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含有肝细胞生长因子受体抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂的药物组合物及其用途
    【技术领域】

    本发明涉及一种药物组合物及其在制备治疗癌症的药物中的应用，具体涉及含有肝细胞生长因子受体抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂的药物组合物及其在制备治疗肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、脑瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用。

    背景技术

    世界卫生组织调查报告表明，全球癌症状况日益严重，今后20年新患者的人数将由目前的每年1000万增加到1500万，因癌症而死亡的人数也将由每年的600万增加至1000万。其中原发性肝癌为发生在肝细胞与肝内胆管上皮细胞的癌变，是人类最常见的恶性肿瘤之一；胰腺癌是恶性程度较高的消化系统肿瘤之一，发病率呈逐年上升趋势。由于起病隐匿，缺乏有效的早期诊断方法，确诊时往往已到晚期或发生转移，晚期患者中位生存期不超过六个月，因此研究胰腺癌的治疗新方法迫在眉睫。

    目前已上市的抗肿瘤药物较多，如烷化剂药物、抗代谢药物、抗肿瘤抗生素、免疫调节剂等，但是大多药物由于毒性较大，病人不耐受。随着对肿瘤的发生发展的分子机制研究越来越清楚，分子靶向治疗多种恶性肿瘤受到了广泛的关注和高度重视。分子靶向药物选择性高、广谱有效，其安全性优于细胞毒性化疗药物，是目前肿瘤治疗领域发展的新方向。

    肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor，HGF)通过与其靶细胞上特异的受体(肝细胞生长因子受体cMet)结合后具有促进细胞分裂、运动和成形的能力。cMet是原癌基因cMet编码的蛋白，是一类具有自主性磷酸化活性的跨膜受体。HGF和cMet结合后诱导胞膜上cMet受体酪氨酸磷酸化，并通过多种细胞内信号转导途径发挥HGF的生物学效应，在肿瘤细胞的发生、迁徙及转移过程中发挥了重要的作用。因此，抑制cMet的活性可能会对肿瘤细胞的发生、侵袭和转移起到重要的干预作用。在研或已进入临床研究的肝细胞生长因子受体抑制剂有PF‑02341066、SGX523或PHA665752等。

    丝裂原活化蛋白激酶(mitogen‑activated protein kinase，MAPK)级联是细胞信号转导的重要途径，能将募集的多种细胞外信号(如生长因子、细胞因子、肿瘤启动因子)通过磷酸活化逐级转递至细胞核，并激活多种核转录因子，如C‑myc，C‑jun等，参与细胞生长、发育、分裂、及分化等多种生理过程，并在细胞恶性转化及演进中起重要作用。作为MAPK信号传导通路中的重要一环——丝裂原细胞外激酶(mitogenextracellular kinase，MEK)可被多种生长因子、炎症因子和环境应激反应等激活，导致细胞的增殖，因此，MEK抑制剂成为抗肿瘤药物研究的一个新方向。

    随着肿瘤分子生物学的研究进展，肿瘤分子靶向治疗已成为肿瘤研究的热点，在多种肿瘤的治疗中发挥了重要的作用。然而，大部分肿瘤的生物学行为并非由单一信号传导通路所支配，而是多个信号传导通路共同起作用的，因此联合用药针对多靶点进行靶向治疗将不仅旨在减少或延缓耐药性的出现、降低毒性，而且通过多种药物对癌细胞杀伤的协同作用取得更好的疗效。

    【发明内容】

    针对以上技术缺陷，本发明提供一种药物组合物及其在制备治疗肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、脑瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用，具体为含有肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂与丝裂原细胞外激酶抑制剂的药物组合物及其在制备治疗肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、脑瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物的应用。

    本发明的含有肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂与丝裂原细胞外激酶抑制剂的药物组合物中，所述肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂可以为任何结构类型的肝细胞生长因子受体抑制剂的药物，如PF‑02341066、SGX523或PHA665752，其中，SGX‑523由SGXPharmaceuticals公司研发，已申请I期临床；PHA‑665752由Sugen公司研发。

    本发明药物组合物中，所述肝细胞生长因子受体抑制剂优选为PF‑02341066，结构式为式I：

    

    所述组分不限于PF‑02341066药物本身，还可以是其可药用的盐，PF‑02341066的衍生物或如WO2007066187专利申请中所披露的各种PF‑02341066的类似物。

    本发明中，所述丝裂原细胞外激酶抑制剂可以为任何结构类型的丝裂原细胞外激酶抑制剂的药物，如U0126、ARRY‑142886、CI‑1040或PD325901，其中，PD‑325901由Pfizer公司研发，目前正在进行II期临床；CI‑1040由Pfizer公司研发。

    本发明药物组合物中，所述丝裂原细胞外激酶抑制剂优选为U0126或ARRY‑142886或其组合，其中ARRY‑142886为WO03/077914中所记载的式II的化合物；

    

    本发明药物组合物中，所述组分不限于上述药物本身，还可以是它们的类似物、衍生物及其有机或无机的盐。

    本发明含有肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂的药物组合物中，所述肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂的摩尔比为0.1‑5.0:0.05‑2.0；进一步优选肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂的摩尔比为0.5‑2.0:0.15‑1.0。

    本发明含有肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂的药物组合物可以用于制备治疗各种肿瘤的药物，所述肿瘤包括但不限于肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、脑瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌。

    本发明肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂的药物组合物优选用于制备治疗肝癌或胰腺癌的药物中的应用。

    在本发明药物组合物用于制备治疗肝癌的药物的应用中，肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂优选为PF‑02341066，丝裂原细胞外激酶抑制剂优选为ARRY‑142886；其中，所述PF‑02341066和ARRY‑142886的摩尔比为0.5‑2.0：0.15‑0.5，优选为PF‑02341066和ARRY‑142886摩尔比为1.0‑2.0：0.25‑0.5，最佳为PF‑02341066和ARRY‑142886摩尔比为2.0：0.5。

    本发明组合物在制备治疗胰腺癌的药物的应用中，所述肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂优选为PF‑02341066，丝裂原细胞外激酶抑制剂优选为ARRY‑142886，其中，所述PF‑02341066和ARRY‑142886的摩尔比为0.5‑2.0：0.25‑1.0。

    本发明药物组合物在制备治疗AsPC‑1类型胰腺癌的药物的应用中，所述PF‑02341066和ARRY‑142886的摩尔比为1.0‑2.0:0.25‑1.0；优选PF‑02341066和ARRY‑142886的摩尔比为1.5‑2.0:0.5‑1.0；最佳优选为PF‑02341066和ARRY‑142886的摩尔比为2.0:1.0。

    其中在制备治疗Hs766T类型胰腺癌的药物的应用中，所述PF‑02341066和ARRY‑142886的摩尔比为0.5‑1.5:0.25‑1.0；优选PF‑02341066和ARRY‑142886的摩尔比为1.0‑1.5:0.5‑1.0；最佳优选为PF‑02341066和ARRY‑142886的摩尔比为1.5：1.0。

    含有肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂与丝裂原细胞外激酶抑制剂组合物在制备治疗肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、脑瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物的应用中，在将本发明组合物制成同时给药的药剂的方案中，肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂可以含在同一种药物制剂如片剂或胶囊中，也可以将肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂分别做成制剂，如分别做成片剂或胶囊，并采用本领域常规的方式将它们包装或结合在一起，患者然后按照药品说明书的指示同时服用；在将本发明组合物制成先后给药的药剂的方案中，可以将肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂分别做成不同的制剂，并采用本领域常规的方式将它们包装或结合在一起，患者然后按照药品说明书指示的先后顺序进行服用，或将上述组合物中的两种成分制成一种控释的制剂，先释放组合物中的一种成分、然后再释放组合物中的另一种成分，患者只需要服用该控释组合物制剂；在将本发明组合物制备成交叉给药的药剂的方案中，可以将肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂分别做成不同的制剂，并采用本领域常规的方式将它们包装或结合在一起，患者然后按照药品说明书指示的交叉顺序服用，或者将该药物组合物制备成肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂交叉释放的控释制剂。

    本发明肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂与丝裂原细胞外激酶抑制剂组合物在制备治疗肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、脑瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物的应用中，所述组合物中的肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂可以同时使用或以任何先后的顺序使用，如可以将肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂同时给患者服用；也可以先将肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂药物给患者服用、然后服用丝裂原细胞外激酶抑制剂，或先服用丝裂原细胞外激酶抑制剂、然后服用肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂药物，对于两者服用的时间间隔没有特别要求，但优选服用两种药物的时间间隔不超过一天；或者两种药物交替给药。

    本发明中，可将本发明肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂采用本领域常规的方法制备成适于胃肠道给药或非胃肠道给药的药物制剂，本发明优选将肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂制成胃肠道给药的药物制剂，其制剂形式可以为常规片剂或胶囊、或控释、缓释制剂。在本发明肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂组合物的药物制剂中，根据不同的制剂形式和制剂规格，所述组合物在制剂中的含量可以以质量计为1‑99％，优选为10％‑90％；制剂使用的辅料可采用本领域常规的辅料，以不和本发明组合物发生反应或不影响本发明药物的疗效为前提；所述制剂的制备方法可采用本领域常规的制备方法进行制备。

    本发明中，肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂组合物的制备方法没有什么限制，肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂两者可以进行直接混合然后做成制剂，或分别和/或相应的辅料混合分别做成制剂，然后再按照本领域常规的方式包装在一起，或分别和相应的辅料混合然后再混合做成制剂。

    本发明中的药物组合物的给药剂量根据给药对象、给药途径或药物的制剂形式不同可以进行适当的变化，但以保证该药物组合物在哺乳动物体内能够达到有效的血药浓度为前提。

    本发明分别进行了肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂和丝裂原细胞外激酶抑制剂组合杀死HepG2(肝癌细胞株)、AsPC‑1、Hs766T(胰腺癌细胞株)的试验，结果提示，本发明肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂与丝裂原细胞外激酶抑制剂组合治疗肝癌、胰腺癌具有显著的协同效应，不仅提高了药物的疗效，而且降低了用药剂量，减少了副作用的发生。

    【具体实施方式】

    结合以下实施例对本发明作进一步的阐述，但本发明并不受限于此。

    实施例

    试剂和方法：

    细胞：HepG2(肝癌细胞株)，AsPC‑1(胰腺癌细胞株)、Hs766T(胰腺癌细胞株)，均购自American Type Culture Collection(ATCC)，Rockville，MD，USA。

    药品：以下实施例中所用药物组合物均按下列方法1或方法2所述来制备；丝裂原细胞外激酶抑制剂ARRY‑142886参照专利WO03/077914合成而得；肝细胞生长因子受体(cMet)抑制剂PF‑02341066参照专利WO2007066187合成而得。

    方法1：准确称量相应的药物组合物的各组分，以二甲基亚砜分别溶解，各自配成10mM的贮存液，在‑20℃下保存，使用时用新鲜的培养基稀释到合适的浓度，然后各自取1微升的各组分的溶液，混合在一起备用。所有的试验中，二甲基亚砜的最终浓度应≤5g/L，以便不影响细胞的活性。

    将所有的细胞于含10％小牛血清、100kU/L青霉素、100mg/L链霉素的RPMI1640培养基中，37℃、5％CO₂的湿度条件下培养，在加药的前一天，在六孔板上进行细胞接种2×10⁵/孔，然后向细胞中加入按上述方法制备的药物组合物溶液，使各组分达到其工作浓度，具体见表中第1‑6。

    加药5天之后，通过台盼蓝(Trypan Blue)测定细胞死亡，细胞通过在37℃用胰蛋白酶钠/EDTA进行胰酶化作用10分钟。死亡的细胞从培养器上脱落进入培养基中，通过在1200转/分钟下离心收集所有的细胞，然后再用培养基重新悬浮沉淀物，与台盼蓝染料混合。染色之后，用光学显微镜和血细胞计数器进行计数。被染料染成蓝色的计为死亡细胞。随机选取500个细胞进行计数，死亡的细胞以占总计数细胞的百分比来表达。

    方法2：准确称量相应的药物组合物的各组分，以二甲基亚砜分别溶解，各自配成10mM的贮存液，在‑20℃下保存。使用时用新鲜的培养基稀释到合适的浓度，然后各自取1微升的各组分的溶液备用。所有的试验中，二甲基亚砜的最终浓度应≤5g/L，以便不影响细胞的活性。

    将所有的细胞于含10％小牛血清、100kU/L青霉素、100mg/L链霉素的RPMI1640培养基中，37℃、5％CO₂的湿度条件下培养，在加药的前一天，在六孔板上进行细胞接种2×10⁵/孔，然后以任意次序向细胞中加入按上述方法制备的药物组合物的各组分溶液，使各组分达到其工作浓度，具体见表中第7‑9。

    加药5天之后，通过台盼蓝(Trypan Blue)测定细胞死亡，细胞通过在37℃用胰蛋白酶钠/EDTA进行胰酶化作用10分钟。因为死亡的细胞从培养器上脱落进入培养基中，通过在1200转/分钟下离心收集所有的细胞，然后再用培养基重新悬浮沉淀物，与台盼蓝染料混合。染色之后，用光学显微镜和血细胞计数器进行计数。被染料染成蓝色的计为死亡细胞。随机选取500个细胞进行计数，死亡的细胞以占总计数细胞的百分比来表达。

    下列表1所示的药物组合中，第1‑6的组合按方法1制备；第7‑9按方法2制备。

    表1

    

    实施例1不同比例的PF‑02341066与ARRY‑142886的组合协同增效促进HepG2细胞死亡试验，见表2。

    表2

    

    在考察相关化合物导致肝癌细胞株HepG2细胞死亡的试验中，发现当单独使用2.0μM PF‑02341066或更低浓度、0.25μM ARRY‑142886或更低浓度时只有很少量的细胞死亡；即使增加单药的浓度至0.5μMARRY‑142886时，也只有约20％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(1.0μM PF‑02341066+0.25μM ARRY‑142886)则产生明显的协同作用，导致约60％的癌细胞死亡；当两者以2.0μMPF‑02341066+0.5μMARRY‑142886的比例合用时，则产生更加明显的协同作用，导致约100％的癌细胞死亡。

    实施例2不同比例的PF‑02341066与ARRY‑142886组合协同增效促进AsPC‑1细胞死亡，见表3。

    表3

    

    在考察相关化合物导致胰腺癌细胞株AsPC‑1细胞死亡的试验中，发现当单独使用1.5μM PF‑02341066或更低浓度、0.5μMARRY‑142886或更低浓度时只有很少量的细胞死亡；即使增加单药的浓度至2.0μMPF‑02341066或1.0μMARRY‑142886时只有约15‑20％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(1.5μM PF‑02341066+0.5μM ARRY‑142886)则产生明显的协同作用，导致约60％的癌细胞死亡；当两者以2.0μMPF‑02341066+1.0μMARRY‑142886的比例合用时，则产生更加明显的协同作用，导致约90％的癌细胞死亡。

    实施例3不同比例的PF‑02341066与ARRY‑142886组合协同增效促进Hs766T细胞死亡，见表4。

    表4

    

    在考察相关化合物导致胰腺癌细胞株Hs766T细胞死亡的试验中，发现当单独使用1.5μMPF‑02341066或更低浓度、1.0μMARRY‑142886或更低浓度时只有很少量的细胞死亡；而当两者以1.5μM PF‑02341066+1.0μMARRY‑142886的比例合用时，则产生明显的协同作用，导致约85％的癌细胞死亡。