1-2α-连接的鼠李糖(D，L)寡糖及肺炎菌株O-多糖抗原的 四糖重复单元的制备 本发明属于有生物活性的寡糖的制备技术领域，特别是涉及能用于合成1→2α-连接的鼠李糖寡糖的制备，以及由鼠李糖双糖制备肺炎菌株的O-多糖抗原的四糖重复单元的方法。
1→2α-连接的鼠李糖(D，L)寡糖存在于很多天然产物中，特别是一些细菌多糖中，如肺炎菌株(Klebsiella pneumoniae strain)的O-多糖抗原即由L-鼠李糖四糖的重复单元组成，其非还原端为1→3α-连接，而另外的键都是1→2α-连接(见M.Ansaruzzaman et al.Eur..JBiochem.237，1996，786-791)，此四糖重复单元可能就是该多糖抗原的活性决定部位，合成这个四糖重复单元以及一些1→2α-连接的鼠李糖寡糖，可用于结构-活性的研究，也能用于新药地筛选。
过去合成1→2连接的鼠李糖寡糖，都是用苄基或硅烷基等复杂的保护基，步骤繁多，本发明的目的在于提供一种简单易行且可批量操作的方法，由苯甲酰化单糖的原酸酯自身缩合直接制备1→2α-连接的鼠李糖双糖，进而由这些双糖制备出1→2α-连接的鼠李糖三糖、四糖及更大的寡糖。同时合成肺炎菌株的O-多糖抗原的四糖重复单元。
本发明的目的是这样实现的：以苯甲酰化的鼠李糖的烷基原酸酯为原料，在路易斯酸催化下进行缩合，得到1→2α-连接的、2位为乙酰基的苯甲酰化鼠李糖双糖，选择性脱除乙酰基，即得到双糖受体，而脱除1位烷基并进行活化，即得到双糖供体，由这些供体与受体可合成新的寡糖。
本发明的合成方法在于：乙酰化的鼠李糖溴代物1，经原酸酯化并脱除乙酰基后得到2，再苯甲酰化得到3，在路易斯酸的催化下使3缩合，直接得到1→2α-连接的双糖4；将4的1位烷基脱除，再活化得到双糖供体5，而将4的乙酰基脱除即得到双糖受体6；使双糖供体5与双糖受体6缩合，即得到1→2α-连接的鼠李糖四糖7；使单糖供体1与双糖受体6缩合，即得到1→2α-连接的鼠李糖三糖8；
Bz＝Ph(CO)- R＝烷基 Ac＝乙酰基双糖受体6与1→3α-连接的鼠李糖双糖供体9偶联，得到四糖10，再脱除保护基，即得到肺炎菌株的O-多糖抗原的重复单元四糖11：
Bz＝Ph(CO)- R＝烷基 Ac＝乙酰基 R’＝烷基或H所述的烷基为甲基、乙基、丙基、辛基、月桂基等；下面结合实施例对本发明进行详细的说明。
(1)苯甲酰化的鼠李糖的烯丙基原酸酯3(式3中R＝烯丙基)的合成
将三乙酰基溴代鼠李糖738毫克(2毫克分子)溶于二氯甲烷中，加入2，4-二甲基吡啶0.23毫升(2毫克分子)，烯丙醇10毫升(14毫克分子)，搅拌下室温反应3小时，减压下蒸干溶剂，加入甲醇40毫升，再加入甲醇钠，至pH＝8，搅拌2小时后蒸干得到粉末状2，然后加入吡啶25毫升，苯甲酰氯2.6毫升，搅拌下室温反应3小时，按常规方法处理反应液，用硅胶柱层析法精致产品，得到苯甲酰化的鼠李糖烯丙基原酸酯791毫克，产率80％。
(2)苯甲酰化的鼠李糖的甲基原酸酯3a(式3中R＝甲基)的合成
将三乙酰基溴代鼠李糖738毫克(2毫克分子)溶于二氯甲烷中，加入2，4-二甲基吡啶0.23毫升(2毫克分子)，甲醇6毫升(14毫克分子)，搅拌下室温反应3小时，减压下蒸干溶剂，加入甲醇40毫升，再加入甲醇钠，至pH＝8，搅拌2小时后蒸干得到粉末状2，然后加入吡啶25毫升，苯甲酰氯2.6毫升，搅拌下室温反应3小时，按常规方法处理反应液，用硅胶柱层析法精致产品，得到苯甲酰化的鼠李糖甲基原酸酯3a 754毫克，产率79％
(3)苯甲酰化的鼠李糖的正辛基原酸酯3b(式3中R＝辛基)的合成
将三乙酰基溴代鼠李糖738毫克(2毫克分子)溶于二氯甲烷中，加入2，4-二甲基吡啶0.23毫升(2毫克分子)，正辛醇22毫升(14毫克分子)，搅拌下室温反应3小时，用硅胶柱层析法分离掉未反应的正辛醇，将含原酸酯的组分在减压下蒸干溶剂，加入甲醇40毫升，再加入甲醇钠，至pH＝8，搅拌2小时后蒸干得到粉末状2，然后加入吡啶25毫升，苯甲酰氯2.6毫升，搅拌下室温反应3小时，按常规方法处理反应液，用硅胶柱层析法精致产品，得到苯甲酰化的鼠李糖辛基原酸酯3b796毫克，产率74％
(4)双糖4(Allyl 2-O-acetyl-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranoside)的合成
将3 9.39克(18.2毫克分子)溶于30毫升二氯甲烷中，加入TMSOTF(三甲基硅三氟甲磺酸盐)80微升，在室温、搅拌下进行反应，用TLC监测。反应完成后，用常规方法处理反应液，产物用硅胶柱层析法精制，得到2位为乙酰基的苯甲酰化双糖的烯丙基苷45.15g，产率70％，熔点144-148℃；[α]D＋34.6°(c1.1，CHCl3)；
(5)双糖4a(Methyl 2-O-acetyl-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranoside)的合成
将3a 8.2克(17毫克分子)溶于30毫升二氯甲烷中，加入TMSOTF(三甲基硅三氟甲磺酸盐)80微升，在室温、搅拌下进行反应，用TLC监测。反应完成后，用常规方法处理反应液，产物用硅胶柱层析法精制，得到2位为乙酰基的苯甲酰化双糖的甲基苷4a 4.64g，产率70％，熔点142-144℃；[α]D＋31.5°(c1.1，CHCl3)；
(6)双糖4b(Octyl 2-O-acetyl-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranoside)的合成
将3b 6.1克(14毫克分子)溶于30毫升二氯甲烷中，加入TMSOTF(三甲基硅三氟甲磺酸盐)60微升，在室温、搅拌下进行反应，用TLC监测。反应完成后，用常规方法处理反应液，产物用硅胶柱层析法精制，得到2位为乙酰基的苯甲酰化双糖的辛基苷4b 3.04g，产率67％，[α]D＋21.5°(c2.1，CHCl3)；
(7)双糖供体5(2-O-Acetyl-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl trichloroacetimidate)的合成
将双糖4708毫克(1毫克分子)溶于含乙酸钠(292毫克)的乙酸(10毫升)，加入氯化钯293毫克，搅拌、室温下反应，用TLC监测，反应完成后，过滤，将滤液和洗涤液合并，减压下蒸干。将残余物溶于15毫升干燥二氯甲烷中，加入三氯乙睛0.2毫升(2毫克分子)，DBU27微升，在室温、搅拌下进行反应，用TLC监测。反应完成后，用常规方法处理反应液，产物用硅胶柱层析法精制，得到双糖供体5 720毫克，两步产率90％。熔点133-135℃；[α]D＋16.2°(c1.2，CHCl3)；
(8)双糖受体6(Allyl 3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranoside)的合成
将双糖4 708毫克(1毫克分子)溶于25毫升甲醇中，加入乙酰氯(0.50毫升)，室温、搅拌下反应4小时，再补加乙酰氯(0.25毫升)。用TLC监测，反应完成后，按常规方法处理反应液，得到双糖受体6 640毫克。产率95％。熔点138-141℃；[α]D＋27.5°(c1.1，CHCl3)；
(9)双糖受体6a(Methyl 3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranoside)的合成
将双糖4a 680毫克(1毫克分子)溶于25毫升甲醇中，加入乙酰氯(0.50毫升)，室温、搅拌下反应4小时，再补加乙酰氯(0.25毫升)。用TLC监测，反应完成后，按常规方法处理反应液，得到双糖受体6a 610毫克。产率94％。熔点136-139℃；[α]D＋29.5°(c1.4，CHCl3)；
(10)双糖受体6b(Octyl 3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranoside)的合成
将双糖4b 778毫克(1毫克分子)溶于25毫升甲醇中，加入乙酰氯(0.50毫升)，室温、搅拌下反应4小时，再补加乙酰氯(0.25毫升)。用TLC监测，反应完成后，按常规方法处理反应液，得到双糖受体6b 671毫克。产率92％。无定型固体；[α]D＋22.5°(c2.1，CHCl3)；
(11)四糖7(Allyl 2-O-acetyl-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranoside)的合成
按发表的标准反应方法(Adv.Carbohydr.Chem.Biochem 50，1994，21-124)，使双糖供体5 811毫克(1毫克分子)与双糖受体6 666毫克(1毫克分子)反应，得到四糖7 1170毫克，产率88％：熔点144-147℃；[α]D＋25.5°(c1.1，CHCl3)；
(12)四糖7a(Methyl 2-O-acetyl-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-o-L-rhamnopyranoside)的合成
按发表的标准反应方法(Adv.Carbohydr Chem.Biochem.50，1994，21-124)，使双糖供体5 811毫克(1毫克分子)与双糖受体6a 638毫克(1毫克分子)反应，得到四糖7a 1112毫克，产率84％：熔点142-144℃；[α]D＋27.5°(c1.1，CHCl3)；
(13)四糖7b(Octyl 2-O-acetyl-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranoside)的合成
按发表的标准反应方法(Adv.Carbohydr.Chem.Biochem.50，1994，21-124)，使双糖供体5 811毫克(1毫克分子)与双糖受体6b 736毫克(1毫克分子)反应，得到四糖7b 1202毫克，产率83％：无定型粉末；[α]D＋20.1°(c 2.1，CHCl3)；
(14)三糖8(Allyl 2-O-acetyl-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranoside)的合成
三糖供体1 411毫克(1毫克分子)与双糖受体6 666毫克(1毫克分子)溶于10毫升二氯甲烷中，加入三氟甲磺酸银1毫克分子，反应在室温、搅拌下进行2小时后完成，用常规方法处理反应液，用硅胶柱层析法精制后得到三糖8 701毫克，产率71％，熔点132-135℃；[α]D＋27.5°(c1.2，CHCl3)；
(15)双糖供体9(2，3，4-tri-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→3)-2，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl trichloroacetimidate)的合成
首先按文献(杜宇国 孔繁祚.J.Carbohydr.Chem.，18，1999，655-664.)发表的方法，以鼠李糖烯丙基苷204毫克(1毫克分子)为原料，与糖基供体1411毫克(1毫克分子)溶于10毫升二氯甲烷中，再加入2，4-1utidine及三氟甲磺酸银各1毫克分子，得到在3位连接的双糖的原酸酯，接着苯甲酰化，并在TMSOTf催化下转位，得到1→3连接的鼠李糖双糖(Allyl2，3，4-tri-O-acetyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→3)-2，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranoside)612毫克，产率70％，按文献(王为 孔繁祚 Carbohydr.Res.，315，1999，117-126)的方法用乙酰氯/甲醇为反应试剂的方法，选择性脱除乙酰基，然后用苯甲酰氯/吡啶的标准方法进行苯甲酰化，得到鼠李糖双糖(Allyl2，3，4-tri-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→3)-2，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranoside)750毫克，产率71％，由1048毫克(1毫克分子)的此双糖，按由双糖4制备双糖供体5的方法，得到双糖供体9 902毫克，产率82％。
(16)肺炎菌株的O-多糖抗原的四糖重复单元的烯丙基苷(带保护基)10(Allyl 2-O-acetyl-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→3)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranoside)的合成
按发表的标准反应方法(Adv.Carbohydr Chem.Biochem 50，1994，21-124)，使双糖供体9 1150毫克(1毫克分子)与双糖受体6 666毫克(1毫克分子)反应，得到四糖重复单元的烯丙基苷10 1302毫克，产率81％：无定型粉末；[α]D＋26.1°(c2.5，CHCl3)；
(17)肺炎菌株的O-多糖抗原的四糖重复单元的正辛基苷(带保护基)10b(Octyl 2-O-acetyl-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→3)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-3，4-di-O-benzoyl-α-L-rhamnopyranoside)的合成
按发表的标准反应方法(Adv.Carbohydr.Chem Biochem 50，1994，21-124)，使双糖供体9 1150毫克(1毫克分子)与双糖受体6b 736毫克(1毫克分子)反应，得到四糖重复单元的正辛基苷10b 1376克，产率80％：无定型粉末；[α]D＋21.1°(c2.5，CHCl3)；
(18)游离的肺炎菌株的O-多糖抗原的四糖重复单元的烯丙基苷11(Allylα-L-rhamnopyranosyl-(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranoside)及游离的肺炎菌株的O-多糖抗原的四糖重复单元的正辛基苷11b(Octyl α-L-rhamnopyranosyl-(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranoside)以及游离的肺炎菌株的O-多糖抗原的四糖重复单元(式11中R＝H)(α-L-rhamnopyranosyl-(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-L-rhamnopyranose)的合成
将保护的四糖重复单元的烯丙基苷10或保护的四糖重复单元的正辛基苷10b1毫克分子溶于用氨饱和的甲醇溶液10毫升中，反应在室温下进行4天后完成，减压下蒸干溶剂，再用乙酸乙酯洗涤残余物得到乳白色粉末11，产率92％或11b，产率87％；
如将保护的四糖重复单元的烯丙基苷10 1毫克分子首先用标准方法(PdCl2-乙酸钠-乙酸)脱掉烯丙基，然后按10转化为11的方法，脱掉其余的保护基，得到游离的四糖(式11中R＝H)，产率90％。