一种微生物饵料添加剂及其制备方法 【技术领域】
本发明涉及一种微生物饵料添加剂及其制备方法。背景技术 近些年来， 我国的南美白对虾养殖业在不断的发展， 但随着养殖规模的扩大导致 养殖环境的日益恶化， 出现了成虾免疫力下降、 幼虾生长慢、 成活率低等一些问题， 严重制 约了南美白对虾养殖业的发展。 南美白对虾微生物饵料添加剂作为一种绿色添加剂近些年 来发展非常迅速， 它不仅能改善动物体肠道微生态环境和分泌消化酶， 提高饵料转化率， 预 防疾病， 促进生长 ； 而且可以降低水中氨氮、 亚硝酸盐和 H2S 等含量， 对改善水质也起到了非 常关键的作用。南美白对虾微生物饵料添加剂在水产养殖中应用非常广泛， 但其对南美白 对虾生长和消化酶活性的影响还很少见报道。
发明内容 本发明要解决的问题是针对以上问题， 提供一种微生物饵料添加剂及其制备方 法， 该微生物饵料添加剂具有提高南美白对虾的抗逆性， 增加幼虾产量和改善养殖水体状 况的功能。
为解决以上问题， 本发明采用的技术方案为 ： 一种微生物饵料添加剂， 其特征在 于： 所述添加剂包括以下重量比的成分 ：
蜡样芽胞杆菌培养物 10 ～ 40％、 枯草芽胞杆菌培养物 10 ～ 40％、 凝结芽孢杆菌 5 ～ 20％、 植物乳杆菌培养物 10 ～ 40％、 嗜酸乳杆菌培养物 10 ～ 40％和沼泽红假单胞菌 培养物 5 ～ 20％。
作为上述技术方案的进一步改进 ：
所述添加剂包括以下重量比的成分 ：
蜡样芽胞杆菌株和枯草芽胞杆菌混合培养物 30％、 凝结芽胞杆菌培养物 10％、 植 物乳杆菌和嗜酸乳杆菌混合培养物 50％和沼泽红假单胞菌培养物 10％。
所述蜡样芽胞杆菌株和枯草芽胞杆菌的混合比以重量计是 1 ∶ 1。
所述植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌的混合比以重量计是 1 ∶ 1。
所述制备方法包括如下步骤 ：
a、 制备蜡样芽胞杆菌培养物 ： 将蜡样芽胞杆菌种子液接入已经灭菌后的培养基 中， 培养基含有重量比为 5-10％的豆芽汁、 0.2-0.5％的葡萄糖和 0.5-1.5％的蛋白胨， 余 量为作为溶剂的水， 接种量为 0.3％， 在温度为 32-36℃、 PH 值 7.2-8.5 的条件下有氧发酵 16-28 小时后， 放罐， 制得蜡样芽胞菌发酵培养物 ；
b、 枯草芽胞杆菌培养物 ： 枯草芽胞杆菌种子液接入已经灭菌后的培养基中， 培养 基含有重量比为 5-10％的豆芽汁、 0.2-0.5％的葡萄糖和 0.5-1.5％的蛋白胨、 余量为作为 溶剂的水， 接种量为 0.3％， 在温度 32-36℃、 PH 值 7.2-8.5 的条件下有氧发酵 16-28 小时 后， 放罐， 制得枯草芽胞菌发酵培养物 ；
c、 制备凝结芽孢杆菌培养物 ： 将凝结芽孢杆菌种子液接入已经灭菌后的培养基 中， 培养基含有重量比为 0.05-1％的蔗糖、 0.01-0.5％的 MgSO47H2O、 0.005-0.5％的 FeCl3、 0.05-0.5％的 CaCO3 和 0.01-0.1％的 NaCl， pH 值为 7.0-8.5， 余量为作为溶剂的水， 接种量 为 0.3％， 在 30-35℃、 pH 值为 7.2-8.5 下培养 48 小时， 放罐， 获得凝结芽孢杆菌发酵培养 物；
d、 制备植物乳杆菌培养物 ： 将植物乳杆菌种子液接入已经灭菌后的培养基中， 培 养基含有重量比为 1-3％的葡萄糖、 0.5-1.5％的蛋白胨和 0.5-1％的酵母浸膏， 余量为作 为溶剂的水， 接种量为 0.3％， 在温度 32-36℃下厌氧发酵后， 放罐， 获得植物乳杆菌发酵培 养物 ；
e、 制备嗜酸乳杆菌培养物 ： 将嗜酸乳杆菌种子液接入已经灭菌后的培养基中， 培 养基含有重量比为 1-3％的葡萄糖、 0.5-1.5％的蛋白胨和 0.5-1％的酵母浸膏， 余量为作 为溶剂的水， 接种量为 0.3％， 在温度 32-36℃下厌氧发酵后， 放罐， 获得嗜酸乳杆菌发酵培 养物 ；
f、 制备沼泽红假单胞菌培养物 ： 将沼泽红假单胞菌种子液接入已经灭菌后的培养 基中， 培养基含有重量比 5-10％的豆芽汁和 0.1-0.5％的氯化钠， 余量为作为溶剂的水， 接 种量为 0.3％， 在温度 25-35℃、 光照恒温培养 36-96 小时， 得到沼泽红假单胞菌培养物。
所述制备方法包括如下步骤 ：
取蜡样芽胞杆菌、 枯草芽胞杆菌、 凝结芽胞杆菌、 植物乳杆菌、 嗜酸乳杆菌和沼泽 红假单胞菌培养物， 按照所述重量比混合、 分装， 制成微生物饵料添加剂。
所述制备方法包括如下步骤 ：
将蜡样芽胞杆菌、 枯草芽胞杆菌、 凝结芽胞杆菌、 植物乳杆菌、 嗜酸乳杆菌和沼泽 红假单胞菌培养物按照所述重量比混合， 得到混合液， 混合液离心后与碳酸钙混合， 混合液 与碳酸钙的重量比为 1 ∶ 3， 在 45℃ -75℃条件下干燥， 得到固体微生物饵料添加剂。
所述制备方法包括如下步骤 ：
a、 制备芽胞杆菌混合培养物 ： 将蜡样芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌 1 ∶ 1 比例的种 子液接入已经灭菌后的培养基中， 培养基含有重量比为 5-10 ％的豆芽汁、 0.2-0.5 ％的葡 萄糖和 0.5-1.5％的蛋白胨、 余量为作为溶剂的水， 接种量为 0.3％， 在温度 32-36℃、 PH 值 7.2-8.5 的条件下有氧发酵 16-28 小时后， 放罐， 制得芽胞菌混合发酵培养物 ；
b、 制备乳杆菌混合培养物 ： 将植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌 1 ∶ 1 比例的种子液接 入已经灭菌后的培养基中， 培养基含有重量比为 1-3 ％的葡萄糖、 0.5-1.5 ％的蛋白胨合 0.5-1 ％的酵母浸膏， 余量为作为溶剂的水， 接种量为 0.3 ％， 在温度 32-36 ℃下厌氧发酵 后， 放罐， 获得乳杆菌混合发酵培养物 ；
c、 制备凝结芽孢杆菌培养物 ： 将凝结芽孢杆菌种子液接入已经灭菌后的培养基 中， 培养基含有重量比为 0.05-1％的蔗糖、 0.01-0.5％的 MgSO47H2O、 0.005-0.5％的 FeCl3、 0.05-0.5％的 CaCO3 和 0.01-0.1％的 NaCl， pH 值为 7.0-8.5， 余量为作为溶剂的水， 接种量 为 0.3％， 在 30-35℃、 pH 值为 7.2-8.5 下培养 48 小时， 放罐， 获得凝结芽孢杆菌发酵培养 物；
d、 制备沼泽红假单胞菌培养物 ： 将沼泽红假单胞菌种子液接入已经灭菌后的培养 基中， 培养基含有重量比 5-10％的豆芽汁和 0.1-0.5％的氯化钠， 余量为作为溶剂的水， 接种量为 0.3％， 在温度 25-35℃、 光照恒温培养 36-96 小时， 得到沼泽红假单胞菌培养物。
所述制备方法包括如下步骤 ：
取蜡样芽胞杆菌株和枯草芽胞杆菌混合培养物、 凝结芽胞杆菌培养物、 植物乳杆 菌和嗜酸乳杆菌混合培养物和沼泽红假单胞菌培养物， 按以上重量比混合、 分装， 制成微生 物饵料添加剂。
所述制备方法包括如下步骤 ：
将蜡样芽胞杆菌株和枯草芽胞杆菌混合培养物、 凝结芽胞杆菌培养物、 植物乳杆 菌和嗜酸乳杆菌混合培养物和沼泽红假单胞菌培养物按照所述重量比混合， 得到混合液， 混合液离心后与碳酸钙混合， 混合液与碳酸钙的重量比为 1 ∶ 3， 在 45℃ -75℃条件下干燥， 得到固体微生物饵料添加剂。
所述各菌培养物其菌种名称是 ： 蜡样芽胞杆菌 CMCC63305(B.cereus)、 枯草芽 胞杆菌 K-M(B.subtilis)、 植物乳杆菌 AS1.557(L.phantarum)、 嗜酸乳杆菌 ATCC5221(L. acidophilus)、 凝结芽孢杆菌 AS 1.152(B.coagulans)、 沼泽红假单胞菌 981.982(Rhodo eudomona alustris)， 这些菌株均为市售菌株。
上述微生物饵料添加剂在南美白对虾养殖中的用法如下 ： (1) 饵 料 添 加 ： 在 干 饵 料 中 添 加 比 例 为 1000 ∶ 1 ； 在湿饵料中添加比例为 3000 ∶ 1。
(2) 水面喷洒 ： 南美白对虾育苗室水体水面喷洒， 每立方水体用量 5ml ； 虾圈养殖 水体喷洒， 每亩米水体用量 1000ml。
用于海参、 鲍鱼育苗养殖 ：
(1) 饵 料 添 加 ： 在 干 饵 料 中 添 加 比 例 为 1000 ∶ 1 ； 在湿饵料中添加比例为 3000 ∶ 1。
(2) 水面喷洒 ： 鲍鱼育苗室水体水面喷洒， 每立方水体用量 5ml。
用于扇贝育苗养殖 ： 水面喷洒 ： 扇贝育苗室水体水面喷洒， 每立方水体用量 2ml。
本发明采用以上技术方案， 具有以下优点 ：
(1) 采用蜡样芽胞杆菌、 枯草芽胞杆菌、 凝结芽孢杆菌、 植物乳杆菌、 嗜酸乳杆菌、 沼泽红假单胞菌进行复合， 通过饵料添加和水中喷洒方法使用， 可提高南美白对虾的抗逆 性， 增加幼虾产量和改善养殖水体质量的作用。
(2) 采用单一菌种分批发酵和多菌种混合发酵技术可充分利用各菌种的生长特点 减少发酵次数获得最大数量的有益微生物， 降低生产成本。
(3) 采用固体形式制备的南美白对虾微生物饵料添加剂便于长期储存和运输， 其 使用效果稳定， 重现性好。
(4) 本菌剂主要利用多种具有益生作用芽孢菌作为主要生产菌种， 可保障产品的 有效活菌数量， 延长产品的质保期和货架期。
(5) 本菌剂中的活菌数达到 10 ～ 30 亿 / 毫升， 固体菌剂活菌数达到 50 ～ 100 亿 / 克。
(6) 本发明生物制剂的原材料是来源广泛、 成本低廉， 并可进行大规模的生产， 产 品成本低， 效果好， 生物安全性高， 发酵周期短， 菌剂制备工艺简单， 具有工业化生产的可能 性， 宜于普及和推广。
下面结合实施例对本发明进行详细说明。具体实施方式
实施例 1， 微生物饵料添加剂， 包括蜡样芽胞杆菌培养物 15％、 枯草芽胞杆菌培养 物 15％、 凝结芽孢杆菌 10％、 植物乳杆菌培养物 25％、 嗜酸乳杆菌培养物 25％和沼泽红假 单胞菌培养物 10％。
按照以下方法制备 ：
a、 制备蜡样芽胞杆菌培养物 ： 将蜡样芽胞杆菌种子液接入已经灭菌后的培养基 中， 培养基含有重量比为 5％的豆芽汁、 0.2％的葡萄糖和 1％的蛋白胨， 余量为作为溶剂的 水， 接种量为 0.3％， 在温度为 32℃、 PH 值 7.2 的条件下有氧发酵 24 小时后， 放罐， 制得蜡 样芽胞菌发酵培养物 ；
b、 枯草芽胞杆菌培养物 ： 枯草芽胞杆菌种子液接入已经灭菌后的培养基中， 培养 基含有重量比为 5％的豆芽汁、 0.2％的葡萄糖和 1％的蛋白胨、 余量为作为溶剂的水， 接种 量为 0.3％， 在温度 32℃、 PH 值 7.2 的条件下有氧发酵 20 小时后， 放罐， 制得枯草芽胞菌发 酵培养物 ； c、 制备凝结芽孢杆菌培养物 ： 将凝结芽孢杆菌种子液接入已经灭菌后的培养基 中， 培养基含有重量比为 1％的蔗糖、 0.01％的 MgSO47H2O、 0.005％的 FeCl3、 0.2％的 CaCO3 和 0.1％的 NaCl， pH 值为 7.0， 余量为作为溶剂的水， 接种量为 0.3％， 在 35℃、 pH 值为 7.2 下培养 48 小时， 放罐， 获得凝结芽孢杆菌发酵培养物 ；
d、 制备植物乳杆菌培养物 ： 将植物乳杆菌种子液接入已经灭菌后的培养基中， 培 养基含有重量比为 2％的葡萄糖、 1％的蛋白胨和 0.5％的酵母浸膏， 余量为作为溶剂的水， 接种量为 0.3％， 在温度 36℃下厌氧发酵后， 放罐， 获得植物乳杆菌发酵培养物 ；
e、 制备嗜酸乳杆菌培养物 ： 将嗜酸乳杆菌种子液接入已经灭菌后的培养基中， 培 养基含有重量比为 2％的葡萄糖、 1％的蛋白胨合 0.5％的酵母浸膏， 余量为作为溶剂的水， 接种量为 0.3％， 在温度 36℃下厌氧发酵后， 放罐， 获得嗜酸乳杆菌发酵培养物 ；
f、 制备沼泽红假单胞菌培养物 ： 将沼泽红假单胞菌种子液接入已经灭菌后的培养 基中， 培养基含有重量比 5％的豆芽汁和 0.1％的氯化钠， 余量为作为溶剂的水， 接种量为 0.3％， 在温度 25℃、 光照恒温培养 96 小时， 得到沼泽红假单胞菌培养物。
将蜡样芽胞杆菌、 枯草芽胞杆菌、 凝结芽胞杆菌、 植物乳杆菌、 嗜酸乳杆菌和沼泽 红假单胞菌培养物， 按照所述重量比混合、 分装， 制成微生物饵料添加剂。
实施例 2， 将实施例 1 的各菌种培养物经离心后按重量比为 1 ∶ 3 与碳酸钙载体 混合、 并在 45℃ -75℃条件下干燥的方法来制备上述菌体培养物的固体菌粉， 最终产品中 各种固体菌粉的混合和比例为 ： 蜡样芽胞菌 1％、 枯草杆菌 1％、 植物乳杆菌 2％、 嗜酸乳杆 菌 2％、 凝结芽胞杆菌 1％、 沼泽红假单胞菌 1％， 载体为海藻粉， 经混合， 分装， 制成固体微 生物饵料添加剂。
实施例 3， 微生物饵料添加剂， 包括蜡样芽胞杆菌株和枯草芽胞杆菌混合培养物 30％、 凝结芽胞杆菌培养物 10％、 植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌混合培养物 50％和沼泽红假单 胞菌培养物 10％。
按下述方法制备各混合菌种发酵液 ：
a、 制备蜡样芽胞杆菌株和枯草芽胞杆菌混合培养物 ： 将蜡样芽胞杆菌和枯草芽胞 杆菌重量计 1 ∶ 1 比例的种子液接入已经灭菌后的培养基中， 培养基含有重量比为 5％的豆 芽汁、 0.5％的葡萄糖和 1％的蛋白胨、 余量为作为溶剂的水， 接种量为 0.3％， 在温度 32℃、 PH 值 7.2 的条件下有氧发酵 24 小时后， 放罐， 制得芽胞菌混合发酵培养物 ；
b、 制备植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌混合培养物 ： 将植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌 1 ∶ 1 比例的种子液接入已经灭菌后的培养基中， 培养基含有重量比为 2％的葡萄糖、 1％的蛋白 胨和 0.5％的酵母浸膏， 余量为作为溶剂的水， 接种量为 0.3％， 在温度 36℃下厌氧发酵后， 放罐， 获得乳杆菌混合发酵培养物 ；
c、 制备沼泽红假单胞菌培养物 ： 将沼泽红假单胞菌种子液接入已经灭菌后的培 养基中， 培养基含有重量比 5％的豆芽汁和 0.1％的氯化钠， 余量为作为溶剂的水， 在温度 25℃、 光照恒温培养 96 小时， 得到沼泽红假单胞菌培养物 ；
d、 制备凝结芽孢杆菌培养物 ： 将凝结芽孢杆菌种子液接入已经灭菌后的培养基 中， 培养基含有重量比为 1％的蔗糖、 0.01％的 MgSO47H2O、 0.005％的 FeCl3、 0.2％的 CaCO3 和 0.1％的 NaCl， pH 值为 7.0， 余量为作为溶剂的水， 接种量为 0.3％， 在 35℃、 pH 值为 7.2 培养 48 小时， 放罐， 获得凝结芽孢杆菌发酵培养物。 取蜡样芽胞杆菌株和枯草芽胞杆菌混合培养物、 凝结芽胞杆菌培养物、 植物乳杆 菌和嗜酸乳杆菌混合培养物和沼泽红假单胞菌培养物， 按以上重量比混合、 分装， 制成微生 物饵料添加剂。
实施例 4， 将实施例 3 的各菌种培养物经离心后按重量比为 1 ∶ 3 与碳酸钙载体 混合、 并在 45℃ -75℃条件下干燥的方法来制备上述菌体培养物的固体菌粉， 最终产品中 各种固体菌粉的混合和比例为 ： 蜡样芽胞杆菌株和枯草芽胞杆菌混合培养物菌粉 3％、 凝 结芽胞杆菌菌粉 1％、 植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌混合培养物菌粉 4％、 沼泽红假单胞菌菌粉 1％， 载体为海藻粉或其他对南美白对虾无害固体粉末， 经混合， 分装， 制成固体微生物饵料 添加剂。
微生物饵料添加剂的用法如下 ：
1、 饵料添加 ： 在干饵料中添加比例为 1000 ∶ 1 ； 在湿饵料中添加比例为 3000 ∶ 1.
2、 水面喷洒 ： 南美白对虾育苗室水体水面喷洒， 每立方水体用量 5ml ； 虾圈养殖水 体喷洒， 每亩米水体用量 1000ml。
将以上制备的微生物饵料添加剂应用于进行南美白对虾进行试验， 得到以下结 果：
1、 采用微生物饵料添加剂对南美白对虾进行静水式的耗氧率和排氨率实验。 在 30 天实验结束后， 投喂微生物饵料添加剂实验组的耗氧率和排氨率分别为 0.2249、 0.52292mg(g*h)-1， 而对照组的耗氧率和排氨率分别为 0.16、 0.20mg(g*h)-1。实验组耗氧 率和排氨率高于对照组， 表明实验组的南美白对虾生理代谢能力最强。
2、 采用微生物饵料添加剂对南美白对虾进行特定生长率的实验。 实验组和对照组 的南美白对虾的特定生长率分别时是 0.95 和 0.30。从特定生长率的均值可以看出投喂微 生物南美白对虾微生物饵料添加剂对促进南美白对虾生长具有明显的作用。
3、 采用微生物饵料添加剂可提高南美白对虾消化酶活性， 酶活性高可以提高刺虾 对饵料中营养成分的吸收， 从而促进其生长。
4、 本发明微生物南美白对虾微生物饵料添加剂能可提高南美白对虾的抗逆性， 增 加幼虾产量和改善养殖水体质量的作用。
微生物饵料添加剂用海参、 鲍鱼育苗养殖用法如下 ：
1、 饵料添加 ： 在于饵料中添加比例为 1000 ∶ 1 ； 在湿饵料中添加比例为 3000 ∶ 1。
2、 水面喷洒 ： 海参、 鲍鱼育苗室水体水面喷洒， 每立方水体用量 5ml。
微生物饵料添加剂用于海参、 鲍鱼育苗实施效果 ：
1、 本发明微生物饵料添加剂能可提高海参、 鲍鱼的抗逆性， 增加幼体产量和改善 养殖水体质量的作用。
2、 本发明微生物饵料添加剂能可提高海参、 鲍鱼幼苗的附着性， 减少滑板和死亡。9