1990)和Cohen et al.，Biochim.Biophys.Acta 1063：95(1991)；LiposomeTechnology，第2版，Vol.III，Gregoriadis(编著)，第317页，Alving等人的“Preparation and Use of Liposomes in Immunological Studies”(CRC Press1993)；Wassef et al.，Meth.Enzymol. 149：124(1987))。如上所述，可用于治疗的脂质体可含有多种组分。例如，脂质体可含有聚乙二醇的脂类衍生物(Allen etal.，Biochim.Biophys.Acta 1150：9(1993))。
可以设计可降解的聚合物微球来保持治疗性蛋白较高的全身水平。使用例如下述的可降解聚合物来制备微球，所述聚合物例如聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)、聚酸酐、聚原酸酯、不可生物降解的乙酸乙基乙烯酯聚合物，其中蛋白质被捕获在聚合物中(Gombotz and Pettit，Bioconjugate Chem.6：332(1995)；Drug Delivery Systems，Ranade and Hollinger(编著)，第51-93页，Ranade的“Role of Polymers in Drug Delivery”(CRC Press 1995)；Protein Delivery：Physical Systems，Sanders和Hendren(编著)，第45-92页，Roskos和Maskiewicz的“Degradable Controlled Release Systems Useful for Protein Delivery”(Plenum Press 1997)；Barms et al.，Science 281：1161(1998)；Putney and Burke，Nature Biotechnology 16：153(1998)；Putney，Curr.Opin.Chem.Biol.2：548(1998))。聚乙二醇(PEG)包被的纳米颗粒还可以作为用于静脉内送递治疗性蛋白的载体(参见例如，Gref et al.，Pharm.Biotechnol.10：167(1997))。
本发明还考虑到了具有IL-17A和/或IL-17F结合活性的经化学修饰的多肽，例如IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA单体、同二聚体、异二聚体或多聚体形式的可溶性受体，其中所述所述受体为一种如上所述地与聚合物相连接的多肽。
本领域技术人员也可以如下述文献所述地设计其他剂型，所述文献例如，Ansel and Popovich，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第5版(Lea&Febiger 1990)，Gennaro(ed.)，Remington′s PharmaceuticalSciences，第19版(Mack Publishing Company 1995)，和Ranade and Hollinger，Drug Delivery Systems(CRC Press 1996)。
例如，药物组合物可以以试剂盒的形式提供，所述试剂盒包括装有一种本发明的可溶性多肽的容器。治疗性多肽可以以用于单次或多次剂量的可注射溶液的形式提供，或者以可在注射前重溶的无菌粉末形式提供。或者，这类试剂盒可包括一个用于给予治疗性多肽的干粉喷射器、液体气溶胶发生器或喷雾器。这类试剂盒还可包括关于所述药物组合物的适应症和使用方法的文字信息。此外，这类信息可以包括如下声明，声明已知对IL-17RC或IL-17RA过敏的患者禁用所述组合物。
含有本发明的可溶性多肽的药物组合物可以以液体形式、气溶胶形式或固体形式提供。液体形式的实例为可注射溶液、气溶胶、滴剂、局部用溶液和口服悬液。示例性的固体形式包括胶囊、片剂和控释形式。控释形式的实例为微量渗透泵和植入物(Bremer et al.，Pharn.Biotechnol.10：239(1997)；DrugDelivery Systems，Ranade和Hollinger(编著)，第95-123页，Ranade的“Implantsin Drug Delivery”(CRC Press 1995)；Protein Delivery：Physical Systems，Sanders和Hendren(编著)，第239-254页，Bremer等人的“Protein Defiverywith Infusion Pumps”(Plenum Press 1997)；Protein Delivery：Physical Systems，Sanders和Hendren(编著)，pages 93-117页，Yewey等人的“Delivery of Proteinsfrom a Controlled Release Injectable Implant”(Plenum Press 1997))。其他固体形式包括乳剂、糊剂和其他局部应用形式等等。
脂质体提供了一种通过以下给药途径将治疗性多肽送递至受试者的方法：静脉内、腹膜内、鞘内、肌内、皮下，或口服给药、吸入给药或鼻内给药。脂质体是由被脂质双层包围的一个或多个水性区室组成的微囊(总体参见，Bakker-Woudenberg et al.，Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis.12(Suppl.1)：S61(1993)；Kim，Drugs 46：618(1993)和Drug Delivery Systems，Ranade和Hollinger(编著)，第3-24页，Ranade的“Site-Specific Drug Delivery Using Liposomes asCarriers”(CRC Press 1995))。脂质体在组成上与细胞膜类似，因此脂质体可以用于安全地给药并且是可生物降解的。根据制备方法的不同，脂质体可为单层的或多层的，脂质体的直径大小可为0.02μm至10μm以上。脂质体中可包封多种药物：分配于脂双层中的疏水性药物和分配于内部水性空间中的亲水性药物(参见例如，Machy et al.，Liposomes In Cell Biology And Pharmacology(JohnLibbey 1987)和Ostro et al.，American J.Hosp.Pharm.46：1576(1989))。此外，还可以通过改变脂质体的大小、脂双层的数目、液体组分以及改变脂质体的荷电特征和表面特性，从而控制被包封药物的治疗利用度。
脂质体可吸附在基本所有类型的细胞上，并缓慢释放所包封的药剂。或者，吸附的脂质体可被吞噬性细胞内吞。内吞作用之后脂质体脂质会在溶酶体内被降解而释放所包封的药物(Scherphof et al.，Ann.N.Y.Acad.Sci.446：368(1985))。在静脉内给药之后，小脂质体(0.1至1.0μm)通常被主要位于肝脏和脾的网状内皮系统的细胞摄取，而大于3.0μm的脂质体会在肺部沉积。可以利用这种网状内皮系统的细胞优先摄取较小脂质体的特性来将化学治疗剂送递到巨噬细胞和肝脏肿瘤中。
可以通过一些方法来绕过所述网状内皮系统，所述方法包括用大剂量的脂质体颗粒饱和或用药物手段选择性地使巨噬细胞失活(Claassen et al.，Biochim.Biophys.Acta 802：428(1984))。此外，已显示在脂质体膜中掺入糖脂衍生磷脂或聚乙二醇衍生磷脂可以显著地降低网状内皮系统的摄取(Allen et al.，Biochim.Biophys.Acta 1068：133(1991)；Allen et al.，Biochim.Biophys.Acta1150：9(1993))。
还可以通过改变磷脂组分或在脂质体中插入受体或配体，从而制备靶向于特定细胞或器官的脂质体。例如，已有入使用用高含量的非离子型表面活性剂制备的脂质体来靶向于肝脏(Hayakawa et al.，日本专利04-244,018；Katoet al.，Biol. Pharm.Bull. 16：960(1993))。这些制剂通过下述过程制备：将大豆磷脂酰胆碱、α-生育酚和乙氧基氢化蓖麻油(HCO-60)在甲醇中混合；将混合物在真空中浓缩；然后将混合物在水中重溶。已显示使用二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)与大豆衍生化甾醇葡萄糖苷混合物(SG)和胆固醇(Ch)制备的脂质体制剂可以靶向于肝脏(Shimizu et al.，Biol. Pharm.Bull.20：881(1997))。
或者，可以在脂质体表面结合各种靶向配体，例如抗体、抗体片段、糖类、维生素类和转运蛋白。例如，可以用支链型半乳糖脂类衍生物修饰脂质体，以使其靶向于脱唾液酸糖蛋白(半乳糖)受体，该受体专一地在肝脏细胞的表面表达(Kato and Sugiyama，Crit.Rev.Ther.Drug Carrier Syst.14：287(1997)；Murahashi et al.，Biol. Pharm.Bull.20：259(1997))。类似地，Wu et al.，Hepatology 27：772(1998)中已证明，使用脱唾液酸胎球蛋白标记脂质体可以减短脂质体的血浆半衰期，并显著提高肝细胞对脱唾液酸胎球蛋白标记的脂质体的摄取。另一方面，可以通过预先注射脱唾液酸胎球蛋白来抑制含有支链型半乳糖脂类衍生物的脂质体在肝脏中的累积(Murahashi et al.，Biol. Pharm.Bull.20：259(1997))。聚乌头酸化人类血清清蛋白脂质体提供了使脂质体靶向于肝细胞的另一种手段(Kamps et al.，Proc.Nat’l Acad.Sci. USA 94：11681(1997))。此外，Geho等人的美国专利No.4,603,044描述了一种定向于肝细胞的脂质体囊泡送递系统，该系统特异性针对与肝脏的特化代谢细胞相关的肝胆管受体。
在一种更常用的组织靶向手段中，用特异性针对目标细胞上表达的配体的生物素化抗体对目标细胞进行预标记(Harasym et al.，Adv.Drug Deliv.Rev.32：99(1998))。在游离抗体被从血浆中清除之后，给予链亲和素缀合的脂质体。在另一种方法中，直接将靶向抗体连接到脂质体上(Harasym et al.，Adv.Drug Deliv.Rev.32：99(1998))。
可以使用标准的蛋白质微包封技术将本发明的可溶性多肽包封在脂质体内(参见例如，Anderson et al.，Infect.Immun.31：1099(1981)；Anderson et al.，Cancer Res.50：1853(1990)和Cohen et al.，Biochim.Biophys.Acta 1063：95(1991)；Liposome Technology，第2版，第III卷，Gregoriadis(编著)，第317页，Alving等人的“Preparation and Use of Liposomes in Immunological Studies”(CRC Press 1993)；Wassef et al.，Meth.Enzymol. 149：124(1987))。如上所述，可用于治疗的脂质体可含有多种组分。例如，脂质体可含有聚乙二醇的脂类衍生物(Allen et al.，Biochim.Biophys.Acta 1150：9(1993))。
可以设计可降解的聚合物微球来保持治疗性蛋白较高的全身水平。使用例如下述的可降解聚合物来制备微球，所述聚合物例如聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)、聚酸酐、聚原酸酯、不可生物降解的乙酸乙基乙烯酯聚合物，其中蛋白质被捕获在聚合物中(Gombotz and Pettit，Bioconjugate Chem.6：332(1995)；Drug Delivery Systems，Ranade和Hollinger(编著)，第51-93页，Ranade的“Roleof Polymers in Drug Delivery”(CRC Press 1995)；Protein Delivery：PhysicalSystems，Sanders和Hendren(编著)，第45-92页，Roskos和Maskiewicz的“Degradable Controlled Release Systems Useful for Protein Delivery”(PlenumPress 1997)；Bartus et al.，Science 281：1161(1998)；Putney and Burke，NatureBiotechnology 16：153(1998)；Putney，Curr.Opin.Chem.Biol.2：548(1998))。聚乙二醇(PEG)包被的纳米颗粒还可以作为用于静脉内送递治疗性蛋白的载体(参见例如，Grefet et al.，Pharn.Biotechnol. 10：167(1997))。
本领域技术人员也可以如下述文献所述地设计其他剂型，所述文献例如，Ansel and Popovich，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems，第5版(Lea&Febiger 1990)；Gennaro(编著)，Remington′sPharmaceutical Sciences，第19版(Mack Publishing Company 1995)和Ranadeand Hollinger，Drug Delivery Systems(CRC Press 1996)。
本发明考虑了本发明的可溶性多肽组合物，以及包括本文所述的相同多肽的方法和治疗用途。这类组合物还可包括载体。所述载体可为常规的有机载体或无机载体。载体的实例包括水、缓冲溶液、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、麻油和玉米油等等。
K)转基因小鼠的制备
可对转基因小鼠进行基因工程改造，以使其在所有组织中过表达IL-17F、IL-17A、IL-17RA或IL-17RC基因，或在组织特异性或组织优先性调控元件的控制下过表达IL-17F、IL-17A、IL-17RA或IL-17RC基因。可以使用这些过表达产物来表征由过表达导致的表型，并且该转基因动物可以作为因过量的IL-17F、IL-17A、IL-17RA或IL-17RC导致的人类疾病的模型。过表达上述任一产物的转基因小鼠也可以作为模型生物反应器，用于生产IL-17RA或IL-17RC，例如在较大动物的乳或血液中生产任一种本发明的可溶性多肽。制备转基因小鼠的方法是本领域技术人员公知的(参见例如，Overexpression andKnockout of Cytokines in Transgenic Mice，Jacob(编著)，第111-124页，Jacob的“Expression and Knockout of Interferons in Transgenic Mice”(AcademicPress，Ltd.1994)；Monastersky and Robl(编著)，Strategies in TransgenicAnimal Science(ASM Press 1995)和Gene Expression Systems：Using Naturefor the Art of Expression，Fernandez和Hoeffler(编著)，第367-397页，Abbud和Nilson的“Recombinant Protein Expression in Transgenic Mice”(AcademicPress，Inc.1999))。
例如，一种制备表达IL-17RC基因的转基因小鼠的方法可以使用有生育能力的成年雄鼠(种鼠)(B6C3f1，2-8月龄(Taconic Farms，Germantown，NY))、切除输精管的雄鼠(绝育鼠)(B6D2f1，2-8月龄(Taconic Farms))、青春期前的有生育能力的雌鼠(供体)(B6C3f1，4-5周龄(Taconic Farms))和成年的有生育能力的雌鼠(受体)(B6D2f1，2-4月龄(Taconic Farms))。将供体适应培养一周，然后以大约8IU/小鼠的量腹膜内注射孕马血清促性腺激素(Sigma ChemicalCompany；St.Louis，MO)，然后在46-47小时后以8IU/小鼠的量腹膜内注射人类绒毛膜促性腺激素(hCG)(Sigma)以诱导超排卵。在激素注射之后使供体与种鼠交配。通常在hCG注射后13小时内发生排卵。通过在交配次日早上观察阴道塞的存在以确认交配完成。
在外科手术镜(surgical scope)下收集受精卵。收集输卵管并将其中的卵放在含有透明质酸酶(Sigma)的尿分析载玻片上。将卵用透明质酸酶洗涤一次并用Whitten’s W640培养基洗涤两次(如例如Menino and O’Claray，Biol.Reprod.77：159(1986)和Dienhart和Downs，Zygote 4：129(1996)中所述)，所述培养基已在5％CO₂、5％O₂和90％N₂且37℃的条件下孵育过。然后将卵储存于37℃/5％CO₂培养箱中直至用于微注射。
将含有IL-17RC编码序列的10至20微克的质粒DNA线性化、凝胶纯化并重悬于10mM Tris-HCl(pH 7.4)、0.25mM EDTA(pH 8.0)中，使其终浓度为5-10纳克/微针，以用于微注射。例如，IL-17RC编码序列可编码含有SEQ ID NO：2的氨基酸残基21至452的多肽。
将质粒DNA微注射至收集的卵中，所述卵被置于一滴W640培养基中并用温热的经CO₂平衡的矿物油覆盖。将DNA吸入注射针头中(从0.75mm ID、1mmOD的硼硅玻璃毛细管中拉出)，并注射至每个卵中。用注射针头穿透每个卵，进入一个或两个单倍体原核中。
将皮升量级的DNA注射至原核中，在不接触核仁的情况下将注射针头抽出。重复这一步骤直至对所有的卵进行注射。将微注射成功的卵转移至含有预充气的W640培养基的器官组织培养皿中，在37℃/5％CO₂培养箱中培养过夜。
第二天，将双细胞胚胎转移至假怀孕的受体中。在与切除输精管的绝育鼠交配后存在交配塞的小鼠被识别为受体。麻醉受体并刮去其后背左侧的毛，将其置于外科显微镜下。在皮肤上切一小口，并切开位于膝部和脾之间的腹部中间区域的肌肉壁，所述区域被肋架、后背(saddle)和后腿所限定。将生殖器官外置于一个小的外科手术布上。使脂肪垫在手术布上摊放，并将一个婴儿血管镊(Roboz，Rockville，MD)与脂肪垫相连街并挂在小鼠的后背上，以防止器官滑回体腔。
使用含有矿物油并在之后交替含有W640和气泡的细移液管，将12-17个健康的来自于前一天注射的双细胞胚胎转移至受体体内。在受体体内固定一个膨胀的安瓿(ampulla)，使输卵管保持在安瓿和粘液囊之间，并用28g针头在输卵管接近粘液囊的地方划一划口，注意不要划破安瓿或粘液囊
将移液管插入输卵管的划口中并吹入胚胎，允许第一个气泡从移液管中逸出。将脂肪垫轻轻地推入腹膜，并使生殖器官滑回体腔。用缝线缝合腹膜壁并用缝合夹夹住皮肤。将小鼠置于37℃的载物片加温器上至少加热四个小时使其复原。
将受体成对地放回笼中，使其妊娠19-21天。在出生后，分娩后19-21天时断奶，将断奶后的小鼠按性别分别饲养在不同的笼中，用干净的剪刀剪下小鼠尾部0.5cm作为活检样本(用于基因分型)。
例如使用Qiagen Dneasy试剂盒，按照厂商的说明用断尾中制备基因组DNA。使用PCR分析基因组DNA，所述PCR的引物被设计为可扩增IL-17RC基因或在相同质粒中引入的可筛选标记基因。在确认动物为转基因动物之后，通过将转基因雌鼠与野生型雄鼠一起饲养或将转基因雄鼠与一只或两只野生型雌鼠一起饲养，使其与近亲品系回交。在幼鼠出生和断奶后，按性别分离并断尾进行基因分型。
为检验转基因在活体动物中的表达，进行了部分肝切除术。在上腹部紧挨着剑状软骨(zyphoid process)下方进行外科准备。使用无菌技术在胸骨下切一个1.5-2cm的小切口，将肝脏左侧叶外置。使用4-0丝线在下叶处打结，使下叶露在体腔外。使用无创钳夹住丝线结，并在第一个结附近放置另一个可吸收的Dexon(American Cyanamid；Wayne，N.J.)的环。从Dexon结处进行远端切除，并将大约100mg的切下的肝组织置于无菌培养皿中。将切下的肝脏部分转移至一个14ml聚丙烯圆底试管中，并在液氮中迅速冷冻，在干冰上保存。用缝线和缝合夹缝合外科手术部位，在手术后将动物笼置于37℃加热垫上24小时。在手术后每天检查动物并在手术后7-10天移去缝合夹。使用RNA溶液杂交测定法或聚合酶链式反应检测每只转基因小鼠的IL-17RC mRNA表达水平。
除了制备过表达IL-17F、IL-17A、IL-17RA或IL-17RC的转基因小鼠之外，也可以对不表达上述任何基因或表达异常低的转基因小鼠进行基因工程改造。这种转基因小鼠提供了与缺少IL-17F、IL-17A、IL-17RA或IL-17RC相关的疾病的有用模型。如上所述，可以使用反义基因、核酶基因或外部引导序列基因来抑制IL-17RC基因的表达。例如，为制备低表达IL-17RC基因的转基因小鼠，可使上述抑制序列靶向IL-17RC mRNA。制备特定基因表达异常低的转基因小鼠的方法是本领域技术人员已知的(参见例如，Methods in Gene Biotechnology，第205-224页，Wu等人的“Gene Underexpression in Cultured Cells and Animalsby Antisense DNA and RNA Strategies”(CRC Press 1997))。
另一种制备基本不表达或完全不表达IL-17RC基因的转基因小鼠的方法是产生这样一种小鼠，该小鼠体内的至少一个正常的IL-17RC等位基因被无功能的IL-17RC基因所替换。设计无功能IL-17RC基因的一种方法是将另一基因(例如一种可筛选标记基因)插入至编码IL-17RC的核酸分子中。制备这种被称为“基因敲除小鼠”的标准方法是本领域技术人员已知的(参见例如，Overexpression and Knockout of Cytokines in Transgenic Mice，Jacob(编著)，第111-124页，Jacob的“Expression and Knockout of Interferons in TransgenicMice”(Academic Press，Ltd.1994)和Methods in Gene Biotechnology，第339-365页，Wu等人的“New Strategies for Gene Knockout”(CRC Press 1997))。
通过下面的非限制性实施例进一步说明本发明。
实施例1
IL-17RC基因的表达
使用Human Multiple Tissue Blots试剂盒(Clontech Laboratories，Inc.，PaloAlto，CA)进行RNA印迹分析。用凝胶纯化的PCR产物中产生了两个探针。使用ZC21798(5’CGG CGT GGT GGT CTT GCT CTT 3’；SEQ ID NO：8)和ZC21808(5’TCC CGT CCC CCG CCC CAG GTC 3’；SEQ ID NO：31)作为引物制备第一个探针。使用购自Amersham(Arlington Heights，IL)的Multiprime标记试剂盒，根据厂商的说明对该探针进行放射性标记。使用NucTrap push柱(Stratagene，La Jolla，CA)纯化该探针。使用ExpressHyb(Clontech)溶液作为RNA印迹的预杂交和杂交溶液。在65℃下杂交过夜。在杂交后使用含有0.1％SDS和SSC的下述溶液洗涤印迹，每次30分钟：在室温下用2×SSC洗涤两次，在50℃下用0.1×SSC洗涤三次，在55℃下用0.1×SSC洗涤一次，以及在65℃下用0.1×SSC洗涤一次。结果表明IL-17RC基因在甲状腺、肾上腺、前列腺和肝脏组织中有很强的表达，在心脏、小肠、胃和气管组织中表达较弱。与此不同的是，在脑部、胎盘、肺部、骨骼肌、肾脏、胰腺、脾脏、胸腺、睾丸、卵巢、结肠、外周血白细胞、脊柱、淋巴结和骨髓中没有表达或几乎没有表达。
实施例2
使用PCR测定mRNA在细胞系板上的分布
从自培养的静息细胞系和经刺激的细胞系中纯化总RNA，并根据厂商的说明使用Qiagen(Valencia，CA)的RNeasy试剂盒，或者使用酸-苯酚纯化方法(Chomczynski and Sacchi，Analytical Biochemistry，162：156-9，1987)纯化。使用Agilent Bioanalyzer测定一份样本来评估RNA的质量。如果RNA被显著降解，则不能被用于随后的第一链cDNA的制备。通过对一份RNA进行PCR测定来评估是否存在污染的基因组DNA，所述PCR的引物为zc41011(5’CTCTCCATCCTTATCTTTCATCAAC 3’；SEQ ID NO：32)和zc41012(5’CTCTCTGCTGGCTAAACAAAACAC 3’；SEQ ID NO：33)，该引物扩增基因间的基因组DNA的单位点。用于测定污染的基因组DNA的PCR条件如下：2.5μl的10×缓冲液和0.5μl Advantage 2cDNA聚合酶混合物(BDBiosciences Clontech，Palo Alto，CA)、2ul的2.5mM dNTP混合物(AppliedBiosystems，Foster City，CA)、2.5μl的10×Rediload(Invitrogen，Carlsbad，CA)和0.5μl的20μM zc41011和zc41012，终体积为25μl。循环参数如下：94℃20秒，(94℃20秒+60℃1分20秒)的40个循环和72℃7分钟的一个循环。取每种反应的产物各10μl进行琼脂糖凝胶电泳，并检测凝胶上是否存在来自污染的基因组DNA的PCR产物。如果观察到污染的基因组DNA，则使用无DNA试剂(Ambion，Inc，Austin，TX)根据厂商的说明对总RNA进行DNA酶降解，然后再如上所述地进行检测。只有看起来不含有污染的基因组DNA的RNA才可以用于随后的第一链cDNA的制备。
将20μg来自82种人类细胞系的总RNA用水溶至98μl，然后分为两份49μl的等份，每一份含有10μg总RNA，然后将它们置于两块96孔PCR板上。向每一等份中加入用于第一链cDNA合成的试剂(Invitrogen First Strand cDNASynthesis System，Carlsbad，CA)：20μl的25mM MgCl2、10ul的10×RT缓冲液、10μl的0.1M DTT、2μl的寡dT、2ul的RNAseOut。然后向来自每一细胞系的一个等份中加入2μl的Superscript II反转录酶，向相应的细胞系等份中加入2μl的H₂O作为无反转录酶的阴性对照。将所有的样本按下述条件孵育：25℃10分钟，42℃50分钟，70℃15分钟。将样本分置于深孔板中并用H₂O稀释至1.7ml。使用Multipette(Saigan)机械手分多次向96孔PCR板的每一孔中分装16.5μl的等分试样，产生多个细胞系一次性PCR板，然后密封该板并储存于-20℃。这些板中的每一孔代表来自大约100ng总RNA的第一链cDNA。将82种细胞系分散于两个板上，称为阵列#118A和#118B。使用多重PCR测定法在一系列的板上评估板上的第一链cDNA的质量，PCR中使用的引物为针对两个表达广泛但是丰度中等的基因CLTC(网格蛋白)和TFRC(转铁蛋白受体C)的引物。将网格蛋白引物zc42901(5’CTCATATTGCTCAACTGTGTGAAAAG 3’；SEQ ID NO：34)和zc42902(5’TAGAAGCCACCTGAACACAAATCTG3’；SEQ ID NO：35)，以及TFRC引物zc42599(5’ATCTTGCGTTGTATGTTGAAAATCAATT3’；SEQ ID NO：36)和zc42600(5’TTCTCCACCAGGTAAACAAGTCTAC3’；SEQ ID NO：37)各0.5μl，与下列试剂混合：2.5μl的10×缓冲液和0.5μl的Advantage 2cDNA聚合酶混合物(BD Biosciences Clontech，Palo Alto，CA)、2μl的2.5mM dNTP混合物(Applied Biosystems，，Foster City，CA)和2.5μl的10×Rediload(Invitrogen，Carlsbad，CA)，然后加入到阵列#118A和阵列#118B的每一孔中。循环参数如下：94℃20秒，(94℃20分钟+67℃80秒)的35个循环，以及72℃7分钟的一个循环。取每种反应的产物各10μl进行琼脂糖凝胶电泳，并通过凝胶对每种细胞系的+RT孔的每种特异性基因的稳定PCR产物的存在进行评分。
通过PCR分析IL-17RC的人类第一链cDNA板上的mRNA的表达，所述PCR使用的正义寡聚引物为ZC42756(5’ctctccaggcccaagtcgtgctct3’；SEQ IDNO：38)、反义寡聚引物为ZC42757(5’ttgtcctgggggcctcgtgtctcc3’；SEQ IDNO：39)，每一样本的PCR反应条件为：2.5μl的10×缓冲液和0.5μl的Advantage 2cDNA聚合酶混合物(BD Biosciences Clontech，Palo Alto，CA)、2μl的2.5mMdNTP混合物(Applied Biosystems)、2.5μl的10×Rediload(Invitrogen，Carlsbad，CA)和0.5μl的20μM正义和反义引物。循环条件如下：94℃2分钟，(94℃1分钟+66℃30秒+72℃1分30秒)的35个循环，以及72℃7分钟的一个循环。取每种反应的产物各10μl进行琼脂糖凝胶电泳，并通过凝胶对IL-17RC的阳性表达和阴性表达进行评分。
IL-17RC mRNA在代表广泛的组织和细胞类型的多种细胞系中都有广泛的表达。特别地，IL-17RC在非T细胞外周血细胞系(包括单核细胞、B-细胞和髓系细胞)中有持续的表达。而且，IL-17RC mRNA在来源于皮肤的细胞系中也有确信的表达。表达IL-17RC的其他细胞系为阵列上存在的全部5种大肠细胞系。
实施例3
使用RT PCR测定mRNA在小鼠细胞系板上的分布
从自培养的60种静息细胞系和经刺激的细胞系中纯化总RNA，并根据厂商的说明使用Qiagen(Valencia，CA)RNeasy试剂盒，或者使用酸-苯酚纯化方法(Chomczynski和Sacchi， Analytical Biochemistry，162：156-9，1987)，或使用Triol试剂的方法(Invitrogen，Carlsbad，CA)纯化。
将来自各细胞系的5μg总RNA分置于深孔96孔板上，向每孔中加入125μl的3M NaOAc和100μl的沉淀染料(Pellet Paint)(Novagen，Madison，WI)，然后用H₂O将终体积调至1.25ml。使用Multipette(Saigan)机械手分多次向96孔PCR板的每一孔中分装25μl的RNA混合物的等分试样，然后再向每孔中加入75μl乙醇，产生多个细胞系一次性RT PCR板，然后密封该板并储存于-20℃。首先将板在Qiagen(Valencia，CA)96孔离心机上以6000RPM离心10分钟，以进行RTPCR筛选。将板倒扣在吸水纸上以除去上清液。用100μl的70％EtOH洗涤RNA沉淀，再以6000RPM离心5分钟。再次除去上清液，并将板风干直至剩余的乙醇完全挥发。然后将RNA沉淀重悬于15μl的H₂O中。
通过RT PCR来评估IL-17RC mRNA在小鼠细胞系RNA板上的表达，所述RT PCR中使用的引物为zc38910(5’acgaagcccaggtaccagaaagag3’；SEQ IDNO：40)和zc38679(5’aaaagcgccgcagccaagagtagg3’；SEQ ID NO：41)，每个样本的RT PCR条件同使用Platinum Taq试剂盒(Invitrogen，Carlsbad，CA)的SuperScript One-Step PCR。循环条件为：48℃30分钟的一个循环，94℃2分钟，然后是(94℃15秒+55℃30秒+72℃1分30秒)的35个循环，然后是72℃7分钟的一个循环。取每种反应的产物各10μl进行琼脂糖凝胶电泳，并通过凝胶对IL-17RC的阳性表达和阴性表达进行评分。
鼠类IL-17RCmRNA在一些小鼠细胞系中表达，特别是在来源于骨髓的细胞系(包括成骨细胞系、脂肪细胞系和前脂肪细胞系)中表达。此外，小鼠IL-17RC mRNA在来自内分泌系统的一些样本中表达，例如在胰腺间质细胞系、胰岛细胞系和下丘脑细胞系、唾液腺细胞系和睾丸细胞系的样本中表达。
实施例4
大肠杆菌中产生的pIL-17F的重折叠和纯化
A)包含体分离和pIL-17F的提取
在批次发酵物或摇瓶培养物中诱导蛋白质的表达，在诱导后将大肠杆菌培养肉汤置于1升的瓶中，使用Sorvall浮桶式转头离心机以3000RPM离心。使用含200mM NaCl和5mM EDTA的50mM Tris缓冲液(pH 8.0)洗涤细胞沉淀以除去所有的肉汤污染物，直至上清液澄清为止。
然后将细胞沉淀悬浮于冰冷的裂解缓冲液(50mM Tris pH 8.0；5mMEDTA；200mM NaCl；10％蔗糖(w/v)；5mM DTT；5mM苯甲脒)中，使其在600nm处的光密度为10-20光密度单位。然后将该悬液在冰冷条件下用APV2000实验室匀浆器以8500-9000psi匀浆3次，产生破碎的细胞裂解物。在4℃下，以20000×G离心细胞裂解物1小时，以回收不可溶的部分(包含体)。
将20000×G离心所得的包含体沉淀称重后重悬于洗涤缓冲液(50mM TrispH 8，含有200mM NaCl、5mM EDTA、5mM DTT、5mM苯甲脒)中，每毫克包含体使用10ml洗涤缓冲液。通过使用OMNI国际通用转子定子式发动器(internationalrotor stator generator)进行匀浆得到均匀的分散系。然后将该悬液在4℃下以20000×G离心30分钟。重复洗涤3-5次直至上清液澄清为止。
将经过洗涤的最终沉淀溶解于含7M盐酸胍的40mM Tris缓冲液(pH 8，含有0.1M亚硫酸钠和0.02M连四硫酸钠)中。在4℃下缓慢搅拌过夜，进行提取和亚硫酸解反应。将所得的粉红色溶液在4℃下以35000×G离心1小时，然后取澄清的含有可溶性pIL-17F的上清液以0.45μm过滤。
B)pIL-17F的重折叠过程
将溶解的亚硫酸解的pIL-17F逐滴加入冰冷的重折叠缓冲液中稀释以进行重折叠，所述重折叠缓冲液含有55mM MES、10.56mM NaCl、0.44mM KCl、0.055％PEG(3400K)、1.1mM EDTA、20％甘油、0.5M盐酸胍、0.75M的精氨酸以及比例为1∶1的谷胱甘肽的氧化还原对(1mM GSH：1mM GSSG)。用HCl将重折叠缓冲液的pH调节至6.5，并加入pIL-17F至终浓度为100μg/ml。在稀释后，将混合物在冷室中缓慢搅拌72小时。
C)产物回收和纯化
使用实验室规模的TFF系统和10kDa截留膜，将重折叠的pIL-17F浓缩10倍。然后使用0.45微米的膜过滤，通过加入乙酸将pH调节至5.1。然后使用经过50mM pH 5.1的乙酸缓冲液平衡的Pharmacia SP Fast Flow柱，通过阳离子交换色谱捕获经pH调节的物质。通过将pIL-17F用5倍体积的平衡缓冲液以流速为190cm/小时在线(inline)稀释进行上柱。上述稀释降低了离子强度，使得目标蛋白与基质可以有效地结合。在上样完成后，用平衡缓冲液将柱洗涤至基线吸收。然后用含0.4M NaCl的50mM乙酸缓冲液(pH 5.1)洗涤柱，然后再用含0.4M-1.5M NaCl的50mM乙酸缓冲液(pH 5.1)以5CV的梯度洗脱结合的蛋白。通过对洗脱级分的SDS PAGE分析表明，用约1M NaCl洗脱的蛋白质中有大约85％为二聚体。混合含有pIL-17F的级分，并在Amicon搅拌池中用10kDa截留超滤膜浓缩所述级分，制备的级分最后通过分子筛色谱进行纯化并更换缓冲液。
D)分子筛缓冲液更换和制剂配制
将浓缩的阳离子混合物(体积为CV的3-4％)以30cm/小时的流速注射到Pharmacia Superdex 75分子筛柱上，所述柱已用含有109mM NaCl的50mM磷酸钠缓冲液(pH 7.2)平衡。将含有所述产物的对称洗脱峰用含有109mM NaCl的50mM磷酸钠缓冲液(pH 7.2)稀释至浓度为1mg/ml。最后将pIL-17F以0.2μm过滤除菌，分成等份并储存于-80℃下。最终的加工产量为20％。
实施例5
哺乳动物可溶性IL-17RC表达构建体的构建
使用编码IL-17RC多肽(SEQ ID NO：43)的DNA片段(SEQ ID NO：42)、编码mFc1(SEQ ID NO：44)的DNA片段和表达载体pZMP20，通过重叠PCR和同源重组构建了含有人类IL-17RC[L21-K451]-mFc1(小鼠BALB/c μ2a Fc)的表达构建体。通过PCR扩增产生上述片段。
编码IL-17RC[L21-K451]的PCR片段包括：5’端的与pZMP20载体序列的优化的组织纤溶酶原激活物前原分泌前导序列编码区域重叠的部分、编码[L21-K451]的IL-17RC胞外结构域，以及3’端的与mFc1编码区域重叠的部分。PCR扩增反应使用了5’寡核苷酸[GTTTCGCTCAGCCAGGAAATCCATGCCGAGTTGAGACGCTTCCGTAGACTGGAGAGGCTTGTGGGGCCT；SEQ ID NO：46]、3’寡核苷酸[TGTGGGCCCT CTGGGCTCCTTGTGGATGTATTTGTC；SEQ IDNO：47]和一个在之前产生作为模板的IL-17RC的DNA克隆。
编码mFc1的PCR片段包括5’端的与IL-17RC序列重叠的部分、mFc1编码区域以及3’端的与pZMP20载体的脊髓灰质炎病毒内核糖体进入位点区域重叠的部分。扩增反应使用了5’寡核苷酸[GACAAATACATCCACAAGGAGCCCAGAGGGCCCACA；SEQ IDNO：48]、3’寡核苷酸[CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTATTTACCCGGAGTCCGGGA；SEQ ID NO：49]和一个在之前产生作为模板的mFc1的DNA克隆。
PCR扩增反应条件如下：94℃5分钟的一个循环，(94℃1分钟+55℃2分钟+72℃3分钟)的35个循环，以及72℃10分钟的一个循环。将PCR反应产物混合物用1％的琼脂糖凝胶进行分离，并使用QIAquick^TM Gel Extraction试剂盒(Qiagen，Cat.No.28704)从凝胶上提取与预期大小相符的DNA片段。
通过重叠PCR将两个PCR片段连接在一起。两个片段的凝胶提取物各取大约1μl，通过PCR扩增反应连接，所述PCR扩增反应中使用了5’寡核苷酸[GTTTCGCTCAGCCAGGAAATCCATGCCGAGTTGAGACGCTTCCGTAGACTGGAGAGGCTTGTGGGGCCT；SEQ ID NO：46]和3’寡核苷酸[CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTATTTACCCGGAGTCCGGGA；SEQ ID NO：49]。使用的PCR条件如下：94℃5分钟的一个循环，(94℃1分钟+55℃2分钟+72℃3分钟)的35个循环，以及72℃10分钟的一个循环。将PCR反应产物混合物用1％的琼脂糖凝胶进行分离，并使用QIAquick^TMGel Extraction试剂盒(Qiagen，Cat.No.28704)从凝胶上提取与插入物大小相符的DNA片段。
质粒pZMP20为一种哺乳动物表达载体，该载体中含有一个表达盒、来自脊髓灰质炎病毒的内核糖体进入元件、在跨膜结构域的C端截短的CD8胞外结构域、大肠杆菌复制起点、哺乳动物可筛选标记表达单位(包括SV40启动子、增强子和复制起点，DHFR基因和SV40终止子)；以及在酿酒酵母中进行筛选和复制所需的URA3和CEN-ARS序列，所述表达盒中具有下述序列：MPSV启动子、用于在酵母重组之前进行线性化的Bgl II位点、otPA信号肽序列。
在将质粒pZMP20与凝胶提取的IL-17RC[L21-K451]-mFc1的PCR片段在酵母中进行同源重组之前，使用Bgl II消化该质粒。将100μl的感受态酵母(酿酒酵母)细胞与10μl的IL-17RC[L21-K451]-mFc1插入物DNA和100ng的经BglII消化的pZMP20载体相混合，然后将该混合物转移至0.2cm电穿孔杯中。对酵母/DNA混合物进行电脉冲，使用的电源(BioRad Laboratories，Hercules，CA)设置为0.75kV(5kV/cm)、∞ohm和25μF。向杯中加入600μl的1.2M山梨醇，然后分别将100μl和300μl等分试样的酵母铺于两块URA-D板上，并在30℃下培养。在约72小时后，将来自一块板上的Ura+酵母转化体重悬于1ml H₂O中，短暂离心以沉淀酵母细胞。细胞沉淀重悬于0.5ml的裂解缓冲液(2％TritonX-100、1％SDS、100mM NaCl、10mM Tris、pH 8.0、1mM EDTA)中。向装有250μl经酸洗涤的玻璃珠和300μl苯酚-氯仿的Eppendorf管中加入500μl裂解混合物，漩涡振荡3分钟，在Eppendorf离心机上以最大转速离心5分钟。取300μl水相转移至新管中，加入600μl乙醇以沉淀DNA，然后以最大转速离心30分钟。倒出上清液并用1ml的70％乙醇洗涤沉淀。倒出上清液并将DNA沉淀重悬于30μl含1mM EDTA的10mM Tris(pH 8.0)中。
使用5μl酵母DNA制品和50μl大肠杆菌细胞进行电击感受态大肠杆菌宿主细胞(DH12S)的转化。以2.0kV、25μF和400ohm对细胞进行电脉冲。在电穿孔之后，加入1ml SOC(2％Bacto^TM胰蛋白胨(Difco，Detroit，MI)、0.5％酵母提取物(Difco)、10mM NaCl、2.5mM KCl、10mM MgCl₂、10mM MgSO₄和20mM葡萄糖)，然后分别将50μl和200μl等分试样的细胞铺于两块LB AMP板(LB肉汤(Lennox)、1.8％Bacto^TM琼脂(Difco)、100mg/L氨苄青霉素)上。
对用于构建体的三种DNA克隆的插入物进行序列分析并选择含有正确序列的一个克隆。使用市售的试剂盒(QIAGEN Plasmid Mega试剂盒，Qiagen，Valencia，CA)，根据厂商的说明进行大规模质粒DNA的分离。
实施例6
表达IL-17RC-CEE、IL-17RC-CHIS和IL-17RC-CFLAG的哺乳动物可溶性IL-17RC表达构建体的构建
使用编码IL-17RC[L21-K451]的DNA片段(SEQ ID NO：42)和表达载体pZMP20，通过PCR和同源重组构建了含有人类IL-17RC[L21-K451]和C末端标签的表达构建体，所述C末端标签为Glu-Glu(CEE)标签、六组氨酸(CHIS)标签或FLAG(CFLAG)标签。
编码IL-17RCCEE的PCR片段包括：5’端的与pZMP20载体序列的优化的组织纤溶酶原激活物前原分泌前导序列编码区域重叠的部分、编码[L21-K451]的IL-17RC胞外结构域，Glu-Glu标签序列(Glu Glu Tyr Met Pro Met Glu；SEQID NO：53)，以及3’端的与pZMP20载体的脊髓灰质炎病毒内核糖体进入位点区域重叠的部分。PCR扩增反应使用了5’寡核苷酸[GTTTCGCTCAGCCAGGAAATCCATGCCGAGTTGAGACGCTTCCGTAGACTGGAGAGGCTTGTGGGGCCT；SEQ ID NO：46]、3’寡核苷酸[CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTATTCCATGGGCATGTATTCTTCCT TGTGGATGTATTTGTC；SEQ ID NO：50]和一个在之前产生作为模板的IL-17RC的DNA克隆。
PCR扩增反应条件如下：94℃5分钟的一个循环，(94℃1分钟+55℃2分钟+72℃3分钟)的35个循环，以及72℃10分钟的一个循环。将PCR反应产物混合物用1％的琼脂糖凝胶进行分离，并使用QLAquick^TM Gel Extraction试剂盒(Qiagen，Cat.No.28704)从凝胶上提取与预期大小相符的DNA片段。
在将质粒pZMP20与凝胶提取的IL-17RCCEE的PCR片段在酵母中进行重组之前，使用Bgl II消化该质粒。将100μl的感受态酵母(酿酒酵母)细胞与10μl的IL-17RCCEE插入物DNA和100ng的经Bgl II消化的pZMP20载体相混合，然后将该混合物转移至0.2cm电穿孔杯中。对酵母/DNA混合物进行电脉冲，使用的电源(BioRad Laboratories，Hercules，CA)的设置为0.75kV(5kV/cm)、∞ohm和25μF。向杯中加入600μl的1.2M山梨醇，然后分别将100μl和300μl等分试样的酵母铺于两块URA-D板上，并在30℃下培养。在约72小时后，将来自一块板上的Ura+酵母转化体重悬于1mlH₂O中，短暂离心以沉淀酵母细胞。细胞沉淀重悬于0.5ml的裂解缓冲液(2％TritonX-100、1％SDS、100mM NaCl、10mM Tris、pH 8.0、1mM EDTA)中。向装有250μl经酸洗涤的玻璃珠和300μl苯酚-氯仿的Eppendorf管中加入500μl裂解混合物，漩涡振荡3分钟，在Eppendorf离心机上以最大转速离心5分钟。取300μl水相转移至一个新管中，加入600μl乙醇以沉淀DNA，然后以最大转速离心30分钟。倒出上清液并用1ml的70％乙醇洗涤沉淀。倒出上清液并将DNA沉淀重悬于30μl含1mM EDTA的10mM Tris(pH 8.0)中。
使用5μl酵母DNA制品和50μl大肠杆菌细胞进行电击感受态大肠杆菌宿主细胞(DH12S)的转化。以2.0kV、25μF和400ohm对细胞进行电脉冲。在电穿孔之后，加入1ml SOC(2％Bacto^TM胰蛋白胨(Difco，Detroit，MI)、0.5％酵母提取物(Difco)、10mM NaCl、2.5mM KCl、10mM MgCl2、10mM MgSO4和20mM葡萄糖)，然后分别将50μl和200μl等分试样的细胞铺于两块LB AMP板(LB肉汤(Lennox)、1.8％Bacto^TM琼脂(Difco)、100mg/L氨苄青霉素)上。
对用于构建体的三种DNA克隆的插入物进行序列分析并选择含有正确序列的一个克隆。使用市售的试剂盒(QIAGEN Plasmid Mega试剂盒，Qiagen，Valencia，CA)，根据厂商的说明进行大规模质粒DNA的分离。
使用与上述过程相同的过程制备带有C末端组氨酸标签(组成为Gly SerGly Gly His His His His His His(IL-17RCCHIS；SEQ ID NO：51))或C末端FLAG标签(组成为Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys(IL-17RCCFLAG；SEQ ID NO：52))的IL-17RC。为制备这些构建体，3’寡核苷酸不再使用SEQ ID NO：50，而是使用3’寡核苷酸[CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTAGTGATGGTGATGGTGATGTCCACCAGATCCCTTGTGGATGTATTTGTC；SEQ ID NO：54]来产生IL-17RCCHIS，或使用3’寡核苷酸[CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTACTTATCATCATCATCCTTATAATCGGATCCCTTGTGGATGTATTTGTC；SEQ ID NO：55]来产生IL-17RCCFLAG。
实施例7
表达IL-17RC-mFc1融合蛋白和IL-17RC-CEE、IL-17RC-CHIS和IL-17RC-CFLAG
C末端标记的蛋白的可溶性IL-17RC受体表达构建体的转染和表达
将三个系列的每种可溶性IL-17RC融合表达构建体或具有标签的可溶性IL-17RC表达构建体各200μg分别用200单位的PvuI在37℃下消化3小时，用异丙醇沉淀并在1.5mL的Microfuge管中离心。弃去上清液得到沉淀，将沉淀用1mL的70％乙醇洗涤并在室温下放置5分钟。用Microfuge离心机将管以14000RPM离心10分钟，弃去上清液得到沉淀。然后在无菌环境下将沉淀重悬于750μl的CHO细胞组织培养基中，在60℃下培养30分钟，然后冷却至室温。三个管中每管离心得到大约5×10⁶个CHO细胞，然后将细胞用DNA培养基溶液重悬。将DNA/细胞混合物置于0.4cm内径(gap)的杯中，使用下列参数进行电穿孔：950μF、高电容、300V。取出杯中物质，混合，并用CHO细胞组织培养基稀释至25mL，置于125mL摇瓶中。然后将摇瓶置于振荡器上的培养箱中，以120RPM在37℃、6％CO₂条件下培养。
通过逐渐增量加入甲氨喋呤(MTX)至200nM，然后至1μM，以对CHO细胞进行营养筛选。通过蛋白质印迹确认融合蛋白或具有标签的蛋白的表达，然后将CHO细胞群扩大培养并收获用于蛋白纯化。
实施例8
可溶性IL-17RC的表达
使用IL-17RC_Tbx的DNA片段和表达载体pZMP40，通过同源重组构建含有IL-17RC-Tbx-C(Fc9)(SEQ ID NO：64)的表达质粒。使用引物zc44531和zc44545通过PCR扩增产生所述片段。
PCR片段IL-17RC_Tbx含有部分IL-17RC胞外结构域编码区域，使用之前产生的IL-17RC克隆作为模板制备所述区域。所述片段包括：5’端的与pZMP40载体序列的otPA编码区域重叠的部分、IL-17RC区段(SEQ ID NO：2的氨基酸残基21至451)、连接物序列、凝血酶切割位点，以及3’端的与pZMP40载体的Fc9编码区重叠的部分。所用PCR扩增反应条件如下：94℃5分钟的一个循环，(94℃1分钟+55℃2分钟+72℃3分钟)的35个循环，以及72℃10分钟的一个循环。
将PCR反应产物混合物用1％的琼脂糖凝胶进行分离，并使用QIAquick^TMGel Extraction试剂盒(Qiagen，Cat.No.28704)从凝胶上提取与插入物大小相符的条带。
质粒pZMP40为一种哺乳动物表达载体，该载体中含有一个表达盒、来自脊髓灰质炎病毒的内核糖体进入位点(IRES)元件和在跨膜结构域的C端截短的CD8胞外结构域、大肠杆菌复制起点、哺乳动物可筛选标记表达单位(包括SV40启动子、增强子和复制起点，DHFR基因和SV40终止子)；以及在酿酒酵母中进行筛选和复制所需的URA3和CEN-ARS序列，所述表达盒具有MPSV启动子、用于插入编码序列的多个限制性酶切位点、otPA信号肽序列和Fc9序列。该质粒是用pZMP21质粒(美国专利公布No.US 2003/0232414A1；保藏于美国典型培养物保藏中心，保藏号为ATCC#PTA-5266)构建的。
在将质粒pZMP40与PCR片段进行酵母中的同源重组之前，使用BglII切割该质粒。将100μl的感受态酵母(酿酒酵母)细胞与10μl的插入物DNA(SEQ IDNO：66)和100ng经切割的pZMP40载体独立地相混合，然后将该混合物转移至0.2cm电穿孔杯中。对酵母/DNA混合物进行电脉冲，使用的电源(BioRadLaboratories，Hercules，CA)的设置为0.75kV(5kV/cm)、∞ohm和25μF。向杯中加入600μl的1.2M山梨醇，然后分别将100μl和300μl等分试样的酵母铺于两块URA-D板上，并在30℃下培养。在约72小时后，将来自一块板上的Ura+酵母转化体重悬于1ml H₂O中，短暂离心以沉淀酵母细胞。将细胞沉淀重悬于0.5ml的裂解缓冲液(2％Triton X-100、1％SDS、100mM NaCl、10mM Tris、pH 8.0、1mM EDTA)中。向装有250μl经酸洗涤的玻璃珠和300μl苯酚-氯仿的Eppendorf管中加入500μl裂解混合物，漩涡振荡3分钟，在Eppendorf离心机上以最大转速离心5分钟。取300μl水相转移至新管中，加入600μl乙醇(EtOH)以沉淀DNA，然后以最大转速离心30分钟。倒出上清液并用1ml的70％乙醇洗涤沉淀。倒出上清液并将DNA沉淀重悬于30μl的TE中。
使用5μl酵母DNA制品和50μl大肠杆菌细胞进行电击感受态大肠杆菌宿主细胞(DH12S)的转化。以2.0kV、25μF和400ohm对细胞进行电脉冲。在电穿孔之后，加入1ml SOC(2％Baeto^TM胰蛋白胨(Difco，Detroit，MI)、0.5％酵母提取物(Difco)、10mM NaCl、2.5mM KCl、10mM MgCl2、10mM MgSO4和20mM葡萄糖)，然后分别将50μl和200μl等分试样的细胞铺于两块LBAMP板(LB肉汤(Lennox)、1.8％Bacto^TM琼脂(Difco)、100mg/L氨苄青霉素)上。
对用于构建体的三种DNA克隆的插入物进行序列分析，并且时于每个构建体选择含有正确序列的一个克隆。使用市售的试剂盒(QIAGEN Plasmid Mega试剂盒，Qiagen，Valencia，CA)，根据厂商的说明进行大规模质粒DNA的分离。
将三个系列的IL-17RC[L21-K451]_Tbx_C(Fc9)构建体各200μg分别用200单位的PvuI在37℃下消化3小时，用IFA沉淀并在1.5mL的Mcrofuge管中离心。弃去上清液得到沉淀，将沉淀用1mL的70％乙醇洗涤并在室温下放置5分钟。在Microfuge离心机上将管以14000RPM离心10分钟，弃去上清液得到沉淀。然后在无菌环境下将沉淀重悬于750μl的PF-CHO培养基中，在60℃下培养30分钟，然后冷却至室温。三个管中每管离心得到大约5×10⁶个APFDXB11细胞，然后将细胞用DNA培养基溶液重悬。将DNA/细胞混合物置于0.4cm内径的杯中，使用下列参数进行电穿孔：950μF、高电容和300V。取出杯中物质，混合，并用PF-CHO培养基稀释至25mL，置于125mL摇瓶中。然后将摇瓶置于振荡器上的培养箱中，以120RPM在37℃、6％CO₂条件下培养。
通过逐渐增量加入甲氨喋呤(MTX)至200nM，然后至1μM MTX，以对细胞系进行营养筛选。通过蛋白质印迹确认表达，然后将细胞系扩大培养并进行蛋白纯化。
实施例9
从CHO细胞纯化可溶性IL-17RC
使用Pellicon-II切线流过滤系统，通过两个Biomax 0.1m² 30kD分子量截留膜盒(Millipore，Bedford，MA)，将来源于表达IL-17RC-TbX-Fc9(SEQ IDNO：64)的CHO细胞的条件培养基浓缩大约10倍。用冰乙酸将浓缩后的培养基的pH调节到5.5，0.2μm过滤除菌，然后通过批色谱(batch chromatography)上样到蛋白G sepharose fast flow树脂柱上(Pharmacia，Piscataway，NJ)上，4℃下过夜。在调节好pH的条件培养基上样之前，该蛋白G树脂柱应先用5倍柱体积(大约150ml)的平衡缓冲液(25mM乙酸钠、150mM NaCl，pH5.5)进行预平衡。经过滤且调节好pH的条件培养基与树脂的比例为33∶1(v/v)。
在室温条件下(大约21℃)进行批色谱处理。将分批的经过pH调节和0.22μm过滤的条件培养基倒在一个空的5.5×20.5cm的玻璃柱(BioRad，Hercules，CA)上并利用重力压紧。将柱用10倍柱体积(大约300ml)的平衡缓冲液(25mM乙酸钠、150mM NaCl，pH5.5)洗涤。然后用100mM甘氨酸，pH2.7的溶液对结合的蛋白进行pH洗脱。收集9.0ml级分并立即用1.0ml的2.0M Tris，pH 8.0溶液进行中和。通过SDS-PAGE考马斯亮蓝染色对所收集的级分进行分析。将含有IL-17RC-Tbx-Fc9的级分混合，并使用5kD分子量截留Biomax膜旋转浓缩器(Millipore，Bedford，MA)，根据厂商的说明将混合的级分浓缩大约6倍。
在4℃下，使用7kD分子量截留膜Slide-A-Lyzer(Pierce，Rockford，IL)，将浓缩的混合级分用1×磷酸盐缓冲盐溶液(pH 7.3)(Sigma，St.Louis，MO)广泛透析。将所得的含有IL-17RC-TbX-Fc9的1×磷酸盐缓冲盐溶液(pH 7.3)经过0.22μm过滤除菌，然后分装并存储于-80℃。
实施例10
IL-17A和IL-17F与人类IL-17RC的结合
A)生物素化细胞因子与转染细胞的结合
用编码人类IL-17受体(SEQ ID NO：21)、人类IL-17RC(SEQ ID NO：2)或编码上述两种受体的表达载体转染幼仓鼠肾(BHK)细胞，以评估它们结合生物素化人类IL-17A和人类IL-17F的能力。使用乙二胺四乙酸钠收获细胞、计数并在染色培养基(SM)中稀释至10⁷细胞/ml，所述染色培养基(SM)为加入了1mg/ml牛血清清蛋白(BSA)、10mM Hepes和0.1％叠氮钠(w/v)的HBSS。用不同浓度的生物素化人类IL-17A(SEQ ID NO：14)和人类IL-17F(SEQ ID NO：16)在冰上与细胞一起培养30分钟。在30分钟后，使用SM洗去过量的细胞因子，并用1∶100稀释度的链亲和素缀合的藻红蛋白(SA-PE)，在冰上与细胞一起培养30分钟。洗去过量的SA-PE，使用流式细胞术分析细胞。由细胞因子染色的平均荧光强度计算细胞因子结合的量。我们由上述分析发现，人类IL-17A以相似的程度与人类IL-17R和IL-17RC两者结合。此外，人类IL-17F与IL-17RC结合的程度与IL-17A相似，与IL-17R结合的程度可检测但是就远逊于IL-17A。
B)生物素化细胞因子与人类外周血单核细胞的结合
人类外周血单核细胞(PBMC)通过聚蔗糖密度梯度离心从全血中制备。将PBMC以10⁷细胞/ml的密度与1μg/ml的生物素化IL-17A或IL-17F以及针对特定细胞表面蛋白的荧光染料缀合的抗体一起培养，所述抗体被设计用于区分不同的白细胞谱系。这些标记物包括CD4、CD8、CD19、CD11b、CD56和CD16。洗去过量的抗体和细胞因子，如上所述通过与SA-PE一起培养来检测特异性的细胞因子结合。使用流式细胞术分析样本，我们由上述分析发现，人类IL-17A几乎与所检测的所有的PBMC类群都有结合，但是人类IL-17F不能以可检测的程度结合任何细胞类群。
C)生物素化人类IL-17A和IL-17F与未标记的细胞因子的特异性结合的抑制
如上所述地进行结合研究，不同的只是在结合反应中包括了过量的未标记的人类IL-17A和IL-17F。在针对BHK细胞的研究中，未标记细胞因子的量在一定浓度范围内变化，我们发现加入未标记的IL-17A可以与IL-17A和IL-17F竞争性地结合IL-17RC和IL-17R。然而，未标记的IL-17F可以与IL-17A和IL-17F竞争性结合IL-17RC，但是不能有效地与IL-17A和IL-17F竞争性结合IL-17R。这说明IL-17A和IL-17F都可以与IL-17RC特异性结合，而且由于它们可以相互竞争结合，因此说明它们的结合位点相同或者相重叠。此外，IL-17F结合IL-17R的竞争能力比IL-17A要弱，这说明这两种细胞因子也是结合IL-17R的相似区域，但是IL-17F结合IL-17R的亲和力要比IL-17F结合IL-17RC的亲和力弱得多。
D)生物素化人类IL-17A和IL-17F与可溶性IL-17RC和IL-17R的特异性结合的抑制
如上所述地进行结合研究，不同的只是在结合反应中包括了可溶形式的IL-17RC或IL-17R。这些可溶性受体为来源于每种受体的胞外结构域与人类IgG1恒定(Fc)区相融合的融合蛋白。我们发现，可溶性IL-17RC可抑制人类IL-17A和IL-17F两者与IL-17R和IL-17RC转染的BHK细胞的结合。然而，可溶性IL-17R抑制IL-17A与任一种受体的结合，但并不能有效地阻断IL-17F与IL-17RC的结合，这一结果与IL-17F对IL-17R的结合力较弱的事实相一致。
实施例11
IL-17A和IL-17F与IL-17RC的结合
A)使用冷配体(Cold Ligand)抑制结合
用hIL-17RC(SEQ ID NO：2)和IL-17R(SEQ ID NO：21)转染BHK细胞，然后以40,000细胞/孔的密度将细胞在24孔板(Costar 3527)上培养两天后进行测定。分别向各孔中加入10ng/ml的通过碘珠(iodobead)法被放射性标记的IL-17A(SEQ ID NO：14)和IL-17F(SEQ ID NO：16)，以及终体积至250μl/孔的结合缓冲液(RPMI 1640培养基(JRH 51502-500M)和10mg/ml牛血清清蛋白(Gibco15260-037))，实验设三个平行样。以100倍过量的摩尔量加入冷竞争物。检测的竞争物包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、II-17D、IL-17E、IL-17F和IL-21。各孔在冰上培养1小时，然后用PBS(Invitrogen 20012-027)洗涤两次，用高盐溶液(1.5M NaCl、50mM HEPES，pH 7.4)洗涤一次。用500μl的0.8M NaOH在室温下提取孔30分钟，并通过γ计数器(Packard Cobra II A5005)测量每分钟的计数。
结果表明，100倍摩尔量的冷IL-17A和IL-17F可以使¹²⁵I标记的IL-17A与BHK hIL-17RC的结合降低大约7倍，而IL-17B、C、D、E和IL-21对结合没有影响。100倍摩尔量的冷IL-17A可以使¹²⁵I标记的IL-17A与BHK IL-17R的结合减少大约4倍，而IL-17B、C、D、E、F和IL-21对结合没有影响。100倍摩尔量的冷IL-17A和IL-17F可以使¹²⁵I标记的IL-17F与BHK hIL-17RC的结合分别降低大约4倍和5倍，而IL-17B、C、D、E和IL-21对结合没有影响。
B)使用可溶性受体抑制结合：
如上部分所述进行hzytor14(SEQ ID NO：2)和IL-17R(SEQ ID NO：21)转染的BHK细胞的结合研究，不同的是使用100倍过量摩尔量的可溶性hIL-17RCx1/Fc9(实施例8)和可溶性IL-17R/Fc(获自R&D；Ref.177-IR)代替冷配体进行竞争结合。细胞的洗涤、提取和计数步骤如上部分所述。
可溶性hIL-17RC/Fc可抑制¹²⁵I标记的IL-17F与BHK hIL-17RC的结合，其IC50约为10倍过量的摩尔量(三次试验的平均值)。可溶性hIL-17RC/Fc可抑¹²⁵I标记的IL-17A与相同细胞系的结合，其平均IC50约为20倍过量的摩尔量，可溶性IL-17R/Fc可抑制¹²⁵I标记的IL-17A，其平均IC50约为20倍过量的摩尔量。
C)结合饱和
如上文中所述将转染的BHK细胞铺于24孔板中。加入放射性标记的IL-17A和IL-17F，将初始浓度为4nM的放射性标记的IL-17A和IL-17F用结合缓冲液以1∶3的比例梯度稀释8份至浓度为1.83pM，每孔终体积为250μl，设三个平行样。然后分别在每个稀释度的样本中点加入100倍过量摩尔量的冷配体。细胞的洗涤、提取和计数步骤如上文所述。通过用每一稀释度的非竞争状态的计数减去100倍过量时的计数，可将每分钟的特异性结合计数相对于加入的放射性标记配体的浓度作图。将上述经过标准化的数据作图，以产生针对放射性标记配体和转染的BHK细胞的每一种组合的饱和结合曲线。表7显示了由上述全部三组实验计算得出的亲和力值。
表7
  ¹²⁵I标记的IL-17A+BHK hIL-17RC  1.180pM  2.200pM  3.370pM  ¹²⁵I标记的IL-17A+BHK IL-17R  1.2.5+/-0.2nM  2.4.5+/-0.3nM  3.5.9+/-0.1nM  ¹²⁵I标记的IL-17F+BHK hIL-17RC  1.50pM  2.60pM  3.80pM  ¹²⁵I标记的IL-17F+BHK IL-17R  1.亲和力极低  2.亲和力极低  3.亲和力极低
单位点结合曲线拟合与IL-17A和IL-17F与IL-17R结合的特征最为接近。双位点结合曲线拟合与IL-17A和IL-17F与hIL-17RC结合的特征最为接近。高亲和力结合位点为上表所示的值。低亲和力结合位点具有的亲和力极低，并且在三个实验中还有所不同。
实施例12
鼠类Nih3t3细胞对人类IL-17A和IL-17F的应答
A)细胞铺板和kz142腺病毒报告物感染。
将来源于小鼠成纤维细胞(由ATCC记载)Nih3t3的Nih3t3细胞以5000细胞/孔的密度铺于细胞培养物包被的白色固体96孔板上(Cat.#3917.Costar)，使用含有谷氨酰胺和添加了丙酮酸盐的DMEM/10％FBS铺板，并在37℃、5％CO2的条件下培养过夜。在第二天，移去铺板培养基并且用含有谷氨酰胺和添加了丙酮酸盐的DMEM/1％FBS培养基制备感染复数为5000颗粒/细胞的Kz142腺病毒颗粒，并在37℃、5％CO2的条件下培养过夜。
B)萤光素酶测定，以测量kz142腺病毒报告物感染的nih3t3细胞中IL-17A和F的激活作用。
在与腺病毒颗粒报告物培养过夜后，用无血清培养基(添加有0.28％BSA)准备人类IL-17A和IL-17F配体的处理物。移去腺病毒颗粒和培养基，并加入合适剂量的配体，设三个平行样。然后继续在37℃和5％CO2条件下继续培养4小时，之后移去培养基并使细胞裂解15分钟，使用萤光素酶测定系统和试剂(Cat.#e1531 Promega.Madison，WI.)以及微量板发光计测量平均荧光强度(MFI)。检测浓度范围为0.1-1000ng/ml的人类IL-17A和IL-17F的活性，得出两种配体的EC50值约为50ng/ml。上述数据表明nih3t3细胞携带有上述配体的受体，并且IL-17A和IL-17F可激活NF-κB/Ap-1转录因子。
实施例13
鼠类Nih3t3细胞表达IL-17RA和IL-17RC两者
对nih3t3 RNA进行的RT PCR分析表明，这些细胞均为IL-17RA和IL-17RC阳性，这与这些细胞对人类IL-17A和IL-17F介导作用有NF-κB/Ap-1应答相一致，所述人类IL-17A和IL-17F介导作用是通过上述一种或两种受体介导实现的。
RT PCR反应的具体过程：
A)鼠类IL-17RC的PCR
使用标准方法从分离自nih3t3细胞的总RNA制备第一链cDNA。使用hotstar聚合酶(Qiagen，Valencia，CA)根据厂商的说明进行PCR，使用的正义引物为zc38910，5’ACGAAGCCCAGGTACCAGAAAGAG 3’(SEQ ID NO：56)，反义引物为zc 3869，5’AAAAGCGCCGCAGCCAAGAGTAGG 3’(SEQ IDNO：57)，进行35个循环的扩增。琼脂糖凝胶电泳显示出预期的850bp大小的单个明显扩增子。
B)鼠类IL-17RA的PCR
使用标准方法从分离自nih3t3细胞的总RNA制备第一链cDNA。使用hotstar聚合酶(Qiagen，Valencia，CA)根据厂商的说明进行PCR，使用的正义引物为zc 38520，5’CGTAAGCGGTGGCGGTTTTC 3’(SEQ ID NO：58)，反义引物为zc 38521，5’TGGGCAGGGCACAGTCACAG 3’(SEQ ID NO：59)，进行35个循环的扩增。琼脂糖凝胶电泳显示出预期的498bp大小的单个明显扩增子。
实施例14
表达ap1/nfkb转录因子的稳定的Nih3t3测试克隆的制备
使用含有新霉素可筛选标记的kz142 ap1/nfkb报告物构建体稳定转染如上所述的鼠类nih3t3细胞系。以克隆密度将新霉素抗性的转染混合物铺板。使用克隆环分离克隆，并使用人类IL-17A配体作为诱导物通过萤光素酶测定筛选克隆。选择具有最高平均荧光强度(MFI)(通过Ap-1/NF-κB萤光素酶)和最低背景信号的克隆。筛选出了一个稳定转染的细胞系并将其命名为nih3t3/kz142.8。
实施例15
使用可溶性IL-17RC和IL-17RA/FC嵌合物抑制鼠类Nih3t3细胞中的人类IL-17A和IL-17F的激活作用
在萤光素酶测定中，使用可溶形式的IL-17RC或IL-17RA作为Ap-1/NF-κB元件被人类IL-17A和IL-17F激活的拮抗剂。这些可溶性受体是来源于每种受体的胞外结构域与人类IgG1恒定(Fc)区相融合的融合蛋白。可溶性人类IL-17RFC融合蛋白是商购的(重组人类IL-17R/FC嵌合物，目录号177-IR-100，R&DSystems，Inc.，Minneapolis，Mn.)。如上所述地构建可溶性人类IL-17RC FC嵌合物(IL-17RCsR/FC9)。我们发现过量的IL-17RCsR/FC9和人类IL-17RsR/FC嵌合物抑制人类IL-17A和IL-17F两者介导的鼠类nih3t3/kz142.8测试细胞系中的Ap-1/NF-κB激活的EC50水平。
IL-17RCsR/FC9蛋白显示出最高的拮抗IL-17F激活的效力，IL-17RsR/FC嵌合物显示出最高的拮抗IL-17A激活的效力。
实施例16
在哮喘的鼠类模型中IL-17F mRNA上调
使用小鼠的致敏和气道刺激模型来测量IL-17F mRNA水平。通过在第0天和第7天对各组小鼠(8至10周龄)腹膜内注射含10μg重组屋尘螨(dermatophagoides pteronyssinus)变应原1(DerP1)(Indoor biotechnologies，Cardiff，UK)的50％Imject Alum(Pierce)，使得动物被致敏。在七天后，使用含20微克DerP1的50μl PBS对小鼠进行连续三天(第14、15和16天)的刺激。该组为4只小鼠。阴性对照组为5只小鼠(使用磷酸缓冲盐溶液(PBS)致敏，并使用PBS刺激)。还有3只小鼠是用DerP1致敏和用PBS刺激的组。在用变应原或对照物刺激后48小时，收集整个肺组织并分离总RNA。
使用来自每一受试者的相同量的总RNA来制备第一链cDNA。使用Qiagenhotstar聚合酶(Qiagen，Valencia，CA)根据厂商的说明进行IL-17F的PCR。IL-17F的PCR进行35个扩增循环，使用的正义引物为zc46098，5’ACTTGCCATTCTGAGGGAGGTAGC 3’(SEQ ID NO：60)，使用的反义引物为46099，5’CACAGGTGCAGCCAACTTTTAGGA 3’(SEQ ID NO：61)。为了确认在所有受试者中模板质量都是均一的，使用与IL-17F扩增中相同的每种模板的量进行β肌动蛋白的PCR。β肌动蛋白的PCR包括25个PCR循环，使用的正义引物为zc44779，5’GTGGGCCGCTCTAGGCACCA 3’(SEQ IDNO：62)，使用的反义引物为zcc44776，5’CGGTTGGCCTTAGGGTTCAGGGGGG 3’(SEQ ID NO：63)。
来自DerP1致敏且Derp1刺激哮喘刺激)的处理组中的全部4只小鼠均表现出明显的IL-17F扩增。与此不同的是，阴性对照组中仅观察到微弱的IL-17F扩增，所述阴性对照包括代表DerP1致敏/PBS刺激处理组的全部3个受试者和代表PBS致敏/PBS刺激处理组的全部5个受试者。对于哮喘刺激受试者而言，β肌动蛋白扩增的强度至少与阴性对照相同，这表明阴性对照中IL-17F扩增微弱不是因为模板的问题。
实施例17
COS细胞转染和分泌捕获
A)Cos细胞转染和分泌捕获测定显示，IL-17RCsR/Fc9和IL-17F为受体/配体对
使用分泌捕获测定将人类IL-17RC(SEQ ID NO：2)与人类IL-17F(SEQ IDNO：16)相匹配。使用可溶性IL-17RCsR/Fc9融合蛋白(实施例8)作为分泌测定中的结合试剂。将含有人类IL-17B、C、D、E和F的cDNA并带有SV40复制起点的表达载体瞬时转染至COS细胞中。使用下文所述的分泌捕获测定分析IL-17RCsR/Fc9与转染的COS细胞的结合。仅观察到IL-17RCsR/Fc9与人类IL-17F的阳性结合。上述结果证实了人类IL-17RC和IL-17F为受体/配体对的这一新发现。
B)COS细胞的转染
按下述步骤进行COS细胞的转染：将3μl混合的DNA和5μl的Lipofectamine^TM在92μl无血清DMEM培养基(500ml DMEM中含5mg丙酮酸钠、146mg L-谷氨酰胺、5mg转铁蛋白、2.5mg胰岛素、1μg硒和5mg胎球蛋白)中混合，在室温下培养30分钟，然后再加入400μl的无血清DMEM培养基。将500μl的上述混合物加入到每孔铺有1.5×10⁵个COS细胞的12孔组织培养板上，在37℃下培养5小时。加入500μl的20％FBS DMEM培养基(500ml DMEM中含100ml FBS、55mg丙酮酸钠和146mg L-谷氨酰胺)并培养过夜。
C)分泌捕获测定
按下述步骤进行分泌捕获测定：用PBS洗去细胞上的培养基，然后用含1.8％甲醛的PBS固定细胞15分钟。然后将细胞用TNT(0.1M Tris-HCL、0.15MNaCl和0.05％Tween-20，溶于H2O)洗涤，用含0.1％Triton-X的PBS透化15分钟，再次用TNT洗涤。用TNB(0.1M Tris-HCL、0.15M NaCl和0.5％封闭试剂(NEN Renaissance TSA-Direct试剂盒)，溶于H2O)封闭细胞1小时，并再用TNT洗涤细胞。将细胞与1μg/ml的人类IL-17RCx1sR/FC9可溶性受体融合蛋白一起培养1小时，然后用TNT洗涤细胞。再将细胞与1∶200稀释度的山羊抗人类Ig-HRP(Fc特异性的)抗体一起培养1小时。然后再次用TNT洗涤细胞。
将荧光素酪胺(fluorescein tyramide)试剂以1∶50稀释于稀释缓冲液(NEN试剂盒)中并与细胞一起培养4-6分钟，再用TNT洗涤，从而检测阳性结合。将细胞用TNT以1∶5稀释并保存于Vectashield Mounting培养基(Vector LabsBurlingame，CA)中。使用FITC滤光片在荧光显微镜下观察细胞。
实施例18
鼠类抗人类IL-17RC单克隆抗体的制备
A.用于制备抗IL-17RC抗体的免疫
1.可溶性IL-17RC-muFc
使用25-50μg的可溶性人类IL-17RC-muFc蛋白(实施例23)与Ribi佐剂(Sigma)以1∶1(v∶v)混合，以隔周免疫方案对六周龄至十二周龄的正常小鼠或IL-17RC基因敲除小鼠进行腹膜内注射免疫。在第三次免疫后七至十天，取眶后血的血样并收集血清，用中和测定(例如，如本文所述)评估其抑制IL-17或IL-17F与IL-17RC结合的能力，并且用FACS染色测定评估其对IL-17RC转染的293细胞和未转染的293细胞的染色能力。继续如上所述地对小鼠进行免疫、取血样和评估，直至中和效价达到平台为止。此时，向具有最高中和效价的小鼠血管内注射含25-50μg可溶性IL-17RC-Fc蛋白的PBS。三天后，取这些小鼠的脾脏和淋巴结以用于产生杂交瘤，杂交瘤的产生可以例如使用小鼠骨髓瘤(P3-X63-Ag8.653.3.12.11)细胞或其他本领域适合的细胞系，并使用本领域已知的标准方法(例如参见Kearney，J.F.et al.，J Immunol.123：1548-50，1979；和Lane，R.D.J Immunol Methods 81：223-8，1985)。
2.可溶性的IL-17RC：IL-17RC-CEE、IL-17RC-CHIS、IL-17RC-CFLAG
使用25-50μg的可溶性人类IL-17RC-CEE、IL-17RC-CHIS或IL-17RC-CFLAG与Ribi佐剂(Sigma)以1∶1(v∶v)混合，以隔周免疫方案对六周龄至十二周龄的正常小鼠或IL-17RC基因敲除小鼠进行腹膜内注射免疫。在第三次免疫后七至十天，提取眶后血的血样并收集血清，用中和测定(例如，如本文所述)评估其抑制IL-17或IL-17F与IL-17RC结合的能力，并且用FACS染色测定评估其对IL-17RC转染的293细胞和未转染的293细胞的染色能力。继续如上所述地对小鼠进行免疫、取血样和评估，直至中和效价达到平台为止。此时，向具有最高中和效价的小鼠血管内注射含25-50μg可溶性IL-17RC即IL-17RC-CEE、zcytor-CHIS或IL-17RC-CFLAG抗原蛋白的PBS。三天后，取这些小鼠的脾脏和淋巴结以用于产生杂交瘤，杂交瘤的产生可以例如使用小鼠骨髓瘤(P3-X63-Ag8.653.3.12.11)细胞或其他本领域适合的细胞系，并使用本领域已知的标准方法(例如参见Kearney，J.F.et al.，J Immunol.123：1548-50，1979；和Lane，R.D.J Immunol Methods 81：223-8，1985)。
3.表达IL-17RC的P815转染体
对六周龄至十周龄的雌性DBA/2小鼠进行腹膜内注射免疫，注射1×10⁵转染的P815活细胞，例如P815/IL-17RC细胞(例如注射0.5ml，细胞密度为2×10⁵细胞/ml)。注射前应使细胞维持于指数生长期。为用于注射，收集细胞并用PBS洗涤三次，然后以2×10⁵细胞/ml的密度重悬于PBS中。在这一模型中，小鼠会在2-3周内发生腹水瘤，如果没有产生针对转染的靶抗原的免疫应答，小鼠将在4-6周内死亡。在三周内，对于腹部没有明显肿胀(腹水的标志)的小鼠按照上述方法以2-3周的间隔再次免疫。在第二次免疫后七至十天，取眶后血的血样并收集血清，用中和测定(例如，如本文所述)评估其抑制IL-17或IL-17F与IL-17或IL-17RC结合的能力，并且用FACS染色测定评估其对IL-17RC转染的293细胞和未转染的293细胞的染色能力。继续如上所述地对小鼠进行免疫、取血样和评估，直至中和效价达到平台为止。此时，向具有最高中和效价的小鼠腹膜内注射1×10⁵转染的P815活细胞。四天后，取这些小鼠的脾脏和淋巴结以用于产生杂交瘤，杂交瘤的产生可以例如使用小鼠骨髓瘤(P3-X63-Ag8.653.3.12.11)细胞或其他本领域适合的细胞系，并使用本领域已知的标准方法(例如参见Kearney，J.F.et al.，见上文；和Lane，R.D.见上文)。
另一种代替对转染的P815活细胞进行免疫的方法包括以每2-3周的频率腹膜内注射1-5×10⁶经辐照的转染细胞。在这种方法中，动物不会发生并死于腹水瘤。那么就要如上所述地监测动物血清以监测其针对IL-17RC的中和性免疫应答，从第二次免疫后开始取血样进行监测。一旦中和效价达到最高水平，则对具有最高效价的小鼠腹膜内注射5×10⁶经辐照的细胞，进行预融合，四天后，取这些小鼠的脾脏和淋巴结以用于产生杂交瘤，杂交瘤的产生可以例如使用小鼠骨髓瘤(P3-X63-Ag8.653.3.12.11)细胞或其他本领域适合的细胞系，并使用本领域已知的标准方法(例如参见Kearney，J.F.et al.，见上文；和Lane，R.D.见上文)。
B.筛选杂交瘤融合体以获得结合IL-17RC并抑制IL-17或IL-17F与IL-17RC结合的抗体
在融合后8-10天，对杂交瘤上清液进行三种不同的原代筛选。对于第一种测定，使用HRP-缀合的山羊抗小鼠κ和抗λ轻链二抗(second step reagent)，通过ELISA方法，检测上清液中抗体与结合在板上的可溶性人类IL-17RC(IL-17RC-muFc、IL-17RC-CEE、IL-17RC-CHIS或IL-17RC-CFLAG)蛋白结合的能力，以识别结合的小鼠抗体。为证实IL-17RC融合蛋白的IL-17RC部分的特异性，就与相同的鼠类Fc区域(mG2a)、EE序列、HIS序列或FLAG序列融合的非相关蛋白，对初始测定中呈阳性的上清液进行评估。这些上清液中与IL-17RC-融合蛋白结合但是不与含有muFc或其他蛋白的非相关融合蛋白序列结合的抗体被认为是特异性针对IL-17RC的抗体。对于第二种测定，通过ELISA对所有杂交瘤上清液中的抗体都进行测定，评估它们抑制生物素化人类IL-17或生物素化人类IL-17F与结合在板上的IL-17RC-muFc或IL-17RC-融合蛋白结合的能力。
继续检测所有上清液——无论它们在ELISA测定中是否能抑制IL-17或IL-17F与IL-17RC的结合——以测试它们抑制IL-17或IL-17F与IL-17RC转染的Baf3细胞或BHK细胞或正常人类支气管上皮细胞的结合能力，所述上清液中含有特异性针对IL-17RC的抗体。继续通过FACS分析评估所有在IL-17和/或IL-17F抑制测定中呈中和阳性的上清液，以评估它们对IL-17RC转染的Baf3细胞或BHK细胞以及对未转染的Baf3细胞或BHK细胞的染色能力。设计这一分析的目的是证实对IL-17或IL-17F与IL-17RC的结合的抑制作用确实是由特异性结合IL-17RC受体的抗体产生的。此外，由于FACS分析中使用抗IgG抗体作为二抗，因此特异性的FACS阳性结果表明该中和抗体很可能属于IgG类抗体。通过上述手段识别了一个原始孔(master well)，该孔在板结合ELISA测定中可结合IL-17RC、在基于ELISA的抑制测定中可抑制IL-17或IL-17F与IL-17RC的结合、可分别阻断IL-17和IL-17F与IL-17RC转染Baf3细胞或BHK细胞的相互作用，并且在使用抗小鼠IgG二抗的IL-17RC转染的Baf3或BHK细胞染色测定中呈强阳性。
第三种分析中使用了表达IL-17RC并可响应于IL-17F处理而被诱导分泌IL-8或IL-6的原代人类支气管上皮细胞。测定了特异性单克隆抗体抑制IL-17或IL-17F刺激这些细胞产生IL-8或IL-6的能力。如本文所述地测定了对IL-17或IL-17F应答而产生的IL-8和IL-6。
或者，可以使用单克隆抗体；抗IL-17RC介导的对IL-17或IL-17F诱导NIH3T3细胞或其他含有IL-17RC的细胞产生萤光素酶的抑制作用测定，来代替上述生物活性中和测定的一种或与上述生物活性中和测定的一种一起使用。在NIH 3T3细胞中的NF-κB介导的萤光素酶测定在本文中也有所描述。
C)产生抗IL-17RC特异性抗体的杂交瘤细胞的克隆
使用标准的低密度稀释(通常少于1细胞/孔)方法来克隆产生特异性抗IL-17RC mAb的杂交瘤细胞系，所述特异性抗IL-17RC mAb可交叉中和IL-17和IL-17F与适当转染的BaF3细胞或BHK细胞的结合。在铺板后约5-7天，通过ELISA筛选克隆，例如可以利用结合有人类IL-17RC-muFc的板，然后再如上所述地通过ELISA对含有muFc的非相关融合蛋白进行阳性孔再测试。筛选其上清液能结合IL-17RC-muFc但是不结合含有muFc的非相关融合蛋白的克隆，并通过重复进行中和测定以及FACS分析进一步确认特异性抗体活性。将所有筛选出的IL-17RC抗体阳性克隆至少克隆两次以确保其品系纯度(clonality)，并评估抗体产生的稳定性。继续如上所述地进行几轮克隆和筛选，直至优选地至少95％的所得克隆都能够中和抗IL-17RC抗体的生产。
D)被抗IL-17RC mAb识别的分子的生物化学表征
通过标准的免疫沉淀技术以及SDS-PAGE分析或蛋白质印迹方法，以生物化学手段确认被推定的抗IL-17RC mAb识别的靶分子IL-17RC确实是IL-17RC，在上述分析中均使用了来自于IL-17RC转染的和未转染的Baf3细胞或BHK细胞的可溶性膜制品。此外，使用表达IL-17RC的未转染细胞系的可溶性膜制品，以显示mAb可识别天然受体链以及转染的细胞。或者，测试mAb与可溶性IL-17RC-muFc蛋白进行特异性免疫沉淀或进行蛋白质印迹的能力。
实施例19
使用经人类IL-17RC转染的P815细胞注射小鼠，并使用来源于该小鼠的血清中和人类IL-17RC
使用基于细胞的中和测定，将来自经人类IL-17RC转染的活P815细胞(实施例17)注射的小鼠的血清进行系列稀释，稀释后的浓度为1％、0.5％、0.25％、0.13％、0.06％、0.03％、0.02％和0％。将测定板在37℃、5％CO2条件下培养4天，然后以20μl/孔加入Alamar Blue(Accumed，Chicago，IL)试剂。将测定板再在37℃、5％CO2条件下培养16小时。结果显示，来自四只动物的血清可通过人类IL-17RC中和人类IL-17和人类IL-17F的信号传导。
上述的结果提供了进一步的证据证明，例如通过本发明的抗IL-17RC中和性单克隆抗体，通过结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17或IL-17F活性(单独地或共同地)，可以有效地阻断IL-17RC，这样可有利地降低体内IL-17和IL-17F的作用(单独地或共同地)，并可以减轻由IL-17和/或IL-17F诱导的炎症，例如，在例如下述的疾病中观察到的炎症：银屑病、IBD、结肠炎、慢性阻塞性肺病、囊性纤维化病，或者其他由IL-17和/或IL-17F诱导的炎性疾病，包括IBD、关节炎、哮喘、银屑病关节炎、结肠炎、炎性皮肤病和特应性皮炎。
实施例20
抗人类IL-17RC单克隆抗体的药物代谢动力学
将待测的单克隆抗体-抗人类IL-17RC mAb分装为例如3×3mL的等分试样，浓度为大约1mg/mL(通过280nM处的UV吸收测定)并储存于-80℃直至使用。载体为1×PBS(50mM NaPO4、109mM NaCl)，pH 7.3。在用前将mAb在室温下融化，并将试样1和2分别用于100μg的IV和SC剂量组。将试样3的一半用1XPBS以1∶2稀释以用于50μg的SC剂量组，将试样3的另一半用1XPBS以1∶10稀释以用于10μg的SC剂量组。雌性SCID小鼠(n＝96)获自Charles River Labs。在收到动物后确认其健康状况，并分组饲养(每笼中3只动物)。开始研究时，小鼠达到12周龄，平均体重为大约22g。
A)给药方案
将雌性SCID小鼠随机分为四个剂量组(每剂量组n＝24)(表8)。第1组通过在尾静脉IV注射约93μl给予抗人类IL-17RC mAb，第2、3和4组通过在颈背SC注射约93μl给予抗人类IL-17RC mAb。
B)样本采集
在采血前将小鼠用氟烷或异氟烷充分麻醉。在各时间点(除168小时的时间点之外)通过心脏穿刺采集血样，在168小时的时间点通过眼部放血采血(同一只动物在504小时的时间点通过心脏穿刺再次放血)。将血样收集于血清分离管中并放置15分钟使其凝结。然后将样本以14000rpm离心3分钟。在离心后，将样本分为125-150μL的等份分装在标记好的eppendorf管中，并立即储存于-80℃直至分析时。
表8
  组编号  剂量(ROA) 动物  PK时间点  1  100μg(IV) 每时间点3只小鼠^＊  0.25、1、4、8、24、72、  168、336和504小时  2  100μg(SC) 每时间点3只小鼠^＊  0.25、1、4、8、24、72、  168、336和504小时  3  50μg(SC) 每时间点3只小鼠^＊  0.25、1、4、8、24、72、  168、336和504小时  4  10μg(SC) 每时间点3只小鼠^＊  0.25、1、4、8、24、72、  168、336和504小时
^＊在168小时和504小时的时间点使用相同的动物。
C)通过ELISA对血清中抗人类IL-17RC mAb的浓度进行定量
在药物代谢动力学研究中使用酶联免疫吸附测定(ELISA)，以定量分析来自给予过抗IL-17RC mAb的动物的小鼠血清样本。这一测定的设计利用了市售的二抗和TMB比色检测。对用于标准曲线的稀释度进行了改变，以改进标准曲线的线性部分的清晰度。使用浓度范围为100ng/mL至0.231ng/mL的二倍稀释标准曲线，可以对小鼠血清样本进行定量测定。将QC样本用10％的SCID小鼠血清稀释100倍、1000倍和10000倍，并根据标准曲线进行回复计算。
D)药物代谢动力学分析
将血清浓度对时间的数据下载至WinNonlin Professional 4.0软件(Pharsight，Inc.；Cary，NC)中以进行药物代谢动力学分析。使用无房室分析，基于每一时间点的平均数据确定药物代谢动力学参数。
实施例21
用抗人类IL-17RC单克隆抗体中和IL-17A和IL-17F的活性
使用基于细胞的中和测定，将纯化的小鼠抗人类IL-17RC单克隆抗体进行连续稀释后加入，例如稀释后的浓度为10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml、1.25Rg/ml、625ng/ml、313ng/ml、56ng/ml和78ng/ml。将测定板在37℃、5％CO2条件下培养4天，然后以20μl/孔加入Alamar Blue(Accumed，Chicago，IL)试剂。将测定板再在37℃、5％CO2条件下培养16小时。这一测定的结果可以证明，纯化的抗人类IL-17RC单克隆抗体可通过人类IL-17RC中和人类IL-17和人类IL-17F的信号传导。对于高效抗体而言，在以约10μg/ml的浓度使用时，抗体可以完全中和由人类IL-17或人类IL-17F诱导的增殖，而且在较低浓度时增殖的抑制以剂量依赖性方式下降。以上述浓度对同种型匹配的阴性对照小鼠mAb进行了测试，如预期的一样没有产生对任一种细胞因子诱导的增殖的抑制。上述结果可以进一步证实，针对IL-17RC的单克隆抗体在低浓度时就确实可以拮抗促炎性配体IL-17和IL-17F的活性。
实施例22
IL-17A诱导IFN-γ和TNF-α在人类外周血单核细胞中水平的升高
通过聚蔗糖密度梯度离心纯化人类外周血单核细胞(PBMC)，并在37℃下将它们单纯用培养基培养、或与50ng/ml抗人类CD3抗体一起培养或与50ng/ml抗人类CD3抗体加上1μg/ml抗人类CD28抗体的组合物一起培养。建立了用于上述每种培养条件的复制培养物并且在培养物中加入细胞因子、加入25ng/ml人类IL-17A或加入25ng/ml人类IL-17F的条件。在培养24小时后，收集每种培养物的上清液，并使用B-D Bioscience’s人类Th1/Th2细胞计数微球阵列(CBA)测定细胞因子含量。我们发现培养物可被抗CD3抗体或抗CD3抗体+抗CD28抗体刺激，并且添加IL-17A的培养物与不加入细胞因子或加入IL-17F的培养物相比，IFN-γ和TNF-α的水平显著提高(每种提高3-5倍)。未加入抗CD3抗体刺激的培养物没有显示出细胞因子水平的明显改变。此外，使用CBA测定发现，加入IL-17A并未诱导其他细胞因子(包括IL-2、IL-4、IL-5和IL-10)水平明显改变。上述结果表明IL-17A而非IL-17F能够增加抗CD3抗体或抗CD3抗体+抗CD28抗体刺激的PBMC培养物中IFN-γ和TNF-α的产生。
实施例23鼠类代用分子mIL-17RA-Fc在小鼠胶原诱导的关节炎(CIA)模型中降低疾病的发病率并减缓疾病进程
A)小鼠胶原诱导的关节炎(CIA)模型
关节炎的CIA模型是一种用于评价药物(例如本文所述的IL-17RC和IL-17RA/RC蛋白)对治疗人类关节炎的潜在疗效的合适和公知的模型。在CIA模型中，发现与未患关节炎的小鼠其淋巴结核足爪内的水平相比，关节炎小鼠的受影响腘淋巴结和足爪内的鼠类IL-17A和IL-17F的mRNA水平显著升高(升高了10-20倍；p＜0.001)，这进一步说明这一模型可用作IL-17A和IL-17F有影响的疾病模型。由于mIL-17RA-Fc能够中和鼠类IL-17A和IL-17F，这与人类IL-17RC或IL-17RA/RC能够结合人类IL-17A和IL-17F的特征相类似，因此mIL-17RA-Fc蛋白是本文所述的IL-17RC和IL-17RA/RC蛋白的合适的代用物。
在这些研究中使用八至十周龄的雄性DBA/1J小鼠(Jackson Labs，每只约25-30克)。在第-21天，在动物尾部皮内注射100μl用弗氏完全佐剂配制的1mg/ml鸡II型胶原(由Chondrex，Redmond，WA生产)，三周后(第0天)再次进行相同的注射，所不同的是这一次使用弗氏不完全佐剂配制。在第二次胶原注射后动物开始表现出关节炎症状，大多数动物在1-2周内发生炎症。每只足爪的疾病的程度按下述方式评估：使用测径器测量足爪厚度，并对每只足爪进行临床评分(0-3)：0＝正常、0.5＝足尖发炎、1＝轻度足爪炎症、2＝中度足爪炎症、3＝重度足爪炎症，详见下文。
B)监测疾病
这一模型中疾病的发病率通常为95-100％，也就是说在使用40只动物的研究中，通常有0-2只动物没有反应(通过6周的观察后确定)。注意到在炎症开始时，通常会出现短期程度各异的低等级足爪炎症或足尖炎症的现象。因此，在发生明显的持续的足爪肿胀之前，并不认为动物确实具有疾病。
每天对所有动物进行观察，并通过对每只足爪进行定性临床评分来评估它们足爪的疾病状态。每天根据其临床疾病状态对每只动物的4只足爪进行评分。为确定临床评分，可将足爪分为3个区域：足尖、足爪本身(前足(manus)或后足(pes))和腕关节或踝关节。观察相对于上述区域的炎症范围和严重程度，包括：观察每只足尖的肿胀；趾甲撕裂或足尖发红；注意任一足爪中水肿或发红的任何表现；注意肌腱或骨的良好解剖学分界的任何缺失；评估腕关节或踝关节的任何水肿或发红；以及注意炎症是否向上延伸到附近的腿部。1、2或3的足爪评分首先是基于严重程度的总体印象，其次是基于炎症涉及了多少区域。临床评分的标准示于下文。
C)临床评分
0＝正常
0.5＝炎症涉及一个或多个足尖，但是只有足尖发炎
1＝涉及足爪(1个区域)的轻度炎症，并可能包括一个或多个足尖
2＝足爪中度炎症，并可包括一部分足尖和/或腕/踝关节(2个区域)
3＝足爪、腕/踝关节和部分或全部足尖重度炎症(3个区域)
治疗：当足爪炎症的定性评分为1分或更高时，就被确定确实患有疾病。一旦确认患有疾病，则记录当天的日期并将其指定为该动物“确实患有疾病”的第一天，同时开始治疗。使用PBS或不同剂量的mIL-17RA-Fc(150μg；75μg；25μg或10μg)治疗小鼠，将所述mIL-17RA-Fc用PBS稀释至所需浓度并通过i.p.给药，每两天给药一次，共给药5次。
在实验全程中采集血液以监测抗胶原抗体的血清水平以及免疫球蛋白和细胞因子的血清水平。在最后一次(第5次)治疗后的48小时(此时约为疾病发病后第11天)处死动物。采集血液以取得血清，并将所有的足爪收集到10％NBF用于组织学研究。收集血清并冻存于-80℃用于免疫球蛋白和细胞因子测定。经mIL-17RA-Fc治疗的小鼠各组的平均足爪评分示于下表9。
表9.经mIL-17RA-Fc治疗的CIA模型小鼠各组的平均足爪评分
  治疗  治疗第4天  治疗第10天  PBS  1.59+0.15  2.13+0.20  10μg mIL-17RA-Fc  0.89+0.16^＊  1.49+0.14^＊  20μg mIL-17RA-Fc  0.95+0.19^＊  1.35+0.24^＊  75μg mIL-17RA-Fc  0.86+0.13^＊  1.18+0.12^＊  150μg mIL-17RA-Fc  0.64+0.17^＊  0.83+0.2^＊
注：第1天为治疗开始的第一天；每两天通过i.p.注射给予治疗。数据表示为平均值+SEM。
^＊与PBS治疗的组的平均足爪评分有显著性差异(p＜0.05)。
经过mIL-17RA-Fc治疗的小鼠与用PBS治疗的小鼠相比，在临床评分的严重程度上存在剂量依赖性的显著下降。使用10μg mIL-17RAFc治疗的小鼠表现出显著性最低的疗效(即在10天的治疗中仅有3只小鼠表现出显著疗效)。当使用重复性量度ANOVA进行分析发现，使用10和25μg mIL-17RAFc治疗的小鼠与PBS治疗组相比，随时间的趋势有显著差异(p＜0.05)；使用75或150μgmIL-17RAFc治疗的小鼠与PBS治疗组相比，随时间的趋势有极显著的差异(p＜0.001)。使用mIL-17RA-Fc治疗的小鼠还表现出剂量依赖性的患病足爪数量的减少，患病动物与未患病的预取血(prebled)动物相比较，在试验结束时测量的所有血清细胞因子(IL-1β、-6、-10、-12、-15、17、IP-10、GM-CSF、TNF-α、MIP-1α、MCP、KC和RANTES)的血清水平均升高。使用mIL-17RA-Fc治疗后，细胞因子IL-1β、-6、-10、-15和MIP-1α的血清水平比PBS治疗组低。在使用150μg mIL-17RA-Fc治疗的动物中观察到上述降低程度最大也最显著。在试验结束时测量发现mIL-17RA-Fc的血清水平呈剂量依赖性的升高。组织学分析证实，在关节炎症和关节损害方面也表现出剂量依赖性的降低，使用75μgmIL-17RA-Fc治疗的小鼠组表现出显著性降低，p＜0.01；使用150μgmIL-17RA-Fc治疗的小鼠组表现出最大的疗效(p＜0.001)。
通过对血清进行ELISA分析发现，所有患病的动物的抗胶原抗体的水平均比预取血的动物高。在各治疗组之间未发现显著性差异。
总而言之，上述结果表明，本文所述的人类IL-17RC和IL-17RA/RC蛋白的鼠类代用物(例如mIL-17RA-Fc)能够缓解与这一合适的关节炎模型相关的炎症以及降低疾病发病率并缓解疾病进程，因此表明人类IL-17RC和IL-17RA/RC蛋白具有治疗人类关节炎的效力。
实施例24
IL-17RC在表达ap1/nfkb转录因子的鼠类测定细胞系Nih3t3/kz142.8中的稳定过表达
使用含有人类IL-17RCx1(SEQ ID NO：2)和甲氨喋呤抗性基因(二氢叶酸还原酶，DHFR)的表达载体转染鼠类nih3t3/kz142.8测定细胞系。使用市售的试剂盒(Mirus，Madison，WI.Cat.#MIR218)并根据厂商的说明进行上述转染。将细胞置于添加有1μM mtx的生长培养基中培养，以针对含有人类IL-17RCx1转基因的表达载体进行筛选。在筛选后得到人类IL-17RCx1转染混合物，并将其命名为nih3t3/kz142.8/hcytor14x1。
A)使用nih3t3/kz142.8测定细胞系进行萤光素酶测定
由于nih3t3/kz142.8具有稳定的kz142报告物，因此无需使用腺病毒感染来加入这一报告物。这样就简化了萤光素酶的测定步骤，具体的测定步骤如下：
1.细胞铺板
将nih3t3/kz142.8细胞以5000细胞/孔的密度铺于细胞培养物包被的白色固体96孔板上(Cat.#3917.Costar)，使用含有谷氨酰胺和添加了丙酮酸盐的DMEM/10％FBS铺板，在37℃、5％CO2的条件下培养过夜。在第二天，移去铺板培养基，更换为含有谷氨酰胺和添加了丙酮酸盐的DMEM/1％FBS培养基，并在37℃、5％CO2的条件下培养过夜。
2.萤光素酶测定，以测量IL-17A和F对稳定的kz142报告物的激活
在用DMEM/1％FBS培养基培养过夜后，用无血清培养基(添加有0.28％BSA)稀释人类IL-17A和IL-17F配体。在加入配体稀释液后将细胞在37℃和5％CO2条件下培养4小时，然后移去培养基并使细胞裂解15分钟，使用萤光素酶测定系统和试剂(Cat.#e1531 Promega.Madison，WI.)和微量板发光计测量平均荧光强度(MFI)。检测浓度范围为0.1-1000ng/ml的两种配体的活性。nih3t3/kz142.8/hcytor14x1转染混合物表现出的对于鼠类IL-17A配体的活性与母细胞系相似(实施例14)。然而，cytor14x1转染体混合物表现出增高的对于人类IL-17A和F处理的应答性，甚至即使在上述配体浓度低至20飞克时也有上述作用。mIL-17A的信号传导与母细胞系(实施例14)相似这一事实表明，表达人类IL-17RC的细胞并没有常见的非特异性问题，而且鼠类IL-17A很可能是通过内源性鼠类nih3t3细胞的IL-17R或IL-17RC受体进行信号传导的。因此，人类IL-17A和IL-17F在如此低的配体浓度下导致MFI提高的这一事实可能表明，细胞对于那些配体具有特异性的高应答性，这是通过过表达的人类IL-17RC受体介导的。
这一结果具有重要的临床和生物学方面的意义和应用。例如，生理环境可能导致IL-17RC受体局部上调，而这会使得该区域对于IL-17A和IL-17F有高应答性，从而导致在配体浓度非常低时产生生物激活，该配体浓度比没有IL-17RC过表达时所推测的配体浓度低得多。因此，仅需要极低的可溶性受体水平就足以拮抗上述假设的较低的配体浓度，这种极低的可溶性受体水平比本领域技术人员以前认为的或公认的水平要低得多。
实施例25
IL-17F和IL-17A活性的拮抗剂降低炎性肠病(IBD)模型的疾病发病率并减缓疾病进程
这一模型被设计为显示来自患有IBD的患者的培养的肠组织所产生的炎性介质的水平要高于与来自健康对照者的组织。这种升高的炎性介质(包括但不限于IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17A和F、IL-18、IL-23、TNF-α、IFN-γ、MIP家族成员、MCP-1、G-和GM-CSF等等)水平通过它们激活炎性途径和下游效应细胞的作用加重了与IBD例如克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)相关的症状和病理。上述途径和组分则可导致在体内观察到的组织和细胞损伤/破坏。因此，这一模型可模拟IBD的炎性介质升高的特征。而且，在存在上述炎性组分的条件下培养来自健康对照者或来自人类肠上皮细胞(IEC)细胞系的肠组织时，可以观察炎性途径的信号传导以及组织和细胞损伤的迹象。
可能在体内对人类IBD有效的疗法也应该能通过抑制和/或中和炎性介质的产生和/或存在而在上述的离体或IEC模型中起作用。
在该模型中，从经历肠组织活检和再切片的健康对照者或IBD患者身上，或从死后的尸体组织中采集人类肠组织并使用改进的Alexakis et al(Gut53：85-90；2004)的方法对采集的组织进行处理。在无菌条件下使用大量的PBS小心地清洁样本，然后使用完全组织培养基(加入抗生素以抑制细菌过度生长)培养组织碎片。对来自相同的组织碎片混合物的样本分别用下述物质处理：载体(PBS)；重组人类(rh)IL-17A；rhIL-17F；或rhIL-17A+rhIL-17F。此外，还对上述样本分别使用或不使用IL-17A或IL-17F的拮抗剂进行处理，所述拮抗剂为单一拮抗剂或联合拮抗剂(例如可溶性IL-17RC)。同样按照这一实验过程进行人类IEC细胞系的研究，只是使用现有的细胞储液直接进行细胞传代。在不同的培养时间点(从1小时至几天)，分别收集上清液并分析其中炎性介质(包括上述的炎性介质)的水平。来自IBD患者的样本或使用rhIL-17A和/或F处理的样本与未处理的健康对照组织样本相比，其中的炎性细胞因子和趋化因子水平升高。加入IL-17F和/或IL-17A活性拮抗剂(例如IL-17RC的可溶性受体和抗IL-17RC抗体，包括本发明的抗人类IL-17RC单克隆和中和抗体)显著降低了炎性介质的产生，因此，可预期它们能有效治疗人类IBD。
实施例26
IL-17F和IL-17A活性的拮抗剂降低多发性硬化(MS)模型的疾病发病率并减缓疾病进程
多发性硬化(MS)是一种被认为由多种因素介导的复杂的疾病，所述因素包括存在淋巴细胞和单核细胞的炎性浸润和整个CNS的脱髓鞘作用。小胶质细胞是存在于中枢神经系统(CNS)中的巨噬细胞样细胞，它在损伤或感染时被激活。小胶质细胞在各种CNS疾病包括MS中起重要作用，并可被用于研究疾病的发生、发展和治疗机制(Nagai et al.Neurobiol Dis 8：1057-1068；2001；Olson et al.JNeurosci Methods 128：33-43；2003)。因此，可以使用永生化人类小胶质细胞系和/或已有的人类星形胶质细胞系来研究炎性介质对这些细胞类型的一些作用以及它们的中和能力。炎性介质(包括但不限于IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17A和F、IL-18、IL-23、TNF-α、IFN-γ、MIP家族成员、RANTES、IP-10、MCP-1、G-和GM-CSF等等)可通过它们激活炎性途径和下游效应细胞的作用来加重与MS相关的症状和病理。
为评估IL-17A和IL-17F的促炎作用和IL-17F和/或IL-17A活性拮抗剂(例如IL-17RC的可溶性受体和抗IL-17RC抗体，包括本发明的抗人类IL-17RC单克隆和中和抗体)中和或减轻这些作用的能力，分别用下述一种物质处理培养的胶质细胞：载体；rhIL-17A；rhIL-17F；rhIL-17A+rhIL-17F。此外，还对上述培养细胞使用或不使用IL-17A或IL-17F的拮抗剂进行处理，所述拮抗剂为单一拮抗剂或联合拮抗剂(例如可溶性IL-17RC)。在不同的培养时间点(从1小时至几天)，分别收集上清液和细胞并分析其中炎性介质(包括上述的炎性介质)的水平和/或表达。存在rhIL-17A和/或IL-17F的培养物与仅用载体处理的培养物相比，炎性细胞因子和趋化因子的水平升高。加入IL-17F和/或IL-17A活性拮抗剂(例如IL-17RC的可溶性受体和抗IL-17RC抗体，包括本发明的抗人类IL-17RC单克隆和中和抗体)显著降低了炎性介质的产生和表达，因此，可预期它们能有效治疗人类MS相关的炎性症状。
实施例27
IL-17F和IL-17A活性的拮抗剂降低类风湿性关节炎(RA)和骨关节炎(OA)模型的疾病发病率并减缓疾病进程
这一模型被设计为显示来自患有RA和OA的患者的人类滑液培养物(包括滑液巨噬细胞、滑液成纤维细胞和关节软骨细胞)和外植物所产生的炎性介质的水平要高于与来自健康对照者的培养物/外植物。这种升高的炎性介质(包括但不限于制瘤素M、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17A和F、IL-18、IL-23、TNF-α、IFN-γ、IP-10、RANTES、RANKL、MIP家族成员、MCP-1、G-和GM-CSF、一氧化氮等等)水平通过它们激活炎性途径和下游效应细胞的作用加重了与RA和OA相关的症状和病理。这些途径和组分则可导致炎性浸润、软骨和基质丢失/破坏、骨丢失以及前列腺素和环氧化酶的上调。因此，这一模型可在体外或离体实验中模拟RA和OA的破坏性炎性特征。而且，在存在上述一些炎性组分(例如制瘤素M、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A和F、IL-15等等)的条件下培养来自健康对照者的外植物和滑液培养物时，可以观察炎性途径的信号传导。可能在体内对人类RA有效的疗法也应该能通过抑制和/或中和炎性介质的产生和/或存在而在上述的体外或离体模型中起作用。
在该模型中，从经历关节置换的健康对照者或RA或OA患者身上，或从死后的尸体组织中采集人类滑液外植物，并使用改进的Wooley andTetlow(Arthritis Res 2：65-70；2000)和van‘t Hof等(Rheumatology 39：1004-1008；2000)的方法对外植物进行处理。还研究了滑液成纤维细胞、滑液巨噬细胞和关节软骨细胞的培养物。对复制样本分别用下述一种物质处理：载体(PBS)；重组人类(rh)IL-17A；rhIL-17F；或rhIL-17A+rhIL-17F，还有一些样本中含有了制瘤素M、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A、IL-17F和IL-15的不同组合。此外，还对上述样本分别使用或不使用IL-17A和/或IL-17F活性的拮抗剂(例如IL-17RC的可溶性受体和抗IL-17RC抗体，包括本发明的抗人类IL-17RC单克隆和中和抗体)进行处理。在不同的培养时间点(从1小时至几天)，分别收集上清液并分析其中炎性介质(包括上述的炎性介质)的水平。来自RA或OA患者的样本或使用rhIL-17A和/或F处理(单独处理或与其他炎性细胞因子一起处理)的样本中，与未处理的健康对照外植物或未处理的细胞培养物相比，其中的炎性细胞因子和趋化因子水平升高。加入IL-17F和/或IL-17A活性拮抗剂(例如IL-17RC的可溶性受体和抗IL-17RC抗体，包括本发明的抗人类IL-17RC单克隆和中和抗体)显著降低了炎性介质的产生，因此，可预期它们能有效治疗人类RA和OA。
实施例28
IL-17A和IL-17F的功能性应答
使用人类IL-17RCx1(SEQ ID NO：I)和小鼠IL-17RCx1(SEQ ID NO：25)稳定转染NIH-3T3/KZ142细胞。如上所述，使用IL-17A、IL-17F、鼠类II-17F和合适地对照对每种细胞系进行剂量应答处理，处理7分钟和15分钟。当使用IL-17RCx1(SEQ ID NO：1)转染时，IL-17A和IL-17F对磷酸化IκB-α和p38MAPK转录因子产生剂量依赖性应答，这比对照细胞系中固有信号传导高大约30％。当使用鼠类IL-17RCx1(SEQ ID NO：25)转染时，IL-17A和IL-17F不能使信号传导增强。鼠类IL-17F不能使人类或鼠类IL-17RCx1的信号传导增强.
实施例29
鼠类疾病模型中IL-17A、IL-17F、IL-17RA和IL-17RC的表达
使用针对IL-17A、IL-17F、IL-17R和IL-17RC表达的已知技术，分析了四种疾病(哮喘、DSS结肠炎、特应性皮炎和实验性变应性脑脊髓炎)的鼠类模型。
在哮喘模型中，IL-17A和IL-17F在患病和未患病小鼠的肺、脾脏、肺引流淋巴结和肺浸润细胞中的表达均低到了不能检测的水平。发现IL-17RC信使RNA在肺中的表达比在脾脏和淋巴结中高，但该表达水平并不受疾病的调节。IL-17R在脾脏和肺引流淋巴结中的表达比在肺中高，但该表达水平也不受疾病的调节。
与哮喘模型不同，在DSS结肠炎模型中，患病小鼠的近端和远端结肠中IL-17A和IL-17F的水平均上调，但在正常小鼠中并没有这种上调。在肠系膜淋巴结中这两种细胞因子均未明显上调。此外，还发现这两种细胞因子在急性的DSS诱导结肠炎环境中上调，而在慢性的DSS诱导结肠炎中则没有上调。发现IL-17R在肠系膜淋巴结中的表达比在近端和远端结肠中的表达高，但该表达水平并不受疾病的调节。相反地，IL-17RC在近端和远端结肠组织中的表达比在肠系膜淋巴结中的表达高。IL-17RC的表达水平也不受疾病的调节。
在特应性皮炎中，不能检测到IL-17A mRNA。发现IL-17F在皮肤和皮肤引流淋巴结中表达，但是表达水平似乎并不明显受疾病的调节。IL-17R mRNA在皮肤引流淋巴结中的表达比在皮肤中高，但该表达水平并不受疾病的调节。IL-17RC在皮肤中的表达比在皮肤引流淋巴结中高，但该表达对平也不受疾病的调节。
在实验性变应性脑脊髓炎模型中，患病小鼠的脊髓中IL-17A和IL-17F的水平似乎均上调，但在健康小鼠中并没有这种上调。IL-17F在淋巴结中的表达比在脊髓中高，但是淋巴结中的表达水平并不受疾病的调节。然而，在这些组织中总体的表达水平都是非常低的。IL-17R在淋巴结组织中的表达比在脑和脊髓中高。未测试IL-17RC。
简而言之，在DSS诱导的结肠炎环境中和实验性变应性脑脊髓炎模型中，IL-17A和IL-17F的表达似乎受疾病的调节，但是在哮喘或特应性皮炎中IL-17A和IL-17F的表达并不明显受疾病的调节。IL-17R和IL-17RC的表达并不明显受疾病的调节，但是IL-17R似乎在淋巴样组织中表达较高，而IL-17RC似乎在非淋巴样组织中表达较高。
实施例30
IL-17RC是IL-17A和IL-17F二者的激活作用的介质
使用含有人类IL-17RCx1(SEQ ID NO：2)和甲氨喋呤抗性基因(二氢叶酸还原酶，DHFR)的表达载体转染鼠类nih3t3/kz142.8测定细胞系。类似地，还使用人类IL-17RA(SEQ ID NO：21)转染该细胞系。使用市售的试剂盒(Mirus，Madison，WI.Cat.#MIR218)并根据厂商的说明进行上述转染。将细胞置于添加有1μM mtx的生长培养基中培养，以针对含有表达构建体的表达载体进行筛选。在筛选后得到转染混合物，并将其命名为nih3t3/kz142.8/hcytor14X1和nih3t3/kz142.8/IL-17R。
A)使用基于nih3t3/kz142.8的细胞系进行萤光素酶测定
由于基于nih3t3/kz142.8的细胞系具有稳定的ap1/nfkb报告物(kz142)，因此无需使用腺病毒感染来加入这一报告物。这样就简化了萤光素酶的测定步骤，具体的测定步骤如下：
1.细胞铺板
将细胞以5000细胞/孔的密度铺于细胞培养物包被的白色固体96孔板上(Cat.#3917.Costar)，使用含有谷氨酰胺和添加了丙酮酸盐的DMEM/10％FBS铺板，在37℃、5％CO₂的条件下培养过夜。在第二天，移去铺板培养基，更换为含有谷氨酰胺和添加了丙酮酸盐的DMEM/1％FBS培养基，并将培养物在37℃、5％CO₂的条件下培养过夜。
2.萤光素酶测定，以测量IL-17A和F对稳定的kz142报告物的激活
在用DMEM/1％FBS培养基培养过夜后，用无血清培养基(添加有0.28％BSA)稀释人类IL-17A和IL-17F配体。在加入配体稀释液后将细胞在37℃和5％CO₂条件下培养4小时，移去培养基并使细胞裂解15分钟，使用萤光素酶测定系统和试剂(Cat.#e1531 Promega.Madison，WI.)和微量板发光计测量平均荧光强度(MFI)。检测浓度范围为0.1-100ng/ml的两种配体的活性。
下文所述的EC50为至少4次实验的平均值。nih3t3/kz142.8/hcytor14x1转染混合物表现出的对于鼠类IL-17A配体的活性与母细胞系相似，其EC50约为4ng/ml(实施例14)。hcytor14x1重组细胞系中mIL-17A的信号传导与母细胞系(实施例14)相似这一事实表明，鼠类IL-17A很可能是通过内源性鼠类nih3t3细胞的IL-17RA或IL-17RC受体进行信号传导的，而且并不通过hcytor14X1激活细胞。然而，hIL-17RCX1的转染混合物对于人类IL-17A的处理表现出更高的应答性，平均4次实验的EC50为0.41ng/ml，而母细胞系为2.8ng/ml(重组细胞系中的EC50增强6.8倍)。而且，hIL-17RCX1重组细胞系对于人类IL-17F也表现出更高的应答性，其EC50为0.61ng/ml，而母细胞系为10ng/ml(重组细胞系中的EC50增强17倍)。hIL-17RCX1细胞系中hIL-17A和F的效力增加与人类IL-17RCX1为人类IL-17A和IL-17F二者的高亲和力受体这一事实相一致。相反地，hIL-17RA重组细胞系仅对hIL-17A有高敏感性，其EC50为0.6ng/ml，而母细胞系为2.8ng/ml。hIL-17RA重组细胞系对于hIL-17F的EC50没有增强，重组细胞系的IL-17F EC50为12.4ng/ml，而母细胞系为8.9ng/ml。
这一结果很有意义，因为它特别地表明了hIL-17RCX1是hIL-17A和hIL-17F二者的激活作用的介质，而且还表明hIL-17RA仅价导hIL-17A激活的信号传导，但不介导hIL-17F激活的信号传导。
实施例31
IL-17A和IL-17F的静脉内给药
本实施例使用BALB/c小鼠测定了鼠类或人类IL-17A或IL-17F的静脉内送递在不同时间点对于全血细胞计数(CBC)和血清细胞因子/趋化因子的影响。
I.V.给予1μg的mIL-17A可导致在给药后1-2小时循环系统中的嗜中性粒细胞增加约2倍(通过CBC测定)、血清中KC和MCP-1增加约10倍(通过Luminex测定)；给予5μg的hIL-17A也观察到了对于上述趋化因子的相似的影响。在用1μg mIL-17A、5μg hII-17A或5μg hIL-17F处理后2小时的时间点，小鼠体内血单核细胞水平也有明显的增加，其中给予1μg mIL-17A时表现出的增加程度最高。I.V.给予鼠类和人类IL-17F在1小时和2小时的时间点导致血清IL-15明显增加(通过Luminex测定)，血清KC和MCP-1在上述相同的时间点有少量增加。
实施例32
静脉内给予的IL-17A和IL-17F的中和
为用i.p.给予的可溶性受体(针对鼠类配体给予mIL-17RA-Fc；针对人类配体给予可溶性人类IL-17RC)中和静脉内给予的IL-17A和IL-17F所介导的细胞因子和趋化因子的增加，通过i.p.注射给予雌性BALB/c小鼠PBS、100μgmIL-17RA-Fc或100μg可溶性人类IL-17RC，在三小时后通过尾静脉注射下列物质：PBS；2μg的mIL-17A或mIL-17F或2μg的mIL-17A+mIL-17F(对于接受mIL-17RA-Fc的小鼠)；或2μg的hIL-17A、hIL-17F或2μg的hIL-17A+hIL-17F(对于接受可溶性人类IL-17RC的小鼠)。在配体给药后1小时采集血清，分析少数血清细胞因子和趋化因子。
通过i.p.给予鼠类可溶性受体进行预处理的小鼠与用PBS+鼠类IL-17A处理的小鼠相比，由鼠类IL-17A介导的IL-17A和KC(CXCL1)的血清浓度的增加量显著下降(降低约2至2.2倍；p＜0.05)。经过i.p.注射人类IL-17RC-Fc处理的小鼠表现出由人类IL-17F介导的IL-15血清浓度的增加量的显著下降(降低约2倍；p＜0.05)；由IL-17A介导的KC浓度的增加量的显著下降(降低约30％；p＜0.05)；由人类IL-17A+IL-17F介导的KC浓度的增加量的显著下降(降低约25％；p＜0.05)；以及由人类IL-17F或IL-17A+IL-17F介导的IL-15浓度的增加量的显著下降(降低约2倍；p＜0.05)。
实施例33
可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽的基于板的蛋白结合测定
按照下述步骤进行捕获EIA：用1μg/ml的山羊抗人IgG抗体包被ELISA板，并在4℃下培养过夜。洗涤板并用200μl/孔的1％BSA在室温下封闭板1小时。洗涤，然后向板上加入可溶性受体变体(A1586F，A1587F)或IL-17RCx1(A1034F)的系列稀释液(100μg/ml直至0.10μg/ml)，在室温下培养1小时。洗涤，以10∶1(IL-17A)或6∶1(IL-17F)的比例加入生物素标记的配体，并在室温下培养1小时。洗涤，加入0.5μg/mL的链亲和素-辣根过氧化物酶，在室温下培养1小时。洗涤，加入TMB底物反应4分钟。通过加入终止溶液终止反应。(注：除非特别指明，否则上述所有试剂的体积均为50μl/孔)。阳性结果是指较高的OD值，通常应高于0.5。结果显示，在这一测定中，构建体1342(SEQ ID NO：74)不与IL-17A结合，与IL-17F微弱结合。构建体1341(SEQ ID NO：72)与IL-17A和IL-17F二者都有很强的结合。IL-17RCx1与IL-17A和IL-17F结合。
按照下述步骤进行中和EIA：用1μg/ml的可溶性受体(A1034F)包被板，并在4℃下培养过夜。洗涤板并用200μl/孔的1％BSA在室温下封闭板1小时。在封闭的同时，在另一块板上将相同体积的可溶性受体变体(A1586F，A1587F)的系列稀释液(50μg/ml直至0.05μg/ml)与生物素标记的配体以10∶1(IL-17A)或6∶1(IL-17F)的比例培养，在室温下培养1小时。洗涤封闭好的板，然后向封闭好的板上加入受体-配体复合物，在室温下培养1小时。洗涤，加入0.5μg/mL的链亲和素-辣根过氧化物酶，在室温下培养1小时。洗涤，加入TMB底物反应7分钟。通过加入终止溶液终止反应(注：除非特别指明，否则上述所有试剂的体积均为50μl/孔)。阳性结果是指较低的OD值，通常应低于0.5。结果显示，构建体1342(SEQ ID NO：74)微弱地中和IL-17A与IL-17RCx1的结合，但能很强地中和IL-17F与IL-17RCx1的结合。构建体1341(SEQ ID NO：72)微弱地中和IL-17A与IL-17RCx1的结合以及微弱地中和IL-17F与IL-17RCx1的结合。中和表明变体蛋白与生物素化配体相结合。
实施例34
FACS结合测定方法
为评估本发明的可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽与配体IL-17A和IL-17F结合的能力，应用了基于流式细胞术的竞争结合测定。在存在配体IL-17A或IL-17F的条件下培养经全长IL-17RCx4稳定转染的BHK细胞系，使用靶向结合配体的可溶性受体可以检测和相对定量检测结合在细胞表面(因此未被可溶性受体结合)的配体。对配体生物素化使得可以使用链亲和素缀合的荧光团作为二抗进行FACS检测。随着可溶性受体的滴定，细胞结合配体的减少可通过细胞的平均荧光的减少来记录。在染色培养基(HBSS+1％BSA+0.1％叠氮钠+10mM HEPES)中将1μg/ml的各种生物素化配体分别与滴定量的可溶性受体预先混合，使其终体积为100μl，在室温下培养15分钟。通过下述步骤处理经全长IL-17RCx4稳定转染的BHK细胞系以用于配体染色：用乙二胺四乙酸钠(Invitrogen cat.15040-066)重悬细胞，平衡至2×10⁵细胞/100μl，沉淀细胞并重悬于配体/可溶性受体的预混合物中。将染色的细胞在4℃下培养30分钟，用染色培养基洗涤1次，然后用1∶100的链亲和素-PE(BD Pharmingen cat.554061)进行染色。将细胞在4℃下避光培养30分钟，用染色培养基洗涤2次，并重悬于1∶1的染色培养基和Cytofix(BD Bioscience 554655)的混合物中。使用BD LSR II流式细胞仪或类似的仪器进行数据采集和分析。图5显示的是一张标准图。该图是使用Prizm软件程序产生的。Y轴的数值代表标准化的MFI值(该标准化是将仅有配体时的MFI设为100％，没有配体/没有可溶性受体的对照孔的MFI设为0％)，并由此表示配体与细胞结合的百分比。该软件可针对每条曲线计算IC50。
实施例35
生物素化人类IL-17A和IL-17F与可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽的特异性结合的抑制
使用本文所述的结合测定法来测定可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽与IL-17A和IL-17F结合的能力。如上所述地进行结合研究，只是在结合反应中增加了另外的可溶性多肽，例如SEQ ID NO：157和158。这些可溶性多肽抑制人类IL-17A和IL-17F二者与IL-17RC转染的BHK细胞的结合，其抑制程度与可溶性人类IL-17RCx1Fc融合蛋白(SEQ ID NO：64)相同。其余的可溶性多肽包括SEQ ID NO：157和158的可溶性多肽，它们都包括在下表10中。
表10^＊
  可溶性多肽  变体 IC50-IL-17A  可溶性多肽  变体 IC50-IL-17F  IL-17RA/RC  1407  7  IL-17RC  1390  9  IL-17RA/RC  1407  9  IL-17RA/RC  1454  18  IL-17RA/RC  1454  4  IL-17RA/RC  1454  31  IL-17RA/RC  1454  17  IL-17RA/RC  1454  95  IL-17RA/RC  1454  20  IL-17RA/RC  1407  33  IL-17RC  1390  12  IL-17RA/RC  1407  42  IL-17RA/RC  1341  30  IL-17RC  1210  31  IL-17RC  1210  35  IL-17RC  1210  61  IL-17RC  1210  47  IL-17RC  1210  67  IL-17RC  1210  74  IL-17RA/RC  1341  47  IL-17RC  1459  126  IL-17RC  1459  103  IL-17RC  1342  217  IL-17RC  1342  313
^＊基于细胞的竞争结合IC50(ng/μL)；构建体的排序是按照对每种配体的IC50，从最强的结合物至最弱的结合物。
实施例36
IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA可溶性多肽对IL-17A和IL-17F的结合亲和力
按照下述步骤，检测IL-17RCx1、IL-17RA和可溶性IL-17RC/IL-17RA可溶性多肽(SEQ ID NO：157和158)对IL-17A和IL-17F二者的结合亲和力：用pH5.0的乙酸钠将山羊抗人IgG-Fc特异性抗体(Jackson#109-005-008)稀释至50μg/ml，并固定在CM5Biacore芯片上。在将一系列浓度的每种配体注入以观察结合和解离之前，按照理论上的结合最大值来优化捕获受体的实验方案。测试了可溶性受体和IL-17RC/IL-17RA多肽与一系列浓度的每种配体的结合。在各轮之间通过2×30秒的注射pH 1.75的甘氨酸使表面再生。使用BiacoreEvaluation软件评估数据以确定动力学数值，并示于下表11。
表11^＊
人类IL-17RCx1对人类IL-17A的亲和力                       05-2005
ka(1/Ms)          kd(1/s)      KD(M)      Rmax(RU)      Chi²(RU²)
1.05E+06          4.90E-04     4.69E-10   9.02          0.424
1.24E+06          4.38E-04     3.52E-10   8.86          0.324
人类IL-17RCx1对人类IL-17F的亲和力                       05-2005
ka(1/Ms)          kd(1/s)      KD(M)      Rmax(RU)      Chi²(RU²)
9.91E+05          4.31E-04     4.35E-10   7.22          0.378
1.11E+06          3.84E-04     3.46E-10   7.57          0.549
可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽对人类IL-17A的亲和力           04-2006
ka(1/Ms)          kd(1/s)      KD(M)      Rmax(RU)      Chi²(RU²)
1.42E+06          6.22E-05     4.39E-11   20.5          0.460
2.61E+06          9.95E-05     3.82E-11   18.3          0.888
可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽对人类IL-17F的亲和力           04-2006
ka(1/Ms)          kd(1/s)      KD(M)      Rmax(RU)      Chi²(RU²)
1.82E+06          2.61E-04     1.43E-10   10.2          0.495
2.49E+06          3.15E-04     1.26E-10   11.2          0.544
人类IL-17RA对人类IL-17A的亲和力                         06-2006
ka(1/Ms)          kd(1/s)      KD(M)      Rmax(RU)      Chi²(RU²)
3.70E+05          8.65E-05     2.34E-10   29.5          0.249
2.89E+05          8.57E-05     2.96E-10   35.1          0.197
人类IL-17RA对人类IL-17F的亲和力                         07-2006
ka(1/Ms)          kd(1/s)      KD(M)      Rmax(RU)      Chi²(RU²)
2.09E+04          5.56E-04     2.66E-08   20.3          0.071
2.55E+04          4.40E-04     1.72E-08   9.9           0.076
^＊显示了平衡常数和反应速率常数，这些值都在机器的限度范围内。
Chi²指的是结合曲线和评估拟合曲线之间的残差的平方和。该值越接近0，则说明数据的置信度越高。显示的这些数据置信度都很高。
上述数据证实了人类IL-17A和人类IL-17F与人类IL-17RA和人类IL-17RC的结合。特别地，人类IL-17RC对人类IL-17A和人类IL-17F表现出相似的结合亲和力，解离平衡常数(KD)约为400皮摩(pM)。可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽结合人类IL-17A的亲和力(KD约为40pM)比其结合人类IL-17F的亲和力(KD约为140pM)略高。人类IL-17RA对于人类IL-17A和人类IL-17F的配体结合亲和力差异最大，它对人类IL-17A的KD约为300pM而对人类IL-17F的KD约为30纳摩(nM)，相差了100倍之多。
实施例37
重组人类IL-17RA/NIH3T3/KZ142.8和IL-17RCx4/NIH3T3/KZ142.8报告物测定细胞系的产生
使用本文所述的鼠类NIH3T3/KZ142.8报告物细胞系来产生新的测定细胞系，即人类IL-17RA(SEQ ID NO：21)或IL-17RCx4(SEQ ID NO：166)的重组体。这可通过用含有每种上述DNA的表达构建体转染上述细胞而实现。所述表达载体利用了pzmp11，它含有二氢叶酸还原酶基因。因此，使用添加有1μM甲氨喋呤的生长培养基筛选转染体以产生稳定的转染混合物。得到的测细胞系被称为hIL-17RA/NIH3T3/KZ142.8和hIL-17RCX4/NIH3T3/KZ142.8。
实施例38
可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽拮抗人类IL-17A对重组人类IL-17RA/NIH3T3/KZ142.8细胞的激活
使用下述步骤测定可溶性IL-17RC/IL-RA可溶性多肽(SEQ ID NO：157和158)对人类IL-17A激活重组hIL-17RA/NIH3T3/KZ142.8细胞的竞争效力：用于萤光素酶测定的细胞铺板和制备与本文所述的相同。在测定当天，首先对细胞给予一系列2倍剂量的可溶性受体(设三个平行样)，所述可溶性受体的体积为1倍体积，浓度为终浓度的2倍，包括上文所述可溶性多肽即IL-17RA和IL-17RC起始浓度为2μg/ml(将在加入配体后成为1μg/ml的终浓度)。然后再加入1倍体积的1ng/ml的IL-17A，这一浓度也是终浓度0.5ng/ml的2倍，在受体-配体混合在一起后就成为0.5ng/ml的终浓度。对接受了0.5ng/ml的IL-17A而未接受受体的三个平行样的系列测定激活的最大值。对只接受了既不含配体也不含可溶性受体的测试培养基的三个平行样的系列测定激活的基线值。数据分析显示，上述可溶性多肽抑制IL-17A激活上述细胞系的IC50值为7ng/ml。可溶性IL-17RA或IL-17RC即使在最高剂量(1μg/ml)时，也不能足够有效地拮抗0.5ng/ml的hIL-17A对该细胞系的激活。
实施例39
可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽拮抗人类IL-17F对重组人类IL-17RA/NIH3T3/KZ142.8细胞的激活
使用下述步骤测定可溶性IL-17RC/IL-RA可溶性多肽(SEQ ID NO：157和158)对人类IL-17F激活重组hIL-17RA/NIH3T3/KZ142.8细胞(如上所述)的竞争效力：用于萤光素酶测定的细胞铺板和制备与本文所述的相同。在测定当天，首先对细胞给予一系列2倍剂量可溶性受体(设三个平行样)，所述可溶性受体的体积为1倍体积，浓度为终浓度的2倍，包括上文所述可溶性多肽即IL-17RA和IL-17RC起始浓度为4μg/ml(将在加入配体后成为2μg/ml的终浓度)。然后再加入1倍体积的40ng/ml的IL-17F，这一浓度也是终浓度20ng/ml的2倍，在受体-配体混合在一起后就成为20ng/ml的终浓度。对接受20ng/ml的IL-17F而无未接受受体的三个平行样的系列测定激活的最大值。对接受既不含配体也不含可溶性受体的测试培养基的三个平行样的系列测定激活的基线值。数据分析显示，IL-17RC/IL-17RA可溶性多肽抑制IL-17F激活上述细胞系的IC50值为0.48μg/ml。可溶性IL-17RA或IL-17RC即使在最高剂量(2μg/ml)时，也不足以表现出对20ng/ml的IL-17F对该细胞系的激活的任何拮抗作用。
实施例40
可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽拮抗人类IL-17F对重组人类IL-17RCx4/NIH3T3/KZ142.8细胞的激活
使用下述步骤测定可溶性IL-17RC/IL-RA可溶性多肽(SEQ ID NO：157和158)对IL-17F激活重组hIL-17RCX4/NIH3T3/KZ142.8细胞(如上所述)的竞争效力：用于萤光素酶测定的细胞铺板和制备与本文所述的相同。在测定当天，首先对细胞给予5倍系列剂量的可溶性受体(设三个平行样)，所述可溶性受体的体积为1倍体积，浓度为终浓度的2倍，包括上文所述可溶性多肽即IL-17RA和IL-17RC起始浓度为4μg/ml。然后再加入1倍体积的2ng/ml的IL-17F批次A1275F，这一浓度也是终浓度1ng/ml的2倍，在受体-配体混合在一起后就成为1ng/ml的终浓度。对接受1ng/ml的IL-17F而未接受受体的三个平行样的系列测定激活的最大值。对接受既不含配体也不含可溶性受体的测试培养基的三个平行样的系列测定激活的基线值。数据分析显示，IL-17RC/IL-17RA可溶性多肽抑制IL-17F激活上述细胞系的IC50值为0.8μg/ml。可溶性IL-17RC的IC50为6μg/ml，而IL-17RA在任何剂量时都没有拮抗作用。
实施例41
可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽中和人类IL-17A和IL-17F二者诱导G-CSF、IL-6和IL-8的活性
使用人类IL-17A或使用人类IL-17F处理人类小气道上皮细胞(SAEC)，在48小时后收集上清液。对这些上清液的测定显示出G-CSF、IL-6和IL-8的剂量依赖性诱导，结果示于下表12。
表12

对于用10ng/ml人类IL-17A或50ng/ml人类IL-17F处理的SAEC，还使用了0.01-10μg/ml剂量的可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQ ID NO：157和158)进行处理(在加入到细胞之前先将配体和可溶性多肽在37℃下一起培养30分钟)，在48小时后收集上清液。如下表13所示，所述上清液中的G-CSF、IL-6和IL-8的含量下降，表明可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽能够有效地中和人类IL-17A和人类IL-17F诱导这些细胞因子的活性。应该注意的是，不能测定IL-6中和的IC50值，因为在所测试的可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽的最低剂量(0.01μg/ml)时，中和才下降到最大值的大约50％)。
表13
  可溶性IL-17RA/RC受体中和人类  IL-17A/F的活性：  IL-17RA/RC的IC50(μg/ml)  人类IL-17A(10ng/ml)诱导G-CSF  人类IL-17F(50ng/ml)诱导G-CSF  0.14  1.20  人类IL-17A(10ng/ml)诱导IL-8  人类IL-17F(50ng/ml)诱导IL-8  0.03  0.57  人类IL-17A(10ng/ml)诱导IL-6  人类IL-17F(50ng/ml)诱导IL-6  在10μg/ml时中和94％  在0.01μg/ml时中和49％  在10μg/ml时中和72％  在0.01μg/ml时中和57％
实施例42
可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽对人类多发性硬化样本的效力
多发性硬化(MS)是一种被认为由多种因素介导的复杂的疾病，所述因素包括存在淋巴细胞和单核细胞的炎性浸润和整个CNS的脱髓鞘作用。小胶质细胞是存在于中枢神经系统(CNS)中的巨噬细胞样细胞，它在损伤或感染时被激活。小胶质细胞和神经细胞都在各种CNS疾病包括MS中起重要作用，并可被用于研究疾病的发生、发展和治疗机制(Nagai et al.，Neurobiol Dis 8：1057-1068；2001；Olson et al.，J Neurosci Methods 128：33-43；2003；Giuliani et al.，JNeuroimmunol 165：83-91；2005)。因此，可以使用原代神经细胞培养物、永生化人类小胶质细胞系和/或已有的人类星形胶质细胞系来研究炎性介质对这些细胞类型的一些作用以及它们的中和能力。炎性介质(包括但不限于IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17A和F、IL-18、IL-23、TNF-α、IFN-γ、MIP家族成员、RANTES、IP-10、MCP-1、G-和GM-CSF等等)可通过它们激活炎性途径和下游效应细胞的作用来加重MS相关的症状和病理。
为评估IL-17A和IL-17F对上述细胞类型的促炎作用和本发明的可溶性多肽例如可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQ ID NO：158)中和或减轻这些作用的能力，分别用下述一种物质处理培养的神经细胞或胶质细胞：载体；rhIL-17A；rhIL-17F；rhIL-17A+rhIL-17F。此外，还对上述培养细胞分别使用或不使用本发明的可溶性多肽例如可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQ ID NO：158)进行处理。在不同系列的培养物中，在不存在外源性IL-17A或IL-17-F的条件下，将分离自人类受试者的被抗CD3抗体激活的循环系统T细胞加入至培养的神经细胞和胶质细胞中，藉此提供研究激活的T细胞对这些细胞类型的破坏作用的共培养方法。对T细胞分别使用或不使用本发明的可溶性多肽例如可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQ ID NO：158)进行处理。在不同的培养时间点(从1小时至几天)，分别收集上清液和细胞并分析其中炎性介质(包括上述的炎性介质)的水平和/或表达，还分析细胞的存活水平。用rhIL-17A和/或IL-17F处理的细胞与仅用载体处理的细胞相比，炎性细胞因子和趋化因子的水平和神经细胞的死亡率升高。加入本发明的可溶性多肽例如可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQ ID NO：158)显著降低了炎性介质的产生和表达并提高了神经细胞的存活水平。
综上所述，由于这些离体实验证实了本发明的可溶性多肽例如可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQ ID NO：158)能够减轻与人类MS的病理相关的破坏作用和炎性作用，因此可预期使用这类可溶性多肽进行治疗能够有效地减轻与人类MS相关的炎性症状、神经细胞死亡和/或脱髓鞘作用。
实施例43
可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽对人类类风湿性关节炎(“RA”)和骨关节炎(“OA”)样本的效力
这些模型被设计为显示来自患有RA和OA的患者的人类滑液培养物(包括滑液巨噬细胞、滑液成纤维细胞和关节软骨细胞)和外植物所产生的炎性介质的水平要高于与来自健康对照者的培养物/外植物，这可促进胞外基质组分(例如骨和软骨等)的降解，而这种降解正是上述疾病的标志。此外还设计了下文所述的共培养模型，以显示RA/OA滑液和/或激活的T细胞中存在的炎性介质还可能导致更严重的炎症和基质降解。
这种升高的炎性介质(包括但不限于制瘤素M、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17A和F、IL-18、IL-23、TNF-α、IFN-γ、IP-10、RANTES、RANKL、MIP家族成员、MCP-1、MMP-9、G-和GM-CSF、一氧化氮等等)水平通过它们激活炎性途径和下游效应细胞的作用加重了与RA和OA相关的症状和病理。这些途径和组分可导致炎性浸润、软骨和基质丢失/破坏、骨丢失以及基质金属蛋白酶、前列腺素和环氧化酶的上调。因此，这一模型可在体外或离体实验中模拟RA和OA的破坏性炎性特征。而且，在存在上述外源加入的炎性组分(例如制瘤素M、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A和F、IL-15等等)的条件下，或在存在来自RA患者的滑液(应含有内源性炎性组分)的条件下，培养来自健康对照者的外植物和滑液培养物时可以观察炎性和降解性途径的信号传导。可能在体内对人类RA有效的疗法也应该能通过抑制和/或中和炎性介质的产生和/或存在而在上述的体外或离体模型中起作用。
在上述模型中，从经历关节置换的健康对照者或RA或OA患者身上，或从死后的尸体组织中采集人类滑液外植物，，并使用改进的Wooley and Tetlow(Arthritis Res 2：65-70；2000)和van‘t Hof等(Rheumatology 39：1004-1008；2000)的方法对外植物进行处理。还研究了滑液成纤维细胞、滑液巨噬细胞和关节软骨细胞的培养物。对复制样本分别用下述一种物质处理：载体(PBS)；重组人类(rh)IL-17A；rhIL-17F；或rhIL-17A+rhIL-17F，还有一些样本中含有制瘤素M、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A、IL-17F和IL-15的不同组合。还使用来自健康对照者或RA或OA患者的激活的人类T细胞或滑液处理不同系列的样本。此外，还对上述所有样本分别使用或不使用本发明的可溶性多肽例如可溶性IL-17RC多肽或可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQ ID NO：158)进行处理。在不同的培养时间点(从1小时至几天)，分别收集上清液和细胞并分析其中炎性介质和软骨/骨/基质生物标记(包括上述的那些)的水平。来自RA或OA患者的样本或使用RA/OA滑液、激活的T细胞、rhIL-17A和/或rhIL-17F处理(单独处理或与其他炎性细胞因子一起处理)的样本中，与未处理的健康对照外植物或未处理的细胞培养物相比，其中的炎性细胞因子和趋化因子和软骨/骨/基质降解性生物标记的水平升高。加入本发明的可溶性多肽显著降低了炎性介质和软骨/骨/基质降解性介质的产生，因此，可预期它们能有效治疗人类RA和OA。
实施例44
通过粘膜活检培养物测定可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽对人类炎性肠病(“IBD”)样本的效力
这一模型被设计为显示来自患有IBD的患者的培养的肠组织所产生的炎性介质的水平要高于与来自健康对照者的组织。这种升高的炎性介质(包括但不限于IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17A和F、IL-18、IL-23、TNF-α、IFN-γ、MIP家族成员、MCP-1、G-和GM-CSF等等)水平通过它们激活炎性途径和下游效应细胞的作用加重了与IBD例如克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)相关的症状和病理。上述途径和组分可导致在体内观察到的组织和细胞损伤/破坏。因此，这一模型可模拟IBD的炎性介质升高的特征。而且，在存在上述炎性组分的条件下培养来自健康对照者或来自人类肠上皮细胞(IEC)细胞系的肠组织时，可以观察炎性途径的信号传导以及组织和细胞损伤的迹象。
可能在体内对人类IBD有效的疗法也应该能通过抑制和/或中和炎性介质的产生和/或存在而在上述的离体或IEC模型中起作用。
在该模型中，从经历肠组织活检和再切片的健康对照者或IBD患者身上，或从死后的尸体组织中采集人类肠组织，并使用改进的Alexakis等(Gut53：85-90，2004)的方法对组织进行处理。在无菌条件下使用大量的PBS小心地清洁样本，然后使用完全组织培养基(加入抗生素以抑制细菌过度生长)培养组织碎片。对来自相同的组织碎片混合物的样本分别用下述一种物质处理：载体(PBS)；重组人类(rh)IL-17A；rhIL-17F；或rhIL-17A+rhIL-17F。此外，还对上述样本分别使用或不使用本发明的可溶性多肽例如可溶性IL-17RC多肽或可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQ ID NO：158)进行处理。同样按照这一实验过程进行人类IEC细胞系的研究，只是使用现有的细胞储液进行细胞传代。在不同的培养时间点(从1小时至几天)，分别收集上清液并分析其中炎性介质(包括上述的炎性介质)的水平。来自IBD患者的样本或使用rhIL-17A和/或F处理的样本与未处理的健康对照组织样本相比，其中的炎性细胞因子和趋化因子水平升高。加入本发明的可溶性多肽显著降低了炎性介质的产生，因此，可预期它们能有效治疗人类IBD。
本研究的另一方面可包括对来自接受有效治疗的IBD患者、目前未接受治疗的患者或被认为是对治疗无反应的患者的活检组织中的炎性介质的产生进行比较。
实施例45
通过上皮屏障功能测定可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽对人类IBD样本的效力
维持上皮屏障的完整性是保持胃肠道健康的一个关键因素。实验证据表明，肠上皮屏障的渗漏可能会导致IBD的发生。位于肠固有层中的免疫细胞通常会通过细胞与细胞的接触或通过产生可溶性因子而与肠上皮细胞相互作用，以维持免疫监督并有助于维持上皮屏障的完整性。然而，长时间的或失调的免疫介导的炎症可能导致上皮屏障细胞完整性和功能的缺陷。设计了下述研究以测量T细胞产生的IL-17A和/或IL-17F对于上皮屏障完整性的直接影响。
在本实施例中，使肠上皮细胞系例如Caco-2细胞在半透膜上分化，并在基底外侧与来源于IBD患者或正常个体的活检组织的T细胞或单核细胞共培养。通过评估跨上皮电阻或细胞单层对染料扩散的抗性，随时间监测上皮细胞单层的完整性。在共培养物中细胞单层的跨上皮电阻的降低表明在共培养物中的T细胞或单核细胞的活性诱导了细胞单层的破坏。可以使用IL-17A和IL-17F的抑制剂，例如本发明的可溶性多肽、例如可溶性IL-17RC多肽或可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQ ID NO：158)，来测定IL-17A和IL-17F对上皮细胞单层的破坏的相对作用，并检测IL-17A和IL-17F的抑制剂是否能够有效地维持上皮屏障的完整性。如果这类分子能够防止激活的T细胞诱导的上皮细胞单层的破坏，则说明本发明的可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽可有效地用于人类IBD的治疗。
还可以使用来自IBD患者的原代上皮细胞形成的细胞单层来产生共培养系统，以测定这些细胞与来源于健康个体的上皮细胞相比是否对于IL-17A和IL-17F更加敏感。如果是这样，那么这些数据就表明抑制IL-17A和IL-17F是一种治疗IBD的适当策略。
实施例46
IL-17A和IL-17F对来自正常样本和人类IBD样本的固有层T细胞和单核细胞/巨噬细胞的效力
失调的或持续的免疫介导的炎症可能通过组织损伤或永久地偏向不适当的或延长的免疫应答的方式加重与IBD相关的症状和病理学。这一模型可以测定疾病相关的T细胞和单核细胞与IL-17A和IL-17F相接触的潜在下游后果，所述IL-17A和IL-17F可能存在于肠组织紧靠的环境性细胞因子环境中。
可能在体内对人类IBD有效的疗法也应该能通过抑制和/或中和炎性介质(包括但不限于IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17A和F、IL-18、IL-23、TNF-α、IFN-γ、MIP家族成员、MCP-1、G-和GM-CSF等等)的产生和/或存在，而在上述的离体模型中起作用。
在该模型中，通过下述步骤从活检样本中分离T细胞和单核细胞/巨噬细胞：在HBSS中小心地使用剪子仔细剪碎活检样本，用胶原酶和分散酶II处理并在摇床上于37℃培养1小时。用尼龙筛过滤细胞悬液以除去细胞碎片和细胞团，并用HBSS洗涤多次。可以使用直接细胞分选或微球消耗/富集方法分离T细胞和巨噬细胞/单核细胞。将分离的细胞与IL-17A和IL-17F一起培养。这可诱导T细胞和单核细胞/巨噬细胞产生炎性介质或使得后续的T细胞应答偏向为高促炎应答。可以对来自IBD患者和来自正常个体的细胞产生的炎性介质的类型进行比较，并可能表明在存在IL-17A和IL-17F的条件下来自IBD患者的T细胞和单核细胞/巨噬细胞会具有更强的促炎性特征。加入本发明的可溶性多肽(例如可溶性IL-17RC多肽或可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQ ID NO：158))可以中和IL-17A和IL-17F诱导的下游炎性介质的产生，这表明这类可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽可有效地治疗患有IBD的患者。
实施例47
可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽对肠易激综合征(“IBS”)的效力：CNS定向的发病机制
该模型主要研究IBS的原始CNS定向发病机制，该模型使用应激刺激诱导IBS的症状特征。新生幼崽的心理社会应激模型模拟了一些与IBS患者相关的临床特征，包括内脏痛觉过敏、腹泻和应激过敏。在幼崽出生后4-18天，每天将它们与母亲分隔180分钟可导致母方行为的改变，并显著减少舔舐/理毛行为的时间。对于新生幼崽的应激导致CNS的永久性改变，并导致应激诱导的内脏和躯体痛觉敏感性发生变化。在这些动物中结肠运动功能对于应激的应答增强，初步的数据显示有结肠通透性增加的迹象(Mayer et al.，2002)。使用本发明的可溶性多肽(例如可溶性IL-17RC多肽或可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQ IDNO：158))进行治疗，并随后对结肠运动功能、上皮通透性和对应激的应答进行分析，可以测定对这种IBS动物模型的有效性。在用上述抑制剂治疗后症状发病率的降低可表明IBS疗法的潜在有效性。
实施例48
可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽对肠易激综合征(“IBS”)的效力：应激的原始肠定向诱导物
该模型主要研究应激(即肠道炎症，感染或物理应激)的原始肠定向诱导物。动物研究表明，程度较低的炎症或免疫激活可能是肠的运动性和/或传入功能和上皮功能发生改变的基础(Mayer et al.，2002)。在该模型中，每天通过对新生动物(8-21日龄)结肠内注射芥子油产生每天的结肠刺激。芥子油是一种神经刺激物，已表明通过结肠内给予芥子油可诱导内脏痛觉过敏。这一模型模拟了IBS的关键特征，包括内脏痛觉过敏和排便习惯改变。动物还表现出腹泻或便秘，这也是IBS患者的关键特征(Mayer et al.，2002；Kimball et al.，2005)。可以送递本发明的可溶性多肽(例如可溶性IL-17RC多肽或可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQ ID NO：158))，以测定与该模型相关的症状发展的变化。在使用本发明的抑制剂治疗后，内脏痛觉过敏的发病率和程度的降低以及肠道运动性的变化可表明这些分子用于治疗IBS的潜在有效性。
实施例49
设计用于生产可溶性IL-17A和IL-17F拮抗剂的可放大规模的蛋白生产工艺
在设计主要用于开发可溶形式的IL-17RC的可放大规模的蛋白生产工艺的策略时，在识别可在条件培养基中产生高水平蛋白浓度的表达系统时遇到了许多困难。蛋白质印迹分析表明随着蛋白在细胞中逐渐累积，蛋白分泌的水平降低。在发现本发明的可溶性多肽的过程中，我们设计和制备了七十多种不同的表达构建体并测试了它们在BHK细胞、CHO细胞或HEK 293细胞中的表达。有些表达构建体在一种以上的宿主细胞系中进行了测试。所测试的可溶性IL-17RC表达盒的变体包括：
1)各种信号序列，例如：a)天然；b)otPA；c)小鼠免疫球蛋白重链可变区；d)人类生长激素；e)小鼠IL-17RA。
2)两种不同的天然存在的剪接变体(IL-17RCx1，SEQ ID NO：2；和IL-17RCx4，SEQ ID NO：166)。
3)在IL-17RC胞外结构域(ECD)和Fc部分之间增加连接物序列，例如：a)没有连接物；b)一种基于GlyGlyGlySer的9氨基酸连接物；和c)一种基于GlyGlyGlySer的20氨基酸连接物。
4)带His标签的单体形式。
5)氨基末端和羧基末端Fc融合蛋白。
6)去除N-连接的糖连接位点。
7)用Gln置换Asn的氨基酸置换。
8)IL-17RA和IL-17RC的杂合融合蛋白
所有的可溶性IL-17RC变体表达构建体都通过瞬时转染至HEK 293细胞中进行了蛋白表达的检测。使用了蛋白质印迹分析来检测分泌至条件培养基中的蛋白，并与通过采集细胞裂解物测定的细胞中保留的蛋白的量进行比较。大多数构建体表达的分泌至条件培养基中的蛋白都几乎不能用蛋白质印迹方法检出。此外，细胞裂解物样本中的信号比条件培养基样本中的信号强，这表明蛋白不能被有效地分泌。使用那些在条件培养基中产生最强信号的表达构建体来转染稳定的CHO细胞系。测量来自稳定的CHO细胞系的蛋白效价，并且如果可能还在基于细胞的竞争结合测定中分析了纯化蛋白与IL-17A和IL-17F的结合。下表显示了用最高表达的构建体转染稳定的CHO细胞系所得到的蛋白表达结果。当绝对蛋白浓度的测量值低于检测水平时，就将蛋白效价表示为＜0.5mg/mL。
下表中包括IL-17RC和IL-17RC/RA蛋白表达构建体的命名号、所含有的外显子简述、来自转染稳定的CHO细胞系的蛋白效价和与IL-17A和IL-17F的结合能力。此处未包括表14中所包括的变体的全序列。
表14
  描述  蛋白效价  (mg/L)  结合  x1剪接变体  IL-17RC外显子1-6，外  显子8-16  (变体1210)  3.0  能够阻断IL-17A和IL-17F  X4剪接变体  IL-17RC外显子1-16  ＜0.5  不能获得足够的样本  IL-17RC外显子1-6  ＜0.5  无活性  IL-17RC外显子8-13  1.6  无活性  IL-17RC外显子7-16  (变体S10)  ＜0.5  能够阻断IL-17A和IL-17F  IL-17RA外显子1-10  IL-17RC外显子8-16  (变体1407)  32.5  能够阻断IL-17A和IL-17F  IL-17RA外显子1-6  IL-17RC外显子8-16  IL-17RA外显子7-10  ＜0.5  无活性  IL-17RA外显子1-3  ＜0.5  不能获得足够的样本
  IL-17RC外显子4-16  IL-17RA外显子1  IL-17RC外显子2-16  ＜0.5不能获得足够的样本  IL-17RA外显子1-6  IL-17RC外显子8-16  (变体1454)  19能够阻断IL-17A和IL-17F
实施例50
IL-17RA/RC-Fc5的氨基末端序列的测定
蛋白表达：使用含有编码IL-17RA/RCFc5的DNA(SEQ ID NO：157，编码SEQ ID NO：158的氨基酸序列)的表达载体转染CHO DXB-11细胞。从条件化培养基的回收物中通过蛋白A亲和层析和尺寸排阻色谱纯化IL-17RA/RC-Fc5蛋白。
N-端氨基酸序列分析：使用购自Applied Biosystems公司的试剂进行标准的自动N-端多肽测序(Edman降解)。使用Model 494蛋白质测序系统(AppliedBiosystems，Inc.，Foster City，CA)进行N-端序列分析。使用SequencePro蛋白质序列分析软件2.0版(Applied Biosystems)进行数据分析。样本制备过程包括将100皮摩尔(pmol)的样本上样至预循环滤器上。
IL-17RA/RC-Fc5样本(样本编号A1672F、A1774F和A1776F)的N-端序列分析获得了起点为L33(亮氨酸)的序列。
实施例51
使用鼠类代用物分子即可溶性鼠类IL-17RA-Fc治疗噁唑酮结肠炎
对雌性C57BL/10小鼠(约20g)进行了如下所述的噁唑酮结肠炎研究。在第-5天，通过皮下注射噁唑酮(3％溶于100％乙醇)对小鼠致敏，然后，在第0天，通过直肠内给药溶于50％乙醇的1.25％噁唑酮进行药物激发。小鼠在随后的2-3天后会发生急性结肠炎。通常在第2天将它们处死并收集组织。
进行了两项独立的噁唑酮结肠炎研究，以确定可溶性鼠类(m)IL-1RA-Fc是否能够有效治疗小鼠的噁唑酮诱导的结肠炎，这一动物模型是模拟人类溃疡性结肠炎的模型。由于mIL-17RA-Fc可以中和鼠类IL-17A和IL-17F，这一特征与人类IL-17RC和IL-17RA/RC能够结合人类IL-17A和IL-17F的特征相类似，因此mIL-17RA-Fc蛋白是本文所述的IL-17RC和IL-17RA/RC蛋白的合适的代用物。
第一项研究的结果表明，使用mIL-17RA-Fc进行治疗与用PBS进行治疗相比，噁唑酮结肠炎的小鼠疾病指标评分(包括体重下降、便秘和便血)显著(p＜0.05)下降了约2倍。治疗方案为对噁唑酮结肠炎模型动物每天i.p.给药100μg，从第-6天或第-1天给药至第1天。与使用PBS进行治疗的噁唑酮结肠炎小鼠相比，使用mIL-17RA-Fc治疗的小鼠组还表现出更低的组织学评分和更轻微的结肠炎诱导的结肠变短症状。
在第二项研究中，对这一模型的小鼠每天用PBS或mIL-17RA-Fc(100μg，i.p.)治疗，治疗从第-6天持续至第1天，并使用合适的噁唑酮-载体对照(仅给予乙醇)。此外，本研究中还包括在药物激发7天后从结肠炎恢复的各组小鼠，以评估mIL-17RA-Fc对这一模型的这一阶段是否有效果。结果表明，在经过从第-6天至第1天每日给予可溶性鼠类IL-17RA-Fc1治疗后，这一模型的疾病指标评分显著(p＜0.05)下降了约3倍。在患有噁唑酮结肠炎的小鼠组中，使用mIL-17RA-Fc1治疗的小鼠与使用PBS治疗的小鼠相比，在第2天出现可见损伤的发生率降低，经mIL-17RA-Fc1治疗的小鼠的损伤发生率为37.5％，而使用PBS治疗的小鼠的损伤发生率为75％。此外，与使用PBS进行治疗的噁唑酮结肠炎小鼠相比，使用mIL-17RA-Fc治疗的小鼠组还表现出改善的组织学评分和更轻微(p＜0.05)的结肠炎诱导的结肠变短症状。在7天恢复组中，所有小鼠在此时间点都已恢复，因此没有观察到差异。在结肠培养物(在第2天从小鼠获得的结肠小块，于37℃培养24小时)中，经过噁唑酮处理的小鼠的所有评估的炎性细胞因子/趋化因子的水平均比载体(乙醇)组小鼠高。在患有噁唑酮结肠炎的小鼠中，经mIL-17RA-Fc治疗的小鼠与经PBS治疗的小鼠相比，IL-17A、IL-17F、TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-12、GM-CSF和IFN-γ在结肠中的产生量均有所下降。结肠中的IL-17A和IL-17F的浓度彼此显著相关(R＝0.93；p＜0.000001)。IL-17A和IL-17F的浓度与下列因子的水平显著相关：TNF-α(R＝0.91和0.95；p＜0.0000001)、IL-1β(R均为0.64；p＜0.01)、IFN-γ(R＝0.71和0.72；p＜0.01)和IL-6(R均为0.57；p＜0.05)。疾病指标评分与下列因子在结肠中的产生量相关：IL-17A(R＝0.70；p＜0.01)、IL-17F(R＝0.72；p＜0.01)、TNF-α(R＝0.76；p＜0.001)、IL-4(R＝0.59；p＜0.05)、IL-1β(R＝0.50；p＜0.05)和IFN-γ(R＝0.52；p＜0.05)。
总而言之，使用本文所述的人类IL-17RC和IL-17RA/RC蛋白的代用物(例如mIL-17RA-Fc)的治疗可以缓解结肠炎疾病症状，减少炎性细胞因子在结肠中的产生并改善病理学。这些结果表明使用本文所述的人类IL-17-RC或IL-17RA/RC蛋白能够有效地治疗人类IBD。
实施例52
小鼠IL-17F过表达在鼠类疾病模型中的影响
使用基本如本文所述的方法(见上文部分K)，转基因小鼠的制备)产生转基因小鼠，该转基因小鼠在造血细胞特异性启动子(EuLck启动子)的控制下过表达IL-17F基因。
IL-17F转基因小鼠的血清中IL-17A与IL-17F的比值与人类相似：使用内部开发的基于Luminex的测定手段，发现在EuLck启动子的控制下过表达鼠类IL-17F的小鼠与野生型小鼠相比IL-17F的血清水平显著升高，该转基因小鼠IL-17F的血清水平约为2ng/mL，而野生型小鼠的血清中检测不到IL-17F。在转基因小鼠血清中IL-17A的水平约为IL-17F的十分之一(约0.2ng/mL)。因此，在转基因小鼠血清中IL-17A与IL-17F的比例约为1∶10。在野生型小鼠的血清中，IL-17A仅为可检出的水平(约0.1ng/mL)。这种IL-17F的血清水平显著高于(如10倍)IL-17A的现象也通常见于患有自身免疫性疾病的人类，因此说明IL-17F转基因小鼠可用于在人类疾病(例如多发性硬化和关节炎)的小鼠模型中研究IL-17F的作用。
实验性变应性脑脊髓炎(EAE)的研究：在人类多发性硬化的小鼠模型特别是在鼠类实验性变应性脑脊髓炎(EAE)的小鼠模型中进行了两项独立的研究，以评估IL-17F过表达的影响。C57BL/6背景的EuLck IL-17F转基因小鼠作为研究动物，同窝出生的雌性C57BL/6野生型小鼠被用作对照，每只小鼠约20-22g，使用MOG35-55/Ribi(第一项研究)或MOG35-55/CFA(第二项研究)佐剂在第0天免疫各小鼠，然后在第2天通过i.v.注射百日咳毒素。每日对小鼠称重并记录其疾病临床症状(例如尾部和肢体麻痹)的评分。上述两项研究的结果都表明，IL-17F转基因小鼠与野生型小鼠相比，疾病的发病和严重程度都有显著(p＜0.05)增加。在第一项研究中，转基因小鼠的发病高峰比野生型更早，平均的疾病严重程度评分也比野生型高36％。在第二项研究中，IL-17F转基因小鼠的疾病严重程度评分比同窝出生的野生型对照小鼠高50-70％。
胶原诱导的关节炎(CLA)研究：在人类类风湿性关节炎的小鼠模型特别是在鼠类胶原诱导的关节炎(CIA)的模型中进行了两项独立的研究，以评估IL-17F过表达的影响。C57BL/6背景的EuLck IL-17F转基因小鼠作为研究动物，同窝出生的雄性C57BL/6野生型小鼠被用作对照，每只小鼠约23-28g，使用鸡II型胶原/CFA通过尾部注射免疫各小鼠，三周后再用鸡II型胶原/IFA进行免疫。每日记录小鼠的疾病临床症状(即足爪肿胀)评分。以上研究的结果均表明，IL-17F转基因小鼠与同窝出生的野生型对照小鼠相比，疾病的发病和严重程度都有显著(p＜0.05)增加(约2.5至3倍)。
实施例53
鼠类IL-17RA-Fc、人类IL-17RC-Fc和人类IL-17RA/RC-Fc的药代动力学
对于不同的可溶性IL-17受体(包括人类可溶性IL-17RC和IL-17RA/RC受体及其鼠类代用物mIL-17RA-Fc)进行了三项独立的研究。在上述研究中使用获自Charles River实验室的雌性C57BL/6小鼠。在获得动物时对其进行了健康检查，并将其分组饲养(每笼5只)。当动物达到10-12周龄，平均体重达到约20g时，开始研究。
A)剂量方案
在上述三项研究的各项研究中，将小鼠随机分为以下各指定的剂量组(每一剂量组的n＝24)，并分别通过专门的途径给药：静脉内(i.v.)、腹膜内(i.p.)或皮下(s.c.，颈背处)。对每一组的小鼠都按照上述指定的给药途径给予100μL的合适的蛋白质。
B)样本采集
在各不同时间点(从0.25小时至336小时)采集小鼠血样，在采血前，使用氟烷或异氟烷将小鼠完全麻醉。在所有的时间点均通过心脏穿刺进行采血。将血液收集在血清分离管中，静置15分钟使其凝固。然后将样本以14,000rpm离心3分钟。离心后将样本等分为125-150μL的等分试样并装于带有标签的eppendorf管中立即置于-80℃储存，直至分析之前。
C)结果
鼠类II-17RA-Fc药代动力学研究：i.v.给药的半衰期为61h；i.p.给药的半衰期为70h；s.c.给药的半衰期为69h。i.p.给药的生物利用度为100％；s.c.给药的生物利用度为67％。对于i.v.、i.p.和s.c.途径的给药，分布体积分别为6.7、8.7和10.3mL。数据采集的最晚时间点为给药后120h；在这一时间点之前mIL-17RA-Fc1的血清水平未恢复至基线水平。随后进行药代动力学研究直至336h(结果总结于下表)。
人类IL-17RC-Fc药代动力学研究：i.v.给药的半衰期为72h；i.p.给药的半衰期为64h；s.c.给药的半衰期为54h。i.p.和s.c.给药的生物利用度均为100％。对于i.v.、i.p.和s.c.途径的给药，分布体积分别为2.7、2.4和2.2mL。
人类IL-17RA/RC-Fc(变体1454)药代动力学研究：i.v.给药的半衰期为46h；i.p.给药的半衰期为49h；s.c.给药的半衰期为52h。i.p.给药的生物利用度为100％；s.c.给药的生物利用度为69％。对于i.v.、i.p.和s.c.途径的给药，分布体积分别为1.7、2.2和3.5mL。
实施例54
鼠类代用分子mIL-17RA-Fc用于治疗移植物抗宿主疾病(GVHD)的疗效
移植物抗宿主疾病(GVHD)是一种发生于干细胞或骨髓移植或输血或输入血组分之后的并发症，最常见于免疫功能受损的患者。GVHD最常发生于异体移植之后，但是有时也以较低频率发生于同系移植和自体移植之后。GVHD可发生于接受了来自如下供体的血液的有免疫活性的患者，所述供体为纯合的HLA单倍体型，而所述患者的该单倍体型是杂合的。这种病症的病因是由于移植物中含有的免疫活性供体淋巴细胞的植入，该淋巴细胞在移植后被宿主的抗原激活并导致增殖。于是这种抵抗感染的细胞就会攻击宿主体内的组织。GVHD通常分为急性和慢性，急性GVHD是指在移植后100天以内发作的疾病，慢性GVHD是在移植后100天以后发作的疾病。通常该疾病所涉及的组织包括肝脏、胃肠道和皮肤；可能发生严重的炎症。
当供体和受体的HLA抗原的匹配程度越低、供体年龄越大和患者年龄越大时，GVHD的发病率就越高。根据上述以及其他因素，估计该病的发病率为20％至70％。然而，可能仍有很多GCHD病例未被诊断出和未被报道。
急性GVHD的症状包括发疹，由于胆红素浓度升高而导致的皮肤和眼发黄，以及腹泻。急性GVHD分为1至4级，4级是最严重的。慢性GVHD可以从头发生或从急性GVHD发展而来。慢性GVHD的症状比急性GVHD的症状范围更广，并且与各种自身免疫疾病的症状相似。某些症状包括干眼症、口干、发疹、皮肤和口腔溃疡、关节挛缩(关节难以运动)、肝脏血液的检测结果异常、肺部僵硬(呼吸困难)、眼炎、吞咽困难、肌肉无力或口腔中长白膜。GVHD的其他症状包括组织损伤(包括肠道、皮肤、肝脏，在严重的病例中还涉及肺和肾)以及由于循环系统中炎性细胞因子水平升高而导致的类似败血症的症状(“细胞因子风暴”)。在一些严重的病例中，GVHD可能是致命性的。
GVHD的一线治疗包括类固醇(例如甲泼尼龙(methylprednisolone))疗法。使用类固醇和环孢菌素A治疗慢性GVHD。类固醇类药物免疫抑制的副作用包括增加了感染和继发性恶化的几率，这可能是致命的。目前使用的疗法还干扰被移植供体细胞的移植物抗肿瘤活性。鉴于上述严重的副作用，需要选择性更高的治疗药物。
预期本文所述的IL-17RC和IL-17RA/RC蛋白能够有效地治疗GVHD和/或用于移植。已报道在移植物排斥的患者和动物模型的血清和尿中IL-17A(并且最可能的是IL-17F)的水平升高。因此，使用可溶性的人类IL-17RC或IL-17RA/RC蛋白中和IL-17A和IL-17F可能能使GVHD和/或器官移植具有更好的结果。
在急性GVHD的小鼠模型中评估了人类IL-17RC和IL-17RA/RC蛋白的鼠类代用物(mIL-17RA-Fc)的效果(Durie et al.，J.Clin.Invest.94：1333-1338，1994)。处死亲代小鼠(C57BL/6；n＝12)并收集其脾脏。使用两片载玻片将混合的脾脏研碎以解离脾细胞。向脾细胞悬液中加入裂解缓冲液以除去血细胞。使用RPMI 1640(10％FBS)培养基洗涤细胞并重悬于合适量的PBS中，使细胞浓度为3×10⁸细胞/ml。将受体小鼠(C57BL/6×DBA/2F1)分为两组，分别使用PBS或mIL-17RA-Fc治疗。通过腹膜内注射(每次注射150μg)进行鼠类IL-17RA-Fc的治疗，从第-1天开始每两天注射一次，直至第15天。在第0天，将8×10⁷个来自B6小鼠的供体脾脏淋巴细胞静脉内注射至受体小鼠(C57BL/6×DBA/2F1(BDF1)；每组n＝10)体内。每周三次监测小鼠体重的变化(这是该模型中疾病恶化的最重要的指征)以及任何垂死的指征。处死体重比初始体重降低20％以上的小鼠。其他的小鼠在细胞移植后12-18天处死，并收集脾脏和血液。
针对T细胞和B细胞标志物(包括MHC I类标志物H2^b和H2^d)对脾脏染色，以观察供体/受体细胞的比例(急性GVHD脾细胞多为供体细胞)。收集血清，通过ELISA测量IgG1、IgG2a和IgE的血清水平，以及使用市售的试剂盒(LuminexCorporation，Austin，TX)测量细胞因子和趋化因子的水平。
两项独立研究的结果显示了动物模型与急性GVHD发病的相关性。在PBS对照中宿主(BDF1)脾细胞数量减少，供体(C57BL/6)的Treg细胞的数量也减少。在接受治疗的动物中，mIL-17RA-Fc的治疗使得宿主脾细胞、CD4⁺T细胞和Treg细胞的数量得以维持。治疗未阻止供体(C57BL/6)常规CD4⁺T细胞的激活或扩散。所有组的动物均具有相似数量的供体常规CD4⁺T细胞，并且GITR(糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体家族相关基因)被供体常规CD4⁺T细胞上调。在两项研究中，经过IL-17RA-Fc治疗的组体重下降不很严重，而且在两项研究中，该体重下降比PBS对照组显著(p＜0.05)降低(第二项研究，见图6)。IL-17RA-Fc治疗未阻止基于脾脏：体重比的脾肿大，但是在第二项研究中显示，与PBS处理组相比，治疗能够减少疾病引起的脾细胞数量的增加(数量方面低2倍；p＜0.01)。在第一项研究中，经过mIL-17RA-Fc治疗的小鼠与经PBS治疗的对照小鼠相比，IL-10的血清浓度显著增高(增高约2倍；p＜0.05)(IL-10被认为是一种主要的抗炎细胞因子)。在第二项研究中，经过mIL-17RA-Fc治疗的小鼠的TNF-α和IFN-γ的血清浓度显著降低。在两项研究中，使用mIL-17RA-Fc的治疗均导致宿主粒细胞的百分比显著降低(降低约2.5倍；p＜0.001)。
综上所述，本文所述的IL-17RC和IL-17RA/RC蛋白的鼠类代用物(mIL-17RA-Fc)对于GVHD的鼠类模型具有治疗效果。上述结果表明，使用本文所述的人类IL-17RC和IL-17RA/RC蛋白能够有效地治疗GVHD和移植物排斥。
实施例55
在293F细胞中表达IL-17A-CH6/IL-17F-CEE异二聚体
通过在酵母中的同源重组，在pZMP45载体中分别构建了编码IL-17A-CH6(核苷酸序列和氨基酸序列分别示于SEQ ID NO：186和187)和IL-17F-CEE(核苷酸序列和氨基酸序列分别示于SEQ ID NO：188和189)的两种表达质粒。
使用先前产生的含有IL-17A的质粒作为模板，使用正向引物zc57312以产生与pZMP45的5’重叠区域，使用反向引物zc48893以产生丝氨酸-甘氨酸连接物、6×组氨酸标签和与pZMP45的3’重叠区域，通过PCR方法生成IL-17A-CH6片段。使用先前产生的含有IL-17F的质粒作为模板，使用正向引物zc57314以产生与pZMP45的5’重叠区域，使用反向引物zc58978以产生丝氨酸-甘氨酸连接物、EE标签(EEYMPME；SEQ ID NO：190)和与pZMP45的3’重叠区域，通过PCR方法生成IL-17F-CEE片段。使用PCR SuperMix High Fidelity试剂盒(Invitrogen，Cat.#12532-016)进行pCR扩增，PCR条件如下：94℃，2min的一个循环；(94℃，30秒→55℃，30秒→68℃，45秒)×30个循环；然后保持在4℃。然后在1％琼脂糖凝胶和1×TAE中对PCR反应混合物进行电泳。切下正确条带并使用Qiagen公司的凝胶纯化试剂盒进行纯化(Qiagen，Cat.#28704)。
pZMP45质粒是一种哺乳动物表达载体，它具有的表达盒中含有CMV启动子、内含子A、用于插入编码序列的多个限制性酶切位点、otPA信号肽序列、SV40终止子、大肠杆菌复制起点、以及用于在酿酒酵母(S.cerevisiae)中筛选和复制的URA3和CEN-ARS序列。
将100μL的电感受态酿酒酵母(S.cerevisiae)细胞与10μl的上述纯化的DNA相混合，再混入100ng的经BglII酶切的pZMP4P45质粒，将上述混合物转移至0.2cm电穿孔杯中。对上述酵母-DNA的混合物进行0.75kV(5kV/cm)、∞ohms和25μF的电脉冲。向每个杯子中加入1ml的1.2M山梨醇，然后将所述酵母置于URA-DS盘中于30℃下培养。约72小时后，从一个盘的Ura+酵母转化体中取出约50μL的堆积酵母细胞，重悬于100μL裂解缓冲液(2％Triton X-100、1％SDS、100mM NaCl、10mM Tris、pH 8.0、1mM EDTA)、100μL的Qiagen微量制备试剂盒(Qiagen，Valencia，CA，产品目录号#27104)中的Qiagen P1缓冲液和20U的酵母裂解酶(Zymolyase)(Zymo Research，Orange，CA，产品目录号#1001)中。将上述混合物置于37℃培养30分钟，然后加入试剂P2并进行Qiagen微量制备试剂盒中所述的其余流程。使用40μL EB试剂洗脱DNA。
在0.2cm电穿孔杯中，使用2μL酵母DNA转化15μL的电感受态大肠杆菌细胞(DH12S，Invitrogen，Carlsbad，CA)。对细胞进行1.75kV、25μF和400ohm的电脉冲。在电穿孔之后，向杯子中加入1ml SOC(2％Bacto Tryptone(Difco，Detroit，MI)、0.5％酵母提取物(Difco)、10mM NaCl、2.5mM KCl、10mMMgCl₂、10mM MgSO₄、20mM葡萄糖)。将该溶液置于两块LB AMP板上(LB肉汤培养基(Lennox)、1.8％Bacto Agar(Difco)、100mg/L氨苄青霉素)，其中一块加入200μL转化体，另一块加入100μL转化体。
从转化体板上挑取各单菌落，通过测序识别出一个含有IL-17A-CH6的正确表达构建体的菌落和一个含有IL-17F-CEE的正确表达构建体的菌落。使用Invitrogen大量制备试剂盒(Invitrogen，Carlsbad，CA，产品目录号#457009)，根据厂商的说明书进行大规模的质粒DNA分离。
转染至293F细胞
为了测试IL-17A-CH6-IL-17F-CEE异二聚体的表达，使用Lipofectamine2000试剂盒(Invitrogen，Carlsbad，CA，产品目录号#11668-019)和OptiMEM培养基(Invitrogen，Carlsbad，CA，产品目录号#31985-070)对293F细胞进行瞬时转染，然后在12孔板上生长。由于已经测得IL-17A比IL-17F蛋白表达量要少，因此在转染中使用的DNA比例为3份IL-17A-CH6比1份IL-17F-CEE。在转染中使用2μg的质粒DNA和1×10⁶细胞。在96小时后收获培养基并准备进行蛋白质印迹测定。
使用Invitrogen公司的试剂和方法进行蛋白质印迹测定，使用抗-6×组氨酸抗体(R&D Systems，Minneapolis，MN，产品目录号#MAB050H)作为检测IL-17A-CH6的检测抗体，使用自制的小鼠mAb作为检测IL-17F-CEE的检测抗体，使用Jackson HRP-山羊抗小鼠IgG(H+L)(产品目录号#115-035-003)+BDParm.HRP-抗小鼠IgG2a(R19-15)(产品目录号#553391)作为二抗。观察到明显的表达，因此证明实现了大规模转染并由此能够获取蛋白。
实施例56
从CHO DXB11细胞培养表达产物中纯化单链人类IL-17A：IL-17F异二聚体
在WAVE设备中培养CHO DXB11细胞获得细胞培养物，并由该细胞中的单链构建体表达产生重组人类IL-17A：IL-17F异二聚体蛋白(zcyto40f2 v.2)。所述构建体含有人类IL-17A的序列和IL-17F的序列(构建体1789；C-His标签)，其中所述IL-17A的序列的N端和IL-17F的序列的C端通过一个(G₄S)₃连接物相连接。在C端加上一个His标签以便于有效地捕获产物。收获大约10L的条件化培养基，使用0.2μm滤器过滤除菌。在搅拌条件下加入乙酸以将培养基调节至pH5.0。在此pH值下会出现明显的沉淀过程，使用0.8至0.2μm的两相滤器(PallCorporation)对上述调节好pH的培养基再次进行过滤。
阳离子交换色谱
然后将上述调节好的培养基以10ml/min的速度上样至配备有AKTATM探索者色谱平台(GE Healthcare)的预平衡的阳离子交换柱(16mL柱床体积；2cm直径(SP Fast Flow resin，GE Healthcare))上。平衡缓冲液为pH 5.0，0.02M乙酸和0.1M NaCl。当上样完成时，使用20倍柱体积的平衡缓冲液对柱子进行洗涤，由此获得280nm处的UV的稳定基线。
然后以20ml/分钟的流速洗脱结合的蛋白，洗脱的级分按5ml/份收集，洗脱液共20倍柱体积，其梯度为从平衡缓冲液至洗脱缓冲液：0.02M乙酸、1.0MNaCl、pH 5.0。通过SDS-PAGE和考马斯染色和蛋白质印迹方法对级分进行分析。在梯度洗脱中得到两个洗脱峰，其中第一个峰是主要的洗脱峰，在该峰中观察到一条38kDa的明显条带。主峰转运结构域包括#20-48级分在内表现出抗His标签染色，将在蛋白质印迹分析中可被染色的全部宽度均混合在一起，以用于下一步研究。
IMAC色谱(金属螯合亲和步骤)
将5mL HisTrap IMAC柱(GE Healthcare)用20倍柱体积的含0.5M NaCl、50mM磷酸的钠盐、25mM咪唑、pH 7.5的缓冲液进行平衡。向上述144ml的阳离子交换色谱的混合物中加入足量的固体咪唑，以使得其中咪唑的浓度达到25mM。再加入0.5M磷酸二氢钠和0.5M磷酸氢二钠的等摩尔混合液，以使得其中磷酸根缓冲液的浓度达到20mM，此时再用2N NaOH将溶液的pH调至7.5。
将调节好的阳离子交换色谱混合物准备上样至HisTrap IMAC柱。上样流速为4ml/min。当上样完成时，使用40倍柱体积的平衡缓冲液洗涤IMAC柱，然后用含0.4M NaCl、400mM咪唑、pH 7.5的缓冲液进行洗脱步骤。在更换为洗脱缓冲液后不久，就从柱上洗脱下一个明显的峰。
混合上述物质并浓缩至3ml以用于最终的尺寸排阻色谱步骤中的注入。
尺寸排阻色谱步骤
将来自IMAC步骤的浓缩物注入预平衡的Superdex 200(GEHealthcare；16/60；120ml)SEC柱上，流速为1.5ml/min，流动相为35mM磷酸钠缓冲液、109mM NaCl、pH 7.3。级分收集为1.5ml/份。在较早的时候会出现一些水平较低的洗脱物质，然后在0.7倍柱体积的时候出现一个非常对称的洗脱峰。通过SDS-PAGE和考马斯染色分析该峰中的物质以及在该峰之前紧邻出现的物质。将级分混合用于制备最高纯度的产物，并排除一些含有产物和共洗脱的不想要的污染物的级分。
纯化的单链人类IL-17A：IL-17F异二聚体的分析
对重组的单链人类IL-7A：IL-17F异二聚体进行如下分析：先是SDS-PAGE(10％BisTris，Invitrogen，Carlsbad，CA)以及用0.1％考马斯R250对蛋白进行染色，然后转移至硝酸纤维素膜上，使用抗-His-HRP进行免疫染色。使用Invitrogen Novex’s Xcell II微池对纯化蛋白进行电泳，然后在室温下，在含有25mM Tris碱、200mM甘氨酸和20％甲醇的缓冲液中，以600mA电转移45分钟，将蛋白转移至硝酸纤维素膜(0.2mm；Invitrogen，Carlsbad，CA)上。然后使用含10％脱脂奶粉、50mM Tris、150mM NaCl、5mM EDTA、0.05％Igepal(TBS)的缓冲液在室温下封闭滤膜15分钟。快速地洗涤硝酸纤维素膜，加入偶联有HRP的特异性抗体(1∶2500)。在温和振荡的条件下在4℃培养蛋白印迹物过夜。培养之后，将印迹物在TBS中洗涤三次，每次15分钟，然后在水中快速洗涤。然后使用市售的化学发光底物试剂(Roche LumiLight)使印迹物显色，并使用Lumi-Imager’s Lumi Analyst 3.0软件(Boehringer MannheimGmbH，Germany)捕获信号。非还原性考马斯染色分析发现二聚体产物以双条带形式存在，其中下方的带为主要条带。
对还原性和非还原性产物进行的SDS-PAGE和考马斯染色分析发现，在二聚体多肽链的表观电泳迁移度的位置上出现了强度不成比例的双条带。双条带中上方的条带为观察到的主要条带。还原性SDS-PAGE和蛋白质印迹结果显示，较低分子量种类的量很少，几乎可被忽略。取100pmol的产物进行了N端序列分析。结果表明单次N端回收的可重复性产量为57.9pmol，N端的残基为G24，这是人类IL-17A序列的起点。氨基酸组成分析的结果验证了上述理论组成。分析性尺寸排阻色谱表明产物的纯度大于99％。
实施例57
通过表面等离子共振(Biacore)测量IL-17RA/RC-Fc5与IL-17A/F异二聚体的结合亲和力
进行本研究的目的是评估IL-17RA/RC-Fc5(变体1454)与IL-17A/F双链异二聚体的结合亲和力。
亲和力测定
通过表面等离子共振，测量了IL-17RA/RC-Fc5与IL-17A/F异二聚体抗原的相互作用的动力学速度常数、平衡结合常数和平衡解离常数。结合速度常数(k_a(M^-1s^-1))是反映抗原-受体复合物形成速度的数值。解离速度常数(k_d(s^-1))是反映该复合物稳定性的数值。平衡结合亲和力通常被表示为平衡解离常数(K_D(M))或平衡结合常数(K_A(M¹))。K_D是用解离速度常数除以结合速度常数(k_d/k_a)得到的，而K_A是用结合速度常数除以解离速度常数(k_a/k_d)得到的。具有相似的K_D(或相似的K_A)的拮抗剂可能具有大不相同的结合速度常数和解离速度常数。因此，测量k_a和k_d，以及K_A或K_D，可以有助于唯一地描述受体-抗原相互作用的亲和力。
材料和方法
进行下述试验以测量纯化的IL-17RA/RC-Fc5受体与重组人类IL-17A/F异二聚体的结合亲和力。在Biacore T100^TM系统(GE Healthcare，Piscataway，NJ)上进行结合动力学和亲和力研究。使用Biacore T100^TM控制软件，v 1.1.1编程以便对Biaeore T100^TM系统进行操作。由于IL-17RA/RC-Fc5受体含有人类Fc结构域，因此在研究中使用山羊抗人IgG Fc-γ(Jackson ImmunoResearch，WestGrove，PA)作为捕获抗体。使用0.4M EDC[N-乙基-N’-(3-二乙基氨基-丙基)碳二亚胺]和0.1M NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)的混合物，将捕获抗体共价固定化在CM4传感器芯片上，使其密度达到约4000RU。在固定化抗体之后，使用1M乙醇胺封闭流通池上的剩余活性位点。CM4芯片上的一个流通池捕获的IL-17RA/RC-Fc5受体的近似强度为90-100RU。以10μL/分钟的流速进行受体与固定化表面的捕获过程。Biacore设备能够测量传感器芯片表面上结合的蛋白的质量，并由此确定每一分析循环中捕获到的可溶性受体的量。
为了进行IL-17A/F异二聚体(如上文实施例55所述的IL-17A-CH6/IL-17F-CEE双链异二聚体)的结合研究，将抗原按照1∶3的比例进行系列稀释，获得浓度为33nM至0.015nM的一系列稀释液，将所述稀释液注射至传感器芯片表面，以使其能够与传感器芯片上捕获的IL-17RA/RC-FC5受体发生特异性结合。每种浓度的IL-17A/F抗原稀释液重复注射两次，结合时间7分钟，解离时间15分钟。以30μL/分钟的流速进行动力学结合研究。所有的结合试验均在25℃下进行，所使用的缓冲液均为含10mM HEPES、150mMNaCl、3mM EDTA、0.05％表面活性剂P20(GE Healthcare，Piscataway，NJ)、1mg/mL牛血清白蛋白(Proliant Biologicals，Boone，IA)、pH 7.4的缓冲液。
在每一分析循环之间，使用20mM盐酸洗涤流通池以再生表面。这一洗涤步骤的目的是从固定化的抗体表面洗去捕获的IL-17RA/RC-Fc5受体，以使得下一样本中的受体可以再次结合。使用Biacore T100^TM Evaluation软件(1.1.1版)整理数据。将所得的测量值数据减去参比流通池的测量值和空白注射的值获得实际测量值。评估了基线稳定性，以保证在整个各次注射过程中再生步骤均提供了一致的表面结合能力。重复注射两次是为了检查可重复性。IL-17A/F异二聚体具有IL-17RA/RC-Fc5受体的两个可能的结合伴侣(IL-17A和IL-17F)。如果该异二聚体中仅有一个部分与受体结合，那么使用简单的1:1结合模型应该是合适的，并且结合曲线应符合这一模型。然而，如果该异二聚体中的IL-17A部分和IL-17F部分均与受体结合，那么使用二价结合模型应该是合适的，并且结合曲线应符合这一模型。所述结合曲线总体上符合1:1模型和二价分析物结合模型。
结果
表征了IL-17RA/RC-Fc5受体与人类IL-17A/F异二聚体抗原的结合亲和力。测量了结合速度常数(k_a(M^-1s^-1))和解离速度常数(k_d(s^-1))。虽然所得的结合曲线不符合1:1结合模型，但是所得数据符合二价分析物模型。这一结果与IL-17A/F异二聚体中的两个部分(IL-17A和IL-17F)均与受体结合的预计相符。二价分析物结合模型测量两个k_a值(k_a1和k_a2)和k_d值(k_d1和k_d2)。第一系列的数值(k_a1和k_d1)描述了相互作用的一价动力学。所报道的这些样本的亲和力来自于上述数值，并被表示为K_D1和K_A1。第二系列的数值(k_a2和k_d2)表示的是相互作用的总体亲合力，并且没有报道。所测得的结合动力学为：k_a1为5E+05(M^-1s^-1)，k_d1为2E-03(s^-1)，由此计算出的K_D1为4E-9(M)[K_A1为2E+8(M^-1)]。这些数值与对IL-17A/A和IL-17F/F同二聚体测量得到的结果相近。
表15：IL-17A/F异二聚体的结合亲和力
  抗原k_a1(M^-1s^-1)  k_d1(s^-1)  K_D1(M)K_A1(M^-1)  IL-17A/F异二聚体5.E+05  2.E-03  4.E-92.E+8
实施例58
IL-17A/F异二聚体活性及其与IL-17RA/RC-Fc5的中和反应
使用IL-17A/F异二聚体构建体(单链或双链的zcyto40f2v.和单链的zcyto40f2)测试了活性及其与IL-17RA/RC-Fc5的中和反应。IL-17RC活性测定使用被KZ170报告物构建体转染的NIH-3T3细胞，以便通过荧光素酶报告物测定检测由NFκB介导的IL-17A和IL-17F信号。在这一测定中，两种异二聚体构建体都表现出剂量依赖性反应，其中双链构建体的EC50值为15.19nM，单链构建体的EC50值为20.59nM。IL-17A和IL-17F同二聚体也表现出剂量依赖性反应，其EC50值分别为2.026nM和17.31nM。
还使用基于NIH-3T3/KZ170荧光素酶报告物细胞的中和测定测试了IL-17A/F异二聚体构建体。使用固定浓度的配体滴定了可溶性受体IL-17RA/RC-Fc5(变体1454)，并在报告物生物测定对其进行了测试。两种异二聚体构建体均可被可溶性受体IL-17RA/RC-Fc5中和，并呈现剂量依赖性反应，其中双链构建体的IC50值为3.169nM，单链构建体的IC50值为13.34nM。IL-17A和IL-17F同二聚体也表现出剂量依赖性反应，其IC50值分别为0.1673nM和0.8735nM。
从上文的描述可以认识到，虽然本文出于说明的目的描述了本发明的具体实施方案，但是在不偏离本发明精神和范围的前提下可以进行各种改变。在本文中所引用的所有出版物、专利和专利申请的全部内容均通过原因的方式纳入本文，并用于所有目的。
序列表
<110>津莫吉尼蒂克斯公司
<120>可溶性IL-17RA/RC融合蛋白以及相关方法
<130>07-06PC
<150>11/691,000
<151>2007-03-26
<150>60/908,554
<151>2007-03-28
<150>60/983,822
<151>2007-10-30
<160>190
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>2255
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(154)...(2229)
<220>
<223>优化的组织纤溶酶原激活物(otPA)
前原信号序列和人类IL-17RC的外显子7-10和Fc5
<400>1
aactacccag cacagccccc tccgccccct ctggaggctg aagagggatt ccagcccctg  60
ccacccacag acacgggctg actggggtgt ctgcccccct tggggggggg cagcacaggg 120
cctcaggcct gggtgccacc tggcacctag aag atg cct gtg ccc tgg ttc ttg  174
                                     Met Pro Val Pro Trp Phe Leu
                                      1               5
ctg tcc ttg gca ctg ggc cga agc cca gtg gtc ctt tct ctg gag agg  222
Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro Val Val Leu Ser Leu Glu Arg
         10                  15                  20
ctt gtg ggg cct cag gac gct acc cac tgc tct ccg ggc ctc tcc tgc  270
Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys
     25                  30                  35
cgc ctc tgg gac agt gac ata ctc tgc ctg cct ggg gac atc gtg cct  318
Arg Leu Trp Asp Set Asp Ile Leu Cys Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro
 40                  45                  50                  55
gct ccg ggc ccc gtg ctg gcg cct acg cac ctg cag aca gag ctg gtg  366
Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr His Leu Gln Thr Glu Leu Val
                 60                  65                  70
ctg agg tgc cag aag gag acc gac tgt gac ctc tgt ctg cgt gtg gct  414
Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala
             75                  80                  85
gtc cac ttg gcc gtg cat ggg cac tgg gaa gag cct gaa gat gag gaa  462
Val His Leu Ala Val His Gly His Trp Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu
         90                  95                 100
aag ttt gga gga gca gct gac tca ggg gtg gag gag cct agg aat gcc  510
Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala
    105                 110                 115
tct ctc cag gcc caa gtc gtg ctc tcc ttc cag gcc tac cct act gcc  558
Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala
120                 125                 130                 135
cgc tgc gtc ctg ctg gag gtg caa gtg cct gct gcc ctt gtg cag ttt  606
Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe
            140                 145                 150
ggt cag tct gtg ggc tct gtg gta tat gac tgc ttc gag gct gcc cta    654
Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu
            155                 160                 165
ggg agt gag gta cga atc tgg tcc tat act cag ccc agg tac gag aag    702
Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys
        170                 175                 180
gaa ctc aac cac aca cag cag ctg cct gcc ctg ccc tgg ctc aac gtg    750
Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val
    185                 190                 195
tca gca gat ggt gac aac gtg cat ctg gtt ctg aat gtc tct gag gag    798
Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu
200                 205                 210                 215
cag cac ttc ggc ctc tcc ctg tac tgg aat cag gtc cag ggc ccc cca    846
Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro
                220                 225                 230
aaa ccc cgg tgg cac aaa aac ctg act gga ccg cag atc att acc ttg    894
Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu
            235                 240                 245
aac cac aca gac ctg gtt ccc tgc ctc tgt att cag gtg tgg cct ctg    942
Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu CysIle Gln Val Trp Pro Leu
        250                 255                 260
gaa cct gac tcc gtt agg acg aac atc tgc ccc ttc agg gag gac ccc    990
Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro
    265                 270                 275
cgc gca cac cag aac ctc tgg caa gcc gcc cga ctg cga ctg ctg acc    1038
Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr
280                 285                 290                 295
ctg cag agc tgg ctg ctg gac gca ccg tgc tcg ctg ccc gca gaa gcg    1086
Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala
                300                 305                 310
gca ctg tgc tgg cgg gct ccg ggt ggg gac ccc tgc cag cca ctg gtc    1134
Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val
            315                 320                 325
cca ccg ctt tcc tgg gag aac gtc act gtg gac aag gtt ctc gag ttc    1182
Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe
        330                 335                 340
cca ttg ctg aaa ggc cac cct aac ctc tgt gtt cag gtg aac agc tcg    1230
Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser
    345                 350                 355
gag aag ctg cag ctg cag gag tgc ttg tgg gct gac tcc ctg ggg cct    1278
Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro
360                 365                 370                 375
ctc aaa gac gat gtg cta ctg ttg gag aca cga ggc ccc cag gac aac    1326
Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn
                380                 385                 390
aga tcc ctc tgt gcc ttg gaa ccc agt ggc tgt act tca cta ccc agc    1374
Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser
            395                 400                 405
aaa gcc tcc acg agg gca gct cgc ctt gga gag tac tta cta caa gac    1422
Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp
        410                 415                 420
ctg cag tca ggc cag tgt ctg cag cta tgg gac gat gac ttg gga gcg    1470
Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala
    425                 430                 435
cta tgg gcc tgc ccc atg gac aaa tac atc cac aag cgc tgg gcc ctc    1518
Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Arg Trp Ala Leu
440                 445                 450                 455
gtg tgg ctg gcc tgc cta ctc ttt gcc gct gcg ctt tcc ctc atc ctc  1566
Val Trp Leu Ala Cys Leu Leu Phe Ala Ala Ala Leu Ser Leu Ile Leu
                460                 465                 470
ctt ctc aaa aag gat cac gcg aaa gcg gcc gcc agg ggc cgc gcg gct  1614
Leu Leu Lys Lys Asp His Ala Lys Ala Ala Ala Arg Gly Arg Ala Ala
            475                 480                 485
ctg ctc ctc tac tca gcc gat gac tcg ggt ttc gag cgc ctg gtg ggc  1662
Leu Leu Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser Gly Phe Glu Arg Leu Val Gly
        490                 495                 500
gcc ctg gcg tcg gcc ctg tgc cag ctg ccg ctg cgc gtg gcc gta gac  1710
Ala Leu Ala Ser Ala Leu Cys Gln Leu Pro Leu Arg Val Ala Val Asp
    505                 510                 515
ctg tgg agc cgt cgt gaa ctg agc gcg cag ggg ccc gtg gct tgg ttt  1758
Leu Trp Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala Gln Gly Pro Val Ala Trp Phe
520                 525                 530                 535
cac gcg cag cgg cgc cag acc ctg cag gag ggc ggc gtg gtg gtc ttg  1806
His Ala Gln Arg Arg Gln Thr Leu Gln Glu Gly Gly Val Val Val Leu
                540                 545                 550
ctc ttc tct ccc ggt gcg gtg gcg ctg tgc agc gag tgg cta cag gat  1854
Leu Phe Ser Pro Gly Ala Val Ala Leu Cys Ser Glu Trp Leu Gln Asp
            555                 560                 565
ggg gtg tcc ggg ccc ggg gcg cac ggc ccg cac gac gcc ttc cgc gcc  1902
Gly Val Ser Gly Pro Gly Ala His Gly Pro His Asp Ala Phe Arg Ala
        570                 575                 580
tcg ctc agc tgc gtg ctg ccc gac ttc ttg cag ggc cgg gcg ccc ggc  1950
Ser Leu Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe Leu Gln Gly Arg Ala Pro Gly
    585                 590                 595
agc tac gtg ggg gcc tgc ttc gac agg ctg ctc cac ccg gac gcc gta  1998
Ser Tyr Val Gly Ala Cys Phe Asp Arg Leu Leu His Pro Asp Ala Val
600                 605                 610                 615
ccc gcc ctt ttc cgc acc gtg ccc gtc ttc aca ctg ccc tcc caa ctg  2046
Pro Ala Leu Phe Arg Thr Val Pro Val Phe Thr Leu Pro Ser Gln Leu
                620                 625                 630
cca gac ttc ctg ggg gcc ctg cag cag cct cgc gcc ccg cgt tcc ggg  2094
Pro Asp Phe Leu Gly Ala Leu Gln Gln Pro Arg Ala Pro Arg Ser Gly
            635                 640                 645
cgg ctc caa gag aga gcg gag caa gtg tcc cgg gcc ctt cag cca gcc  2142
Arg Leu Gln Glu Arg Ala Glu Gln Val Ser Arg Ala Leu Gln Pro Ala
        650                 655                 660
ctg gat agc tac ttc cat ccc ccg ggg act ccc gcg ccg gga cgc ggg  2190
Leu Asp Ser Tyr Phe His Pro Pro Gly Thr Pro Ala Pro Gly Arg Gly
    665                 670                 675
gtg gga cca ggg gcg gga cct ggg gcg ggg gac ggg act taaataaagg   2239
Val Gly Pro Gly Ala Gly Pro Gly Ala Gly Asp Gly Thr
680                 685                 690
cagacgctgt ttttct                                                2255
<210>2
<211>692
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>2
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                25                30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                 45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
               100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
            115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
        130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu
        195                 200                 205
Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp
    210                 215                 220
Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr
225                 230                 235                 240
Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu
                245                 250                 255
Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile
            260                 265                 270
Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala
        275                 280                 285
Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro
    290                 295                 300
Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly
305                 310                 315                 320
Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr
                325                 330                 335
Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu
            340                 345                 350
Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu
        355                 360                 365
Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu
    370                 375                 380
Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser
385                 390                 395                 400
Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu
                405                 410                 415
Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu
            420                 425                 430
Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr
        435                 440                 445
Ile His Lys Arg Trp Ala Leu Val Trp Leu Ala Cys Leu Leu Phe Ala
    450                 455                 460
Ala Ala Leu Ser Leu Ile Leu Leu Leu Lys Lys Asp His Ala Lys Ala
465                 470                 475                 480
Ala Ala Arg Gly Arg Ala Ala Leu Leu Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser
                485                 490                 495
Gly Phe Glu Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Ser Ala Leu Cys Gln Leu
            500                 505                 510
Pro Leu Arg Val Ala Val Asp Leu Trp Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala
        515                 520                 525
Gln Gly Pro Val Ala Trp Phe His Ala Gln Arg Arg Gln Thr Leu Gln
    530                 535                 540
Glu Gly Gly Val Val Val Leu Leu Phe Ser Pro Gly Ala Val Ala Leu
545                 550                 555                 560
Cys Ser Glu Trp Leu Gln Asp Gly Val Ser Gly Pro Gly Ala His Gly
                565                 570                 575
Pro His Asp Ala Phe Arg Ala Ser Leu Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe
            580                 585                 590
Leu Gln Gly Arg Ala Pro Gly Ser Tyr Val Gly Ala Cys Phe Asp Arg
        595                 600                 605
Leu Leu His Pro Asp Ala Val Pro Ala Leu Phe Arg Thr Val Pro Val
    610                 615                 620
Phe Thr Leu Pro Ser Gln Leu Pro Asp Phe Leu Gly Ala Leu Gln Gln
625                 630                 635                 640
Pro Arg Ala Pro Arg Ser Gly Arg Leu Gln Glu Arg Ala Glu Gln Val
                645                 650                 655
Ser Arg Ala Leu Gln Pro Ala Leu Asp Ser Tyr Phe His Pro Pro Gly
            660                 665                 670
Thr Pro Ala Pro Gly Arg Gly Val Gly Pro Gly Ala Gly Pro Gly Ala
        675                 680                 685
Gly Asp Gly Thr
    690
<210>3
<211>432
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>3
Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His Cys Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15
Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys Leu Pro Gly Asp
            20                  25                  30
Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr His Leu Gln Thr
        35                  40                  45
Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys Asp Leu Cys Leu
    50                  55                  60
Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp Glu Glu Pro Glu
65                  70                  75                  80
Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val Glu Glu Pro
                85                  90                  95
Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr
            100                 105                 110
Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Ala Leu
        115                 120                 125
Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp Cys Phe Glu
    130                 135                 140
Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr Gln Pro Arg
145                 150                 155                 160
Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala Leu Pro Trp
                165                 170                 175
Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val
            180                 185                 190
Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln
        195                 200                 205
Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile
    210                 215                 220
Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val
225                 230                 235                 240
Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg
                245                 250                 255
Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg
            260                 265                 270
Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro
        275                 280                 285
Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln
    290                 295                 300
Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val
305                 310                 315                 320
Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val
                325                 330                 335
Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser
            340                 345                 350
Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro
        355                 360                 365
Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser
    370                 375                 380
Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp
                405                 410                 415
Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Arg
            420                 425                 430
<210>4
<211>1753
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(2)...(1726)
<400>4
g gag gag cct agg aat gcc tct ctc cag gcc caa gtc gtg ctc tcc ttc 49
  Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe
   1               5                   10                 15
cag gcc tac cct act gcc cgc tgc gtc ctg ctg gag gtg caa gtg cct    97
Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro
             20                  25                  30
gct gcc ctt gtg cag ttt ggt cag tct gtg ggc tct gtg gta tat gac    145
Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp
         35                  40                  45
tgc ttc gag gct gcc cta ggg agt gag gta cga atc tgg tcc tat act    193
Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr
     50                  55                  60
cag ccc agg tac gag aag gaa ctc aac cac aca cag cag ctg cct gcc    241
Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala
 65                  70                  75                  80
ctg ccc tgg ctc aac gtg tca gca gat ggt gac aac gtg cat ctg gtt    289
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
                 85                  90                  95
ctg aat gtc tct gag gag cag cac ttc ggc ctc tcc ctg tac tgg aat    337
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
            100                 105                 110
cag gtc cag ggc ccc cca aaa ccc cgg tgg cac aaa aac ctg act gga    385
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
        115                 120                 125
ccg cag atc att acc ttg aac cac aca gac ctg gtt ccc tgc ctc tgt    433
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
    130                 135                 140
att cag gtg tgg cct ctg gaa cct gac tcc gtt agg acg aac atc tgc    481
Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys
145                 150                 155                 160
ccc ttc agg gag gac ccc cgc gca cac cag aac ctc tgg caa gcc gcc    529
Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala
                165                 170                 175
cga ctg cga ctg ctg acc ctg cag agc tgg ctg ctg gac gca ccg tgc    577
Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys
            180                 185                 190
tcg ctg ccc gca gaa gcg gca ctg tgc tgg cgg gct ccg ggt ggg gac    625
Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp
        195                 200                 205
ccc tgc cag cca ctg gtc cca ccg ctt tcc tgg gag aac gtc act gtg    673
Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val
    210                 215                 220
gac gtg aac agc tcg gag aag ctg cag ctg cag gag tgc ttg tgg gct    721
Asp Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala
225                 230                 235                 240
gac tcc ctg ggg cct ctc aaa gac gat gtg cta ctg ttg gag aca cga    769
Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg
                245                 250                 255
ggc ccc cag gac aac aga tcc ctc tgt gcc ttg gaa ccc agt ggc tgt    817
Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys
            260                 265                 270
act tca cta ccc agc aaa gcc tcc acg agg gca gct cgc ctt gga gag    865
Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu
        275                 280                 285
tac tta cta caa gac ctg cag tca ggc cag tgt ctg cag cta tgg gac    913
Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp
    290                 295                 300
gat gac ttg gga gcg cta tgg gcc tgc ccc atg gac aaa tac atc cac    961
Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys TyrIle His
305                 310                 315                 320
aag cgc tgg gcc ctc gtg tgg ctg gcc tgc cta ctc ttt gcc gct gcg    1009
Lys Arg Trp Ala Leu Val Trp Leu Ala Cys Leu Leu Phe Ala Ala Ala
                325                 330                 335
ctt tcc ctc atc ctc ctt ctc aaa aag gat cac gcg aaa ggg tgg ctg    1057
Leu Ser Leu Ile Leu Leu Leu Lys Lys Asp His Ala Lys Gly Trp Leu
            340                 345                 350
agg ctc ttg aaa cag gac gtc cgc tcg ggg gcg gcc gcc agg ggc cgc    1105
Arg Leu Leu Lys Gln Asp Val Arg Ser Gly Ala Ala Ala Arg Gly Arg
        355                 360                 365
gcg gct ctg ctc ctc tac tca gcc gat gac tcg ggt ttc gag cgc ctg    1153
Ala Ala Leu Leu Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser Gly Phe Glu Arg Leu
    370                 375                 380
gtg ggc gcc ctg gcg tcg gcc ctg tgc cag ctg ccg ctg cgc gtg gcc    1201
Val Gly Ala Leu Ala Ser Ala Leu Cys Gln Leu Pro Leu Arg Val Ala
385                 390                 395                 400
gta gac ctg tgg agc cgt cgt gaa ctg agc gcg cag ggg ccc gtg gct    1249
Val Asp Leu Trp Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala Gln Gly Pro Val Ala
                405                 410                 415
tgg ttt cac gcg cag cgg cgc cag acc ctg cag gag ggc ggc gtg gtg    1297
Trp Phe His Ala Gln Arg Arg Gln Thr Leu Gln Glu Gly Gly Val Val
            420                 425                 430
gtc ttg ctc ttc tct ccc ggt gcg gtg gcg ctg tgc agc gag tgg cta    1345
Val Leu Leu Phe Ser Pro Gly Ala Val Ala Leu Cys Ser Glu Trp Leu
        435                 440                 445
cag gat ggg gtg tcc ggg ccc ggg gcg cac ggc ccg cac gac gcc ttc    1393
Gln Asp Gly Val Ser Gly Pro Gly Ala His Gly Pro His Asp Ala Phe
    450                 455                 460
cgc gcc tcg ctc agc tgc gtg ctg ccc gac ttc ttg cag ggc cgg gcg    1441
Arg Ala Ser Leu Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe Leu Gln Gly Arg Ala
465                 470                 475                 480
ccc ggc agc tac gtg ggg gcc tgc ttc gac agg ctg ctc cac ccg gac    1489
Pro Gly Ser Tyr Val Gly Ala Cys Phe Asp Arg Leu Leu His Pro Asp
                485                 490                 495
gcc gta ccc gcc ctt ttc cgc acc gtg ccc gtc ttc aca ctg ccc tcc    1537
Ala Val Pro Ala Leu Phe Arg Thr Val Pro Val Phe Thr Leu Pro Ser
            500                 505                 510
caa ctg cca gac ttc ctg ggg gcc ctg cag cag cct cgc gcc ccg cgt    1585
Gln Leu Pro Asp Phe Leu Gly Ala Leu Gln Gln Pro Arg Ala Pro Arg
        515                 520                 525
tcc ggg cgg ctc caa gag aga gcg gag caa gtg tcc cgg gcc ctt cag    1633
Ser Gly Arg Leu Gln Glu Arg Ala Glu Gln Val Ser Arg Ala Leu Gln
    530                 535                 540
cca gcc ctg gat agc tac ttc cat ccc ccg ggg act ccc gcg ccg gga    1681
Pro Ala Leu Asp Ser Tyr Phe His Pro Pro Gly Thr Pro Ala Pro Gly
545                 550                 555                 560
cgc ggg gtg gga cca ggg gcg gga cct ggg gcg ggg gac ggg act        1726
Arg Gly Val Gly Pro Gly Ala Gly Pro Gly Ala Gly Asp Gly Thr
                565                 570                 575
taaataaagg cagacgctgt ttttcta                                      1753
<210>5
<211>575
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>5
Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe
 1               5                  10                 15
Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro
            20                  25                  30
Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp
        35                  40                  45
Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr
    50                  55                  60
Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala
65                  70                  75                  80
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
                85                  90                  95
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
            100                 105                 110
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
        115                 120                 125
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
    130                 135                 140
Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys
145                 150                 155                 160
Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala
                165                 170                 175
Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys
            180                 185                 190
Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp
        195                 200                 205
Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val
    210                 215                 220
Asp Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala
225                 230                 235                 240
Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg
                245                 250                 255
Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys
            260                 265                 270
Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu
        275                 280                 285
Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp
    290                 295                 300
Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His
305                 310                 315                 320
Lys Arg Trp Ala Leu Val Trp Leu Ala Cys Leu Leu Phe Ala Ala Ala
                325                 330                 335
Leu Ser Leu Ile Leu Leu Leu Lys Lys Asp His Ala Lys Gly Trp Leu
            340                 345                 350
Arg Leu Leu Lys Gln Asp Val Arg Ser Gly Ala Ala Ala Arg Gly Arg
        355                 360                 365
Ala Ala Leu Leu Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser Gly Phe Glu Arg Leu
    370                 375                 380
Val Gly Ala Leu Ala Ser Ala Leu Cys Gln Leu Pro Leu Arg Val Ala
385                 390                 395                 400
Val Asp Leu Trp Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala Gln Gly Pro Val Ala
                405                 410                 415
Trp Phe His Ala Gln Arg Arg Gln Thr Leu Gln Glu Gly Gly Val Val
            420                 425                 430
Val Leu Leu Phe Ser Pro Gly Ala Val Ala Leu Cys Ser Glu Trp Leu
        435                 440                 445
Gln Asp Gly Val Ser Gly Pro Gly Ala His Gly Pro His Asp Ala Phe
    450                 455                 460
Arg Ala Ser Leu Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe Leu Gln Gly Arg Ala
465                 470                 475                 480
Pro Gly Ser Tyr Val Gly Ala Cys Phe Asp Arg Leu Leu His Pro Asp
                485                 490                 495
Ala Val Pro Ala Leu Phe Arg Thr Val Pro Val Phe Thr Leu Pro Ser
            500                 505                 510
Gln Leu Pro Asp Phe Leu Gly Ala Leu Gln Gln Pro Arg Ala Pro Arg
        515                 520                 525
Ser Gly Arg Leu Gln Glu Arg Ala Glu Gln Val Ser Arg Ala Leu Gln
    530                 535                 540
Pro Ala Leu Asp Ser Tyr Phe His Pro Pro Gly Thr Pro Ala Pro Gly
545                 550                 555                 560
Arg Gly Val Gly Pro Gly Ala Gly Pro Gly Ala Gly Asp Gly Thr
       565                 570                 575
<210>6
<211>1725
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>简并序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)...(1725)
<223>n＝A，T，C或G
<400>6
gargarccnm gnaaygcnws nytncargcn cargtngtny tnwsnttyca rgcntayccn  60
acngcnmgnt gygtnytnyt ngargtncar gtnccngcng cnytngtnca rttyggncar 120
wsngtnggnw sngtngtnta ygaytgytty gargcngcny tnggnwsnga rgtnmgnath 180
tggwsntaya cncarccnmg ntaygaraar garytnaayc ayacncarca rytnccngcn 240
ytnccntggy tnaaygtnws ngcngayggn gayaaygtnc ayytngtnyt naaygtnwsn 300
gargarcarc ayttyggnyt nwsnytntay tggaaycarg tncarggncc nccnaarccn 360
mgntggcaya araayytnac nggnccncar athathacny tnaaycayac ngayytngtn 420
ccntgyytnt gyathcargt ntggccnytn garccngayw sngtnmgnac naayathtgy 480
ccnttymgng argayccnmg ngcncaycar aayytntggc argcngcnmg nytnmgnytn 540
ytnacnytnc arwsntggyt nytngaygcn ccntgywsny tnccngcnga rgcngcnytn 600
tgytggmgng cnccnggngg ngayccntgy carccnytng tnccnccnyt nwsntgggar 660
aaygtnacng tngaygtnaa ywsnwsngar aarytncary tncargartg yytntgggcn 720
gaywsnytng gnccnytnaa rgaygaygtn ytnytnytng aracnmgngg nccncargay 780
aaymgnwsny tntgygcnyt ngarccnwsn ggntgyacnw snytnccnws naargcnwsn 840
acnmgngcng cnmgnytngg ngartayytn ytncargayy tncarwsngg ncartgyytn 900
carytntggg aygaygayyt nggngcnytn tgggcntgyc cnatggayaa rtayathcay 960
aarmgntggg cnytngtntg gytngcntgy ytnytnttyg cngcngcnyt nwsnytnath 1020
ytnytnytna araargayca ygcnaarggn tggytnmgny tnytnaarca rgaygtnmgn 1080
wsnggngcng cngcnmgngg nmgngcngcn ytnytnytnt aywsngcnga ygaywsnggn 1140
ttygarmgny tngtnggngc nytngcnwsn gcnytntgyc arytnccnyt nmgngtngcn 1200
gtngayytnt ggwsnmgnmg ngarytnwsn gcncarggnc cngtngcntg gttycaygcn 1260
carmgnmgnc aracnytnca rgarggnggn gtngtngtny tnytnttyws nccnggngcn 1320
gtngcnytnt gywsngartg gytncargay ggngtnwsng gnccnggngc ncayggnccn 1380
caygaygcnt tymgngcnws nytnwsntgy gtnytnccng ayttyytnca rggnmgngcn 1440
ccnggnwsnt aygtnggngc ntgyttygay mgnytnytnc ayccngaygc ngtnccngcn 1500
ytnttymgna cngtnccngt nttyacnytn ccnwsncary tnccngaytt yytnggngcn 1560
ytncarcarc cnmgngcncc nmgnwsnggn mgnytncarg armgngcnga rcargtnwsn 1620
mgngcnytnc arccngcnyt ngaywsntay ttycayccnc cnggnacncc ngcnccnggn 1680
mgnggngtng gnccnggngc nggnccnggn gcnggngayg gnacn                 1725
<210>7
<211>2076
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>简并序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)...(2076)
<223>n＝A，T，C或G
<400>7
atgccngtnc cntggttyyt nytnwsnytn gcnytnggnm gnwsnccngt ngtnytnwsn  60
ytngarmgny tngtnggncc ncargaygcn acncaytgyw snccnggnyt nwsntgymgn 120
ytntgggayw sngayathyt ntgyytnccn ggngayathg tnccngcncc nggnccngtn 180
ytngcnccna cncayytnca racngarytn gtnytnmgnt gycaraarga racngaytgy 240
gayytntgyy tnmgngtngc ngtncayytn gcngtncayg gncaytggga rgarccngar 300
gaygargara arttyggngg ngcngcngay wsnggngtng argarccnmg naaygcnwsn 360
ytncargcnc argtngtnyt nwsnttycar gcntayccna cngcnmgntg ygtnytnytn 420
gargtncarg tnccngcngc nytngtncar ttyggncarw sngtnggnws ngtngtntay 480
gaytgyttyg argcngcnyt nggnwsngar gtnmgnatht ggwsntayac ncarccnmgn 540
taygaraarg arytnaayca yacncarcar ytnccngcny tnccntggyt naaygtnwsn 600
gcngayggng ayaaygtnca yytngtnytn aaygtnwsng argarcarca yttyggnytn 660
wsnytntayt ggaaycargt ncarggnccn ccnaarccnm gntggcayaa raayytnacn 720
ggnccncara thathacnyt naaycayacn gayytngtnc cntgyytntg yathcargtn 780
tggccnytng arccngayws ngtnmgnacn aayathtgyc cnttymgnga rgayccnmgn 840
gcncaycara ayytntggca rgcngcnmgn ytnmgnytny tnacnytnca rwsntggytn 900
ytngaygcnc cntgywsnyt nccngcngar gcngcnytnt gytggmgngc nccnggnggn  960
gayccntgyc arccnytngt nccnccnytn wsntgggara aygtnacngt ngayaargtn 1020
ytngarttyc cnytnytnaa rggncayccn aayytntgyg tncargtnaa ywsnwsngar 1080
aarytncary tncargartg yytntgggcn gaywsnytng gnccnytnaa rgaygaygtn 1140
ytnytnytng aracnmgngg nccncargay aaymgnwsny tntgygcnyt ngarccnwsn 1200
ggntgyacnw snytnccnws naargcnwsn acnmgngcng cnmgnytngg ngartayytn 1260
ytncargayy tncarwsngg ncartgyytn carytntggg aygaygayyt nggngcnytn 1320
tgggcntgyc cnatggayaa rtayathcay aarmgntggg cnytngtntg gytngcntgy 1380
ytnytnttyg cngcngcnyt nwsnytnath ytnytnytna araargayca ygcnaargcn 1440
gcngcnmgng gnmgngcngc nytnytnytn taywsngcng aygaywsngg nttygarmgn 1500
ytngtnggng cnytngcnws ngcnytntgy carytnccny tnmgngtngc ngtngayytn 1560
tggwsnmgnm gngarytnws ngcncarggn ccngtngcnt ggttycaygc ncarmgnmgn 1620
caracnytnc argarggngg ngtngtngtn ytnytnttyw snccnggngc ngtngcnytn 1680
tgywsngart ggytncarga yggngtnwsn ggnccnggng cncayggncc ncaygaygcn 1740
ttymgngcnw snytnwsntg ygtnytnccn gayttyytnc arggnmgngc nccnggnwsn 1800
taygtnggng cntgyttyga ymgnytnytn cayccngayg cngtnccngc nytnttymgn 1860
acngtnccng tnttyacnyt nccnwsncar ytnccngayt tyytnggngc nytncarcar 1920
ccnmgngcnc cnmgnwsngg nmgnytncar garmgngcng arcargtnws nmgngcnytn 1980
carccngcny tngaywsnta yttycayccn ccnggnacnc cngcnccngg nmgnggngtn 2040
ggnccnggng cnggnccngg ngcnggngay ggnacn                           2076
<210>8
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PCR引物
<400>8
cggcgtggtg gtcttgctct t                                       21
<210>9
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>肽连接物
<400>9
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
 1               5                  10                  15
<210>10
<211>688
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>嵌合Zcytor14蛋白
<400>10
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu
        195                 200                 205
Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp
    210                 215                 220
Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr
225                 230                 235                 240
Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu
                245                 250                 255
Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile
            260                 265                 270
Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala
        275                 280                 285
Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro
    290                 295                 300
Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly
305                 310                 315                 320
Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr
                325                 330                 335
Val Asp Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp
            340                 345                 350
Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr
        355                 360                 365
Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly
    370                 375                 380
Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly
385                 390                 395                 400
Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp
                405                 410                 415
Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile
            420                 425                 430
His Lys Arg Trp Ala Leu Val Trp Leu Ala Cys Leu Leu Phe Ala Ala
        435                 440                 445
Ala Leu Ser Leu Ile Leu Leu Leu Lys Lys Asp His Ala Lys Gly Trp
    450                 455                 460
Leu Arg Leu Leu Lys Gln Asp Val Arg Ser Gly Ala Ala Ala Arg Gly
465                 470                 475                 480
Arg Ala Ala Leu Leu Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser Gly Phe Glu Arg
                485                 490                 495
Leu Val Gly Ala Leu Ala Ser Ala Leu Cys Gln Leu Pro Leu Arg Val
            500                 505                 510
Ala Val Asp Leu Trp Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala Gln Gly Pro Val
        515                 520                 525
Ala Trp Phe His Ala Gln Arg Arg Gln Thr Leu Gln Glu Gly Gly Val
    530                 535                 540
Val Val Leu Leu Phe Ser Pro Gly Ala Val Ala Leu Cys Ser Glu Trp
545                 550                 555                 560
Leu Gln Asp Gly Val Ser Gly Pro Gly Ala His Gly Pro His Asp Ala
                565                 570                 575
Phe Arg Ala Ser Leu Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe Leu Gln Gly Arg
            580                 585                 590
Ala Pro Gly Ser Tyr Val Gly Ala Cys Phe Asp Arg Leu Leu His Pro
        595                 600                 605
Asp Ala Val Pro Ala Leu Phe Arg Thr Val Pro Val Phe Thr Leu Pro
    610                 615                 620
Ser Gln Leu Pro Asp Phe Leu Gly Ala Leu Gln Gln Pro Arg Ala Pro
625                 630                 635                 640
Arg Ser Gly Arg Leu Gln Glu Arg Ala Glu Gln Val Ser Arg Ala Leu
                645                 650                 655
Gln Pro Ala Leu Asp Ser Tyr Phe His Pro Pro Gly Thr Pro Ala Pro
            660                 665                 670
Gly Arg Gly Val Gly Pro Gly Ala Gly Pro Gly Ala Gly Asp Gly Thr
        675                 680                 685
<210>11
<211>705
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>嵌合Zcytor14蛋白
<400>11
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                 15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
             20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu
        195                 200                 205
Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp
    210                 215                 220
Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr
225                 230                 235                 240
Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu
                245                 250                 255
Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile
            260                 265                 270
Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala
        275                 280                 285
Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro
    290                 295                 300
Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly
305                 310                 315                 320
Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr
                325                 330                 335
Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu
            340                 345                 350
Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu
        355                 360                 365
Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu
    370                 375                 380
Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser
385                 390                 395                 400
Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu
                405                 410                 415
Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu
            420                 425                 430
Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr
        435                 440                 445
Ile His Lys Arg Trp Ala Leu Val Trp Leu Ala Cys Leu Leu Phe Ala
    450                 455                 460
Ala Ala Leu Ser Leu Ile Leu Leu Leu Lys Lys Asp His Ala Lys Gly
465                 470                 475                 480
Trp Leu Arg Leu Leu Lys Gln Asp Val Arg Ser Gly Ala Ala Ala Arg
                485                 490                 495
Gly Arg Ala Ala Leu Leu Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser Gly Phe Glu
            500                 505                 510
Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Ser Ala Leu Cys Gln Leu Pro Leu Arg
        515                 520                 525
Val Ala Val Asp Leu Trp Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala Gln Gly Pro
    530                 535                 540
Val Ala Trp Phe His Ala Gln Arg Arg Gln Thr Leu Gln Glu Gly Gly
545                 550                 555                 560
Val Val Val Leu Leu Phe Ser Pro Gly Ala Val Ala Leu Cys Ser Glu
                565                 570                 575
Trp Leu Gln Asp Gly Val Ser Gly Pro Gly Ala His Gly Pro His Asp
            580                 585                 590
Ala Phe Arg Ala Ser Leu Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe Leu Gln Gly
        595                 600                 605
Arg Ala Pro Gly Ser Tyr Val Gly Ala Cys Phe Asp Arg Leu Leu His
    610                 615                 620
Pro Asp Ala Val Pro Ala Leu Phe Arg Thr Val Pro Val Phe Thr Leu
625                 630                 635                 640
Pro Ser Gln Leu Pro Asp Phe Leu Gly Ala Leu Gln Gln Pro Arg Ala
                645                 650                 655
Pro Arg Ser Gly Arg Leu Gln Glu Arg Ala Glu Gln Val Ser Arg Ala
            660                 665                 670
Leu Gln Pro Ala Leu Asp Ser Tyr Phe His Pro Pro Gly Thr Pro Ala
        675                 680                 685
Pro Gly Arg Gly Val Gly Pro Gly Ala Gly Pro Gly Ala Gly Asp Gly
    690                 695                 700
Thr
705
<210>12
<211>675
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>嵌合Zcytor14蛋白
<400>12
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu
        195                 200                 205
Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp
    210                 215                 220
Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr
225                 230                 235                 240
Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu
                245                 250                 255
Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile
            260                 265                 270
Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala
        275                 280                 285
Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro
    290                 295                 300
Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly
305                 310                 315                 320
Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr
                325                 330                 335
Val Asp Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp
            340                 345                 350
Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr
        355                 360                 365
Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly
    370                 375                 380
Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly
385                 390                 395                 400
Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp
                405                 410                 415
Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile
            420                 425                 430
His Lys Arg Trp Ala Leu Val Trp Leu Ala Cys Leu Leu Phe Ala Ala
        435                 440                 445
Ala Leu Ser Leu Ile Leu Leu Leu Lys Lys Asp His Ala Lys Ala Ala
    450                 455                 460
Ala Arg Gly Arg Ala Ala Leu Leu Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser Gly
465                 470                 475                 480
Phe Glu Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Ser Ala Leu Cys Gln Leu Pro
                485                 490                 495
Leu Arg Val Ala Val Asp Leu Trp Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala Gln
            500                 505                 510
Gly Pro Val Ala Trp Phe His Ala Gln Arg Arg Gln Thr Leu Gln Glu
        515                 520                 525
Gly Gly Val Val Val Leu Leu Phe Ser Pro Gly Ala Val Ala Leu Cys
    530                 535                 540
Ser Glu Trp Leu Gln Asp Gly Val Ser Gly Pro Gly Ala His Gly Pro
545                 550                 555                 560
His Asp Ala Phe Arg Ala Ser Leu Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe Leu
                565                 570                 575
Gln Gly Arg Ala Pro Gly Ser Tyr Val Gly Ala Cys Phe Asp Arg Leu
            580                 585                 590
Leu His Pro Asp Ala Val Pro Ala Leu Phe Arg Thr Val Pro Val Phe
        595                 600                 605
Thr Leu Pro Ser Gln Leu Pro Asp Phe Leu Gly Ala Leu Gln Gln Pro
    610                 615                 620
Arg Ala Pro Arg Ser Gly Arg Leu Gln Glu Arg Ala Glu Gln Val Ser
625                 630                 635                 640
Arg Ala Leu Gln Pro Ala Leu Asp Ser Tyr Phe His Pro Pro Gly Thr
                645                 650                 655
Pro Ala Pro Gly Arg Gly Val Gly Pro Gly Ala Gly Pro Gly Ala Gly
            660                 665                 670
Asp Gly Thr
    675
<210>13
<211>1874
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>13
gaattccggc aggcacaaac tcatccatcc ccagttgatt ggaagaaaca acgatgactc  60
ctgggaagac ctcattggtg tcactgctac tgctgctgag cctggaggcc atagtgaagg 120
caggaatcac aatcccacga aatccaggat gcccaaattc tgaggacaag aacttccccc 180
ggactgtgat ggtcaacctg aacatccata accggaatac caataccaat cccaaaaggt 240
cctcagatta ctacaaccga tccacctcac cttggaatct ccaccgcaat gaggaccctg 300
agagatatcc ctctgtgatc tgggaggcaa agtgccgcca cttgggctgc atcaacgctg 360
atgggaacgt ggactaccac atgaactctg tccccatcca gcaagagatc ctggtcctgc 420
gcagggagcc tccacactgc cccaactcct tccggctgga gaagatactg gtgtccgtgg 480
gctgcacctg tgtcaccccg attgtccacc atgtggccta agagctctgg ggagcccaca 540
ctccccaaag cagttagact atggagagcc gacccagccc ctcaggaacc ctcatccttc 600
aaagacagcc tcatttcgga ctaaactcat tagagttctt aaggcagttt gtccaattaa 660
agcttcagag gtaacacttg gccaagatat gagatctgaa ttacctttcc ctctttccaa 720
gaaggaaggt ttgactgagt accaatttgc ttcttgttta cttttttaag ggctttaagt 780
tatttatgta tttaatatgc cctgagataa ctttggggta taagattcca ttttaatgaa 840
ttacctactt tattttgttt gtctttttaa agaagataag attctgggct tgggaatttt 900
attatttaaa aggtaaaacc tgtatttatt tgagctattt aaggatctat ttatgtttaa 960
gtatttagaa aaaggtgaaa aagcactatt atcagttctg cctaggtaaa tgtaagatag 1020
aattaaatgg cagtgcaaaa tttctgagtc tttacaacat acggatatag tatttcctcc 1080
tctttgtttt taaaagttat aacatggctg aaaagaaaga ttaaacctac tttcatatgt 1140
attaatttaa attttgcaat ttgttgaggt tttacaagag atacagcaag tctaactctc 1200
tgttccatta aacccttata ataaaatcct tctgtaataa taaagtttca aaagaaaatg 1260
tttatttgtt ctcattaaat gtattttagc aaactcagct cttccctatt gggaagagtt 1320
atgcaaattc tcctataagc aaaacaaagc atgtctttga gtaacaatga cctggaaata 1380
cccaaaattc caagttctcg atttcacatg ccttcaagac tgaacaccga ctaaggtttt 1440
catactatta gccaatgctg tagacagaag cattttgata ggaatagagc aaataagata 1500
atggccctga ggaatggcat gtcattatta aagatcatat ggggaaaatg aaaccctccc 1560
caaaatacaa gaagttctgg gaggagacat tgtcttcaga ctacaatgtc cagtttctcc 1620
cctagactca ggcttccttt ggagattaag gcccctcaga gatcaacaga ccaacatttt 1680
tctcttcctc aagcaacact cctagggcct ggcttctgtc tgatcaaggc accacacaac 1740
ccagaaagga gctgatgggg cagaatgaac tttaagtatg agaaaagttc agcccaagta 1800
aaataaaaac tcaatcacat tcaattccag agtagtttca agtttcacat cgtaaccatt 1860
ttcgcccgga attc                                                   1874
<210>14
<211>155
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>14
Met Thr Pro Gly Lys Thr Ser Leu Val Ser Leu Leu Leu Leu Leu Ser
 1               5                  10                  15
Leu Glu Ala Ile Val Lys Ala Gly Ile Thr Ile Pro Arg Asn Pro Gly
            20                  25                  30
Cys Pro Asn Ser Glu Asp Lys Asn Phe Pro Arg Thr Val Met Val Asn
        35                  40                  45
Leu Asn Ile His Asn Arg Asn Thr Asn Thr Asn Pro Lys Arg Ser Ser
    50                  55                  60
Asp Tyr Tyr Asn Arg Ser Thr Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu
65                  70                  75                  80
Asp Pro Glu Arg Tyr Pro Ser Val Ile Trp Glu Ala Lys Cys Arg His
                85                  90                  95
Leu Gly Cys Ile Asn Ala Asp Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser
            100                 105                 110
Val Pro Ile Gln Gln Glu Ile Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Pro His
        115                 120                 125
Cys Pro Asn Ser Phe Arg Leu Glu Lys Ile Leu Val Ser Val Gly Cys
    130                 135                 140
Thr Cys Val Thr Pro Ile Val His His Val Ala
145                 150                 155
<210>15
<211>923
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>15
ggcttcagtt actagctagg ctactgagtt tagttctcag tttggcacct tgataccttt  60
aggtgtgagt gttcccattt ccaggtgagg aactgaggtg caaagagaag ccctgatccc 120
ataaaaggac aggaatgctg agttccgcca gaccatgcat ctcttgctag taggtgaggc 180
gagtctctaa ctgattgcag cgtcttctat tttccaggtc aagtacttgc tgctgtcgat 240
attggggctt gcctttctga gtgaggcggc agctcggaaa atccccaaag taggacatac 300
ttttttccaa aagcctgaga gttgcccgcc tgtgccagga ggtagtatga agcttgacat 360
tggcatcatc aatgaaaacc agcgcgtttc catgtcacgt aacatcgaga gccgctccac 420
ctccccctgg aattacactg tcacttggga ccccaaccgg tacccctcgg aagttgtaca 480
ggcccagtgt aggaacttgg gctgcatcaa tgctcaagga aaggaagaca tctccatgaa 540
ttccgttccc atccagcaag agaccctggt cgtccggagg aagcaccaag gctgctctgt 600
ttctttccag ttggagaagg tgctggtgac tgttggctgc acctgcgtca cccctgtcat 660
ccaccatgtg cagtaagagg tgcatatcca ctcagctgaa gaagctgtag aaatgccact 720
ccttacccag tgctctgcaa caagtcctgt ctgaccccca attccctcca cttcacagga 780
ctcttaataa gacctgcacg gatggaaaca taaaatattc acaatgtatg tgtgtatgta 840
ctacacttta tatttgatat ctaaaatgtt aggagaaaaa ttaatatatt cagtgctaat 900
ataataaagt attaataatg tta                                         923
<210>16
<211>153
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>16
Met Val Lys Tyr Leu Leu Leu Ser Ile Leu Gly Leu Ala Phe Leu Ser
 1               5                  10                  15
Glu Ala Ala Ala Arg Lys Ile Pro Lys Val Gly His Thr Phe Phe Gln
            20                  25                  30
Lys Pro Glu Ser Cys Pro Pro Val Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Asp
        35                  40                  45
Ile Gly Ile Ile Asn Glu Asn Gln Arg Val Ser Met Ser Arg Asn Ile
    50                  55                  60
Glu Ser Arg Ser Thr Ser Pro Trp Asn Tyr Thr Val Thr Trp Asp Pro
65                  70                  75                  80
Asn Arg Tyr Pro Ser Glu Val Val Gln Ala Gln Cys Arg Asn Leu Gly
                85                  90                  95
Cys Ile Asn Ala Gln Gly Lys Glu Asp Ile Ser Met Asn Ser Val Pro
            100                 105                 110
Ile Gln Gln Glu Thr Leu Val Val Arg Arg Lys His Gln Gly Cys Ser
        115                 120                 125
Val Ser Phe Gln Leu Glu Lys Val Leu Val Thr Val Gly Cys Thr Cys
    130                 135                 140
Val Thr Pro Val Ile His His Val Gln
145                 150
<210>17
<211>1172
<212>DNA
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>17
gatccacctc acacgaggca caagtgcacc cagcaccagc tgatcaggac gcgcaaacat  60
gagtccaggg agagcttcat ctgtgtctct gatgctgttg ctgctgctga gcctggcggc 120
tacagtgaag gcagcagcga tcatccctca aagctcagcg tgtccaaaca ctgaggccaa 180
ggacttcctc cagaatgtga aggtcaacct caaagtcttt aactcccttg gcgcaaaagt 240
gagctccaga aggccctcag actacctcaa ccgttccacg tcaccctgga ctctccaccg 300
caatgaagac cctgatagat atccctctgt gatctgggaa gctcagtgcc gccaccagcg 360
ctgtgtcaat gcggagggaa agctggacca ccacatgaat tctgttctca tccagcaaga 420
gatcctggtc ctgaagaggg agcctgagag ctgccccttc actttcaggg tcgagaagat 480
gctggtgggt gtgggctgca cctgcgtggc ctcgattgtc cgccaggcag cctaaacaga 540
gacccgcggc tgacccctaa gaaaccccca cgtttctcag caaacttact tgcattttta 600
aaacagttcg tgctattgat tttcagcaag gaatgtggat tcagaggcag attcagaatt 660
gtctgccctc cacaatgaaa agaaggtgta aaggggtccc aaactgcttc gtgtttgttt 720
ttctgtggac tttaaattat ttgtgtattt acaatatccc aagatagctt tgaagcgtaa 780
cttattttaa tgaagtatct acattattat tatgtttctt tctgaagaag acaaaattca 840
agactcagaa attttattat ttaaaaggta aagcctatat ttatatgagc tatttatgaa 900
tctatttatt tttcttcagt atttgaagta ttaagaacat gattttcaga tctacctagg 960
gaagtcctaa gtaagattaa atattaatgg aaatttcagc tttactattt gtttatttaa 1020
ggttctctcc tctgaatggg gtgaaaacca aacttagttt tatgtttaat aactttttaa 1080
attattgaag attcaaaaaa ttggataatt tagctcccta ctctgtttta aaaaaaaatt 1140
gtaacaatat cactgtaata ataaagtttt gg                               1172
<210>18
<211>158
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>18
Met Ser Pro Gly Arg Ala Ser Ser Val Ser Leu Met Leu Leu Leu Leu
 1               5                  10                  15
Leu Ser Leu Ala Ala Thr Val Lys Ala Ala Ala Ile Ile Pro Gln Ser
            20                  25                  30
Ser Ala Cys Pro Asn Thr Glu Ala Lys Asp Phe Leu Gln Asn Val Lys
        35                  40                  45
Val Asn Leu Lys Val Phe Asn Ser Leu Gly Ala Lys Val Ser Ser Arg
    50                  55                  60
Arg Pro Ser Asp Tyr Leu Asn Arg Ser Thr Ser Pro Trp Thr Leu His
65                  70                  75                  80
Arg Asn Glu Asp Pro Asp Arg Tyr Pro Ser Val Ile Trp Glu Ala Gln
                85                  90                  95
Cys Arg His Gln Arg Cys Val Asn Ala Glu Gly Lys Leu Asp His His
            100                 105                 110
Met Asn Ser Val Leu Ile Gln Gln Glu Ile Leu Val Leu Lys Arg Glu
        115                 120                 125
Pro Glu Ser Cys Pro Phe Thr Phe Arg Val Glu Lys Met Leu Val Gly
    130                 135                 140
Val Gly Cys Thr Cys Val Ala Ser Ile Val Arg Gln Ala Ala
145                 150                 155
<210>19
<211>462
<212>DNA
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>19
atggtcaagt ctttgctact gttgatgttg ggacttgcca ttctgaggga ggtagcagct  60
cggaagaacc ccaaagcagg ggttcctgcc ttgcagaagg ctgggaactg tcctcccctg 120
gaggataaca ctgtgagagt tgacattcga atcttcaacc aaaaccaggg catttctgtc 180
ccacgtgaat tccagaaccg ctccagttcc ccatgggatt acaacatcac tcgagacccc 240
caccggttcc cctcagagat cgctgaggcc cagtgcagac actcaggctg catcaatgcc 300
cagggtcagg aagacagcac catgaactcc gtcgccattc agcaagaaat cctggtcctt 360
cggagggagc cccagggctg ttctaattcc ttcaggttgg agaagatgct cctaaaagtt 420
ggctgcacct gtgtcaagcc cattgtccac caagcggcct ga                    462
<210>20
<211>153
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>20
Met Val Lys Ser Leu Leu Leu Leu Met Leu Gly Leu Ala Ile Leu Arg
 1               5                  10                  15
Glu Val Ala Ala Arg Lys Asn Pro Lys Ala Gly Val Pro Ala Leu Gln
            20                  25                  30
Lys Ala Gly Asn Cys Pro Pro Leu Glu Asp Asn Thr Val Arg Val Asp
        35                  40                  45
Ile Arg Ile Phe Asn Gln Asn Gln Gly Ile Ser Val Pro Arg Glu Phe
    50                  55                  60
Gln Asn Arg Ser Ser Ser Pro Trp Asp Tyr Asn Ile Thr Arg Asp Pro
65                  70                  75                  80
His Arg Phe Pro Ser Glu Ile Ala Glu Ala Gln Cys Arg His Ser Gly
                85                  90                  95
Cys Ile Asn Ala Gln Gly Gln Glu Asp Ser Thr Met Asn Ser Val Ala
            100                 105                 110
Ile Gln Gln Glu Ile Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Gln Gly Cys Ser
        115                 120                 125
Asn Ser Phe Arg Leu Glu Lys Met Leu Leu Lys Val Gly Cys Thr Cys
    130                 135                 140
Val Lys Pro Ile Val His Gln Ala Ala
145                 150
<210>21
<211>320
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>21
Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu
 1               5                  10                  15
Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser
            20                  25                  30
Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gln Pro Gly Leu
        35                  40                  45
Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His
    50                  55                  60
Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gln Ile Gln Leu
65                  70                  75                  80
His Phe Ala His Thr Gln Gln Gly Asp Leu Phe Pro Val Ala His Ile
                 85                  90                  95
Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala
            100                 105                 110
Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Arg
        115                 120                 125
Phe Glu Phe Leu Ser Lys Leu Arg His His His Arg Arg Trp Arg Phe
    130                 135                 140
Thr Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Asp Gln Glu Tyr Glu Val Thr
145                 150                 155                 160
Val His His Leu Pro Lys Pro Ile Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Gln
                165                 170                 175
Ser Lys Asn Phe Leu Val Pro Asp Cys Glu His Ala Arg Met Lys Val
            180                 185                 190
Thr Thr Pro Cys Met Ser Ser Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn Ile Thr
        195                 200                 205
Val Glu Thr Leu Glu Ala His Gln Leu Arg Val Ser Phe Thr Leu Trp
    210                 215                 220
Asn Glu Ser Thr His Tyr Gln Ile Leu Leu Thr Ser Phe Pro His Met
225                 230                 235                 240
Glu Asn His Ser Cys Phe Glu His Met His His Ile Pro Ala Pro Arg
                245                 250                 255
Pro Glu Glu Phe His Gln Arg Ser Asn Val Thr Leu Thr Leu Arg Asn
            260                 265                 270
Leu Lys Gly Cys Cys Arg His Gln Val Gln Ile Gln Pro Phe Phe Ser
        275                 280                 285
Ser Cys Leu Asn Asp Cys Leu Arg His Ser Ala Thr Val Ser Cys Pro
     290                 295                 300
Glu Met Pro Asp Thr Pro Glu Pro Ile Pro Asp Tyr Met Pro Leu Trp
305                 310                 315                 320
<210>22
<211>221
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>22
Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu
 1               5                  10                  15
Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu
            20                  25                  30
Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro
        35                  40                  45
Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr
    50                  55                  60
Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala
65                  70                  75                  80
Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val
                85                  90                  95
Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe
            100                 105                 110
Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser
        115                 120                 125
Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro
    130                 135                 140
Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn
145                 150                 155                 160
Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser
                165                 170                 175
Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp
            180                 185                 190
Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala
        195                 200                 205
Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Arg
    210                 215                 220
<210>23
<211>2180
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>23
aactacccag cacagccccc tccgccccct ctggaggctg aagagggatt ccagcccctg  60
ccacccacag acacgggctg actggggtgt ctgcccccct tggggggggg cagcacaggg 120
cctcaggcct gggtgccacc tggcacctag aagatgcctg tgccctggtt cttgctgtcc 180
ttggcactgg gccgaagccc agtggtcctt tctctggaga ggcttgtggg gcctcaggac 240
gctacccact gctctccggg cctctcctgc cgcctctggg acagtgacat actctgcctg 300
cctggggaca tcgtgcctgc tccgggcccc gtgctggcgc ctacgcacct gcagacagag 360
ctggtgctga ggtgccagaa ggagaccgac tgtgacctct gtctgcgtgt ggctgtccac 420
ttggccgtgc atgcctctct ccaggcccaa gtcgtgctct ccttccaggc ctaccctact 480
gcccgctgcg tcctgctgga ggtgcaagtg cctgctgccc ttgtgcagtt tggtcagtct 540
gtgggctctg tggtatatga ctgcttcgag gctgccctag ggagtgaggt acgaatctgg 600
tcctatactc agcccaggta cgagaaggaa ctcaaccaca cacagcagct gcctgccctg 660
ccctggctca acgtgtcagc agatggtgac aacgtgcatc tggttctgaa tgtctctgag 720
gagcagcact tcggcctctc cctgtactgg aatcaggtcc agggcccccc aaaaccccgg 780
tggcacaaaa acctgactgg accgcagatc attaccttga accacacaga cctggttccc 840
tgcctctgta ttcaggtgtg gcctctggaa cctgactccg ttaggacgaa catctgcccc 900
ttcagggagg acccccgcgc acaccagaac ctctggcaag ccgcccgact gcgactgctg 960
accctgcaga gctggctgct ggacgcaccg tgctcgctgc ccgcagaagc ggcactgtgc 1020
tggcgggctc cgggtgggga cccctgccag ccactggtcc caccgctttc ctgggagaac 1080
gtcactgtgg acaaggttct cgagttccca ttgctgaaag gccaccctaa cctctgtgtt 1140
caggtgaaca gctcggagaa gctgcagctg caggagtgct tgtgggctga ctccctgggg 1200
cctctcaaag acgatgtgct actgttggag acacgaggcc cccaggacaa cagatccctc 1260
tgtgccttgg aacccagtgg ctgtacttca ctacccagca aagcctccac gagggcagct 1320
cgccttggag agtacttact acaagacctg cagtcaggcc agtgtctgca gctatgggac 1380
gatgacttgg gagcgctatg ggcctgcccc atggacaaat acatccacaa gcgctgggcc 1440
ctcgtgtggc tggcctgcct actctttgcc gctgcgcttt ccctcatcct ccttctcaaa 1500
aaggatcacg cgaaagcggc cgccaggggc cgcgcggctc tgctcctcta ctcagccgat 1560
gactcgggtt tcgagcgcct ggtgggcgcc ctggcgtcgg ccctgtgcca gctgccgctg 1620
cgcgtggccg tagacctgtg gagccgtcgt gaactgagcg cgcaggggcc cgtggcttgg 1680
tttcacgcgc agcggcgcca gaccctgcag gagggcggcg tggtggtctt gctcttctct 1740
cccggtgcgg tggcgctgtg cagcgagtgg ctacaggatg gggtgtccgg gcccggggcg 1800
cacggcccgc acgacgcctt ccgcgcctcg ctcagctgcg tgctgcccga cttcttgcag 1860
ggccgggcgc ccggcagcta cgtgggggcc tgcttcgaca ggctgctcca cccggacgcc 1920
gtacccgccc ttttccgcac cgtgcccgtc ttcacactgc cctcccaact gccagacttc 1980
ctgggggccc tgcagcagcc tcgcgccccg cgttccgggc ggctccaaga gagagcggag 2040
caagtgtccc gggcccttca gccagccctg gatagctact tccatccccc ggggactccc 2100
gcgccgggac gcggggtggg accaggggcg ggacctgggg cgggggacgg gacttaaata 2160
aaggcagacg ctgtttttct                                             2180
<210>24
<211>667
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>24
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Ala Ser Leu
                85                 90                 95
Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys
            100                 105                 110
Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln
        115                 120                 125
Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser
    130                 135                 140
Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu
145                 150                 155                 160
Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala
                165                 170                 175
Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His
            180                 185                 190
Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro
        195                 200                 205
Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His
    210                 215                 220
Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro
225                 230                 235                 240
Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala
                245                 250                 255
His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln
            260                 265                 270
Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu
        275                 280                 285
Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro
    290                 295                 300
Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu
305                 310                 315                 320
Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys
                325                 330                 335
Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys
            340                 345                 350
Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser
        355                 360                 365
Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala
    370                 375                 380
Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln
385                 390                 395                 400
Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu GlyAla Leu Trp
                405                 410                 415
Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Arg Trp Ala Leu Val Trp
            420                 425                 430
Leu Ala Cys Leu Leu Phe Ala Ala Ala Leu Ser Leu Ile Leu Leu Leu
        435                 440                 445
Lys Lys Asp His Ala Lys Ala Ala Ala Arg Gly Arg Ala Ala Leu Leu
    450                 455                 460
Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser Gly Phe Glu Arg Leu Val Gly Ala Leu
465                 470                 475                 480
Ala Ser Ala Leu Cys Gln Leu Pro Leu Arg Val Ala Val Asp Leu Trp
                485                 490                 495
Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala Gln Gly Pro Val Ala Trp Phe His Ala
            500                 505                 510
Gln Arg Arg Gln Thr Leu Gln Glu Gly Gly Val Val Val Leu Leu Phe
        515                 520                 525
Ser Pro Gly Ala Val Ala Leu Cys Ser Glu Trp Leu Gln Asp Gly Val
    530                 535                 540
Ser Gly Pro Gly Ala His Gly Pro His Asp Ala Phe Arg Ala Ser Leu
545                 550                 555                 560
Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe Leu Gln Gly Arg Ala Pro Gly Ser Tyr
                565                 570                 575
Val Gly Ala Cys Phe Asp Arg Leu Leu His Pro Asp Ala Val Pro Ala
            580                 585                 590
Leu Phe Arg Thr Val Pro Val Phe Thr Leu Pro Ser Gln Leu Pro Asp
        595                 600                 605
Phe Leu Gly Ala Leu Gln Gln Pro Arg Ala Pro Arg Ser Gly Arg Leu
    610                 615                 620
Gln Glu Arg Ala Glu Gln Val Ser Arg Ala Leu Gln Pro Ala Leu Asp
625                 630                 635                 640
Ser Tyr Phe His Pro Pro Gly Thr Pro Ala Pro Gly Arg Gly Val Gly
                645                 650                 655
Pro Gly Ala Gly Pro Gly Ala Gly Asp Gly Thr
            660                 665
<210>25
<211>2269
<212>DNA
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>25
aaatcgaaag cactccagct gaaactgggc ctggagtcca ggctcactgg agtggggaag  60
catggctgga gaggaattct agcccttgct ctctcccagg gacacggggc tgattgtcag 120
caggggcgag gggtctgccc ccccttgggg gggcaggacg gggcctcagg cctgggtgct 180
gtccggcacc tggaagatgc ctgtgtcctg gttcctgctg tccttggcac tgggccgaaa 240
ccctgtggtc gtctctctgg agagactgat ggagcctcag gacactgcac gctgctctct 300
aggcctctcc tgccacctct gggatggtga cgtgctctgc ctgcctggaa gcctccagtc 360
tgccccaggc cctgtgctag tgcctacccg cctgcagacg gagctggtgc tgaggtgtcc 420
acagaagaca gattgcgccc tctgtgtccg tgtggtggtc cacttggccg tgcatgggca 480
ctgggcagag cctgaagaag ctggaaagtc tgattcagaa ctccaggagt ctaggaacgc 540
ctctctccag gcccaggtgg tgctctcctt ccaggcctac cccatcgccc gctgtgccct 600
gctggaggtc caggtgcccg ctgacctggt gcagcctggt cagtccgtgg gttctgcggt 660
atttgactgt ttcgaggcta gtcttggggc tgaggtacag atctggtcct acacgaagcc 720
caggtaccag aaagagctca acctcacaca gcagctgcct gtcctgccct ggctcaatgt 780
gtctacagat ggtgacaatg tccttctgac actggatgtc tctgaggagc aggactttag 840
cttcttactg tacctgcgtc cagtcccgga tgctctcaaa tccttgtggt acaaaaacct 900
gactggacct cagaacatta ctttaaacca cacagacctg gttccctgcc tctgcattca 960
ggtgtggtcg ctagagccag actctgagag ggtcgaattc tgccccttcc gggaagatcc 1020
cggtgcacac aggaacctct ggcacatagc caggctgcgg gtactgtccc caggggtatg 1080
gcagctagat gcgccttgct gtctgccggg caaggtaaca ctgtgctggc aggcaccaga 1140
ccagagtccc tgccagccac ttgtgccacc agtgccccag aagaacgcca ctgtgaatga 1200
gccacaagat ttccagttgg tggcaggcca ccccaacctc tgtgtccagg tgagcacctg 1260
ggagaaggtt cagctgcaag cgtgcttgtg ggctgactcc ttggggccct tcaaggatga 1320
tatgctgtta gtggagatga aaaccggcct caacaacaca tcagtctgtg ccttggaacc 1380
cagtggctgt acaccactgc ccagcatggc ctccacgaga gctgctcgcc tgggagagga 1440
gttgctgcaa gacttccgat cacaccagtg tatgcagctg tggaacgatg acaacatggg 1500
atcgctatgg gcctgcccca tggacaagta catccacagg cgctgggtcc tagtatggct 1560
ggcctgccta ctcttggctg cggcgctttt cttcttcctc cttctaaaaa aggaccgcag 1620
gaaagcggcc cgtggctccc gcacggcctt gctcctccac tccgccgacg gagcgggcta 1680
cgagcgtctg gtgggagcac tggcgtccgc gttgagccag atgccactgc gcgtggccgt 1740
ggacctgtgg agccgccgcg agctgagcgc gcacggagcc ctagcctggt tccaccacca 1800
gcgacgccgt atcctgcagg agggtggcgt ggtaatcctt ctcttctcgc ccgcggccgt 1860
ggcgcagtgt cagcagtggc tgcagctcca gacagtggag cccgggccgc atgacgccct 1920
cgccgcctgg ctcagctgcg tgctacccga tttcctgcaa ggccgggcga ccggccgcta 1980
cgtcggggtc tacttcgacg ggctgctgca cccagactct gtgccctccc cgttccgcgt 2040
cgccccgctc ttctccctgc cctcgcagct gccggctttc ctggatgcac tgcagggagg 2100
ctgctccact tccgcggggc gacccgcgga ccgggtggaa cgagtgaccc aggcgctgcg 2160
gtccgccctg gacagctgta cttctagctc ggaagcccca ggctgctgcg aggaatggga 2220
cctgggaccc tgcactacac tagaataaaa gccgatacag tattcctaa             2269
<210>26
<211>683
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>26
Met Pro Val Ser Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Asn Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Val Ser Leu Glu Arg Leu Met Glu Pro Gln Asp Thr Ala Arg
            20                  25                  30
Cys Ser Leu Gly Leu Ser Cys His Leu Trp Asp Gly Asp Val Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Ser Leu Gln Ser Ala Pro Gly Pro Val Leu Val Pro Thr
    50                  55                  60
Arg Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Pro Gln Lys Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Ala Leu Cys Val Arg Val Val Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Ala Glu Pro Glu Glu Ala Gly Lys Ser Asp Ser Glu Leu Gln Glu Ser
            100                 105                 110
Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr
        115                 120                 125
Pro Ile Ala Arg Cys Ala Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Asp Leu
    130                 135                 140
Val Gln Pro Gly Gln Ser Val Gly Ser Ala Val Phe Asp Cys Phe Glu
145                 150                 155                 160
Ala Ser Leu Gly Ala Glu Val Gln Ile Trp Ser Tyr Thr Lys Pro Arg
                165                 170                 175
Tyr Gln Lys Glu Leu Asn Leu Thr Gln Gln Leu Pro Val Leu Pro Trp
            180                 185                 190
Leu Asn Val Ser Thr Asp Gly Asp Asn Val Leu Leu Thr Leu Asp Val
        195                 200                 205
Ser Glu Glu Gln Asp Phe Ser Phe Leu Leu Tyr Leu Arg Pro Val Pro
    210                 215                 220
Asp Ala Leu Lys Ser Leu Trp Tyr Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Asn
225                 230                 235                 240
Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val
                245                 250                 255
Trp Ser Leu Glu Pro Asp Ser Glu Arg Val Glu Phe Cys Pro Phe Arg
            260                 265                 270
Glu Asp Pro Gly Ala His Arg Asn Leu Trp His Ile Ala Arg Leu Arg
        275                 280                 285
Val Leu Ser Pro Gly Val Trp Gln Leu Asp Ala Pro Cys Cys Leu Pro
    290                 295                 300
Gly Lys Val Thr Leu Cys Trp Gln Ala Pro Asp Gln Ser Pro Cys Gln
305                 310                 315                 320
Pro Leu Val Pro Pro Val Pro Gln Lys Asn Ala Thr Val Asn Glu Pro
                325                 330                 335
Gln Asp Phe Gln Leu Val Ala Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val
            340                 345                 350
Ser Thr Trp Glu Lys Val Gln Leu Gln Ala Cys Leu Trp Ala Asp Ser
        355                 360                 365
Leu Gly Pro Phe Lys Asp Asp Met Leu Leu Val Glu Met Lys Thr Gly
    370                 375                 380
Leu Asn Asn Thr Ser Val Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Pro
385                 390                 395                 400
Leu Pro Ser Met Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Glu Leu
                405                 410                 415
Leu Gln Asp Phe Arg Ser His Gln Cys Met Gln Leu Trp Asn Asp Asp
            420                 425                 430
Asn Met Gly Ser Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Arg
        435                 440                 445
Arg Trp Val Leu Val Trp Leu Ala Cys Leu Leu Leu Ala Ala Ala Leu
    450                 455                 460
Phe Phe Phe Leu Leu Leu Lys Lys Asp Arg Arg Lys Ala Ala Arg Gly
465                 470                 475                 480
Ser Arg Thr Ala Leu Leu Leu His Ser Ala Asp Gly Ala Gly Tyr Glu
                485                 490                 495
Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Ser Ala Leu Ser Gln Met Pro Leu Arg
            500                 505                 510
Val Ala Val Asp Leu Trp Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala His Gly Ala
        515                 520                 525
Leu Ala Trp Phe His His Gln Arg Arg Arg Ile Leu Gln Glu Gly Gly
    530                 535                 540
Val Val Ile Leu Leu Phe Ser Pro Ala Ala Val Ala Gln Cys Gln Gln
545                 550                 555                 560
Trp Leu Gln Leu Gln Thr Val Glu Pro Gly Pro His Asp Ala Leu Ala
                565                 570                 575
Ala Trp Leu Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe Leu Gln Gly Arg Ala Thr
            580                 585                 590
Gly Arg Tyr Val Gly Val Tyr Phe Asp Gly Leu Leu His Pro Asp Ser
        595                 600                 605
Val Pro Ser Pro Phe Arg Val Ala Pro Leu Phe Ser Leu Pro Ser Gln
    610                 615                 620
Leu Pro Ala Phe Leu Asp Ala Leu Gln Gly Gly Cys Ser Thr Ser Ala
625                 630                 635                 640
Gly Arg Pro Ala Asp Arg Val Glu Arg Val Thr Gln Ala Leu Arg Ser
                645                 650                 655
Ala Leu Asp Ser Cys Thr Ser Ser Ser Glu Ala Pro Gly Cys Cys Glu
            660                 665                 670
Glu Trp Asp Leu Gly Pro Cys Thr Thr Leu Glu
       675                 680
<210>27
<211>449
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>27
Met Pro Val Ser Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Asn Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Val Ser Leu Glu Arg Leu Met Glu Pro Gln Asp Thr Ala Arg
            20                  25                  30
Cys Ser Leu Gly Leu Ser Cys His Leu Trp Asp Gly Asp Val Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Ser Leu Gln Ser Ala Pro Gly Pro Val Leu Val Pro Thr
    50                  55                  60
Arg Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Pro Gln Lys Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Ala Leu Cys Val Arg Val Val Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Ala Glu Pro Glu Glu Ala Gly Lys Ser Asp Ser Glu Leu Gln Glu Ser
            100                 105                 110
Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr
        115                 120                 125
Pro Ile Ala Arg Cys Ala Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Asp Leu
    130                 135                 140
Val Gln Pro Gly Gln Ser Val Gly Ser Ala Val Phe Asp Cys Phe Glu
145                 150                 155                 160
Ala Ser Leu Gly Ala Glu Val Gln Ile Trp Ser Tyr Thr Lys Pro Arg
                165                 170                 175
Tyr Gln Lys Glu Leu Asn Leu Thr Gln Gln Leu Pro Val Leu Pro Trp
            180                 185                 190
Leu Asn Val Ser Thr Asp Gly Asp Asn Val Leu Leu Thr Leu Asp Val
        195                 200                 205
Ser Glu Glu Gln Asp Phe Ser Phe Leu Leu Tyr Leu Arg Pro Val Pro
    210                 215                 220
Asp Ala Leu Lys Ser Leu Trp Tyr Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Asn
225                 230                 235                 240
Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val
                245                 250                 255
Trp Ser Leu Glu Pro Asp Ser Glu Arg Val Glu Phe Cys Pro Phe Arg
            260                 265                 270
Glu Asp Pro Gly Ala His Arg Asn Leu Trp His Ile Ala Arg Leu Arg
        275                 280                 285
Val Leu Ser Pro Gly Val Trp Gln Leu Asp Ala Pro Cys Cys Leu Pro
    290                 295                 300
Gly Lys Val Thr Leu Cys Trp Gln Ala Pro Asp Gln Ser Pro Cys Gln
305                 310                 315                 320
Pro Leu Val Pro Pro Val Pro Gln Lys Asn Ala Thr Val Asn Glu Pro
                325                 330                 335
Gln Asp Phe Gln Leu Val Ala Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val
            340                 345                 350
Ser Thr Trp Glu Lys Val Gln Leu GlnAla Cys Leu Trp Ala Asp Ser
        355                 360                 365
Leu Gly Pro Phe Lys Asp Asp Met Leu Leu Val Glu Met Lys Thr Gly
    370                 375                 380
Leu Asn Asn Thr Ser Val Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Pro
385                 390                 395                 400
Leu Pro Ser Met Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Glu Leu
                405                 410                 415
Leu Gln Asp Phe Arg Ser His Gln Cys Met Gln Leu Trp Asn Asp Asp
            420                 425                 430
Asn Met Gly Ser Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Arg
        435                 440                 445
Arg
<210>28
<211>222
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>28
Lys Ser Leu Trp Tyr Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Asn Ile Thr Leu
 1               5                  10                  15
Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Ser Leu
            20                  25                  30
Glu Pro Asp Ser Glu Arg Val Glu Phe Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro
        35                  40                  45
Gly Ala His Arg Asn Leu Trp His Ile Ala Arg Leu Arg Val Leu Ser
    50                  55                  60
Pro Gly Val Trp Gln Leu Asp Ala Pro Cys Cys Leu Pro Gly Lys Val
65                  70                  75                  80
Thr Leu Cys Trp Gln Ala Pro Asp Gln Ser Pro Cys Gln Pro Leu Val
                85                  90                  95
Pro Pro Val Pro Gln Lys Asn Ala Thr Val Asn Glu Pro Gln Asp Phe
            100                 105                 110
Gln Leu Val Ala Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Ser Thr Trp
        115                 120                 125
Glu Lys Val Gln Leu Gln Ala Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro
    130                 135                 140
Phe Lys Asp Asp Met Leu Leu Val Glu Met Lys Thr Gly Leu Asn Asn
145                 150                 155                 160
Thr Ser Val Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Pro Leu Pro Ser
                165                 170                 175
Met Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Glu Leu Leu Gln Asp
            180                 185                 190
Phe Arg Ser His Gln Cys Met Gln Leu Trp Asn Asp Asp Asn Met Gly
        195                 200                 205
Ser Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Arg Arg
    210                 215                 220
<210>29
<211>2287
<212>DNA
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>29
aaatcgaaag cactccagct gaaactgggc ctggagtcca ggctcactgg agtggggaag  60
catggctgga gaggaattct agcccttgct ctctcccagg gacacggggc tgattgtcag 120
caggggcgag gggtctgccc ccccttgggg gggcaggacg gggcctcagg cctgggtgct 180
gtccggcacc tggaagatgc ctgtgtcctg gttcctgctg tccttggcac tgggccgaaa 240
ccctgtggtc gtctctctgg agagactgat ggagcctcag gacactgcac gctgctctct 300
aggcctctcc tgccacctct gggatggtga cgtgctctgc ctgcctggaa gcctccagtc 360
tgccccaggc cctgtgctag tgcctacccg cctgcagacg gagctggtgc tgaggtgtcc 420
acagaagaca gattgcgccc tctgtgtccg tgtggtggtc cacttggccg tgcatgggca 480
ctgggcagag cctgaagaag ctggaaagtc tgattcagaa ctccaggagt ctaggaacgc 540
ctctctccag gcccaggtgg tgctctcctt ccaggcctac cccatcgccc gctgtgccct 600
gctggaggtc caggtgcccg ctgacctggt gcagcctggt cagtccgtgg gttctgcggt 660
atttgactgt ttcgaggcta gtcttggggc tgaggtacag atctggtcct acacgaagcc 720
caggtaccag aaagagctca acctcacaca gcagctgcct gactgcaggg gtcttgaagt 780
ccgggacagc atccagagct gctgggatgg tgacaatgtc cttctgacac tggatgtctc 840
tgaggagcag gactttagct tcttactgta cctgcgtcca gtcccggatg ctctcaaatc 900
cttgtggtac aaaaacctga ctggacctca gaacattact ttaaaccaca cagacctggt 960
tccctgcctc tgcattcagg tgtggtcgct agagccagac tctgagaggg tcgaattctg 1020
ccccttccgg gaagatcccg gtgcacacag gaacctctgg cacatagcca ggctgcgggt 1080
actgtcccca ggggtatggc agctagatgc gccttgctgt ctgccgggca aggtaacact 1140
gtgctggcag gcaccagacc agagtccctg ccagccactt gtgccaccag tgccccagaa 1200
gaacgccact gtgaatgagc cacaagattt ccagttggtg gcaggccacc ccaacctctg 1260
tgtccaggtg agcacctggg agaaggttca gctgcaagcg tgcttgtggg ctgactcctt 1320
ggggcccttc aaggatgata tgctgttagt ggagatgaaa accggcctca acaacacatc 1380
agtctgtgcc ttggaaccca gtggctgtac accactgccc agcatggcct ccacgagagc 1440
tgctcgcctg ggagaggagt tgctgcaaga cttccgatca caccagtgta tgcagctgtg 1500
gaacgatgac aacatgggat cgctatgggc ctgccccatg gacaagtaca tccacaggcg 1560
ctgggtccta gtatggctgg cctgcctact cttggctgcg gcgcttttct tcttcctcct 1620
tctaaaaaag gaccgcagga aagcggcccg tggctcccgc acggccttgc tcctccactc 1680
cgccgacgga gcgggctacg agcgtctggt gggagcactg gcgtccgcgt tgagccagat 1740
gccactgcgc gtggccgtgg acctgtggag ccgccgcgag ctgagcgcgc acggagccct 1800
agcctggttc caccaccagc gacgccgtat cctgcaggag ggtggcgtgg taatccttct 1860
cttctcgccc gcggccgtgg cgcagtgtca gcagtggctg cagctccaga cagtggagcc 1920
cgggccgcat gacgccctcg ccgcctggct cagctgcgtg ctacccgatt tcctgcaagg 1980
ccgggcgacc ggccgctacg tcggggtcta cttcgacggg ctgctgcacc cagactctgt 2040
gccctccccg ttccgcgtcg ccccgctctt ctccctgccc tcgcagctgc cggctttcct 2100
ggatgcactg cagggaggct gctccacttc cgcggggcga cccgcggacc gggtggaacg 2160
agtgacccag gcgctgcggt ccgccctgga cagctgtact tctagctcgg aagccccagg 2220
ctgctgcgag gaatgggacc tgggaccctg cactacacta gaataaaagc cgatacagta 2280
ttcctaa                                                           2287
<210>30
<211>689
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>30
Met Pro Val Ser Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Asn Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Val Ser Leu Glu Arg Leu Met Glu Pro Gln Asp Thr Ala Arg
            20                  25                  30
Cys Ser Leu Gly Leu Ser Cys His Leu Trp Asp Gly Asp Val Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Ser Leu Gln Ser Ala Pro Gly Pro Val Leu Val Pro Thr
    50                  55                  60
Arg Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Pro Gln Lys Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Ala Leu Cys Val Arg Val Val Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Ala Glu Pro Glu Glu Ala Gly Lys Ser Asp Ser Glu Leu Gln Glu Ser
            100                 105                 110
Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr
        115                 120                 125
Pro Ile Ala Arg Cys Ala Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Asp Leu
    130                 135                 140
Val Gln Pro Gly Gln Ser Val Gly Ser Ala Val Phe Asp Cys Phe Glu
145                 150                 155                 160
Ala Ser Leu Gly Ala Glu Val Gln Ile Trp Ser Tyr Thr Lys Pro Arg
                165                 170                 175
Tyr Gln Lys Glu Leu Asn Leu Thr Gln Gln Leu Pro Asp Cys Arg Gly
            180                 185                 190
Leu Glu Val Arg Asp Ser Ile Gln Ser Cys Trp Asp Gly Asp Asn Val
        195                 200                 205
Leu Leu Thr Leu Asp Val Ser Glu Glu Gln Asp Phe Ser Phe Leu Leu
    210                 215                 220
Tyr Leu Arg Pro Val Pro Asp Ala Leu Lys Ser Leu Trp Tyr Lys Asn
225                 230                 235                 240
Leu Thr Gly Pro Gln Asn Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro
                245                 250                 255
Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Ser Leu Glu Pro Asp Ser Glu Arg Val
            260                 265                 270
Glu Phe Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Gly Ala His Arg Asn Leu Trp
        275                 280                 285
His Ile Ala Arg Leu Arg Val Leu Ser Pro Gly Val Trp Gln Leu Asp
    290                 295                 300
Ala Pro Cys Cys Leu Pro Gly Lys Val Thr Leu Cys Trp Gln Ala Pro
305                 310                 315                 320
Asp Gln Ser Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Val Pro Gln Lys Asn
                325                 330                 335
Ala Thr Val Asn Glu Pro Gln Asp Phe Gln Leu Val Ala Gly His Pro
            340                 345                 350
Asn Leu Cys Val Gln Val Ser Thr Trp Glu Lys Val Gln Leu Gln Ala
        355                 360                 365
Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Phe Lys Asp Asp Met Leu Leu
    370                 375                 380
Val Glu Met Lys Thr Gly Leu Asn Asn Thr Ser Val Cys Ala Leu Glu
385                 390                 395                 400
Pro Ser Gly Cys Thr Pro Leu Pro Ser Met Ala Ser Thr Arg Ala Ala
                405                 410                 415
Arg Leu Gly Glu Glu Leu Leu Gln Asp Phe Arg Ser His Gln Cys Met
            420                 425                 430
Gln Leu Trp Asn Asp Asp Asn Met Gly Ser Leu Trp Ala Cys Pro Met
        435                 440                 445
Asp Lys Tyr Ile His Arg Arg Trp Val Leu Val Trp Leu Ala Cys Leu
    450                 455                 460
Leu Leu Ala Ala Ala Leu Phe Phe Phe Leu Leu Leu Lys Lys Asp Arg
465                 470                 475                 480
Arg Lys Ala Ala Arg Gly Ser Arg Thr Ala Leu Leu Leu His Ser Ala
                485                 490                 495
Asp Gly Ala Gly Tyr Glu Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Ser Ala Leu
             500                 505                 510
Ser Gln Met Pro Leu Arg Val Ala Val Asp Leu Trp Ser Arg Arg Glu
        515                 520                 525
Leu Ser Ala His Gly Ala Leu Ala Trp Phe His His Gln Arg Arg Arg
    530                 535                 540
Ile Leu Gln Glu Gly Gly Val Val Ile Leu Leu Phe Ser Pro Ala Ala
545                 550                 555                 560
Val Ala Gln Cys Gln Gln Trp Leu Gln Leu Gln Thr Val Glu Pro Gly
                565                 570                 575
Pro His Asp Ala Leu Ala Ala Trp Leu Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe
            580                 585                 590
Leu Gln Gly Arg Ala Thr Gly Arg Tyr Val Gly Val Tyr Phe Asp Gly
        595                 600                 605
Leu Leu His Pro Asp Ser Val Pro Ser Pro Phe Arg Val Ala Pro Leu
    610                 615                 620
Phe Ser Leu Pro Ser Gln Leu Pro Ala Phe Leu Asp Ala Leu Gln Gly
625                 630                 635                 640
Gly Cys Ser Thr Ser Ala Gly Arg Pro Ala Asp Arg Val Glu Arg Val
                645                 650                 655
Thr Gln Ala Leu Arg Ser Ala Leu Asp Ser Cys Thr Ser Ser Ser Glu
            660                 665                 670
Ala Pro Gly Cys Cys Glu Glu Trp Asp Leu Gly Pro Cys Thr Thr Leu
        675                 680                 685
Glu
<210>31
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>31
tcccgtcccc cgccccaggt c                                    21
<210>32
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>32
ctctccatcc ttatctttca tcaac                                25
<210>33
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>33
ctctctgctg gctaaacaaa acac                                 24
<210>34
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>34
ctcatattgc tcaactgtgt gaaaag                              26
<210>35
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>35
tagaagccac ctgaacacaa atctg                               25
<210>36
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>36
atcttgcgtt gtatgttgaa aatcaatt                            28
<210>37
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>37
ttctccacca ggtaaacaag tctac                               25
<210>38
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>38
ctctccaggc ccaagtcgtg ctct                               24
<210>39
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>39
ttgtcctggg ggcctcgtgt ctcc                                24
<210>40
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>40
acgaagccca ggtaccagaa agag                               24
<210>41
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>41
aaaagcgccg cagccaagag tagg                              24
<210>42
<211>1293
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>42
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc  60
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 120
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 180
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 240
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 300
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 360
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 420
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 480
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgccc tgccctggct caacgtgtca 540
gcagatggtg acaacgtgca tctggttctg aatgtctctg aggagcagca cttcggcctc 600
tccctgtact ggaatcaggt ccagggcccc ccaaaacccc ggtggcacaa aaacctgact 660
ggaccgcaga tcattacctt gaaccacaca gacctggttc cctgcctctg tattcaggtg 720
tggcctctgg aacctgactc cgttaggacg aacatctgcc ccttcaggga ggacccccgc 780
gcacaccaga acctctggca agccgcccga ctgcgactgc tgaccctgca gagctggctg 840
ctggacgcac cgtgctcgct gcccgcagaa gcggcactgt gctggcgggc tccgggtggg 900
gacccctgcc agccactggt cccaccgctt tcctgggaga acgtcactgt ggacaaggtt 960
ctcgagttcc cattgctgaa aggccaccct aacctctgtg ttcaggtgaa cagctcggag 1020
aagctgcagc tgcaggagtg cttgtgggct gactccctgg ggcctctcaa agacgatgtg 1080
ctactgttgg agacacgagg cccccaggac aacagatccc tctgtgcctt ggaacccagt 1140
ggctgtactt cactacccag caaagcctcc acgagggcag ctcgccttgg agagtactta 1200
ctacaagacc tgcagtcagg ccagtgtctg cagctatggg acgatgactt gggagcgcta 1260
tgggcctgcc ccatggacaa atacatccac aag                              1293
<210>43
<211>431
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>43
Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His Cys Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15
Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys Leu Pro Gly Asp
            20                  25                  30
Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr His Leu Gln Thr
        35                  40                  45
Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys Asp Leu Cys Leu
    50                  55                  60
Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp Glu Glu Pro Glu
65                  70                  75                  80
Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val Glu Glu Pro
                85                  90                  95
Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr
            100                 105                 110
Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Ala Leu
        115                 120                 125
Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp Cys Phe Glu
    130                 135                 140
Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg lle Trp Ser Tyr Thr Gln Pro Arg
145                 150                 155                 160
Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala Leu Pro Trp
                165                 170                 175
Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val
            180                 185                 190
Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln
        195                 200                 205
Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile
    210                 215                 220
Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val
225                 230                 235                 240
Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg
                245                 250                 255
Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg
            260                 265                 270
Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro
         275                 280                 285
Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln
    290                 295                 300
Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val
305                 310                 315                 320
Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val
                325                 330                 335
Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser
            340                 345                 350
Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro
        355                 360                 365
Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser
    370                 375                 380
Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp
                405                 410                 415
Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys
          420                 425                 430
<210>44
<211>699
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>44
gagcccagag ggcccacaat caagccctgt cctccatgca aatgcccagc acctaacctc  60
ttgggtggac catccgtctt catcttccct ccaaagatca aggatgtact catgatctcc 120
ctgagcccca tagtcacatg tgtggtggtg gatgtgagcg aggatgaccc agatgtccag 180
atcagctggt ttgtgaacaa cgtggaagta cacacagctc agacacaaac ccatagagag 240
gattacaaca gtactctccg ggtggtcagt gccctcccca tccagcacca ggactggatg 300
agtggcaagg agttcaaatg caaggtcaac aacaaagacc tcccagcgcc catcgagaga 360
accatctcaa aacccaaagg gtcagtaaga gctccacagg tatatgtctt gcctccacca 420
gaagaagaga tgactaagaa acaggtcact ctgacctgca tggtcacaga cttcatgcct 480
gaagacattt acgtggagtg gaccaacaac gggaaaacag agctaaacta caagaacact 540
gaaccagtcc tggactctga tggttcttac ttcatgtaca gcaagctgag agtggaaaag 600
aagaactggg tggaaagaaa tagctactcc tgttcagtgg tccacgaggg tctgcacaat 660
caccacacga ctaagagctt ctcccggact ccgggtaaa                        699
<210>45
<211>233
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>45
Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro
 1               5                  10                  15
Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys
            20                  25                  30
Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val
        35                  40                  45
Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe
    50                  55                  60
Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu
65                  70                  75                  80
Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His
                85                  90                  95
Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys
            100                 105                 110
Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser
        115                 120                 125
Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met
    130                 135                 140
Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro
145                 150                 155                 160
Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn
                165                 170                 175
Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met
            180                 185                 190
Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser
        195                 200                 205
Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr
    210                 215                 220
Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
225                 230
<210>46
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>46
gtttcgctca gccaggaaat ccatgccgag ttgagacgct tccgtagact ggagaggctt 60
gtggggcct                                                         69
<210>47
<211>36
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>47
tgtgggccct ctgggctcct tgtggatgta tttgtc                         36
<210>48
<211>36
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>48
gacaaataca tccacaagga gcccagaggg cccaca                         36
<210>49
<211>55
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>49
caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagattattt acccggagtc cggga    55
<210>50
<211>76
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>50
caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagattattc catgggcatg tattcttcct 60
tgtggatgta tttgtc                                                 76
<210>51
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>C端his标签
<400>51
Gly Ser Gly Gly His His His His His His
 1               5                  10
<210>52
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>C端FLAG标签
<400>52
Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
 1               5                  10
<210>53
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Glu-Glu标签
<400>53
Glu Glu Tyr Met Pro Met Glu
 1               5
<210>54
<211>85
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>54
caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagattagtg atggtgatgg tgatgtccac 60
cagatccctt gtggatgtat ttgtc                                       85
<210>55
<211>85
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>55
caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagattactt atcatcatca tccttataat 60
cggatccctt gtggatgtat ttgtc                                       85
<210>56
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>56
acgaagccca ggtaccagaa agag                                        24
<210>57
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>57
aaaagcgccg cagccaagag tagg                                        24
<210>58
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>58
cgtaagcggt ggcggttttc                                            20
<210>59
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>59
tgggcagggc acagtcacag                                            20
<210>60
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>60
acttgccatt ctgagggagg tagc                     24
<210>61
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>61
cacaggtgca gccaactttt agga                     24
<210>62
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>62
gtgggccgct ctaggcacca                          20
<210>63
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物
<400>63
cggttggcct tagggttcag ggggg                    25
<210>64
<211>2127
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>64
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt  60
tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagactgga gaggcttgtg 120
gggcctcagg acgctaccca ctgctctccg ggcctctcct gccgcctctg ggacagtgac 180
atactctgcc tgcctgggga catcgtgcct gctccgggcc ccgtgctggc gcctacgcac 240
ctgcagacag agctggtgct gaggtgccag aaggagaccg actgtgacct ctgtctgcgt 300
gtggctgtcc acttggccgt gcatgggcac tgggaagagc ctgaagatga ggaaaagttt 360
ggaggagcag ctgactcagg ggtggaggag cctaggaatg cctctctcca ggcccaagtc 420
gtgctctcct tccaggccta ccctactgcc cgctgcgtcc tgctggaggt gcaagtgcct 480
gctgcccttg tgcagtttgg tcagtctgtg ggctctgtgg tatatgactg cttcgaggct 540
gccctaggga gtgaggtacg aatctggtcc tatactcagc ccaggtacga gaaggaactc 600
aaccacacac agcagctgcc tgccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780
accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840
gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900
tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960
tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020
ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 1080
ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag 1140
gagtgcttgt gggctgactc cctggggcct ctcaaagacg atgtgctact gttggagaca 1200
cgaggccccc aggacaacag atccctctgt gccttggaac ccagtggctg tacttcacta 1260
cccagcaaag cctccacgag ggcagctcgc cttggagagt acttactaca agacctgcag 1320
tcaggccagt gtctgcagct atgggacgat gacttgggag cgctatgggc ctgccccatg 1380
gacaaataca tccacaaggg aggaagtggc ggaggaacag gaagtttggt ccctcgtgga 1440
agcgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 1500
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 1560
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 1620
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 1680
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1740
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1800
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1860
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1920
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1980
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 2040
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 2100
agcctctccc tgtctccggg taaataa                                     2127
<210>65
<211>708
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>65
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
 1               5                  10                  15
Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg
            20                  25                  30
Phe Arg Arg Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His Cys
        35                  40                  45
Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys Leu
    50                  55                  60
Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr His
65                  70                  75                  80
Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys Asp
                85                  90                  95
Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp Glu
            100                 105                 110
Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val
        115                 120                 125
Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe
    130                 135                 140
Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro
145                 150                 155                 160
Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp
                165                 170                 175
Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr
            180                 185                 190
Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala
        195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                  215                 220
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
            260                 265                 270
Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys
        275                 280                 285
Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala
    290                 295                 300
Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys
305                 310                 315                 320
Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp
                325                 330                 335
Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val
            340                 345                 350
Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys
        355                 360                 365
Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp
    370                  375                 380
Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr
385                 390                 395                 400
Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly
                405                 410                 415
Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly
            420                 425                 430
Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp
        435                 440                 445
Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile
    450                 455                 460
His Lys Gly Gly Ser Gly Gly Gly Thr Gly Ser Leu Val Pro Arg Gly
465                 470                 475                 480
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
                485                 490                 495
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
            500                 505                 510
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
        515                 520                 525
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
    530                 535                 540
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
545                 550                 555                 560
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                565                 570                 575
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
             580                 585                 590
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
        595                 600                 605
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
    610                 615                 620
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
625                 630                 635                 640
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
                645                 650                 655
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
            660                 665                 670
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
        675                 680                 685
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
    690                 695                 700
Ser Pro Gly Lys
705
<210>66
<211>1416
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的插入物
<400>66
agccaggaaa tccatgccga gttgagacgc ttccgtagac tggagaggct tgtggggcct  60
caggacgcta cccactgctc tccgggcctc tcctgccgcc tctgggacag tgacatactc 120
tgcctgcctg gggacatcgt gcctgctccg ggccccgtgc tggcgcctac gcacctgcag 180
acagagctgg tgctgaggtg ccagaaggag accgactgtg acctctgtct gcgtgtggct 240
gtccacttgg ccgtgcatgg gcactgggaa gagcctgaag atgaggaaaa gtttggagga 300
gcagctgact caggggtgga ggagcctagg aatgcctctc tccaggccca agtcgtgctc 360
tccttccagg cctaccctac tgcccgctgc gtcctgctgg aggtgcaagt gcctgctgcc 420
cttgtgcagt ttggtcagtc tgtgggctct gtggtatatg actgcttcga ggctgcccta 480
gggagtgagg tacgaatctg gtcctatact cagcccaggt acgagaagga actcaaccac 540
acacagcagc tgcctgccct gccctggctc aacgtgtcag cagatggtga caacgtgcat 600
ctggttctga atgtctctga ggagcagcac ttcggcctct ccctgtactg gaatcaggtc 660
cagggccccc caaaaccccg gtggcacaaa aacctgactg gaccgcagat cattaccttg 720
aaccacacag acctggttcc ctgcctctgt attcaggtgt ggcctctgga acctgactcc 780
gttaggacga acatctgccc cttcagggag gacccccgcg cacaccagaa cctctggcaa 840
gccgcccgac tgcgactgct gaccctgcag agctggctgc tggacgcacc gtgctcgctg 900
cccgcagaag cggcactgtg ctggcgggct ccgggtgggg acccctgcca gccactggtc 960
ccaccgcttt cctgggagaa cgtcactgtg gacaaggttc tcgagttccc attgctgaaa 1020
ggccacccta acctctgtgt tcaggtgaac agctcggaga agctgcagct gcaggagtgc 1080
ttgtgggctg actccctggg gcctctcaaa gacgatgtgc tactgttgga gacacgaggc 1140
ccccaggaca acagatccct ctgtgccttg gaacccagtg gctgtacttc actacccagc 1200
aaagcctcca cgagggcagc tcgccttgga gagtacttac tacaagacct gcagtcaggc 1260
cagtgtctgc agctatggga cgatgacttg ggagcgctat gggcctgccc catggacaaa 1320
tacatccaca agggaggaag tggcggagga acaggaagtt tggtccctcg tggaagcgac 1380
aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaa                           1416
<210>67
<211>2154
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>67
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60
tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagactgga gaggcttgtg 120
gggcctcagg acgctaccca ctgctctccg ggcctctcct gccgcctctg ggacagtgac 180
atactctgcc tgcctgggga catcgtgcct gctccgggcc ccgtgctggc gcctacgcac 240
ctgcagacag agctggtgct gaggtgccag aaggagaccg actgtgacct ctgtctgcgt 300
gtggctgtcc acttggccgt gcatgggcac tgggaagagc ctgaagatga ggaaaagttt 360
ggaggagcag ctgactcagg ggtggaggag cctaggaatg cctctctcca ggcccaagtc 420
gtgctctcct tccaggccta ccctactgcc cgctgcgtcc tgctggaggt gcaagtgcct 480
gctgcccttg tgcagtttgg tcagtctgtg ggctctgtgg tatatgactg cttcgaggct 540
gccctaggga gtgaggtacg aatctggtcc tatactcagc ccaggtacga gaaggaactc 600
aaccacacac agcagctgcc tgccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780
accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840
gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900
tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960
tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020
ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 1080
ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag 1140
gagtgcttgt gggctgactc cctggggcct ctcaaagacg atgtgctact gttggagaca 1200
cgaggccccc aggacaacag atccctctgt gccttggaac ccagtggctg tacttcacta 1260
cccagcaaag cctccacgag ggcagctcgc cttggagagt acttactaca agacctgcag 1320
tcaggccagt gtctgcagct atgggacgat gacttgggag cgctatgggc ctgccccatg 1380
gacaaataca tccacaaggg aggtgggggc tccggcgggg gtggaagcgg tggaggcggg 1440
tcggggggcg gaggtagtga gcccaaatct tcagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 1500
ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 1560
accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 1620
gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 1680
aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 1740
caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1800
gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1860
accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1920
aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1980
aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 2040
ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 2100
gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaa       2154
<210>68
<211>718
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>68
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
 1               5                  10                  15
Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg
            20                  25                  30
Phe Arg Arg Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His Cys
        35                  40                  45
Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys Leu
    50                  55                  60
Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr His
65                  70                  75                  80
Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys Asp
                85                  90                  95
Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp Glu
            100                 105                 110
Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val
        115                 120                 125
Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe
    130                 135                 140
Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro
145                 150                 155                 160
Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp
                165                 170                 175
Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr
            180                 185                 190
Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala
        195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
            260                 265                 270
Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys
        275                 280                 285
Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala
    290                 295                 300
Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys
305                 310                 315                 320
Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp
                325                 330                 335
Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val
            340                 345                 350
Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys
        355                  360                 365
Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp
    370                 375                 380
Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr
385                 390                 395                 400
Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly
                405                 410                 415
Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly
            420                 425                 430
Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp
        435                 440                 445
Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile
    450                 455                 460
His Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
465                 470                 475                 480
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
                485                 490                 495
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
            500                 505                 510
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
        515                 520                 525
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
    530                 535                 540
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
545                 550                 555                 560
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
                565                 570                 575
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
            580                 585                 590
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
        595                 600                 605
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
    610                 615                 620
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
625                 630                 635                 640
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
                645                 650                 655
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
            660                 665                 670
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
        675                 680                 685
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
    690                 695                 700
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
705                 710                 715
<210>69
<211>2052
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>69
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgccc tgccctggct caacgtgtca 600
gcagatggtg acaacgtgca tctggttctg aatgtctctg aggagcagca cttcggcctc 660
tccctgtact ggaatcaggt ccagggcccc ccaaaacccc ggtggcacaa aaacctgact 720
ggaccgcaga tcattacctt gaaccacaca gacctggttc cctgcctctg tattcaggtg 780
tggcctctgg aacctgactc cgttaggacg aacatctgcc ccttcaggga ggacccccgc 840
gcacaccaga acctctggca agccgcccga ctgcgactgc tgaccctgca gagctggctg 900
ctggacgcac cgtgctcgct gcccgcagaa gcggcactgt gctggcgggc tccgggtggg 960
gacccctgcc agccactggt cccaccgctt tcctgggaga acgtcactgt ggacaaggtt 1020
ctcgagttcc cattgctgaa aggccaccct aacctctgtg ttcaggtgaa cagctcggag 1080
aagctgcagc tgcaggagtg cttgtgggct gactccctgg ggcctctcaa agacgatgtg 1140
ctactgttgg agacacgagg cccccaggac aacagatccc tctgtgcctt ggaacccagt 1200
ggctgtactt cactacccag caaagcctcc acgagggcag ctcgccttgg agagtactta 1260
ctacaagacc tgcagtcagg ccagtgtctg cagctatggg acgatgactt gggagcgcta 1320
tgggcctgcc ccatggacaa atacatccac aaggagccca aatcttcaga caaaactcac 1380
acatgcccac cgtgcccagc acctgaagcc gagggggcac cgtcagtctt cctcttcccc 1440
ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 1500
gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 1560
cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 1620
gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1680
aacaaagccc tcccatcctc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 1740
gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc 1800
ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1860
gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga cggctccttc 1920
ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1980
tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 2040
ccgggtaaat aa                                                     2052
<210>70
<211>683
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>70
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu
        195                 200                 205
Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp
    210                 215                 220
Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr
225                 230                 235                 240
Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu
                245                 250                 255
Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile
            260                 265                 270
Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala
        275                 280                 285
Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro
    290                 295                 300
Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly
305                 310                 315                 320
Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr
                325                 330                 335
Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu
            340                 345                 350
Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu
        355                 360                 365
Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu
    370                  375                 380
Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser
385                 390                 395                 400
Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu
                405                 410                 415
Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu
            420                 425                 430
Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr
        435                 440                 445
Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
    450                 455                 460
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
465                 470                 475                 480
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
                485                 490                 495
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
            500                 505                 510
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
        515                 520                 525
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
    530                 535                 540
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
545                 550                 555                 560
Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
                565                 570                 575
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
            580                 585                 590
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
        595                 600                 605
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
    610                 615                 620
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
625                 630                 635                 640
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                645                 650                 655
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
            660                 665                 670
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        675                 680
<210>71
<211>2130
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>鼠类信号肽和鼠类IL-17RA的外显子1-6，
人类IL-17RC的外显子8-16，连接物和Fc10
<400>71
atggcgattc ggcgctgctg gccacgggtc gtccccgggc ccgcgctggg atggctgctt 60
ctgctgctga acgttctggc cccgggccgc gcctccccgc gcctcctcga cttcccggct 120
ccggtctgcg cgcaggaggg gctgagctgc agagtcaaga atagtacttg tctggatgac 180
agctggatcc accccaaaaa cctgaccccg tcttccccaa aaaacatcta tatcaatctt 240
agtgtttcct ctacccagca cggagaatta gtccctgtgt tgcatgttga gtggaccctg 300
cagacagatg ccagcatcct gtacctcgag ggtgcagagc tgtccgtcct gcagctgaac 360
accaatgagc ggctgtgtgt caagttccag tttctgtcca tgctgcagca tcaccgtaag 420
cggtggcggt tttccttcag ccactttgtg gtagatcctg gccaggagta tgaagtgact 480
gttcaccacc tgccgaagcc catccctgat ggggacccaa accacaaatc caagatcatc 540
tttgtgcctg actgtgagga cagcaagatg aagatgacta cctcatgcgt gagctcagcc 600
ctgccctggc tcaacgtgtc agcagatggt gacaacgtgc atctggttct gaatgtctct 660
gaggagcagc acttcggcct ctccctgtac tggaatcagg tccagggccc cccaaaaccc 720
cggtggcaca aaaacctgac tggaccgcag atcattacct tgaaccacac agacctggtt 780
ccctgcctct gtattcaggt gtggcctctg gaacctgact ccgttaggac gaacatctgc 840
cccttcaggg aggacccccg cgcacaccag aacctctggc aagccgcccg actgcgactg 900
ctgaccctgc agagctggct gctggacgca ccgtgctcgc tgcccgcaga agcggcactg 960
tgctggcggg ctccgggtgg ggacccctgc cagccactgg tcccaccgct ttcctgggag 1020
aacgtcactg tggacaaggt tctcgagttc ccattgctga aaggccaccc taacctctgt 1080
gttcaggtga acagctcgga gaagctgcag ctgcaggagt gcttgtgggc tgactccctg 1140
gggcctctca aagacgatgt gctactgttg gagacacgag gcccccagga caacagatcc 1200
ctctgtgcct tggaacccag tggctgtact tcactaccca gcaaagcctc cacgagggca 1260
gctcgccttg gagagtactt actacaagac ctgcagtcag gccagtgtct gcagctatgg 1320
gacgatgact tgggagcgct atgggcctgc cccatggaca aatacatcca caagggaggt 1380
gggggctccg gcgggggtgg aagcggtgga ggcgggtcgg ggggcggagg tagtgagccc 1440
aaatcttcag acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 1500
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 1560
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 1620
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 1680
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1740
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1800
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 1860
ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1920
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1980
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 2040
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 2100
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa                                  2130
<210>72
<211>710
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>鼠类信号肽和鼠类IL 17RA的外显子1-6，
人类IL-17RC的外显子8-16，连接物和Fc10
<400>72
Met Ala Ile Arg Arg Cys Trp Pro Arg Val Val Pro Gly Pro Ala Leu
 1               5                  10                  15
Gly Trp Leu Leu Leu Leu Leu Asn Val Leu Ala Pro Gly Arg Ala Ser
            20                  25                  30
Pro Arg Leu Leu Asp Phe Pro Ala Pro Val Cys Ala Gln Glu Gly Leu
        35                  40                  45
Ser Cys Arg Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His
    50                  55                  60
Pro Lys Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asn Ile Tyr Ile Asn Leu
65                  70                  75                  80
Ser Val Ser Ser Thr Gln His Gly Glu Leu Val Pro Val Leu His Val
                85                  90                  95
Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala
            100                 105                 110
Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Lys
        115                 120                 125
Phe Gln Phe Leu Ser Met Leu Gln His His Arg Lys Arg Trp Arg Phe
    130                 135                 140
Ser Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Gly Gln Glu Tyr Glu Val Thr
145                 150                 155                 160
Val His His Leu Pro Lys Pro Ile Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Lys
                165                 170                 175
Ser Lys Ile Ile Phe Val Pro Asp Cys Glu Asp Ser Lys Met Lys Met
            180                 185                 190
Thr Thr Ser Cys Val Ser Ser Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala
        195                 200                 205
Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His
    210                 215                 220
Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro
225                 230                 235                 240
Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His
                245                 250                 255
Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro
            260                 265                 270
Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala
        275                 280                 285
His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln
    290                 295                 300
Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu
305                 310                 315                 320
Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro
                325                 330                 335
Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu
            340                 345                 350
Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys
        355                 360                 365
Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys
    370                 375                 380
Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser
385                 390                 395                 400
Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala
                405                 410                 415
Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln
            420                 425                 430
Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp
        435                 440                 445
Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly
    450                 455                 460
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro
465                 470                 475                 480
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
                485                 490                 495
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
            500                 505                 510
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
        515                 520                 525
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
    530                 535                 540
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
545                 550                 555                 560
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
                565                 570                 575
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
            580                 585                 590
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
        595                 600                 605
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
    610                 615                 620
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
625                 630                 635                 640
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
                645                 650                 655
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
            660                 665                 670
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
        675                 680                 685
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
    690                 695                 700
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
705                 710
<210>73
<211>1638
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>otPA(优化的组织纤溶酶原激活物)
信号肽和人类IL-17RC的外显子8-16，
连接物和Fc 10
<400>73
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60
tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagagccct gccctggctc 120
aacgtgtcag cagatggtga caacgtgcat ctggttctga atgtctctga ggagcagcac 180
ttcggcctct ccctgtactg gaatcaggtc cagggccccc caaaaccccg gtggcacaaa 240
aacctgactg gaccgcagat cattaccttg aaccacacag acctggttcc ctgcctctgt 300
attcaggtgt ggcctctgga acctgactcc gttaggacga acatctgccc cttcagggag 360
gacccccgcg cacaccagaa cctctggcaa gccgcccgac tgcgactgct gaccctgcag 420
agctggctgc tggacgcacc gtgctcgctg cccgcagaag cggcactgtg ctggcgggct 480
ccgggtgggg acccctgcca gccactggtc ccaccgcttt cctgggagaa cgtcactgtg 540
gacaaggttc tcgagttccc attgctgaaa ggccacccta acctctgtgt tcaggtgaac 600
agctcggaga agctgcagct gcaggagtgc ttgtgggctg actccctggg gcctctcaaa 660
gacgatgtgc tactgttgga gacacgaggc ccccaggaca acagatccct ctgtgccttg 720
gaacccagtg gctgtacttc actacccagc aaagcctcca cgagggcagc tcgccttgga 780
gagtacttac tacaagacct gcagtcaggc cagtgtctgc agctatggga cgatgacttg 840
ggagcgctat gggcctgccc catggacaaa tacatccaca agggaggtgg gggctccggc 900
gggggtggaa gcggtggagg cgggtcgggg ggcggaggta gtgagcccaa atcttcagac 960
aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 1020
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 1080
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 1140
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 1200
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 1260
aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1320
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1380
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1440
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1500
ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1560
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1620
tccctgtctc cgggtaaa                                               1638
<210>74
<211>546
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>otPA(优化的组织纤溶酶原激活物)
信号肽和人类IL-17RC的外显子8-16，
连接物和Fc10
<400>74
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
 1               5                  10                  15
Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg
            20                  25                  30
Phe Arg Arg Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn
        35                  40                  45
Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser
    50                  55                  60
Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys
65                  70                  75                  80
Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val
                85                  90                  95
Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg
            100                 105                 110
Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu
        115                 120                 125
Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu
    130                 135                 140
Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala
145                 150                 155                 160
Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu
                165                 170                 175
Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His
            180                 185                 190
Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln
        195                 200                 205
Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu
    210                 215                 220
Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu
225                 230                 235                 240
Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala
                245                 250                 255
Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys
            260                 265                 270
Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met
        275                 280                 285
Asp Lys Tyr Ile His Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
    290                 295                 300
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp
305                 310                 315                 320
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
                325                 330                 335
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
            340                 345                 350
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
        355                 360                 365
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
    370                 375                 380
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
385                 390                 395                 400
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
                405                 410                 415
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
            420                 425                 430
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
        435                 440                 445
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
    450                 455                 460
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
465                 470                 475                 480
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu AsnAsn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
                485                 490                 495
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
            500                 505                 510
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
        515                 520                 525
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
    530                 535                 540
Gly Lys
545
<210>75
<211>622
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>75
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct  60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg gg                                          622
<210>76
<211>207
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>76
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                  135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp
         195                 200                 205
<210>77
<211>1318
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-7和Fc5
<400>77
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg gggagcccaa atcttcagac aaaactcaca catgcccacc 660
gtgcccagca cctgaagccg agggggcacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa 720
ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca 780
cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa 840
gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt 900
cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct 960
cccatcctcc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt 1020
gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct 1080
ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga 1140
gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctacag 1200
caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat 1260
gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggtaaa   1318
<210>78
<211>439
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-7和Fc5
<400>78
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Glu
        195                 200                 205
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
    210                 215                 220
Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
225                 230                 235                 240
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
                245                 250                 255
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
            260                 265                 270
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
        275                 280                 285
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
    290                 295                 300
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
305                 310                 315                 320
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
                325                 330                 335
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
            340                 345                 350
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
        355                 360                 365
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
    370                 375                 380
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
385                 390                 395                 400
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
                405                 410                 415
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
            420                 425                 430
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
       435
<210>79
<211>762
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>79
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct  60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tg                    762
<210>80
<211>254
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>80
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala
        195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu
                245                 250
<210>81
<211>1458
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-8和Fc5
<400>81
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tggagcccaa atcttcagac 780
aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg agggggcacc gtcagtcttc 840
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 900
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 960
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 1020
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 1080
aaggtctcca acaaagccct cccatcctcc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1140
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1200
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1260
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1320
ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1380
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1440
tccctgtctc cgggtaaa                                               1458
<210>82
<211>486
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-8和Fc5
<400>82
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala
        195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Glu Pro
                245                 250                 255
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
            260                 265                 270
Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
        275                 280                 285
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
    290                 295                 300
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
305                 310                 315                 320
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
                325                 330                 335
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
        355                 360                 365
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
    370                 375                 380
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
385                 390                 395                 400
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
                405                 410                 415
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
            420                 425                 430
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
        435                 440                 445
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
    450                 455                 460
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
465                 470                 475                 480
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                485
<210>83
<211>822
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>83
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780
accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc ag 822
<210>84
<211>274
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>84
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala
        195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
            260                 265                 270
Ile Gln
<210>85
<211>1518
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-9和Fc5
<400>85
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780
accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggagcccaa atcttcagac 840
aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg agggggcacc gtcagtcttc 900
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 960
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 1020
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 1080
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 1140
aaggtctcca acaaagccct cccatcctcc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1200
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1260
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1320
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1380
ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1440
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1500
tccctgtctc cgggtaaa    1518
<210>86
<211>506
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-9和Fc5
<400>86
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala
        195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
            260                 265                 270
Ile Gln Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
         275                 280                 285
Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
    290                 295                 300
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
305                 310                 315                 320
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
                325                 330                 335
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
            340                 345                 350
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
        355                 360                 365
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
    370                 375                 380
Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
385                 390                 395                 400
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
                405                 410                 415
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
            420                 425                 430
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
        435                 440                 445
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
    450                 455                 460
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
465                 470                 475                 480
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
                485                 490                 495
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            500                 505
<210>87
<211>873
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>87
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780
accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840
gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agg 873
<210>88
<211>291
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>88
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala
       195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
            260                 265                 270
Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys
        275                 280                 285
Pro Phe Arg
    290
<210>89
<211>1569
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-10和Fc5
<400>89
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780
accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840
gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggagccca aatcttcaga caaaactcac 900
acatgcccac cgtgcccagc acctgaagcc gagggggcac cgtcagtctt cctcttcccc 960
ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 1020
gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 1080
cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 1140
gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1200
aacaaagccc tcccatcctc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 1260
gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc 1320
ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1380
gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga cggctccttc 1440
ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1500
tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1560
ccgggtaaa                                                         1569
<210>90
<211>523
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-10和Fc5
<400>90
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly GlyAla Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
ProAla Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala
        195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
            260                 265                 270
Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys
        275                 280                 285
Pro Phe Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
    290                 295                 300
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
305                 310                 315                 320
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile SerArg Thr Pro Glu Val Thr
                325                 330                 335
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
            340                 345                 350
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
        355                 360                 365
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
    370                 375                 380
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
385                 390                 395                 400
Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
                405                 410                 415
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
            420                 425                 430
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
        435                 440                 445
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
    450                 455                 460
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
465                 470                 475                 480
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                485                 490                 495
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
            500                 505                 510
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        515                 520
<210>91
<211>1059
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>91
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780
accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840
gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900
tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960
tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020
ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggac                        1059
<210>92
<211>353
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>92
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala
        195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
            260                 265                 270
Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys
        275                 280                 285
Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala
    290                 295                 300
Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys
305                 310                 315                 320
Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp
                325                 330                 335
Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val
            340                 345                 350
Asp
<210>93
<211>1755
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-11和Fc5
<400>93
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780
accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840
gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900
tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960
tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020
ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggacg agcccaaatc ttcagacaaa 1080
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagccgagg gggcaccgtc agtcttcctc 1140
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 1200
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 1260
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 1320
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 1380
gtctccaaca aagccctccc atcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1440
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag 1500
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1560
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1620
tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1680
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1740
ctgtctccgg gtaaa                                                  1755
<210>94
<211>585
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-11和Fc5
<400>94
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala
        195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
            260                 265                 270
Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys
        275                 280                 285
Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala
    290                 295                 300
Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys
305                 310                 315                 320
Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp
                325                 330                 335
Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val
            340                 345                 350
Asp Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
        355                 360                 365
Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
    370                 375                 380
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
385                 390                 395                 400
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
                405                 410                 415
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
            420                 425                 430
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
        435                 440                 445
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
    450                 455                 460
Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
465                 470                 475                 480
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
                485                 490                 495
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
            500                 505                 510
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
        515                 520                 525
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
    530                 535                 540
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
545                 550                 555                 560
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
                565                 570                 575
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            580                 585
<210>95
<211>303
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>95
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
gactccctgg ggcctctcaa agacgatgtg ctactgttgg agacacgagg cccccaggac 120
aacagatccc tctgtgcctt ggaacccagt ggctgtactt cactacccag caaagcctcc 180
acgagggcag ctcgccttgg agagtactta ctacaagacc tgcagtcagg ccagtgtctg 240
cagctatggg acgatgactt gggagcgcta tgggcctgcc ccatggacaa atacatccac 300
aag                                                               303
<210>96
<211>101
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>96
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu
            20                  25                  30
Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala
    50                  55                  60
Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu
65                  70                  75                  80
Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp
                85                  90                  95
Lys Tyr Ile His Lys
            100
<210>97
<211>999
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子14-16和Fc5
<400>97
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
gactccctgg ggcctctcaa agacgatgtg ctactgttgg agacacgagg cccccaggac 120
aacagatccc tctgtgcctt ggaacccagt ggctgtactt cactacccag caaagcctcc 180
acgagggcag ctcgccttgg agagtactta ctacaagacc tgcagtcagg ccagtgtctg 240
cagctatggg acgatgactt gggagcgcta tgggcctgcc ccatggacaa atacatccac 300
aaggagccca aatcttcaga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaagcc 360
gagggggcac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 420
cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 480
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 540
cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 600
aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccatcctc catcgagaaa 660
accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 720
cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 780
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 840
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 900
agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 960
cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaa                        999
<210>98
<211>333
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子14-16和Fc5
<400>98
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu
            20                  25                  30
Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala
    50                  55                  60
Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu
65                  70                  75                  80
Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp
                85                  90                  95
Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
            100                 105                 110
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu
        115                 120                 125
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
    130                 135                 140
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
145                 150                 155                 160
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
                165                 170                 175
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
            180                 185                 190
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
        195                 200                 205
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
    210                 215                 220
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
225                 230                 235                 240
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
                245                 250                 255
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
            260                 265                 270
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
        275                 280                 285
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
    290                 295                 300
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
305                 310                 315                 320
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                325                 330
<210>99
<211>585
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>99
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
gaggaccccc gcgcacacca gaacctctgg caagccgccc gactgcgact gctgaccctg 120
cagagctggc tgctggacgc accgtgctcg ctgcccgcag aagcggcact gtgctggcgg 180
gctccgggtg gggacccctg ccagccactg gtcccaccgc tttcctggga gaacgtcact 240
gtggacaagg ttctcgagtt cccattgctg aaaggccacc ctaacctctg tgttcaggtg 300
aacagctcgg agaagctgca gctgcaggag tgcttgtggg ctgactccct ggggcctctc 360
aaagacgatg tgctactgtt ggagacacga ggcccccagg acaacagatc cctctgtgcc 420
ttggaaccca gtggctgtac ttcactaccc agcaaagcct ccacgagggc agctcgcctt 480
ggagagtact tactacaaga cctgcagtca ggccagtgtc tgcagctatg ggacgatgac 540
ttgggagcgc tatgggcctg ccccatggac aaatacatcc acaag    585
<210>100
<211>195
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>100
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala
            20                  25                  30
Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro
        35                  40                  45
Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly
    50                  55                  60
Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr
65                  70                  75                  80
Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu
                85                  90                  95
Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu
            100                 105                 110
Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu
        115                 120                 125
Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser
    130                 135                 140
Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu
145                 150                 155                 160
Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu
                165                 170                 175
Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr
            180                 185                 190
Ile His Lys
        195
<210>101
<211>1281
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子11-16和Fc5
<400>101
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
gaggaccccc gcgcacacca gaacctctgg caagccgccc gactgcgact gctgaccctg 120
cagagctggc tgctggacgc accgtgctcg ctgcccgcag aagcggcact gtgctggcgg 180
gctccgggtg gggacccctg ccagccactg gtcccaccgc tttcctggga gaacgtcact 240
gtggacaagg ttctcgagtt cccattgctg aaaggccacc ctaacctctg tgttcaggtg 300
aacagctcgg agaagctgca gctgcaggag tgcttgtggg ctgactccct ggggcctctc 360
aaagacgatg tgctactgtt ggagacacga ggcccccagg acaacagatc cctctgtgcc 420
ttggaaccca gtggctgtac ttcactaccc agcaaagcct ccacgagggc agctcgcctt 480
ggagagtact tactacaaga cctgcagtca ggccagtgtc tgcagctatg ggacgatgac 540
ttgggagcgc tatgggcctg ccccatggac aaatacatcc acaaggagcc caaatcttca 600
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ccgagggggc accgtcagtc 660
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 720
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 780
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 840
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 900
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccatcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 960
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 1020
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1080
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1140
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1200
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1260
ctctccctgt ctccgggtaa a                                           1281
<210>102
<211>427
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子11-16和Fc5
<400>102
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala
            20                  25                  30
Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro
        35                  40                  45
Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly
    50                  55                  60
Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr
65                  70                  75                  80
Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu
85                  90                  95
Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu
                100                 105                 110
Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu
            115                 120                 125
Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser
        130                 135                 140
Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu
145                 150                 155                 160
Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu
                165                 170                 175
Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr
            180                 185                 190
Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
        195                 200                 205
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
    210                 215                 220
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
225                 230                 235                 240
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
                245                 250                 255
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
            260                 265                 270
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
        275                 280                 285
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
    290                 295                 300
Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
305                 310                 315                 320
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
                325                 330                 335
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
            340                 345                 350
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
        355                 360                 365
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
    370                 375                 380
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
385                 390                 395                 400
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
                405                 410                 415
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            420                 425
<210>103
<211>882
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>103
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct  60
gactgcaggg ggctcgaagt ctggaacagc atcccgagct gctgggccct gccctggctc 120
aacgtgtcag cagatggtga caacgtgcat ctggttctga atgtctctga ggagcagcac 180
ttcggcctct ccctgtactg gaatcaggtc cagggccccc caaaaccccg gtggcacaaa 240
aacctgactg gaccgcagat cattaccttg aaccacacag acctggttcc ctgcctctgt 300
attcaggtgt ggcctctgga acctgactcc gttaggacga acatctgccc cttcagggag 360
gacccccgcg cacaccagaa cctctggcaa gccgcccgac tgcgactgct gaccctgcag 420
agctggctgc tggacgcacc gtgctcgctg cccgcagaag cggcactgtg ctggcgggct 480
ccgggtgggg acccctgcca gccactggtc ccaccgcttt cctgggagaa cgtcactgtg 540
gacaaggttc tcgagttccc attgctgaaa ggccacccta acctctgtgt tcaggtgaac 600
agctcggaga agctgcagct gcaggagtgc ttgtgggctg actccctggg gcctctcaaa 660
gacgatgtgc tactgttgga gacacgaggc ccccaggaca acagatccct ctgtgccttg 720
gaacccagtg gctgtacttc actacccagc aaagcctcca cgagggcagc tcgccttgga 780
gagtacttac tacaagacct gcagtcaggc cagtgtctgc agctatggga cgatgacttg 840
ggagcgctat gggcctgccc catggacaaa tacatccaca ag                    882
<210>104
<211>294
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>104
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro
            20                  25                  30
Ser Cys Trp Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn
        35                  40                  45
Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser
    50                  55                  60
Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys
65                  70                  75                  80
Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val
                85                  90                  95
Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg
            100                 105                 110
Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu
        115                 120                 125
Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu
    130                 135                 140
Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala
145                 150                 155                 160
Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu
                165                 170                 175
Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His
            180                 185                 190
Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln
        195                 200                 205
Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu
    210                 215                 220
Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu
225                 230                 235                 240
Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala
                245                 250                 255
Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys
            260                 265                 270
Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met
        275                 280                 285
Asp Lys Tyr Ile His Lys
290
<210>105
<211>1578
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子7-16和Fc5
<400>105
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
gactgcaggg ggctcgaagt ctggaacagc atcccgagct gctgggccct gccctggctc 120
aacgtgtcag cagatggtga caacgtgcat ctggttctga atgtctctga ggagcagcac 180
ttcggcctct ccctgtactg gaatcaggtc cagggccccc caaaaccccg gtggcacaaa 240
aacctgactg gaccgcagat cattaccttg aaccacacag acctggttcc ctgcctctgt 300
attcaggtgt ggcctctgga acctgactcc gttaggacga acatctgccc cttcagggag 360
gacccccgcg cacaccagaa cctctggcaa gccgcccgac tgcgactgct gaccctgcag 420
agctggctgc tggacgcacc gtgctcgctg cccgcagaag cggcactgtg ctggcgggct 480
ccgggtgggg acccctgcca gccactggtc ccaccgcttt cctgggagaa cgtcactgtg 540
gacaaggttc tcgagttccc attgctgaaa ggccacccta acctctgtgt tcaggtgaac 600
agctcggaga agctgcagct gcaggagtgc ttgtgggctg actccctggg gcctctcaaa 660
gacgatgtgc tactgttgga gacacgaggc ccccaggaca acagatccct ctgtgccttg 720
gaacccagtg gctgtacttc actacccagc aaagcctcca cgagggcagc tcgccttgga 780
gagtacttac tacaagacct gcagtcaggc cagtgtctgc agctatggga cgatgacttg 840
ggagcgctat gggcctgccc catggacaaa tacatccaca aggagcccaa atcttcagac 900
aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg agggggcacc gtcagtcttc 960
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 1020
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 1080
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 1140
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 1200
aaggtctcca acaaagccct cccatcctcc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1260
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1320
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1380
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1440
ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1500
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1560
tccctgtctc cgggtaaa    1578
<210>106
<211>526
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子7-16和Fc5
<400>106
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro
            20                  25                  30
Ser Cys Trp Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn
        35                  40                  45
Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser
    50                  55                  60
Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys
65                  70                  75                  80
Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val
                85                  90                  95
Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg
            100                 105                 110
Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu
        115                 120                 125
Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu
    130                 135                 140
Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala
145                 150                 155                 160
Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu
                165                 170                 175
Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His
            180                 185                 190
Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln
        195                 200                 205
Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu
    210                 215                 220
Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu
225                 230                 235                 240
Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala
                245                 250                 255
Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys
            260                 265                 270
Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met
        275                 280                 285
Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
    290                 295                 300
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe
305                 310                 315                 320
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
                325                 330                 335
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
            340                 345                 350
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
        355                 360                 365
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
    370                 375                 380
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
385                 390                 395                 400
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
                405                 410                 415
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
            420                 425                 430
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
        435                 440                 445
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
    450                 455                 460
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
465                 470                 475                 480
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
                485                 490                 495
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
            500                 505                 510
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        515                 520                 525
<210>107
<211>864
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>107
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg ggactccctg gggcctctca aagacgatgt gctactgttg 660
gagacacgag gcccccagga caacagatcc ctctgtgcct tggaacccag tggctgtact 720
tcactaccca gcaaagcctc cacgagggca gctcgccttg gagagtactt actacaagac 780
ctgcagtcag gccagtgtct gcagctatgg gacgatgact tgggagcgct atgggcctgc 840
cccatggaca aatacatcca caag 864
<210>108
<211>288
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>108
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Asp
        195                 200                 205
Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly
    210                 215                 220
Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr
225                 230                 235                 240
Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr
                245                 250                 255
Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp
            260                 265                 270
Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys
        275                 280                 285
<210>109
<211>1560
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-7和外显子14-16和Fc5
<400>109
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg ggactccctg gggcctctca aagacgatgt gctactgttg 660
gagacacgag gcccccagga caacagatcc ctctgtgcct tggaacccag tggctgtact 720
tcactaccca gcaaagcctc cacgagggca gctcgccttg gagagtactt actacaagac 780
ctgcagtcag gccagtgtct gcagctatgg gacgatgact tgggagcgct atgggcctgc 840
cccatggaca aatacatcca caaggagccc aaatcttcag acaaaactca cacatgccca 900
ccgtgcccag cacctgaagc cgagggggca ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 960
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc 1020
cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 1080
aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 1140
gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 1200
ctcccatcct ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag 1260
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 1320
ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 1380
gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac 1440
agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 1500
atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1560
<210>110
<211>520
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-7和外显子14-16和Fc5
<400>110
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Asp
        195                 200                 205
Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly
    210                 215                 220
Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr
225                 230                 235                 240
Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr
                245                 250                 255
Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp
            260                 265                 270
Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys
        275                 280                 285
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
    290                 295                 300
Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
305                 310                 315                 320
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
                325                 330                 335
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
            340                 345                 350
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
        355                 360                 365
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
    370                 375                 380
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
385                 390                 395                 400
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
                405                 410                 415
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
            420                 425                 430
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
        435                 440                 445
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
    450                 455                 460
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
465                 470                 475                 480
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
                485                 490                 495
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
            500                 505                 510
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
      515                 520
<210>111
<211>1146
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>111
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg ggaggacccc cgcgcacacc agaacctctg gcaagccgcc 660
cgactgcgac tgctgaccct gcagagctgg ctgctggacg caccgtgctc gctgcccgca 720
gaagcggcac tgtgctggcg ggctccgggt ggggacccct gccagccact ggtcccaccg 780
ctttcctggg agaacgtcac tgtggacaag gttctcgagt tcccattgct gaaaggccac 840
cctaacctct gtgttcaggt gaacagctcg gagaagctgc agctgcagga gtgcttgtgg 900
gctgactccc tggggcctct caaagacgat gtgctactgt tggagacacg aggcccccag 960
gacaacagat ccctctgtgc cttggaaccc agtggctgta cttcactacc cagcaaagcc 1020
tccacgaggg cagctcgcct tggagagtac ttactacaag acctgcagtc aggccagtgt 1080
ctgcagctat gggacgatga cttgggagcg ctatgggcct gccccatgga caaatacatc 1140
cacaag                                                            1146
<210>112
<211>382
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>112
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Glu
       195                 200                 205
Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu
    210                 215                 220
Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala
225                 230                 235                 240
Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro
                245                 250                 255
Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu
            260                 265                 270
Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu
    290                 295                 300
Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln
305                 310                 315                 320
Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu
                325                 330                 335
Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu
            340                 345                 350
Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu
        355                 360                 365
Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys
    370                 375                 380
<210>113
<211>1842
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-7和外显子11-16和Fc5
<400>113
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg ggaggacccc cgcgcacacc agaacctctg gcaagccgcc 660
cgactgcgac tgctgaccct gcagagctgg ctgctggacg caccgtgctc gctgcccgca 720
gaagcggcac tgtgctggcg ggctccgggt ggggacccct gccagccact ggtcccaccg 780
ctttcctggg agaacgtcac tgtggacaag gttctcgagt tcccattgct gaaaggccac 840
cctaacctct gtgttcaggt gaacagctcg gagaagctgc agctgcagga gtgcttgtgg 900
gctgactccc tggggcctct caaagacgat gtgctactgt tggagacacg aggcccccag 960
gacaacagat ccctctgtgc cttggaaccc agtggctgta cttcactacc cagcaaagcc 1020
tccacgaggg cagctcgcct tggagagtac ttactacaag acctgcagtc aggccagtgt 1080
ctgcagctat gggacgatga cttgggagcg ctatgggcct gccccatgga caaatacatc 1140
cacaaggagc ccaaatcttc agacaaaact cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa 1200
gccgaggggg caccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc 1260
tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc 1320
aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag 1380
gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg 1440
ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccatc ctccatcgag 1500
aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca 1560
tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat 1620
cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc 1680
acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac 1740
aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac 1800
aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aa                    1842
<210>114
<211>614
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-7和外显子11-16和Fc5
<400>114
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Glu
        195                 200                 205
Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu
    210                 215                 220
Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala
225                 230                 235                 240
Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro
                245                 250                 255
Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu
            260                 265                 270
Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu
    290                 295                 300
Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln
305                 310                 315                 320
Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu
                325                 330                 335
Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu
            340                 345                 350
Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu
        355                 360                 365
Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro
    370                 375                 380
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
385                 390                 395                 400
Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
                405                 410                 415
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
            420                 425                 430
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
        435                  440                 445
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
    450                 455                 460
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
465                 470                 475                 480
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
                485                 490                 495
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
            500                 505                 510
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
        515                 520                 525
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
    530                 535                 540
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
545                 550                 555                 560
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
                565                 570                 575
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
            580                 585                 590
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
        595                 600                 605
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
    610
<210>115
<211>1524
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-13和
人类IL-17RA的外显子7-9
<400>115
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780
accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840
gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900
tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960
tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020
ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 1080
ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag 1140
gagtgcttgt gggctggcag cctttgggat cccaacatca ctgtggagac cttggacaca 1200
cagcatctgc gagtggactt caccctgtgg aatgaatcca ccccctacca ggtcctgctg 1260
gaaagtttct ccgactcaga gaaccacagc tgctttgatg tcgttaaaca aatatttgcg 1320
cccaggcaag aagaattcca tcagcgagct aatgtcacat tcactctaag caagtttcac 1380
tggtgctgcc atcaccacgt gcaggtccag cccttcttca gcagctgcct aaatgactgt 1440
ttgagacacg ctgtgactgt gccctgccca gtaatctcaa ataccacagt tcccaagcca 1500
gttgcagact acattcccct gtgg                                        1524
<210>116
<211>508
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-13和
人类IL-17RA的外显子7-9
<400>116
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala
        195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
            260                 265                 270
Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys
        275                 280                 285
Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala
    290                 295                 300
Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys
305                 310                 315                 320
Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp
                325                 330                 335
Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val
            340                 345                 350
Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys
        355                 360                 365
Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp
    370                 375                 380
Ala Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn Ile Thr Val Glu Thr Leu Asp Thr
385                 390                 395                 400
Gln His Leu Arg Val Asp Phe Thr Leu Trp Asn Glu Ser Thr Pro Tyr
                405                 410                 415
Gln Val Leu Leu Glu Ser Phe Ser Asp Ser Glu Asn His Ser Cys Phe
            420                 425                 430
Asp Val Val Lys Gln Ile Phe Ala Pro Arg Gln Glu Glu Phe His Gln
        435                 440                 445
Arg Ala Asn Val Thr Phe Thr Leu Ser Lys Phe His Trp Cys Cys His
    450                 455                 460
His His Val Gln Val Gln Pro Phe Phe Ser Ser Cys Leu Asn Asp Cys
465                 470                 475                 480
Leu Arg His Ala Val Thr Val Pro Cys Pro Val Ile Ser Asn Thr Thr
                485                 490                 495
Val Pro Lys Pro Val Ala Asp Tyr Ile Pro Leu Trp
            500                 505
<210>117
<211>2220
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-13和
人类IL 17RA的外显子7-9和Fc5
<400>117
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780
accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840
gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900
tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960
tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020
ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 1080
ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag 1140
gagtgcttgt gggctggcag cctttgggat cccaacatca ctgtggagac cttggacaca 1200
cagcatctgc gagtggactt caccctgtgg aatgaatcca ccccctacca ggtcctgctg 1260
gaaagtttct ccgactcaga gaaccacagc tgctttgatg tcgttaaaca aatatttgcg 1320
cccaggcaag aagaattcca tcagcgagct aatgtcacat tcactctaag caagtttcac 1380
tggtgctgcc atcaccacgt gcaggtccag cccttcttca gcagctgcct aaatgactgt 1440
ttgagacacg ctgtgactgt gccctgccca gtaatctcaa ataccacagt tcccaagcca 1500
gttgcagact acattcccct gtgggagccc aaatcttcag acaaaactca cacatgccca 1560
ccgtgcccag cacctgaagc cgagggggca ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 1620
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc 1680
cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 1740
aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 1800
gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 1860
ctcccatcct ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag 1920
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 1980
ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 2040
gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac 2100
agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 2160
atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 2220
<210>118
<211>740
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-13和
人类IL-17RA的外显子7-9和Fc5
<400>118
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala
        195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
            260                 265                 270
Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys
        275                 280                 285
Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala
    290                 295                 300
Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys
305                 310                 315                 320
Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp
                325                 330                 335
Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val
            340                 345                 350
Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys
        355                 360                 365
Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp
    370                 375                 380
Ala Gly Ser Leu Trp Asp Pro AsnIle Thr Val Glu Thr Leu Asp Thr
385                 390                 395                 400
Gln His Leu Arg Val Asp Phe Thr Leu Trp Asn Glu Ser Thr Pro Tyr
                405                 410                 415
Gln Val Leu Leu Glu Ser Phe Ser Asp Ser Glu Asn His Ser Cys Phe
            420                 425                 430
Asp Val Val Lys Gln Ile Phe Ala Pro Arg Gln Glu Glu Phe His Gln
        435                 440                 445
Arg Ala Asn Val Thr Phe Thr Leu Ser Lys Phe His Trp Cys Cys His
    450                 455                 460
His His Val Gln Val Gln Pro Phe Phe Ser Ser Cys Leu Asn Asp Cys
465                 470                 475                 480
Leu Arg His Ala Val Thr Val Pro Cys Pro Val Ile Ser Asn Thr Thr
                485                 490                 495
Val Pro Lys Pro Val Ala Asp Tyr Ile Pro Leu Trp Glu Pro Lys Ser
            500                 505                 510
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu
        515                 520                 525
Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
    530                 535                 540
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
545                 550                 555                 560
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
                565                 570                 575
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
            580                 585                 590
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
        595                 600                 605
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser
    610                 615                 620
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
625                 630                 635                 640
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
                645                 650                 655
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
            660                 665                 670
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
         675                 680                 685
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
    690                 695                 700
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
705                 710                 715                 720
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
               725                 730                 735
Ser Pro Gly Lys
        740
<210>119
<211>1500
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>鼠类IL-17RA信号肽和鼠类IL-17RA的外显子1-6，
人类IL-17RC的外显子8-13，以及鼠类IL-17RA的外显子7-9
<400>119
atggcgattc ggcgctgctg gccacgggtc gtccccgggc ccgcgctggg atggctgctt 60
ctgctgctga acgttctggc cccgggccgc gcctccccgc gcctcctcga cttcccggct 120
ccggtctgcg cgcaggaggg gctgagctgc agagtcaaga atagtacttg tctggatgac 180
agctggatcc accccaaaaa cctgaccccg tcttccccaa aaaacatcta tatcaatctt 240
agtgtttcct ctacccagca cggagaatta gtccctgtgt tgcatgttga gtggaccctg 300
cagacagatg ccagcatcct gtacctcgag ggtgcagagc tgtccgtcct gcagctgaac 360
accaatgagc ggctgtgtgt caagttccag tttctgtcca tgctgcagca tcaccgtaag 420
cggtggcggt tttccttcag ccactttgtg gtagatcctg gccaggagta tgaagtgact 480
gttcaccacc tgccgaagcc catccctgat ggggacccaa accacaaatc caagatcatc 540
tttgtgcctg actgtgagga cagcaagatg aagatgacta cctcatgcgt gagctcagcc 600
ctgccctggc tcaacgtgtc agcagatggt gacaacgtgc atctggttct gaatgtctct 660
gaggagcagc acttcggcct ctccctgtac tggaatcagg tccagggccc cccaaaaccc 720
cggtggcaca aaaacctgac tggaccgcag atcattacct tgaaccacac agacctggtt 780
ccctgcctct gtattcaggt gtggcctctg gaacctgact ccgttaggac gaacatctgc 840
cccttcaggg aggacccccg cgcacaccag aacctctggc aagccgcccg actgcgactg 900
ctgaccctgc agagctggct gctggacgca ccgtgctcgc tgcccgcaga agcggcactg 960
tgctggcggg ctccgggtgg ggacccctgc cagccactgg tcccaccgct ttcctgggag 1020
aacgtcactg tggacaaggt tctcgagttc ccattgctga aaggccaccc taacctctgt 1080
gttcaggtga acagctcgga gaagctgcag ctgcaggagt gcttgtgggc tggcagcctt 1140
tgggatccca acatcactgt ggagaccttg gacacacagc atctgcgagt ggacttcacc 1200
ctgtggaatg aatccacccc ctaccaggtc ctgctggaaa gtttctccga ctcagagaac 1260
cacagctgct ttgatgtcgt taaacaaata tttgcgccca ggcaagaaga attccatcag 1320
cgagctaatg tcacattcac tctaagcaag tttcactggt gctgccatca ccacgtgcag 1380
gtccagccct tcttcagcag ctgcctaaat gactgtttga gacacgctgt gactgtgccc 1440
tgcccagtaa tctcaaatac cacagttccc aagccagttg cagactacat tcccctgtgg 1500
<210>120
<211>500
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>鼠类IL-17RA信号肽和鼠类IL 17RA的外显子1-6，
人类IL-17RC的外显子8-13，以及鼠类IL-17RA的外显子7-9
<400>120
Met Ala Ile Arg Arg Cys Trp Pro Arg Val Val Pro Gly Pro Ala Leu
 1               5                  10                  15
Gly Trp Leu Leu Leu Leu Leu Asn Val Leu Ala Pro Gly Arg Ala Ser
            20                  25                  30
Pro Arg Leu Leu Asp Phe Pro Ala Pro Val Cys Ala Gln Glu Gly Leu
        35                  40                  45
Ser Cys Arg Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His
    50                  55                  60
Pro Lys Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asn Ile Tyr Ile Asn Leu
65                  70                  75                  80
Ser Val Ser Ser Thr Gln His Gly Glu Leu Val Pro Val Leu His Val
                85                  90                  95
Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala
            100                 105                 110
Glu Leu Ser Val Leu Gln LeuAsn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Lys
        115                 120                 125
Phe Gln Phe Leu Ser Met Leu Gln His His Arg Lys Arg Trp Arg Phe
    130                 135                 140
Ser Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Gly Gln Glu Tyr Glu Val Thr
145                 150                 155                 160
Val His His Leu Pro Lys Pro Ile Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Lys
                165                 170                 175
Ser Lys Ile Ile Phe Val Pro Asp Cys Glu Asp Ser Lys Met Lys Met
            180                 185                 190
Thr Thr Ser Cys Val Ser Ser Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala
        195                 200                 205
Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His
    210                 215                 220
Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro
225                 230                 235                 240
Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His
                245                 250                 255
Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro
            260                 265                 270
Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala
        275                 280                 285
His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln
    290                 295                 300
Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu
305                 310                 315                 320
Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro
                325                 330                 335
Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu
            340                 345                 350
Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys
        355                 360                 365
Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn
    370                 375                 380
Ile Thr Val Glu Thr Leu Asp Thr Gln His Leu Arg Val Asp Phe Thr
385                 390                 395                 400
Leu Trp Asn Glu Ser Thr Pro Tyr Gln Val Leu Leu Glu Ser Phe Ser
                405                 410                 415
Asp Ser Glu Asn His Ser Cys Phe Asp Val Val Lys Gln Ile Phe Ala
            420                 425                 430
Pro Arg Gln Glu Glu Phe His Gln Arg Ala Asn Val Thr Phe Thr Leu
        435                 440                 445
Ser Lys Phe His Trp Cys Cys His His His Val Gln Val Gln Pro Phe
    450                 455                 460
Phe Ser Ser Cys Leu Asn Asp Cys Leu Arg His Ala Val Thr Val Pro
465                 470                 475                 480
Cys Pro Val Ile Ser Asn Thr Thr Val Pro Lys Pro Val Ala Asp Tyr
                485                 490                 495
Ile Pro Leu Trp
            500
<210>121
<211>2196
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>鼠类IL-17RA信号肽和鼠类IL-17RA的外显子1-6，
人类IL-17RC的外显子8-13，以及鼠类IL-17RA的外显子7-9和Fc5
<400>121
atggcgattc ggcgctgctg gccacgggtc gtccccgggc ccgcgctggg atggctgctt 60
ctgctgctga acgttctggc cccgggccgc gcctccccgc gcctcctcga cttcccggct 120
ccggtctgcg cgcaggaggg gctgagctgc agagtcaaga atagtacttg tctggatgac 180
agctggatcc accccaaaaa cctgaccccg tcttccccaa aaaacatcta tatcaatctt 240
agtgtttcct ctacccagca cggagaatta gtccctgtgt tgcatgttga gtggaccctg 300
cagacagatg ccagcatcct gtacctcgag ggtgcagagc tgtccgtcct gcagctgaac 360
accaatgagc ggctgtgtgt caagttccag tttctgtcca tgctgcagca tcaccgtaag 420
cggtggcggt tttccttcag ccactttgtg gtagatcctg gccaggagta tgaagtgact 480
gttcaccacc tgccgaagcc catccctgat ggggacccaa accacaaatc caagatcatc 540
tttgtgcctg actgtgagga cagcaagatg aagatgacta cctcatgcgt gagctcagcc 600
ctgccctggc tcaacgtgtc agcagatggt gacaacgtgc atctggttct gaatgtctct 660
gaggagcagc acttcggcct ctccctgtac tggaatcagg tccagggccc cccaaaaccc 720
cggtggcaca aaaacctgac tggaccgcag atcattacct tgaaccacac agacctggtt 780
ccctgcctct gtattcaggt gtggcctctg gaacctgact ccgttaggac gaacatctgc 840
cccttcaggg aggacccccg cgcacaccag aacctctggc aagccgcccg actgcgactg 900
ctgaccctgc agagctggct gctggacgca ccgtgctcgc tgcccgcaga agcggcactg 960
tgctggcggg ctccgggtgg ggacccctgc cagccactgg tcccaccgct ttcctgggag 1020
aacgtcactg tggacaaggt tctcgagttc ccattgctga aaggccaccc taacctctgt 1080
gttcaggtga acagctcgga gaagctgcag ctgcaggagt gcttgtgggc tggcagcctt 1140
tgggatccca acatcactgt ggagaccttg gacacacagc atctgcgagt ggacttcacc 1200
ctgtggaatg aatccacccc ctaccaggtc ctgctggaaa gtttctccga ctcagagaac 1260
cacagctgct ttgatgtcgt taaacaaata tttgcgccca ggcaagaaga attccatcag 1320
cgagctaatg tcacattcac tctaagcaag tttcactggt gctgccatca ccacgtgcag 1380
gtccagccct tcttcagcag ctgcctaaat gactgtttga gacacgctgt gactgtgccc 1440
tgcccagtaa tctcaaatac cacagttccc aagccagttg cagactacat tcccctgtgg 1500
gagcccaaat cttcagacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaagccgag 1560
ggggcaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 1620
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 1680
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 1740
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 1800
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc catcctccat cgagaaaacc 1860
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1920
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1980
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 2040
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 2100
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 2160
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa    2196
<210>122
<211>2196
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>鼠类IL-17RA信号肽和鼠类IL-17RA的外显子1-6，
人类IL-17RC的外显子8-13，以及鼠类IL-17RA的外显子7-9和Fc5
<400>122
Ala Thr Gly Gly Cys Gly Ala Thr Thr Cys Gly Gly Cys Gly Cys Thr
 1               5                  10                  15
Gly Cys Thr Gly Gly Cys Cys Ala Cys Gly Gly Gly Thr Cys Gly Thr
            20                  25                  30
Cys Cys Cys Cys Gly Gly Gly Cys Cys Cys Gly Cys Gly Cys Thr Gly
        35                  40                  45
Gly Gly Ala Thr Gly Gly Cys Thr Gly Cys Thr Thr Cys Thr Gly Cys
    50                  55                  60
Thr Gly Cys Thr Gly Ala Ala Cys Gly Thr Thr Cys Thr Gly Gly Cys
65                  70                  75                  80
Cys Cys Cys Gly Gly Gly Cys Cys Gly Cys Gly Cys Cys Thr Cys Cys
                85                  90                  95
Cys Cys Gly Cys Gly Cys Cys Thr Cys Cys Thr Cys Gly Ala Cys Thr
            100                 105                 110
Thr Cys Cys Cys Gly Gly Cys Thr Cys Cys Gly Gly Thr Cys Thr Gly
        115                 120                 125
Cys Gly Cys Gly Cys Ala Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly
    130                 135                 140
Ala Gly Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala Gly Thr Cys Ala Ala Gly Ala
145                 150                 155                 160
Ala Thr Ala Gly Thr Ala Cys Thr Thr Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala
                165                 170                 175
Thr Gly Ala Cys Ala Gly Cys Thr Gly Gly Ala Thr Cys Cys Ala Cys
            180                 185                 190
Cys Cys Cys Ala Ala Ala Ala Ala Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Cys
        195                 200                 205
Cys Gly Thr Cys Thr Thr Cys Cys Cys Cys Ala Ala Ala Ala Ala Ala
    210                 215                 220
Cys Ala Thr Cys Thr Ala Thr Ala Thr Cys Ala Ala Thr Cys Thr Thr
225                 230                 235                 240
Ala Gly Thr Gly Thr Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr Ala Cys Cys Cys
                245                 250                 255
Ala Gly Cys Ala Cys Gly Gly Ala Gly Ala Ala Thr Thr Ala Gly Thr
            260                 265                 270
Cys Cys Cys Thr Gly Thr Gly Thr Thr Gly Cys Ala Thr Gly Thr Thr
        275                 280                 285
Gly Ala Gly Thr Gly Gly Ala Cys Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala
    290                 295                 300
Cys Ala Gly Ala Thr Gly Cys Cys Ala Gly Cys Ala Thr Cys Cys Thr
305                 310                 315                 320
Gly Thr Ala Cys Cys Thr Cys Gly Ala Gly Gly Gly Thr Gly Cys Ala
                325                 330                 335
Gly Ala Gly Cys Thr Gly Thr Cys Cys Gly Thr Cys Cys Thr Gly Cys
            340                 345                 350
Ala Gly Cys Thr Gly Ala Ala Cys Ala Cys Cys Ala Ala Thr Gly Ala
        355                 360                 365
Gly Cys Gly Gly Cys Thr Gly Thr Gly Thr Gly Thr Cys Ala Ala Gly
    370                 375                 380
Thr Thr Cys Cys Ala Gly Thr Thr Thr Cys Thr Gly Thr Cys Cys Ala
385                 390                 395                 400
Thr Gly Cys Thr Gly Cys Ala Gly Cys Ala Thr Cys Ala Cys Cys Gly
                405                 410                 415
Thr Ala Ala Gly Cys Gly Gly Thr Gly Gly Cys Gly Gly Thr Thr Thr
            420                 425                 430
Thr Cys Cys Thr Thr Cys Ala Gly Cys Cys Ala Cys Thr Thr Thr Gly
        435                 440                 445
Thr Gly Gly Thr Ala Gly Ala Thr Cys Cys Thr Gly Gly Cys Cys Ala
    450                 455                 460
Gly Gly Ala Gly Thr Ala Thr Gly Ala Ala Gly Thr Gly Ala Cys Thr
465                 470                 475                 480
Gly Thr Thr Cys Ala Cys Cys Ala Cys Cys Thr Gly Cys Cys Gly Ala
                485                 490                 495
Ala Gly Cys Cys Cys Ala Thr Cys Cys Cys Thr Gly Ala Thr Gly Gly
            500                 505                 510
Gly Gly Ala Cys Cys Cys Ala Ala Ala Cys Cys Ala Cys Ala Ala Ala
        515                 520                 525
Thr Cys Cys Ala Ala Gly Ala Thr Cys Ala Thr Cys Thr Thr Thr Gly
    530                 535                 540
Thr Gly Cys Cys Thr Gly Ala Cys Thr Gly Thr Gly Ala Gly Gly Ala
545                 550                 555                 560
Cys Ala Gly Cys Ala Ala Gly Ala Thr Gly Ala Ala Gly Ala Thr Gly
                565                 570                 575
Ala Cys Thr Ala Cys Cys Thr Cys Ala Thr Gly Cys Gly Thr Gly Ala
            580                 585                 590
Gly Cys Thr Cys Ala Gly Cys Cys Cys Thr Gly Cys Cys Cys Thr Gly
        595                 600                 605
Gly Cys Thr Cys Ala Ala Cys Gly Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala
    610                 615                 620
Gly Ala Thr Gly Gly Thr Gly Ala Cys Ala Ala Cys Gly Thr Gly Cys
625                 630                 635                 640
Ala Thr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Cys Thr Gly Ala Ala Thr Gly Thr
                645                 650                 655
Cys Thr Cys Thr Gly Ala Gly Gly Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala Cys
            660                 665                 670
Thr Thr Cys Gly Gly Cys Cys Thr Cys Thr Cys Cys Cys Thr Gly Thr
        675                 680                 685
Ala Cys Thr Gly Gly Ala Ala Thr Cys Ala Gly Gly Thr Cys Cys Ala
    690                 695                 700
Gly Gly Gly Cys Cys Cys Cys Cys Cys Ala Ala Ala Ala Cys Cys Cys
705                 710                 715                 720
Cys Gly Gly Thr Gly Gly Cys Ala Cys Ala Ala Ala Ala Ala Cys Cys
                725                 730                 735
Thr Gly Ala Cys Thr Gly Gly Ala Cys Cys Gly Cys Ala Gly Ala Thr
            740                 745                 750
Cys Ala Thr Thr Ala Cys Cys Thr Thr Gly Ala Ala Cys Cys Ala Cys
        755                 760                 765
Ala Cys Ala Gly Ala Cys Cys Thr Gly Gly Thr Thr Cys Cys Cys Thr
    770                 775                 780
Gly Cys Cys Thr Cys Thr Gly Thr Ala Thr Thr Cys Ala Gly Gly Thr
785                 790                 795                 800
Gly Thr Gly Gly Cys Cys Thr Cys Thr Gly Gly Ala Ala Cys Cys Thr
                805                 810                 815
Gly Ala Cys Thr Cys Cys Gly Thr Thr Ala Gly Gly Ala Cys Gly Ala
            820                 825                 830
Ala Cys Ala Thr Cys Thr Gly Cys Cys Cys Cys Thr Thr Cys Ala Gly
        835                 840                 845
Gly Gly Ala Gly Gly Ala Cys Cys Cys Cys Cys Gly Cys Gly Cys Ala
    850                 855                 860
Cys Ala Cys Cys Ala Gly Ala Ala Cys Cys Thr Cys Thr Gly Gly Cys
865                 870                 875                 880
Ala Ala Gly Cys Cys Gly Cys Cys Cys Gly Ala Cys Thr Gly Cys Gly
                885                 890                 895
Ala Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala Cys Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly
            900                 905                 910
Ala Gly Cys Thr Gly Gly Cys Thr Gly Cys Thr Gly Gly Ala Cys Gly
        915                 920                 925
Cys Ala Cys Cys Gly Thr Gly Cys Thr Cys Gly Cys Thr Gly Cys Cys
    930                 935                 940
Cys Gly Cys Ala Gly Ala Ala Gly Cys Gly Gly Cys Ala Cys Thr Gly
945                 950                 955                 960
Thr Gly Cys Thr Gly Gly Cys Gly Gly Gly Cys Thr Cys Cys Gly Gly
                965                 970                 975
Gly Thr Gly Gly Gly Gly Ala Cys Cys Cys Cys Thr Gly Cys Cys Ala
            980                 985                 990
Gly Cys Cys Ala Cys Thr Gly Gly Thr Cys Cys Cys Ala Cys Cys Gly
        995                 1000                1005
Cys Thr Thr Thr Cys Cys Thr Gly Gly Gly Ala Gly Ala Ala Cys Gly
    1010                1015                1020
Thr Cys Ala Cys Thr Gly Thr Gly Gly Ala Cys Ala Ala Gly Gly Thr
1025                1030                1035                1040
Thr Cys Thr Cys Gly Ala Gly Thr Thr Cys Cys Cys Ala Thr Thr Gly
                1045                1050                1055
Cys Thr Gly Ala Ala Ala Gly Gly Cys Cys Ala Cys Cys Cys Thr Ala
           1060                1065                1070
Ala Cys Cys Thr Cys Thr Gly Thr Gly Thr Thr Cys Ala Gly Gly Thr
        1075                1080                1085
Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys Thr Cys Gly Gly Ala Gly Ala Ala Gly
    1090                1095                1100
Cys Thr Gly Cys Ala Gly Cys Thr Gly Cys Ala Gly Gly Ala Gly Thr
1105                1110                1115                1120
Gly Cys Thr Thr Gly Thr Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Cys Ala Gly
                1125                1130                1135
Cys Cys Thr Thr Thr Gly Gly Gly Ala Thr Cys Cys Cys Ala Ala Cys
            1140                1145                1150
Ala Thr Cys Ala Cys Thr Gly Thr Gly Gly Ala Gly Ala Cys Cys Thr
        1155                1160                1165
Thr Gly Gly Ala Cys Ala Cys Ala Cys Ala Gly Cys Ala Thr Cys Thr
    1170                1175                1180
Gly Cys Gly Ala Gly Thr Gly Gly Ala Cys Thr Thr Cys Ala Cys Cys
1185                1190                1195                1200
Cys Thr Gly Thr Gly Gly Ala Ala Thr Gly Ala Ala Thr Cys Cys Ala
                1205                1210                1215
Cys Cys Cys Cys Cys Thr Ala Cys Cys Ala Gly Gly Thr Cys Cys Thr
            1220                1225                1230
Gly Cys Thr Gly Gly Ala Ala Ala Gly Thr Thr Thr Cys Thr Cys Cys
        1235                1240                1245
Gly Ala Cys Thr Cys Ala Gly Ala Gly Ala Ala Cys Cys Ala Cys Ala
    1250                1255                1260
Gly Cys Thr Gly Cys Thr Thr Thr Gly Ala Thr Gly Thr Cys Gly Thr
1265                1270                1275                1280
Thr Ala Ala Ala Cys Ala Ala Ala Thr Ala Thr Thr Thr Gly Cys Gly
                1285                1290                1295
Cys Cys Cys Ala Gly Gly Cys Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Ala Thr
            1300                1305                1310
Thr Cys Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys Gly Ala Gly Cys Thr Ala Ala
        1315                1320                1325
Thr Gly Thr Cys Ala Cys Ala Thr Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Ala
    1330                1335                1340
Ala Gly Cys Ala Ala Gly Thr Thr Thr Cys Ala Cys Thr Gly Gly Thr
1345                1350                1355                1360
Gly Cys Thr Gly Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Cys Ala Cys Gly Thr
               1365                1370                1375
Gly Cys Ala Gly Gly Thr Cys Cys Ala Gly Cys Cys Cys Thr Thr Cys
            1380                1385                1390
Thr Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Thr Gly Cys Cys Thr Ala Ala
        1395                1400                1405
Ala Thr Gly Ala Cys Thr Gly Thr Thr Thr Gly Ala Gly Ala Cys Ala
    1410                1415                1420
Cys Gly Cys Thr Gly Thr Gly Ala Cys Thr Gly Thr Gly Cys Cys Cys
1425                1430                1435                1440
Thr Gly Cys Cys Cys Ala Gly Thr Ala Ala Thr Cys Thr Cys Ala Ala
                1445                1450                1455
Ala Thr Ala Cys Cys Ala Cys Ala Gly Thr Thr Cys Cys Cys Ala Ala
            1460                1465                1470
Gly Cys Cys Ala Gly Thr Thr Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Ala Cys
        1475                1480                1485
Ala Thr Thr Cys Cys Cys Cys Thr Gly Thr Gly Gly Gly Ala Gly Cys
    1490                1495                1500
Cys Cys Ala Ala Ala Thr Cys Thr Thr Cys Ala Gly Ala Cys Ala Ala
1505                1510                1515                1520
Ala Ala Cys Thr Cys Ala Cys Ala Cys Ala Thr Gly Cys Cys Cys Ala
                1525                1530                1535
Cys Cys Gly Thr Gly Cys Cys Cys Ala Gly Cys Ala Cys Cys Thr Gly
            1540                1545                1550
Ala Ala Gly Cys Cys Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Cys Ala Cys Cys
        1555                1560                1565
Gly Thr Cys Ala Gly Thr Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr Thr Cys
    1570                1575                1580
Cys Cys Cys Cys Cys Ala Ala Ala Ala Cys Cys Cys Ala Ala Gly Gly
1585                1590                1595                1600
Ala Cys Ala Cys Cys Cys Thr Cys Ala Thr Gly Ala Thr Cys Thr Cys
                1605                1610                1615
Cys Cys Gly Gly Ala Cys Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Thr Cys
            1620                1625                1630
Ala Cys Ala Thr Gly Cys Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Oly
        1635                1640                1645
Ala Cys Gly Thr Gly Ala Gly Cys Cys Ala Cys Gly Ala Ala Gly Ala
    1650                1655                1660
Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Thr Cys Ala Ala Gly Thr Thr Cys
1665                1670                1675                1680
Ala Ala Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys Gly Thr Gly Gly Ala Cys Gly
                1685                1690                1695
Gly Cys Gly Thr Gly Gly Ala Gly Gly Thr Gly Cys Ala Thr Ala Ala
            1700                1705                1710
Thr Gly Cys Cys Ala Ala Gly Ala Cys Ala Ala Ala Gly Cys Cys Gly
        1715                1720                1725
Cys Gly Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Cys Ala Gly Thr Ala Cys Ala
    1730                1735                1740
Ala Cys Ala Gly Cys Ala Cys Gly Thr Ala Cys Cys Gly Thr Gly Thr
1745                1750                1755                1760
Gly Gly Thr Cys Ala Gly Cys Gly Thr Cys Cys Thr Cys Ala Cys Cys
                1765                1770                1775
Gly Thr Cys Cys Thr Gly Cys Ala Cys Cys Ala Gly Gly Ala Cys Thr
            1780                1785                1790
Gly Gly Cys Thr Gly Ala Ala Thr Gly Gly Cys Ala Ala Gly Gly Ala
        1795                1800                1805
Gly Thr Ala Cys Ala Ala Gly Thr Gly Cys Ala Ala Gly Gly Thr Cys
    1810                1815                1820
Thr Cys Cys Ala Ala Cys Ala Ala Ala Gly Cys Cys Cys Thr Cys Cys
1825                1830                1835                1840
Cys Ala Thr Cys Cys Thr Cys Cys Ala Thr Cys Gly Ala Gly Ala Ala
                1845                1850                1855
Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Thr Cys Cys Ala Ala Ala Gly Cys Cys
            1860                1865                1870
Ala Ala Ala Gly Gly Gly Cys Ala Gly Cys Cys Cys Cys Gly Ala Gly
        1875                1880                1885
Ala Ala Cys Cys Ala Cys Ala Gly Gly Thr Gly Thr Ala Cys Ala Cys
    1890                1895                1900
Cys Cys Thr Gly Cys Cys Cys Cys Cys Ala Thr Cys Cys Cys Gly Gly
1905               1910                 1915                1920
Gly Ala Thr Gly Ala Gly Cys Thr Gly Ala Cys Cys Ala Ala G1y Ala
                1925                1930                 1935
Ala Cys Cys Ala Gly Gly Thr Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Ala Cys
            1940                1945                1950
Cys Thr G1y Cys Cys Thr Gly Gly Thr Cys Ala Ala Ala Gly Gly Cys
        1955                1960                1965
Thr Thr Cys Thr Ala Thr Cys Cys Cys Ala Gly Cys Gly Ala Cys Ala
    1970                1975                1980
Thr Cys Gly Cys Cys Gly Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Gly Ala
1985                1990                1995                2000
Gly Ala Gly Cys Ala Ala Thr Gly Gly Gly Cys Ala Gly Cys Cys Gly
                2005                2010                2015
Gly Ala Gly Ala Ala Cys Ala Ala Cys Thr Ala Cys Ala Ala Gly Ala
            2020                2025                2030
Cys Cys Ala Cys Gly Cys Cys Thr Cys Cys Cys Gly Thr Gly Cys Thr
        2035                2040                2045
Gly Gly Ala Cys Thr Cys Cys Gly Ala Cys Gly Gly Cys Thr Cys Cys
    2050                2055                2060
Thr Thr Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys Ala
2065                2070                2075                2080
Ala G1y Cys Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Gly Gly Ala Cys Ala Ala
                2085                2090                2095
Gly Ala Gly Cys Ala Gly Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly Cys Ala Gly
            2100                2105                2110
Gly Gly Gly Ala Ala Cys G1y Thr Cys Thr Thr Cys Thr Cys Ala Thr
        2115                2120                2125
Gly Cys Thr Cys Cys G1y Thr G1y Ala Thr G1y Cys Ala Thr Gly Ala
    2130                2135                2140
Gly Gly Cys Thr Cys Thr Gly Cys Ala Cys Ala Ala Cys Cys Ala Cys
2145                2150                2155                2160
Thr Ala Cys Ala Cys Gly Cys Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Cys Cys
                2165                2170                2175
Thr Cys Thr Cys Cys Cys Thr Gly Thr Cys Thr Cys Cys G1y Gly Gly
            2180                2185                2190
Thr Ala Ala Ala
        2195
<210>123
<211>1272
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-6和Fc5
<400>123
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgagc ccaaatcttc agacaaaact 600
cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa gccgaggggg caccgtcagt cttcctcttc 660
cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 720
gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 780
gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 840
agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 900
tccaacaaag ccctcccatc ctccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 960
cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc 1020
agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1080
aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1140
ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1200
tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1260
tctccgggta aa                                                     1272
<210>124
<211>424
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-6和Fc5
<400>124
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1                5                 10                   15
Val Val Leu Set Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gin Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                   80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
        195                 200                 205
Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
    210                215                220
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
225                230                235                240
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
               245                250                255
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
            260                265                270
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
        275                280                285
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
    290                295                300
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
305                310                315                320
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
               325                330                335
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
            340                345                350
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
        355                360                365
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
    370                375                380
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
385                 390                 395                 400
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
                405                 410                 415
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            420
<210>125
<211>1794
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL 17RC的外显子1-6和外显子11-16和Fc5
<400>125
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgacc cccgcgcaca ccagaacctc 600
tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 660
tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 720
ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 780
ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag 840
gagtgcttgt gggctgactc cctggggcct ctcaaagacg atgtgctact gttggagaca 900
cgaggccccc aggacaacag atccctctgt gccttggaac ccagtggctg tacttcacta 960
cccagcaaag cctccacgag ggcagctcgc cttggagagt acttactaca agacctgcag 1020
tcaggccagt gtctgcagct atgggacgat gacttgggag cgctatgggc ctgccccatg 1080
gacaaataca tccacaagga gcccaaatct tcagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 1140
ccagcacctg aagccgaggg ggcaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 1200
accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 1260
gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 1320
aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 1380
caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1440
tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1500
accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1560
aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1620
aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1680
ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1740
gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaa    1794
<210>126
<211>598
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-6和外显子11-16和Fc5
<400>126
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu
        195                 200                 205
Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala
    210                 215                 220
Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro
225                 230                 235                 240
Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp G1u Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu
                245                 250                 255
Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn
            260                 265                 270
Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu
        275                 280                 285
Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln
    290                 295                 300
Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu
305                 310                 315                 320
Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu
                325                 330                 335
Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu
            340                 345                 350
Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro
        355                 360                 365
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
    370                 375                 380
Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
385                 390                 395                 400
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
                405                 410                 415
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
            420                 425                 430
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
        435                 440                 445
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
    450                 455                 460
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
465                 470                 475                 480
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                485                 490                 495
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
            500                 505                 510
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
        515                 520                 525
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
    530                 535                 540
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
545                 550                 555                 560
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
                565                 570                 575
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
            580                 585                 590
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        595
<210>127
<211>1515
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-6和外显子14-16和Fc5
<400>127
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact ccctggggcc tctcaaagac 600
gatgtgctac tgttggagac acgaggcccc caggacaaca gatccctctg tgccttggaa 660
cccagtggct gtacttcact acccagcaaa gcctccacga gggcagctcg ccttggagag 720
tacttactac aagacctgca gtcaggccag tgtctgcagc tatgggacga tgacttggga 780
gcgctatggg cctgccccat ggacaaatac atccacaagg agcccaaatc ttcagacaaa 840
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagccgagg gggcaccgtc agtcttcctc 900
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 960
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 1020
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 1080
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 1140
gtctccaaca aagccctccc atcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1200
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag 1260
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1320
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1380
tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1440
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1500
ctgtctccgg gtaaa    1515
<210>128
<211>505
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号肽和人类IL-17RC的外显子1-6和外显子14-16和Pc5
<400>128
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg
        195                 200                 205
Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys
    210                 215                 220
Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu
225                 230                 235                 240
Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp
                245                 250                 255
Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His
            260                 265                 270
Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
        275                 280                 285
Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
    290                 295                 300
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
305                 310                 315                 320
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
                325                 330                 335
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
            340                 345                 350
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
        355                 360                 365
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
    370                 375                 380
Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
385                 390                 395                 400
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
                405                 410                 415
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
            420                 425                 430
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
        435                 440                 445
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
    450                 455                 460
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
465                 470                 475                 480
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
                485                 490                 495
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            500                 505
<210>129
<211>1335
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>优化的组织纤溶酶原激活物(otPA)
     前原信号序列和人类IL-17RC的外显子8-13和Fc5
<400>129
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60
tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagagccct gccctggctc 120
aacgtgtcag cagatggtga caacgtgcat ctggttctga atgtctctga ggagcagcac 180
ttcggcctct ccctgtactg gaatcaggtc cagggccccc caaaaccccg gtggcacaaa 240
aacctgactg gaccgcagat cattaccttg aaccacacag acctggttcc ctgcctctgt 300
attcaggtgt ggcctctgga acctgactcc gttaggacga acatctgccc cttcagggag 360
gacccccgcg cacaccagaa cctctggcaa gccgcccgac tgcgactgct gaccctgcag 420
agctggctgc tggacgcacc gtgctcgctg cccgcagaag cggcactgtg ctggcgggct 480
ccgggtgggg acccctgcca gccactggtc ccaccgcttt cctgggagaa cgtcactgtg 540
gacaaggttc tcgagttccc attgctgaaa ggccacccta acctctgtgt tcaggtgaac 600
agctcggaga agctgcagct gcaggagtgc ttgtgggctg agcccaaatc ttcagacaaa 660
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagccgagg gggcaccgtc agtcttcctc 720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960
gtctccaaca aagccctccc atcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag 1080
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200
tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320
ctgtctccgg gtaaa                                                  1335
<210>130
<211>445
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>优化的组织纤溶酶原激活物(otPA)
     前原信号序列和人类IL-17RC的外显子8-13和Fc5
<400>130
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
 1               5                  10                  15
Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg
            20                  25                  30
Phe Arg Arg Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn
        35                  40                  45
Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser
    50                  55                  60
Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys
65                  70                  75                  80
Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val
                85                  90                  95
Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg
            100                 105                 110
Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu
        115                 120                 125
Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu
    130                 135                 140
Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala
145                 150                 155                 160
Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu
                165                 170                 175
Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His
            180                 185                 190
Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln
        195                 200                 205
Glu Cys Leu Trp Ala Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
    210                 215                 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu
225                 230                 235                 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
                245                 250                 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
            260                 265                 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
        275                 280                 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
    290                 295                 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305                 310                 315                 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
                325                 330                 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
            340                 345                 350
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
        355                 360                 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
    370                 375                 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385                 390                 395                 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        435                 440                 445
<210>131
<211>1299
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>优化的组织纤溶酶原激活物(otPA)
     前原信号序列和人类IL-17RC的外显子8-10和外显子14-16和Fc5
<400>131
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60
tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagagccct gccctggctc 120
aacgtgtcag cagatggtga caacgtgcat ctggttctga atgtctctga ggagcagcac 180
ttcggcctct ccctgtactg gaatcaggtc cagggccccc caaaaccccg gtggcacaaa 240
aacctgactg gaccgcagat cattaccttg aaccacacag acctggttcc ctgcctctgt 300
attcaggtgt ggcctctgga acctgactcc gttaggacga acatctgccc cttcagggag 360
gactccctgg ggcctctcaa agacgatgtg ctactgttgg agacacgagg cccccaggac 420
aacagatccc tctgtgcctt ggaacccagt ggctgtactt cactacccag caaagcctcc 480
acgagggcag ctcgccttgg agagtactta ctacaagacc tgcagtcagg ccagtgtctg 540
cagctatggg acgatgactt gggagcgcta tgggcctgcc ccatggacaa atacatccac 600
aaggagccca aatcttcaga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaagcc 660
gagggggcac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 720
cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 780
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 840
cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 900
aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccatcctc catcgagaaa 960
accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1020
cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1080
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1140
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 1200
agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1260
cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaa    1299
<210>132
<211>433
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>优化的组织纤溶酶原激活物(otPA)
     前原信号序列和人类IL-17RC的外显子8-10和外显子14-16和Fc5
<400>132
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
 1               5                  10                  15
Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg
            20                  25                  30
Phe Arg Arg Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn
        35                  40                  45
Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser
    50                  55                  60
Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys
65                  70                  75                  80
Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val
                85                  90                  95
Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg
            100                 105                 110
Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp
        115                 120                 125
Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu
    130                 135                 140
Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser
145                 150                 155                 160
Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser
                165                 170                 175
Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala
            180                 185                 190
Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
        195                 200                 205
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro
    210                 215                 220
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
225                 230                 235                 240
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                245                 250                 255
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
            260                 265                 270
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
        275                 280                 285
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
    290                 295                 300
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
305                 310                 315                 320
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
                325                 330                 335
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
            340                 345                 350
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
        355                 360                 365
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
    370                 375                 380
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
385                 390                 395                 400
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
                405                 410                 415
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
            420                 425                 430
Lys
<210>133
<211>1056
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>优化的组织纤溶酶原激活物(otPA)
     前原信号序列和人类IL-17RC的外显子8-10和Fc5
<400>133
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60
tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagagccct gccctggctc 120
aacgtgtcag cagatggtga caacgtgcat ctggttctga atgtctctga ggagcagcac 180
ttcggcctct ccctgtactg gaatcaggtc cagggccccc caaaaccccg gtggcacaaa 240
aacctgactg gaccgcagat cattaccttg aaccacacag acctggttcc ctgcctctgt 300
attcaggtgt ggcctctgga acctgactcc gttaggacga acatctgccc cttcagggag 360
gagcccaaat cttcagacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaagccgag 420
ggggcaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 480
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 540
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 600
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 660
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc catcctccat cgagaaaacc 720
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 780
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 840
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 900
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 960
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1020
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa                           1056
<210>134
<211>352
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>优化的组织纤溶酶原激活物(otPA)
     前原信号序列和人类IL-17RC的外显子8-10和Fc5
<400>134
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
 1               5                  10                  15
Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg
            20                  25                  30
Phe Arg Arg Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn
        35                  40                  45
Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser
    50                  55                  60
Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys
65                  70                  75                  80
Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val
                85                  90                  95
Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg
            100                 105                 110
Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr
        115                 120                 125
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser
    130                 135                 140
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
                165                 170                 175
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
            180                 185                 190
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
        195                 200                 205
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
    210                 215                 220
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
225                 230                 235                 240
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
                245                 250                 255
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
            260                 265                 270
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
        275                 280                 285
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
    290                 295                 300
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
305                 310                 315                 320
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
                325                 330                 335
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            340                 345                 350
<210>135
<211>1080
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>优化的组织纤溶酶原激活物(otPA)
     前原信号序列和人类IL-17RC的外显子11-13和Fc5
<400>135
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60
tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagagaccc ccgcgcacac 120
cagaacctct ggcaagccgc ccgactgcga ctgctgaccc tgcagagctg gctgctggac 180
gcaccgtgct cgctgcccgc agaagcggca ctgtgctggc gggctccggg tggggacccc 240
tgccagccac tggtcccacc gctttcctgg gagaacgtca ctgtggacaa ggttctcgag 300
ttcccattgc tgaaaggcca ccctaacctc tgtgttcagg tgaacagctc ggagaagctg 360
cagctgcagg agtgcttgtg ggctgagccc aaatcttcag acaaaactca cacatgccca 420
ccgtgcccag cacctgaagc cgagggggca ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 480
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc 540
cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 600
aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 660
gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 720
ctcccatcct ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag 780
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 840
ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 900
gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac 960
agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 1020
atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1080
<210>136
<211>360
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>优化的组织纤溶酶原激活物(otPA)
     前原信号序列和人类IL-17RC的外显子11-13和Fc5
<400>136
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
 1               5                  10                  15
Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg
            20                  25                  30
Phe Arg Arg Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg
        35                  40                  45
Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser
    50                  55                  60
Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro
65                  70                  75                  80
Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp
                85                  90                  95
Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val
            100                 105                 110
Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala
        115                 120                 125
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
    130                 135                 140
Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
145                 150                 155                 160
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
                165                 170                 175
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
            180                 185                 190
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
        195                 200                 205
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
    210                 215                 220
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
225                 230                 235                 240
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
                245                 250                 255
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
            260                 265                 270
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
        275                 280                 285
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
    290                 295                 300
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
305                 310                 315                 320
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
                325                 330                 335
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
            340                 345                 350
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        355                 360
<210>137
<211>1164
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>优化的组织纤溶酶原激活物(otPA)
     前原信号序列和人类IL-17RC的外显子7-10和Fc5
<400>137
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60
tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagaggcag cctgtgggac 120
cccaacatca ccgtggagac cctggaggcc caccagctgc gtgtgagctt caccctgtgg 180
aacgaatcta cccattacca gatcctgctg accagttttc cgcacatgga gaaccacagt 240
tgctttgagc acatgcacca catacctgcg cccagaccag aagagttcca ccagcgatcc 300
aacgtcacac tcactctacg caaccttaaa gggtgctgtc gccaccaagt gcagatccag 360
cccttcttca gcagctgcct caatgactgc ctcagacact ccgcgactgt ttcctgccca 420
gaaatgccag acactccaga accaattccg gactacatgc ccctgtggga gcccaaatct 480
tcagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aagccgaggg ggcaccgtca 540
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 600
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 660
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 720
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 780
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 840
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 900
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 960
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1020
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1080
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1140
agcctctccc tgtctccggg taaa                                        1164
<210>138
<211>388
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>优化的组织纤溶酶原激活物(otPA)
     前原信号序列和人类IL-17RC的外显子7-10和Fc5
<400>138
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
 1               5                  10                  15
Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg
            20                  25                  30
Phe Arg Arg Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn Ile Thr Val Glu Thr Leu
        35                  40                  45
Glu Ala His Gln Leu Arg Val Ser Phe Thr Leu Trp Asn Glu Ser Thr
    50                  55                  60
His Tyr Gln Ile Leu Leu Thr Ser Phe Pro His Met Glu Asn His Ser
65                  70                  75                  80
Cys Phe Glu His Met His His Ile Pro Ala Pro Arg Pro Glu Glu Phe
                85                  90                  95
His Gln Arg Ser Asn Val Thr Leu Thr Leu Arg Asn Leu Lys Gly Cys
            100                 105                 110
Cys Arg His Gln Val Gln Ile Gln Pro Phe Phe Ser Ser Cys Leu Asn
        115                 120                 125
Asp Cys Leu Arg His Ser Ala Thr Val Ser Cys Pro Glu Met Pro Asp
    130                 135                 140
Thr Pro Glu Pro Ile Pro Asp Tyr Met Pro Leu Trp Glu Pro Lys Ser
145                 150                 155                 160
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu
                165                 170                 175
Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
            180                 185                 190
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
        195                 200                 205
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
    210                 215                 220
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
225                 230                 235                 240
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                245                 250                 255
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser
            260                 265                 270
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
        275                 280                 285
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
    290                 295                 300
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
305                 310                 315                 320
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
                325                 330                 335
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
            340                 345                 350
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
        355                 360                 365
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
    370                 375                 380
Ser Pro Gly Lys
385
<210>139
<211>2433
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RA信号序列和IL-17RA的外显子1-10和人类IL-17RC的
     外显子8-16和Fc5
<400>139
atgggggccg cacgcagccc gccgtccgct gtcccggggc ccctgctggg gctgctcctg 60
ctgctcctgg gcgtgctggc cccgggtggc gcctccctgc gactcctgga ccaccgggcg 120
ctggtctgct cccagccggg gctaaactgc acggtcaaga atagtacctg cctggatgac 180
agctggattc accctcgaaa cctgaccccc tcctccccaa aggacctgca gatccagctg 240
cactttgccc acacccaaca aggagacctg ttccccgtgg ctcacatcga atggacactg 300
cagacagacg ccagcatcct gtacctcgag ggtgcagagt tatctgtcct gcagctgaac 360
accaatgaac gtttgtgcgt caggtttgag tttctgtcca aactgaggca tcaccacagg 420
cggtggcgtt ttaccttcag ccactttgtg gttgaccctg accaggaata tgaggtgacc 480
gttcaccacc tgcccaagcc catccctgat ggggacccaa accaccagtc caagaatttc 540
cttgtgcctg actgtgagca cgccaggatg aaggtaacca cgccatgcat gagctcaggc 600
agcctgtggg accccaacat caccgtggag accctggagg cccaccagct gcgtgtgagc 660
ttcaccctgt ggaacgaatc tacccattac cagatcctgc tgaccagttt tccgcacatg 720
gagaaccaca gttgctttga gcacatgcac cacatacctg cgcccagacc agaagagttc 780
caccagcgat ccaacgtcac actcactcta cgcaacctta aagggtgctg tcgccaccaa 840
gtgcagatcc agcccttctt cagcagctgc ctcaatgact gcctcagaca ctccgcgact 900
gtttcctgcc cagaaatgcc agacactcca gaaccaattc cggactacat gcccctgtgg 960
gccctgccct ggctcaacgt gtcagcagat ggtgacaacg tgcatctggt tctgaatgtc 1020
tctgaggagc agcacttcgg cctctccctg tactggaatc aggtccaggg ccccccaaaa 1080
ccccggtggc acaaaaacct gactggaccg cagatcatta ccttgaacca cacagacctg 1140
gttccctgcc tctgtattca ggtgtggcct ctggaacctg actccgttag gacgaacatc 1200
tgccccttca gggaggaccc ccgcgcacac cagaacctct ggcaagccgc ccgactgcga 1260
ctgctgaccc tgcagagctg gctgctggac gcaccgtgct cgctgcccgc agaagcggca 1320
ctgtgctggc gggctccggg tggggacccc tgccagccac tggtcccacc gctttcctgg 1380
gagaacgtca ctgtggacaa ggttctcgag ttcccattgc tgaaaggcca ccctaacctc 1440
tgtgttcagg tgaacagctc ggagaagctg cagctgcagg agtgcttgtg ggctgactcc 1500
ctggggcctc tcaaagacga tgtgctactg ttggagacac gaggccccca ggacaacaga 1560
tccctctgtg ccttggaacc cagtggctgt acttcactac ccagcaaagc ctccacgagg 1620
gcagctcgcc ttggagagta cttactacaa gacctgcagt caggccagtg tctgcagcta 1680
tgggacgatg acttgggagc gctatgggcc tgccccatgg acaaatacat ccacaaggag 1740
cccaaatctt cagacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agccgagggg 1800
gcaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 1860
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 1920
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 1980
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 2040
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccat cctccatcga gaaaaccatc 2100
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 2160
gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 2220
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 2280
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 2340
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 2400
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa                              2433
<210>140
<211>811
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RA信号序列和IL-17RA的外显子1-10和人类IL-17RC的
    外显子8-16和Fc5
<400>140
Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu
 1               5                  10                  15
Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser
            20                  25                  30
Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gln Pro Gly Leu
        35                  40                  45
Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His
    50                  55                  60
Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gln Ile Gln Leu
65                  70                  75                  80
His Phe Ala His Thr Gln Gln Gly Asp Leu Phe Pro Val Ala His Ile
                85                  90                  95
Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala
            100                 105                 110
Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Arg
        115                 120                 125
Phe Glu Phe Leu Ser Lys Leu Arg His His His Arg Arg Trp Arg Phe
    130                 135                 140
Thr Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Asp Gln Glu Tyr Glu Val Thr
145                 150                 155                 160
Val His His Leu Pro Lys Pro Ile Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Gln
                165                 170                 175
Ser Lys Asn Phe Leu Val Pro Asp Cys Glu His Ala Arg Met Lys Val
            180                 185                 190
Thr Thr Pro Cys Met Ser Ser Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn Ile Thr
        195                 200                 205
Val Glu Thr Leu Glu Ala His Gln Leu Arg Val Ser Phe Thr Leu Trp
    210                 215                 220
Asn Glu Ser Thr His Tyr Gln Ile Leu Leu Thr Ser Phe Pro His Met
225                 230                 235                 240
Glu Asn His Ser Cys Phe Glu His Met His His Ile Pro Ala Pro Arg
                245                 250                 255
Pro Glu Glu Phe His Gln Arg Ser Asn Val Thr Leu Thr Leu Arg Asn
            260                 265                 270
Leu Lys Gly Cys Cys Arg His Gln Val Gln Ile Gln Pro Phe Phe Ser
        275                 280                 285
Ser Cys Leu Asn Asp Cys Leu Arg His Ser Ala Thr Val Ser Cys Pro
    290                 295                 300
Glu Met Pro Asp Thr Pro Glu Pro Ile Pro Asp Tyr Met Pro Leu Trp
305                 310                 315                 320
Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu
                325                 330                 335
Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp
            340                 345                 350
Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr
        355                 360                 365
Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu
    370                 375                 380
Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile
385                 390                 395                 400
Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala
                405                 410                 415
Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro
            420                 425                 430
Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly
        435                 440                 445
Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr
    450                 455                 460
Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu
465                 470                 475                 480
Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu
                485                 490                 495
Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu
            500                 505                 510
Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser
        515                 520                 525
Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu
    530                 535                 540
Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu
545                 550                 555                 560
Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr
                565                 570                 575
Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
            580                 585                 590
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
        595                 600                 605
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
    610                 615                 620
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
625                 630                 635                 640
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
                645                 650                 655
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
            660                 665                 670
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
        675                 680                 685
Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
    690                 695                 700
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
705                 710                 715                 720
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
                725                 730                 735
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
            740                 745                 750
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
        755                 760                 765
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
    770                 775                 780
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
785                 790                 795                 800
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                805                 810
<210>141
<211>2190
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RA信号序列和IL-17RA的外显子1-6和人类IL-17RC的外显子8-13
    和IL-17RA的外显子7-10和Fc5
<400>141
atgggggccg cacgcagccc gccgtccgct gtcccggggc ccctgctggg gctgctcctg 60
ctgctcctgg gcgtgctggc cccgggtggc gcctccctgc gactcctgga ccaccgggcg 120
ctggtctgct cccagccggg gctaaactgc acggtcaaga atagtacctg cctggatgac 180
agctggattc accctcgaaa cctgaccccc tcctccccaa aggacctgca gatccagctg 240
cactttgccc acacccaaca aggagacctg ttccccgtgg ctcacatcga atggacactg 300
cagacagacg ccagcatcct gtacctcgag ggtgcagagt tatctgtcct gcagctgaac 360
accaatgaac gtttgtgcgt caggtttgag tttctgtcca aactgaggca tcaccacagg 420
cggtggcgtt ttaccttcag ccactttgtg gttgaccctg accaggaata tgaggtgacc 480
gttcaccacc tgcccaagcc catccctgat ggggacccaa accaccagtc caagaatttc 540
cttgtgcctg actgtgagca cgccaggatg aaggtaacca cgccatgcat gagctcagcc 600
ctgccctggc tcaacgtgtc agcagatggt gacaacgtgc atctggttct gaatgtctct 660
gaggagcagc acttcggcct ctccctgtac tggaatcagg tccagggccc cccaaaaccc 720
cggtggcaca aaaacctgac tggaccgcag atcattacct tgaaccacac agacctggtt 780
ccctgcctct gtattcaggt gtggcctctg gaacctgact ccgttaggac gaacatctgc 840
cccttcaggg aggacccccg cgcacaccag aacctctggc aagccgcccg actgcgactg 900
ctgaccctgc agagctggct gctggacgca ccgtgctcgc tgcccgcaga agcggcactg 960
tgctggcggg ctccgggtgg ggacccctgc cagccactgg tcccaccgct ttcctgggag 1020
aacgtcactg tggacaaggt tctcgagttc ccattgctga aaggccaccc taacctctgt 1080
gttcaggtga acagctcgga gaagctgcag ctgcaggagt gcttgtgggc tggcagcctg 1140
tgggacccca acatcaccgt ggagaccctg gaggcccacc agctgcgtgt gagcttcacc 1200
ctgtggaacg aatctaccca ttaccagatc ctgctgacca gttttccgca catggagaac 1260
cacagttgct ttgagcacat gcaccacata cctgcgccca gaccagaaga gttccaccag 1320
cgatccaacg tcacactcac tctacgcaac cttaaagggt gctgtcgcca ccaagtgcag 1380
atccagccct tcttcagcag ctgcctcaat gactgcctca gacactccgc gactgtttcc 1440
tgcccagaaa tgccagacac tccagaacca attccggact acatgcccct gtgggagccc 1500
aaatcttcag acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgagggggca 1560
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 1620
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 1680
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 1740
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1800
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccatcct ccatcgagaa aaccatctcc 1860
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 1920
ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1980
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 2040
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 2100
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 2160
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa                                  2190
<210>142
<211>730
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RA信号序列和IL-17RA的外显子1-6和人类IL-17RC的外显子8-13
    和IL-17RA的外显子7-10和Fc5
<400>142
Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu
 1               5                  10                  15
Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser
            20                  25                  30
Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gln Pro Gly Leu
        35                  40                  45
Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His
    50                  55                  60
Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gln Ile Gln Leu
65                  70                  75                  80
His Phe Ala His Thr Gln Gln Gly Asp Leu Phe Pro Val Ala His Ile
                85                  90                  95
Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala
            100                 105                 110
Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Arg
        115                 120                 125
Phe Glu Phe Leu Ser Lys Leu Arg His His His Arg Arg Trp Arg Phe
    130                 135                 140
Thr Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Asp Gln Glu Tyr Glu Val Thr
145                 150                 155                 160
Val His His Leu Pro Lys Pro Ile Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Gln
                165                 170                 175
Ser Lys Asn Phe Leu Val Pro Asp Cys Glu His Ala Arg Met Lys Val
            180                 185                 190
Thr Thr Pro Cys Met Ser Ser Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala
        195                 200                 205
Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His
    210                 215                 220
Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro
225                 230                 235                 240
Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His
                245                 250                 255
Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro
            260                 265                 270
Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala
        275                 280                 285
His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln
    290                 295                 300
Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu
305                 310                 315                 320
Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro
                325                 330                 335
Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu
            340                 345                 350
Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys
        355                 360                 365
Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn
    370                 375                 380
Ile Thr Val Glu Thr Leu Glu Ala His Gln Leu Arg Val Ser Phe Thr
385                 390                 395                 400
Leu Trp Asn Glu Ser Thr His Tyr Gln Ile Leu Leu Thr Ser Phe Pro
                405                 410                 415
His Met Glu Asn His Ser Cys Phe Glu His Met His His Ile Pro Ala
            420                 425                 430
Pro Arg Pro Glu Glu Phe His Gln Arg Ser Asn Val Thr Leu Thr Leu
        435                 440                 445
Arg Asn Leu Lys Gly Cys Cys Arg His Gln Val Gln Ile Gln Pro Phe
    450                 455                 460
Phe Ser Ser Cys Leu Asn Asp Cys Leu Arg His Ser Ala Thr Val Ser
465                 470                 475                 480
Cys Pro Glu Met Pro Asp Thr Pro Glu Pro Ile Pro Asp Tyr Met Pro
                485                 490                 495
Leu Trp Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
            500                 505                 510
Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
        515                 520                 525
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
    530                 535                 540
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
545                 550                 555                 560
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
                565                 570                 575
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
            580                 585                 590
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
        595                 600                 605
Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
    610                 615                 620
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
625                 630                 635                 640
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                645                 650                 655
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
            660                 665                 670
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
        675                 680                 685
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
    690                 695                 700
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
705                 710                 715                 720
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                725                 730
<210>143
<211>2124
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RA信号序列和IL-17RA的外显子1-3和人类IL-17RC的外显子4-16和Fc5
<400>143
atgggggccg cacgcagccc gccgtccgct gtcccggggc ccctgctggg gctgctcctg 60
ctgctcctgg gcgtgctggc cccgggtggc gcctccctgc gactcctgga ccaccgggcg 120
ctggtctgct cccagccggg gctaaactgc acggtcaaga atagtacctg cctggatgac 180
agctggattc accctcgaaa cctgaccccc tcctccccaa aggacctgca gatccagctg 240
cactttgccc acacccaaca aggagacctg ttccccgtgg ctcacatcga atggacactg 300
cagacagacg ggcactggga agagcctgaa gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac 360
tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag 420
gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag 480
tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat gactgcttcg aggctgccct agggagtgag 540
gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg tacgagaagg aactcaacca cacacagcag 600
ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg aattccatcc cgagctgctg ggccctgccc 660
tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag 720
cagcacttcg gcctctccct gtactggaat caggtccagg gccccccaaa accccggtgg 780
cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt accttgaacc acacagacct ggttccctgc 840
ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc 900
agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc 960
ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg 1020
cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc 1080
actgtggaca aggttctcga gttcccattg ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag 1140
gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag gagtgcttgt gggctgactc cctggggcct 1200
ctcaaagacg atgtgctact gttggagaca cgaggccccc aggacaacag atccctctgt 1260
gccttggaac ccagtggctg tacttcacta cccagcaaag cctccacgag ggcagctcgc 1320
cttggagagt acttactaca agacctgcag tcaggccagt gtctgcagct atgggacgat 1380
gacttgggag cgctatgggc ctgccccatg gacaaataca tccacaagga gcccaaatct 1440
tcagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aagccgaggg ggcaccgtca 1500
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 1560
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 1620
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 1680
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1740
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1800
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1860
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1920
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1980
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 2040
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 2100
agcctctccc tgtctccggg taaa                                        2124
<210>144
<211>708
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RA信号序列和IL-17RA的外显子1-3和人类IL-17RC的外显子4-16和Fc5
<400>144
Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu
 1               5                  10                  15
Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser
            20                  25                  30
Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gln Pro Gly Leu
        35                  40                  45
Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His
    50                  55                  60
Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gln Ile Gln Leu
65                  70                  75                  80
His Phe Ala His Thr Gln Gln Gly Asp Leu Phe Pro Val Ala His Ile
                85                  90                  95
Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Gly His Trp Glu Glu Pro Glu Asp Glu
            100                 105                 110
Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val Glu Glu Pro Arg Asn
        115                 120                 125
Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr Pro Thr
    130                 135                 140
Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Ala Leu Val Gln
145                 150                 155                 160
Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp Cys Phe Glu Ala Ala
                165                 170                 175
Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr Gln Pro Arg Tyr Glu
            180                 185                 190
Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Asp Cys Arg Gly Leu Glu
        195                 200                 205
Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val
    210                 215                 220
Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu
225                 230                 235                 240
Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro
                245                 250                 255
Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu
            260                 265                 270
Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu
        275                 280                 285
Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro
    290                 295                 300
Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr
305                 310                 315                 320
Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala
                325                 330                 335
Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val
            340                 345                 350
Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe
        355                 360                 365
Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser
    370                 375                 380
Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro
385                 390                 395                 400
Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn
                405                 410                 415
Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser
            420                 425                 430
Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp
        435                 440                 445
Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala
    450                 455                 460
Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro Lys Ser
465                 470                 475                 480
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu
                485                 490                 495
Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
            500                 505                 510
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
        515                 520                 525
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
    530                 535                 540
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
545                 550                 555                 560
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                565                 570                 575
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser
            580                 585                 590
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
        595                 600                 605
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
    610                 615                 620
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
625                 630                 635                 640
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
                645                 650                 655
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
            660                 665                 670
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
        675                 680                 685
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
    690                 695                 700
Ser Pro Gly Lys
705
<210>145
<211>2127
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RA信号序列和IL-17RA的外显子1和人类IL-17RC的外显子2-16和Fc5
<400>145
atgggggccg cacgcagccc gccgtccgct gtcccggggc ccctgctggg gctgctcctg 60
ctgctcctgg gcgtgctggc cccgggtggc gcctccctgc gactcctgga ccaccgggcg 120
ctggtctgct cccagccggg cctctcctgc cgcctctggg acagtgacat actctgcctg 180
cctggggaca tcgtgcctgc tccgggcccc gtgctggcgc ctacgcacct gcagacagag 240
ctggtgctga ggtgccagaa ggagaccgac tgtgacctct gtctgcgtgt ggctgtccac 300
ttggccgtgc atgggcactg ggaagagcct gaagatgagg aaaagtttgg aggagcagct 360
gactcagggg tggaggagcc taggaatgcc tctctccagg cccaagtcgt gctctccttc 420
caggcctacc ctactgcccg ctgcgtcctg ctggaggtgc aagtgcctgc tgcccttgtg 480
cagtttggtc agtctgtggg ctctgtggta tatgactgct tcgaggctgc cctagggagt 540
gaggtacgaa tctggtccta tactcagccc aggtacgaga aggaactcaa ccacacacag 600
cagctgcctg actgcagggg gctcgaagtc tggaattcca tcccgagctg ctgggccctg 660
ccctggctca acgtgtcagc agatggtgac aacgtgcatc tggttctgaa tgtctctgag 720
gagcagcact tcggcctctc cctgtactgg aatcaggtcc agggcccccc aaaaccccgg 780
tggcacaaaa acctgactgg accgcagatc attaccttga accacacaga cctggttccc 840
tgcctctgta ttcaggtgtg gcctctggaa cctgactccg ttaggacgaa catctgcccc 900
ttcagggagg acccccgcgc acaccagaac ctctggcaag ccgcccgact gcgactgctg 960
accctgcaga gctggctgct ggacgcaccg tgctcgctgc ccgcagaagc ggcactgtgc 1020
tggcgggctc cgggtgggga cccctgccag ccactggtcc caccgctttc ctgggagaac 1080
gtcactgtgg acaaggttct cgagttccca ttgctgaaag gccaccctaa cctctgtgtt 1140
caggtgaaca gctcggagaa gctgcagctg caggagtgct tgtgggctga ctccctgggg 1200
cctctcaaag acgatgtgct actgttggag acacgaggcc cccaggacaa cagatccctc 1260
tgtgccttgg aacccagtgg ctgtacttca ctacccagca aagcctccac gagggcagct 1320
cgccttggag agtacttact acaagacctg cagtcaggcc agtgtctgca gctatgggac 1380
gatgacttgg gagcgctatg ggcctgcccc atggacaaat acatccacaa ggagcccaaa 1440
tcttcagaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaagccga gggggcaccg 1500
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 1560
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 1620
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 1680
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 1740
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccatcctcca tcgagaaaac catctccaaa 1800
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg 1860
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1920
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1980
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 2040
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 2100
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa                                     2127
<210>146
<211>709
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RA信号序列和IL-17RA的外显子1和人类IL-17RC的外显子2-16和Fc5
<400>146
Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu
 1               5                  10                  15
Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser
            20                  25                  30
Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gln Pro Gly Leu
        35                  40                  45
Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys Leu Pro Gly Asp Ile
    50                  55                  60
Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr His Leu Gln Thr Glu
65                  70                  75                  80
Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys Asp Leu Cys Leu Arg
                85                  90                  95
Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp Glu Glu Pro Glu Asp
            100                 105                 110
Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val Glu Glu Pro Arg
        115                 120                 125
Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr Pro
    130                 135                 140
Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Ala Leu Val
145                 150                 155                 160
Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp Cys Phe Glu Ala
                165                 170                 175
Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr Gln Pro Arg Tyr
            180                 185                 190
Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Asp Cys Arg Gly Leu
        195                 200                 205
Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala Leu Pro Trp Leu Asn
    210                 215                 220
Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu
225                 230                 235                 240
Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro
                245                 250                 255
Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr
            260                 265                 270
Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro
        275                 280                 285
Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp
    290                 295                 300
Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu
305                 310                 315                 320
Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu
                325                 330                 335
Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu
            340                 345                 350
Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu
        355                 360                 365
Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser
    370                 375                 380
Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly
385                 390                 395                 400
Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp
                405                 410                 415
Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro
            420                 425                 430
Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln
        435                 440                 445
Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly
    450                 455                 460
Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro Lys
465                 470                 475                 480
Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
                485                 490                 495
Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
            500                 505                 510
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
        515                 520                 525
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
    530                 535                 540
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
545                 550                 555                 560
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
                565                 570                 575
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser
            580                 585                 590
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
        595                 600                 605
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
    610                 615                 620
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
625                 630                 635                 640
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
                645                 650                 655
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
            660                 665                 670
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
        675                 680                 685
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
    690                 695                 700
Leu Ser Pro Gly Lys
705
<210>147
<211>2094
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号序列和IL-17RCx4的外显子1-16(其中带有Cys194Ser
    和Cys202Ser的置换)和人类IL-17RC的外显子2-16和Fc5
<400>147
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact ccagggggct cgaagtctgg 600
aattccatcc cgagctcctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780
accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840
gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900
tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960
tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020
ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 1080
ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag 1140
gagtgcttgt gggctgactc cctggggcct ctcaaagacg atgtgctact gttggagaca 1200
cgaggccccc aggacaacag atccctctgt gccttggaac ccagtggctg tacttcacta 1260
cccagcaaag cctccacgag ggcagctcgc cttggagagt acttactaca agacctgcag 1320
tcaggccagt gtctgcagct atgggacgat gacttgggag cgctatgggc ctgccccatg 1380
gacaaataca tccacaagga gcccaaatct tcagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 1440
ccagcacctg aagccgaggg ggcaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 1500
accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 1560
gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 1620
aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 1680
caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1740
tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1800
accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1860
aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1920
aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1980
ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 2040
gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaa       2094
<210>148
<211>698
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号序列和IL-17RCx4的外显子1-16(其中带有Cys194Ser
     和Cys202Ser的置换)和人类IL-17RC的外显子2-16和Fc5
<400>148
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Ser Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Ser Trp Ala
        195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
            260                 265                 270
Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys
        275                 280                 285
Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala
    290                 295                 300
Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys
305                 310                 315                 320
Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp
                325                 330                 335
Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val
            340                 345                 350
Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys
        355                 360                 365
Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp
    370                 375                 380
Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr
385                 390                 395                 400
Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly
                405                 410                 415
Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly
            420                 425                 430
Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp
        435                 440                 445
Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile
    450                 455                 460
His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
465                 470                 475                 480
Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
                485                 490                 495
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
            500                 505                 510
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
        515                 520                 525
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
    530                 535                 540
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
545                 550                 555                 560
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
                565                 570                 575
Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
            580                 585                 590
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
        595                 600                 605
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
    610                 615                 620
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
625                 630                 635                 640
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                645                 650                 655
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
            660                 665                 670
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
        675                 680                 685
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
    690                 695
<210>149
<211>2061
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号序列和IL-17RC的外显子1-6和8-16和Fc5，在外显子6和外显子8
     之间有GlyGlyGlySer连接物
<400>149
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctggag gaggatccgc cctgccctgg 600
ctcaacgtgt cagcagatgg tgacaacgtg catctggttc tgaatgtctc tgaggagcag 660
cacttcggcc tctccctgta ctggaatcag gtccagggcc ccccaaaacc ccggtggcac 720
aaaaacctga ctggaccgca gatcattacc ttgaaccaca cagacctggt tccctgcctc 780
tgtattcagg tgtggcctct ggaacctgac tccgttagga cgaacatctg ccccttcagg 840
gaggaccccc gcgcacacca gaacctctgg caagccgccc gactgcgact gctgaccctg 900
cagagctggc tgctggacgc accgtgctcg ctgcccgcag aagcggcact gtgctggcgg 960
gctccgggtg gggacccctg ccagccactg gtcccaccgc tttcctggga gaacgtcact 1020
gtggacaagg ttctcgagtt cccattgctg aaaggccacc ctaacctctg tgttcaggtg 1080
aacagctcgg agaagctgca gctgcaggag tgcttgtggg ctgactccct ggggcctctc 1140
aaagacgatg tgctactgtt ggagacacga ggcccccagg acaacagatc cctctgtgcc 1200
ttggaaccca gtggctgtac ttcactaccc agcaaagcct ccacgagggc agctcgcctt 1260
ggagagtact tactacaaga cctgcagtca ggccagtgtc tgcagctatg ggacgatgac 1320
ttgggagcgc tatgggcctg ccccatggac aaatacatcc acaaggagcc caaatcttca 1380
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ccgagggggc accgtcagtc 1440
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 1500
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 1560
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 1620
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 1680
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccatcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1740
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 1800
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1860
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1920
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1980
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 2040
ctctccctgt ctccgggtaa a                                           2061
<210>150
<211>687
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC信号序列和IL-17RC的外显子1-6和8-16和Fc5，在外显子6和外显子8
     之间有GlyGlyGlySer连接物
<400>150
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Gly Gly Gly Ser Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp
        195                 200                 205
Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu
    210                 215                 220
Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His
225                 230                 235                 240
Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu
                245                 250                 255
Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val
            260                 265                 270
Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn
        275                 280                 285
Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu
    290                 295                 300
Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg
305                 310                 315                 320
Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp
                325                 330                 335
Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly
            340                 345                 350
His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu
        355                 360                 365
Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val
    370                 375                 380
Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala
385                 390                 395                 400
Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg
                405                 410                 415
Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln
            420                 425                 430
Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro
        435                 440                 445
Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
    450                 455                 460
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val
465                 470                 475                 480
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
                485                 490                 495
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
            500                 505                 510
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
        515                 520                 525
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
    530                 535                 540
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
545                 550                 555                 560
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
                565                 570                 575
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
            580                 585                 590
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
        595                 600                 605
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
    610                 615                 620
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
625                 630                 635                 640
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
                645                 650                 655
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
            660                 665                 670
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        675                 680                 685
<210>151
<211>2094
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>otPA前原信号序列和带有Leu21Ala置换的IL-17RC的外显子1-6
     和外显子8-16，和Fc5
<400>151
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60
tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagagcaga gaggcttgtg 120
gggcctcagg acgctaccca ctgctctccg ggcctctcct gccgcctctg ggacagtgac 180
atactctgcc tgcctgggga catcgtgcct gctccgggcc ccgtgctggc gcctacgcac 240
ctgcagacag agctggtgct gaggtgccag aaggagaccg actgtgacct ctgtctgcgt 300
gtggctgtcc acttggccgt gcatgggcac tgggaagagc ctgaagatga ggaaaagttt 360
ggaggagcag ctgactcagg ggtggaggag cctaggaatg cctctctcca ggcccaagtc 420
gtgctctcct tccaggccta ccctactgcc cgctgcgtcc tgctggaggt gcaagtgcct 480
gctgcccttg tgcagtttgg tcagtctgtg ggctctgtgg tatatgactg cttcgaggct 540
gccctaggga gtgaggtacg aatctggtcc tatactcagc ccaggtacga gaaggaactc 600
aaccacacac agcagctgcc tgccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780
accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840
gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900
tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960
tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020
ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 1080
ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag 1140
gagtgcttgt gggctgactc cctggggcct ctcaaagacg atgtgctact gttggagaca 1200
cgaggccccc aggacaacag atccctctgt gccttggaac ccagtggctg tacttcacta 1260
cccagcaaag cctccacgag ggcagctcgc cttggagagt acttactaca agacctgcag 1320
tcaggccagt gtctgcagct atgggacgat gacttgggag cgctatgggc ctgccccatg 1380
gacaaataca tccacaagga gcccaaatct tcagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 1440
ccagcacctg aagccgaggg ggcaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 1500
accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 1560
gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 1620
aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 1680
caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1740
tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1800
accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1860
aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1920
aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1980
ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 2040
gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaa       2094
<210>152
<211>698
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>otPA前原信号序列和带有Leu21Ala置换的IL-17RC的外显子1-6
     和外显子8-16，和Fc5
<400>152
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
 1               5                  10                  15
Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg
            20                  25                  30
Phe Arg Arg Ala Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His Cys
        35                  40                  45
Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys Leu
    50                  55                  60
Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr His
65                  70                  75                  80
Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys Asp
                85                  90                  95
Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp Glu
            100                 105                 110
Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val
        115                 120                 125
Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe
    130                 135                 140
Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro
145                 150                 155                 160
Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp
                165                 170                 175
Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr
            180                 185                 190
Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala
       195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
            260                 265                 270
Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys
        275                 280                 285
Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala
    290                 295                 300
Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys
305                 310                 315                 320
Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp
                325                 330                 335
Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val
            340                 345                 350
Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys
        355                 360                 365
Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp
    370                 375                 380
Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr
385                 390                 395                 400
Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly
                405                 410                 415
Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly
            420                 425                 430
Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp
        435                 440                 445
Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile
    450                 455                 460
His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
465                 470                 475                 480
Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
                485                 490                 495
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
            500                 505                 510
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
        515                 520                 525
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
    530                 535                 540
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
545                 550                 555                 560
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
                565                 570                 575
Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
            580                 585                 590
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
        595                 600                 605
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
    610                 615                 620
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
625                 630                 635                 640
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                645                 650                 655
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
            660                 665                 670
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
        675                 680                 685
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
    690                 695
<210>153
<211>2097
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC的外显子1-6和8-16，带有Ser215Thr和Ser228Thr置换
<400>153
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60
tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagactgga gaggcttgtg 120
gggcctcagg acgctaccca ctgctctccg ggcctctcct gccgcctctg ggacagtgac 180
atactctgcc tgcctgggga catcgtgcct gctccgggcc ccgtgctggc gcctacgcac 240
ctgcagacag agctggtgct gaggtgccag aaggagaccg actgtgacct ctgtctgcgt 300
gtggctgtcc acttggccgt gcatgggcac tgggaagagc ctgaagatga ggaaaagttt 360
ggaggagcag ctgactcagg ggtggaggag cctaggaatg cctctctcca ggcccaagtc 420
gtgctctcct tccaggccta ccctactgcc cgctgcgtcc tgctggaggt gcaagtgcct 480
gctgcccttg tgcagtttgg tcagtctgtg ggctctgtgg tatatgactg cttcgaggct 540
gccctaggga gtgaggtacg aatctggtcc tatactcagc ccaggtacga gaaggaactc 600
aaccacacac agcagctgcc tgccctgccc tggctcaacg tgacagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt cacagaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780
accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840
gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900
tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960
tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020
ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 1080
ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag 1140
gagtgcttgt gggctgactc cctggggcct ctcaaagacg atgtgctact gttggagaca 1200
cgaggccccc aggacaacag atccctctgt gccttggaac ccagtggctg tacttcacta 1260
cccagcaaag cctccacgag ggcagctcgc cttggagagt acttactaca agacctgcag 1320
tcaggccagt gtctgcagct atgggacgat gacttgggag cgctatgggc ctgccccatg 1380
gacaaataca tccacaagga gcccaaatct tcagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 1440
ccagcacctg aagccgaggg ggcaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 1500
accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 1560
gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 1620
aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 1680
caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1740
tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1800
accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1860
aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1920
aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1980
ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 2040
gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaataa    2097
<210>154
<211>698
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC的外显子1-6和8-16(带有Ser215Thr和Ser228Thr置换)和Fc5
<400>154
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
 1               5                  10                  15
Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg
            20                  25                  30
Phe Arg Arg Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His Cys
        35                  40                  45
Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys Leu
    50                  55                  60
Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr His
65                  70                  75                  80
Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys Asp
                85                  90                  95
Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp Glu
            100                 105                 110
Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val
        115                 120                 125
Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe
    130                 135                 140
Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro
145                 150                 155                 160
Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp
                165                 170                 175
Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr
            180                 185                 190
Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala
        195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Thr Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Thr Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
            260                 265                 270
Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys
        275                 280                 285
Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala
    290                 295                 300
Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys
305                 310                 315                 320
Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp
                325                 330                 335
Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val
            340                 345                 350
Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys
        355                 360                 365
Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp
    370                 375                 380
Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr
385                 390                 395                 400
Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly
                405                 410                 415
Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly
            420                 425                 430
Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp
        435                 440                 445
Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile
    450                 455                 460
His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
465                 470                 475                 480
Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
                485                 490                 495
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
            500                 505                 510
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
        515                 520                 525
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
    530                 535                 540
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
545                 550                 555                 560
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
                565                 570                 575
Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
            580                 585                 590
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
        595                 600                 605
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
    610                 615                 620
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
625                 630                 635                 640
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                645                 650                 655
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
            660                 665                 670
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
        675                 680                 685
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
    690                 695
<210>155
<211>2094
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC的外显子1-6和8-16和Fc5，在120、215、228、374和408位的残基
     处有Ser置换为Thr的置换
<400>155
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60
tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagactgga gaggcttgtg 120
gggcctcagg acgctaccca ctgctctccg ggcctctcct gccgcctctg ggacagtgac 180
atactctgcc tgcctgggga catcgtgcct gctccgggcc ccgtgctggc gcctacgcac 240
ctgcagacag agctggtgct gaggtgccag aaggagaccg actgtgacct ctgtctgcgt 300
gtggctgtcc acttggccgt gcatgggcac tgggaagagc ctgaagatga ggaaaagttt 360
ggaggagcag ctgactcagg ggtggaggag cctaggaatg ccacactcca ggcccaagtc 420
gtgctctcct tccaggccta ccctactgcc cgctgcgtcc tgctggaggt gcaagtgcct 480
gctgcccttg tgcagtttgg tcagtctgtg ggctctgtgg tatatgactg cttcgaggct 540
gccctaggga gtgaggtacg aatctggtcc tatactcagc ccaggtacga gaaggaactc 600
aaccacacac agcagctgcc tgccctgccc tggctcaacg tgacagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt cacagaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780
accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840
gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900
tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960
tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020
ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 1080
ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagca cagagaagct gcagctgcag 1140
gagtgcttgt gggctgactc cctggggcct ctcaaagacg atgtgctact gttggagaca 1200
cgaggccccc aggacaacag aacactctgt gccttggaac ccagtggctg tacttcacta 1260
cccagcaaag cctccacgag ggcagctcgc cttggagagt acttactaca agacctgcag 1320
tcaggccagt gtctgcagct atgggacgat gacttgggag cgctatgggc ctgccccatg 1380
gacaaataca tccacaagga gcccaaatct tcagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 1440
ccagcacctg aagccgaggg ggcaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 1500
accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 1560
gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 1620
aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 1680
caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1740
tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1800
accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1860
aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1920
aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1980
ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 2040
gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaa       2094
<210>156
<211>698
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RC的外显子1-6和8-16和Fc5，在120、215、228、374和408位的残基
     处有Ser置换为Thr的置换
<400>156
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
 1               5              10                  15
Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg
            20                  25                  30
Phe Arg Arg Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His Cys
        35                  40                  45
Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys Leu
    50                  55                  60
Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr His
65                  70                  75                  80
Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys Asp
                85                  90                  95
Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp Glu
            100                 105                 110
Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val
        115                 120                 125
Glu Glu Pro Arg Asn Ala Thr Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe
    130                 135                 140
Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro
145                 150                 155                 160
Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp
                165                 170                 175
Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr
            180                 185                 190
Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala
        195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Thr Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Thr Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
            260                 265                 270
Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys
        275                 280                 285
Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala
    290                 295                 300
Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys
305                 310                 315                 320
Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp
                325                 330                 335
Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val
            340                 345                 350
Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys
        355                 360                 365
Val Gln Val Asn Ser Thr Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp
    370                 375                 380
Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr
385                 390                 395                 400
Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Thr Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly
                405                 410                 415
Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly
            420                 425                 430
Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp
        435                 440                 445
Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile
    450                 455                 460
His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
465                 470                 475                 480
Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
                485                 490                 495
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
            500                 505                 510
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
        515                 520                 525
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
    530                 535                 540
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
545                 550                 555                 560
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
                565                 570                 575
Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
            580                 585                 590
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
        595                 600                 605
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
    610                 615                 620
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
625                 630                 635                 640
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                645                 650                 655
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
            660                 665                 670
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
        675                 680                 685
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
    690                 695
<210>157
<211>2070
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RA信号肽和IL-17RA的外显子1-6和IL-17RC的外显子8-16和Fc5
<400>157
atgggggccg cacgcagccc gccgtccgct gtcccggggc ccctgctggg gctgctcctg 60
ctgctcctgg gcgtgctggc cccgggtggc gcctccctgc gactcctgga ccaccgggcg 120
ctggtctgct cccagccggg gctaaactgc acggtcaaga atagtacctg cctggatgac 180
agctggattc accctcgaaa cctgaccccc tcctccccaa aggacctgca gatccagctg 240
cactttgccc acacccaaca aggagacctg ttccccgtgg ctcacatcga atggacactg 300
cagacagacg ccagcatcct gtacctcgag ggtgcagagt tatctgtcct gcagctgaac 360
accaatgaac gtttgtgcgt caggtttgag tttctgtcca aactgaggca tcaccacagg 420
cggtggcgtt ttaccttcag ccactttgtg gttgaccctg accaggaata tgaggtgacc 480
gttcaccacc tgcccaagcc catccctgat ggggacccaa accaccagtc caagaatttc 540
cttgtgcctg actgtgagca cgccaggatg aaggtaacca cgccatgcat gagctcagcc 600
ctgccctggc tcaacgtgtc agcagatggt gacaacgtgc atctggttct gaatgtctct 660
gaggagcagc acttcggcct ctccctgtac tggaatcagg tccagggccc cccaaaaccc 720
cggtggcaca aaaacctgac tggaccgcag atcattacct tgaaccacac agacctggtt 780
ccctgcctct gtattcaggt gtggcctctg gaacctgact ccgttaggac gaacatctgc 840
cccttcaggg aggacccccg cgcacaccag aacctctggc aagccgcccg actgcgactg 900
ctgaccctgc agagctggct gctggacgca ccgtgctcgc tgcccgcaga agcggcactg 960
tgctggcggg ctccgggtgg ggacccctgc cagccactgg tcccaccgct ttcctgggag 1020
aacgtcactg tggacaaggt tctcgagttc ccattgctga aaggccaccc taacctctgt 1080
gttcaggtga acagctcgga gaagctgcag ctgcaggagt gcttgtgggc tgactccctg 1140
gggcctctca aagacgatgt gctactgttg gagacacgag gcccccagga caacagatcc 1200
ctctgtgcct tggaacccag tggctgtact tcactaccca gcaaagcctc cacgagggca 1260
gctcgccttg gagagtactt actacaagac ctgcagtcag gccagtgtct gcagctatgg 1320
gacgatgact tgggagcgct atgggcctgc cccatggaca aatacatcca caaggagccc 1380
aaatcttcag acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgagggggca 1440
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 1500
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 1560
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 1620
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1680
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccatcct ccatcgagaa aaccatctcc 1740
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 1800
ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1860
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1920
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1980
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 2040
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa    2070
<210>158
<211>690
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-17RA信号肽和IL-17RA的外显子1-6和IL-17RC的外显子8-16和Fc5
<400>158
Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu
 1               5                  10                  15
Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser
            20                  25                  30
Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gln Pro Gly Leu
        35                  40                  45
Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His
    50                  55                  60
Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gln Ile Gln Leu
65                  70                  75                  80
His Phe Ala His Thr Gln Gln Gly Asp Leu Phe Pro Val Ala His Ile
                85                  90                  95
Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala
            100                 105                 110
Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Arg
        115                 120                 125
Phe Glu Phe Leu Ser Lys Leu Arg His His His Arg Arg Trp Arg Phe
    130                 135                 140
Thr Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Asp Gln Glu Tyr Glu Val Thr
145                 150                 155                 160
Val His His Leu Pro Lys Pro Ile Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Gln
                165                 170                 175
Ser Lys Asn Phe Leu Val Pro Asp Cys Glu His Ala Arg Met Lys Val
            180                 185                 190
Thr Thr Pro Cys Met Ser Ser Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala
        195                 200                 205
Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His
    210                 215                 220
Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro
225                 230                 235                 240
Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His
                245                 250                 255
Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro
            260                 265                 270
Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala
        275                 280                 285
His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln
    290                 295                 300
Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu
305                 310                 315                 320
Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro
                325                 330                 335
Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu
            340                 345                 350
Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys
        355                 360                 365
Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys
    370                 375                 380
Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser
385                 390                 395                 400
Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala
                405                 410                 415
Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln
            420                 425                 430
Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp
        435                 440                 445
Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp
    450                 455                 460
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala
465                 470                 475                 480
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
                485                 490                 495
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
            500                 505                 510
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
        515                 520                 525
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
    530                 535                 540
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
545                 550                 555                 560
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu
                565                 570                 575
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
            580                 585                 590
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
        595                 600                 605
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
    610                 615                 620
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
625                 630                 635                 640
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
                645                 650                 655
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
            660                 665                 670
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
        675                 680                 685
Gly Lys
    690
<210>159
<211>252
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>结构域1
<400>159
gccctgccct ggctcaacgt gtcagcagat ggtgacaacg tgcatctggt tctgaatgtc 60
tctgaggagc agcacttcgg cctctccctg tactggaatc aggtccaggg ccccccaaaa 120
ccccggtggc acaaaaacct gactggaccg cagatcatta ccttgaacca cacagacctg 180
gttccctgcc tctgtattca ggtgtggcct ctggaacctg actccgttag gacgaacatc 240
tgccccttca gg                                                     252
<210>160
<211>84
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>结构域1
<400>160
Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu
 1               5                  10                  15
Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp
            20                  25                  30
Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr
        35                  40                  45
Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu
    50                  55                  60
Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile
65                  70                  75                  80
Cys Pro Phe Arg
<210>161
<211>282
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>结构域2
<400>161
gaggaccccc gcgcacacca gaacctctgg caagccgccc gactgcgact gctgaccctg 60
cagagctggc tgctggacgc accgtgctcg ctgcccgcag aagcggcact gtgctggcgg 120
gctccgggtg gggacccctg ccagccactg gtcccaccgc tttcctggga gaacgtcact 180
gtggacaagg ttctcgagtt cccattgctg aaaggccacc ctaacctctg tgttcaggtg 240
aacagctcgg agaagctgca gctgcaggag tgcttgtggg ct                    282
<210>162
<211>94
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>结构域2
<400>162
Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg
 1               5                  10                  15
Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro
            20                  25                  30
Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln
        35                  40                  45
Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val
    50                  55                  60
Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val
65                  70                  75                  80
Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala
                85                  90
<210>163
<211>231
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>结构域3
<400>163
gactccctgg ggcctctcaa agacgatgtg ctactgttgg agacacgagg cccccaggac 60
aacagatccc tctgtgcctt ggaacccagt ggctgtactt cactacccag caaagcctcc 120
acgagggcag ctcgccttgg agagtactta ctacaagacc tgcagtcagg ccagtgtctg 180
cagctatggg acgatgactt gggagcgcta tgggcctgcc ccatggacaa a          231
<210>164
<211>77
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>结构域3
<400>164
Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg
 1               5                  10                  15
Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys
            20                  25                  30
Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu
        35                  40                  45
Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp
    50                  55                  60
Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys
65                  70                  75
<210>165
<211>2124
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>165
atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60
ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120
ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180
ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240
gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300
gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360
ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420
gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480
gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540
tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600
aacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660
gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720
caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780
accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840
gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900
tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960
tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020
ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 1080
ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag 1140
gagtgcttgt gggctgactc cctggggcct ctcaaagacg atgtgctact gttggagaca 1200
cgaggccccc aggacaacag atccctctgt gccttggaac ccagtggctg tacttcacta 1260
cccagcaaag cctccacgag ggcagctcgc cttggagagt acttactaca agacctgcag 1320
tcaggccagt gtctgcagct atgggacgat gacttgggag cgctatgggc ctgccccatg 1380
gacaaataca tccacaagcg ctgggccctc gtgtggctgg cctgcctact ctttgccgct 1440
gcgctttccc tcatcctcct tctcaaaaag gatcacgcga aagcggccgc caggggccgc 1500
gcggctctgc tcctctactc agccgatgac tcgggtttcg agcgcctggt gggcgccctg 1560
gcgtcggccc tgtgccagct gccgctgcgc gtggccgtag acctgtggag ccgtcgtgaa 1620
ctgagcgcgc aggggcccgt ggcttggttt cacgcgcagc ggcgccagac cctgcaggag 1680
ggcggcgtgg tggtcttgct cttctctccc ggtgcggtgg cgctgtgcag cgagtggcta 1740
caggatgggg tgtccgggcc cggggcgcac ggcccgcacg acgccttccg cgcctcgctc 1800
agctgcgtgc tgcccgactt cttgcagggc cgggcgcccg gcagctacgt gggggcctgc 1860
ttcgacaggc tgctccaccc ggacgccgta cccgcccttt tccgcaccgt gcccgtcttc 1920
acactgccct cccaactgcc agacttcctg ggggccctgc agcagcctcg cgccccgcgt 1980
tccgggcggc tccaagagag agcggagcaa gtgtcccggg cccttcagcc agccctggat 2040
agctacttcc atcccccggg gactcccgcg ccgggacgcg gggtgggacc aggggcggga 2100
cctggggcgg gggacgggac ttaa    2124
<210>166
<211>707
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>166
Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His
            20                  25                  30
Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys
        35                  40                  45
Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr
    50                  55                  60
His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys
65                  70                  75                  80
Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp
                85                  90                  95
Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser
        115                 120                 125
Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val
    130                 135                 140
Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro
            180                 185                 190
Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala
        195                 200                 205
Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val
    210                 215                 220
Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys
            260                 265                 270
Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys
        275                 280                 285
Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala
    290                 295                 300
Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys
305                 310                 315                 320
Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp
                325                 330                 335
Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val
            340                 345                 350
Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys
        355                 360                 365
Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp
    370                 375                 380
Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr
385                 390                 395                 400
Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly
                405                 410                 415
Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly
            420                 425                 430
Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp
        435                 440                 445
Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile
    450                 455                 460
His Lys Arg Trp Ala Leu Val Trp Leu Ala Cys Leu Leu Phe Ala Ala
465                 470                 475                 480
Ala Leu Ser Leu Ile Leu Leu Leu Lys Lys Asp His Ala Lys Ala Ala
                485                 490                 495
Ala Arg Gly Arg Ala Ala Leu Leu Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser Gly
            500                 505                 510
Phe Glu Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Ser Ala Leu Cys Gln Leu Pro
        515                 520                 525
Leu Arg Val Ala Val Asp Leu Trp Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala Gln
    530                 535                 540
Gly Pro Val Ala Trp Phe His Ala Gln Arg Arg Gln Thr Leu Gln Glu
545                 550                 555                 560
Gly Gly Val Val Val Leu Leu Phe Ser Pro Gly Ala Val Ala Leu Cys
                565                 570                 575
Ser Glu Trp Leu Gln Asp Gly Val Ser Gly Pro Gly Ala His Gly Pro
            580                 585                 590
His Asp Ala Phe Arg Ala Ser Leu Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe Leu
        595                 600                 605
Gln Gly Arg Ala Pro Gly Ser Tyr Val Gly Ala Cys Phe Asp Arg Leu
    610                 615                 620
Leu His Pro Asp Ala Val Pro Ala Leu Phe Arg Thr Val Pro Val Phe
625                 630                 635                 640
Thr Leu Pro Ser Gln Leu Pro Asp Phe Leu Gly Ala Leu Gln Gln Pro
                645                 650                 655
Arg Ala Pro Arg Ser Gly Arg Leu Gln Glu Arg Ala Glu Gln Val Ser
            660                 665                 670
Arg Ala Leu Gln Pro Ala Leu Asp Ser Tyr Phe His Pro Pro Gly Thr
        675                 680                 685
Pro Ala Pro Gly Arg Gly Val Gly Pro Gly Ala Gly Pro Gly Ala Gly
    690                 695                 700
Asp Gly Thr
705
<210>167
<211>3120
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<400>167
ggggccgagc cctccgcgac gccacccggg ccatgggggc cgcacgcagc ccgccgtccg 60
ctgtcccggg gcccctgctg gggctgctcc tgctgctcct gggcgtgctg gccccgggtg 120
gcgcctccct gcgactcctg gaccaccggg cgctggtctg ctcccagccg gggctaaact 180
gcacggtcaa gaatagtacc tgcctggatg acagctggat tcaccctcga aacctgaccc 240
cctcctcccc aaaggacctg cagatccagc tgcactttgc ccacacccaa caaggagacc 300
tgttccccgt ggctcacatc gaatggacac tgcagacaga cgccagcatc ctgtacctcg 360
agggtgcaga gttatctgtc ctgcagctga acaccaatga acgtttgtgc gtcaggtttg 420
agtttctgtc caaactgagg catcaccaca ggcggtggcg ttttaccttc agccactttg 480
tggttgaccc tgaccaggaa tatgaggtga ccgttcacca cctgcccaag cccatccctg 540
atggggaccc aaaccaccag tccaagaatt tccttgtgcc tgactgtgag cacgccagga 600
tgaaggtaac cacgccatgc atgagctcag gcagcctgtg ggaccccaac atcaccgtgg 660
agaccctgga ggcccaccag ctgcgtgtga gcttcaccct gtggaacgaa tctacccatt 720
accagatcct gctgaccagt tttccgcaca tggagaacca cagttgcttt gagcacatgc 780
accacatacc tgcgcccaga ccagaagagt tccaccagcg atccaacgtc acactcactc 840
tacgcaacct taaagggtgc tgtcgccacc aagtgcagat ccagcccttc ttcagcagct 900
gcctcaatga ctgcctcaga cactccgcga ctgtttcctg cccagaaatg ccagacactc 960
cagaaccaat tccggactac atgcccctgt gggtgtactg gttcatcacg ggcatctcca 1020
tcctgctggt gggctccgtc atcctgctca tcgtctgcat gacctggagg ctagctgggc 1080
ctggaagtga aaaatacagt gatgacacca aatacaccga tggcctgcct gcggctgacc 1140
tgatcccccc accgctgaag cccaggaagg tctggatcat ctactcagcc gaccaccccc 1200
tctacgtgga cgtggtcctg aaattcgccc agttcctgct caccgcctgc ggcacggaag 1260
tggccctgga cctgctggaa gagcaggcca tctcggaggc aggagtcatg acctgggtgg 1320
gccgtcagaa gcaggagatg gtggagagca actctaagat catcgtcctg tgctcccgcg 1380
gcacgcgcgc caagtggcag gcgctcctgg gccggggggc gcctgtgcgg ctgcgctgcg 1440
accacggaaa gcccgtgggg gacctgttca ctgcagccat gaacatgatc ctcccggact 1500
tcaagaggcc agcctgcttc ggcacctacg tagtctgcta cttcagcgag gtcagctgtg 1560
acggcgacgt ccccgacctg ttcggcgcgg cgccgcggta cccgctcatg gacaggttcg 1620
aggaggtgta cttccgcatc caggacctgg agatgttcca gccgggccgc atgcaccgcg 1680
taggggagct gtcgggggac aactacctgc ggagcccggg cggcaggcag ctccgcgccg 1740
ccctggacag gttccgggac tggcaggtcc gctgtcccga ctggttcgaa tgtgagaacc 1800
tctactcagc agatgaccag gatgccccgt ccctggacga agaggtgttt gaggagccac 1860
tgctgcctcc gggaaccggc atcgtgaagc gggcgcccct ggtgcgcgag cctggctccc 1920
aggcctgcct ggccatagac ccgctggtcg gggaggaagg aggagcagca gtggcaaagc 1980
tggaacctca cctgcagccc cggggtcagc cagcgccgca gcccctccac accctggtgc 2040
tcgccgcaga ggagggggcc ctggtggccg cggtggagcc tgggcccctg gctgacggtg 2100
ccgcagtccg gctggcactg gcgggggagg gcgaggcctg cccgctgctg ggcagcccgg 2160
gcgctgggcg aaatagcgtc ctcttcctcc ccgtggaccc cgaggactcg ccccttggca 2220
gcagcacccc catggcgtct cctgacctcc ttccagagga cgtgagggag cacctcgaag 2280
gcttgatgct ctcgctcttc gagcagagtc tgagctgcca ggcccagggg ggctgcagta 2340
gacccgccat ggtcctcaca gacccacaca cgccctacga ggaggagcag cggcagtcag 2400
tgcagtctga ccagggctac atctccagga gctccccgca gccccccgag ggactcacgg 2460
aaatggagga agaggaggaa gaggagcagg acccagggaa gccggccctg ccactctctc 2520
ccgaggacct ggagagcctg aggagcctcc agcggcagct gcttttccgc cagctgcaga 2580
agaactcggg ctgggacacg atggggtcag agtcagaggg gcccagtgca tgagggcggc 2640
tccccaggga ccgcccagat cccagctttg agagaggagt gtgtgtgcac gtattcatct 2700
gtgtgtacat gtctgcatgt gtatatgttc gtgtgtgaaa tgtaggcttt aaaatgtaaa 2760
tgtctggatt ttaatcccag gcatccctcc taacttttct ttgtgcagcg gtctggttat 2820
cgtctatccc caggggaatc cacacagccc gctcccagga gctaatggta gagcgtcctt 2880
gaggctccat tattcgttca ttcagcattt attgtgcacc tactatgtgg cgggcatttg 2940
ggataccaag ataaattgca tgcggcatgg ccccagccat gaaggaactt aaccgctagt 3000
gccgaggaca cgttaaacga acaggatggg ccgggcacgg tggctcacgc ctgtaatccc 3060
agcacactgg gaggccgagg caggtggatc actctgaggt caggagtttg agccagcctg 3120
<210>168
<211>78
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人类生长激素信号肽
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(78)
<400>168
atg gct aca ggc tcc cgg acg tcc ctg ctc ctg gct ttt ggc ctg ctc  48
Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu
 1               5                  10                  15
tgc ctg ccc tgg ctt caa gag ggc agt gcc                          78
Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala
            20                  25
<210>169
<211>26
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人类生长激素信号肽
<400>169
Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu
1                5                  10                  15
Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala
            20                  25
<210>170
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>小鼠免疫球蛋白重链可变区(VH 26-10)信号肽
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(57)
<400>170
atg gga tgg agc tgg atc ttt ctc ttt ctt ctg tca gga act gca ggt  48
Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly
 1               5                  10                  15
gtc ctc tct                                                      57
Val Leu Ser
<210>171
<211>19
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>小鼠免疫球蛋白重链可变区(VH 26-10)信号肽
<400>171
Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly
 1               5                  10                  15
Val Leu Ser
<210>172
<211>48
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人类CD33信号肽
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(48)
<400>172
atg ccg ctg ctg cta ctg ctg ccc ctg ctg tgg gca ggg gcc ctg gct  48
Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala
 1               5                  10                  15
<210>173
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人类CD33信号肽
<400>173
Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala
 1               5                  10                  15
<210>174
<211>696
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Fc10免疫球蛋白重链恒定区
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(696)
<400>174
gag ccc aaa tct tca gac aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca  48
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
 1               5                  10                  15
cct gaa ctc ctg ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc   96
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
            20                  25                  30
aag gac acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg   144
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
        35                  40                  45
gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg   192
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
    50                  55                  60
gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag   240
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65                  70                  75                  80
tac aac agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag   288
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
                85                  90                  95
gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc   336
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
           100                 105                 110
ctc cca gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc   384
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
       115                 120                 125
cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc   432
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
    130                 135                 140
aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc   480
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145                 150                 155                 160
gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac   528
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
                165                 170                 175
aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac   576
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
            180                 185                 190
agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc   624
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
        195                 200                 205
tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac ccac tac acg cag aag  672
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu HisAsn His Tyr Thr Gln Lys
    210                 215                 220
agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa                                   696
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225                 230
<210>175
<211>232
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Fc10免疫球蛋白重链恒定区
<400>175
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
 1               5                  10                  15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
            20                  25                  30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
        35                  40                  45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
    50                  55                  60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65                  70                  75                  80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
                85                  90                  95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
            100                 105                 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
        115                 120                 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
    130                 135                 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145                 150                 155                 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
                165                 170                 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
            180                 185                 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
        195                 200                 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
    210                 215                 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225                 230
<210>176
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>连接物
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(60)
<400>176
gga ggt ggg ggc tcc ggc ggg ggt gga agc ggt gga ggc ggg tcg ggg  48
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
 1               5                  10                  15
ggc gga ggt agt                                                  60
Gly Gly Gly Ser
            20
<210>177
<211>20
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>连接物
<400>177
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
 1               5                  10                  15
Gly Gly Gly Ser
            20
<210>178
<211>35
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>来自otPA的前原信号序列
<400>178
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
 1               5                  10                  15
Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg
            20                  25                  30
Phe Arg Arg
        35
<210>179
<211>696
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Fc5免疫球蛋白重链恒定区
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(696)
<400>179
gag ccc aaa tct tca gac aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca  48
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
 1               5                  10                  15
cct gaa gcc gag ggg gca ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc  96
Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
            20                  25                  30
aag gac acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg  144
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
        35                  40                  45
gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg  192
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
    50                  55                  60
gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag  240
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65                  70                  75                  80
tac aac agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag  288
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
                85                  90                  95
gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc  336
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
            100                 105                 110
ctc cca tcc tcc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc  384
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
        115                 120                 125
cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc  432
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
    130                 135                 140
aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc  480
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145                 150                 155                 160
gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac  528
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
                165                 170                 175
aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac  576
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
            180                 185                 190
agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc  624
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
        195                 200                 205
tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag  672
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
    210                 215                 220
agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa                                  696
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225                 230
<210>180
<211>232
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Fc5免疫球蛋白重链恒定区
<400>180
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
 1               5                  10                  15
Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
            20                  25                  30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
        35                  40                  45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
    50                  55                  60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65                  70                  75                  80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
                85                  90                  95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
            100                 105                 110
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
        115                 120                 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
    130                 135                 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145                 150                 155                 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
                165                 170                 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
            180                 185                 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
        195                 200                 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
    210                 215                 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225                 230
<210>181
<211>31
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>鼠类Il-17RA信号肽
<400>181
Met Ala Ile Arg Arg Cys Trp Pro Arg Val Val Pro Gly Pro Ala Leu
 1               5                  10                  15
Gly Trp Leu Leu Leu Leu Leu Asn Val Leu Ala Pro Gly Arg Ala
            20                  25                  30
<210>182
<211>1974
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(1974)
<220>
<223>带有N端丝氨酸缺失的IL-17RA的外显子1-6，IL-17RC的外显子8-16和Fc5
<400>182
ctg cga ctc ctg gac cac cgg gcg ctg gtc tgc tcc cag ccg ggg cta  48
Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gln Pro Gly Leu
 1               5                  10                  15
aac tgc acg gtc aag aat agt acc tgc ctg gat gac agc tgg att cac  96
Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His
            20                  25                  30
cct cga aac ctg acc ccc tcc tcc cca aag gac ctg cag atc cag ctg    144
Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gln Ile Gln Leu
        35                  40                  45
cac ttt gcc cac acc caa caa gga gac ctg ttc ccc gtg gct cac atc    192
His Phe Ala His Thr Gln Gln Gly Asp Leu Phe Pro Val Ala His Ile
    50                  55                  60
gaa tgg aca ctg cag aca gac gcc agc atc ctg tac ctc gag ggt gca    240
Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala
65                  70                  75                  80
gag tta tct gtc ctg cag ctg aac acc aat gaa cgt ttg tgc gtc agg    288
Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Arg
                85                  90                  95
ttt gag ttt ctg tcc aaa ctg agg cat cac cac agg cgg tgg cgt ttt    336
Phe Glu Phe Leu Ser Lys Leu Arg His His His Arg Arg Trp Arg Phe
            100                 105                 110
acc ttc agc cac ttt gtg gtt gac cct gac cag gaa tat gag gtg acc    384
Thr Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Asp Gln Glu Tyr Glu Val Thr
        115                 120                 125
gtt cac cac ctg ccc aag ccc atc cct gat ggg gac cca aac cac cag    432
Val His His Leu Pro Lys Pro Ile Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Gln
    130                 135                 140
tcc aag aat ttc ctt gtg cct gac tgt gag cac gcc agg atg aag gta    480
Ser Lys Asn Phe Leu Val Pro Asp Cys Glu His Ala Arg Met Lys Val
145                 150                 155                 160
acc acg cca tgc atg agc tca gcc ctg ccc tgg ctc aac gtg tca gca    528
Thr Thr Pro Cys Met Ser Ser Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala
                165                 170                 175
gat ggt gac aac gtg cat ctg gtt ctg aat gtc tct gag gag cag cac    576
Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His
            180                 185                 190
ttc ggc ctc tcc ctg tac tgg aat cag gtc cag ggc ccc cca aaa ccc    624
Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro
        195                 200                 205
cgg tgg cac aaa aac ctg act gga ccg cag atc att acc ttg aac cac    672
Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His
    210                 215                 220
aca gac ctg gtt ccc tgc ctc tgt att cag gtg tgg cct ctg gaa cct    720
Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro
225                 230                 235                 240
gac tcc gtt agg acg aac atc tgc ccc ttc agg gag gac ccc cgc gca    768
Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala
                245                 250                 255
cac cag aac ctc tgg caa gcc gcc cga ctg cga ctg ctg acc ctg cag    816
His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln
            260                 265                 270
agc tgg ctg ctg gac gca ccg tgc tcg ctg ccc gca gaa gcg gca ctg    864
Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu
        275                 280                 285
tgc tgg cgg gct ccg ggt ggg gac ccc tgc cag cca ctg gtc cca ccg    912
Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro
    290                 295                 300
ctt tcc tgg gag aac gtc act gtg gac aag gtt ctc gag ttc cca ttg    960
Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu
305                 310                 315                 320
ctg aaa ggc cac cct aac ctc tgt gtt cag gtg aac agc tcg gag aag    1008
Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys
                325                 330                 335
ctg cag ctg cag gag tgc ttg tgg gct gac tcc ctg ggg cct ctc aaa    1056
Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys
            340                 345                 350
gac gat gtg cta ctg ttg gag aca cga ggc ccc cag gac aac aga tcc    1104
Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser
        355                 360                 365
ctc tgt gcc ttg gaa ccc agt ggc tgt act tca cta ccc agc aaa gcc    1152
Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala
    370                 375                 380
tcc acg agg gca gct cgc ctt gga gag tac tta cta caa gac ctg cag    1200
Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln
385                 390                 395                 400
tca ggc cag tgt ctg cag cta tgg gac gat gac ttg gga gcg cta tgg    1248
Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp
                405                 410                 415
gcc tgc ccc atg gac aaa tac atc cac aag gag ccc aaa tct tca gac    1296
Ala Cys Pro Met Asp Lys TyrIle His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp
            420                 425                 430
aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa gcc gag ggg gca    1344
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala
        435                 440                 445
ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg atc    1392
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
    450                 455                 460
tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa    1440
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
465                 470                 475                 480
gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat    1488
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                485                 490                 495
aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac agc acg tac cgt    1536
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
            500                 505                 510
gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag    1584
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
        515                 520                 525
gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca tcc tcc atc gag    1632
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu
    530                 535                 540
aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac    1680
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
545                 550                 555                 560
acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc aag aac cag gtc agc ctg    1728
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
                565                 570                 575
acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg    1776
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
            580                 585                 590
gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg    1824
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
        595                 600                 605
ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac    1872
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
    610                 615                 620
aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat    1920
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
625                 630                 635                 640
gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg  1968
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
                645                 650                 655
ggt aaa                                                          1974
Gly Lys
<210>183
<211>658
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>带有N端丝氨酸缺失的IL-17RA的外显子1-6，IL-17RC的外显子8-16和Fc5
<400>183
Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gln Pro Gly Leu
 1               5                  10                  15
Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His
            20                  25                  30
Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gln Ile Gln Leu
        35                  40                  45
His Phe Ala His Thr Gln Gln Gly Asp Leu Phe Pro Val Ala His Ile
    50                  55                  60
Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala
65                  70                  75                  80
Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Arg
                85                  90                  95
Phe Glu Phe Leu Ser Lys Leu Arg His His His Arg Arg Trp Arg Phe
            100                 105                 110
Thr Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Asp Gln Glu Tyr Glu Val Thr
        115                 120                 125
Val His His Leu Pro Lys Pro Ile Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Gln
    130                 135                 140
Ser Lys Asn Phe Leu Val Pro Asp Cys Glu His Ala Arg Met Lys Val
145                 150                 155                 160
Thr Thr Pro Cys Met Ser Ser Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala
                165                 170                 175
Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His
            180                 185                 190
Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro
        195                 200                 205
Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His
    210                 215                 220
Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro
225                 230                 235                 240
Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala
                245                 250                 255
His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln
            260                 265                 270
Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu
        275                 280                 285
Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro
    290                 295                 300
Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu
305                 310                 315                 320
Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys
                325                 330                 335
Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys
            340                 345                 350
Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser
        355                 360                 365
Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala
    370                 375                 380
Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln
385                 390                 395                 400
Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp
                405                 410                 415
Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp
            420                 425                 430
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala
        435                 440                 445
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
    450                 455                 460
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
465                 470                 475                 480
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                485                 490                 495
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
            500                 505                 510
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
        515                 520                 525
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu
    530                 535                 540
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
545                 550                 555                 560
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
                565                 570                 575
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
            580                 585                 590
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
        595                 600                 605
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
    610                 615                 620
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
625                 630                 635                 640
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
                645                 650                 655
Gly Lys
<210>184
<211>96
<212>DNA
<213>人类(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(96)
<400>184
atg ggg gcc gca cgc agc ccg ccg tcc gct gtc ccg ggg ccc ctg ctg  48
Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu
 1               5                  10                  15
ggg ctg ctc ctg ctg ctc ctg ggc gtg ctg gcc ccg ggt ggc gcc tcc  96
Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser
            20                  25                  30
<210>185
<211>32
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>185
Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu
 1               5                  10                  15
Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser
            20                  25                  30
<210>186
<211>492
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL17A CH6编码序列
<400>186
atgactcctg ggaagacctc attggtgtca ctgctactgc tgctgagcct ggaggccata 60
gtgaaggcag gaatcacaat cccacgaaat ccaggatgcc caaattctga ggacaagaac 120
ttcccccgga ctgtgatggt caacctgaac atccataacc ggaataccaa taccaatccc 180
aaaaggtcct cagattacta caaccgatcc acctcacctt ggaatctcca ccgcaatgag 240
gaccctgaga gatatccctc tgtgatctgg gaggcaaagt gccgccactt gggctgcatc 300
aacgctgatg ggaacgtgga ctaccacatg aactctgtcc ccatccagca agagatcctg 360
gtcctgcgca gggagcctcc acactgcccc aactccttcc ggctggagaa gatactggtg 420
tccgtgggct gcacctgtgt caccccgatt gtccaccatg tggcctccgg acaccatcac 480
catcatcatt aa                                                     492
<210>187
<211>163
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL17A-CH6
<400>187
Met Thr Pro Gly Lys Thr Ser Leu Val Ser Leu Leu Leu Leu Leu Ser
 1               5                  10                  15
Leu Glu Ala Ile Val Lys Ala Gly Ile Thr Ile Pro Arg Asn Pro Gly
            20                  25                  30
Cys Pro Asn Ser Glu Asp Lys Asn Phe Pro Arg Thr Val Met Val Asn
        35                  40                  45
Leu Asn Ile His Asn Arg Asn Thr Asn Thr Asn Pro Lys Arg Ser Ser
    50                  55                  60
Asp Tyr Tyr Asn Arg Ser Thr Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu
65                  70                  75                  80
Asp Pro Glu Arg Tyr Pro Ser Val Ile Trp Glu Ala Lys Cys Arg His
                85                  90                  95
Leu Gly Cys Ile Asn Ala Asp Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser
            100                 105                 110
Val Pro Ile Gln Gln Glu Ile Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Pro His
        115                 120                 125
Cys Pro Asn Ser Phe Arg Leu Glu Lys Ile Leu Val Ser Val Gly Cys
    130                 135                 140
Thr Cys Val Thr Pro Ile Val His His Val Ala Ser Gly His His His
145                 150                 155                 160
His His His
<210>188
<211>519
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL17F-CEE编码序列
<400>188
atgacagtga agaccctgca tggcccagcc atggtcaagt acttgctgct gtcgatattg 60
gggcttgcct ttctgagtga ggcggcagct cggaaaatcc ccaaagtagg acatactttt 120
ttccaaaagc ctgagagttg cccgcctgtg ccaggaggta gtatgaagct tgacattggc 180
atcatcaatg aaaaccagcg cgtttccatg tcacgtaaca tcgagagccg ctccacctcc 240
ccctggaatt acactgtcac ttgggacccc aaccggtacc cctcggaagt tgtacaggcc 300
cagtgtagga acttgggctg catcaatgct caaggaaagg aagacatctc catgaattcc 360
gttcccatcc agcaagagac cctggtcgtc cggaggaagc accaaggctg ctctgtttct 420
ttccagttgg agaaggtgct ggtgactgtt ggctgcacct gcgtcacccc tgtcatccac 480
catgtgcagt ccggagaaga atatatgccc atggaataa                        519
<210>189
<211>172
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL17F-CEE
<400>189
Met Thr Val Lys Thr Leu His Gly Pro Ala Met Val Lys Tyr Leu Leu
 1               5                  10                  15
Leu Ser Ile Leu Gly Leu Ala Phe Leu Ser Glu Ala Ala Ala Arg Lys
            20                  25                  30
Ile Pro Lys Val Gly His Thr Phe Phe Gln Lys Pro Glu Ser Cys Pro
        35                  40                  45
Pro Val Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Asp Ile Gly Ile Ile Asn Glu
    50                  55                  60
Asn Gln Arg Val Ser Met Ser Arg Asn Ile Glu Ser Arg Ser Thr Ser
65                  70                  75                  80
Pro Trp Asn Tyr Thr Val Thr Trp Asp Pro Asn Arg Tyr Pro Ser Glu
                85                  90                  95
Val Val Gln Ala Gln Cys Arg Asn Leu Gly Cys Ile Asn Ala Gln Gly
            100                 105                 110
Lys Glu Asp Ile Ser Met Asn Ser Val Pro Ile Gln Gln Glu Thr Leu
        115                 120                 125
Val Val Arg Arg Lys His Gln Gly Cys Ser Val Ser Phe Gln Leu Glu
    130                 135                 140
Lys Val Leu Val Thr Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Val Ile His
145                 150                 155                 160
His Val Gln Ser Gly Glu Glu Tyr Met Pro Met Glu
                165                 170
<210>190
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>EE标签
<400>190
Glu Glu Tyr Met Pro Met Glu
1               5