二硫代氨基甲酸酯衍生物及其作为抗菌剂的应用.pdf

本发明涉及二硫代氨基甲酸酯衍生物在治疗或预防哺乳动物(人和动物)中由细菌引起的传染性疾病，尤其是分支杆菌引起的结核病(TB)和麻风病以及葡萄球菌引起的传染性疾病中的应用。本发明还涉及式(I)之具有优异抗菌活性的新型二硫代氨基甲酸酯衍生物以及包含该衍生物的药物组合物，其中X是选自于式(1、2、3、4)的二价基团。

1、  通式1的化合物在制备用于治疗或预防细菌感染的药物组合物中的应用：

                             式I
其中X是选自于以下组中的二价基团：

其中，
R¹是CN、CONR³R⁴、CONHNR³R⁴；
R²是H、NO₂、CN、CONR³R⁴、CONHNR³R⁴、COOR⁵、CHO、卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～8的烷醇基，OR⁵、SR⁵、NR³R⁴、SO₂NR³R⁴、三氟甲基、苯基；
n是0～3；
R³和R⁴相互独立地是H、饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，具有3～7个碳原子的环烷基，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～8的烷醇基；被(R⁵)_m取代的苄基、苯基或萘基，其中m为0～7；OR⁵；或者NR³R⁴是吗啉基，饱和或不饱和、含有N、S、O杂原子并被(R5)_m取代的单环或多环杂环基；或者R³和R⁴一起组成结构为-(CH₂)_m-的二价基团，其中m为2～7，或结构为-(CH₂CH₂)NR⁶(CH₂CH₂)-的二价基团；或者R³和R⁴一起组成结构如下的二价基团；

R⁵是H，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，三氟甲基，苄基、苯基、卤原子；饱和或不饱和、卤代或未卤代、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～8的烷醇基，苄基、苯基、苯乙烯基、或萘基，每个基团是未取代的或被(R⁶)_m取代的；COOH、COOR⁵、CONR³R⁴；
R⁶是H，卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，饱和或不饱和、卤代或未卤代、线性或支化、链长为1～8的烷醇基，三氟甲基，苄基，苯基，苯乙烯基，萘基，每个基团是未取代的或被(R⁶)_m取代的；COOH、COOR⁵、CONR³R⁴；
R⁷是H，卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，OR⁵，SR⁵，NR³R⁴，三氟甲基，苯基，苯乙烯基，每个基团是未取代的或被(R⁶)_m取代的。

2、  式I的化合物：

                             式I
其中X是选自于以下组中的二价基团：

其中，
R¹是CN、CONR³R⁴、CONHNR³R⁴；
R²是H、NO₂、CN、CONR³R⁴、CONHNR³R⁴、COOR⁵、CHO、卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、任选被羟基取代的链长为1～7的脂族基团；OR⁵、SR⁵、NR³R⁴、SO₂NR³R⁴、三氟甲基、苯基；
n是0～3；
在X＝1时，R³和R⁴相互独立地是H，不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，具有3～7个碳原子的环烷基；饱和或不饱和、线性或支化、被羟基取代的链长为1～8的烷基；分别是未取代或者被(R⁵)_m取代的苄基、苯基或萘基，其中m为1～5；OR⁵；或者NR³R⁴是饱和或不饱和、含有N、S、O杂原子、未取代或被(R⁵)_m取代的单环或多环杂环；
在X＝2～4时，R³和R⁴相互独立地是H，饱和或不饱和、线性或支化、任选被羟基取代的链长为1～7的脂族基团，具有3～7个碳原子的环烷基；分别是未取代或被(R⁵)_m取代的苄基、苯基或萘基，其中m为1～5；OR⁵；或者NR³R⁴是饱和或不饱和、含有N、S、O杂原子、并被(R⁵)_m取代的单环或多环杂环；
或者在X＝1～4时，R³和R⁴一起代表如下的二价基团；

R⁵是H，卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、任选被卤原子或羟基取代的链长为1～7的脂族基团；分别是未取代或被(R⁶)_m取代的苄基、苯基、苯乙烯基、或萘基，其中m为1～5；COOH、COOR⁵、CONR³R⁴；
R⁶是H，卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、任选被卤原子或羟基取代的链长为1～7的脂族基团；分别是未取代或被(R⁶)_m取代的苄基、苯基、苯乙烯基、或萘基；COOH、COOR⁵、CONR³R⁴；
但排除以下化合物：3，5-二硝基-2-二甲基二硫代氨基甲酰基吡啶、3，5-二硝基-6-二甲基氨基-2-二甲基二硫代氨基甲酰基吡啶、4-甲氧基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、4-甲氧基-6-二丙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、4-二甲基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、4-二甲基氨基-6-二丙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、以及4-甲基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶。

3、  按照权利要求2所述的式(I)化合物，其是3，5-二硝基-2-R³R⁴-二硫代氨基甲酰基-苯甲腈，其中X是式(1)的基团；R¹是CN；R²是NO₂，n是1，而R³和R⁴的含义与权利要求1相同。

4、  按照权利要求2所述的式(I)化合物，其是3，5-二硝基-2-R³R⁴-二硫代氨基甲酰基-苯甲酰胺，其中X是式(1)的基团；R¹是CONR³R⁴；R²是NO₂，n是1，而R³和R⁴的含义与权利要求1相同。

5、  按照权利要求2所述的式(I)化合物，其是3，5-二硝基-2-R³R⁴-二硫代氨基甲酰基-吡啶，其中X是式(2)的基团；R²是NO₂，n是1，而R³和R⁴的含义与权利要求2相同，但3，5-二硝基-2-二甲基二硫代氨基甲酰基吡啶除外。

6、  按照权利要求2所述的式(I)化合物，其是4-R⁷-2-R⁵-6-R³R⁴-二硫代氨基甲酰基-5-硝基-嘧啶，其中X是式(3)的基团；R³、R⁴、R⁵和R⁷的含义与权利要求2相同，但4-甲氧基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、4-甲氧基-6-二丙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、4-二甲基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、4-二甲基氨基-6-二丙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、和4-甲基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶除外。

7、  按照权利要求2所述的式(I)化合物，其选自于以下组中：

3，  5-二硝基-2-二甲基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，

3，  5-二硝基-2-二乙基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，

3，  5-二硝基-2-甲基乙基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，

3，  5-二硝基-2-甲基丙基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，

3，  5-二硝基-2-甲基异丙基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，

3，  5-二硝基-2-甲基异丁基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，

3，  5-二硝基-2-乙基丙基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，

3，  5-二硝基-2-乙基异丙基二硫代氨基甲酰基苯甲腈。

8、  按照权利要求2所述的式(I)化合物，其选自于以下组中：

3，  5-二硝基-2-二甲基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，

3，  5-二硝基-2-二乙基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，

3，  5-二硝基-2-甲基乙基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，

3，  5-二硝基-2-甲基丙基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，

3，  5-二硝基-2-甲基异丙基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，

3，  5-二硝基-2-甲基异丁基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，

3，  5-二硝基-2-乙基丙基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，

3，  5-二硝基-2-乙基异丙基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺。

9、  按照权利要求2所述的式(I)化合物，其中R³和R⁴一起表示2，5-二羟基吡咯、1，2，3，6-四羟基吡啶、1，3-thiazolane、1，4-二氧杂-8-氮杂螺[4，5]-癸烷的二价基团。

10、  按照权利要求2所述的式(I)化合物，其选自于以下组中：
4-环丙基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-甲基羟基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-乙氧基-2-甲基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-甲基氨基-6-二甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-二甲基氨基-6-二甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-乙氧基-2-甲基-6-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-丙氧基-6-二甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-甲基氨基-6-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-二甲基氨基-6-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-甲氧基-6-二甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-甲氧基-6-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，

3，  5-二硝基-2-六亚甲基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，

3，  5-二硝基-2-四亚甲基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，

3，  5-二硝基-2-四亚甲基二硫代氨基甲酰基吡啶，

3，  5-二硝基-2-六亚甲基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，
4-甲基氨基-6-七亚甲基二硫代氨基甲酰基5-硝基嘧啶。

11、  一种药物组合物，其包含如权利要求2所述的式(I)化合物。

12、  一种用于治疗哺乳动物中细菌感染的式I化合物：

            式I
其中X是选自于以下组中的二价基团：

其中，
R¹是CN、CONR³R⁴、CONHNR³R⁴；
R²是H、NO₂、CN、CONR³R⁴、CONHNR³R⁴、COOR⁵、CHO、卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、任选被羟基取代的链长为1～7的脂族基团；OR⁵、SR⁵、NR³R⁴、SO₂NR³R⁴、三氟甲基、苯基；
n是0～3；
R³和R⁴相互独立地是H，饱和或不饱和、线性或支化、任选被羟基取代的链长为1～7的脂族基团；具有3～7个碳原子的环烷基；分别是未取代或被(R⁵)_m取代的苄基、苯基或萘基，其中m为1～5；OR⁵；或者NR³R⁴是饱和或不饱和、含有N、S、O杂原子、未取代或被(R⁵)_m取代的单环或多环杂环；
或者，R³和R⁴一起代表如下的二价基团；

R⁵是H，卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、任选被卤原子或羟基取代的链长为1～7的脂族基团；分别是未取代或被(R⁶)_m取代的苄基、苯基、苯乙烯基、或萘基，其中m为1～5；COOH、COOR⁵、CONR³R⁴；
R⁶是H，卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、任选被卤原子或羟基取代的链长为1～7的脂族基团；分别是未取代或被(R⁶)_m取代的苄基、苯基、苯乙烯基、或萘基；COOH、COOR⁵、CONR³R⁴。

13、  一种药物组合物，其包含以下式I的化合物，

                           式I
其中X可以是如下二价基团，


其中，
R¹是CN、CONR³R⁴、CONHNR³R⁴；
R²是H、NO₂、CN、CONR³R⁴、CONHNR³R⁴、COOR⁵、CHO、卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～8的烷醇基，OR⁵、SR⁵、NR³R⁴、SO₂NR³R⁴、三氟甲基、苯基；
n是0～3；
R³和R⁴相互独立地是H、饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，具有3～7个碳原子的环烷基；饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～8的烷醇基；被(R⁵)_m取代的苄基、苯基或萘基，其中m为0～7；OR⁵；或者NR³R⁴是吗啉基，饱和或不饱和、含有N、S、O杂原子并被(R⁵)_m取代的单环或多环杂环；或者R³和R⁴一起组成结构式为-(CH₂)_m-的二价基团，其中m为2～7的整数，或者结构式为-(CH₂CH₂)NR⁶(CH₂CH₂)-的二价基团；或者R³和R⁴一起组成如下的二价基团；

R⁵是H，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，三氟甲基，苄基，苯基，卤原子；饱和或不饱和、卤代或未卤代、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～8的烷醇基，苄基，苯基，苯乙烯基或萘基，每个基团未被取代或被(R⁶)_m取代；COOH、COOR⁵、CONR³R⁴；
R⁶是H，卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，饱和或不饱和、卤代或未卤代、线性或支化、链长为1～8的烷醇基，三氟甲基，苄基，苯基，苯乙烯基或萘基，每个基团未被取代或被(R⁶)_m取代；COOH、COOR⁵、CONR³R⁴。
R⁷是H，卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，OR⁵，SR⁵，NR³R⁴，三氟甲基，苯基，苯乙烯基，每个基团未被取代或被(R⁶)_m取代。

14、  按照权利要求1所述的应用或按照权利要求13所述的药物组合物，其中所述式(I)化合物是：1，5-二硝基-3-氰基-6-二甲基二硫代氨基甲酰基苯、3，5-二硝基-2-二甲基二硫代氨基甲酰基吡啶、3，5-二硝基-6-二甲基氨基-2-二甲基二硫代氨基甲酰基吡啶、4-甲氧基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、4-甲氧基-6-二丙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、4-二甲基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、4-二甲基氨基-6-二丙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、和/或4-甲基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶。

二硫代氨基甲酸酯衍生物及其作为抗菌剂的应用
技术领域
本发明涉及二硫代氨基甲酸酯衍生物，包括新型的二硫代氨基甲酸酯衍生物在哺乳动物(人和动物)间由细菌引起的传染性疾病，尤其是分支杆菌引起的结核病(TB)和麻风病以及葡萄球菌引起的传染性疾病中作为抗菌剂的应用。本发明还涉及新型二硫代氨基甲酸酯衍生物以及包含该衍生物的药物组合物。
背景技术
众所周知，由分支杆菌引发的结核病正在以惊人的速度增加，而且这种细菌对现有的结核药具有耐药性(请参见B.R.Bloom，J.L.Murray，tuberculosis：commentary on a reemergent killer.Science 257，1992，1055-1064)。更为可怕的是这种分支杆菌在逐渐地进化，并具有对多种药物的耐药性(MDR)。现在，这些分支杆菌除了对两种最为有效的结核药，异烟肼和利福平具有耐药性之外，对链霉素、吡嗪酰胺和乙胺丁醇也有了耐药性。在一些国家，具有多种耐药性的结核病(MDR-TB)的比例已经达到了20％以上。在德国，对一种结核病药物具有耐药性的结核病自1996年以来就已经上升了50％。
除了全球结核病总数增加之外，每年全世界由结核病导致的死亡人数已经达到了300万。另外一个令人头疼的问题是如何治疗由多种耐药性的葡萄球菌引起的传染病(请参见：M.Kresken，Bundesgesundheitsblatt 38，1996，170-178)。
为治疗这些疾病，人们急需开发出新一代具有新型治疗机理的药物，尤其是需要克服耐药性问题和现有药物存在的众所周知的副作用问题。
发明内容
本发明的目的就在于提供有潜力成为结核药，对分支杆菌具有活性，而且对其他革兰氏阳性病原体如葡萄球菌具有活性，同时又能够克服耐药性和药物不耐受性问题的新一代化合物。
根据本发明，人们将吃惊地发现二硫代氨基甲酸酯衍生物具有很强的抗菌活性，尤其是对分枝杆菌具有特别明显的活性。
上述目的是通过式I所示的化合物在制备用于治疗或预防细菌感染的药物组合物中的应用以及包含该化合物的药物组合物而实现的：

                            式I
其中X是选自于以下组中的二价基团：

其中，
R¹是CN、CONR³R⁴、CONHNR³R⁴；
R²是H、NO₂、CN、CONR³R⁴、CONHNR³R⁴、COOR⁵、CHO、卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～8的烷醇基，OR⁵、SR⁵、NR³R⁴、SO₂NR³R⁴、三氟甲基、苯基；
n是0～3；
R³和R⁴相互独立地是H、饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，具有3～7个碳原子的环烷基，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～8的烷醇基；(R⁵)_m取代的苄基、苯基或萘基，其中m为0～7；OR⁵；或者NR³R⁴是吗啉基，饱和或不饱和、含有N、S、O杂原子并被(R⁵)_m取代的单环或多环杂环基；或者R³和R⁴一起组成结构为-(CH₂)_m-的二价基团，其中m为2～7，或结构为-(CH₂CH₂)NR⁶(CH₂CH₂)-的二价基团；或者R³和R⁴一起组成结构如下的二价基团；

R⁵是H，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，三氟甲基，苄基、苯基、卤原子；饱和或不饱和、卤代或未卤代、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～8的烷醇基，苄基、苯基、苯乙烯基、或萘基，每个基团是未取代的或被(R⁶)_m取代的；COOH、COOR⁵、CONR³R⁴；
R⁶是H，卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，饱和或不饱和、卤代或未卤代、线性或支化、链长为1～8的烷醇基，三氟甲基，苄基，苯基，苯乙烯基，萘基，每个基团是未取代的或被(R⁶)_m取代的；COOH、COOR⁵、CONR³R⁴；
R⁷是H，卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，OR⁵，SR⁵，NR³R⁴，三氟甲基，苯基，苯乙烯基，每个基团是未取代的或被(R⁶)_m取代的。
根据本发明的具体实施方案，前述式I的化合物选自于以下组中：1，5-二硝基-3-氰基-6-二甲基二硫代氨基甲酰基苯、3，5-二硝基-2-二甲基二硫代氨基甲酰基吡啶、3，5-二硝基-6-二甲基氨基-2-二甲基二硫代氨基甲酰基吡啶、4-甲氧基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，4-甲氧基-6-二丙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、4-二甲基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、4-二甲基氨基-6-二丙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、和4-甲基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶。
更具体而言，本发明涉及的是式I的新型化合物以及它们在制备用于治疗或预防病菌引起的传染性疾病的药物中的应用：

           式I
其中X是选自于以下组中的二价基团：

其中，
R¹是CN、CONR³R⁴、CONHNR³R⁴；
R²是H、NO₂、CN、CONR³R⁴、CONHNR³R⁴、COOR⁵、CHO、卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、任选被羟基取代的链长为1～7的脂族基团；OR⁵、SR⁵、NR³R⁴、SO₂NR³R⁴、三氟甲基、苯基；
n是0～3；
在X＝1时，R³和R⁴相互独立地是H，不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团，具有3～7个碳原子的环烷基；饱和或不饱和、线性或支化、被羟基取代的链长为1～8的烷基；分别是未取代或者被(R⁵)_m取代的苄基、苯基或萘基，其中m为1～5；OR⁵；或者NR³R⁴是饱和或不饱和、含有N、S、O杂原子、未取代或被(R⁵)_m取代的单环或多环杂环；
在X＝2～4时，R³和R⁴相互独立地是H，饱和或不饱和、线性或支化、任选被羟基取代地链长为1～7的脂族基团，具有3～7个碳原子的环烷基；分别是未取代或被(R⁵)_m取代的苄基、苯基或萘基，其中m为1～5；OR⁵；或者NR³R⁴是饱和或不饱和、含有N、S、O杂原子、并被(R⁵)_m取代的单环或多环杂环；
或者在X＝1～4时，R³和R⁴一起代表如下的二价基团；

R⁵是H，卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、任选被卤原子或羟基取代的链长为1～7的脂族基团；分别是未取代或被(R⁶)_m取代的苄基、苯基、苯乙烯基、或萘基，其中m为1～5；COOH、COOR⁵、CONR³R⁴；
R⁶是H，卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、任选被卤原子或羟基取代的链长为1～7的脂族基团，分别是未取代或被(R⁶)_m取代的苄基、苯基、苯乙烯基、或萘基；COOH、COOR⁵、CONR³R⁴；
但排除以下化合物：3，5-二硝基-2-二甲基二硫代氨基甲酰基吡啶、3，5-二硝基-6-二甲基氨基-2-二甲基二硫代氨基甲酰基吡啶、4-甲氧基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、4-甲氧基-6-二丙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、4-二甲基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、4-二甲基氨基-6-二丙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶、4-甲基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶(Khim.Geterotsikl.Soedin.，(Rus.)1994，10，p.1420-1423，CA 122：314512)、以及4-甲基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶(Acta Cryst.Section C，2001，C57，p.72-75)。
在优选实施方案中，本发明涉及选自于以下组中的式I化合物：
3，5-二硝基-2-R³R⁴-二甲基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，
3，5-二硝基-2-R³R⁴-二甲基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，
3，5-二硝基-2-R³R⁴-二甲基二硫代氨基甲酰基吡啶，
4-R⁷-2-R⁵-6-R³R⁴-二甲基二硫代氨基甲酰基5-硝基-嘧啶；
其中R³、R⁴、R⁵和R⁷与上述定义相同，但不包括以下化合物：3，5-二硝基-2-二甲基二硫代氨基甲酰基吡啶，4-甲氧基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，4-甲氧基-6-二丙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，4-二甲基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，4-二甲基氨基-6-二丙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶和4-甲基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶。
更加确切地说，本发明涉及至少一种选自于以下组中的化合物：
4-环丙基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-甲基羟基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-乙氧基-2-甲基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-甲基氨基-6-二甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-二甲基氨基-6-二甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-乙氧基-2-甲基-6-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-丙氧基-6-二甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-甲基氨基-6-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-二甲基氨基-6-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-甲氧基-6-二甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
4-甲氧基-6-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶，
3，5-二硝基-2-六亚甲基二甲基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，
3，5-二硝基-2-四亚甲基二甲基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，
3，5-二硝基-2-四亚甲基二甲基二硫代氨基甲酰基吡啶，
3，5-二硝基-2-六亚甲基二甲基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，
4-甲基氨基-6-七亚甲基二甲基二硫代氨基甲酰基5-硝基嘧啶，
进一步地，
3，5-二硝基-2-二甲基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，
3，5-二硝基-2-二乙基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，
3，5-二硝基-2-甲基乙基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，
3，5-二硝基-2-甲基丙基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，
3，5-二硝基-2-甲基异丙基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，
3，5-二硝基-2-甲基异丁基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，
3，5-二硝基-2-乙基丙基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，
3，5-二硝基-2-乙基异丙基二硫代氨基甲酰基苯甲腈，
3，5-二硝基-2-二甲基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，
3，5-二硝基-2-二乙基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，
3，5-二硝基-2-甲基乙基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，
3，5-二硝基-2-甲基丙基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，
3，5-二硝基-2-甲基异丙基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，
3，5-二硝基-2-甲基异丁基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，
3，5-二硝基-2-乙基丙基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺，
3，5-二硝基-2-乙基异丙基二硫代氨基甲酰基苯甲酰胺。
前述及后面将要提到的取代基具有如下含义：饱和或不饱和、线性或支化、链长为1～7的脂族基团例如是含有1～6个碳原子、任选插有一个氧原子、硫原子或NR⁶的相应烷基、烯基或炔基。饱和或不饱和、含有N、S、O杂原子的单环或多环杂环例如是吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪嗪基、吡咯烷基或piperinyl等五元或六元杂环。其中R³和R⁴一起表示如下二价基团的式I化合物，优选相对于将中心哌嗪环分隔成对等的两部分的对称轴是对称的：

令人吃惊的是，本发明涉及的化合物具有极强的抗菌活性，尤其是对分支杆菌、结核菌和具有多种耐药性的葡萄球菌(MRSA)的活性更强。对生长速度极快的分支杆菌，本发明化合物的最小抑制浓度为0.1～50μg/ml；对结核菌，最小抑制浓度为3.12～12.5μg/ml；对具有多种耐药性的葡萄球菌，最小抑制浓度为0.4～50μg/ml。
因此，本发明涉及的化合物可用于治疗细菌感染，尤其适用于人和动物中由结核菌和其他分支杆菌引起的感染。
相应地，本发明还涉及了含有一种或多种(即至少一种)前述式I化合物的药物组合物。
本发明还涉及的是用于治疗或预防哺乳动物中细菌感染或者是用于制备治疗或预防哺乳动中细菌感染的药物组合物的式I化合物：

    式I
其中X是选自于以下组中的二价基团：


其中，
R¹是CN、CONR³R⁴、CONHNR³R⁴；
R²是H、NO₂、CN、CONR³R⁴、CONHNR³R⁴、COOR⁵、CHO、卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、任选被羟基取代的链长为1～7的脂族基团；OR⁵、SR⁵、NR³R⁴、SO₂NR³R⁴、三氟甲基、苯基；
n是0～3；
R³和R⁴相互独立地是H，饱和或不饱和、线性或支化、任选被羟基取代的链长为1～7的脂族基团；具有3～7个碳原子的环烷基；分别是未取代或被(R⁵)_m取代的苄基、苯基或萘基，其中m为1～5；OR⁵；或者NR³R⁴是饱和或不饱和、含有N、S、O杂原子、未取代或被(R⁵)_m取代的单环或多环杂环；
或者，R³和R⁴一起代表如下的二价基团；

R⁵是H，卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、任选被卤原子或羟基取代的链长为1～7的脂族基团；分别是未取代或被(R⁶)_m取代的苄基、苯基、苯乙烯基、或萘基，其中m为1～5；COOH、COOR⁵、CONR³R⁴；
R⁶是H，卤原子，饱和或不饱和、线性或支化、任选被卤原子或羟基取代的链长为1～7的脂族基团；分别是未取代或被(R⁶)_m取代的苄基、苯基、苯乙烯基、或萘基；COOH、COOR⁵、CONR³R⁴。
此等方法中的优选式I化合物是如上具体列出者。
在药物学上可接受的水性、有机或水性—有机介质中，可将前述化合物配制成稀溶液或悬浮液，以便用于局部给药或者通过静脉注射、皮下注射或肌肉注射进行非胃肠道投药，或者用于鼻内给药；也可以用常规的赋形剂制备成片剂、胶囊或水混悬剂用于口服给药，或者制备成栓剂。
前述化合物的使用剂量为0.1～1000mg/kg体重。
下面通过实例对本发明进行更加详细的描述，但发明不局限于此。
本发明所述化合物的结构通过合成方法、元素分析以及核磁共振或质谱、X衍射等方法进行确定。
                      实验部分
原材料
氯代芳烃类原料直接由市场购买或自己合成：4-氯-6-R-5-硝基-嘧啶根据Chesney J.D.，Gonzales-Sierra M.，Pharm.Res.，1985，p.145-147 andClark J.，Parvizi B.，Colmam R.，J.Chem.Soc.，Perkin Trans 1，1976，p.1004-1007所述的方法合成；3，5-二硝基-2-氯-苯甲腈和3，5-二硝基-2-氯-苯甲酰胺根据Thiel W.，Mayer R.，J.Prakt.Chemie，B328，1986，p.497-514所述的方法合成；二硫代氨基甲酸钠根据经典的方法由二硫化碳、氢氧化钠和不同的胺类化合物制备，并通过在乙醇或丙酮中重结晶进行提纯。有些二硫代氨基甲酸钠可直接由市场购买。
实施例1
4-异丙基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基嘧啶(1)
将4-异丙基氨基-6-氯-5-硝基嘧啶(0.94g，4.0mmol)、三水合二乙基二硫代氨基甲酸钠(1.05g，4.6mmol)和乙醇(25mL)在室温下混合24小时。反应混和物用水(50mL)稀释，滤出黄色固体，用乙醇重结晶进行提纯，得到0.8g黄色晶体状的标题化合物，熔点为165～167℃。
计算和分析得到的C₁₂H₁₇N₅O₂S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，44.02；H，5.23；N，21.39；S，19.59
分析值：C，44.31；H，5.17；N，21.52；S，19.78
实施例2
4-环丙基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基-嘧啶(2)
按照实施例1所述的方法，得熔点为143～145℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₂H₁₇N₅O₂S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，44.02；H，5.23；N，21.39；S，19.59
分析值：C，44.17；H，5.31；N，21.39；S，19.38
实施例3
3，5-二硝基-2-二乙基二硫代氨基甲酰基苯甲腈(3)
将3，5-二硝基-2-氯-苯甲腈(1.5g，6.6mmol)、三水合二乙基二硫代氨基甲酸钠(1.6g，7.1mmol)和乙醇(40mL)在室温下混合2小时。反应混和物用活性碳处理，过滤，滤液用水(80mL)稀释，滤出黄色固体。用异丙醇和丙醇/水混合溶液连续重结晶进行提纯，得到黄色晶体状的纯标题化合物1.2g，熔点为151～153℃。
计算和分析得到的C₁₂H₁₂N₄O₄S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，42.34；H，3.55；N，16.46；S，18.84
分析值：C，42.32；H，3.46；N，16.41；S，18.69
实施例4
4-甲基氨基-6-二甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基-嘧啶(7)
将4-甲基氨基-6-氯-5-硝基-嘧啶(0.7g，3.7mmol)、二水合二甲基二硫代氨基甲酸钠(0.7g，3.9mmol)、乙醇(15mL)和丙酮(15mL)在室温下混合4小时。反应混和物用水(60mL)稀释，滤出黄色固体。用乙醇重结晶提纯，得到黄色晶体状的纯标题化合物0.5g，熔点为136～137℃。
计算和分析得到的C₈H₁₁N₅O₂S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，35.15；H，4.06；N，25.62；S，23.46
分析值：C，34.95；H，4.11；N，25.53；S，23.58
实施例5
4-甲基氨基-6-六亚甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基-嘧啶(20)
按照实施例4所述的方法，得熔点为180～182℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₁H₁₅N₅O₂S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，42.16；H，4.82；N，22.35；S，20.46
分析值：C，42.11；H，5.01；N，22.42；S，20.49
实施例6
4-甲基氨基-6-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基-嘧啶(12)
按照实施例4所述的方法，得熔点为213～215℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₀H₁₃N₅O₂S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，40.12；H，4.38；N，23.39；S，21.42
分析值：C，40.23；H，4.37；N，23.47；S，21.35
实施例7
4-甲基羟基氨基-6-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基-嘧啶(5)
按照实施例4所述的方法，得熔点为92～94℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₀H₁₅N₅O₃S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，37.84；H，4.76；N，22.07；S，20.21
分析值：C，37.81；H，4.57；N，22.01；S，20.33
实施例8
4-二甲基氨基-6-二甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基-嘧啶(8)
按照实施例4所述的方法，得熔点为135～137℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₉H₁₃N₅O₂S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，37.62；H，4.56；N，24.37；S，22.32
分析值：C，37.66；H，4.48；N，24.49；S，22.39
实施例9
4-二甲基氨基-6-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基-嘧啶(13)
按照实施例4所述的方法，得熔点为130～132℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₁H₁₅N₅O₂S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，42.16；H，4.82；N，22.35；S，20.46
分析值：C，42.23；H，4.88；N，22.36；S，20.23
实施例10
3，5-二硝基-2-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-噻吩(28)
将3，5-二硝基-2-氯-噻吩(0.5g，2.4mmol)、二水合四亚甲基二硫代氨基甲酸钠(0.6g，2.9mmol)和乙醇(40mL)在室温下混合5小时。反应混和物用水(100mL)稀释，滤出浅棕黄色固体。用乙醇/水混合溶液重结晶提纯，得到黄色晶体状的纯标题化合物0.4g，熔点为178～180℃。
计算和分析得到的C₉H₉N₃O₄S₃的不同元素的含量为：
计算值：C，33.85；H，2.84；N，13.16；S，30.12
分析值：C，33.93；H，2.71；N，13.27；S，30.16
实施例11
3，5-二硝基-2-二甲基二硫代氨基甲酰基-苯甲腈(9)
将3，5-二硝基-2-氯-苯甲腈(2.0g，8.8mmol)、二水合二甲基二硫代氨基甲酸钠(1.7g，9.5mmol)和乙醇(50mL)在室温下混合0.5小时。反应混和物用水(100mL)稀释，滤出黄色固体。用加有活性碳的乙醇重结晶提纯，得到桔黄色晶体状的标题化合物1.4g，熔点为147～149℃。
计算和分析得到的C₁₀H₈N₄O₄S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，38.46；H，2.58；N，17.94；S，20.53
分析值：C，38.61；H，2.58；N，17.93；S，20.52
实施例12
3，5-二硝基-2-六亚甲基二硫代氨基甲酰基-苯甲腈(19)
按照实施例11所述的方法，得熔点为148～150℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₄H₁₄N₄O₄S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，45.62；H，3.85；N，15.29；S，17.50
分析值：C，45.56；H，3.87；N，15.37；S，17.42
实施例13
3，5-二硝基-2四亚甲基二硫代氨基甲酰基-苯甲腈(22)
按照实施例11所述的方法，得熔点为131～134℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₂H₁₀N₄O₄S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，42.60；H，2.98；N，16.56；S，18.95
分析值：C，42.67；H，3.08；N，16.63；S，19.04
实施例14
3，5-二硝基-2甲基乙基二硫代氨基甲酰基-苯甲腈(23)
按照实施例11所述的方法，得熔点为112～114℃的桔黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₁H₁₀N₄O₄S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，42.34；H，3.55；N，16.46；S，18.84
分析值：C，42.49；H，3.62；N，16.34；S，18.73
实施例15
3，5-二硝基-2-甲基乙基二硫代氨基甲酰基-苯甲腈(24)
按照实施例11所述的方法，得熔点为167～169℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₂H₁₂N₄O₄S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，40.48；H，3.09；N，17.17；S，19.65
分析值：C，40.51；H，3.03；N，17.28；S，19.53
实施例16
4-甲氧基-6-二甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基-嘧啶(14)
将4-甲氧基-6-氯-5-硝基-嘧啶(0.5g，2.6mmol)、二水合二甲基二硫代氨基甲酸钠(0.6g，3.3mmol)和乙醇(40mL)在室温下混合1小时。反应混和物用水(80mL)稀释，滤出浅黄色固体。用甲醇重结晶提纯，得到亮黄色晶体状的标题化合物1.4g，熔点为122～125℃。
计算和分析得到的C₈H₁₀N₄O₃S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，35.03；H，3.67；N，20.42；S，23.38
分析值：C，34.93；H，4.02；N，20.50；S，23.42
实施例17
4-甲氧基-6-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基-嘧啶(15)
按照实施例16所述的方法，得熔点为147～149℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₀H₁₂N₄O₃S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，39.99；H，4.03；N，18.65；S，21.35
分析值：C，39.98；H，4.06；N，18.73；S，21.32
实施例18
4-甲基氨基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基-嘧啶(4)
按照实施例16所述的方法，得熔点为147～150℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₀H₁₅N₅O₂S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，39.85；H，5.02；N，23.24；S，21.28
分析值：C，39.89；H，4.97；N，23.33；S，21.20
实施例19
4-甲氧基-6-甲基乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基-嘧啶(25)
按照实施例16所述的方法，得熔点为154～156℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₉H₁₂N₄O₃S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，37.49；H，4.19；N，19.45；S，22.24
分析值：C，37.38；H，4.10；N，19.55；S，22.37
实施例20
4-乙氧基-2-甲基-6-二乙基二硫代氨基甲酰基-5-硝基-嘧啶(6)
按照实施例16所述的方法，得熔点为108～110℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₂H1₈N₄O₃S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，43.62；H，5.49；N，16.96；S，19.41
分析值：C，43.74；H，5.45；N，16.82；S，20.01
实施例21
4-乙氧基-2-甲基-6-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基-嘧啶(10)
按照实施例16所述的方法，得熔点为100～102℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₀H₁₃N₅O₂S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，40.12；H，4.38；N，23.39；S，21.42
分析值：C，40.23；H，4.37；N，23.47；S，21.35
实施例22
4-丙氧基-6-二甲基二硫代氨基甲酰基-5-硝基-嘧啶(11)
按照实施例16所述的方法，得熔点为107～109℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₀H₁₄N₄O₃S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，39.72；H，4.67；N，18.53；S，21.21
分析值：C，40.04；H，4.65；N，18.42；S，21.56
实施例23
3，5-二硝基-2-六亚甲基二硫代氨基甲酰基-苯甲酰胺(16)
将3，5-二硝基-2-氯-苯甲酰胺(0.7g，2.9mmol)、二水合六亚甲基二硫代氨基甲酸钠(0.7g，3.0mmol)和乙醇(50mL)在室温下混合0.5小时。反应混和物用水(100mL)和乙酸乙酯(50mL)萃取，水层再用30mL乙酸乙酯萃取两次，合并有机相。然后依次用水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，真空浓缩，得棕色油状物。油状物用水处理，过滤，得黄色固体。用乙醇重结晶提纯，得到黄色晶体状的标题化合物0.6g，熔点为187～189℃。
计算和分析得到的C₁₄H₁₆N₄O₅S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，43.74；H，4.20；N，14.57；S，16.68
分析值：C，43.82；H，3.99；N，14.77；S，16.57
实施例24
3，5-二硝基-2-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-苯甲酰胺(17)
将3，5-二硝基-2-氯-苯甲酰胺(1.0g，4.0mmol)、二水合四亚甲基二硫代氨基甲酸钠(0.9g，4.4mmol)和丙酮(40mL)在室温下混合0.5小时。反应混和物用水(80mL)稀释。过滤出黄色固体，并用异丙醇重结晶提纯，得到浅黄色晶体状的标题化合物0.9g，熔点为116～118℃。
计算和分析得到的C₁₂H₁₂N₄O₅S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，40.44；H，3.39；N，15.72；S，18.00
分析值：C，40.57；H，3.42；N，15.64；S，17.87
实施例25
3，5-二硝基-2-(1，4-二氧杂-8-氮杂螺[4，5]癸烷基)二硫代氨基甲酰基-苯甲酰胺(26)
按照实施例23所述的方法，得熔点为144～146℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₀H₁₂N₄O₃S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，42.05；H，3.76；N，13.08；S，14.97
分析值：C，42.09；H，3.66；N，13.13；S，14.84
实施例26
3，5-二硝基-2-(1，4-thiazolan)-二硫代氨基甲酰基-苯甲酰胺(26)
按照实施例23所述的方法，得熔点为123～126℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₁H₁₀N₄O₅S₃的不同元素的含量为：
计算值：C，35.29；H，2.69；N，14.96；S，25.69
分析值：C，35.14；H，2.61；N，15.02；S，25.73
实施例27
3，5-二硝基-2-四亚甲基-二硫代氨基甲酰基-吡啶(18)
将3，5-二硝基-2-氯-吡啶(0.5g，2.4mmol)、二水合四亚甲基二硫代氨基甲酸钠(0.6g，2.9mmol)和乙醇(40mL)在室温下混合3小时。反应混和物用水(80mL)稀释。过滤，得浅棕黄色固体。用乙醇/DMF重结晶提纯，得到浅黄色晶体状的标题化合物0.5g，熔点为157～159℃。
计算和分析得到的C₁₀H₁₀N₄O₄S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，38.21；H，3.21；N，17.82；S，20.40
分析值：C，38.03；H，3.22；N，17.79；S，20.44
实施例28
3，5-二硝基-2-甲基-二硫代氨基甲酰基-噻吩(29)
按照实施例27所述的方法，得熔点为169～171℃的浅黄色晶体。
计算和分析得到的C₇H₇N₃O₄S₃的不同元素的含量为：
计算值：C，28.66；H，2.41；N，14.32；S，32.79
分析值：C，28.54；H，2.33；N，14.29；S，32.90
实施例29
3-硝基-5-甲基氨基磺酰基-2-四亚甲基二硫代氨基甲酰基-苯甲酰胺(30)
按照实施例27所述的方法，得熔点为136～138℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₈H₁₁N₃O₄S₄的不同元素的含量为：
计算值：C，28.14；H，3.25；N，12.31；S，37.56
分析值：C，28.25；H，3.37；N，12.26；S，37.47
实施例30
2-甲基-4-甲基氨基-5-硝基-6-甲基乙基二硫代氨基甲酰基-嘧啶(21)
按照实施例27所述的方法，得熔点为172～174℃的黄色晶体。
计算和分析得到的C₁₀H₁₅N₅O₂S₂的不同元素的含量为：
计算值：C，39.85；H，5.02；N，23.24；S，21.28
分析值：C，40.11；H，5.12；N，23.29；S，21.41
实施例31
本发明所述化合物对葡萄球菌和分支杆菌的抗菌活性的测定。
按照NCCLS指导原则(National Committee for Clinical LaboratoryStandards：Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteriathat grow aerobically；4th Ed.；Villanova，Ed.；Approved standard DocumentM7-A4.NCCLS，(1997))，通过在Mueller-Hinton肉汤(Difco)中采用微量肉汤稀释法测定本发明化合物对具有多种耐药性的葡萄球菌菌株MRSA 134/93和994/93，以及对Mycobacterium smegmatis SG 987、M.aureum SB66、M.vaccae IMET 1010670和M.fortuitum B的最低抑制浓度(MIC)，由此测定这些化合物的抗菌活性。实验结果见表1。采用下述方法测定最低抑制浓度(MIC)和最低细菌浓度(MBC)，由此测试本发明化合物对M.tuberculosis H37Rv以及两种具有耐药性的临床分离菌株的活性。
将菌株接种于固态罗氏(Lowenstein-Jensen)培养基中。21天后，将培养基制成接种体悬浮液，菌株的浓度相当于5×10⁸个微生物细胞/mL。将0.2mL上述悬浮液接种于含有本发明所述化合物的浓度为100.0～0.195μg/mL的2mL液态Shkolnikova培养基中。在37℃保温培养14天。然后，将培养液在300RPM的转速下离心分离15分钟，弃去表面的悬浮物，沉积物再用0.8mL的无菌0.9％NaCl悬浮。用0.1mL上述悬浮液涂片，然后用萋-纳氏法(Ziehl-neelsen)染色。其余沉积物分别接种于三个不含罗氏(Lowenstein-Jensen)培养液的试管中，以测定最低细菌浓度。在37℃保温培养21～28天后，读取结果。用同样的菌株但不含本发明所述的化合物进行相同实验，作为空白对比样品。
药物的最低细菌浓度(MBC)可以看作是在固态培养基上完全抑制分支杆菌生长所需的药物浓度。抑菌效果则是在只有一种分支杆菌存在的情况下，通过与空白样比较，由药物降低的细菌的数量来表示。三种菌株的平均实验结果见表2。
表1：通过最低抑制浓度(MIC)[μg/mL]测定的式I化合物的抗菌活性