一种虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺
技术领域：
本发明属于生物分离技术领域，特别是一种虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺。
背景技术：
虎眼虎眼万年青(Ornithogalum caudatum Ait)又名胡连虎眼万年青、海葱、葫芦兰，为百合科虎眼虎眼万年青，属常绿多年生球根植物，原产于非洲南部。在我国北方有栽培.民间用全草或球茎入药主要用于消炎和抗癌。虎眼虎眼万年青有极高的药用价值，药理学研究表明虎眼虎眼万年青中的虎眼虎眼万年青皂苷OSW21对肺癌、乳腺癌有明显的抗癌活性，体外抗p338淋巴细胞白血病活性结果表明，OSW21是常见抗癌药物喜树碱、阿霉索、紫杉醇抗癌活性的10～100倍，而且对正常细胞没有毒性，因此，是一种极具开发潜力的中草药。
现有提取分离虎眼万年青皂苷工艺，多是传统老工艺。即虎眼万年青叶子水温浸提取，乙酸铅沉淀杂质，活性炭吸附，乙醇再次提取，粗苷水溶解，依次用二硫化碳、乙醚洗涤，氯仿再萃取，再用氯仿乙醇水混溶液萃取和氧化铝柱分离，重结晶得到三种单体成分，工艺复杂繁琐，试剂种类繁多，给回收带来困难。也有利用大孔树脂吸附工艺制备皂苷的，如肖冲等发表的“虎眼虎眼万年青皂苷的分离提取”采用乙醇提取，石油醚脱脂，AB-8树脂吸附，D-280树脂脱色。现有专利公开的方法也多是粗提物的制备，如专利200510069273“虎眼虎眼万年青活性提取物的制备方法及用途”，该方法采用乙醇提取，树脂分离，得到粗提物。
现有公开的虎眼万年青多糖工艺，提取方法简单，产品含量较低，如专利200510017123“治疗肝癌的虎眼虎眼万年青多糖药物”，该专利公开的方法是水提，低醇沉淀沉淀物弃去，再高醇沉淀多糖，乙醇洗涤即可，多糖含量50％。
发明内容：
本发明要解决的技术问题是提供一种虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺，该工艺适合虎眼万年青多种有效成分的分离，能够提高了虎眼万年青原料的利用率。
本发明的目的是这样来实现的：
一种虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺，其特征在于包括以下几个步骤：
1)提取：取虎眼万年青药材粉碎，加入5-8倍量水回流提取1-2小时，提取2-3次，合并提取液加入澄清剂沉淀过滤，收集滤液；
2)大孔树脂吸附：将上述滤液加入大孔树脂吸附，收集下柱液，水-醇梯度洗脱，收集醇洗脱液；
3)总皂苷纯化：将步骤2)中的醇洗脱液，浓缩小体积，加入氧化镁中压柱，乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，收集皂苷流分浓缩小体积，加入乙醚沉析，沉析物滤出乙醇溶解结晶2-3次，干燥即得虎眼万年青总皂苷；
4)多糖纯化：将步骤2)下柱液减压浓缩至密度1.1-1.3，加入乙醇梯度醇沉，滤出沉淀物热水溶解，多糖用活性炭柱脱色，脱色液浓缩加入乙醇沉析，滤出沉淀物，低温真空干燥即得虎眼万年青多糖。
步骤1)中澄清剂为ZTC-II澄清剂，用量1-3‰。
步骤2)中大孔树脂可选D101、AB-8和HZ816中的一种。优选HZ816。
步骤2)中水-醇梯度洗脱为6-8倍柱体积水洗再5-6倍柱体积50-70％乙醇洗脱。
步骤3)中乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱为8-10倍柱体积乙酸乙酯洗脱再4-8倍柱体积50-90％乙醇洗脱。优选85％乙醇。
步骤3)中结晶条件为：90-99％乙醇回流溶解，回收至原体积的1/2-1/3，静置结晶。
步骤4)中的梯度醇沉为最终乙醇浓度90％-70％-50％三个梯度。
综上所述，本发明存在以下优点：水回流提有利于皂苷多糖同时溶出，沉降剂可以除去大分子物质和部分鞣质，提高了大孔树脂寿命；氧化镁中压柱处理速度快、效果好、总皂苷含量高；梯度醇沉和活性炭柱纯化多糖，多糖产品品质好。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式：
实施例1：
取1kg虎眼虎眼万年青，粉碎，加入5L去离子水，回流提取1小时，提取3次，合并提取液加入3gZTC-II沉降剂搅拌均匀，充分沉降，滤过加入500mlHZ816树脂柱中吸附，下柱液收集备用。取4L去离子水洗脱树脂中杂质，再取3L50％的乙醇溶液，洗脱皂苷成分。
1：总皂苷洗纯化：皂苷洗脱液，减压浓缩小体积(浓缩体积不得大于氧化镁体积的1/5)，泵入中压氧化镁柱，先8倍柱体积乙酸乙酯洗脱杂质，再用4倍柱体积85％乙醇洗脱总皂苷，收集总皂苷流分浓缩无醇，加入20ml乙醚沉析，沉析物滤出，90％乙醇溶解回流溶解，浓缩1/3静止结晶，结晶三次，得总皂苷6g含量90％。
2：多糖纯化：将下柱液减压浓缩至密度1.1，放出加入无水乙醇至醇90％，加入过程充分搅拌，沉淀物再70％和50％两个梯度醇沉，粗多糖滤出溶解加入糖用活性炭柱，收集脱色液浓缩加入乙醇至80％醇沉，滤出真空干燥得多糖30g含量80％。
实施例2：
取1kg虎眼虎眼万年青，粉碎，加入8L去离子水，回流提取2小时，提取2次，合并提取液加入4gZTC-II沉降剂搅拌均匀，充分沉降，滤过加入500mlAB-8树脂柱中吸附，下柱液收集备用。取3L去离子水洗脱树脂中杂质，再取2.5L70％的乙醇溶液，洗脱皂苷成分。
1：总皂苷洗纯化：皂苷洗脱液，减压浓缩小体积(浓缩体积不得大于氧化镁体积的1/5)，泵入中压氧化镁柱，先10倍柱体积乙酸乙酯洗脱杂质，再用4倍柱体积90％乙醇洗脱总皂苷，收集总皂苷流分浓缩无醇，加入25ml乙醚沉析，沉析物滤出，99％乙醇溶解回流溶解，浓缩1/2静止结晶，结晶三次，得总皂苷6.2g，含量86％。
2：多糖纯化：将下柱液减压浓缩至密度1.2，放出加入无水乙醇至醇90％，加入过程充分搅拌，沉淀物再70％和50％两个梯度醇沉，粗多糖滤出溶解加入糖用活性炭柱，收集脱色液浓缩加入乙醇至70％醇沉，滤出真空干燥得多糖28g，含量78％。
实施例3：
取1kg虎眼虎眼万年青，粉碎，加入5L去离子水，回流提取1小时，提取3次，合并提取液加入3gZTC-II沉降剂搅拌均匀，充分沉降，滤过加入500mlD101树脂柱中吸附，下柱液收集备用。取4L去离子水洗脱树脂中杂质，再取3L60％的乙醇溶液，洗脱皂苷成分。
1：总皂苷洗纯化：皂苷洗脱液，减压浓缩小体积(浓缩体积不得大于氧化镁体积的1/5)，泵入中压氧化镁柱，先10倍柱体积乙酸乙酯洗脱杂质，再用4倍柱体积50％乙醇洗脱总皂苷，收集总皂苷流分浓缩无醇，加入10ml乙醚沉析，沉析物滤出，95％乙醇溶解回流溶解，浓缩1/2静止结晶，结晶三次，得总皂苷5.5g含量85％。
2：多糖纯化：将下柱液减压浓缩至密度1.15，放出加入无水乙醇至醇90％，加入过程充分搅拌，沉淀物再70％和50％两个梯度醇沉，粗多糖滤出溶解加入糖用活性炭柱，收集脱色液浓缩加入乙醇至80％醇沉，滤出真空干燥得多糖26g，含量75％。
实施例4：
取10kg虎眼虎眼万年青，粉碎，加入50L去离子水，回流提取1小时，提取3次，合并提取液加入40gZTC-II沉降剂搅拌均匀，充分沉降，滤过加入6LHZ816树脂柱中吸附，下柱液收集备用。取40L去离子水洗脱树脂中杂质，再取30L60％的乙醇溶液，洗脱皂苷成分。
1：总皂苷洗纯化：皂苷洗脱液，减压浓缩小体积(浓缩体积不得大于氧化镁体积的1/5)，泵入中压氧化镁柱，先10倍柱体积乙酸乙酯洗脱杂质，再用6倍柱体积85％乙醇洗脱总皂苷，收集总皂苷流分浓缩无醇，加入200ml乙醚沉析，沉析物滤出，90％乙醇溶解回流溶解，浓缩1/3静止结晶，结晶三次，得总皂苷63g含量90％。
2：多糖纯化：将下柱液减压浓缩至密度1.2，放出加入无水乙醇至醇90％，加入过程充分搅拌，沉淀物再70％和50％两个梯度醇沉，粗多糖滤出溶解加入糖用活性炭柱，收集脱色液浓缩加入乙醇至80％醇沉，滤出真空干燥得多糖310g，含量80％。
实施例5：
取10kg虎眼虎眼万年青，粉碎，加入80L去离子水，回流提取2小时，提取2次，合并提取液加入35gZTC-II沉降剂搅拌均匀，充分沉降，滤过加入6LAB-8树脂柱中吸附，下柱液收集备用。取48L去离子水洗脱树脂中杂质，再取35L65％的乙醇溶液，洗脱皂苷成分。
1：总皂苷洗纯化：皂苷洗脱液，减压浓缩小体积(浓缩体积不得大于氧化镁体积的1/5)，泵入中压氧化镁柱，先10倍柱体积乙酸乙酯洗脱杂质，再用6倍柱体积85％乙醇洗脱总皂苷，收集总皂苷流分浓缩无醇，加入200ml乙醚沉析，沉析物滤出，90％乙醇溶解回流溶解，浓缩1/3静止结晶，结晶三次，得总皂苷61g含量85％。
2：多糖纯化：将下柱液减压浓缩至密度1.2，放出加入无水乙醇至醇90％，加入过程充分搅拌，沉淀物再70％和50％两个梯度醇沉，粗多糖滤出溶解加入糖用活性炭柱，收集脱色液浓缩加入乙醇至80％醇沉，滤出真空干燥得多糖305g，含量75％。