作为趋化因子受体CCR4调节剂的新N-（氟-吡嗪基）-苯磺酰胺 【技术领域】
本发明涉及N-(氟-吡嗪基)-苯磺酰胺，在其制备中所用的方法和中间体，含有它们的药物组合物及其在治疗中的用途。
背景技术
趋化因子(Chemokines)在各种疾病和病症的免疫和炎性反应中起着重要作用，这些疾病和病症包括哮喘(asthma)和变应性疾病(allergic diseases)，及自身免疫病变如类风湿性关节炎和动脉粥样硬化。这些被分泌出的小分子属于不断增加的8-14kDa蛋白超家族，该家族特征为保守的4个半胱氨酸基序。目前，趋化因子超家族包括显示出特征性结构基序的三类家族，Cys-X-Cys(C-X-C)、Cys-Cys(C-C)和Cys-X3-Cys(C-X3-C)。C-X-C和C-C家族具有序列相似性并根据半胱氨酸残基NH-近端对之间的单个氨基酸插入区分的。C-X3-C家族是根据半胱氨酸残基NH-近端对之间的三个氨基酸插入来与其他两个家族区分的。
C-X-C趋化因子包括嗜中性粒细胞的几种强效的化学引诱物和活化剂，例如白细胞介素-8(IL-8)和嗜中性粒细胞活化肽2(NAP-2)。
C-C趋化因子包括单核细胞和淋巴细胞(但不包括嗜中性粒细胞)的强效化学引诱物。实例包括人单核细胞趋化蛋白1-3(MCP-1、MCP-2和MCP-3)、RANTES(调节活性、正常T表达和分泌)、嗜酸细胞活化趋化因子(eotaxin)和巨噬细胞炎性蛋白1α和1β(MIP-1α和MIP-1β)、胸腺和活化调节的趋化因子(TARC，CCL17)和巨噬细胞衍生的趋化因子(MDC，CCL22)。C-X3-C(亦已知为CXXXC趋化分子)是中枢神经系统的小胶质细胞(microglia)及单核细胞、T细胞、NK细胞和肥大细胞的强效化学引诱物和活化剂。
研究表明趋化因子的作用是通过G蛋白-偶联受体亚家族介导的，其中这些受体称为CCR1、CCR2、CCR2A、CCR2B、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10和CCR11(C-C家族)；CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4和CXCR5(C-X-C家族)和CX3CR1(C-X3-C家族)。由于调节这些受体的药物可用于治疗例如上述提及的那些疾病和病症，因此这些受体体现了良好的药物开发目标。在CCRR4受体调节方面有效的药物对炎性疾病治疗用途而言是特别相关的。
WO 03/051870和WO 03/059893公开了一系列氨磺酰类化合物，该化合物被认为对治疗多种疾病有效的。现在，意料不到地发现，WO 03/059893一般性公开的化合物中一些窄类化合物显示出有益的药学性质。例如，本发明化合物除高效之外也显示了与人血浆的低血浆蛋白结合，这增加了体内有效性。
本发明提供了式(I)的化合物或其药用盐。
其中
R1选自甲基、氯和氟；
R2选自甲基、氯和氟；
R3为甲氧基；
R4和R5之一为氟，R4和R5中的另一个选自氢和羟甲基。
式(I)的合适药用盐包括金属盐，如碱金属盐(例如钠盐或钾盐)或碱土金属盐(例如镁盐或钙盐)，或有机胺盐例如氨、三乙胺、哌啶、哌嗪或二苄胺。
应该理解，某些本发明化合物或其药用盐可以以溶剂化，例如水合形式存在，以及非溶剂化形式存在。应该理解，本发明包括所有这样的溶剂化形式。本发明也包括式(I)化合物的任何互变异构体，或其混合物。
在本发明的一个实施方案中，R1选自氯和氟，R2选自氯和氟。
在本发明的一个实施方案中，R1为氯，且R2为氯.
在本发明的一个实施方案中，R4为氟，且R5选自氢和羟甲基。
在本发明的一个实施方案中，R5为氟，且R4选自氢和羟甲基。
在本发明的一个实施方案中，R4和R5之一为氟，R4和R5中的另一个为氢。
在本发明的一个实施方案中，R4和R5之一为氟，R4和R5中的另一个为羟甲基。
在本发明的一个实施方案中，R4为氢，且R5为氟。
在本发明的一个实施方案中，R4为羟甲基，且R5为氟。
在本发明的一个实施方案中，R4为氟，且R5为氢。
在本发明的一个实施方案中，R4为氟，且R5为羟甲基。
在本发明的一个实施方案中，式(I)的化合物选自
2-氯-3-氟-N-(5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺，
2，3-二氯-N-(5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺，
2，3-二氯-N-(6-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺，
2，3-二氯-N-[6-氟-5-(羟甲基)-3-甲氧基吡嗪-2-基]-苯磺酰胺，
3-氯-2-氟-N-(5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺，
2，3-二氯-N-[5-氟-6-(羟甲基)-3-甲氧基吡嗪-2-基]-苯磺酰胺，
3-氯-N-(5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-2-甲基-苯磺酰胺，
或其药用盐。
药物化合物可在体内代谢形成其他化合物。对于N-吡嗪基-苯磺酰胺，可在体内形成的一种代谢产物的类型为氨基吡嗪的衍生物。一些氨基吡嗪衍生物表现出诱变性(mutagenicity)，即根据Mutation Res.1983；113：173-215中所述的Maron和Ames试验操作它们为AMES+ve。本发明化合物的另一个优点是它们的氨基吡嗪衍生物是非诱变的。
本发明还提供了制备式(I)化合物或其药用盐的方法，其包括
(a)使式(II)化合物与亚硝酸盐在氟化剂的存在下反应，
在式(II)化合物中，R1、R2和R3如式(I)所定义且R6和R7之一为氢，R6和R7中的另一个为NH2，
或
(b)使式(III)化合物与氢气在钯催化剂的存在下反应，
在式(III)化合物中，R1、R2和R3如式(I)所定义，且R8和R9之一为氟，R8和R9中的另一个为溴，
或
(c)当R4和R5之一为羟甲基时，使如(b)中所述的式(III)化合物与一氧化碳在钯催化剂的存在下反应，并随后将得到的酸(或其C1-4烷基酯)用合适的还原剂处理，或
(d)当R4和R5之一为氟，R4和R5中另一个为氢时，使式(IV)化合物与式(V)化合物反应，
在式(IV)化合物中，R3如式(I)中所定义，且R10和R11之一为氟，R10和R11中另一个为氢，
在式(V)化合物中，R1和R2如式(I)中定义
或
(e)当R2为氟且R1为氯时，使式(VI)化合物与六氯乙烷在氨基锂或烷基锂碱(lithium amide or alkyl lithium base)的存在下反应，
在式(VI)化合物中，R3、R4和R5如式(I)中所定义，
以及任选地在(a)、(b)、(c)、(d)或(e)之后进行以下的一个或多个操作：
●将所述化合物转化为本发明的另一化合物或
●形成所述化合物的药用盐。
本领域技术人员应该理解的是，式(II)化合物中位于R6或R7位的氢原子在方法(a)中不经历转化，并且将成为所生成的式(I)化合物中R4或R5位的氢原子。类似地，在式(III)化合物中位于R8或R9位的氟原子在方法(b)中不经历转化，并且将成为所生成的式(I)化合物中R4或R5位的氟原子。在式(IV)化合物中，R10和R11位的取代基在方法(d)中不经历转化，并且它们直接对应于所生成的式(I)化合物中R4或R5位的取代基。
在方法(a)中，反应可在溶剂如乙腈中，在-10℃至50℃的温度范围进行。亚硝酸盐可为亚硝酸钠(以水溶液或固体的形式)及氟化剂可为例如四氟硼酸或氟化氢/吡啶。
在方法(b)中，反应可在适当的溶剂如乙酸乙酯中，在氢气压力，例如1巴的氢气压力下，在适当的碱如三乙胺和钯催化剂如5％钯/碳的存在下，在0至50℃的温度范围进行。
在方法(c)中，开始的反应可在适当的溶剂如甲醇、乙醇中，在一氧化碳压力，例如3-7巴的一氧化碳压力下，在适当的叔胺碱如三乙胺或二异丙基乙胺和适当的钯催化剂如[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物的存在下，及70至100℃的温度范围进行。当反应在醇类溶剂的存在下进行时得到的酸将转化为相应的烷基酯，例如，当甲醇为溶剂时将形成甲酯。反应还可在溶剂如二甲基甲酰胺中进行，在这种情况下将得到酸。随后将烷基酯还原成醇的反应可在适当的溶剂如四氢呋喃中，使用适当的还原剂如三乙基硼氢化锂在0至30℃的温度范围进行。将酸还原成醇的反应可用常规的化学反应实现。
在方法(d)中，反应可在适当的溶剂如1，2-二甲氧基乙烷或四氢呋喃中，在0至50℃的温度范围，在碱如NaH或叔丁醇钾作用下进行。
在方法(e)中，反应可在-78至0℃温度范围，在适当的溶剂如四氢呋喃或己烷或它们的混合物中，经用适当的碱如二异丙基氨基锂处理，随后加入六氯乙烷进行。
式(II)、(III)或(V)的化合物为市售的，为文献中已知的或可用已知技术制备的。这些化合物的某些制备方法的实例在下文实施例中给出。其它实例可经类似方法制备。
例如，式(II)化合物(其中R6为NH2和R7为氢)可根据方案1制备，其中R1、R2和R3如式(I)中定义。
方案1
根据方案1，如下所述将式(VII)化合物转化为式(VIII)化合物：使式(VII)化合物与发烟硝酸在适当的溶剂如乙酸中，在50至100℃的温度反应，或使式(VII)化合物与四氟硼酸硝鎓(nitronium tetrafluoroborate)在适当的溶剂如乙腈或环丁砜中，在0至50℃的温度反应。随后，如下所述将式(VIII)化合物转化为式(II)化合物(其中R6为NH2且R7为氢)：在适当的溶剂如乙酸或乙酸/乙酸乙酯的混合物中，利用适当的氢化催化剂如5-10％钯/碳，在20至70℃的温度对式(VIII)化合物进行氢化(1-3巴)，或在适当的溶剂如含有浓盐酸的乙酸乙酯中，在50至100℃温度加热，使式(VIII)化合物与金属如铁粉反应。式(VII)化合物可用根据或类似于WO03/059893所述的那些方法制备。
或者，式(II)化合物可根据方案2制备，其中R1、R2和R3如式(I)中所定义。
方案2
根据方案2，如下所述将式(IX)化合物转化为式(X)化合物：使式(IX)化合物与一氧化碳(3-7巴)在适当的溶剂如甲醇中在适当的叔胺碱如三乙胺或二异丙基乙胺，以及适当的钯催化剂如[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷的存在下，在60至100℃的温度反应，之后对所得的甲酯进行水解得到式(X)化合物。如下所述将式(X)化合物转化为氨基甲酸酯(XI)：使式(X)化合物与二苯基磷酰基叠氮化物和对甲氧基苄基醇或叔丁醇，在适当的胺类碱如三乙胺存在下在适当的溶剂如四氢呋喃中加热回流反应。氨基甲酸酯(XI)经适当的酸如HCl(如4M)的二噁烷溶液处理转化为式(II)化合物。式(IX)化合物可经根据或类似于WO03/059893中所述的那些方法来制备。
式(III)化合物可以，例如，如方案3所述制备，其中R1、R2和R3如式(I)中所定义。
方案3
根据方案3，如下所述将式(XII)化合物转化为式(XIII)化合物(其中R12和R13之一为NO2，R12和R13中另一个为溴)：使式(XII)化合物与发烟硝酸在适当的溶剂如乙酸中，在50至100℃的温度反应，或使式(XII)化合物与四氟硼酸硝鎓在适当的溶剂如乙腈或环丁砜中，在0至50℃的温度反应。随后，如下所述将式(XIII)化合物转化为式(XIV)化合物(其中R14和R15之一为NH2，R14和R15中另一个为溴)：利用适当的氢化催化剂如5-10％钯/碳，在20至70℃的温度，在适当的溶剂如乙酸或乙酸/乙酸乙酯混合物中对使式(XIII)化合物进行氢化(1-3巴压力)，或在适当的溶剂如含有浓盐酸的乙酸乙酯中，在50至100℃的温度加热，用金属如铁粉处理式(XIII)化合物。在类似于上述的方法(a)中所述的方法中，使式(XIV)化合物与亚硝酸盐在氟化剂的存在下反应，由此转化为(III)。式(XII)化合物可根据或类似于WO03/059893所述的那些方法制备。
式(IV)的化合物(其中R10为氟，R11为氢)可如方案4所述来制备。
方案4
根据方案4，如下所述将式(XV)化合物转化为式(XVI)化合物：使式(XV)化合物与丙酮基丙酮在对甲苯磺酸的存在下，在适当的溶剂如甲苯中，在80至110℃的温度反应。然后，将式(XVI)化合物如下转化为式(XVII)化合物：使式(XVI)化合物与氟化钾在18-冠-6(18-crown-6)存在下在适当的溶剂如2-甲氧基乙基醚中，在100至130℃的温度反应。用盐酸水溶液和适当的溶剂如二噁烷在40至60℃温度处理式(XVII)化合物得到式(XVIII)化合物，式(XVIII)化合物与甲醇钠的甲醇溶液在0至30℃的温度反应转化为式(IV)化合物(其中R10为氟，且R11为氢)。式(IV)化合物(其中R11为氟，且R10为氢)可经类似的化学反应制备。
中间体式(IV)化合物以前没有制备过。因此，本发明另一方面提供了式(IV)的化合物，
其中R3为甲氧基；R10和R11之一为氟，且R10和R11中另一个为氢。在本发明的一个实施方案中R10为氟，且R11为氢。在本发明的另一个实施方案中R11为氟，且R10为氢。
式(V)化合物在文献中已知或可用已知方法制备。
式(VI)可以，例如用上文所述的制备式(I)化合物的那些类似方法来制备。
本领域技术人员应该理解，在本发明方法中起始反应物或中间体化合物中的某些官能团如羟基、羧基或氨基可能需要用保护基保护。因此，式(I)化合物的制备某一阶段可能包含加入/除去一个或多个保护基。官能团的保护和脱保护描述于′Protective Groups in Organic Synthesis′，2nd edition，T.W.Greene and P.G.M.Wuts，Wiley-Interscience(1991)and‘Protecting Groups’，P.J.Kocienski，Georg Thieme Verlag(1994)中。
本发明化合物或其药用盐具有作为药物的活性，特别是作为趋化因子受体(尤其是CCR4)调节剂的活性。可用该化合物治疗的疾病和病症包括：
1.呼吸道：气道阻塞性疾病，包括哮喘，包括支气管哮喘、变应性哮喘、内源性哮喘、外源性哮喘、运动诱发性哮喘、药物诱发性(包括阿司匹林和NSAID诱发的)哮喘和粉尘诱发性哮喘，间歇性哮喘和持续性哮喘，以及各种严重度的哮喘，及其它原因引起的气道高反应性；慢性阻塞性肺病(COPD)；支气管炎，包括传染性支气管炎和嗜酸性支气管炎；肺气肿；支气管扩张；囊性纤维化；结节病；农民肺及相关疾病；超敏感性肺炎；肺纤维化，包括隐原性纤维化肺泡炎、特发性间质性肺炎、抗肿瘤治疗和慢性感染(包括结核病和曲霉病及其它真菌感染)并发的纤维化；肺移植的并发症；肺血管的血管炎和血栓形成疾病及肺动脉高压；镇咳活性，包括治疗与气道炎症和分泌情况相关的慢性咳嗽及医源性咳嗽；急性鼻炎和慢性鼻炎，包括药物性鼻炎和血管运动性鼻炎；常年性(perennial)变应性鼻炎和季节性变应性鼻炎，包括神经性鼻炎(花粉症)；鼻息肉病；急性病毒感染，包括普通感冒和由呼吸道合胞病毒、流行性感冒、冠状病毒(包括SARS)和腺病毒引起的感染；
2.骨和关节：与骨关节炎/骨关节病相关或包括骨关节炎/骨关节病的关节炎，包括原发性和继发性关节炎，例如先天性髋关节发育不良；颈和腰脊椎炎及腰背痛和颈部疼痛；骨质疏松；类风湿性关节炎和斯蒂尔病(Still’sdisease)；血清阴性脊柱关节病，包括强直性脊柱炎、牛皮癣性关节炎、反应性关节炎和未分化脊柱关节病；脓毒性关节炎和其它感染相关的关节病和骨疾病，例如结核病，包括波特病(Potts’disease)和蓬塞综合征(Poncet’ssyndrome)；晶体诱发的急性和慢性滑膜炎，包括尿酸盐沉积病、焦磷酸钙沉积病和钙磷灰石相关的腱、粘液囊和滑膜炎症；贝切特病(Behcet’sdisease)；原发性和继发性斯耶格伦综合征(Sjogren’s syndrome)；全身性硬化和局限性硬皮病；系统性红斑狼疮、混合性结缔组织病和未分化结缔组织病；炎性肌病，包括皮肌炎和多肌炎；风湿性多肌痛；幼年型关节炎，包括分布在任何关节的特发性炎性关节炎及相关综合征和风湿热及其全身性并发症；血管炎(vasculitis)，包括巨细胞性动脉炎、高安动脉炎(Takayasu’sarteritis)、丘-施综合征(Churg-Strauss syndrome)、结节性多动脉炎、显微镜性多动脉炎和与病毒感染、超敏反应、冷球蛋白和异蛋白相关的血管炎；腰背痛；家族性地中海热、穆-韦综合征(Muckle-Wells syndrome)和家族性爱尔兰热(Familial Hibernian Fever)、菊池病(Kikuchi disease)；药物诱发性关节痛、腱炎和肌病；
3.由损伤(例如运动损伤)或疾病引起的疼痛和结缔组织再造的肌肉骨骼疾病：关节炎(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、痛风或晶体性关节病)、其它关节疾病(例如椎间盘变性或颞下颌关节变性)、骨再造疾病(例如骨质疏松、佩吉特病(Paget’s disease)或骨坏死)、多软骨炎、硬皮病、混合性结缔组织病、脊椎关节病或牙周病(例如牙周炎)；
4.皮肤：牛皮癣、特应性皮炎、接触性皮炎或其它湿疹性皮肤病及迟发型超敏反应；植物性和光照性皮炎；脂溢性皮炎、疱疹样皮炎、扁平苔癣、萎缩性硬化性苔癣、坏疽性脓皮症、皮肤结节病、盘状红斑狼疮、天疱疮、类天疱疮、大疱性表皮松解、荨麻疹、血管性水肿、血管炎、中毒性红斑、皮肤嗜酸粒细胞增多、斑秃、男性型脱发、斯威特综合征(Sweet’ssyndrome)、韦-克综合征(Weber-Christian syndrome)、多形性红斑；蜂窝组织炎，包括传染性和非传染性蜂窝组织炎；脂膜炎；皮肤淋巴瘤、非黑素瘤皮肤癌和其它发育不良性损伤；药物诱发的疾病，包括固定性药疹；
5.眼：睑炎；结膜炎，包括常年性变应性结膜炎或春季变应性结膜炎；虹膜炎；前色素层炎和后色素层炎；脉络膜炎；自身免疫；影响视网膜的变性或炎性疾病；眼炎，包括交感性眼炎；结节病；感染，包括病毒、真菌和细菌感染；
6.胃肠道：舌炎、龈炎、牙周炎；食管炎，包括返流；嗜酸性胃肠炎、肥大细胞增多、克罗恩病(Crohn’s disease)、结肠炎包括溃疡性结肠炎、直肠炎、肛门瘙痒；腹部疾病、肠应激综合征，以及具有远离肠作用的食物相关的变态反应(例如偏头痛、鼻炎或湿疹)；
7.腹部：肝炎，包括自身免疫性、酒精性和病毒性肝炎；肝纤维化和硬化；胆囊炎；胰腺炎，包括急性和慢性胰腺炎；
8.生殖泌尿系统：肾炎，包括间质性肾炎和肾小球性肾炎；肾病综合征；膀胱炎，包括急性和慢性(间质性)膀胱炎和杭纳溃疡(Hunner’s ulcer)；急性和慢性尿道炎、前列腺炎、附睾炎、卵巢炎和输卵管炎；女阴阴道炎；佩伦涅病(Peyronie’s disease)；勃起机能障碍(男性和女性)；
9.同种异体移植物排斥：在例如肾脏、心脏、肝脏、肺脏、骨髓、皮肤或角膜移植后或在输血后出现的急性和慢性同种异体移植物排斥；或慢性移植物抗宿主病；
10.CNS：阿耳茨海默病(Alzheimer’s disease)和其它痴呆疾病包括CJD和nvCJD；淀粉样变性病；多发性硬化和其它脱髓鞘综合征；脑动脉粥样硬化和血管炎；颞动脉炎；重症肌无力；急性和慢性疼痛(急性、间歇性或持续性疼痛，无论是中枢源性的还是外周源性的)，包括内脏痛、头痛、偏头痛、三叉神经痛、不典型面痛、关节和骨痛、由癌症和肿瘤侵入引起的疼痛、神经性疼痛综合征包括糖尿病性、疱疹后和HIV相关的神经病；神经性肉样瘤病；恶性、感染性或自身免疫性过程的中枢和外周神经系统并发症；
11.其它自身免疫性和变态反应性疾病，包括桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis)、格雷夫斯病(Graves’disease)、阿狄森病(Addison’sdisease)、糖尿病、特发性血小板减少性紫癜、嗜酸性筋膜炎、高IgE综合征、抗磷脂综合征；
12.其它带有炎性或免疫性组成的疾病，包括获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、麻风病、塞扎里综合征(Sezary syndrome)和瘤外综合征；
13.心血管：影响冠脉和外周循环的动脉粥样硬化；心包炎；心肌炎；炎性和自身免疫性心肌病，包括心肌结节病；缺血性再灌注损伤；心内膜炎、心瓣炎和主动脉炎，包括传染性(例如梅毒性)的；血管炎；近端和外周静脉的疾病，包括静脉炎和血栓形成包括深静脉血栓形成及静脉曲张的并发症；
14.肿瘤：对一般癌症的治疗，包括前列腺、乳腺、肺、卵巢、胰腺、肠和结肠、胃、皮肤和脑肿瘤及影响骨髓(包括白血病)和淋巴增生系统(例如何杰金(Hodgkin’s)和非何杰金淋巴瘤)的恶性肿瘤；包括对转移性疾病和肿瘤复发及瘤外综合征的预防和治疗；和
15.胃肠道：腹部疾病、直肠炎、嗜酸性胃肠炎、肥大细胞增生、克罗恩病、溃疡性结肠炎、显微镜性结肠炎、不确定性结肠炎、肠应激病、肠应激综合征、非炎性腹泻、具有远离肠作用的食物相关的变态反应(例如偏头痛、鼻炎或湿疹)。
因此，本发明进一步提供上文所定义的式(I)化合物或其药用盐，其用于治疗。
本发明化合物通过调节CC趋化因子受体亚家族的活性，特别是通过调节CCR4受体的活性，从而可以用于治疗疾病。可用本发明化合物治疗的具体病症有哮喘、鼻炎和炎性皮肤病症(inflammatory skin disorders)、TARC，MDC或CCR4水平升高的疾病。
在另一个方面，本发明提供上文所定义的式(I)化合物或其药用盐在制备用于治疗的药物中的用途。
在另一个方面，本发明提供上文所定义的式(I)化合物或其药用盐在制备用于治疗对趋化因子受体活性，特别是CCR4活性的调节是有益的人类疾病或病症的药物中的用途。
在另一方面，本发明提供了如上定义的式(I)化合物或其药用盐在制备用于治疗对CCR4受体的调节是有益的人类疾病或病症的药物中的用途。
在另一方面，本发明提供了如上定义的式(I)化合物或其药用盐在制备用于治疗哮喘的药物中的用途。
在另一方面，本发明提供了如上定义的式(I)化合物或其药用盐在制备用于治疗慢性阻塞性肺病的药物中的用途。
在本说明书的上下文中，除非特别指出相反的意思，术语“治疗”也包括“预防”。术语“治疗的”和“治疗地”也应该相应地理解。
本发明进一步提供了治疗趋化因子介导的疾病的方法，其中趋化因子与趋化因子受体(特别是CCR4)受体结合，所述的方法包括将如上定义的治疗有效量的式(I)化合物或其药用盐给药于患者。
本发明进一步提供了治疗CCR4受体介导的疾病的方法，包括将如上定义的治疗有效量的式(I)化合物或其药用盐给药于患者。
本发明还提供了治疗患有呼吸系统疾病，如哮喘和鼻炎，特别是哮喘或者面临所述疾病危险的患者中所述疾病的方法，所述的方法包括将如上定义的治疗有效量的式(I)化合物或其药用盐给药于患者。
对于上述治疗用途，给药剂量当然随所用的化合物、给药模式、期望的治疗和适应症的不同而变化。
式(I)化合物或其药用盐可单独使用，但通常以药物组合物的形式给药，其中式(I)化合物/盐(有效成分)与药用辅料、稀释剂或载体联合。基于给药模式，药物组合物可优选地包括0.05至99％w(重量百分比)，更优选为0.05至80％w，仍然更优选为0.10至70％w，甚至更优选为0.10至50％w的活性成分，所有重量百分比都基于总组合物。
本发明也提供一种药物组合物，其包括上文所定义的式(I)化合物或其药用盐以及结合有药用辅料、稀释剂或载体。
本发明还提供制备本发明药物组合物的方法，所述方法包括混合上文所定义的式(I)化合物或其药用盐与可药用辅料、稀释剂或载体。
药物组合物可以如下形式来局部给药(例如给药至肺和/或气道或给药至皮肤)：溶液剂、混悬剂、七氟代烷气雾剂和干粉制剂；或药物组合物可通过口服给药例如以如下形式来全身给药：片剂、胶囊剂、糖浆剂、散剂或颗粒剂；或药物组合物可通过非经肠给药以溶液剂或混悬剂的形式来给药；或药物组合物可通过皮下给药来给药；或药物组合物可通过直肠给药以栓剂的形式来给药；或药物组合物可经皮给药。通常将本发明化合物口服给药。
本发明进一步涉及联合治疗，其中本发明的化合物或其药用盐或包含本发明化合物的药物组合物或制剂与另一种治疗剂或多种治疗剂同时或先后给药，或与另一种治疗剂或多种治疗剂一起作为组合制剂来给药，用于治疗所列出病症中的一种或多种。
具体地，为了治疗炎症疾病，例如(但不局限于)类风湿性关节炎、骨关节炎、哮喘、变应性鼻炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、牛皮癣和炎性肠病，可将本发明的化合物与以下药物组合：
非甾类抗炎药(在下文中为NSAIDs)，包括无论局部应用还是全身应用的非选择性环氧化酶COX-1/COX-2抑制剂(例如吡罗昔康；双氯芬酸；丙酸类，例如萘普生、氟比洛芬、非诺洛芬、酮洛芬和布洛芬；芬那酸类，例如甲芬那酸、吲哚美辛、舒林酸、阿扎丙宗(azapropazone)；吡唑酮类，例如保泰松；水杨酸盐(酯)，例如阿司匹林)；选择性COX-2抑制剂(例如美洛昔康、塞来考昔、罗非考昔、伐地考昔、鲁马考昔(lumarocoxib)、帕瑞考昔和艾托考昔)；抑制环氧化酶的一氧化氮供体(CINODs)；糖皮质激素(无论通过局部、口服、肌内、静脉内途径还是通过关节内途径来给药)；甲氨蝶呤；来氟米特；羟氯喹；d-青霉胺；金诺芬或其它非经肠或口服金制剂；镇痛药；双醋瑞因(diacerein)；关节内治疗剂，例如透明质酸衍生物；和营养补剂，例如葡糖胺。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：细胞因子或细胞因子功能的激动剂或拮抗剂(包括作用于细胞因子信号传导路径的药物，例如SOCS系统的调节剂)，包括α-、β-和γ-干扰素；I型胰岛素样生长因子(IGF-1)；白介素(IL)，包括IL1至17和白介素拮抗剂或抑制剂(例如阿那白滞素)；α肿瘤坏死因子(TNF-α)抑制剂，例如抗TNF单克隆抗体(例如英夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adalimumab)和CDP-870)和TNF受体拮抗剂(包括免疫球蛋白分子(例如依那西普)和低分子量药物(例如己酮可可碱(pentoxyfylline)))。
另外，本发明涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：靶向于B淋巴细胞的单克隆抗体(例如CD20(利妥昔单抗(rituximab))、MRA-aIL16R)和靶向于T淋巴细胞的单克隆抗体(CTLA4-Ig、HuMax I1-15)。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：趋化因子受体功能调节剂，例如CCR1、CCR2、CCR2A、CCR2B、CCR3、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10和CCR11(C-C家族)的拮抗剂；CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4和CXCR5(C-X-C家族)的拮抗剂；和CX3CR1(C-X3-C家族)的拮抗剂。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：基质金属蛋白酶(MMPs)即溶基质蛋白酶(stromelysin)、胶原酶和明胶酶及蛋白聚糖酶(aggrecanase)(尤其是胶原酶-1(MMP-1)、胶原酶-2(MMP-8)、胶原酶-3(MMP-13)、溶基质蛋白酶-1(MMP-3)、溶基质蛋白酶-2(MMP-10)和溶基质蛋白酶-3(MMP-11)及MMP-9和MMP-12)的抑制剂，包括药物，例如多西环素。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：白三烯生物合成抑制剂、5-脂肪氧化酶(5-LO)抑制剂或5-脂肪氧化酶活化蛋白(FLAP)拮抗剂，例如齐留通；ABT-761；芬留顿；替泊沙林；Abbott-79175；Abbott-85761；N-(5-取代的)-噻吩-2-烷基磺酰胺；2，6-二-叔丁基苯酚腙；甲氧基四氢吡喃，例如Zeneca ZD-2138；化合物SB-210661；吡啶基取代的2-氰基萘化合物，例如L-739,010；2-氰基喹啉化合物，例如L-746,530；或吲哚或喹啉化合物，例如MK-591、MK-886和BAY×1005。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：白三烯(LT)B4、LTC4、LTD4和LTE4的受体拮抗剂，选自吩噻嗪-3-基化合物，例如L-651,392；脒基化合物，例如CGS-25019c；苯并噁胺(benzoxalamine)，例如昂唑司特；苯甲脒(benzenecarboximidamide)，例如BIIL 284/260；和化合物，例如扎鲁司特、阿鲁司特、孟鲁司特、普仑司特、维鲁司特(MK-679)、RG-12525、Ro-245913、伊拉司特(CGP 45715A)和BAY×7195。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：磷酸二酯酶(PDE)抑制剂，例如甲基黄嘌呤(methylxanthanine)，包括茶碱和氨茶碱；选择性PDE同工酶抑制剂，包括PDE4抑制剂、同工型PDE4D抑制剂或PDE5抑制剂。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：组胺1型受体拮抗剂，例如西替利嗪、氯雷他定、地氯雷他定、非索非那定、阿伐斯汀、特非那定、阿司咪唑、氮斯汀、左卡巴斯汀、氯苯那敏、异丙嗪、赛克力嗪(cyclizine)或咪唑斯汀；口服、局部或非经肠给药。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：质子泵抑制剂(例如奥美拉唑)或胃保护性组胺2型受体拮抗剂。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：组胺4型受体拮抗剂。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：α1/α2肾上腺素受体激动剂、血管收缩药、拟交感神经药，例如丙己君(propylhexedrine)、苯福林、苯丙醇胺、麻黄碱、伪麻黄碱、盐酸萘甲唑啉、盐酸羟甲唑啉、盐酸四氢唑啉、盐酸木甲唑啉、盐酸曲马唑啉或盐酸乙基去甲肾上腺素。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：抗胆碱能药，包括毒蕈碱受体(M1、M2和M3)拮抗剂，例如阿托品、东莨菪碱、格隆铵(glycopyrrrolate)、异丙托溴铵(ipratropium bromide)、噻托溴铵(tiotropiumbromide)、氧托溴铵(oxitropium bromide)、哌仑西平(pirenzepine)或替仑西平(telenzepine)。
本发明还涉及本发明化合物或可药用盐与以下物质的组合：β肾上腺素受体(包括β受体亚型1-4)激动剂，例如异丙肾上腺素、沙丁胺醇(salbutamol)、福莫特罗、沙美特罗(salmeterol)、特布他林、奥西那林、甲磺酸比托特罗或吡布特罗或它们的手性对映异构体。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：色原酮，例如色甘酸钠或奈多罗米钠。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：糖皮质激素，例如氟尼缩松、曲安奈德、二丙酸倍氯美松、布地奈德、丙酸氟替卡松、环索奈德或糠酸莫米松。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：调节核激素受体(例如PPARs)的药物。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：免疫球蛋白(Ig)或Ig制品；或调节Ig功能的拮抗剂或抗体，例如抗IgE(例如奥马珠单抗(omalizumab))。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：另一种全身或局部应用的抗炎药，例如沙利度胺(thalidomide)或其衍生物、类维生素A、地蒽酚(dithranol)或卡泊三醇(calcipotriol)。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：氨基水杨酸盐(酯)和磺胺吡啶(例如柳氮磺吡啶、美沙拉嗪、巴柳氮和奥沙拉嗪)的组合；和免疫调节药，例如硫代嘌呤和皮质类固醇(例如布地奈德)。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：抗菌药，例如青霉素衍生物、四环素、大环内酯、β-内酰胺、氟喹诺酮、甲硝唑、吸入性氨基糖苷；抗病毒药，包括阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、西多福韦、金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林、扎那米韦(zanamavir)和特敏服(oseltamavir)；蛋白酶抑制剂，例如茚地那韦、奈非那韦、利托那韦和沙奎那韦；核苷逆转录酶抑制剂，例如去羟肌苷、拉米夫定、司他夫定(stavudine)、扎西他宾或齐多夫定；或非核苷逆转录酶抑制剂，例如奈韦拉平(nevirapine)或依法韦仑(efavirenz)。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：心血管药，例如钙通道阻断剂、β-肾上腺素受体阻断剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、血管紧张素2受体拮抗剂；降脂药，例如抑制素或贝特类；血细胞形态学调节剂，例如配妥西菲林(pentoxyfylline)；溶栓药或抗凝药，例如血小板聚集抑制剂。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：CNS药，例如抗抑郁药(例如舍曲林)、抗帕金森药(例如丙炔苯丙胺、L-多巴、罗匹尼罗、普拉克索、MAOB抑制剂(例如司来吉兰和雷沙吉兰)、comP抑制剂(例如托卡朋(tasmar))、A-2抑制剂、多巴胺重摄取抑制剂、NMDA拮抗剂、尼古丁激动剂、多巴胺激动剂或神经元一氧化氮合酶抑制剂)或抗阿耳茨海默药(例如多奈哌齐(donepezil)、利伐斯的明、他克林、COX-2抑制剂、丙戊茶碱或美曲磷酯)。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：用于治疗急性或慢性疼痛的药物，例如在中枢或外周发挥作用的止痛药(例如阿片样物质或其衍生物)、卡马西平、苯妥英、丙戊酸钠、阿米替林(amitryptiline)或其它抗抑郁药、对乙酰氨基酚或非甾类抗炎药。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：非经肠或局部应用的(包括吸入的)局麻药，例如利诺卡因或其衍生物。
本发明的化合物或其药用盐也可与以下物质联用：抗骨质疏松药，包括激素药物(例如雷洛昔芬(raloxifene))或二膦酸盐(例如阿伦膦酸盐(alendronate))。
本发明还涉及本发明化合物或其药用盐与以下物质的组合：(i)类胰蛋白酶(tryptase)抑制剂；(ii)血小板活化因子(PAF)拮抗剂；(iii)白介素转化酶(ICE)抑制剂；(iv)IMPDH抑制剂；(v)粘附分子抑制剂，包括VLA-4拮抗剂；(vi)组织蛋白酶；(vii)激酶抑制剂，例如酪氨酸激酶(例如Btk、Itk、Jak3或MAP)抑制剂(例如吉非替尼(gefitinib)或甲磺酸伊马替尼(imatinib))、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(例如MAP激酶(例如p38，JNK，蛋白激酶A、B或C，或IKK)抑制剂)或在细胞周期调节中牵涉的激酶(例如细胞周期蛋白依赖性激酶)的抑制剂；(viii)葡萄糖-6磷酸脱氢酶抑制剂；(ix)激肽B1受体或激肽B2受体拮抗剂；(x)抗痛风药，例如秋水仙碱；(xi)黄嘌呤氧化酶抑制剂，例如别嘌醇；(xii)排尿酸药，例如丙磺舒、磺吡酮或苯溴马隆；(xiii)生长激素促分泌剂；(xiv)转化生长因子(TGFβ)；(xv)血小板源性生长因子(PDGF)；(xvi)成纤维细胞生长因子，例如基本的成纤维细胞生长因子(bFGF)；(xvii)粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)；(xviii)辣椒素油(capsaicin cream)；(xix)速激肽NK1受体或速激肽NK3受体拮抗剂，例如NKP-608C、SB-233412(他奈坦(talnetant))或D-4418；(xx)弹性酶抑制剂，例如UT-77或ZD-0892；(xxi)TNF-α转化酶抑制剂(TACE)；(xxii)诱导的一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂；(xxiii)TH2细胞上表达的化学引诱物受体同源分子(例如CRTH2拮抗剂)；(xxiv)P38的抑制剂；(xxv)调节Toll样受体(TLR)功能的药物；或(xxvi)调节嘌呤能受体活性的药物，例如P2X7；(xxvii)转录因子活化抑制剂，例如NFkB、API或STATS。
也可将本发明的化合物或其药用盐与现有的治疗药物联用，用于治疗癌症，合适的药物例如包括：
(i)在医用肿瘤学中使用的抗增殖/抗肿瘤药或其组合，例如烷基化剂(例如顺铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安或亚硝基脲)；抗代谢剂(例如抗叶酸剂，例如氟嘧啶样5-氟尿嘧啶或替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、羟基脲、吉西他滨或紫杉醇)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环类抗生素，例如阿霉素、博来霉素、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素C、更生霉素或光辉霉素)；抗有丝分裂剂(例如长春花属生物碱，例如长春新碱、长春碱、长春地辛或长春瑞滨；或紫杉烷，例如泰素(taxol)或泰索帝(taxotere))；或拓扑同工酶抑制剂(例如表鬼臼毒素，例如依托泊苷、替尼泊苷、安沙可林、托泊替康或喜树碱)；
(ii)细胞生长抑制药，例如抗雌激素药(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬或iodoxyfene)；雌激素受体下调剂(例如氟维司群)；抗雄激素药(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特或乙酸环丙孕酮)；LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林或布舍瑞林)；孕激素(例如乙酸甲地孕酮)；芳构酶(aromatase)抑制剂(例如为阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑(vorazole)或依西美坦)；或5α-还原酶抑制剂(例如非那雄胺)；
(iii)抑制癌细胞侵入的药物(例如金属蛋白酶抑制剂(例如马立马司他)或尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂受体功能抑制剂)；
(iv)生长因子功能抑制剂，例如：生长因子抗体(例如抗erb b2抗体曲妥单抗或抗erb b1抗体西妥昔单抗[C225])；法尼基转移酶抑制剂；酪氨酸激酶抑制剂或丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂；表皮生长因子家族抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，例如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼，AZD1839)、N-(3-乙炔基苯基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(埃罗替尼(erlotinib)，OSI-774)或6-丙烯酰氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI 1033))；血小板源性生长因子家族抑制剂；或肝细胞生长因子家族抑制剂；
(v)抗血管生成药，例如抑制血管内皮生长因子作用的抗血管生成药(例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗、在WO 97/22596、WO 97/30035、WO 97/32856或WO 98/13354中披露的化合物)；或通过另一种机制发挥作用的化合物(例如利诺胺、整联蛋白αvβ3功能抑制剂或血管生长抑素)；
(vi)血管损伤剂，例如考布他汀A4或在WO 99/02166、WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434或WO 02/08213中披露的化合物；
(vii)在反义治疗中使用的药物，例如指向以上所列靶标之一的反义治疗药物，例如ISIS 2503、抗ras反义物；
(viii)在例如以下基因治疗方法中使用的药物：置换异常基因(例如异常的p53或异常的BRCA1或BRCA2)的方法；GDEPT(基因介导的酶前药治疗)方法，例如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的GDEPT方法；和提高患者化疗或放疗耐受的方法，例如多种药物抵抗基因治疗；或
(ix)在例如以下免疫治疗方法中使用的药物：提高患者肿瘤细胞免疫原性的离体和在体方法，例如用细胞因子(例如白介素2、白介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)转染；降低T细胞无反应性的方法；使用转染的免疫细胞(例如细胞因子转染的树突细胞)的方法；使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法；和使用抗个体基因型抗体的方法。
现将参照下面示例性的实施例进一步解释本发明。在实施例中，在Varian Unity光谱仪上以300或400MHz的质子频率测量NMR光谱。在Agilent 1100 MSD G1946D光谱仪或Hewlett Packard HP1100 MSD G1946A光谱仪上测量MS光谱。使用Waters or 柱进行制备性HPLC分离(使用0.1％的三氟乙酸水溶液:乙腈，0.1％氨水:乙腈或0.1％乙酸铵:乙腈作为洗脱剂)。
实施例1
2-氯-3-氟-N-(5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺
a)3，5-二溴-2-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-吡嗪
使用迪安-斯达克水分离器(Dean and Stark trap)，对3，5-二溴-吡嗪-2-胺(Synthesis，1990，p659-660)(6.33g)、丙酮基丙酮(4.42g)和对甲苯磺酸(0.4g)于甲苯(100ml)中的溶液回流加热。2小时后，使反应混合物冷却，减压蒸发至约15ml。溶液用二氯甲烷稀释，并使其经过用二氯甲烷洗脱的硅胶柱。将溶剂蒸发后，使产物静置结晶。收率8.00g。
m/e 330/332/334(M+1)
b)2-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-3，5-二氟-吡嗪
将3，5-二溴-2-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-吡嗪(步骤a得到的产物)(7.3g)、无水氟化钾(4.2g)和18-冠-6(0.2g)于无水2-甲氧基乙基醚(30ml)的溶液在氮气下于120℃加热16h。冷却后，将混合物分配在水和二氯甲烷之间。将二氯甲烷溶液用水洗涤，然后使其经过用二氯甲烷洗脱的厚硅胶垫。将溶剂蒸发得到产物。收率4.5g。
1H NMR(D6-DMSO)δ 8.37(1H，dd)，5.96(2H，s)，2.07(6H，s)。
c)3，5-二氟-吡嗪-2-胺
将2-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-3，5-二氟-吡嗪(步骤b的产物)(0.4g)的水溶液(6ml)和HCl的二噁烷溶液(4M溶液，20ml)在50℃加热16h。然后将溶液浓缩至约8ml并在水和乙酸乙酯之间分配。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)并蒸发。由用乙酸乙酯:异己烷1:3洗脱的硅胶柱色谱进行纯化。将溶剂蒸发得到产物。收率0.09g。
1H NMR(CDCl3)δ 7.77(1H，dd)，4.70(2H，br s)。
d)5-氟-3-甲氧基-吡嗪-2-胺
将3，5-二氟-吡嗪-2-胺(步骤c的产物)(0.09g)和甲醇钠(0.3ml 25％的甲醇溶液)的甲醇溶液(2ml)在室温搅拌。0.5h之后，将溶液在乙酸乙酯和饱和氯化铵水溶液之间分配。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)并蒸发得到产物。收率0.06g。
1H NMR(CDCl3)δ 7.37(1H，d)，4.65(2H，br s)，4.00(3H，s)。
e)3-氟-N-(5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺
将叔丁醇钾(4ml，1M的四氢呋喃溶液)滴入冰浴中冷却的5-氟-3-甲氧基-吡嗪-2-胺(步骤d的产物)(0.25g)和3-氟苯磺酰氯(0.43g)的无水四氢呋喃(5ml)搅拌溶液中。0.5h之后，反应混合物用2M盐酸水溶液(50ml)淬灭。混合物用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)并蒸发。由用乙酸乙酯:异己烷1:3洗脱的硅胶柱色谱进行纯化。将溶剂蒸发得到产物。收率0.42g。
1H NMR(D6-DMSO)δ 11.27(1H，br s)，7.73-7.90(3H，m)，7.67-7.73(1H，m)，7.50-7.60(1H，m)，3.92(3H，s)。
f)2-氯-3-氟-N-(5-氟-3甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺
在-78℃将3-氟-N-(5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺(步骤e的产物)(0.19g)的无水四氢呋喃溶液(3ml)，滴入搅拌的LDA(通过向二异丙胺(0.18g)中加入0.56ml 2.5M BuLi的己烷溶液制成)的无水四氢呋喃(7ml)溶液。15分钟之后，滴入六氯乙烷(0.6g)的无水四氢呋喃(3ml)溶液。1h之后，移除冷却浴并将溶液加热至室温。将反应混合物在乙酸乙酯和2M盐酸水溶液之间分配。蒸发有机层。由用乙酸乙酯:异己烷1:3洗脱的硅胶柱色谱进行纯化。蒸发溶剂得到产物。收率0.13g。
m/e 336/338(M+1)
1H NMR(D6-DMSO)δ 11.54(1H，br s)，7.91(1H，dd)，7.7-7.8(2H，m)，7.61(1H，dt)，3.90(3H，s)。
13C NMR(D6-DMSO)δ 157.9(d，J 249Hz)，154.7(d，J 248Hz)，149.4(d，J 8.8Hz)，140.4，134.1(d，J 3.6Hz)，128.7(d，J 8.2Hz)，126.7(d，J 3.2Hz)，121.0(d，J 21.8 Hz)，118.1(d，J 38.3)，117.8(d，20.4Hz)，54.7。
实施例2
2，3-二氯-N-(5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺
a)2，3-二氯-N-(3-甲氧基-5-硝基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺
在室温将发烟硝酸(1.26g)滴入搅拌的2，3-二氯-N-(3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺(WO2003059893，实施例30)(4.5g)的乙酸(45ml)混悬液中。将反应混合物小心加热到75℃。1h之后，将反应混合物冷却并通过过滤收集白色结晶产物。收率3.94g。
1H NMR(D6-DMSO)δ 8.53(1H，s)，8.16(1H，d)，7.95(1H，d)，7.61(1H，t)4.02(3H，s)。
b)N-(5-氨基-3-甲氧基吡嗪-2-基)-2，3-二氯-苯磺酰胺
将2，3-二氯-N-(3-甲氧基-5-硝基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺(步骤2a的产物)(4g)和5％钯/碳(Johnson Matthey型440糊)(0.8g)的乙酸溶液(40ml)，在氢气气氛(1巴)中于60℃加热直到氢气吸收停止(16h)。冷却至室温后，将沉淀出的产物和钯催化剂通过过滤收集并用少量乙酸洗涤。将固体悬浮于四氢呋喃(500ml)中并搅拌1h。经硅藻土过滤除去钯催化剂。将四氢呋喃溶液蒸发至干并将甲苯加至固体中，并减压蒸发得到淡棕色固体。收率2.6g。
1H NMR(D6-DMSO)δ 10.04(1H，s)，7.91-7.88(2H，m)，7.50(1H，t)，7.08(1H，s)，6.43(2H，br s)，3.59(3H，s)。
c)2，3-二氯-N-(5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺
将亚硝酸钠(0.44g)逐份加到冰浴中冷却的N-(5-氨基-3-甲氧基吡嗪-2-基)-2，3-二氯-苯磺酰胺(步骤2b的产物)(2g)的乙腈(10ml)搅拌溶液和48％HBF4(25ml)的水溶液中。1h之后，将反应混合物倒入水中(250ml)并用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯溶液蒸发至干并由用乙酸乙酯:异己烷1:4洗脱的硅胶色谱对产物进行纯化。蒸发溶剂得到产物。收率0.4g。
m/e 350/352/354(M-1)
1H NMR(D6-DMSO)δ 8.05(1H，dd)，7.95(1H，dd)，7.73(1H，d)，7.59(1H，t)，3.90(3H，s)
13C NMR(D6-DMSO)δ 154.2(d，J256Hz)，149.0(d，J7.9Hz)，140.3，134.1，133.6，133.2，129.4，128.1，127.9，117.5(d，J37.5Hz)，54.2
实施例3
2，3-二氯-N-(6-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺
a)N-(5-溴-3-甲氧基-6-硝基吡嗪-2-基)-2，3-二氯-苯磺酰胺
将四氟硼酸硝鎓(7.5g)历时约15分钟逐份加到搅拌的N-(5-溴-3-甲氧基吡嗪-2-基)-2，3-二氯-苯磺酰胺(WO2003059893，实施例8)(10.0g)的乙腈(100ml)混悬液中。2h后，再加入四氟硼酸硝鎓(0.75g)。再过1h后，将反应化合物倒入冰/水上并用二氯甲烷萃取。将萃取物干燥(MgSO4)并蒸发。由用乙酸乙酯:异己烷1:1洗脱的硅胶色谱进行纯化。蒸发溶剂得到产物。收率8.4g。
1H NMR(CDCl3)δ 8.36(1H，m)，7.74(1H，m)，7.49(1H，t)，4.18(3H，s)。
b)N-(6-氨基-5-溴-3-甲氧基吡嗪-2-基)-2，3-二氯-苯磺酰胺
将N-(5-溴-3-甲氧基-6-硝基吡嗪-2-基)-2，3-二氯-苯磺酰胺(步骤3a的产物)(7.4g)的乙酸乙酯(100ml)溶液，和含有5％钯/碳(Johnson Matthey型39糊)(3.2g)的乙酸于氢气(1巴)中剧烈搅拌。3h之后，反应化合物经硅藻土垫过滤并蒸发。收率6.5g。
m/e 427/429(M+1)
c)N-(5-溴-6-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-2，3-二氯-苯磺酰胺
将亚硝酸钠(2.4g)历时约20分钟逐份加到冷至-10℃的N-(6-氨基-5-溴-3-甲氧基吡嗪-2-基)-2，3-二氯-苯磺酰胺(步骤3b的产物)(7.4g)的氟化氢-吡啶(吡啶聚(氟化氢))(30ml)的搅拌溶液中。0.5h之后，加入水并用二氯甲烷(x2)萃取溶液。合并的萃取物用水洗涤，并经过用1.25％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱的硅胶垫。由用甲醇:二氯甲烷1:100洗脱的硅胶色谱进行纯化。将溶剂蒸发得到产物。收率4.1g。
m/e 430/432(M+1)
d)2，3-二氯-N-(6-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺
将N-(5-溴-6-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-2，3-二氯-苯磺酰胺(步骤3c的产物)(0.2g)的乙酸乙酯(10ml)和含有5％钯/碳(Johnson Matthey型39糊)(0.4g)的三乙胺(1ml)于氢气(1巴)中剧烈搅拌。0.5h之后，反应化合物经硅藻土垫过滤并蒸发。由用乙酸乙酯:异己烷1:4洗脱的硅胶色谱进行纯化。将溶剂蒸发得到产物。收率0.06g。
m/e 352/354/356(M+1)
1H NMR(D6-DMSO)δ 8.13(1H，dd)，7.95(1H，dd)，7.75(1H，d)，7.62(1H，t)，3.91(3H，s)
13C NMR(D6-DMSO)δ 152.7(d，J 240.4Hz)，147.7(d，J 147.7Hz)，140.0，134.9，134.1(d，J 10.3Hz)，133.8，130.6，128.8，128.4，118.9(d 39Hz)，54.5。
实施例4
2，3-二氯-N-[6-氟-5-(羟甲基)-3-甲氧基吡嗪-2-基]-苯磺酰胺
a)5-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3-氟-6-甲氧基吡嗪-2-羧酸甲酯
将N-(5-溴-6-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-2，3-二氯-苯磺酰胺(实施例3c的产物)(0.4g)和[1，1’-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(0.06g)的甲醇(15ml)溶液和三乙胺(5ml)，在90-100℃于一氧化碳气氛下(6巴)加热。3h之后，将反应混合物物冷却并蒸发溶液。将残余物在乙酸乙酯和2M盐酸水溶液之间分配。水层用乙酸乙酯萃取并将合并的萃取物干燥(MgSO4)并蒸发。由用乙酸乙酯洗脱的硅胶色谱进行纯化。蒸发溶剂得到产物。收率0.25g。
m/e 410/412(M+1)
b)2，3-二氯-N-[6-氟-5-(羟甲基)-3-甲氧基吡嗪-2-基]-苯磺酰胺
历时1分钟将三乙基硼氢化锂(Superhydride，2ml1M的四氢呋喃溶液)加到冰浴中冷却的5-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3-氟-6-甲氧基吡嗪-2-羧酸甲酯(步骤4a的产物)(0.17g)的无水四氢呋喃(5ml)的搅拌溶液中。20分钟后，将反应混合物在乙酸乙酯和饱和柠檬酸水溶液中分配。将合并的乙酸乙酯萃取物用水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发。由用乙酸乙酯:异己烷1:1洗脱的硅胶色谱进行纯化。蒸发溶剂得到产物。收率0.035g。
m/e 382/384/386(M+1)
1H NMR(D6-DMSO)δ 8.11(1H，dd)，7.95(1H，dd)，7.61(1H，t)，4.37(2H，s)3.91(3H，s)
13C NMR(D6-DMSO)δ 150.1(d，J 241.1Hz)，147.1(d，J 2Hz)，140.0，134.9，133.8，132.8(d，J 10.1Hz)，130.9(d，J 30.4Hz)，130.6，128.7，128.4，58.2，54.5
实施例5
3-氯-2-氟-N-(5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺
a)3-氯-2-氟-N-(3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺
使用3-氯-2-氟苯甲磺酰氯(2.5g)和3-甲氧基-吡嗪-2-胺(1.25g)，用实施例1步骤e的方法制备。后处理后将合并的乙酸乙酯萃取物干燥(MgSO4)并蒸发得到淡棕色固体。收率3.3g。
m/e 318/320(M+1)
b)3-氯-2-氟-N-(3-甲氧基-5-硝基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺
将3-氯-2-氟-N-(3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺(步骤5a的产物)(2.5g)加到四氟硼酸硝鎓的环丁砜(50ml0.5M溶液)溶液中，并将混合物在50℃加热。6h之后，再加入四氟硼酸硝鎓的环丁砜(20ml)溶液。再过3h后，将混合物冷却并倒入冰/水上。将得到的油溶于乙酸乙酯并分离。将合并的乙酸乙酯萃取物干燥(MgSO4)并蒸发至干得到橙色的油。由用二氯甲烷洗脱的硅胶色谱进行纯化以除去环丁砜，之后用乙酸乙酯洗脱来收集产物。将产物溶于二氯甲烷并用水洗涤以除去残留的环丁砜。将有机层干燥(MgSO4)并蒸发。收率1.2g。
1H NMR(D6-DMSO)δ 8.53(1H，s)，7.95(1H，t)，7.88(1H，t)，7.42(1H，t)，3.99(3H，s)
c)N-(5-氨基-3-甲氧基吡嗪-2-基)-3-氯-2-氟-苯磺酰胺
将3-氯-2-氟-N-(3-甲氧基-5-硝基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺(步骤5b的产物)(0.8g)，铁粉(0.8g)和氯化铵(0.8g)的乙醇(40ml)溶液和水(40ml)于回流下加热。1h之后，将反应混合物冷却并经硅藻土过滤，用甲醇充分洗涤。将溶液蒸发至干然后在乙酸乙酯和水之间分配。将有机层干燥(MgSO4)并蒸发。由用乙酸乙酯洗脱的硅胶色谱进行纯化。蒸发溶剂得到产物。收率0.28g。
1H NMR(D6-DMSO)δ 7.87(1H，t)，7.67(1H，t)，7.35(1H，t)，7.11(1H，s)，6.47(2H，s)，3.58(3H，s)
d)3-氯-2-氟-N-(5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺
采用实施例2步骤c的方法，由N-(5-氨基-3-甲氧基吡嗪-2-基)-3-氯-2-氟-苯磺酰胺(步骤5c的产物)(0.27g)制备标题化合物。由用乙酸乙酯:异己烷1:3洗脱的硅胶色谱进行纯化。蒸发溶剂得到产物。收率0.11g。
m/e 336/338(M+1)
1H NMR(D6-DMSO)δ 7.92(1H，t)，7.86(1H，t)，7.76(1H，d)，7.43(1H，t)，3.90(3H，s)
13C NMR(D6-DMSO)δ 154.8(d，J 249Hz)，153.5(d，J 258Hz)，149.7(d，J 9.1Hz)，135.4，133.9(d，J 3.9Hz)，130.7(d，13.4Hz)，129.1，125.5(d，J 5.0Hz)，121.1(d，J 17.2Hz)，118.1(d，J 38.3Hz)，54.7
实施例6
2，3-二氯-N-[5-氟-6-(羟甲基)-3-甲氧基吡嗪-2-基]-苯磺酰胺
a)2，3-二氯-N-(5-氟-3-甲氧基-6-硝基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺
将四氟硼酸硝鎓(0.4g)逐份加到搅拌的2，3-二氯-N-(5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺(实施例2)(0.5g)的乙腈(10ml)混悬液中。2h之后，反应物在乙酸乙酯和水之间分配。将乙酸乙酯萃取物干燥(MgSO4)并蒸发。由用乙酸乙酯:异己烷1:1洗脱的硅胶色谱进行纯化。蒸发溶剂得到产物。收率0.3g。
1H NMR(D6-DMSO)δ 8.25(1H，dd)，7.94(1H，dd)，7.61(1H，t)，4.03(3H，s)
b)N-(6-氨基-5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-2，3-二氯-苯磺酰胺
将2，3-二氯-N-(5-氟-3-甲氧基-6-硝基吡嗪-2-基)-苯磺酰胺(步骤6a的产物)(0.95g)的乙酸乙酯(10ml)溶液和含有5％钯/碳(Johnson Matthey型39糊)(0.3g)的乙酸(5ml)于氢气(1巴)中剧烈搅拌。16h后，将反应混合物经硅藻土垫过滤并蒸发。收率0.75g。
m/s 367/369/371(M+1)
c)N-(6-溴-5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-2，3-二氯-苯磺酰胺
将亚硝酸钠(0.2g)逐份加到冷至-10℃的、搅拌的N-(6-氨基-5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-2，3-二氯-苯磺酰胺(步骤6b的产物)(0.5g)的乙腈(5ml)溶液和48％ HBr水溶液(5ml)中。20min后，将反应混合物在二氯甲烷和水之间分配。将有机萃取物干燥(MgSO4)并蒸发。由用二氯甲烷洗脱的硅胶色谱进行纯化。蒸发溶剂得到产物。收率0.15g。
m/s 430/432(M+1)
d)6-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3-氟-5-甲氧基吡嗪-2-羧酸甲酯
将N-(6-溴-5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-2，3-二氯-苯磺酰胺(实施例6c的产物)(0.14g)和[1，1’-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(0.2g)的甲醇溶液(10ml)和三乙胺(5ml)，于90-100℃在一氧化碳(6巴)气氛中加热。16h之后，将反应物冷却并蒸发溶液。将残余物在乙酸乙酯和2M盐酸之间分配。有机层用乙酸乙酯萃取并将合并的萃取物干燥(MgSO4)并蒸发。由用乙酸乙酯:异己烷1:2洗脱的硅胶色谱进行纯化。蒸发溶剂得到产物。收率0.1g。
m/e 410/412(M+1)
e)2，3-二氯-N-[5-氟-6-(羟甲基)-3-甲氧基吡嗪基]-苯磺酰胺
历时1分钟将三乙基硼氢化锂(Superhydride，1.5ml1M的四氢呋喃溶液)加到冰浴中冷却的6-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3-氟-5-甲氧基吡嗪-2-羧酸甲酯(步骤6d的产物)(0.1g)的无水四氢呋喃(2ml)的搅拌溶液中。20分钟后，将反应混合物在乙酸乙酯和2M HCl水溶液之间分配。合并的乙酸乙酯萃取物用水洗涤、干燥(MgSO4)并蒸发。由用乙酸乙酯:异己烷2:1洗脱的硅胶色谱进行纯化。溶剂蒸发得到产物。收率0.02g。
m/e 382/384/386(M+1)
1H NMR(D6-DMSO)δ 11.49(1H，br s)，8.10(1H，dd)，7.94(1H，dd)，7.59(1H，t)，4.25(2H，s)，3.85(3H，s)
实施例7
3-氯-N-(5-氟-3-甲氧基吡嗪-2-基)-2-甲基-苯磺酰胺
采用实施例1步骤的方法，由3-氯-2-甲基苯磺酰氯(0.18g)和5-氟-3-甲氧基-吡嗪-2-胺(实施例2步骤d的产物)(0.1g)制备标题化合物。由用乙酸乙酯:异己烷1:4洗脱的硅胶色谱进行纯化。蒸发溶剂得到产物。收率0.15g。
H NMR(D6-DMSO)δ 11.34(1H，br s)，7.95(1H，d)，7.73(1H，d)，7.70(1H，d)，7.43(1H，t)，3.92(3H，s)，2.66(3H，s)
药理学数据
FMAT全细胞结合测定
细胞
将稳定表达人重组CCR4受体(Euroscreen；Brussels，Belgium)的CHO-K1细胞在含有GLUTAMAX-1的NUT.MIX.F_12(HAM)培养基中培养，该培养基含有10％(v/v)胎牛血清和400μgml-1遗传霉素(geneticin)。
细胞经用细胞解离缓冲液处理，约70％融合时收集，并以5 x 103细胞/100μl培养基中接种于黑色Costar透明底96-孔微孔板的孔中。板于37℃在5％ CO2中培养过夜并在次日使用。
测定
在使用前，细胞板用100μl Hanks平衡盐溶液(HBSS)洗涤两次。然后向各孔中加入65μl HBSS，10μL 10％ DMSO的HBSS±受试化合物，然后加入25μL 2.8nM的FB-MDC(Applied Biosystems)。荧光探针从稀释于HBSS中的10μM 0.08％(v/v)TFA/16％(v/v)的乙腈储备液制备得到。
室温避光培养两小时后，板在FMAT8100读数器(Applied Biosystems)中分析，以测量与FB-MDC结合细胞相关的荧光。与对照组和背景孔的荧光比较，化合物活性测定为pIC50[产生50％抑制时化合物浓度的负对数]。
血浆蛋白结合测定
血浆蛋白结合程度通过化合物于37℃在人血浆和缓冲水溶液之间的平衡透析来测定，以及化合物在血浆与缓冲液中的浓度经HPLC-MS/MS测定。
方法
透析细胞(分子量截至值(cut-off)5000)经用水漂洗，然后在透析缓冲液中浸泡最少1小时来制备。透析缓冲液为pH为7.4的等渗缓冲盐水。制备化合物在二甲基亚砜中的储备液，浓度为1mM。从自愿受试者获得冰冻的混合人血浆。
将化合物的DMSO储备溶液添加至血浆中，添加比例为每毫升血浆的10μl DMSO溶液。这产生了1％ DMSO的血浆溶液，含有浓度为10μM的各种化合物。
然后制备透析细胞，并使一半的细胞充满750μl透析缓冲液，另一半细胞充满750μl化合物的血浆溶液。一旦制备好，将细胞密封并浸渍于37℃的水浴中。然后将这些细胞旋转至少4小时以平衡。
平衡后，移除500μl缓冲液样品并与100μl血浆一起加到HPLC小瓶中(样品在6倍稀释的血浆中)，移除100μl血浆样品并与500μl透析缓冲液一起加到HPLC小瓶中(样品在6倍稀释的血浆中)。
然后用HPLC-MS/MS分析样品。如下获得四点校准曲线：用6-倍稀释的血浆稀释储备液，浓度为0.05μM、0.15μM、0.5μM和2.5μM，以稀释的储备液、缓冲液样品和血浆样品的顺序先后注射稀释的储备液、缓冲液样品和血浆样品。
计算
化合物在样品中的浓度用MassLynx version 4.0软件(Waters/Micromass生产)测定，该软件自动计算校准曲线和化合物在细胞中的浓度。使用以下方程，从校准曲线测定血浆蛋白结合，为人血浆中结合的化合物的百分数(结合百分比，％结合)，其中分子中的因子表明用血浆对含水试样进行微小稀释，而分母中的因子6用来校正用缓冲液对血浆样品进行的6倍稀释。
全血效价(whole blood potency)
预测的全血效价是CCR4活性和血浆蛋白结合的联合效果的量度，由以下公式计算：全血效价＝CCR4 pIC50+Log((100-％结合)/100)。
结果
表1表明本发明实施例1-7和来自WO03/059893的对照化合物的CCR4pIC50，血浆蛋白结合(％结合)数值和预测的全血效价。对照化合物为WO03/059893中举例说明的含氯和含溴的类似化合物(实施例5：2，3-二氯-N-(5-氯-3-甲氧基-2-吡嗪基)苯磺酰胺；和实施例8：2，3-二氯-N-(5-溴-3-甲氧基-2-吡嗪基)苯磺酰胺)和实施例30：(2，3-二氯-N-(3-甲氧基-2-吡嗪基)苯磺酰胺)。
表1
实施例化合物编号FMAT CCR4pIC50％人血浆结合全血效价实施例18.399.06.3实施例28.599.46.3实施例38.599.76.0实施例47.898.75.9实施例58.098.96.0实施例68.299.55.9实施例78.499.66.0WO03/059893的实施例57.999.85.2WO03/059893的实施例88.399.85.6WO03/059893的实施例307.798.95.7
本发明化合物(其中吡嗪环在5或6位被氟取代)的全血效价，比对照化合物(其中吡嗪被氯或溴取代)的效价显著升高。非常高的效价和对人血浆的低血浆蛋白结合使本发明的含氟化合物在体内更有效。
代谢产物试验
根据Mutation Res.1983；113：173-215中描述的试验操作，使用鼠伤寒沙门氏菌(salmonella typhimurium)LT2菌株TA98和TA100，测试5-氟-3-甲氧基-吡嗪-2-胺和6-氟-3-甲氧基-吡嗪-2-胺的诱变性。对于代谢活化，将来自Aroclor 1254-处理的大鼠的肝匀浆(后线粒体断片(S9)，购于MolecularToxicology Inc.，Boone，North Carolina，USA)与受试化合物和细菌测交品系一起加到琼脂平皿(不含组氨酸)中；采用的完整的活化体系为：磷酸盐缓冲液(0.1mol/L，pH7.4)：100mmol/L；氯化镁：8mmol/L；氯化钾：33mmol/L；烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸：4mmol/L；葡糖-6-磷酸：5mmol/L；和大鼠肝匀浆(S9部分)：10％ v/v。计算各试验组的复突菌落(revertant colonies)平均数和样本标准差(来自对照板)。当满足以下标准时，受试化合物被认为是突变性的：i)当一种或多种剂量的受试化合物存在时，任何菌株的复突菌落数目增加，包括或不包括代谢活化ii)在复突菌落的数目上有剂量相关的增长，和iii)任何增长为可重现的。
对于5-氟-3-甲氧基-吡嗪-2-胺和6-氟-3-甲氧基-吡嗪-2-胺，试验结果是阴性的，这表明所述化合物在试验条件下是非诱变的。