一种药用组合物新的临床用途 技术领域 本发明为一种药用组合物新的临床用途， 是由胞磷胆碱盐和肌苷或腺苷形成的组 合物在制备治疗脑血管功能障碍、 颅脑损伤， 痴呆症、 帕金森综合征、 心脏疾患药物中的应 用。属于医药技术领域。
背景技术 胞磷胆碱为目前临床用量最大的神经激活剂， 是内源性合成磷脂酰胆碱的中间 体， 是构建生物膜的重要成分。中枢神经损伤后， 胞磷胆碱参与修复和再生， 起神经保护作 用； 在神经介质的转移和生物电的传导中也起重要作用。 胞磷胆碱是核苷衍生物， 也可以降 低脑血管阻力， 增加脑血流而促进脑物质代谢， 改善脑循环。另外， 他可增强脑干网状结构 上行激活系统的机能， 增强锥体系统的机能， 改善运动麻痹， 故对促进大脑功能的恢复和促 进苏醒， 有一定作用。胞磷胆碱是目前在临床上用于治疗脑疾病药物中销量较好的一种药 物。
肌苷是腺嘌呤核苷酸的中间代谢产物之一， 参与体内能量代谢及蛋白质合成。可 能直接进入细胞内， 参与糖代谢， 能提高辅酶 A 的话性， 并活化丙酮酸氧化酶， 使处于低能、 缺氧状态下的细胞继续腻利地进行代谢， 促使受损害的肝细胞修复。临床用于治疗白细胞 和血小扳减少症， 慢性迁延性肝病， 心功能不全及其他心脏疾患。 目前还有研究发现肌苷可 以通过多种途径改善缺血区能量代谢， 减少神经元的凋亡， 同时可以促进神经突触的生长， 但其具体机制尚不十分明确
胞磷胆碱和肌苷都是体内的内源性物质， 具有多种生理效应， 在临床上也广泛 的用于治疗多种疾病。由于二者独特的生理作用， 目前将二者联合应用、 提高疗效、 扩展适 用范围已经受到了普遍的关注。但目前已有的胞磷胆碱和肌苷的复方为注射剂， 只用于治 疗视神经萎缩症， 对于此复方在其他疾病方面的作用效果还没有相关的研究。
发明内容
本发明为胞磷胆碱盐和肌苷或腺苷形成的药用组合物新的临床用途， 是在制备治 疗脑血管功能障碍、 颅脑损伤， 痴呆症、 帕金森综合征、 心脏疾患药物中的应用。 脑血管功能 障碍包括缺血性脑卒中、 出血性脑卒中及其后遗症， 后遗症包括脑血管及大脑神经细胞损 伤。痴呆症包括阿尔茨海默病痴呆、 血管性痴呆引起的意识障碍、 记忆功能减退。颅脑损伤 包括急性颅脑外伤和颅脑术术后意识障碍。心脏疾患包括心肌梗塞、 肺原性心脏病。胞磷 胆碱盐包括钠盐、 钾盐及镁盐。胞磷胆碱盐的单位用量为 0.01g ～ 2.5g ； 肌苷的单位用量 为 0.005g ～ 2g。其药用组合物可制成通过静脉或肌肉注射给药的注射制剂， 包括小水针、 注射液、 冻干粉、 无菌粉， 此注射剂的用法可以是静脉滴注、 静脉注射和肌内注射。 是其药用 组合物可制成口服药用制剂， 包括片、 胶囊、 咀嚼片、 分散片、 口服液。具体实施例
本发明还提供了以下的实施例， 进一步说明本发明所述的药用组合物的作用效 果， 及其适用性。
实施例 1
药理实验 ： 复方胞磷胆碱肌苷在改善痴呆、 意识障碍、 学习记忆方面的作用
分组给药 ： 实验动物 Wistar 大鼠 50 只。实验前 30min 采用腹腔注射氢溴酸东莨 菪碱溶液的方法制备痴呆动物模型。然后将痴呆模型鼠随机分为 5 组， 每组 10 只 ： 痴呆空 白模型组 (A) ； 复方胞磷胆碱肌苷注射组 (B1)， 复方胞磷胆碱肌苷灌胃给药组 (B2)， 胞磷胆 碱组 (C)， 肌苷组 (D)。 30min 后开始用药， 复方胞磷胆碱肌苷 (B1)， 36.0mg/kg， 腹腔注射， 每 日1次； 复方胞磷胆碱肌苷 (B2)200mg( 胞磷胆碱和肌苷的配比为 3 ∶ 2) 每日 2 次灌胃， 胞 磷胆碱 (C)200mg 每日 2 次灌胃， 肌苷 (D)200mg 每日 2 次灌胃 ； 并按治疗时间又将分为 30、 60.90、 120d 四个时段研究。
实验方法 ： (1) 学习能力测试 ： 5 组小鼠均需于实验当日腹腔注射氢溴酸东莨菪 -1 碱， 剂量为 2mg·kg 。30min 后将小鼠放人跳台仪内， 然后通电， 动物受到电击后的正常反 应是跳回平台以躲避伤害性刺激， 多数动物可能再次或多次跳至铜栅上， 受到电击后又迅 速跳回平台， 如此训练 5min， 记录每只鼠达到连续 10 次正确反应之前所需的电击次数 ( 即 尝试次数 ) 表示。尝试次数超过 30 次的大鼠以 30 次计数。(2) 记忆能力测试 ： 上述达标大 鼠休息 48h 后， 用同样方法测试其记忆能力。记录每只大鼠电击 10 次中正确反应次数 ( 即 再显次数 ) 作为大鼠的记忆能力。 结果 ： 由表 1 可看出， 在大鼠学习、 记忆能力的测试中， 复方胞磷胆碱肌苷组大鼠 学习、 记忆能力改善显著好于其他治疗组 P ＜ 0.01 ～ 0.05。
表 1 治疗后在不同时间大鼠学习测试次数、 记忆能力测试反应次数对比分析 (x±s)
实施例 2
药理实验 ： 观察复方胞磷胆碱肌苷对大鼠局灶性脑缺血的保护作用
实验方法 ： 取大鼠 50 只， 随机分为 5 组， 复方胞磷胆碱肌苷 A(36.0mg/kg， 腹腔注 射 )， 复方胞磷胆碱肌苷组 B( 灌胃给药 0.1g/kg)， 胞磷胆碱组 ( 灌胃给药 0.1g/kg)， 肌苷 组 ( 灌胃给药 0.1g/kg)， 模型对照组和假手术组， 每组 10 只。各组分别于造模前给药， 1次 /d， 共给药 4 天， 给药容量均为 10ml/kg。模型对照组和假手术组给等容量的生理盐水。模 型制作方法 ： 末次给药后 1h， 用 10％水合氯醛 (350ms/kg) 腹腔注射麻醉大鼠， 仰卧固定， 常 规消毒皮肤， 颈部正中切开， 钝性分离右侧颈总动脉、 颈外动脉和颈内动脉。沿颈内动脉向 下分离出翼腭动脉， 并电凝。 用动脉夹夹闭颈总动脉， 于颈内动脉上近颈总动脉向下分离出 翼动脉， 并电凝。用动脉夹夹闭颈总动脉， 于颈内动脉上近颈总动脉分又处剪一切口， 将一 鱼线 ( 直径约 0.30mm) 沿颈内动脉缓慢插入至大脑中动脉口， 略感阻力时停止， 插入长度约 (18.0±0.5)m/n， 结扎固定鱼线。 结扎颈内动脉近心端， 取下动脉夹， 恢复颈外动脉血流。 假 手术组除不插鱼线阻断大脑中动脉外， 其余操作同手术组。
观察指标 ： (1) 神经症状评分 ： 按受损程度拟定神经症状评分等级。 无神经损伤症 状为 I 级 ； 不能完全伸展左侧前爪为 II 级 ； 不能完全伸展左侧前爪， 向左侧转圈为 III 级 ；
不能完全伸展左侧前爪， 向左侧倾倒为 IV 级 ； 不能自发行走， 意识丧失为 V 级。 按上述标准， 于造模后 24h， 采用单盲法对各组大鼠进行神经症状评分。 (2) 脑梗塞范围测定 ： 断头取脑， 去除嗅味、 小脑， 生理盐水洗净， 滤纸吸尽水分， 将大脑沿冠状面切成厚约 5mm 脑片， 置 1％ 1Trc 磷酸盐缓冲液中 37℃避光温孵 10min， 洗去染色液， 再用 10％中性甲醛溶液固定 24h， 取出称总染重， 然后切取梗塞区称重， 计算梗塞范围。梗塞范围＝梗塞区重 ×100％ / 总染 重。
结果 ：
(1) 对神经损伤症状的影响由表 2 可知， 给药后 24h， 复方胞磷胆碱肌苷组大鼠神 经损伤症状显著改善， 与模型对照组比较有显著性差异 (P ＜ 0.01)， 明显优于胞磷胆碱组 和肌苷组 (P ＜ 0.05)， 提示复方胞磷胆碱肌苷在修复神经损伤方面比单方具有更显著作 用。
表 2 对神经损伤症状的影响
P 值为各组分别与模型对照组比较 ： n ＝ 10
(2) 对梗塞范围的影响由表 3 可知， 各治疗组大鼠脑梗塞重量显著降低， 与模型对 照组比较有显著性差异。P ＜ 0.01 ～ 0.05。而且复方胞磷胆碱肌苷组降低梗塞重量和范 围的作用要明显高于两个单方组。
表 3 对梗塞范围的影响
组别 假手术组 模型对照组 胞磷胆碱肌苷 A 组 胞磷胆碱肌苷 B 组 剂量 C/mg.kg-1 生理盐水 生理盐水 0.036 0.1 梗塞重量 m/10-2g 28.22±5.46 15.33±4.10 17.23±3.24 梗塞范围％ 22.54±2.63 14.01±2.84 15.23±3.696102100698 A CN 102100701 胞磷胆碱组 肌苷组
0.1 0.1说明书18.25±3.24 21.86±4.125/9 页 16.34±3.25 18.78±3.45实施例 3
药理实验 ： 复方胞磷胆碱肌苷对小鼠帕金森模型的行为药理学影响
实验方法 ： 选取雄性 C57BL 型小黑鼠 100 只， 随机分为生理盐水 (Ns) 组、 MPTP(M) 组、 复方胞磷胆碱腺苷 +MPTP 组 (F+M)、 胞磷胆碱 +MPTP 组 (C+M)， 肌苷 +MPTP 组 (I+M)， 每 组 20 只。实验第一天 F+M 组、 C+M 组和 I+M 组分别腹腔注射复方胞磷胆碱肌苷、 胞磷胆碱 和肌苷， 第二天 F+M 组、 C+M 组和 I+M 组先分别腹腔注射复方胞磷胆碱腺苷、 胞磷胆碱和腺 苷 ( 剂量同第一天 )， 20min 后同 MPTP 组一起腹腔注射 MPTP36mg/kg， NS 组腹腔注射等容量 的生理盐水， 连续操作 7 天。
观察指标 ：
( 一 ) 潜伏期和维持时间的记录
潜伏期 ： 自注射药物完毕开始至出现震颤麻痹症状为止。 维持时间 ： 自出现震颤麻痹症状开始至震颤麻痹症状完全消失为止。
( 二 ) 震颤麻痹行为评分
方法如下 ： 与生理盐水组相似 (0 分 ) ； 偶尔出现震颤但活动自如 (1 分 ) ； 出现间 断性震颤， 活动轻微受限 (2 分 ) ； 出现频繁性震颤， 四肢僵直， 活动受限 (3 分 ) ； 出现连续震 颤， 四肢麻痹， 不能活动 (4 分 ) ； 全身麻痹而死亡 (5 分 )。腹腔注射药物 5 分钟后， 按记分 方法评定震颤麻痹程度。
结果 ： 每次给药度过潜伏期后 .M 组小鼠均表全身震颤 . 行动迟缓 . 两后肢屈蹲， 前肢向前伸展， 弓背竖毛， 进食和饮水都困难， 且随着给药次数的增加症状逐渐加重。F+M、 C+M、 I+M 组症状明显减轻， 且潜伏期长 . 维持时问短。而且 F+M 组比 C+M、 I+M 组的疗效更 为显著， P ＜ 0.05， 说明复方胞磷胆碱腺苷改善震颤麻痹的作用优于单方给药。
表 4 给药后各组出现震颤的潜伏期和维持时间的比较 (x±s)
组别 Ns 组 M组 F+M C+M I+M
7 N 20 20 20 20 20 潜伏期 ( 分 ) 2.07±0.45 3.46±0.68 3.81±0.55 3.05±0.45 维持时间 ( 分 ) 28.74±6.4 5.85±1.67 8.13±1.28 11.12±2.01. ＜ 0.001# ＜ 0.001* ＜ 0.001* ＜ 0.001* P值注： # 与生理盐水组比较， * 与 MPTP 组比较 表 5 小鼠震颤麻痹评分结果 (x±s)102100698 A CN 102100701 组别 Ns 组 M组 F+M C+M I+M
N 20 20 20 20 20说明书记分结果 3.18±0.74 2.01±0.32 2.33±0.52 2.54±0.48 P值 ＜ 0.001# ＜ 0.05* ＜ 0.05* ＜ 0.05*6/9 页注： # 与生理盐水组比较， * 与 MPTP 组比较
实施例 4
药理实验 ： 复方胞磷胆碱肌苷对兔慢性肺源性心脏病模型的心脏保护作用
健康日本大耳兔 40 只， 随机分为 4 组， 每组 10 只。A 组 ： 为正常对照组， 输入与其 他组等量的质量分数为 0.9％的氯化钠注射液。B 组 ： 为肺心病模型组， 从兔耳缘静脉注射 质量分数为 1％的三氯化铁溶液， 第 1 ～ 4 周每周注射 2 次， 每次 0.5ml ； 第 5 ～ 6 周每周 2 每次 0.75ml ； 第 7 周每周 4 次， 每次 1ml。C 组 ： 为注射用复方胞磷胆碱肌苷治疗组， 在 次， 复制肺心病模型后， 采用注射用复方胞磷胆碱肌苷 50.25mg/kg 加入 0.9 氯化钠注射液 5ml 中， 缓慢经耳缘静脉推注， 每日 1 次， 连续 28d。D 组 ： 为肌苷治疗组， 在复制肺心病模型后， 采用注射用肌苷 22.33mg/kg 加入 0.9 氯化钠注射液 5ml 中， 缓慢经耳缘静脉推注， 每日 1 次， 连续 28d。观察各组在电镜及光镜下观察心脏病理变化。
光镜观察结果 ： 模型组心肌水肿坏死 ； 肺动脉壁增厚。注射用复方胞磷胆碱肌苷 组能明显改善心肌病理变化， 减轻心肌水肿 ； 肺动脉壁胶原纤维增生减轻 ； 肌苷治疗组也 能改善上述病理变化， 但不及复方胞磷胆碱肌苷组。
电镜观察结果 ： 正常组心超微结构正常。模型组心肌纤维呈大收缩带， 线粒体固 缩。注射用复方胞磷胆碱肌苷及肌苷组均见病理变化有不同程度减轻， 且注射用复方胞磷 胆碱肌苷的效果优于肌苷。
实施例 5
药理实验 ： 注射给药的血管刺激性实验
方法 ： 将实验动物分为复方胞磷胆碱肌苷注射液给药组和 0.9％氯化钠注射液对 照组， 给药剂量为人临床用量的等效剂量， 每日给药一次， 连续 7 天， 分别以无菌操作家兔 耳缘静脉推注给药。推注后肉眼观察局部静脉血管及周围组织有无红肿， 末次推注后将动 物处死， 于注射部分近心端 1.5cm 至 3cm 处剪取耳缘， 用 10％甲醛固定， 常规组织切片， 观察 有无血栓形成， 内皮损伤及其它病理变化。
结果 ： 给药期间及末次用药 24 小时后， 肉眼观察各组动物耳缘静脉及周围组织无 红肿现象， 组织切片检查可见兔耳血管完整， 未见内皮损伤， 周围组织无水肿及炎性细胞浸 润， 与对照组比较无明显差异。 结果表明， 复方胞磷胆碱肌苷注射液对家兔血管无明显刺激 作用， 亦未引起血管周围组织明显病变。
实施例 6药理实验 ： 注射及口服给药后药代动力学情况 大鼠注射及口服给药后， 不同时间血药浓度变化情况， 见附图 1、 2. 从图中可以看 胞磷胆碱肌苷， 无论口服还是注射， 在体内均能较好的分布， 维持一定得血药浓 实施例 7 ： 胞磷胆碱钠和肌苷片 ： 以如下重量配比的原料制成 1000 粒胞磷胆碱钠和肌苷片。原辅料 胞磷胆碱钠 肌苷 预胶化淀粉 乳糖 微晶纤维素 羧甲基淀粉钠 硬脂酸镁 纯化水 用量 150g 100g 40g 100g 100g 7g 3g 适量出复方
度。
制备工艺 ：
胞磷胆碱钠和肌苷原料与辅料分别过 80 目筛， 备用。
取胞磷胆碱钠和肌苷与预胶化淀粉、 乳糖、 微晶纤维素充分混合均匀， 用纯化水制 软材， 18 目筛制粒， 干燥， 整粒。
3. 加入羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁充分混合均匀， 压片， 即得。
实施例 8 ：
胞磷胆碱钠和肌苷口服溶液
处方 ：
制备方法 ：
取纯化水 800ml， 加入处方量的胞磷胆碱钠和肌苷， 搅拌溶解， 加入处方量的维 生素 C、 三氯蔗糖、 香精和苯甲酸钠， 使溶解， 用枸橼酸溶液和枸橼酸钠溶液调节 pH 值为 5.0-7.5， 加纯化水至总量， 中间体检测。中间体检测合格后， 滤过， 分装于口服液瓶中， 封 口， 即可。
实施例 9 ： 胞磷胆碱钠和肌苷水针
处方 ：
制备方法 ：
取注射用水 3000ml， 加入乙二胺四乙酸钠钙搅拌溶解， 加入处方量的胞磷胆碱钠 和肌苷， 搅拌溶解， 加入处方量的亚硫酸氢钠， 使溶解， 用盐酸溶液与氢氧化钠溶液调节 pH 值为 5.5-7.5， 加适量针用活性炭， 将药液加热至约 50℃ -60℃， 搅拌 20min， 过滤脱炭后， 加 注射用水至总量， 中间体检测。中间体检测合格后， 再采用 0.22μm 微孔滤膜精滤， 灌装于 安瓿瓶中， 每瓶 5ml 或 10ml， 封口， 湿热灭菌， 即可。
实施例 10 ： 胞磷胆碱钠和肌苷冻干粉针 处方 ：制备方法 ：
取注射用水 1000ml， 加入处方量的胞磷胆碱钠和肌苷搅拌溶解， 用盐酸溶液和氢 氧化钠溶液调 pH 值 5.5-7.5， 按配制量加适量针用活性炭， 将药液加热至约 50 ℃ -60 ℃， 搅拌 20min， 过滤脱炭后， 加注射用水至总量， 中间体检测。中间体检测合格后， 再采用 0.22μm 微孔滤膜精滤， 灌装于西林瓶中， 将西林瓶置于冷冻干燥机内， 冷冻干燥。
冷冻干燥条件为 ： -40℃预冻 4 小时， 第一阶段升温至 -10℃， 时间 3 小时， 真空干 燥 22 小时， 第二阶段升温在 1 小时内从 -10℃～ 30℃， 并保温 4 个小时。
冷冻干燥后， 压橡胶塞， 轧铝塑盖。
附图说明
附图 1， 大鼠注射给药后， 不同时间血药浓度变化情况 附图 2， 大鼠口服给药后， 不同时间血药浓度变化情况