发明内容
本发明的目的在于克服现有盐酸多西环素剂型的不足，提供一种盐酸多西环素的新剂型，一种盐酸多西环素的油混悬液，可提高盐酸多西环素药物的稳定性和生物相容性，使其具长效作用，增强盐酸多西环素疗效。
本发明的另一个目的是提供所述盐酸多西环素的油混悬液的制备方法。
本发明还有一个目的是提供所述盐酸多西环素的油混悬液的应用。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现：
提供一种盐酸多西环素的油混悬液，其特征在于每升盐酸多西环素油混悬液包括以下重量的各组分：
盐酸多西环素原料药： 50～300g；
助悬剂： 1～50g；
表面活性剂： 1～30g；
抗氧化剂： 0.1～2g；
油相： 加至1升。
所述油相优选植物油，可选大豆油、棉籽油、花生油、麻油、玉米油、茶油、葵花籽油、蓖麻油或橄榄油中的一种或两种以上任何比例的混合物。
所述的助悬剂包括羧甲基纤维素(钠)、甲基纤维素、阿拉伯胶、黄原胶、聚乙烯吡咯烷酮、分子量大于1000的聚乙二醇、氢化蓖麻油或单硬脂酸铝的一种或两种以上任何比例的混合物。
所述表面活性剂包括卵磷脂、大豆磷脂、脂肪酸甘油酯、蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯(Tween系列)、失水山梨醇脂肪酸酯(Span系列)、聚氧乙烯脂肪酸酯(Myrij系列)或聚氧乙烯脂肪醇醚(Brij系列)的一种或两种以上任何比例的混合物。
所述抗氧剂为亲油性抗氧剂，包括没食子酸及其酯类、叔丁基对羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、生育酚或抗坏血酸棕榈酸酯中的一种或两种以上任何比例的混合物。
所述盐酸多西环素油混悬液的制备方法是按照比例称量盐酸多西环素原料药和助悬剂、表面活性剂、抗氧化剂和油相，在无菌条件下，通过胶体磨混合均匀，即得盐酸多西环素的油混悬液。
本发明同时提供了所述盐酸多西环素的油混悬液在制备兽用长效注射剂方面的应用，尤其是应用于制备治疗猪附红细胞体病或支原体病药物方面的应用。
本发明的有益效果是：
本发明首次应用植物油为分散介质制备盐酸多西环素的油混悬液，寻找到合适的组分配伍及精确比例，采用简单易行的制备方法成功制备得到盐酸多西环素的油混悬液，有效提高了药物的稳定性，解决了常规注射剂使用有机溶剂引发的刺激性问题，动物顺应性好，制剂在体内形成药物贮库，发挥缓释长效作用。本发明盐酸多西环素的油混悬液可应用于兽用长效注射剂，稳定性、生物相容性好，具延缓吸收效果，为我国兽医临床更好地利用盐酸多西环素提供了一种新的制剂。
具体实施方式
下面结合具体实施例详细说明本发明，所述助悬剂、表面活性剂、抗氧化剂、油相的简单替代物不在实施例中一一赘述，但并不因此限定本发明实施范围。
实施例1：20％盐酸多西环素油混悬液
按照以下比例准备各组分，所有组分均为药用常规原料(市购)：
盐酸多西环素原料药： 200g；
单硬脂酸铝： 5g；
司盘80： 2g；
没食子酸丙酯： 0.5g；
茶油： 加至1000mL。
制备方法是按照上述比例称量盐酸多西环素原料药、单硬脂酸铝、司盘80、没食子酸丙酯和茶油，在无菌条件下，通过胶体磨混合均匀，即得盐酸多西环素的油混悬液。胶体磨不做特殊要求，达到混合均匀要求即可。
实施例2：10％盐酸多西环素油混悬液
按照以下比例准备各组分，所有组分均为药用常规用料：
盐酸多西环素原料药：100g；
单硬脂酸铝： 5g；
氢化蓖麻油： 5g；
大豆磷脂： 1g；
司盘80： 2g；
BHA： 0.1g；
BHT： 0.1g；
花生油： 300g；
茶油 加至1000mL。
制备方法是按照上述比例称量盐酸多西环素原料药、单硬脂酸铝、氢化蓖麻油、大豆磷脂、司盘80、BHA、BHT、花生油和茶油，在无菌条件下，通过胶体磨混合均匀，即得盐酸多西环素的油混悬液。
实施例3：5％盐酸多西环素油混悬液
按照以下比例准备各组分，所有组分均为药用常规原料：
盐酸多西环素原料药：50g；
聚乙烯吡咯烷酮： 10g；
大豆磷脂： 2g；
抗坏血酸棕榈酸酯： 0.2g；
玉米油： 加至1000mL。
制备方法是按照上述比例称量盐酸多西环素原料药、聚乙烯吡咯烷酮、大豆磷脂、抗坏血酸棕榈酸酯和玉米油，在无菌条件下，通过胶体磨混合均匀，即得盐酸多西环素的油混悬液。
实施例4：30％盐酸多西环素油混悬液
按照以下比例准备各组分，所有组分均为药用常规原料：
盐酸多西环素原料药：300g；
氢化蓖麻油： 10g；
脂肪酸甘油酯： 10g；
BHT： 0.5g；
大豆油： 加至1000mL。
制备方法是按照上述比例称量盐酸多西环素原料药、氢化蓖麻油、脂肪酸甘油酯、BHT和大豆油，在无菌条件下，通过胶体磨混合均匀，即得盐酸多西环素的油混悬液。
实施例5：本发明盐酸多西环素油混悬液性状试验
1、质量评价
本发明盐酸多西环素油混悬液在放置30min后未见分层，放置3h后沉降体积比为95％，说明混悬液沉降速度较慢；重新分散性试验结果表明混悬液振摇后易分散，不结块；混悬液药物颗粒粒径介于2.5～15μm者占87.27％；大于15μm者占9.25％；符合混悬注射液的要求。
2、稳定性试验
在(4500±500)LX强光照射10d的条件下，观察到本发明盐酸多西环素油混悬液的外观色泽略有加深，有效成分多西环素的含量下降范围在2.76％～7.70％之间，未检测到降解产物，表明其对光较为敏感，建议遮光贮存。在温度30±2℃，相对湿度75±5％的条件下进行6个月加速试验，沉降体积比在68.42％～71.85％之间，重分散性良好，有效成分多西环素的含量下降范围在4.56％～6.13％之间，未检测到降解产物。
3、安全性评价
采用豚鼠和家兔分别进行盐酸多西环素油混悬液的全身用药过敏性、肌肉局部刺激性及家兔红细胞体外溶血性试验研究，用改良寇氏法对小鼠的LD50进行了测定。结果显示本品对豚鼠无全身过敏性、对家兔肌肉注射给药无明显局部刺激性、对家兔红细胞无体外溶血性，表明盐酸多西环素油混悬液的各项安全性均良好，为实际应用提供了有力技术基础。
4、药物动力学试验
以实施例1的20％盐酸多西环素油混悬液为例。选用9头健康猪，按3周期交叉设计静注5％多西环素注射液、肌注10％多西环素注射液和肌注20％盐酸多西环素油混悬液，给药剂量为10mg/kg b.w.。按设计的时间点进行采血，采用0.01mol/L草酸-乙腈-甲醇(50∶35∶15，V/V/V)为流动相，检测波长为345nm，流速为1.0mL/min，反相高效液相色谱紫外检测血浆中多西环素的浓度，在0.1～15μg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系。采用3P97药物动力学程序软件分析处理药时数据，得出相关药物动力学参数见表1所示。
表1
肌注10％多西环素注射液及20％盐酸多西环素油混悬液的主要药动学参数
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比较上表可见，盐酸多西环素油混悬液比普通注射液在家猪体内吸收减慢，消除减慢，达峰时间延迟，峰浓度降低，分布更加广泛，具有极显著的长效缓释效果。
5、临床应用试验
以实施例1的20％盐酸多西环素油混悬液为例。
选择实验室确诊感染附红细胞体病的36头猪，按10mg/kg体重肌肉注射盐酸多西环素油混悬液，2天一次，连续给药两次，给药后猪皮肤发红、黄疸、贫血等临床症状消失，体温下降至正常，猪食欲正常，愈后观察一周无复发，治愈率达97.2％。
选择实验室确诊感染支原体病的48头猪，按10mg/kg体重肌肉注射盐酸多西环素油混悬液，2天一次，连续给药两次，给药后猪喘气、咳嗽等呼吸道症状消失，体温、食欲恢复正常，愈后观察一周无复发，治愈率达95.8％。