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本发明一般涉及包含一个或多个非天然存在的氨基酸残基的肽以及它们在化妆和个人护理组合物中的应用。

1.  一种改善或防止人皮肤老化征象的方法，包括给皮肤局部施用一种包含肽的化妆组合物，所述肽包含一个或多个非天然存在的氨基酸。

2.  权利要求1的方法，其中所述肽包含序列KavaK。

3.  一种化妆组合物，包含肽和化妆可接受的载体，所述肽包含一个或多个非天然存在的氨基酸。

4.  权利要求3的化妆组合物，其中所述肽包含序列KavaK。

5.  权利要求3的化妆组合物，其中所述肽以1ppb到10,000ppm的量存在。

6.  一种治疗、改善和/或防止细纹和皱纹外观的方法，包括以有效提高皮肤细胞中纤连蛋白水平的量给有此需要的皮肤局部施用一种包含KavaK或其衍生物的化妆组合物。

7.  一种改善老化皮肤外观的方法，包括以有效正调节SIRT1表达的量给皮肤局部施用一种包含KavaK或其衍生物的化妆组合物。

包含具有非天然存在的氨基酸的肽的组合物及其使用方法
本申请要求2006年2月28日提交的美国临时专利申请No.60/777,412的优先权，将其内容以整体通过参考引入本文。
发明领域
本发明一般涉及包含一个或多个非天然存在的氨基酸残基的肽以及它们在化妆和个人护理组合物中的应用。
发明背景
已经发现多种天然和合成肽都广泛用于化妆组合物。典型地，化妆品中包含肽是利用它们的功能性属性，例如对酶的抑制，抗病毒和抗细菌活性。在化妆应用中使用肽的例子在下列文献中给出。
美国专利公开2005/0142092A1描述了化妆组合物，其包含橙皮苷和作为血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂的二肽，例如H-Val-Trp-OH，或寡肽，例如H-Gly-Gln-Pro-Arg-OH或棕榈酰基-Gly-Gln-Pro-Arg-OH，据称其可以用于减少眼睛下面的眼袋和眼圈。
美国专利公开2005/0124545A1涉及一族肽例如Arg-Asp-Phe-Thr-Lys-Ala-Thr-Asn-Ile-Arg-Leu-Arg-Phe-Leu-Arg在化妆组合物中的应用。据称这些肽可以减少皮肤老化。
美国专利公开2004/0229808 A1公开了皮肤护理组合物，其包含具有至少50％苯丙氨酸、亮氨酸、丙氨酸和赖氨酸残基的5-22个氨基酸的肽(FLAK肽)，用于抗菌、抗真菌、抗癌、刺激和增殖用途以及伤口愈合用途。
美国专利公开2004/0141939 A1公开了包含序列Leu-Asp-Ala-Pro的肽，例如Lys-Leu-Asp-Ala-Pro-Thr，及它们的化妆和皮肤病用途。据称这些肽能够促进皮肤细胞之间的粘连，并治愈或防止老化皮肤的症状。
美国专利公开2004/0120918 A1提供了化妆组合物，其包含具有抗老化活性的多肽和能够改善多肽的抗老化活性的神经酰胺。这些肽具有长度为3到12个氨基酸的氨基酸序列，例如Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly。
美国专利6,821,524描述了小的天然存在的多肽胸腺素-β-4(TB4)在改善老化或损伤皮肤外观的化妆组合物中的应用。据称血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子β1(TGFβ)肽也用于包括在所述的化妆组合物中。
美国专利6,852,699公开了基于结构Val-Val-Arg-Pro的肽在治疗不希望有的皮肤色素沉着中的应用。
美国专利6,777,389描述了化妆组合物，其包含与内源性弹性蛋白的各部分对应或同源的肽，包括缬氨酸-缬氨酸-脯氨酸-谷酰胺、缬氨酸-丙氨酸-丙氨酸-精氨酸-脯氨酸-甘氨酸、亮氨酸-甘氨酸-丙氨酸-甘氨酸-甘氨酸-丙氨酸-甘氨酸和缬氨酸-甘氨酸-缬氨酸-羟基脯氨酸-甘氨酸，以及它们增强遭受与弹性蛋白不足有关的问题的皮肤外观的应用。
美国专利6,620,419公开了化妆组合物，其包含多肽，例如Lys-Thr-Thr-Lys-Ser，据称它们诱导胶原和糖胺聚糖的合成以治疗皮肤老化。
美国专利6,372,717公开了化妆组合物，其包含Tyr-Arg肽的合成性亲脂衍生物，包括N-乙酰基-L-Tyr-L-Arg-O-鲸蜡基，用于缓解刺激，轻度疼痛，热、冷的效应，皮肤上的摩擦或机械性攻击的感觉。
美国专利6,245,342公开了包含来源于α-MSH(促黑激素)的His-Phe-Arg-Trp的肽的化妆组合物的应用。据称该化妆组合物具有刺激黑素原生成和抗炎性质。
美国专利6,358,929描述了包含序列赖氨酸-脯氨酸-缬氨酸的肽作为添加剂在预防或减少与接触性过敏反应有关的不耐受反应的化妆组合物中的应用。
美国专利6,235,291描述了肽sendide(TyrD-Phe Phe D-His LeuMet NH₂)和spantide II(D-NicLys Pro 3-Pal Pro D-Cl₂ Phe Asn D-TrpPhe D-Trp Leu Nle NH₂)作为P物质拮抗剂在治疗敏感性皮肤的化妆品中的应用。
美国专利6,235,291涉及具有对抗细菌、霉菌和/或病毒活性的肽(Gly Ile Gly Asp Pro Val Thr Cys Leu Lys Ser Gly Ala Ile CysHis Pro Val Phe Cys Pro Arg Arg Tyr Lys Gln Ile Gly Thr Cys GlyLeu Pro Gly Thr Thr Cys Cys Lys Lys Pro)的应用和它在化妆组合物中的应用。
用于化妆组合物的其他肽添加剂包括抑制弹性蛋白酶的大豆肽，抑制胶原蛋白酶的植物肽，肽例如甘氨酰基-L-组氨酰基-L-赖氨酸、L-缬氨酰基-L-组氨酰基-L-赖氨酸和L-丙氨酰基-L-组氨酰基-L-赖氨酸的铜络合物(美国专利公开2003/0148927)，抑制降解弹性蛋白或胶原的蛋白酶的卵转铁蛋白肽，和具有结构乙酰基谷氨酰基-谷氨酰基-蛋氨酰基-谷氨酰基-精氨酰基-精氨酰基酰胺的抗皱纹肽乙酰基六肽-3(美国专利公开2005/0118124 A1)，具有序列Lys-Thr-Thr-Lys-Ser的棕榈酰寡肽和棕榈酰五肽。
其他感兴趣的肽在例如美国专利6,566,330，6,060,043和6,566,115，美国专利公开2005/0187164 A1和2005/0148495 A1，和已公开的PCT申请WO 2005/097060 A1和WO 03/086313 A2中进行了描述，将其内容通过参考引入本文。
尽管需要在化妆品中掺入肽，但是存在某些与它们的应用有关的缺点。例如，由于例如它们的构象柔性和/或预期活性位点上的蛋白酶易于消化肽，因此活性肽药剂可能使用功效较差。此外，由于肽难以转运通过膜例如皮肤以及它们在很多化妆载体中的溶解性较差，因此可能妨碍它们的功效。此外，也需要关注在化妆制剂中对肽的免疫原性反应的危险。
因此，本发明的一个目的是提供用于化妆用途的新的肽，其提供了增强的功效。
本发明的另一个目的是提供用于化妆用途的新的肽，其提供了耐蛋白水解性。
本发明的另一个目的是提供用于化妆用途的新的肽，其降低了免疫原性反应的危险。
发明简述
根据上述和其他目的，本发明提供了新的肽，其包含具有化妆有益特性的一个或多个非天然存在的氨基酸。
本发明的一个方面提供了肽，其包含具有式I序列的非天然存在的氨基酸:
(AA)_n-X-(AA’)_m
其中AA和AA’独立地是氨基酸或包含选自天然存在的氨基酸L-丙氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-脯氨酸、L-色氨酸、L-苯丙氨酸、L-蛋氨酸、甘氨酸、L-丝氨酸、L-酪氨酸、L-苏氨酸、L-半胱氨酸、L-天冬氨酸、L-谷酰胺、L-门冬氨酸、L-谷氨酸、L-赖氨酸、L-精氨酸和L-组氨酸的氨基酸的肽；
“n”和”m”独立地是0到约20的整数；和
X代表式II的非天然存在的氨基酸或包含一个或多个式II的非天然存在的氨基酸并任选包含一个或多个天然存在的氨基酸的肽片段:

其中R₁代表基团AA’的邻近氨基酸的肽键，或在环状肽的情况下，R₁代表基团AA的末端残基的肽键或在基团AA内残基的氨基-功能化侧链，或其中X是m＝0型的末端氨基酸残基，R₁典型地是羟基，但是可以是任何其他的官能团，包括例如氢、保护基、活化基团或亲脂性基团例如选自取代或未取代的C₁到C₂₀支链、直链或环状烷氧基、芳氧基等等的部分；
R₂，当存在时，提供了在α-碳(邻近羧基的碳原子)以外的碳原子，例如包括β或γ碳上具有NH₂基团的氨基酸，并且因此可以是任意的间隔基，特别是选自取代或未取代的支链或直链C₁-C₆烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或烷基-芳基的部分，包括但不限于，其中“a”是1到10的整数的式-(CH₂)_a-的线性烷基部分，包括，例如-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-或-CH₂CH₂CH₂CH₂-；其中“a”是1到10的整数的通式-(CH₂)_aO-或-O(CH₂)_a-的线性烷氧基部分，包括例如，-CH₂O-或-OCH₂-、-CH₂CH₂O-或-OCH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂O-或-OCH₂CH₂CH₂-；其中“a”如上定义的-O(CH₂)_aO-；或式-(CH₂)_bO(CH₂)_c-、-(CH₂)_bS(CH₂)_c-或-(CH₂)_bNR^a(CH₂)_c-的部分，其中“b”和“c”独立地是0(零)到10的整数，R^a是烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或烷基-芳基；
“i”代表0(零)到3的整数；
R₃和R₄可以独立地代表邻近氨基酸的键或者可以独立地选自氢、取代或未取代的支链或直链C₁-C₂₀烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、烷基-芳基、酰基或N-保护基，优选是氢、甲基、乙基、丙基、乙酰基，或者在其中X是n-0型的末端残基的情况下，R₃和R₄分别优选是氢、乙酰基、N-保护基或亲脂性基团，例如选自C₁到C₂₀支链、直链或环状烷基、烯基、芳基、杂芳基等等或者取代或未取代的C₁到C₂₀支链或直链酰基的部分；或者R₃和R₄一起可以形成具有3到6个碳原子的环状烷基、芳基、杂烷基或杂芳基；或者R₃和R₄可以独立地与R₂或Ω一起形成具有3到6个碳原子的环状烷基、芳基、杂烷基或杂芳基；
Ω选自氢；羟基；氨基；卤素；羧基、氨甲酰基、取代或未取代的支链、直链或环状C₁-C₂₀烷基、烯基、炔基、芳基、苄基、杂芳基、烷基-芳基、芳基-烷基、烷基-杂芳基、杂芳基-烷基、杂芳基-芳基、二环烷基、芳基或杂芳基，及其组合；其中上述基团可以被任意部分取代，包括例如，烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、羟基；氨基；氰基；卤素；氧代、氧杂基、羧基、氨甲酰基、及其组合；
条件是在其中AA或AA’都不包含式II的非天然存在的氨基酸的情况下，X不只是代表天然存在的氨基酸。
在式I的肽的另一个感兴趣的实施方案中，AA和AA’可以独立地代表式II的非天然存在的氨基酸，或者AA和AA’可以独立地代表包含式II定义的一个或多个非天然存在的氨基酸的肽片段。在另一个实施方案中，任意的AA、AA’和X可以进一步包括间隔基，所述间隔基不是在邻近的氨基酸残基之间排列的氨基酸。当存在时，该间隔基典型地选自取代或未取代的支链或直链C₁-C₆烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、烷基-芳基、烷基-芳基-烷基和芳基-烷基-芳基，包括但不限于，其中“a”是1到20的整数的式-(CH₂)_a-的线性烷基部分，包括，例如，-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-或-CH₂CH₂CH₂CH₂-；其中“a”是1到20的整数的通式-(CH₂)_aO-或-O(CH₂)_a-的线性烷氧基部分，包括例如，-CH₂O-或-OCH₂-、-CH₂CH₂O-或-OCH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂O-或-OCH₂CH₂CH₂-；其中“a”如上定义的-O(CH₂)_aO-；或式-(CH₂)_bO(CH₂)_c-、-(CH₂)_bS(CH₂)_c-，或-(CH₂)_bNR^a(CH₂)_c-的部分，其中“b”和“c”独立地是0(零)到20的整数，R^a是任选取代的烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或烷基-芳基；和其中间隔基任选在任一末端或两个末端包括官能团，其中该官能团选自-O-、-S-、-NR^a-、-NR^a-(C＝O)-、-O-(C＝O)-、-O-(C＝O)-O-和-O-(SO₂)-，其中R^a如上定义。
在本发明的另一个方面，肽选自:(i)包含式II的一个或多个氨基酸的肽；(ii)包含式II的一种氨基酸的肽；(iii)包含式II的一个或多个氨基酸并包括一个或多个如上定义的间隔部分的肽；和(iv)包含式II的一种氨基酸并并包括一个或多个如上定义的间隔部分的肽。
本发明的另一个方面提供局部施用的化妆组合物，包含在化妆可接受的载体中的本发明的一个或多个肽。
本发明的另一个方面提供了一种改善和/或防止人皮肤光老化和自然老化的征象的方法，包括将本发明的化妆组合物局部施用于皮肤。
在阅读了下面的本发明的详细描述，包括示例性的实施方案和实施方案后，本发明这些和其他方面对于本领域技术人员将变得显而易见。
详细描述
当在本文中使用时，除非另有特殊定义所有术语都意欲具有它们在本领域的一般含义。术语“氨基酸”意欲包括天然存在的氨基酸以及非天然存在的氨基酸，广义地包括所有具有一个羧基和至少一个能形成肽键的伯或仲胺基的小分子。术语“肽”意欲包括所有具有至少一个肽键的分子，因此包括二肽、三肽、寡肽和最多具有约20个氨基酸残基的多肽。术语“肽”也包括具有一个或多个连接基、间隔基或末端基的、不是氨基酸的结构。
i.肽
本发明的肽具有式I的序列:
(AA)_n-X-(AA’)_m
其中AA和AA’独立地是氨基酸或包含如表1所示的天然存在的氨基酸的氨基酸的肽:
表1



其中AA和AA’分别可以独立地代表表1的一种氨基酸的均聚物或可以独立地代表选自表1的不同氨基酸的杂聚物；
“n”和“m”独立地是0到约20的整数；优选0到约10的整数；和更优选0到约5的整数；
X代表式II的非天然存在的氨基酸或包含一个或多个式II的非天然存在的氨基酸并任选包含一个或多个天然存在的氨基酸的肽片段:

其中R₁代表基团AA’的邻近氨基酸的肽键，或在环状肽的情况下，R₁代表基团AA的末端残基的肽键或在基团AA内残基的氨基-功能化侧链，或其中X是m＝0型的末端氨基酸残基，R₁典型地是羟基，但是可以是任何其他的官能团，包括例如氢、保护基、活化基团或亲脂性基团例如选自取代或未取代的C₁到C₂₀支链、直链或环状烷氧基、芳氧基等等的部分；
当存在时，R₂提供了在α-碳(邻近羧基的碳原子)以外的碳原子例如β或γ碳上具有NH₂基的氨基酸，因此可以是任意的间隔基，特别是选自取代或未取代的支链或直链C₁-C₆烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或烷基-芳基的部分，包括但不限于，其中“a”是1到10的整数的式-(CH₂)_a-的线性烷基部分，包括，例如-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-或-CH₂CH₂CH₂CH₂-；其中“a”是1到10的整数的通式-(CH₂)_aO-或-O(CH₂)_a-的线性烷氧基部分，包括例如，-CH₂O-或-OCH₂-、-CH₂CH₂O-或-OCH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂O-或-OCH₂CH₂CH₂-；其中“a”如上定义的-O(CH₂)_aO-；或式-(CH₂)_bO(CH₂)_c-、-(CH₂)_bS(CH₂)_c-或-(CH₂)_bNR^a(CH₂)_c-的部分，其中“b”和“c”独立地是0(零)到10的整数，R^a是烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或烷基-芳基等等。优选地，当存在时R₂是-CH₂-或-CH₂CH₂-；
“i”代表0(零)到3的整数，当氨基酸具有天然存在的氨基酸的α-氨基构象时，是零；
R₃和R₄可以独立地代表邻近氨基酸的键或者可以独立地选自氢、取代或未取代的支链或直链C₁-C₂₀烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、烷基-芳基、酰基或N-保护基，优选是氢、甲基、乙基、丙基、乙酰基，或者在其中X是n＝0型的末端残基的情况下，R₃和R₄分别优选是氢、乙酰基、N-保护基或亲脂性基团，例如选自C₁到C₂₀支链、直链或环状烷基、烯基、芳基、杂芳基等等或者取代或未取代的C₁到C₂₀支链或直链酰基的部分；或者R₃和R₄一起可以形成具有3到6个碳原子的环状烷基、芳基、杂烷基或杂芳基；或者R₃和R₄可以独立地与R₂或Ω一起形成具有3到6个碳原子的环状烷基、芳基、杂烷基或杂芳基(类似于天然存在的氨基酸脯氨酸)；
Ω选自氢；羟基；氨基；卤素；羧基、氨甲酰基、取代或未取代的支链、直链或环状C₁-C₂₀烷基、烯基、炔基、芳基、苄基、杂芳基、烷基-芳基、芳基-烷基、烷基-杂芳基、杂芳基-烷基、杂芳基-芳基、二环烷基、芳基或杂芳基，及其组合；其中上述基团可以被任意部分取代，包括例如，烷基、芳基、杂芳基、羟基；氨基；氰基；卤素；氧代、氧杂、羧基、氨甲酰基及其组合；条件是X不代表天然存在的氨基酸。
Ω可以选自或可以包括选自下列组中的一个或多个取代基:醋蒽基、醋蒽烯基、醋萘亚甲基、醋萘亚甲烯基、醋萘亚甲基亚基、醋萘烯基、醋菲基、醋菲烯基、乙酰氨基、亚氨乙基、乙酰乙酰基、乙腙酰基、乙肟酰基、丙酮基、亚丙酮基、乙酰氧基、乙酰基、乙酰基氨基、乙酰基肼基、乙酰基亚胺基、吖啶基、丙烯酰基、己二酰基、丙氨酰基、b-丙氨酰基、脲甲酰基、烯丙基、亚丙烯基、烯丙氧基、脒基、氨基、氨基亚甲氨基、氨氧基、铵、苯胺基、茴香胺基、茴香酰基、氨茴酰基、蒽基、亚蒽基、精氨酰基、天冬酰胺基、天冬氨二酰基、a-天冬氨酰基、b-天冬氨酰基、阿托酰基、氮杂二环[2.2.1]庚基、壬二酰基、azi、叠氮基、连氮基、偶氮基、氧化偶氮基、甘菊环基、苯甲酰氨基、偶氮苯、氧化偶氮苯、苯甲酰基、1，2-苯二羰基、1，3-苯二羰基、1，4-苯二羰基、苯亚磺酰基、苯磺酰胺基、苯磺酰胺基、苯磺酰氨基、次苯基、二苯甲基、二苯甲叉基、联苯胺基、苯并咪唑基、苯甲亚胺基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、醌基、苯并[b]噻吩基、苯并噁嗪基、苯并噁唑基、苯甲酰基、苯甲酰氨基、苯甲酰肼基、苯甲酰亚胺基、苯甲羧基、苄基、亚苄基、次苄基、苄氧基、苄氧基羰基、苄硫基苄基、二环[2.2.1]庚-5-烯-2-基、二(环己烷)基、二(环己基)基、亚联萘基、联萘基、亚联苯基、联苯基、冰片烯基、冰片基、bornylyl、溴、溴甲酸基、溴鎓基、丁二烯基、丁二酰基、丁二亚基、1，2，3-丁三羰基、丁酰基、1-丁亚-4-基次基、顺-丁烯二酰基、反-丁烯二酰基、丁烯酰基、1-丁烯基、2-丁烯基、2-亚丁烯基、亚丁烯基、次丁烯基、丁氧基、仲-丁氧基、叔-丁氧基、丁基、仲-丁基、叔-丁基、亚丁基、仲-亚丁基、次丁基、丁酰基、樟脑酰基、莰基、氨基甲酰基、氨基脲氨基、咔唑基、卡巴腙基、肼基甲酰基、carbodiazono、咔啉基、氨基脲氨基、羰基、羰二氧基、羧基、羧负离子基、蒈烯基、蒈烷基、氯、氯羰基、氯甲酰基、chloronio、亚氯酰基、氯硫基、氯酰基、胆蒽基、色满基、色满烯基、桂皮烯醛基、桂皮酰基、桂皮酰亚基、二氮萘基、柠康酰基、晕苯基、巴豆酰基、巴豆基、枯烯基、氰酰基、氰基、环丁基、环庚基、环己二烯基、亚环己二烯基、次环己二烯基、环己烷三氟苯基、环己烷carbohydroximoyl、环己烷羰基、环己烷carbothioyl、环己烷甲酰胺基、环己烷carboximidoyl、环己烯基、亚环己烯基、2-次环己烯基、环己基、环己基羰基、亚环己基、次环己基、环己基硫羰基、环戊二烯基、亚环戊二烯基、环戊烷螺环丁基、环戊[a]菲基、1，2-环戊烯菲基、环戊烯基、亚环戊烯基、环戊基、亚环戊基、次环戊基、环丙基、胱硫醚基、半胱氨酰基、胱氨酰基、癸二酰基、癸酰基、癸基、二乙酰氧基、二乙酰基氨基、二氨基亚甲基氨基、二氮杂蒽基、重氮基、重氮氨基、联苯甲酰氨基、二氯碘、二乙基氨基、3，4-二羟苯甲酰基、2，3-二羟丁二酰基、二羟碘、2，3-二羟丙酰基、3，4-二甲氧基苯甲酰基、3，4-二甲氧基苯乙基、3，4-二甲氧基苯乙酰基、二甲基氨基、二甲基苯甲酰基、二氧杂环己基、二氧基、联苯氨基、联苯甲基、联苯亚甲基、二硫杂萘基、二硫基、二硫羧基、二硫磺基、二十二烷基、十二烷酰基、十二烷基、三十二烷基、反油酸酰基、桥二氧基、桥二硒基、桥二硫基、桥亚胺基、桥硒基、桥硫基、桥氧基、乙氧羰基、乙基、乙氨基、乙撑、亚乙二氧基、亚乙基、次乙基、乙基磺酰氨基、乙硫基、乙炔基、亚乙炔基、氟蒽烯基、芴基、亚芴基、氟、氟甲酰基、亚胺甲基、甲酰基、甲酰氨基、甲酰亚胺基、甲酰氧基、富马酰基、呋喃羰基、呋吖基、糠基、亚糠基、糠酰基、呋喃基、3-呋喃甲基、没食子酰基、牛龙牛儿基、谷氨酰基、谷酰基、a-谷氨酰基、g-谷氨酰基、戊二酰基、甘油酰基、乙醇酰基、甘氨酰基、甘氨酰氨基、乙醛酰基、胍基、脒基、hectyl、henicosyl、三十一烷基、并七苯基、七十烷基、二十七烷基、十七酰基、十七烷基、亚十七烷基、庚酰胺基、庚二酰基、庚酰基、庚基苯基、庚基、hexacenyl、六十烷基、二十六烷基、十六酰基、十六烷基、亚十六烷基、己氨基、己二酰基、己亚胺基、hexanohydrazonoyl、hexanohydroximoyl、己酰基、己酰氨基、六苯基、亚己基、次己基、己氧基、马尿酰基、组氨酰基、高半胱氨酰基、高丝氨酰基、脲基乙酰基、氢化阿托酰基、肼抱基、肼基、亚肼基、肼叉、过氧氢基、氢化硒基、羟基、羟氨基、m-羟基苯甲酰基、o-羟基苯甲酰基、p-羟基苯甲酰基、2-羟基苄、2-羟基亚苄基、羟基乙酰基、羟基亚胺基、3-羟基-3-甲氧基苯甲酰基、3-羟基-2-苯基丙酰基、羟基丙二酰基、2-羟基丙酰基、二十烷基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、亚胺基、亚胺基甲氨基、茚满烯基、茚满基、吲唑基、茚基、二氢吲哚基、吲哚满叉、吲嗪基、吲哚基、碘代、碘甲酰基、碘酰基、碘酰叉、亚碘酰基、碘氧基、iodyl、异苯并呋喃基、异丁氧基、异丁基、亚异丁基、次异丁基、异丁酰基、异氨基脲氨基、异色满基、异香豆素基、异巴豆酰基、异氰酰基、异氰基、异己基、亚异己基、次异己基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异亮氨酰基、异烟酰基、异噁唑、异戊基、亚异戊基、次异戊基、异戊氧基、异邻苯二甲酰基、异丙烯基、异丙氧基、异丙基、p-异丙基苯甲酰基、异丙基苄基、亚异丙基、异喹啉基、异硒氰酰基、异半氨基脲氨基、异噻唑基、异氰硫基、异硫脲基、异脲基、异戊酰基、isoviolanthrenyl、乳酰基、lanthionyl、十二酰基、亮氨酰基、沉香基、赖氨酰基、马来酰基、丙二酰基、苹果酰基、薄荷烯基、薄荷基、巯基、中康酰基、三苯甲基、mesoxalo、中草酰基、甲磺酰基、异丁烯酰基、甲偶氮基、甲氧化偶氮基、甲亚磺酰氨基、甲亚磺酰基、甲磺酰氨基、甲磺酰基、甲酰氧基、甲二磺酰基、甲草酰基、甲氧基、甲氧苯甲酰基、甲氧羰基、甲氧亚胺基、甲氧苯基、甲氧亚磺酰基、甲氧磺酰基、甲氧(硫磺酰基)、甲基、a-甲基丙烯酰基、甲基烯丙基、甲氨基、甲偶氮基、甲基氧化偶氮基、甲基苯羰基、a-甲基苄基、甲基苄基、3-甲基丁酰基、顺-甲基丁二酰基、反-甲基丁二酰基、二硫甲基、亚甲基、亚甲二氧基、3，4-亚甲二氧基苯甲酰基、5-甲基己基、次甲基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、2-甲基丙酰基、甲基亚磺酰亚胺基、methylsulfinohydrazonoyl、methylsulfinohydroximoyl、甲基亚磺酰基、甲基亚磺酰基氨基、甲基磺酰基亚胺基、methylsulfonohydrazonoyl、methylsulfonohydroxamoyl、甲基磺酰基、甲硫基、(硫甲基)磺酰基、1-甲基乙烯基、吗啉代、吗啉基、肉豆蔻酰基、并四苯基、萘偶氮基、萘羰基、萘四基、萘并[2，3-b]噻吩基、萘酰基、萘甲酸基、萘基、萘偶氮基、亚萘基、亚萘二偶氮基、萘基亚甲基、萘基次甲基、萘氧基、naphthyridinyl、新戊基、橙花基、烟酰基、次氮基、硝基、异硝基、亚硝基、三十九烷基、二十九烷基、十九烷基、壬二酰基、壬酰基、壬基、冰片基、norbornylyl、norcamphyl、norcaryl、正亮氨基、正蒎基、正缬氨酰基、三十八酰基、二十八酰基、顺-9-十八酰基、十八烷基、十八二酰基、十八酰基、辛基、油酰基、鸟氨酰基、ovalenyl、oxalaceto、oxalacetyl、氧杂、草酰基、乙二酰基、草氨酰基、oxapyrenyl、噁嗪基、噁唑烷基、噁唑啉基、噁唑基、氧桥、氧代、氧鎓、氧基、棕榈酰基、并五苯基、五十烷基、二十五烷基、十五酰基、十五烷基、五氟硫基、并环戊二烯基、亚戊甲基、戊二酰基、戊酰基、戊苯基、戊唑基、戊烯基、2-戊-4-炔基、戊基、叔戊基、亚戊基、次戊基、戊氧基、高氯酸基、萘嵌间二氮杂苯基、二萘嵌苯基、苯酰基、亚苯酰基、phenalenyl、菲啶基、菲咯啉基、菲基、伸菲基、吩吡嗪基、吩嗪基、苯乙基、氨基苯乙醚基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、苯氧基、苯基、苯乙酰基、苯偶氮基、苯氧化偶氮基、phenylcarbrmoyl、次苯基、苯双偶氮基、苯基亚胺基、2-苯基丙酰基、3-苯基丙烯酰基、3-苯基丙基、苯基氨磺酰基、氨磺酰基、苯基亚磺酰基、苯基磺酰基、苯基磺酰基氨基、硫苯基、3-苯基脲基、酞氨基、酞嗪基、酞基、亚酞基、酞亚胺基、邻苯二酰基、植基、苉基、苦基、庚二酰基、蒎烷基、蒎撑、亚蒎烷基、哌嗪基、哌啶-1-基、哌啶基、亚哌啶基、胡椒基、亚胡椒基、胡椒酰基、特戊酰基、pleiadenyl、聚硫、脯氨酰胺基、丙二酰胺、丙烷-1，3-二基-2-亚基、丙烷-1，2，3-三基、丙酰基、丙-1-基-3-亚基、炔丙基、propenpyl、1-丙烯基、2-丙烯基、丙烯撑、丙炔酰基、丙酰胺基、丙酰基、丙酰氨基、丙酰氧基、丙氧基、丙基、丙撑、亚丙基、次丙基、丙炔酰基、1-丙炔基、2-丙炔基、原儿茶基、蝶啶基、嘌呤基、皮蒽基、吡喃基、吡喃烷基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、芘基、哒嗪基、2-吡啶羰基、3-吡啶羰基、4-吡啶羰基、吡啶鎓基、吡啶基、2-吡啶基羰基、吡啶氧基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡咯基、丙酮酰基、喹唑啉基、喹啉二基、喹嗪基、喹啉基、喹噁啉基、奎宁环基、玉红省基、水杨酸基、亚水杨酸基、水杨酰基、肌氨酰基、seleneno、硒宁基、亚硒酰基、硒基、硒氰酰基、硒甲酸基、selenino，seleninyl，seleno，seleno cyanato，seleno formyl，selenonio、selenono、硒砜基、硒脲基、硒氧代、半氨基脲氨基、半脲氨叉、丝氨酰基、硬脂酰基、苯乙烯基、辛二酰基、琥珀酰胺酰基、琥珀酰亚氨基、琥珀酰基、氨磺酰基、磺胺基、磺胺酰基、sulfenamoyl、sulfeno、硫基、sulfinamoyl、砜基、亚磺酰基、磺基、磺氨基、磺酸基、锍基、磺酰基、磺酰二氧基、酒石酰基、牛磺酰基、telluro、(三环己)基、对苯二甲酰基、三苯基、(terthiophen)基、四十烷基、二十四烷基、十四酰基、十四烷基、四亚甲基、四亚苯基、四唑基、噻吩甲酰基、噻吩甲基、噻吩甲叉、硫杂蒽基、噻嗪基、噻唑烷基、噻唑啉基、噻唑基、噻吩基、硫代、硫代乙酰基、硫代苯甲酰基、氨基硫羰基、thiocarbazono、thiocarbodiazono、thiocarbonohydrazido、硫代羰基、硫代羧基、硫代氰酰基、硫代甲酰基、硫代萘亚甲基、thiophanthrenyl、噻吩羰基、硫代半氨基脲氨基、硫代砜基、硫代磺基、硫代脲基、硫氧代、苏氨酰基、侧柏烯基、甲酰氨酰基、甲苯磺酰基、甲苯氨基、甲苯酰基、甲苯基、甲苯磺酰基、甲苯磺酰基、三十烷基、triazano、三氮杂菲基、三氮烯、三嗪基、三唑烷基、三唑基、三氯硫代、二十三烷基、十三酰基、十三烷基、三氟硫代、3，4，5-三羟基苯甲酰基、三甲基铵、三甲基苯胺基、1，2，2-三甲基-1，3-环戊烷二羰基、三亚甲基、三亚甲基二氧基、三萘烯基、三苯烯基、三苯基甲基、trithiadiazaindenyl、三硫基、三硫磺基、三十三烷基、三苯甲基、托品酰基、色氨酰基、酪胺酰基、十一酰基、十一烷基、脲基、次脲基、戊酰基、缬氨酰基、香草酰基、香草基、亚香草基、藜芦酰基、藜芦基、藜芦叉、乙烯基、乙烯撑、亚乙烯基、violanthrenyl、二甲苯氨基、二甲苯基等等。
在某些实施方案中，Ω代表任选被杂原子取代的烷基、烯基或炔基。适当的基团包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、乙烯基、烯丙基和如下所示的结构:

在另一个实施方案中，Ω代表任选被杂原子取代的环烷基。这些环烷基的非限制性例子包括:

在另外的实施方案中，Ω代表芳基或杂芳基取代基，包括但不限于:


除了上述芳香部分，Ω可以包含稠合的芳或杂芳环，包括但不限于:



上述基团仅仅是众多认为适当的烷基和芳基取代基的代表。Ω的其他感兴趣的基团包括:

Ω还可以包括连接任意上述基团与主链的碳原子的间隔基部分，包括例如，其中”a”是1到10的式-(CH₂)_a-的间隔基，包括，例如-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-或-CH₂CH₂CH₂CH₂-；其中”a”是1到10的整数的通式-(CH₂)_aO-或-O(CH₂)_a-的线性烷氧基部分，包括例如，-CH₂O-或-OCH₂-、-CH₂CH₂O-或-OCH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂O-或-OCH₂CH₂CH₂-；其中”a”是1到10的整数的-O(CH₂)_aO-；或式-(CH₂)_bO(CH₂)_c-、-(CH₂)_b(CH₂)_c-，或-(CH₂)_bNR^a(CH₂)_c-的部分，其中”b”和”c”独立地是0(零)到10的整数，R^a是烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或烷基-芳基等等。
在选择Ω的适当取代基时，需要在天然存在的氨基酸的侧链使用生物异构体取代。例如苯丙氨酸的biosterism提供了感兴趣的非天然存在的氨基酸噻吩基丙氨酸、呋喃基丙氨酸、吡啶基丙氨酸等等。
X也可以包含在α-碳上具有倒置的手性的天然存在的氨基酸的变体，包括D-丙氨酸、D-缬氨酸、D-亮氨酸、D-异亮氨酸、D-脯氨酸、D-色氨酸、D-苯丙氨酸、D-蛋氨酸、D-丝氨酸、D-酪氨酸、D-苏氨酸、D-半胱氨酸、D-天冬氨酸、D-谷酰胺、D-门冬氨酸、D-谷氨酸、D-赖氨酸、D-精氨酸和D-组氨酸；或者，在异亮氨酸和苏氨酸的情况下，感兴趣的非天然存在的氨基酸是[R，R]、[S，S]、[S，R]和[R，S]非对映体。
非天然存在的氨基酸也可以基于天然存在的氨基酸的β类似物，如例如D.Seebach等人，Helv.Chim.Acta 1998，81，932，D.Seebach等人，Helv.Chim.Acta 1996，79，913所述，将其内容通过参考引入本文。在其中R₂＝-CH₂-和i＝0的情况下通过式II提供β类似物。
在美国专利申请公开2004/0121438 A1中公开了非天然存在的氨基酸，将其内容通过参考引入本文，这些氨基酸可以用于实施本发明。它们包括β-丙氨酸(β-Ala)；3-氨基丙酸(Dap)；2，3-二氨基丙酸(Dpr)；4-氨基丁酸、ε-氨基异丁酸(Aib)；ε-氨基己酸(Aha)；5-氨基戊酸(Ava)；甲基甘氨酸(MeGly)；鸟氨酸(Orn)；瓜氨酸(Cit)；叔丁基丙氨酸(t-BuA)；叔丁基甘氨酸(t-BuG)；N-甲基异亮氨酸(MeIle)；苯甘氨酸(Phg)；环己基丙氨酸(Cha)；正亮氨酸(Nle)；2-萘基丙氨酸(2-Nal)；4-氯苯丙氨酸(Phe(4-Cl))；2-氟苯丙氨酸(Phe(2-F))；3-氟苯丙氨酸(Phe(3-F))；4-氟苯丙氨酸(Phe(4-F))；青霉胺(Pen)；1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸(Tic)；β-2-噻吩基丙氨酸(Thi)；蛋氨酸亚砜(MSO)；高精氨酸(hArg)；N-乙酰基赖氨酸(AcLys)；2，3-二氨基丁(Dab)；2，3-二氨基丁酸(Dbu)；p-氨基苯丙氨酸(Phe(pNH₂))；N-甲基缬氨酸(MeVal)；高半胱氨酸(hCys)和高丝氨酸(hSer)。
根据式I，现在优选的肽是由(AA)＝L-赖氨酸(K)，(AA’)＝L-赖氨酸(K)，n和m＝1和X＝5-氨基戊酸(Ava)定义的KAvaK:

在式I的肽的另一个感兴趣的实施方案中，AA和AA’可以独立地代表式II的非天然存在的氨基酸，或者AA和AA’可以独立地代表包含式II定义的一个或多个非天然存在的氨基酸的肽片段。在另一个实施方案中，任意的AA、AA’和X可以进一步包括间隔基，所述间隔基不是在邻近的氨基酸残基之间排列的氨基酸。当存在时，该间隔基典型地选自取代或未取代的支链或直链C₁-C₆烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、烷基-芳基、烷基-芳基-烷基和芳基-烷基-芳基，包括但不限于，其中”a”是1到20的整数的式-(CH₂)_a-的线性烷基部分，包括，例如-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-或-CH₂CH₂CH₂CH₂-；其中”a”是1到20的整数的通式-(CH₂)_aO-或-O(CH₂)_a-的线性烷氧基部分，包括例如，-CH₂O-或-OCH₂-、-CH₂CH₂O-或-OCH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂O-或-OCH₂CH₂CH₂-；其中”a”如上定义的-O(CH₂)_aO-；或式-(CH₂)_bO(CH₂)_c-、-(CH₂)_bS(CH₂)c-，或-(CH₂)_bNR^a(CH₂)_c-的部分，其中”b”和”c”独立地是O(零)到20的整数，R^a是任选取代的烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或烷基-芳基；和其中间隔基任选在任一末端或两个末端包括官能团，其中该官能团选自-O-、-S-、-NR^a-、-NR^a-(C＝O)-、-O-(C＝O)-、-O-(C＝O)-O-和-O-(SO₂)-等等，其中R^a如上定义。
在本发明的另一个方面，肽选自:(i)包含式II的一个或多个氨基酸的肽；(ii)包含式II的一种氨基酸的肽；(iii)包含式II的一个或多个氨基酸并包括一个或多个如上定义的间隔部分的肽；和(iv)包含式II的一种氨基酸并并包括一个或多个如上定义的间隔部分的肽。
应当理解的是，式I以外的肽也在本发明的范围内。例如任意包含至少一个式II的氨基酸的包含肽的分子可以用于实施本发明。
本领域技术人员可以使用例如常规的保护和活化化学来制备包含非天然存在的氨基酸的肽。典型地，用可除去的氨基保护剂保护第一个氨基酸的氨基官能团，用可除去的羧基保护基保护第二个氨基酸的羧基官能团。适当的胺保护剂包括但不限于，苯甲酰氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(t-Boc)和9-芴基甲氧羰基(FMOC)。可以通过形成酸或碱不稳定性酯例如甲基、乙基、苄基或三甲硅烷基酯来保护羧基。在保护后，第一和第二氨基酸在适当的溶剂例如水或DMF中，在原位催化剂例如N，N′-二环己基碳二亚胺(DCCI)、二异丙基碳二亚胺(DIPCDI)或1-乙基-3-(3’-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)存在下反应以完成肽键的形成。用保护基保护每个氨基酸的侧链上的反应性部分，例如用叔丁基或或苄基保护OH和SH；用甲基、乙基、叔丁基或苄基保护羧基，用2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基保护Arg的-NHC(NH₂)＝NH官能团，用三苯甲基保护His的咪唑基。在偶合反应后，通过在不会除去第二氨基酸的羧基保护剂的条件下酸水解来完成第一氨基酸的氨基的选择性脱保护。用另外的氨基受到保护的氨基酸重复该过程。固相合成法例如公知的Merrifield法对于合成本发明的肽是特别有用的。
在Hohsaka T，Sisido M“Incorporation of non-natural aminoacids into proteins”Curr.Opin.Chem.Biol.6:809-815(2002)；Noren CJ等人，“A general method for site-specificincorporation of unnatural amino acids into proteins”Science244:182-188(1989)；和Hodgson，David R.W.，Sanderson，John M.，“The Synthesis of Peptides and Proteins Containing Non-NaturalAmino Acids”，Chem.Soc.Rev.，2004，33，422-430中描述了将非天然存在的氨基酸掺入到肽中，将其内容通过参考引入本文。
本发明也提供了一种筛选感兴趣的药物化妆品活性的式I的肽的方法。该方法包括步骤(1)用能够定量所述活性的测定测量天然肽或仅包含天然存在的氨基酸的肽的活性；(2)提供与步骤(1)的肽基本上同源但是基于上述设计考虑而非天然存在的氨基酸的取代不同的式I的肽；(3)测量步骤(2)的肽的相同活性；和(4)比较所测量的步骤(1)和(3)的肽的活性，以确定步骤(2)的肽是否具有感兴趣的活性。代表性的药物化妆品活性包括本文所述的那些，例如，抑制ACE、抑制蛋白水解酶、刺激黑素原生成特性、抗炎性质、诱导胶原和/或糖胺聚糖合成、刺激黑素原生成、拮抗P物质、以及美国专利6,043,218所述的那些，将其内容通过参考引入本文，以及本领域已知的其他活性。
ii.化妆组合物
本发明的肽是在化妆可接受的载体中提供的。载体可以是疏水的或亲水的。适当的疏水载体包括例如，化妆品中常用蜡样非离子物质，例如脂肪醇和脂肪酸的酯和醚，碳链长度为C₄到C₂₂，优选C₈到C₁₈，最优选C₁₂到C₁₈。
脂肪性疏水载体的例子包括肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、棕榈酸辛酯、羊毛酸异丙酯、乙酰化羊毛脂醇、C₁₂-C₁₅醇的苯甲酸酯、辛酸鲸蜡酯、棕榈酸鲸蜡酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、乳酸肉豆蔻酯、醋酸鲸蜡酯、二辛酸/癸酸丙二醇酯、油酸癸酯、乙酰化羊毛脂、庚酸硬脂酸酯、苹果酸二异硬脂酸酯、羟基硬脂酸辛酯、羟基硬脂酸辛酯、异硬脂酸异丙酯等等。
适当的亲水载体溶液可以是，例如二醇和化妆品中常用的烷氧基化的二醇，包括乙二醇、二乙二醇、三乙二醇、丙二醇、二丙二醇等等。
化妆组合物可以配制成乳膏、化妆水、浆液、喷雾剂、棒剂和本领域技术人员已知的其他形式。乳膏和化妆水是当前优选的产品形式。
在化妆可接受的载体中，肽的浓度范围可以是1ppb到10,000ppm，优选10ppb到1,000ppm，更优选100ppb到100ppm，最优选1ppm到100ppm。
化妆组合物典型地包含上述的载体溶液，其水平为约0.01％到约90％重量，优选约0.1％到约50％重量，更优选约0.1％到约20％重量，最优选约1％到约10％重量。
任选地，该局部用组合物可以包含一个或多个本发明的组合物，可以任选包含其他活性或非活性成分，包括但不限于，赋形剂、填充剂、乳化剂、抗氧化剂、表面活性剂、成膜剂、螯合剂、胶凝剂、增稠剂、软化剂、湿润剂、增湿剂、维生素、矿物质、粘度和/或流变学调节剂、遮光剂、角质层分离剂、脱色剂、类视黄醇、激素化合物、α-羟酸、α-酮酸、抗分枝杆菌剂、抗真菌剂、抗微生物剂、抗病毒剂、镇痛剂、脂类化合物、抗过敏剂、H1或H2抗组胺剂、抗炎剂、抗刺激剂、免疫系统强化剂、免疫系统抑制剂、抗痤疮剂、麻醉剂、消毒剂、驱虫剂、皮肤冷却化合物、皮肤保护剂、皮肤渗透促进剂、表皮剥落剂、润滑剂、芳香剂、着色剂、染色剂、脱色剂、色素沉着剂、防腐剂、稳定剂、药剂、光稳定剂及其混合物。除了上述以外，本发明的个人护理产品还可以包含治疗皮肤疾病的任何其他化合物。
本发明也提供一种改善和/或防止人皮肤光老化和自然老化征象的方法，包括局部施用本发明的化妆组合物。本发明的化妆组合物优选每日一次或两次施用于损伤的皮肤区域，只要可以达到所期望的抗老化结果即可。
实施例
下面的实施例是用于以非限制性的方式说明本发明的某些方面。
实施例1
纤连蛋白是一种同二聚体，具有两个通过二硫桥连接的MW250K的亚单元。纤连蛋白与跨越细胞膜的称作整联蛋白的受体蛋白结合，同时与细胞外基质组分例如胶原、纤维蛋白和肝素结合。纤连蛋白是细胞外基质的重要成分，介导细胞与细胞和细胞外基质之间的粘连。纤连蛋白对于维持维持皮肤完整性是非常重要的。纤连蛋白对于皮肤修复是重要的，在伤口愈合过程中会增加。UV辐射增加了皮肤中纤连蛋白的降解。此外，发现在老化皮肤的乳突状真皮中纤维蛋白连接素的水平降低。参见Ray D.等人，J Biol Chem.2006，281:23060-5；Labat-Robert J.等人，J Photochem Photobiol B.200057(2-3):113-8；Pieraggi MT等人，Ann Pathol.1984，4(3):185-94；ClarkRA等人，J Invest Dermatol.1982，79(5):264-9；和Clark RA JInvest Dermatol.1983，81(6):475-9。因此，希望皮肤细胞中纤连蛋白的水平升高会有助于改善老化皮肤的外观，即改善皮肤的细纹、皱纹、肌理、下垂、松弛和坚固度。
将正常人皮肤的成熟成纤维细胞(Cascade Biologics)在12孔组织培养处理板中培养，并在受试活性物存在或不存在下处理72小时。在培养后，将每次处理的条件培养基收集在1.7mL微量离心管中，并在-80℃下冷冻用于随后的分析。该分析是以竞争性抑制ELISA的模式。
将人纤连蛋白预涂敷于孔上，其中一行不涂层作为参考。用人纤连蛋白的多克隆兔抗体预培养标准品和样品。在标准稀释液中，该多克隆抗体与纤连蛋白结合，如果存在的话，也会在样品中结合。然后将混合物转移到涂覆人纤连蛋白的板上。在板上游离的兔抗-人纤连蛋白与纤连蛋白集合。山羊抗-兔IgG HRP-结合物与结合的兔抗-纤连蛋白反应。当加入HRP底物时，产生了蓝色。通过加入酸停止反应，颜色转变为黄色。用设置为450nm的微板读数器定量该颜色。颜色的强度与原样品中纤连蛋白的量成反比。
结果总结: