作为葡糖激酶(GLK)调 制剂的氨基烟酸盐衍生物 本发明涉及激活葡糖激酶(GLK)、导致胰岛素分泌的葡萄糖阈值降低的化合物。此外所述的化合物预计是通过增加肝脏葡萄糖摄取降低血液葡萄糖。这些化合物可以实用于治疗2型糖尿病和肥胖症。本发明还涉及含有本发明化合物的药物组合物，和所述化合物在上述病症中的用途。
在胰腺β-细胞和肝脏实质细胞中主要的血浆膜葡萄糖转运蛋白是GLUT2。在生理葡萄糖浓度下GLUT2转运葡萄糖穿过膜的速率不是葡萄糖摄取进入这些细胞的总速率的限制速率。葡萄糖摄取的速率是由葡萄糖成为葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)的磷酸化作用的速率限制的，该作用经葡糖激酶(GLK)催化[1]。GLK对于葡萄糖具有高(6-10mM)Km且不被G-6-P的生理浓度抑制。GLK表达局限在少数组织和细胞类型，最常见的是胰腺β-细胞和肝脏细胞(肝细胞)[1]。在这些细胞中GLK活性是葡萄糖利用的限速作用且由此调控葡萄糖引起的胰岛素分泌的程度和肝糖原合成。这些过程在整体葡萄糖内稳态的维持中十分关键且两者在糖尿病中均功能不全[2]。
在一种亚型糖尿病，青年的II型发育期发作糖尿病(MODY-2)中，该糖尿病是由功能突变的GLK损失引起的[3，4]。在MODY-2患者中高血糖源自胰腺和肝脏[5]两者中地缺损性葡萄糖利用。MODY-2患者的胰腺中缺损性葡糖利用导致葡糖促胰岛素分泌的阈值升高。相反，稀有的GLK的激活突变作用降低该阈值导致家族性胰岛素分泌过多[6，7]。除了在MODY-2糖尿病中观察到降低的GLK活性以外，肝脏葡糖激酶活性在II型糖尿病中也降低[8]。重要的是，GLK的全面或肝脏选择性过度表达阻止或逆转该疾病的饮食和遗传模型两者中糖尿病表型的噁化[9-12]。此外，II型糖尿病和果糖的快速治疗通过促进肝脏葡糖利用改进葡糖耐受性[13]。确信这种效应是通过下列机理由[13]果糖诱发的肝细胞中胞质GLK活性增高来介导的。
通过与GLK调节蛋白(GLKRP)缔合可抑制肝脏GLK活性。GLK/GLKRP复合物通过果糖-6-磷酸(F6P)结合GLKRP稳定化且通过果糖-1-磷酸(F1P)置换这种糖磷酸去稳定化。在果糖激酶介导的食物果糖的磷酸化作用介导下生成F1P。所以，GLK/GLKRP复合物的完整性和肝脏GLK活性以营养依赖方式受到调节，因为F6P在吸收后状态升高而F1P在进餐后状态占优势。与肝细胞形成对照，胰腺β-细胞在GLKRP不存在的条件下表达GLK。所以，β-细胞GLK活性仅仅由其底物葡萄糖的可利用性来调节。小分子可以直接或者通过使GLK/GLKRP复合物去稳定化来激活GLK。前者种类的化合物预计可促进肝脏和胰腺两者中的葡糖利用而后者预计仅仅在肝脏中起作用。然而，具有一种性能的化合物预计具有治疗II型糖尿病的治疗效益，因为这种疾病特征在于在上述两种组织中的缺损性葡糖利用。
GLK和GLKRP和KATP通道表达在下丘脑的神经元中，下丘脑是调节能量平衡和控制食物摄取非常重要的脑区域[14-18]。已经证实这些神经元表达开胃和厌食神经肽[15，19，20]且被推断是下丘脑内的葡萄糖传感神经元，它们通过环境葡糖浓度的改变来抑制或兴奋[17，19，21，22]。这些神经元感觉葡糖水平变化的能力在多种遗传和试验诱导的肥胖模型中缺损[23-28]。葡糖类似物，也就是葡糖激酶的竞争性抑制剂的脑室内(icv)输注，促进瘦弱大鼠的食物摄取[29，30]。相反，葡糖的icv输注抑制进食[31]。所以，GLK的小分子激活剂可以通过对GLK的中央在于减少食物摄取和体重增加。所以，GLK激活剂可以治疗性应用于治疗除糖尿病以外的饮食性疾病，包括肥胖。下丘脑的作用将与这些化合物的作用加合或协同地在肝脏和/或胰腺中发挥使葡萄糖内稳态正常化的作用，例如治疗II型糖尿病。所以GLK/GLKRP系统可以描述成为潜在“糖尿病肥胖”靶向(作用于糖尿病和肥胖两者)。
在WO0058293和WO 01/44216(Roche)中，描述了一系列作为葡糖激酶激活剂的苄基氨基甲酰基化合物。此类化合物激活GLK的机理是通过测量这些化合物在GLK活性与NADH生成键合的试验中的直接作用来评估的，也就是测定光学-体外试验的详情参见实施例A所述。
在WO 9622282/93/94/95和WO9749707/8中公开了许多用于制备用作后叶加压素药物的化合物的中间体，其涉及那些本发明公开的化合物。有关化合物也公开在WO 9641795和JP 8143565(后叶加压素拮抗)，在JP 8301760(皮肤损伤预防)和EP 619116(osetpathy)中。
我们提供式(I)的化合物或其盐、前药或溶剂化物在制备用于治疗或预防通过GLK介导的疾病或医学病症的药物中的用途作为本发明的一个特征：
式(I)
其中
m是0，1或2；
n是0，1，2，3或4；和
n+m＞0；
各R1独立地选自OH，-(CH2)1-4OH，-CH3-aFa，-(CH2)1-4CH3-aFa，卤素，C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6链炔基，NO2，NH2，-NH-C1-4烷基，-N-二-(C1-4烷基)，CN或甲酰基；
各R2是基团Y-X-，其中各X是独立地选自下列的连接基：-O-Z-，-O-Z-O-Z-，-C(O)O-Z-，-OC(O)-Z-，-S-Z-，-SO-Z-，-SO2-Z-，-N(R6)-Z-，-N(R6)SO2-Z-，-SO2N(R6)-Z-，-(CH2)1-4-，-CH＝CH-Z-，-C≡C-Z-，-N(R6)CO-Z-，-CON(R6)-Z-，-C(O)N(R6)S(O)2-Z-，-S(O)2N(R6)C(O)-Z-，-C(O)-Z-或直接键；
各Z独立地是直接键或式-(CH2)p-C(R6)2-(CH2)q-的基团；
各Y独立地选自芳基-Z1-，杂环基-Z1-，C3-7环烷基-Z1-，C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6链炔基或-(CH2)1-4CH3-aFa；
其中各Y独立地选择性被至多3个R4基团取代；
各R4独立地选自卤素，-CH3-aFa，CN，NO2，NH2，C1-6烷基，-OC1-6烷基，-COOH，-C(O)OC1-6烷基，OH或苯基，或
R5-X1-，其中X1独立地如上述X定义和R5选自氢，C1-6烷基，-CH3-aFa，苯基，萘基，杂环基或C3-7环烷基；和R5选择性地被卤素，C1-6烷基，-CH3-aFa，CN，NO2，NH2，COOH或-C(O)OC1-6烷基取代，其中
R5中各苯基，萘基或杂环基环选择性地被卤素，CH3-aFa，CN，NO2，NH2，C1-6烷基，-OC1-6烷基，COOH，-C(O)OC1-6烷基或OH取代；
各Z1独立地是直接键或式-(CH2)p-C(R6)2-(CH2)q-的基团；
R3选自氢或C1-6烷基；和
R6独立地选自氢，C1-6烷基或-C2-4烷基-O-C1-4烷基；
各a独立地是1，2或3；
p是0-2之间的整数；
q是0-2之间的整数；和
p+q＜4。
按照本发明的另一特征提供式(Ia)的化合物或或其盐、前药或溶剂化物，在制备用于治疗或预防通过GLK介导的疾病或医学病症的药物中的用途：
式(Ia)
其中
m是0，1或2；
n是0，1，2，3或4；和
n+m＞0；
各R1独立地选自OH，-(CH2)1-4OH，-CH3-aFa，-(CH2)1-4CH3-aFa，卤素，C2-6链烯基，C2-6链炔基，NO2，NH2，或CN；
各R2是基团Y-X，其中各X是独立地选自的连接基：-O(CH2)0-2-，-(CH2)0-2O-，-C(O)O(CH2)0-2-，-S(CH2)0-2-，-SO(CH2)0-2-，-SO2(CH2)0-2-，-NHSO2，-SO2NH-，-(CH2)1-4-，-CH＝CH(CH2)0-2-，-C≡C(CH2)0-2-，-NHCO-，或-CONH-；
各Y独立地选自苯基(CH2)0-2，萘基(CH2)0-2，杂环基(CH2)0-2，C3-7环烷基(CH2)0-2，C1-6烷基，C2-6链烯基或C2-6链炔基；和
各Y独立地选择性被R4取代；
各R4独立地选自卤素，-CH3-aFa，CN，NO2，NH2，C1-6烷基，-OC1-6烷基，COOH，-C(O)OC1-6烷基，OH，苯基，
或R5-X1-，其中X1独立地如上述X定义，和R5选自氢，C1-6烷基，-CH3-aFa，苯基，萘基，杂环基或C3-7环烷基；
和R5选择性地被卤素，C1-6烷基，-CH3-aFa，CN，NO2，NH2，COOH和-C(O)OC1-6烷基取代；
各a独立地是1，2或3；
R3选自氢或C1-6烷基。
按照本发明的另一特征提供式(Ib)的化合物或其盐、溶剂化物或前药；
式(Ib)
其中
m是0，1或2；
n是0，1，2，3或4；
和n+m＞0；
各R1独立地选自OH，-(CH2)1-4OH，-CH3-aFa，-(CH2)1-4CH3-aFa，卤素，C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6链炔基，NO2，NH2，-NH-C1-4烷基，-N-二-(C1-4烷基)，CN或甲酰基；
各R2是基团Y-X-，其中各X是独立地选自下列的连接基：-O-Z-，-O-Z-O-Z-，-C(O)O-Z-，-OC(O)-Z-，-S-Z-，-SO-Z-，-SO2-Z-，-N(R6)-Z-，-N(R6)SO2-Z-，-SO2N(R6)-Z-，-(CH2)1-4-，-CH＝CH-Z-，-C≡C-Z-，-N(R6)CO-Z-，-CON(R6)-Z-，-C(O)N(R6)S(O)2-Z-，-S(O)2N(R6)C(O)-Z-，-C(O)-Z-或直接键；
各Z独立地是直接键或式-(CH2)p-C(R6)2-(CH2)q-的基团；
各Y独立地选自芳基-Z1-，杂环基-Z1-，C3-7环烷基-Z1-，C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6链炔基或-(CH2)1-4CH3-aFa；其中各Y独立地选择性被至多3个R4基团取代；
各R4独立地选自卤素，-CH3-aFa，CN，NO2，NH2，C1-6烷基，-OC1-6烷基，-COOH，-C(O)OC1-6烷基，OH或苯基，
或R5-X1-，其中X1独立地如上述X定义和R5选自氢，C1-6烷基，-CH3-aFa，苯基，萘基，杂环基或C3-7环烷基；和R5选择性地被卤素，C1-6烷基，-CH3-aFa，CN，NO2，NH2，COOH或-C(O)OC1-6烷基取代，其中R5各苯基，萘基或杂环基环选择性地被卤素，CH3-aFa，CN，NO2，NH2，C1-6烷基，-OC1-6烷基，COOH，-C(O)OC1-6烷基或OH取代；
各Z1独立地是直接键或式-(CH2)p-C(R6)2-(CH2)q-的基团；
R3选自氢或C1-6烷基；和R6独立地选自氢，C1-6烷基或-C2-4烷基-O-C1-4烷基；
各a独立地是1，2或3；
p是0-2之间的整数；
q是0-2之间的整数；
和p+q＜4。
条件是：
(i)当R3是氢或甲基，m是1和n是0时则R1不是2-卤代或2-甲基；
(ii)当R3是氢或甲基，m是2和n是0时则(R1)m不是二-C1-4烷基，二-卤代或一-卤代-一-C1-4烷基；
(iii)当R3是氢，甲基或乙基，m是0，n是1，R2是位于2-位或4-位的取代基和X是-O-或直接键时则Y不是甲基，苯基或苄基和R4(存在时)不是甲基或三氟甲基；
(iv)当R3是氢，m是0，n是2，X是直接键则(R2)m不是2，4-二苯基；
(v)当R3是氢，m是0和n是3时则至少一个R2必须不是甲氧基(优选至少两个的R2必须不是甲氧基，更优选各R2一定不是甲氧基)；和
(vi)不包括下列化合物：
6-[(3-叔丁基-2-羟基-6-甲基-5-硝基苯甲酰基)氨基]烟酸乙酯。
按照本发明的另一特征提供式(Ic)的化合物或其盐、溶剂化物或前药；
式(Ic)
其中
m是0，1或2；
n是0，1，2，3或4；
和n+m＞0；
各R1独立地选自OH，-(CH2)1-4OH，-CH3-aFa，-(CH2)4CH3-aFa，卤素，C2-6链烯基，C2-6链炔基，NO2，NH2，或CN；
各R2是基团Y-X-，其中各X是独立地选自下列的连接基：-O(CH2)0-2-，-(CH2)0-2O-，-C(O)O(CH2)0-2-，-S(CH2)0-2-，-SO(CH2)0-2-，-SO2(CH2)0-2-，-NHSO2，-SO2NH-，-(CH2)1-4-，-CH＝CH(CH2)0-2-，-C≡C(CH2)0-2-，-NHCO-，或-CONH-；
各Y独立地选自苯基(CH2)0-2，萘基(CH2)0-2，杂环基(CH2)0-2，C3-7环烷基(CH2)0-2，C1-6烷基，C2-6链烯基或C2-6链炔基；
和各Y独立地选择性被R4取代；
各R4独立地选自卤素，CH3-aFa，CN，NO2，NH2，C1-6烷基，OC1-6烷基，COOH，C(O)OC1-6烷基，OH，苯基，
或R5-X1-，其中X独立地如上述X定义，和R5选自氢，C1-6烷基，CH3-aFa，苯基，萘基，杂环基或C3-7环烷基；和R5选择性地被卤素，C1-6烷基，-CH3-aFa，CN，NO2，NH2，COOH和-C(O)OC1-6烷基取代；
各a独立地是1，2或3；
R3选自氢或C1-6烷基。
条件是：
(i)当R3是氢或甲基，m是1和n是0时则R1不是卤素或甲基；
(ii)当R3是氢或甲基，m是2和n是0是则(R1)m不是二-C1-4烷基，二-卤代或一-卤代-一-C1-4烷基；
(iii)当R3是氢或甲基，m是0，n是1，R2是位于2-位的取代基和X是-O-时则Y不是甲基或苄基；和
(iv)条件是当R3是氢，m是0和n是3时则至少一个R2一定不是甲氧基(优选R2的至少两个基团一定不是甲氧基，更优选各R2一定不是甲氧基)。
本发明的化合物可以形成盐，其属于本发明的范围内。优选药学可接受盐，虽然其他盐可以用于例如分离或提纯化合物。
术语″芳基″是指苯基，萘基或含有8-12个碳原子、优选8-10个碳原子的部分饱和双环碳环。部分饱和的双环碳环的实例包括：1，2，3，4-四氢萘基，二氢茚基，茚基，1，2，4a，5，8，8a-六氢萘基或1，3a-二氢戊搭烯。
术语″卤素″包括氟，氯，溴和碘；优选氯，溴和氟；更优选氟。
短语″-CH3-aFa″其中a是1-3间的整数是指甲基，其中1，2或全部3个氢被氟原子代替。实例包括：三氟甲基，二氟甲基和氟甲基。类似注释使用参见基团-(CHl)1-4CH3-aFa，例如包括：2，2-二氟乙基和3，3，3-三氟丙基。
在本说明书中术语″烷基″包括直链和支链烷基。例如，″C1-4烷基″包括丙基，异丙基和叔丁基。
术语″杂环基″是含有3-12个原子的饱和、部分饱和或不饱和的一或双环，这些原子中至少一个原子选自氮、硫或氧，它们可以是碳或氮连接的，除非另外说明，其中-CH2-可以选择性地被-C(O)-代替且杂环中硫原子可以氧化为S(O)或S(O)2基团。优选″杂环基″是含有9或10原子的饱和、部分饱和或不饱和的一或双环(优选5或6原子的单环)，这些原子中的1-3个原子是氮、硫或氧，它们可以碳或氮连接的，除非另外说明，其中-CH2-可以选择性地被-C(O)-代替或杂环中的硫原子可以氧化为S(O)或S(O)2基团。术语″杂环基″的实例和适当值是噻唑烷基，吡咯烷基，吡咯啉基，2，5-二氧代吡咯烷基，2-苯并噁唑啉酮基，1，1-二氧代四氢噻吩基，2，4-二氧代咪唑烷基，2-氧代-1，3，4-(4-三唑啉基)，2-噁唑啉酮基，5，6-二氢尿嘧啶基，1，3-苯并二氧杂环戊烯基，1，2，4-噁二唑基，2-氮杂双环并[2.2.1]庚基，4-噻唑烷酮基，吗啉代，呋喃基，2-氧代四氢呋喃基，四氢呋喃基，2，3-二氢苯并呋喃基，苯并噻吩基，异噁唑基，四氢吡喃基，哌啶基，1-氧代-1，3-二氢异吲哚基，哌嗪基，硫代吗啉代，1，1-二氧代硫代吗啉代，四氢吡喃基，1，3-二氧杂环戊烷基，高哌嗪基，噻吩基，异噁唑基，咪唑基，吡咯基，噻唑基，噻二唑基，异噻唑基，1，2，4-三唑基，1，2，3-三唑基，吡喃基，吲哚基，嘧啶基，吡嗪基，哒嗪基，吡啶基，4-吡啶酮基，喹啉基，四氢噻吩基，1，1-二氧化物，2-氧代-吡咯烷基和1-异喹啉酮基。″杂环基″的优选实例当是指5/6和6/6双环环系时包括色满基，苯并呋喃基，苯并咪唑基，苯并苯硫基，苯并噻唑基，苯并异噻唑基，苯并噁唑基，苯并异噁唑基，吡啶并咪唑基，嘧啶并咪唑基，喹啉基，异喹啉基，喹喔啉基，喹唑啉基，二氮杂萘基，噌啉基，咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基和萘啶基。优选术语″杂环基″是指5-或6-员单环杂环，例如噁唑基，异噁唑基，吡咯烷基，2-吡咯烷酮基，2，5-二氧代吡咯烷基，吗啉代，呋喃基，四氢呋喃基，哌啶基，哌嗪基，硫代吗啉代，四氢吡喃基，高哌嗪基，噻吩基，咪唑基，1，2，4-三唑基，1，3，4-三唑基，吲哚基，噻唑基，噻二唑基，吡嗪基，哒嗪基和吡啶基。
术语″环烷基″是指含有3-12个碳原子、优选3-7个碳原子的饱和碳环。C3-7环烷基的实例包括环庚基、环己基、环戊基、环丁基或环丙基。优选的环丙基，环戊基或环己基。
C1-6烷基的实例包括甲基，乙基，丙基，异丙基，1-甲基-丙基，仲丁基，叔丁基和2-乙基-丁基；C2-6链烯基的实例包括：乙烯基，2-丙烯基，2-丁烯基，或2-甲基-2-丁烯基；C2-6链炔基的实例包括：乙炔基，2-丙炔基，2-丁炔基，或2-甲基-2-丁炔基，-OC1-4烷基的实例包括甲氧基，乙氧基，丙氧基和叔丁氧基；-C(O)OC1-6烷基的实例包括甲氧基羰基，乙氧基羰基和叔丁氧基羰基；-NH-C1-4烷基的实例包括：
和
-N-二-(C1-4烷基)的实例：
为了避免怀疑，在连接基′X′的定义中，该基团的右手侧连接苯环且左手侧连接′Y′。
应理解，在本发明的某些化合物的范围内可以存在旋光或外消旋不对称碳原子，本发明在其定义中包括任何这样的具有直接促进GLK或抑制GLK/GLKRP相互作用的性质的旋光或外消旋体。旋光形式的合成可以通过所属领域熟知的有机化学的标准技术来进行，例如通过由旋光起始原料合成或通过外消旋体的拆分。
上式(I)-(Ic)或下式(II)-(IIf)的优选化合物是那些其中任何一个或多个下列规定的化合物：
(1)m是0或1；
n是1或2；优选n是2；更优选m是0和n是2。
(2)R1和/或R2基团连接在相对于羰基的2-，3-或5-位；当n+m是3时，该基团优选位于2-，3-和5-位；当n+m是2时，该基团优选位于3-和5-位；更优选共两个基团在3-和5-位取代。
(3)各R1独立地选自OH，CH3-aFa(优选-CF3)，卤素，C1-4烷基(优选甲基)和CN；优选R1选自CH3-aFa(优选CF3)，卤素，C1-4烷基(优选甲基)和CN；更优选R1选自-CH3-aFa(优选-CF3)，或卤素。
(4)各R2是基团Y-X，其中各X独立地选自：-O-Z-，-C(O)O-Z-，-S-Z-，-SO-Z-，-SO2-Z-，-N(R6)CO-Z-，-CON(R6)-Z-，-SO2N(R6)-Z-，-N(R6)SO2-Z-或-CH＝CH-Z-；
优选各X选自：-O-Z-，-S-Z-，-SO-Z-，-SO2-Z-，-CON(R6)-Z-，-SO2N(R6)-Z，或-CH＝CH-Z-；
进一步优选各X选自：-O-Z-，-N(R6)-Z-，-CH＝CH-Z-，-SO2N(R6)-Z-或-S-Z-；
更优选各X选自：-O-Z-，-SO2N(R6)-Z-或-N(R6)-Z-。
各Z独立地选自：直接键或-(CH2)1-2，或式-(CH2)p-C(R6)2-(CH2)q-的基团，其中一个R6是氢且另一个R6是C1-4烷基；
优选直接键，-(CH2)0-2-或
更优选直接键或-CH2-。
各Z1独立地选自：直接键或-(CH2)1-2，或式-(CH2)p-C(R6)2-(CH2)q-的基团，其中一个R6是氢且另一个R6是C1-4烷基；
优选直接键，-(CH2)0-2-或
更优选直接键，-CH2-，-(CH2)2-或
首选-CH2-或直接键。
和各Y独立地选自：芳基-Z1-，杂环基-Z1-，或C3-7环烷基-Z1-，C1-6烷基或C2-6链烯基；
优选各Y选自：苯基-Z1-，萘基-Z1-，杂环基-Z1-，或C1-6烷基(优选
支链C2-6烷基，例如异丙基或异丁基)；
其中各Y独立地选择性地被R4取代。
(5)各R2是基团Y-X-，Z在X的定义中是直接键且Z1在Y的定义中是式-(CH2)p-C(R6)2-(CH2)q-的基团。
(6)各R4独立地选自：卤素，-CH3-aFa，CN，NO2，C1-6烷基，OC1-6烷基，-COOH，-C(O)OC1-6烷基，OH，杂环基或苯基；
优选各R4选自：卤素，-CH3-aFa，CN，C1-6烷基(优选甲基)，-COOH或苯基。
首选R4选自：F，Cl，甲基或CN。
(7)R3选自氢或C1-6烷基；优选R3选自氢或甲基；更优选R3是氢。
按照本发明的另一特征提供下列优选组的本发明的化合物：
(I)式(II)的化合物
式(II)
其中：
X，Z1，R3和R4如上述式(I)的化合物定义；
或其盐、溶剂化物或前药。
(II)式(IIa)的化合物
式(IIa)
其中：
Het是单环杂环基，选择性被至多选自R4的基团取代和，
X，Z1，R3和R4如上述式(I)的化合物中定义；
或其盐、溶剂化物或前药.。
(III)式(IIb)的化合物
式(IIb)
其中
C1-6烷基选择性地被至多3个选自R4的基团取代，优选未取代；
C1-6烷基选择性地含有双键，优选C1-6烷基不含有双键；和
X，Z1，R3和R4如上式(I)的化合物中定义；
或其盐、溶剂化物或前药。
(IV)式(IIc)的化合物
式(IIc)
其中：
C3-7环烷基选择性地被至多3个选自R4的基团取代，and
X，Z1，R3和R4如上式(I)的化合物中定义；
或其盐、溶剂化物或前药。
(V)式(IId)的化合物
式(IId)
其中：
C1-6烷基独立地选择性被至多3个选自R4的基团取代；优选C1-6烷基之一未取代。
C1-6烷基独立地选择性含有双键，优选只有一个C1-6烷基含有双键，优选无一C1-6烷基含有双键，和
X，R3和R4如上式(I)的化合物中定义；
或其盐、溶剂化物或前药。
(VI)式(IIe)的化合物
式(IIe)
其中：
C3-7环烷基和C1-6烷基独立地选择性被至多3个选自R4的基团取代，优选C1-6烷基未取代；
C1-6烷基选择性含有双键，优选C1-6烷基不含有双键；和
X，Z1，R3和R4如上式(I)的化合物中定义；
或其盐、溶剂化物或前药。
(VII)式(IIf)的化合物
式(IIf)
其中：
Het是单环杂环基，所述的Het和C1-6烷基独立地选择性被至多3个选自R4的基团取代，优选C1-6烷基未取代；
C1-6烷基选择性含有双键，优选C1-6烷基不含有双键；和
X，Z1，R3和R4如上式(I)的化合物中定义；
或其盐、溶剂化物或前药。
(VIII)式(IIg)的化合物
式(IIg)
其中：
Het是单环杂环基，该Het和C3-7环烷基独立地选择性被至多3个选自R4的基团取代，和
X，Z1，R3和R4如上式(I)的化合物中定义；
或其盐、溶剂化物或前药。
(IX)式(IIh)的化合物
式(IIh)
其中：
Y是芳基-Z1-，其中芳基优选是部分饱和的双环碳环；
Y和C1-6烷基独立地选择性被至多3个选自R4的基团取代，优选C1-6烷基未取代，
C1-6烷基选择性含有双键，优选C1-6烷基不含有双键；和
X，Z1，R3和R4如上式(I)的化合物中定义；
或其盐、溶剂化物或前药。
(X)式(IIj)的化合物
式(IIj)
其中：
X选自-SO2N(R5)-Z-或-N(R6)SO2-Z-，优选X是-SO2N(R6)-Z-；
Z定义如上，优选Z是亚丙基，亚乙基或亚甲基，更优选Z是亚甲基；
Za选自直接键或式-(CH2)p-C(R6)2-(CH2)q-的基团；优选Za选自C1-2亚烷基或直接键；优选Za是直接键；
R6选自：C1-4烷基或氢，优选甲基或氢；
Y选自芳基-Z1-或杂环基-Z1-；
Y和C1-6烷基独立地选择性被至多3个选自R4的基团取代，C1-6烷基选择性含有双键，优选C1-6烷基不含有双键，
和Z1，R3和R4如上式(I)的化合物中定义；
或其盐、溶剂化物或前药。
另一组优选的本发明化合物是上述组(I)-(IX)的化合物其中：
X独立地选自：-O-Z-，SO2N(R6)-Z-或-N(R6)-Z-；
Z是直接键或-CH2-；
Z1选自直接键，-CH2--(CH2)2-或
和
R3如上式(I)的化合物中定义；
或其盐、溶剂化物或前药。
本发明的化合物可以以前药的形式给药。前药是在机体内可降解为生成本发明化合物的生物前体或药学可接受化合物(例如本发明化合物的酯或酰胺，特别是体内可水解的酯)。所属领域了解多种形式的前药。例如所述前药衍生物的实例，参见：
a)Design of Prodrugs，edited by H.Bundgaard，(Elsevier，1985)and Methods in Enzymology，Vol.42，p.309-396，K.Widder等编辑(Academic Press，1985)；
b)A Textbook of Drug Design and Development，Krogsgaard-Larsen编辑；
c)H.Bundgaard，Chapter 5″Design and Application of Prodrugs″，by H.Bundgaard p.113-191(1991)；
d)H.Bundgaard，Advanced Drug Delivery Reviews，8，1-38(1992)；
e)H.Bundgaard等，Journal of Pharmaceutical Sciences，77，285(1988)；和
f)N.Kakeya等，Chem Pharm Bull，32，692(1984)。
上述引用的文献的内容再次引入作为参考。
前药的实例如下。本发明含有羧基或羟基的化合物的体内可水解酯，例如，在人或动物体内水解生成母体酸或醇的药学可接受酯。对于羧基的适当药学可接受酯包括C1-C6烷氧基甲基酯，例如甲氧基甲基，C1-6烷酰氧基甲基酯，例如新戊酰氧基甲基，二苯并[]呋喃酮基酯，C3-8环烷氧基羰基氧基C1-6烷基酯例如1-环己基羰氧基乙基；1，3-二氧杂环戊烷-2-酮基甲基酯，例如5-甲基-1，3-二氧杂环戊烷-2-酮基甲基；和C1-6烷氧基羰氧基乙酯。
本发明含有羟基的化合物的体内可水解酯包括戊基酯例如磷酸酯(包括磷酰胺环酯(phosphoramidic cyclic esters))和α-酰氧基烷基醚和有关化合物，它是酯体内水解产生母体羟基的产物。α-酰氧基烷基醚的实例包括乙酰氧基甲氧基和2，2-二甲基丙烯氧基-甲氧基。体内可水解的与羟基成酯基团的选择包括烷酰基，苯甲酰基，苯基乙酰基和取代的苯甲酰基和苯基乙酰基，烷氧基羰基(得到烷基碳酸酯)，二烷基氨基甲酰基和N-(二烷基氨基乙基)-N-烷基氨基甲酰基(得到氨基甲酸酯)，二烷基氨基乙酰基和羧基乙酰基。
本发明化合物的适当药学可接受盐是，例如，本发明具有足够碱性的化合物的酸加成盐，例如，与如无机或有机酸的酸加成盐，例如盐酸，氢溴酸，硫酸，磷酸，三氟乙酸，柠檬酸或马来酸。此外本发明的具有足够酸性的苯并噁嗪酮衍生物的适当药学可接受盐是碱金属盐，例如钠或钾盐，碱土金属盐，例如钙或镁盐，铵盐或与有机碱形成提供生理可接受阳离子的盐，例如与甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、吗啉或三-(2-羟基乙基)胺的盐。
本发明的另一特征是含有上述定义式(I)-(Ic)或(II)-(IIj)的化合物或其盐、溶剂化物或前药，以及药学可接受稀释剂或载体的药物组合物。
根据本发明提供的另一方面，正如上面定义的式(Ib)或(Ic)，或(II)至(IIj)做为药用；条件是当R3是H或甲基时，m是2，n是0，(R1)m不是二-C1-4烷基。
此外按照本发明提供式(Ib)或(Ic)，或(II)-(IIj)的化合物用于制备治疗由GLK介导的疾病，特别是II型糖尿病的药物。
所述的化合物适合配制为以这种方式使用的药物组合物。
按照本发明的另一个方面提供一种治疗GLK介导的疾病，尤其是糖尿病的方法，该方法通过给需要该治疗的哺乳动物施用有效量的式(Ib)或(Ic)，或(II)-(IIj)的化合物。
可以用本发明的化合物或组合物治疗的具体疾病包括：降低没有严重低血糖危险的II型糖尿病中的血糖(并有效治疗I型)，脂血障碍、肥胖、胰岛素抗性，代谢性X综合征，受损的葡糖耐受性。
可以用本发明的化合物或组合物治疗的具体疾病包括：降低没有严重低血糖危险的II型糖尿病中的血糖(并有效治疗I型)；脂血障碍；肥胖；胰岛素抗性；代谢性X综合征；受损的葡糖耐受性；多囊性卵巢综合征。
本发明的组合物可以是适合口服使用的形式(例如片剂，锭剂，硬或软胶囊，水或油混悬剂，乳剂，可分散散剂或颗粒剂，糖浆剂或酏剂)，局部使用的形式(例如霜剂，软膏，凝胶，或水或油溶液或混悬剂)，吸入给药的形式(例如微粉散剂或液体气雾剂)或非肠道给药的形式(例如灭菌水或由溶液用于静脉内、皮下、肌肉内或肌肉内给药或成为直肠给药的栓剂)。
本发明的组合物可以通过常规方法利用该领域熟知的常规药物赋形剂来获得。所以，用于口服使用的组合物可以含有，例如，一种或多种着色剂、甜味剂、矫味剂和/或防腐剂。
片剂制剂的受到药学可接受赋形剂包括，例如，惰性稀释剂例如乳糖、碳酸钠、磷酸钙或碳酸钙、制粒和崩解剂例如玉米淀粉和藻酸；粘合剂例如淀粉；润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉；防腐剂例如对羟基苯甲酸乙酯或丙酯，和抗氧剂，例如抗坏血酸。片剂制剂可以无包衣或包衣来改变其崩解作用和活性成分在胃肠道内的后续吸收作用，或改进其稳定性和/或表观，在任意情况中，使用该领域熟知的常规包衣剂和方法。
口服使用的组合物可以是硬明胶胶囊的吸收，其中活性成分与惰性固体稀释剂混合，例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土，或成为软明胶胶囊，其中活性成分与水或油例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。
水混悬剂一般含有微粉形式的活性成分和一种或多种助悬剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯-吡咯烷酮、黄芪胶和阿拉伯胶；分散或湿润剂例如卵磷脂或氧化烯与脂肪酸的所含产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如十七氧化亚乙基鲸蜡醇(heptadeca乙基eneoxycetanol)，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，例如聚氧化乙烯山梨糖醇一油酸酯，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，例如聚乙烯脱水山梨糖醇一油酸酯。水混悬剂还可以含有一种或多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或丙酯)，抗氧剂(例如抗坏血酸)，着色剂，矫味剂，和/或甜味剂(例如蔗糖，糖精和天冬甜素)。
油性混悬剂可以通过将活性成分悬浮在植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或在矿物油(例如液体石蜡)中来配制。油性混悬剂也可以含有增稠剂例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可以加入甜味剂例如上述那些，和矫味剂来提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧剂例如抗坏血酸来防腐。
适合通过加入水制成水混悬剂的可分散散剂和颗粒剂一般含有活性成分和分散或湿润剂、助悬剂和一种或多种防腐剂。适当的分散或湿润剂和助悬剂例如上述那些。附加的赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂，也可以存在。
本发明的药物组合物也可以以水包油乳剂的形式存在。油相可以是植物油，例如橄榄油或花生油，或矿物油，例如液体石蜡或任何这些的混合物。适当的乳化剂可以是，例如，天然树胶例如阿拉伯胶或黄芪胶，天然磷脂例如大豆卵磷脂，和衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯(例如脱水山梨糖醇一油酸酯)和所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物例如聚氧化乙烯脱水山梨糖醇一油酸酯。乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂和防腐剂。
糖浆剂和酏剂可以与甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨糖醇、天冬甜素或蔗糖配制，并且也可以含有缓和剂、防腐剂、矫味剂和/或着色剂。
所述的药物组合物还可以是灭菌可注射水或由混悬剂的形式，其可以按照已知方法利用一种或多种适当的分散或湿润剂和助悬剂来配制，这些试剂如上所述。灭菌可注射制剂也可以是存在于无毒非肠道可接受稀释剂或溶剂中的灭菌可注射溶液或混悬剂，例如在1，3-丁二醇中的溶液。
吸入给药的组合物可以是设计为分配活性成分的常规加压气雾剂或者是含有微粉固体或液滴的气雾剂的形式。可以使用常规气雾剂抛射剂例如挥发性氟化烃或烃且气雾剂装置通常装配为分配计量量的活性成分。
有关制剂的其他信息读者参考Comprehensive MedicinalChemistry的第5卷，25.2章(Corwin Hanschl；Chairman ofEditorial Board)，Pergamon Press 1990。
活性成分与一种或多种赋形剂混合制备为单剂量形式的量将需要根据被治疗宿主和具体给药途径来变化。例如，用于对人体口服给药的制剂一般含有，例如，0.5mg-2g的与适当和常规量的赋形剂化合的活性剂，其可以占该组合物载重量的约5-约98％。剂量单位形式一般含有约1mg-约500mg的活性成分。有关给药途径和给药方案的进一步信息读者参考Comprehensive Medicinal Chemistry的第5卷，25.3章(Corwin Hanschl；Chairman of Editorial Board)，PergamonPress 1990。
式(I)、(Ia)、(Ib)或(Ic)的化合物出于治疗或预防目的的给药量自然应根据病症的性质和严重性、动物或患者的年龄和性别和给药途径、按照药物的熟知原理来改变。
在出于治疗或预防目的使用式(I)、(Ia)、(Ib)或(Ic)的化合物时一般是以日剂量在例如0.5mg-75mg/kg体重的范围内给药，如果需要可以分次给药。通常当采用非肠道途径时采用较低剂量。所以，例如，为了静脉内给药，一般采用例如0.5mg-30mg/kg体重范围内的剂量。同样地，为了吸入给药，采用例如0.5mg-25mg/kg体重范围内的剂量。然而优选口服给药。
本发明所述GLK活性的升高可以用作单独疗法或可以除本发明的对象以外包括使用一种或多种其他物质和/或治疗。这样的联合治疗可以通过各个治疗组分的同时、顺序或分开施用的方式来达到。同时治疗可以是单一片或在分开的片剂中。例如在糖尿病的治疗中化疗可以包括下列主要类型的治疗：
1)胰岛素和胰岛素类似物；
2)胰岛素促分泌剂，包括磺酰脲(例如格列本脲，格列吡嗪)和饮食葡糖调节剂(例如repaglinide，nateglinide)；
3)胰岛素敏化剂包括PPARg激动剂(例如吡格列酮和罗格列酮)；
4)抑制肝葡糖输出的药物(例如二甲双胍)；
5)减少肠内葡萄糖吸收的药物(例如阿卡波糖)
6)治疗长期高血糖的并发症的药物；
7)抗肥胖药物(例如西布茶明和orlistat)；
8)抗脂血障碍(dyslipidaemia)药物，例如HMG-CoA还原酶抑制剂(他汀类，例如帕伐他汀)；PPARα激动剂(贝特类(fibrates)，例如吉非贝齐)；胆酸螯合剂(胆胺)；胆甾醇吸收抑制剂(植物谷甾醇(stanol)，合成抑制剂)；胆酸吸收抑制剂(IBATi)和烟酸和类似物(烟酸和缓释制剂)；
9)抗高血压药物，例如β阻滞剂(例如阿替洛尔，普萘洛尔)；ACE抑制剂(例如(赖诺普利)；钙拮抗剂(例如尼非地平)；血管紧张素受体拮抗剂(例如Candesartan)，α拮抗剂和利尿剂(例如速尿和苄噻嗪)；
10)淤血调节剂，例如抗血栓形成药，纤维蛋白溶解的激活剂和抗血小板药物；凝血酶拮抗剂；Xa因子抑制剂；VIIa因子抑制剂)；抗血小板药(例如阿斯匹林，clopidogrel)；阻凝剂(苷酸和低分子量类似物，水蛭素)和华法令；和
11)抗炎剂，例如非甾族抗炎药(例如阿斯匹林)和甾族抗炎药(例如可的松)。
按照本发明的另一方面提供下列实施例中制备的终产物及其盐的各个化合物。
本发明的化合物，或其盐、前药或溶剂化物，可以通过任何用于制备此类化合物或结构上相关化合物的已知方法来制备。此类方法通过下列代表性路线(1和2)来举例说明，其中可变基团具有任何上述式(I)的定义，除非另外说明。官能团可以利用常规方法保护和脱保护。保护基例如氨基和羧酸保护基的实例(以及形成的方式和最后的脱保护)，参见T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“Protective Groups in有机Synthesis”，第2版，John Wiley & Sons，New York，1991。使用的注释缩写在下面的实施例之前立刻列出。
合成路线1
合成路线2
在合成路线2中P代表R2中官能团的保护基或者P是转化为官能团或取代基R2的前体基团。
合成式(I)的化合物的方法是本发明的另一特征。所以，按照本发明的另一方面提供一种制备式(I)的化合物的方法，其包括：
(a)式(IIIa)的化合物与式(IIIb)的化合物反应，
式(IIIa) 式(IIIb)；或
其中X1是离去基团
(b)对于其中R3是氢的式(I)的化合物，使式(IIIc)的化合物脱保护，
式(IIIc)
其中P1是保护基；
(c)对其中n是1，2，3或4的式(I)的化合物，式(IIId)的化合物与式(IIIe)的化合物的反应，
Y-X″
式(IIId) 式(IIIe)
其中X′和X″包括在一起反应时形成基团X的基团；
(d)对于其中n是1，2，3或4的式(I)的化合物且X或X1是-SO-Z-或-SO2-Z-，其中X或X1分别是S-Z-的相应式(I)的化合物的氧化反应；
(e)式(IIIf)的化合物与式(IIIg)的化合物反应，
式(IIIf) 式(IIIg)；或
其中X2是离去基团
和此后，如果必要：
i)使式(I)的化合物转化为另一种式(I)的化合物；
ii)脱除全部保护基；
iii)形成其盐、前药或溶剂化物。
上述反应的具体反应条件如下所述：
方法a)-如上所述；
方法b)-如上所述；
方法c)-这种方法的实例如下所述：
(i)当X是-O-Z-，X′是式HO-Z-的基团且X″是离去基团(或者X′是式L2-Z-的基团，其中L2是离去基团和X″是羟基)时为形成一组化合物，式(IIId)和(IIIe)的化合物在适当溶剂例如DMF或THF中一起与碱反应，所述的碱例如氢化钠或叔丁醇钾，该反应在0-100□的温度下、选择性利用金属催化例如碳载钯或碘化亚铜来进行；
(ii)为形成当X是N(R6)-Z-，X′是式H-(R6)N-Z-的基团和X″是离去基团(或者X′是式L2-Z-的基团，其中L2是离去基团和X″是式-N(R6)-H的基团)时一组化合物，式(IIId)和(IIIe)的化合物在适当溶剂例如THF、醇或乙腈中，利用还原剂例如氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠在室温下一起反应；
(iii)当X是-SO2N(R6)-Z-，X′是式H-N(R6)-Z-的基团，其中L2是离去基团和X″是是活化的磺酰基(例如式-SO2-C1的基团)时为了形成一组化合物，式(IIId)和(IIIe)的化合物在适当溶剂例如二氯甲烷，THF或吡啶中、在碱例如三乙胺或吡啶的存在下、于室温下一起反应；
(iv)当X是-N(R6)SO2-Z-，X′是活化的磺酰基(例如式C1-SO2-Z-基团)和X″是式-N(R6)-L2的基团，其中L2是离去基团时为了形成一组化合物，式(IIId)和(IIIe)的化合物在适当溶剂例如二氯甲烷、THF或吡啶中，在碱例如三乙胺或吡啶的存在下、于室温下一起反应；
(v)当X是-C(O)N(R6)-Z-，X′是式H-N(R6)-Z-的基团，其中L2是离去基团和X″是活化的羰基(例如式C(O)-C1的基团)时为了形成一组活化，式(IIId)和(IIIe)的化合物在适当溶剂例如THF或二氯甲烷中、在碱例如三乙胺或吡啶的存在下于室温下一起反应；
(vi)当X是-N(R6)C(O)-Z-，X′是活化的羰基(例如式C1-C(O)-Z-基团)和X″是式-N(R6)-L2的基团，其中L2是离去基团，式(IIId)和(IIIe)的化合物在适当溶剂例如THF或二氯甲烷，在碱例如三乙胺或吡啶的存在下、于室温下一起反应；
(vii)当X是-CH＝CH-Z-时为了形成一组化合物，可以利用Wittag反应或Wadsworth-Emmans Horner反应。例如，X′末端为醛基和Y-X″是式Y-C-H-P+PH3的膦衍生物，其可以在强碱例如氢化钠或叔丁醇钾中、在适当溶剂例如THF内、于室温-100℃的温度下一起反应。
方法d)-其中X或X1是-S-Z-的式(I)的化合物的氧化是所属领域熟知的，例如，与间氯过苯甲酸(MCPBA)在适当溶剂例如二氯甲烷的存在下于室温下反应。如果使用过量的MCPBA，得到其中X是-S(O2)-的式(I)的化合物。
方法e)-式(IIIf)的活化与式(IIIg)的化合物可以在极性溶剂例如DMF或非进行溶剂例如THF中与强碱例如氢化钠或叔丁醇钾在0-100□的温度下反应，选择性地使用金属催化，例如碳载钯或碘化亚铜。
保护基可以通过文献所述的或所属领域技术人员已知的适合脱除该保护基的常规方法来除去，例如方法的选择应实现保护基的脱除并最小限度地干扰分子这的其他基团。
保护基的具体实例为一般如下所述，其中″低级″表示该基团适宜具有1-4个碳原子。应理解这些实施例不是穷举的。虽然下面给出脱除保护基的方法的具体实例，但这些方法同样不是穷举的。没有具体提及的保护基的使用和脱保护的方法显然属于本发明的范围内。
羧基保护基可以是成酯脂族或芳脂族醇的残基或成酯甲硅烷醇的残基(所述的醇或甲硅烷基优选含有1-20个碳原子)。羧基保护基的实例包括直链和支链(C1-12)烷基(例如异丙基，叔丁基)；低级烷氧基低级烷基(例如甲氧基甲基，乙氧基甲基，异丁氧基甲基；低级脂族酰氧基低级烷基，(例如乙酰氧基甲基，丙酰氧基甲基，丁酰氧基甲基，新戊酰氧基甲基)；低级烷氧基羰基氧基低级烷基(例如1-甲氧基羰基氧基乙基，1-乙氧基羰基氧基乙基)；芳基低级烷基(例如对-甲氧基苄基，邻-硝基苄基，对-硝基苄基，二苯甲基和二苯并[]呋喃酮基)；三(低级烷基)甲硅烷基(例如三甲基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基)；三(低级烷基)甲硅烷基低级烷基(例如三甲基甲硅烷基乙基)；和(2-6C)链烯基(例如烯丙基和乙烯基乙基)。
特别适合脱除羧基保护基的方法包括例如酸-、金属-或酶促-催化的水解。
羟基保护基的实例包括低级链烯基(例如烯丙基)；低级烷酰基(例如乙酰基)；低级烷氧基羰基(例如叔丁氧基羰基)；低级链烯基氧基羰基(例如烯丙基氧基羰基)；芳基低级烷氧基羰基(例如苯甲酰基氧基羰基，对-甲氧基苄基氧基羰基，邻-硝基苄基氧基羰基，对-硝基苄基氧基羰基)；三低级烷基/芳基甲硅烷基(例如三甲基甲硅烷基，叔丁基二甲基甲硅烷基，叔丁基二苯基甲硅烷基)；芳基低级烷基(例如苄基)；和三芳基低级烷基(例如三苯基甲基)。
氨基保护基的实例包括甲酰基，芳烷基(例如苄基和取代的苄基，例如对-甲氧基苄基，硝基苄基和2，4-二甲氧基苄基，和三苯基甲基)；二-对-茴香基甲基和呋喃基甲基；低级烷氧基羰基(例如-丁氧基羰基)；低级链烯基氧基羰基(例如烯丙基氧基羰基)；芳基低级烷氧基羰基(例如苄基氧基羰基，对-甲氧基苄基氧基羰基，邻-硝基苄基氧基羰基，对-硝基苄基氧基羰基；三烷基甲硅烷基(例如三甲基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基)；亚烷基(例如亚甲基)；亚苄基和取代的亚苄基。
适合脱除羟基和氨基保护基的方法包括，例如，酸-、碱、金属-或酶促-催化的水解，或光解例如邻-硝基苄基氧基羰基的基团，或用氟离子脱除甲硅烷基。
酰胺基的保护基的实例包括芳烷氧基甲基(例如苄基氧基甲基和取代的苄氧基甲基)；烷氧基甲基(例如甲氧基甲基和三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)；三烷基/芳基甲硅烷基(例如三甲基甲硅烷基，叔丁基二甲基甲硅烷基，叔丁基二苯基甲硅烷基)；三烷基/芳基甲硅烷基氧基甲基(例如叔丁基二甲基甲硅烷基氧基甲基，-丁基二苯基甲硅烷基氧基甲基)；4-烷氧基苯基(例如4-甲氧基苯基)；2，4-二(烷氧基)苯基(例如2，4-二甲氧基苯基)；4-烷氧基苄基(例如4-甲氧基苄基)；2，4-二(烷氧基)苄基(例如2，4-二(甲氧基)苄基)；和链烯基(例如烯丙基，丁-10烯基和取代的乙烯基，例如2-苯基乙烯基)。
芳烷氧基甲基，可以通过后者与适当芳烷氧基甲基氯反应引入到酰胺基上，并且通过催化氢化脱除。烷氧基甲基，三烷基/芳基甲硅烷基和三烷基/甲硅烷基氧基甲基可以通过酰胺与适当氯化物反应引入并用酸脱除；或在含甲硅烷基基团的情况中，用氟离子。所述的烷氧基苯基和烷氧基苄基因通过与适当卤化物芳基化或烷基化引入并通过用硝酸铈铵氧化脱除。最后，链烯基可以通过酰胺与适当醛反应引入并用酸脱除。
下列实施例举例说明且不限定本申请的范围。各个例举的化合物代表本发明的具体和独立方面。在下列非限定实施例中，除非另外说明：
(i)蒸发是通过旋转蒸发在真空下进行且处理过程是在除去残留固体例如通过过滤除去干燥剂之后进行；
(ii)操纵是在室温下进行，也就是在18-25℃的范围内并在惰性气体如氩气或氮气的气氛下进行；
(iii)收率近接是举例说明且不一定是最大收率；
(iv)式(I)的终产物的结构是通过核(一般是质子)磁共振(NMR)和质谱技术来确定；质子磁共振化学位移值是在δ刻度上测量且峰的多重态显示如下：s，单峰；d，二重峰；t，三重峰；m，多重峰；br，宽封；q，四重峰，quin，五重峰；
(v)中间体一般没有完全定性且纯度是通过薄层层析(TLC)，高效液相色谱(HPLC)，红外(IR)或NMR分析来评估；
(vi)色谱是在硅胶(Merck Silica gel 60，0.040-0.063mm，230-400目)上进行；和
(vi)Biotage筒是指预装的硅胶筒(40g-400g)，用biotage泵洗脱和馏分收集器系统；Biotage UK Ltd，Hertford，Herts，UK。
缩写
ADDP 偶氮二羰基二哌啶；
DCM 二氯甲烷；
DEAD 二偶氮甲酸二乙酯；
DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯；
DMSO 二甲基亚砜；
DMF 二甲基甲酰胺；
DtAD 偶氮二甲酸二叔丁酯；
EDAC 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基甲酰胺盐酸化物；
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基六氟磷酸铵；
LCMS 液相色谱/质谱；
MPLC 中压液体色谱；
RT 室温；和
THF 四氢呋喃。
实施例A
6-[(3，5-二苯甲酰基氧基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸(途径1)
标题化合物的甲酯(267mg 0.57mM)与氢氧化锂(150mg[过量])在四氢呋喃(THF)(10ml)和水(1ml)的混合物中在室温下搅拌过夜。除去溶剂并加入水(10ml)。用1.0M盐酸酸化至Ph＝4之后，过滤出沉淀的固体，用水洗涤且真空干燥。由此得到标题化合物(43mg 17％)；H NMRδ(d6-DMSO)5.17(4Hs)6.86(1Hs)7.30-7.47(12Hm)8.25(2Hs)8.86(1Hs)11.02(1Hb)；MS[MH]+455
该甲酯起始原料制备如下：
使3，5-二苄氧苯甲酸(334mg 1.0mM)悬浮在二氯甲烷同时搅拌。加入草酰氯(0.146mg，1.147Mm)和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(1滴)并将该混合物在室温下搅拌2小时。除去溶剂且将残余物重新溶于二氯甲烷(5ml)。此后将该溶液加入到6-氨基烟酸甲酯(152mg 1.0mM)在二氯甲烷(5ml)和吡啶(80μl)中的混悬液内，搅拌后在室温下过夜该反应混合物在二氯甲烷和饱和氯化铵之间分配，用硫酸镁干燥，过滤和通过真空蒸馏除去溶剂得到粗产物。通过乙酸乙酯/异己烷作为溶剂洗脱硅胶柱纯化。由此得到6-[(3，5-二苄氧基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸甲酯，其为白色固体(267mg 57％)。
MS[MH]+469
实施例B
6-[(3，5-二-(2-甲基苄氧基)苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸(途径2)
将6-[(3，5-二-(2-甲基苄氧基)苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸甲酯(61mgs)于室温下在THF(4ml)、甲醇(1ml)和水(1ml)的混合物中与2M氢氧化钠(0.3ml，xs)搅拌。4小时后减压下除去溶剂，加入水(5ml)并将pH调至中性。由此得到白色沉淀，将沉淀过滤，用水洗涤，干燥得到标题化合物(56mgs，94％).MS[MH]+483
起始甲酯制备如下：3，5-二乙酰氧基苯甲酸(15g，63mM)悬浮在二氯甲烷(100mls)、含草酰氯(7.34mls，69.3mM)的THF(20mls)中并加入DMF(2-3滴)。将所得混合物在室温下带有吹气器的烧瓶内搅拌3小时。由此得到浅褐色溶液。真空浓缩后残余物用乙醚研制。由此得到无色固体，3，5-二乙酰氧基苯甲酰氯(15.95g)，它无需进一步纯化用于下面阶段。
将悬浮在二氯甲烷(3ml)中的二乙酰氧基苯甲酰氯(15.95g，62mM)加入到溶解在吡啶(5ml)中的2-氨基吡啶-5-甲酸甲酯(9.57g，62mM)。所得混合物在室温下搅拌18消失，吡啶与甲苯共沸蒸发且残余物通过用乙酸乙酯：二氯甲烷的10∶90混合物作为洗脱剂洗脱硅胶柱纯化。由此得到6-[(3，5-二-乙酰氧基苯甲酰基)氨基]3-吡啶甲酸甲酯(12.67g)；H NMRδ(CDCl3)3.95(3Hs)，7.19(1Hm)，7.58(2Hd)，8.39(2Hm)，8.70(1Hbs)，8.92(1Hm)
6-[(3，5-二-乙酰氧基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸甲酯(6g，16.1mM)在室温下在THF(50ml)中搅拌并缓慢加入甲醇钠溶液(14.8ml的25％甲醇溶液，64.4mM)。将所得溶液搅拌1小时，倾入1M盐酸和用碳酸氢钠溶液将pH调至pH＝4，用乙酸乙酯萃取，合并提取液，用盐水洗涤和用无水硫酸钠干燥。通过减压下蒸馏除去溶剂得到黄色固体。该固体用热甲醇研制，过滤，得到6-[(3，5-二羟基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸酯，其为浅黄色固体(3.51g，77％)；H′NMRδ(d6-DMSO)3.85(3Hs)6.41(1Hs)6.80(2Hd)8.28(2Hm)8.85(1Hd)9.52(2Hs)
α-溴-O-二甲苯(272mgs，1.5mM)，碳酸银(402mgs，3.7mM)和6-[(3，5-二羟基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸甲酯(200mgs，0.7Mm)在室温下在DMF(4mls)中搅拌18小时。减压下除去溶剂，将残余物溶解在二氯甲烷并通过洗脱下硅胶键合洗脱柱、利用二氯甲烷/乙酸乙酯作为洗脱剂纯化。由此得到6-[(3，5-二-(2-甲基苄氧基)苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸酯(61mgs)。
MS[MH]+497
实施例C
6-([3-(2-甲基苄氧基)-5-(5-甲基异噁唑-3-基甲氧基)苯甲酰基]氨基}-3-吡啶甲酸甲酯(途径3)
6-{[3-(2-甲基苄氧基)-5-(5-甲基异噁唑-3-基甲氧基)苯甲酰基]氨基}-3-吡啶甲酸甲酯(98mg，0.201mM)溶解在THF(4ml)中并加入NaOH(24mg，0.603mM)在水(0.24ml)中的溶液。将水(4ml)加入到该反应混合物直至它变为单相。该反应室温下搅拌16小时并随后用1N含水HCl酸化至pH＝1。由混合物沉淀出的白色固体通过过滤分离且真空中干燥得到标题化合物，其为白色固体(67mg，70％yield)；H′NMRδ(d6-DMSO)2.30(3Hs)2.39(3Hs)5.16(2Hs)5.22(2Hs)6.33(1Hs)6.91(1Hs)7.11-7.42(6Hm)8.30(2Hs)8.87(1Hs).MS[MH]+474。
起始原料制备如下：
向3，5-二羟基苯甲酸甲酯(50g，0.30M)在N，N-二甲基甲酰胺(500ml)中的溶液内0℃下分次加入氢化钠(10.8g，0.27M)，保持该反应稳定低于10℃。使该反应升至15℃且搅拌20分钟。使该混合物冷却至0℃且在30分钟内加入2-甲基苄基溴(36ml，0.27M)在N，N-二甲基甲酰胺(50ml)中的溶液。使该溶液升至室温并真空浓缩。将乙酸乙酯(500ml)加入到残余物且所得有机溶液首先用水(2×250ml)洗涤且随后用饱和氯化钠水溶液(200ml)洗涤。有机层用硫酸镁干燥且随后真空浓缩。粗产物在Kieselgel 60上层析，用0-100％乙酸乙酯在异己烷中的梯度洗脱得到3-羟基-5-(2-甲基苄氧基)-苯甲酸甲酯，其为无色固体(21.9g)；H NMRδ(d6-DMSO)2.39(3Hs)3.90(3Hs)5.02(2Hs)5.61(1Hs)6.69(1Ht)7.157.42(6Hm).MS[MH]+488
起始原料制备如下：
向3-羟基-5-(2-甲基苄氧基)苯甲酸甲酯(21.72g，79.9mM)在甲醇(480ml)和水(167ml)中的溶液内加入2M氢氧化钠(160ml，320mM)。将该反应室温下搅拌2小时且随后60℃下搅拌1小时。使该混合物真空浓缩达到体积的1/3且用2N含水HCl酸化，导致白色固体的沉淀。过滤该混合物且固体用水洗涤，之后真空干燥得到3-羟基-5-(2-甲基苄氧基)苯甲酸，其为白色固体(19.92g)。
3-羟基-5-(2-甲基苄氧基)苯甲酸(20.30g，78.6mM)和乙酸酐(125ml，1.32M)在乙酸(125ml)中回流16小时。使该溶液冷却并真空蒸发溶剂。将乙酸(125ml)和水(125ml)加入到所得残余物且将该混合物在50℃下搅拌1小时。加入甲苯(100ml)且蒸馏除去溶剂得到3-乙酰氧基-5-(2-甲基苄氧基)苯甲酸，其为无色固体(23.6g)；H1 NMRδ(d6-DMSO)2.25(3Hs)2.32(3Hs)5.12(2Hs)7.09-7.25(7H，m)。
向3-乙酰氧基-5-(2-甲基苄氧基)苯甲酸(12g，40mM)在二氯甲烷(125ml)中的溶液加入草酰氯(3.8ml，44mM)。随后将N，N-二甲基甲酰胺(5滴)缓慢加入到该反应混合物，随后加入THF(20ml)。将该反应搅拌2小时，之后减压下除去溶剂。加入甲苯(100ml)且所得混合物再次浓缩得到褐色固体，向其中加入DCM(100ml)。将所得溶液加入到6-氨基-烟酸甲酯(5.78g，38mM)在吡啶(140ml)中的混合物这并将该反应室温下搅拌16小时。该反应在减压下浓缩且将乙酸乙酯(100ml)和水(100ml)加入到所得褐色残余物。将该混合物超声且过滤得到无色固体，其用乙酸乙酯(50ml)和水(50ml)洗涤。该固体随后在减压下干燥得到产物，其为无色固体(10.65g)。分离滤液且有机相在减压下浓缩和所得残余物通过快速色谱纯化，用含0-5％乙酸乙酯的二氯甲烷洗脱得到6-{[3-乙酰氧基-5-(2-甲基苄氧基)苯甲酰基]氨基}-3-吡啶甲酸甲酯，其为无色固体(1.24g)，它与上述沉淀合并得到总产物(11.89g)；H1 NMRδ(d6-DMSO)2.25(3Hs)2.31(3Hs)3.85(3Hs)5.19(2Hs)7.04-7.12(1Hm)7.15-7.30(3Hm)7.39-7.45(2Hm)7.65(1Hs)8.31(2Hs)8.91(1Hs)。
LCMS[M+H]+435，[M-H]-433。
6-{[3-乙酰氧基-5-(2-甲基苄氧基)苯甲酰基]氨基}-3-吡啶甲酸酯(11.64g，26.8mM)溶解在THF(150ml)中并加入甲醇钠(25％在甲醇中)(11.6ml，53.6mM)。所得黄色溶液在室温下搅拌20分钟且随后加入稀盐酸。该混合物的pH通过加入碳酸氢钠和乙酸调至pH＝4，之后加入乙酸乙酯(50ml)和水(25ml)。由此沉淀出无色固体，通过过滤分离它且用水和乙酸乙酯洗涤，之后用硫酸镁干燥，过滤，得到6-{[3-羟基-5-(2甲基苄氧基)苯甲酰基]氨基}-3-吡啶甲酸酯，其为无色固体(9.62g)；H1 NMRδ(d6-DMSO)2.33(3Hs)3.85(3Hs)5.11(2Hs)6.61(1Hs)7.01(1Hs)7.18-7.29(4Hm)7.40(1Hd)8.32(2Hs)8.90(1Hs)9.77(1Hs)11.04(1Hs)。
6-{[3-乙酰氧基-5-(2-甲基苄氧基)苯甲酰基]氨基}-3-吡啶甲酸甲酯(150mg，0.38mM)，碘化钾(13mg，0.08mM)和碳酸钾(56mg，0.41mM)在丙酮(3ml)中的加热至55℃且加入3-氯甲基-5-甲基异噁唑(55mg，0.421mM)在丙酮(2ml)中的溶液。55℃下将该反应搅拌1小时且进一步加入存在于丙酮(1ml)中的3-氯甲基-5-甲基异噁唑(33mg，0.25mM)。55℃下将该反应搅拌24小时，之后冷却至室温。加入乙酸乙酯(15ml)且所得混合物用1N含水HCl(10ml)，饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)和水(10ml)洗涤。减压下除去溶剂得到6-{[3-(2-甲基苄氧基)-5-(5-甲基异噁唑-3-基甲氧基)苯甲酰基]氨基}-3-吡啶甲酸酯，其为白色固体(252mg)；H′NMRδ(d6-DMSO)2.24(3Hs)2.26(3Hs)3.85(3Hs)5.08(2Hs)5.15(s 2H)6.28-6.35(1Hm)6.88(1Hs)7.17-7.43(7Hm)，8.29(1Hs)，8.9(1Hd).MS[MH]+488
实施例D
6-[(3-异丁氧基-5-异苄氧基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸甲酯(途径4)
6-[(3-异丁氧基-5-异丙氧基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸甲酯(230mg，0.62mM)溶解在THF(8ml)并加入2M NaOH溶液(1.2ml，2.40mM)。将水(7ml)加入到该反应混合物直至变为单相。室温下将该反应搅拌6小时且随后用1N含水HCl酸化至pH＝1。由该混合物沉淀出的白色固体通过过滤分离且干燥得到标题化合物，其为无色固体(195mg)；H′ NMRδ(d6-DMSO)0.99(6Hd)1.12(6Hd)2.00(1Hsept)3.80(2Hd)4.65(1H sept)6.62(1Hs)7.19(2Hs)8.30(2Hs)8.86(1Hs)11.09(1Hs br)；[M+H]+373；[M-H]-371。
起始甲酯通过下列步骤制备：
6-[(3-苄氧基-5-羟基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸甲酯(2.20g，5.81mM)，三苯基膦(1.59g，6.10mM)，异丙醇(0.445ml，5.81mM)和THF(50ml)混合且滴加偶氮二甲酸二异丙酯(1.2ml，6.10mM)。室温下将该反应搅拌72小时。该混合物真空浓缩且所得褐色油通过柱色谱在Kieselgel 60上纯化，用含50-100％二氯甲烷的异己烷的梯度且随后含5％EtOAc的二氯甲烷洗脱得到6-[(3-苄氧基-5-异丙氧基苯甲酰基)氨基]-3吡啶甲酸酯，其为无色油(1.92g)；H1 NMRδ(d6-CDCl3)1.36(6Hd)3.95(3Hs)4.60(1H sept)5.09(2Hs)6.72(1Hs)7.02(1Hs)7.10(1Hs)7.30-7.50(4Hm)8.39(2H ddd)8.68(1Hsbr)8.92(1Hs).[M+H]+421；[M-H]-419。
6-[(3-苄氧基-5-异丙氧基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸甲酯(1.92g，4.57mM)溶解在THF(100ml)中且随后加入乙醇(100ml)和10％碳载钯(250mg)。该反应在室温下氢气氛下(球)搅拌20小时且随后经硅藻土过滤。减压下浓缩滤液得到6-[(3-羟基-5-异丙氧基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸甲酯，其为无色固体(1.42g)；H′NMRδ(d6-DMSO)1.24(6Hd)3.85(3Hs)4.62(1H sept)6.49(1Hs)6.97(1Hs)7.04(1Hs)8.30(2Hs)8.89(1Hs)9.67(1Hs)11.01(1Hsbr)；[M+H]+331；[M-H]-329。
6-[(3-羟基-5-异丙氧基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸甲酯(0.300g，0.91mM)，三苯基膦(0.238g，0.91mM)，异丁醇(0.084ml，0.91mM)和THF(8ml)混合并滴加偶氮二甲酸二异丙酯(0.18ml，0.91mM)。该混合物在室温下搅拌15分钟。该反应在减压下浓缩和所得褐色油通过柱色谱在Kieselgel 60上纯化，用50-100％二氯甲烷在异己烷中的梯度和随后含20％乙酸乙酯的二氯甲烷洗脱得到6-[(3-异丁氧基-5异丙氧基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸甲酯，其为无色固体(0.232g)；[M+H]+387；[M-H]-385。
实施例E
6-{[3，5-二-(2-甲基苯甲酰基氨基)苯甲酰基]氨基}-3-吡啶甲酸(途径5)
6-{[3，5-二-(2-甲基苯甲酰基氨基)苯甲酰基]氨基}-3-吡啶甲酸甲酯(130mg 0.25mM)在室温下与氢氧化锂(52.5mg 1.25mM)在水(2ml)和THF(10ml)中搅拌过夜。随后蒸发该混合物除去THF且用1.0N盐酸酸化至pH＝3。将沉淀的固体过滤，用水洗涤和真空下室温干燥(70mg72.1％)。由乙酸乙酯/甲醇重结晶得到标题化合物(16mg 16.5％)。H1NMRδ(d6-DMSO)2.52(6Hs)7.32(4Hm)7.42(2Hm)7.52(2Hm)8.08(2Hs)8.37(2Hs)8.48(1Hs)8.91(1Hs)10.53(2Hs)11.13(1Hs)13.2(1Hb)；MS[MH]+509。
甲酯中间体通过下列方法制备：
将3，5-二硝基苯甲酸(4.24g 20mM)与草酰氯(3.5ml，xs)在二氯甲烷(50ml)和DMF(1滴)中室温下搅拌4小时。蒸发该混合物且随后重新溶解在二氯甲烷中(20ml)中。将该溶液加入到6-氨基烟酸甲酯(3.0g20mM)在吡啶(100ml)中的溶液中，在室温下搅拌过夜之后，蒸发吡啶和该残余物在硅胶上用v/v乙酸乙酯/异己烷层析得到6-[(3，5-二硝基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸甲酯(5.2g 75％)。H NMRδ(d6-DMSO)3.9(3Hs)8.35(2Hq)8.95(2Hm)9.18(2Hs)
将6-[(3，5-二硝基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸甲酯(4.9g 14mM)溶解在THF中并加入10％Pd/C(800mg)。使该混合物氢化直至停止摄入且随后经硅藻土过滤。蒸发滤液得到固体产物(1.0g)。滤饼用大量的THF继续洗涤得到另一部分产物(850mg)，得到6-[(3，5-二氨基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸甲酯，总重量为1.85g(46％)；H′NMRδ(d-DMSO)3.85(3Hs)4.93(4Hbs)6.0(1Hs)6.38(2Hs)8.28(2Hm)8.85(1Hs)10.41(1Hbs)；MS[MH]+287
6-[(3，5-二氨基苯甲酰基)氨基]-3-吡啶甲酸甲酯(286mg，1mM)在室温下与2-甲基苯甲酸(248mg，1.8mM)，HATU(950mg，2.5mM)和二异丙基乙基胺(1.4ml，8mM)在DMF(20ml)中搅拌。该混合物在室温下搅拌过夜且随后倾入水且用乙酸乙酯萃取。将萃取物干燥(硫酸镁)过滤和蒸发得到油。在硅胶上层析，用乙酸乙酯/己烷的梯度洗脱，得到6-{[3，5-二-(2-甲基苯甲酰基氨基)苯甲酰基]氨基}-3-吡啶甲酸甲酯(130mg，25％)；H1 NMRδ(d6-DMSO)2.5(6Hs)3.9(3Hs)7.25-7.55(8Hm)8.05(2Hs)8.3-8.45(3Hm)8.9(1Hs)10.55(2Hs)11.2(1Hs)；MS[MH]+523
实施例F
6-{[3，5-二苯氧基甲基苯甲酰基]氨基}-3-吡啶甲酸(途径6)
3，5-二苯氧基甲基苯基氨基甲酰基吡啶-3-甲酸甲酯(225mg，0.46mM)在室温下与2.0M氢氧化钠(1.2ml，2.4mM)在水(10ml)和THF(25ml)中搅拌过夜。蒸发半体积后该混合物用稀盐酸酸化得到沉淀。过滤出该沉淀，用水洗涤且真空下浓缩得到固体。该产物在甲醇(20ml)中回流搅拌，冷却，过滤和真空下干燥得到标题化合物，其为无色固体(148mg 68％)；H1 NMRδ(d6-DMSO)5.2(4Hs)6.95(2Ht)7.05(4Hd)7.3(4Ht)7.78(1Hs)8.1(2Hs)8.3(2Hs)8.88(1Hs)11.2(1Hs)13.25(1Hb)；MS[MH+]+455。
该起始甲酯中间体制备如下：
室温下3，5-二羟基甲基苯甲酸甲酯(500mg 2.55mM)，三苯基膦(2.0g 7.65mM)和苯酚(480mg 5.1mM)溶解在THF(20ml)。30分钟内滴加偶氮二甲酸二异丙酯(1.5ml 7.65mM)。继续搅拌10分钟后该混合物真空浓缩且该残余物利用MPLC纯化(使用硅胶和异己烷/二氯甲烷作为洗脱剂)得到3，5-二苯氧基甲基苯甲酸甲酯，其为无色固体(534mg 60％)；H1 NMRδ(d6-DMSO)3.92(3Hs)5.1(4Hs)6.92-7.02(6Hm)7.12-7.36(4Hm)7.72(1Hs)8.07(2Hs)；MS[MH]-347
3，5-二苯氧基甲基苯甲酸甲酯(525mg 1.51mM)、2.0M氢氧化钠(2.3ml 4.6mm)、甲醇(5ml)、水(3ml)和THF(10ml)一起在室温下搅拌3小时。浓缩1/2体积之后该混合物用2.0M盐酸酸化且在乙酸乙酯和水之间分配。该有机萃取物用水洗涤，干燥(硫酸镁)过滤和蒸发得到3，5-二苯氧基甲基苯甲酸，其为无色固体(500mg，99％)；H1 NMRδ(d6-DMSO)5.19(4Hs)6.9-7.18(6Hm)7.28(4Ht)7.78(1Hs)7.95(2Hs)；MS[MH]-333。
室温下3，5-二苯氧基甲基苯甲酸(500mg 1.49mM)与草酰氯(1.4ml1.65mM)在二氯甲烷(20ml)和DMF(1drop)中搅拌2小时。用小体积的甲苯共沸除去溶剂。将残余物溶解在二氯甲烷(10ml)中并加入存在于吡啶中的6-氨基烟酸甲酯(250mg 1.65mM)。该混合物在室温下甲苯30分钟和随后蒸发溶剂留下褐色残余物。其通过MPLC在硅胶上纯化，用乙酸乙酯/异己烷作为洗脱剂。由此得到6-{[3，5-二苯氧基甲基苯甲酰基]氨基}-3-吡啶甲酸甲酯(273mg，39％)；H1 NMRδ(d6-DMSO)3.95(3Hs)5.15(4Hs)6.96-7.05(6Hm)7.21-7.29(4Hm)7.75(1Hs)7.95(2Hs)8.3-8.52(2Hm)8.9(1Hs)8.93(1Hs)
实施例G
2-{(3-氨基-5-[2-(4-甲基-噻唑-5-基)乙氧基]苯甲酰基氨基)-5-吡啶甲酸(途径7)
将2M NaOH(1.5ml，3mM)加入到6-[3-氨基-5-(4-甲基-噻唑-5-基)乙氧基]-3-吡啶甲酸甲酯(0.40g，0.97mM)在THF(30m])/水(30ml)中的溶液内。1小时后该反应混合物用2M HCl之后，随后真空浓缩。PH用2M HCl调至3-4，过滤，高真空下干燥得到标题化合物，其为浅黄色色固体(0.32g，83％)；′H NMRδ(d6-DMSO)：2.34(s，3H)，3.18(dd，2H)，4.13(dd，2H)，6.31(m，1H)，6.80(m，2H)，8.25(s，2H)，8.82(s，1H)，8.85(s，1H)，10.80(bs，1H)。
该起始甲酯中间体制备如下：
将10％碳载钯(0.20g)在氩气氛下加入到2-[3-硝基-5-(4-甲基-噻唑-5-基)乙氧基苯甲酰基]氨基-5-吡啶甲酸甲酯(1.05g，1.7mM)在乙酸乙酯(50ml)/乙醇(50ml)中的溶液内。引入氢气并剧烈搅拌该反应混合物18小时，之后经硅藻土过滤，真空浓缩和取出催化剂(80mg)。在氢气下搅拌18小时，完成最后的催化剂变化，此后粗苯胺在硅胶上纯化(1％-4％MeOH/DCM)得到标题化合物，其为无色固体(0.43g，60％)；′H NMRδ(d6-DMSO)：2.36(s，3H)，3.18(dd，2H)，3.88(s，3H)，4.12(dd，2H)，5.32(bs，2H)，6.33(m，1H)，6.79(m，2H)，8.30(m，2H)，8.81(s，1H)，8.88(m，1H)，10.90(bs，1H)。
起始2-[3-硝基-5-(4-甲基-噻唑-5-基)乙氧基苯甲酰基]氨基-5-吡啶甲酸甲酯按照草酰氯偶联方法由3-硝基-5-(4-甲基-噻唑-5-基)乙氧基]苯甲酸，按照实施例A所述制备：
1H NMRδ(d6-DMSO)：2.35(s，3H)，3.28(m，2H)，3.87(s，3H)，4.37(dd，2H)，7.87(m，1H)，8.03(m，1H)，8.33(m，2H)，8.38(m，1H)，8.82(s，1H)，8.91(m，1H)，11.59(bs，1H)。
所需3-硝基-5-(4-甲基-噻唑-5-基)乙氧基]苯甲酸是通过标准方法由3-硝基-5-羟基苯甲酸，按照下列路线制备：
室温和氩气氛下将DIAD(3.16ml，16.1mM)加入到3-硝基-5-羟基苯甲酸甲酯(2.11g，10.7mM)，2-(4-甲基噻唑-5-基)乙醇(1.55ml，12.8mM)和三苯基膦(4.21g，16.1mM)在THF(50mol)的搅拌溶液内。1小时后该反应混合物真空浓缩，且残余物用乙醚研制得到无色固体(三苯基膦氧化物)。乙醚浓缩得到深褐色胶，在硅胶上纯化(50％ to 75％EtOAc/异己烷)得到污染由DIAD和三苯基膦氧化物(6.8g)的产物。将粗产物溶解/悬浮在MeOH(80ml)中，加入2M NaOH(20ml，40mM)，在65℃下加热4小时，随后冷却且浓缩。该残余物用水(140ml)/2MNaOH(40ml)稀释，将沉淀的三苯基膦氧化物过滤，随后用浓HCl酸化至pH＝1-2。将沉淀过滤，用水洗涤，在高真空下干燥得到3-硝基-5-(4-甲基-噻唑-5-基)乙氧基]苯甲酸，其为无色固体(3.12g，79％2步内)；1H NMRδ(d6-DMSO)：2.39(s，3H)，3.23(t，2H)，4.35(t，2H)，7.78(s，1H)，7.90(m，1H)，8.22(s，1H)，8.93(s，1H)。
实施例H
2-{3-二甲基氨基-5-[2-(4-甲基-噻唑-5-基)乙氧基1苯甲酰基氨基}-5-吡啶甲酸(途径8)
惰性气氛和室温下将甲醛(37％wt在水中)(0.021ml，0.75mM)加入到2-[3-氨基-5-(4-甲基-噻唑-5-基)乙氧基苯甲酰基]氨基-5-吡啶甲酸(0.10g 0.25mM)和4A分子筛(0.25g)在甲醇(15ml)中的溶液内。1小时后加热氰基硼氢化钠(0.019g，0.3mM)且将该反应混合物搅拌40小时。将该反应混合物过滤，真空浓缩，2M NaOH加入至pH＝11-12，随后用2M HCl酸化沉淀出固体。过滤该固体，用水洗涤，干燥和在硅胶上纯化(5％-12％MeOH/DCM)得到标题化合物，其为浅黄色色固体(0.020g，19％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：2.36(s，3H)，2.95(m，2H)，4.19(dd，2H)，6.39(s，1H)，6.92(m，2H)，6.99(s，1H)，8.27(s，2H)，8.83(s，1H)，8.88(s，1H)，11.02(bs，1H)。
2-[3-氨基-5-(4-甲基-噻唑-5-基)乙氧基苯甲酰基]氨基-5-吡啶甲酸起始原料按照实施例G所述方法制备。
实施例I
2-{3-(2-甲基苄基氨基)-5-[2-(4-甲基-噻唑-5-基)乙氧基]苯甲酰基氨基}-5-吡啶甲酸(途径9)
室温和惰性气氛下将2-甲基苯甲醛(0.035ml，0.3mM)加入到2-[3-氨基-5-(4-甲基-噻唑-5-基)乙氧基苯甲酰基]氨基-5-吡啶甲酸(0.10g 0.25mM)和4A分子筛(0.25g)在甲醇(15ml)中的溶液内。1小时后加入氰基硼氢化钠(0.019g，0.3mM)且将该反应混合物搅拌40小时。将该反应混合物过滤，真空浓缩，2M NaOH加热至pH＝11-12，随后用2M HCl至沉淀出无色固体。过滤该固体，用水洗涤得到标题化合物，其为无色固体(0.12g，96％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：2.33(m，6H)，3.19(dd，2H)，4.13(dd，2H)，4.26(s，2H)，6.33(s，1H)，6.83(s，1H)，6.90(s，1H)，7.09-7.19(m，3H)，7.26(s，1H)，8.28(s，2H)，8.83(s，1H)，8.88(s，1H)，10.87(s，1H)，13.09(bs，1H)。
2-[3-氨基-5-(4-甲基-噻唑-5-基)乙氧基苯甲酰基]氨基-5-吡啶甲酸起始原料按照实施例G所述方法制备。
实施例J
2-[3-异丙氧基-5-{(2-氟苯氧基)甲基}苯甲酰基氨基]-5-吡啶甲酸(途径10)
室温下2M NaOH(0.55ml，1.1mM)加入到存在于THF(10ml)/水(10ml)中的2-[3-异丙基氧基-5-(2-氟苯氧基)甲基苯甲酰基]氨基-5-吡啶甲酸甲酯(0.16g，0.36mM)。4小时后用2M HCl该反应混合物中和至pH＝4-5，浓缩，过滤，用水洗涤，和在高真空下干燥得到标题化合物，其为无色固体(0.15g，98％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：1.28(d，6H)，4.74(m，1H)，5.20(s，2H)，6.87-6.97(m，1H)，7.10(m，1H)，7.16-7.26(m，3H)，7.54(s，1H)，7.66(s，1H)，8.28(s，2H)，8.84(s，1H)，11.78(bs，1H)。
所需中间体甲酯制备如下：
室温和氩气氛下将草酰氯(0.20ml，2.35mM)加入到存在于含DMF(2滴)的二氯甲烷(10ml)中的3-异丙基氧基-5-(2-氟苯氧基)甲基苯甲酸(0.20g，0.66mM)。2小时后，将该反应混合物真空浓缩。将酰氯和2-氨基-吡啶-5-甲酸甲酯(0.1g，0.66mM)溶解在吡啶(5ml)中并在氩气下搅拌过夜。该反应混合物浓缩并用MeOH研制得到标题化合物，其为无色固体(0.19g，66％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：1.29(d，6H)，3.85(s，3H)，4.74(m，1H)，5.18(s，2H)，6.93(m，1H)，7.10(m，1H)，7.16-7.26(m，3H)，7.53(s，1H)，7.66(s，1H)，8.32(s，2H)，8.89(s，1H)，11.21(bs，1H)。
所需3-异丙基氧基-5-(2-氟苯氧基)甲基苯甲酸起始原料制备如下：
将2M NaOH(4.2ml，8.4mM)加入到存在于MeOH(20ml)/THF(4ml)中的3-异丙基氧基-5-(2-氟苯氧基)甲基苯甲酸甲酯(0.67g，2.1mM)的溶液内。5小时，浓缩该反应混合物，酸化至pH＝1-2(2M HCl)，过滤和高真空下干燥得到标题化合物，其为无色固体(0.62g，97％)；1HNMRδ(d6-DMSO)：1.25(d，6H)，4.61(m，1H)，5.18(s，2H)，6.92(m，1H)，7.05-7.24(m，4H)，7.34(s，1H)，7.54(s，1H)。
所需3-异丙基氧基-5-(2-氟苯氧基)甲基苯甲酸甲酯起始原料制备如下：
氩气氛和室温下将DIAD(0.74ml，3.7mM)加入到存在于DCM(40ml)中的3-异丙基氧基-5-羟基甲基苯甲酸甲酯(0.56g，2.5mM)，三苯基膦(0.98g，3.7mM)和2-氟苯酚(0.24ml，2.7mM)中。10分钟后浓缩该反应混合物且在硅胶上纯化(10-15％EtOAc/异己烷)得到标题化合物，其为浅黄色色油，在高真空下固化(0.71g，90％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：1.26(d，6H)，3.82(s，3H)，4.64(m，1H)，5.21(s，2H)，6.92(m，1H)，7.09(m，1H)，7.16-7.26(m，3H)，7.35(s，1H)，7.58(s，1H)。
所需3-异丙氧基-5-羟基甲基苯甲酸甲酯起始原料制备如下：
5-异丙氧基-间苯二甲酸一甲酯(5.15g，21.6mM)溶解在THF(180ml)，冷却至2℃且在15分钟内滴加硼烷。THF复合物(72ml的1.5M溶液，在THF中，0.11mM)，保持内温＜5℃。15分钟后该反应混合物升至室温，搅拌3小时后冷却(冰浴)且用冰块终止。当发现不再继续反应时加入盐水(150ml)/乙醚(150ml)。除去有机层，水层用附加的乙醚(1×100ml)萃取，合并的有机层用盐水洗涤(1×100ml)，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩。在硅胶上纯化(20-25％EtOAc/异己烷)得到标题化合物，其为无色固体(3.57g，74％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：1.26(d，6H)，3.82(s，3H)，4.50(d，2H)，4.63(m，1H)，5.26(t，1H(-OH))，7.10(s，1H)，7.25(s，1H)，7.47(s，1H)。
所需5-异丙氧基-间苯二甲酸一甲酯起始原料制备如下：
将2M在MeOH(9ml)中的NaOH(1.03g，25.9mM)加入到5-异丙氧基-间苯二甲酸二甲酯(5.68g，22.5mM)在丙酮(45ml)中的溶液内且在室温下搅拌过夜。浓缩该反应混合物，酸化(2M HCl)至pH＝1-2，过滤，用水洗涤和高真空下干燥得到无色固体(5.25g，98％)(含有15-20％二酸)；MS(M-H+)-237。
所需5-异丙氧基-间苯二甲酸二甲酯起始原料制备如下：
5-羟基-间苯二甲酸二甲酯(5.2g，24.6mM)，碳酸钾(4.07g，29.5mM)，碘化钾(0.82g，4.9mM)和2-溴丙烷(2.4ml，25.8mM)在DMF(50ml)中加热至90℃3小时，此后加入附加的2-溴丙烷(2.4ml)，碳酸钾(2.2g)，和继续加热4小时。该反应混合物冷却至室温且浓缩。加入EtOAc(150ml)，随后用水洗涤，盐水，干燥(MgsO4)，过滤和浓缩得到浅黄色色油，它在放置时固化(6.0g，97％)；MS(MH+)253。
实施例K
2-[3-异丙基氧基-5-{(2-氟苄基氨基)甲基苯甲酰基氨基}-5-吡啶甲酸(途径11)
将2-(3-异丙氧基-5-羧基-苯甲酰基)氨基-5-吡啶甲酸(0.10g，0.30mM)，4A分子筛(0.3g)和2-氟苄基胺在MeOH中室温下搅拌2小时，此后加入氰基硼氢化钠(0.023g，0.36mM)。2小时后，过滤该反应混合物，残余物用MeOH洗涤且将滤液真空浓缩。加入水，此后用2M HCl酸化至沉淀出无色固体，将其过滤，用水洗涤和在高真空下干燥得到标题化合物，其为浅褐色固体(0.10g，76％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：1HNMRδ(d6-DMSO)：1.29(d，6H)，4.13(d，2H)，4.74(m，1H)，7.20-7.30(m，3H)，7.43(m，1H)，7.58(m，2H)，7.68(s，1H)，8.28(s，2H)，8.87(s，1H)，11.10(bs，1H)。
所需醛中间体制备如下：
氩气下向在THF(20ml)中的2-(3-异丙氧基-5-羟基甲基-苯甲酰基)氨基-5-吡啶甲酸(0.33g，1.0mM)一次加热Dess-Martinperiodinane(0.46g，1.1mM)。45分钟后加入饱和碳酸钾(20ml)且真空除去THF。残余物与2.0M Na2SO3(3.5ml，7mM)搅拌35分钟，此后小心用2M HCl酸化至pH＝1。所得混悬液被过滤，用水洗涤，乙醚，DCM和在高真空下干燥得到2-(3-异丙氧基-5-羧基-苯甲酰基)氨基-5-吡啶甲酸，其为浅黄色色固体(0.3g，93％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：1.32(d，6H)，4.82(m，1H)，7.58(m，1H)，7.84(m，1H)，8.11(s，1H)，8.29(s，2H)，8.87(s，1H)，10.02(s，1H)，11.34(bs，1H)。
所需中间体甲醇(实施例L)制备如下。
实施例L
2-(3-异丙氧基-5-羟基甲基-苯甲酰基氨基)-5-吡啶甲酸(途径12)
本标题化合物利用标准水解条件(2M NaOH/THF/MeOH)、由2-(3-异丙氧基-5-乙酰氧基甲基)苯甲酰基氨基5-吡啶甲酸甲酯(0.85g，2.2mM)起始制备，得到该标题化合物，其为无色固体(0.13g，92％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：1.28(d，6H)，4.50(s，2H)，4.72(m，1H)，7.06(s，1H)，7.42(s，1H)，7.53(s，1H)，8.29(s，2H)，8.87(s，1H)，11.09(bs，1H)。
所需二酯中间体制备如下：
在3-异丙氧基5-乙酰氧基甲基苯甲酸和2-氨基吡啶-5-甲酸甲酯之间的标准酰偶联(草酰氯/DMF在二氯甲烷中)得到2-(3-异丙氧基-5-乙酰氧基甲基)苯甲酰基氨基-5-吡啶甲酸甲酯，其为无色固体(1.0g，72％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：1.29(d，6H)，2.08(s，3H)，3.85(s，3H)，4.74(m，1H)，5.07(s，2H)，7.10(s，1H)，7.53(s，1H)，7.55(s，1H)，8.31(s，2H)，8.89(s，1H)，11.19(bs，1H)。
所需乙酰氧基甲基苯甲酸中间体制备如下：
将3-异丙氧基-5-羟基甲基苯甲酸(0.77g，3.7mM)溶解在DCM(20ml)中，加入吡啶(1.18ml，14.6mM)，冷却(冰浴)，随后乙酰氯(0.55ml，7.7mM)。使该反应混合物升至室温，2小时后加入水(20ml)且搅拌过夜。此后有机层用0.05M HCl(1×20ml)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩得到3-异丙氧基-5-羟基甲基苯甲酸，其为浅黄色色固体(1.12g，93％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：1.25(d，6H)，2.06(s，3H)，4.64(m，1H)，5.06(s，2H)，7.12(s，1H)，7.31(s，1H)，7.46(s，1H)。
所需羟基甲基甲基苯甲酸中间体制备如下：
3-异丙氧基-5-羟基甲基苯甲酸甲酯(如实施例J所述)(1.12g，5.0mM)的标准酯水解(2M NaOH/THF/MeOH)得到3-异丙氧基-5-羟基甲基苯甲酸，其为无色固体(0.98g，94％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：1.25(d，6H)，4.47(s，2H)，4.60(m，1H)，5.23(bs，1H)，7.06(s，1H)，7.24(s，1H)，7.45(s，1H)。
实施例M
2-{3-异丙氧基-5-[2-(2-吡啶基)乙烯基]苯甲酰基氨基}-5-吡啶甲酸(途径13)
2-{3-异丙氧基-5-[2-(2-吡啶基)乙烯基苯甲酰基}氨基-S-吡啶甲酸甲酯的标准酯水解(2M NaOH/THF)得到标题化合物，其为浅黄色色固体(0.024g，34％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：′H NMRδ(d6-DMSO)：1.32(d，6H)，4.82(m，1H)，7.40(s，1H)，7.49-7.58(m，1H)，7.61(d，1H)，7.62(m，1H)，7.72(m，1H)，7.91(s，1H)，8.03(d，1H)，8.13(d，1H)，8.32(m，2H)，8.74(m，1H)，8.89(m，1H)，11.28(bs，1H)。
所需甲酯中间体制备如下：
将三苯基(2-吡啶基甲基)磷鎓氯盐酸化物(0.12g，0.28mM)悬浮在THF(10ml)且在氩气氛下加入叔丁醇钾(1.0M在THF中)(0.55ml，0.55mM)。15分钟后在氩气氛下将该溶液经注射器转移到2-(3-异丙氧基-5-羧基-苯甲酰基)氨基-5-吡啶甲酸甲酯(0.079g，0.23mM)在THF(10ml)中的冷却(冰浴)溶液内。使该反应混合物升至室温过夜，此后加入水，真空浓缩，用乙酸乙酯萃取，有机萃取物干燥(MgSO4)，过滤和真空浓缩。在硅胶上纯化(10g结合洗脱，负载在DCM中，用15％-30％EtOAc/异己烷洗脱)得到2-{3-异丙氧基-5-[2-(2-吡啶基)乙烯基]苯甲酰基}氨基-5-吡啶甲酸甲酯，其为无色膜(0.07g，73％)；MH+＝418所需醛中间体制备如下：
2-(3-异丙氧基-5-羟基甲基苯甲酰基)氨基-5-吡啶甲酸甲酯(0.37g，1.1mM)的标准Dess-Martin periodinane氧化反应(如实施例K所述)得到2-(3-异丙氧基-5-羧基-苯甲酰基)氨基-5-吡啶甲酸甲酯，其为无色固体(0.32g，87％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：1.32(d，6H)，3.85(s，3H)，4.82(m，1H)，7.58(m，1H)，7.84(m，1H)，8.08(s，1H)，8.32(s，2H)，8.89(s，1H)，10.02(s，1H)，11.40(bs，1H)。
所需中间体甲基醇制备如下：
将碳酸钾(0.197g，1.42mM)加入到2-(3-异丙氧基-5-乙酰氧基甲基)苯甲酰基氨基-5-吡啶甲酸甲酯(0.55g，1.42mM)在MeOH(25ml)/水(2.5ml)中的溶液内。在室温下搅拌2小时后，将该反应混合物用2MHCl酸化至沉淀出固体，通过过滤收集它且高真空下干燥得到标题化合物，其为无色固体(0.40g，82％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：1.3(d，6H)，3.85(s，3H)，4.55(d，2H)，4.75(hept，1H)，5.25(t，1H)，7.05(s，1H)，7.45(s，1H)，7.55(s，1H)，8.35(d，2H)，8.9(d，1H)，11.1(bs，1H)；m/z 345(MH)+，343(M-H)
所需2-(3-异丙氧基-5-乙酰氧基甲基)苯甲酰基氨基-5-吡啶甲酸甲酯按照实施例L所述方法制备。
实施例N
2-{3-异丙氧基-5-[(N-甲基)4-甲苯磺酰基氨基甲基]苯甲酰基氨基}5-吡啶甲酸(途径14)
2-{3-异丙氧基-5-[(N-甲基)-4-甲苯磺酰基氨基甲基]苯甲酰基}氨基-5-吡啶甲酸甲酯的标准酯水解(2M NaOH/THF)，如实施例A所述的，得到标题化合物，其为浅黄色色固体1H NMRδ(d6-DMSO)：1.23(d，6H)，2.40(s，3H)，2.58(s，3H)，4.13(s，2H)，4.62-4.72(m，1H)，7.70(s，1H)，7.41-7.52(m，4H)，7.73(d，2H)，8.31(s，2H)，8.84(s，1H)，11.16(s，1H)m/z 498(MH)+，496(M-H)-。
所需甲酯起始原料制备如下：
将2-(3-异丙氧基-5-羟基甲基苯甲酰基)氨基-5-吡啶甲酸甲酯(100mg，0.29mM)，三丁基膦(88mg，0.44mM)和N-甲基-对-甲苯磺酰胺(82mg，0.44mM)依次溶解在无水甲苯中，在氩气氛和0℃下搅拌。随后将固体1，1′-(偶氮二羰基)二哌啶(ADDP)(111mg，0.44mM)加入到该溶液。10分钟后，该反应混合物升至室温且连续搅拌24小时。将己烷加入到该反应混合物和分离出二氢-ADDP且通过过滤除去。产物在硅胶上纯化(梯度0-100％Et0Ac/异己烷)得到产物，其为无色固体(51mg，0.1mM，34％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：1.25(d，6H)，2.4(s，3H)，2.59(s，3H)，3.83(s，3H)，4.14(s，2H)，4.62-4.72(m，1H)，7.00(s，1H)，7.42(d，2H)，7.48(s，2H)，7.72(d，2H)，8.34(s，2H)，8.90(s，1H)，11.21(bs，1H)。
所需苄基醇起始原料按照实施例M所述方法制备。
实施例O
2-[3-(2-氟苄氧基)-5-(5-甲基异噁唑-3-基甲氧基甲基)-苯甲酰基氨基]-5-吡啶甲酸(途径15)
2-[3-(2-氟苄氧基)-5-(5-甲基异噁唑-3-基甲氧基)甲基苯甲酰基]氨基吡啶-5-甲酸甲酯的标准酯水解(2M NaOH/THF)，按照实施例A所述，得到标题化合物，其为无色固体1H NMRδ(300MHz，d6-DMSO)：2.40(s，3H)；4.58(s，4H)，5.22(s，2H)；6.26(s，1H)；7.21-7.30(m，3H)；7.38-7.4 5(m，1H)；7.55-7.60(ap d，1H)；7.60(s，1H)；7.64(s，1H)；8.32(s，2H)；8.86(s，1H)；11.16(br s，1H)；m/z 492(M+H)+，490(M-H)-。
所需甲酯起始原料通过标准草酰氯偶联反应、由3-(2-氟苄氧基)-5-(5-甲基异噁唑-3-基甲氧基)甲基苯甲酸，按照实施例A所述(途径1)制备，得到2-[3-(2-氟苄氧基)-5-(5-甲基异噁唑-3-基甲氧基)甲基苯甲酰基]氨基吡啶-5-甲酸甲酯，1H NMRδ(d6-DMSO)：2.40(s，3H)；3.86(s，3H)；4.58(ap d，4H)；5.22(s，2H)；6.27(s，1H)，7.20-7.30(m，3H)；7.39-7.46(m，1H)；7.59(d，1H)；7.61(s，2H)；7.68(s，1H)；8.37(s，2H)；8.91(s，1H)；11.22(br s，1H)；m/z 506(M+H)+。
所需3-(2-氟苄氧基)-5-(5-甲基异噁唑-3-基甲氧基)甲基苯甲酸起始原料通过3-(2-氟苄氧基)-5-(5-甲基异噁唑-3-基甲氧基)甲基苯甲酸甲酯的标准水解反应按照通用烷基化方法，并且以实施例C和E的方式制备；1H NMRδ(d6-DMSO)：2.40(s，3H)；4.54(s，2H)；4.57(s，2H)；5.20(s，2H)；6.24(s，1H)；7.18-7.28(m，3H)；7.39-7.47(m，2H)；7.50-7.60(m，2H)；m/z 370(M-H)-。
所需3-(2-氟苄氧基)-5-(5-甲基异噁唑-3-基甲氧基)甲基苯甲酸甲酯起始原料制备如下：
0℃下氢化钠(60％的在油中的分散体，83mg，2.07mM)加入到3-(2-氟苄氧基)-5-羟基甲基苯甲酸甲酯(400mg，1.38mM)在THF(10ml)中的溶液内。该反应混合物升至室温，之后加入3-氯甲基-5-甲基异噁唑(272mg，2.07mM)。将该反应混合物在室温下搅拌24小时。反应用水(5ml)终止，随后用乙酸乙酯(10ml)稀释。分离有机相且用硫酸镁干燥且真空浓缩得到黄色油(462mg，1.2mM，87％)，其无需进一步纯化就可使用；1H NMRδ(d6-DMSO)：2.39(s，3H)；3.82(s，3H)；4.56(s，2H)；4.58(s，2H)；5.20(s，2H)；6.24(s，1H)；7.18-7.28(m，3H)；7.38-7.42(t，1H)；7.48(s，1H)；7.50-7.58(m，2H)；m/z386(M+H)+.
所需3-(2-氟苄氧基)-5-羟基甲基苯甲酸甲酯起始原料按照脚注(f)所述方法制备。
实施例P
2-[3-异丙氧基-5-(2-氟苯基磺酰基甲基)苯甲酰基氨基]-5-吡啶甲酸(途径16)
2-[3-异丙氧基-5-(2-氟苯基磺酰基)甲基苯甲酰基]氨基吡啶-5-甲酸甲酯的标准酯水解(2M NaOH/THF)，按照实施例A所述，得到标题化合物，其为浅黄色色固体，1H NMRδ(300MHz，d6-DMSO)：1.12(d，6H)；4.58-4.66(m，1H)；4.79(s，2H)；6.98(s，1H)；7.30-7.41(m，2H)；7.43(s，1H)；7.48-7.63(m，2H)；7.72-7.81(m，1H)；8.30(s，2H)；8.86(S，1H)；11.08(br s，1H)；m/z 473(M+H)+，471(M-H)-.4
向2-[3-异丙氧基-5-(2-氟苯基硫烷基)甲基苯甲酰基]氨基吡啶-5-甲酸甲酯(300mg，0.66mM)在冰醋酸(10ml)中的搅拌溶液内加入高锰酸钾(151mg，0.96mM)在水(8ml)中的溶液。将所得褐色溶液在室温下搅拌2小时。加入亚硫酸钠固体直至该反应混合物变澄清和无色为止。加入乙酸乙酯且有机相用碳酸氢钠的饱和溶液(4×50ml)洗涤。分离有机相，用硫酸镁干燥和真空浓缩得到黄色油。其在硅胶上纯化(梯度0-100％EtOAc/异己烷)得到2-[3-异丙氧基-5-(2-氟苯基磺酰基)甲基苯甲酰基]氨基吡啶-5-甲酸甲酯，其为无色固体(70mg，0.14mM，21％)；m/z 487(M+H)+。
所需硫化物起始原料按照实施例J所述方法制备(途径10)。
实施例Q
2-[3-异丁氧基-5-(3-噻吩基)苯甲酰基mino]-5-吡啶甲酸(途径17)
2-[3-异丁氧基-5-(3-噻吩基)苯甲酰基]氨基吡啶-5-甲酸甲酯的标准酯水解(2M NaOH/THF)，按照实施例A所述，得到标题化合物，其为浅黄色色固体，m/z 397(M+H)+395(M-H)-；LC-MS：保留时间2.84分钟，93％纯度。
所需甲酯起始原料通过标准草酰氯偶联反应、由2-[3-异丁基氧基-5-(3-噻吩基)苯甲酸起始，按照实施例A(途径1)所述制备，得到2-[3-异丁氧基-5-(3-噻吩基)苯甲酰基]氨基吡啶-5-甲酸甲酯，1H NMRδ(d6-DMSO)：1.01(d，6H)，2.03(m，1H)，3.85(d，2H)，7.33(m，1H)，7.47(m，2H)，7.63(m，1H)，7.68(m，1H)，7.98(m，1H)，8.47(m，2H)，8.92(s，1H)，11.27(br s，1H)；m/z 411(M+H)+.
所需2-[3-异丁氧基-5-(3-噻吩基)苯甲酸起始原料通过2-[3-异丁氧基-5-(3-噻吩基)苯甲酸甲酯的标准水解、按照通用烷基化方法，并以实施例C和E所列方式制备；′H NMRδ(d6-DMSO)：0.99(d，6H)，2.03(m，1H)，3.84(d，2H)，7.32(m，1H)，7.46(m，1H)，7.57(m，1H)，7.62(m，1H)，7.76(s，1H)，7.97(m，1H)。
所需2-[3-异丁氧基-5-(3-噻吩基)苯甲酸甲酯起始原料制备如下：
将噻吩-3-硼酸(0.134g，1.0mM)，3-异丁氧基-5(三氟甲磺酰基氧基)苯甲酸甲酯(″三氟甲基磺酸酯″)(0.34g，0.95mM)，和双(三苯基膦)钯二氯化物(0.067g，0.09mM)悬浮在甲苯和饱和NaHCO3水溶液的混合物(各5ml)中并在100℃下氩气氛下加热。3小时后，冷却该反应混合物，加热饱和NH4Cl水溶液，分离有机层且随后水层用EtOAc(2×10ml)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤，真空浓缩得到黑色油。在硅胶上纯化(异己烷，随后2％EtOAc/异己烷)得到3-异丁氧基5-(3-噻吩基)苯甲酸甲酯，其为无色油(0.205g，74％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：0.99(d，6H)，2.03(m，1H)，3.84(m，SH)，7.33(m，1H)，7.51(m，1H)，7.58(m，1H)，7.63(m，1H)，7.79(s，1H)，7.99(m，1H)。
所需三氟甲基磺酸酯起始原料制备如下：
-78℃和氩气下将三氟甲磺酸酐(2.3ml，13.9mM)在2分钟内滴加到3-异丁氧基-5-羟基苯甲酸甲酯(2.97g，13.2mM)在DCM(80ml)中的溶液内。1小时后使该溶液升至室温，搅拌30分钟，随后加入饱和NaHCO3水溶液。分离有机层，干燥(MgSO4)，过滤和真空浓缩，得到黄色油。在硅胶上纯化(5％EtOAc/异己烷)得到3-异丁氧基-5(三氟甲磺酰氧基)苯甲酸甲酯，其为无色油(2.64g，56％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：0.97(d，6H)，2.02(m，1H)，3.85(m，5H)，7.42(m，1H)，7.47(m，1H)，7.53(m，1H)。
所需3-异丁氧基-5-羟基苯甲酸甲酯起始原料按照通用烷基化方法B所述制备；1H NMRδ(d6-DMSO)：0.98(d，6H)；1.90-2.03(m，1H)；3.70(d，2H)；3.79(s，3H)；6.57(t，1H)；6.88(s，1H)；6.94(s，1H)；9.78(s，1H)；m/z 225(M+H)+，223(M-H)-。
实施例R
2-{3-[2-(噻吩-2-基)-乙氧基]-5-(4-氯苯氧基)苯甲酰基氨基}-5-吡啶甲酸(途径18)
将1M NaOH(0.263ml，0.26mM)加入到2-{3-[2-(噻吩-2-基)乙氧基]-5-(4-氯苯氧基)}苯甲酰基氨基-5-吡啶甲酸甲酯(44.7mg，0.088mM)在THF(1ml)/甲醇(50μl)中的溶液内。17小时后该反应混合物用1M柠檬酸中和，随后真空浓缩。用1M柠檬酸将pH调至3-4，过滤，高真空下干燥得到标题化合物，其为浅黄色色固体(16.1mg，37％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：3.27(2H，t)，4.30(2H，t)，6.85(1H，m)，6.98(2H，m)，7.10(2H，m)，7.22(1H，m)，7.33(1H，m)，7.46(3H，m)，8.28(2H，m)，8.88(1H，s)，11.19(1H，br s)。
该起始甲酯中间体制备如下：
3-(4-氯苯氧基)-5-(2-噻吩-2-基)乙氧基苯甲酸(67.5mg，0.18mM)和6-氨基-烟酸甲酯(35mg，0.22mM)在无水吡啶(1ml)中的溶液用三氯氧化磷(24μl，2.3mM)处理。将该混合物在室温氩气下搅拌18小时。真空除去溶剂且残余物用H2O(5ml)处理并用1M柠檬酸酸化至pH＝3-4。水相用EtOAc(2×20ml)提取且有机相用盐水洗涤(10ml)，干燥(MgSO4)和真空蒸发得到褐色油，其在硅胶上纯化(含10％-50％EtOAc的异己烷)得到2-{3-[2-(噻吩-2-基)-乙氧基]-5-(4-氯苯氧基)}苯甲酰基氨基-5-吡啶甲酸甲酯，其为澄清无色油(44.7mg，49％)。1HNMRδ(CDCl3)：3.32(2H，t)，3.94(3H，s)，4.22(2H，t)，6.77(1H，s)，6.91-7.00(3H，br m)，7.09(1H，s)，7.19(2H，m)，7.34(2H，m)，8.34(1H，m)，8.42(1H，m)，8.63(1H，s)，8.92(1H，s)；m/z511(M+H)+，509(M+H)+.
所需3-(4-氯苯氧基)-5-(2-噻吩-2-基)乙氧基苯甲酸制备如下：
将1M NaOH(1.0ml，1.0mM)加入到3-(4-氯苯氧基)-5-(2-噻吩-2-基)乙氧基苯甲酸甲酯(119mg，0.31mM)在THF(4ml)/甲醇(0.25ml)中的溶液内。17小时后该反应混合物用1M柠檬酸中和，随后真空浓缩。用1M柠檬酸调节pH至3-4，用EtOAc(30ml)萃取，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)和真空浓缩得到3-(4-氯苯氧基)-5-(2-噻吩-2-基)乙氧基苯甲酸，其为浅黄色色固体(67.5mg，58％)；1H NMRδ(CDCl3)：3.30(2H，t)，4.20(2H，t)，6.79(1H，m)，6.88(1H，m)，6.95(3H，m)，7.16(1H，d)，7.26-7.40(4H，br m)。
所需3-(4-氯苯氧基)-5-(2-噻吩-2-基)乙氧基苯甲酸甲酯以类似于Tet.Lett.39(1998)2933-2936的方式制备：
3-羟基-5-(2-噻吩-2-基)乙氧基苯甲酸甲酯(840mg，3.0mM)、4-氯苯基硼酸(1.42g，9.0mM)和三乙胺(1.26ml，9.0mM)在甲苯(50ml)中的搅拌浆液用醋酸铜(II)(822mg，4.5mM)处理，并且在60℃和惰性气氛下加热2小时，之后放置冷却至室温过夜。加入另外0.71g的4-氯苯基硼酸、0.411g的醋酸铜(II)和0.63ml的三乙胺且将该混合物在惰性气氛下加热至110℃17小时，之后冷却至室温。真空除去溶剂且所得深绿色固体在硅胶上纯化(含10％EtOAc的异己烷)得到米色油性固体(119mg，10％)；1H NMRδ(CDCl3)：3.31(2H，t)，3.88(3H，s)，4.22(2H，t)，6.76(1Hm)，6.91(1H，m)，6.95(3H，m)，7.16(1H，d)，7.23(1H，m)，7.30(1H，m)，7.33(2H，m)。
所需3-羟基-5-(2-噻吩-2-基)乙氧基苯甲酸甲酯利用Mitsonobu条件类似于通用烷基化方法B中的方法制备，得到该甲酯，其为蜡状固体，1H NMRδ(d6 DMSO)：3.25(2H，t)，3.8(3H，s)，4.2(2H，t)，6.6(1Hm)，6.95(1H，m)，7.0(3H，m)，7.35(1H，m)，9.8(1H，brs)。
实施例S
下表列出实施例s S1-S81，其利用类似于上述的方法制备。在该表中：
(1)途径是指制备终化合物的方法，如下所述：
途径1参见实施例A；
途径2参见实施例B；
途径3参见实施例C；
途径4参见实施例D；
途径6参见实施例F；
途径7参见实施例G；
途径10参见实施例J；
途径11参见实施例K；
途径12参见实施例L；
途径13参见实施例M；
途径14参见实施例N；
途径15参见实施例O；
途径16参见实施例P；
途径17参见实施例Q；和
途径18参见实施例R。
(2)偶联方法(CM)是指用于实现6-氨基烟酸烷基酯与适当酸之间的酰胺偶联的方法：
(a)偶联法A(CM A)是指实施例A举例的草酰氯偶联；
(b)偶联法B(CM B)是指EDAC()或类似的肽偶联剂，可有可无地加入碱(例如二-异丙基乙基胺或二甲基氨基吡啶)或其他添加剂。
例如：
3-异丙氧基-5-(2-噻吩基)甲氧基苯甲酸(740mg，2.53mmol)溶解在干燥DMF(9ml)中，并且依次用二甲基氨基吡啶(900mg，7.4mmol，3当量)，6-氨基烟酸甲酯(580mg，3.8mmol，1.5当量)和EDAC(600mg，3.2mmol，1.25当量)处理，并且所得溶液在室温下搅拌过夜。反应溶液用乙酸乙酯(100ml)稀释且该溶液用水洗涤2次，用柠檬酸溶液(1M)洗涤1次且用盐水洗涤1次，干燥(MgSO4)，并且蒸发得到6-[{3-异丙氧基-5-(2-噻吩基甲氧基)苯甲酰基}氨基]-3-吡啶甲酸甲酯，其为浅色膏状固体(540mg)，MS[MH]+427，72％，通过LC/MS测定。
(3)烷基化方法(AM)是指用于合成适当酸起始原料的通用烷基化方法：
(a)烷基化方法A(AM A)-对称二醚(R1＝R2)的合成
例如化合物(a)的合成
化合物(a)
将3，5-二羟基苯甲酸甲酯(74.1g，0.44M)溶解在二甲基甲酰胺(400ml)，加入碳酸钾(152g，1.10M)，搅拌15分钟，随后加入2-氯苄基氯(117ml，0.92M)且在100℃氩气氛下加热。3小时后使该反应混合物冷却至室温，真空浓缩，用水(800ml)稀释，用乙酸乙酯萃取(2×600ml)。有机萃取物用盐水洗涤(300ml)，干燥(MgSO4)，过滤，真空浓缩得到褐色油，其用乙醚研制/异己烷，得到化合物(a)，它是米色固体(195g，100％)；1H NMR(d6-DMSO，δ值)：3.81(3H，s)；5.18(4H，s)；6.98(1H，m)；7.16(1H，d)；7.36(4H，m)；7.50(2H，m)；7.58(2H，m)。
(b)烷基化方法(AM B)-不对称二醚(R1≠R2)的合成
例如，化合物(b)的合成
化合物(b)
将3，5-二羟基苯甲酸甲酯(16.8g，0.1mol)溶解在二甲基甲酰胺(180ml)中，加入粉状碳酸钾(27.6g，0.2mol)，随后加入2-碘丙烷(10ml，0.1mol)，且在室温氩气氛下将所得混悬液搅拌过夜。该反应混合物用水(11)稀释并用乙醚(2×200ml)萃取。有机萃取物依次用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和真空浓缩得到浅金色油，该油用甲苯研制并过滤除去未反应的起始原料。滤液被真空浓缩且将残余物层析(2×90g Biotage筒，用含乙酸乙酯的异己烷洗脱(10％v/v增加到15％v/v)得到3-羟基-5-异丙氧基苯甲酸甲酯，其为无色固体(5.3g，25％)；1H NMR(d6-DMSO，δ值)：1.2(6H，d)；3.8(3H，s)；4.6(1H，hept)；6.55(1H，m)；6.85(1H，m)；6.95(1H，m)；9.8(1H，s)。3-羟基-5-异丙氧基苯甲酸甲酯(1.5g，7.2mmol)溶解在二甲基甲酰胺(10ml)中，加入碳酸钾(2.5g，18mmol)，随后加入2-溴丁烷(1.2ml，11mmol)，且将所得混悬液在80℃氩气氛下搅拌7小时。使该反应混合物冷却至室温，用己烷/乙酸乙酯(1∶1v/v)稀释并依次用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和真空浓缩得到无色油，将其层析(快速柱在硅胶上(20g)，用含乙酸乙酯(5％v/v)的异己烷洗脱，得到3-(2-丁氧基)-5-异丙氧基苯甲酸甲酯，其为无色油(1.06g)；1H NMRδ(d6-DMSO，δ值)：0.9(3H，t)；1.2(3H，d+6H，d)；1.6(2h，m)；3.85(3H，s)；4.4(1H，hept)；4.55(1H，hept)；6.7(1H，m)；7.0(2H，m)；m/z267(M+H)+。
(c)烷基化方法C(AM C)-不对称二醚(R1≠R2)的合成
化合物(c)
将3-羟基5-异丙氧基苯甲酸甲酯(0.5g，2.4mmol)溶解在二氯甲烷(10ml)和冷却至0℃同时在氩气氛下搅拌；该溶液依次用三苯基膦(聚合物支持的，1.19g，3.6mmol)、糠醇(0.23ml，2.7mmol)洗涤并滴加存在于二氯甲烷(4ml)中的偶氮二甲酸二叔丁酯(DtAD，0.082g，3.5mmol)，并且将所得溶液搅拌1.5小时。该反应通过hplc监测且加入其他试剂直至起始苯酚消耗完-加入的全部试剂是三苯基膦(聚合物支持的，2.38g，3当量)，糠醇(0.53ml，2.5当量)和DtAD(1.64g，3当量)。将该反应混合物真空浓缩且通过层析纯化(快速柱在硅胶上，用含乙酸乙酯(5％v/v)的异己烷洗脱，得到3-(2-呋喃基甲氧基)-5-异丙氧基苯甲酸甲酯，其为无色油，(0.225g)；1H NMR(d6-DMSO，δ值)：1.25(6H，d)；3.85(3H，s)；4.65(1H，hept)；5.1(2H，s)；6.45(1H，m)；6.6(1H，m)；6.85(1H，m)；7.05(1H，m)；7.15(1H，m)7.75(1H，m)。
(d)烷基化方法D(AM D)-不对称二醚(R1≠R2)的合成
例如，化合物(d)的合成
化合物(d)
氩气氛和室温下将偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD，0.74m1，3.7mM)加入到(5-异丙氧基-3-羟基甲基)-苯甲酸甲酯(0.56g，2.5mM)，三苯基膦(0.98g，3.7mM)和2-氟苯酚(0.24ml，2.7mM)在DCM(40ml)中。10分钟后浓缩，在硅胶上纯化(10-15％EtOAc/异己烷)得到标题化合物，其为浅黄色油，在高真空下固化(0.71g，90％)；1H NMRδ(d6-DMSO)：1.26(d，6H)，3.82(s，3H)，4.64(m，1H)，5.21(s，2H)，6.92(m，1H)，7.09(m，1H)，7.16-7.26(m，3H)，7.35(s，1H)，7.58(s，1H)。
上述通用方法仅仅是举例说明；应理解其他可选择性使用的条件包括：使用其他溶剂(例如丙酮或四氢呋喃)，试剂的其他化学计量量，其他反应温度和其他纯化方法。
由上述烷基化方法得到的酯利用氢氧化钠水溶液和水可混溶的溶剂(例如甲醇或THF)以适当量、以实施例C和E所列的方式水解。(4)括号内的符号，即‘(a)’是指表底的注释
(a)游离苯酚被按照途径2或3用(3-溴甲基)苯甲酸甲酯烷基化，并且所得二-或三-酯水解为相应的二-或三-三。
(b)第二烷基通过Mitsonobu反应引入(参见烷基化方法C)
(c)第一烷基用氢化钠作为碱和DMF作为溶剂引入。
(d)
所需甲酯起始原料通过3，5-二羟基甲基苯甲酸和适当胺(参见实施例A)的标准草酰氯偶联制备；1H NMRδ(d6-DMSO)：3.88(s，3H)4.58(s，2H)4.62(s，2H)7.24-7.42(m，10H)7.6(s，1H)7.95(s，2H)8.35(s，2H)8.91(s，1H)11.22(s，1H)M/Z 497(M+H)+，495(M-H)-.
所需酸起始原料通过相应酯在标准条件下的水解来制备(参见实施例F)：
1H NMRδ(d6-DMSO)：4.62(s，2H)4.68(s，2H)7.32-7.46(m，10H)7.64(s，1H)7.92(s，2H)13.05(bs，1H)；m/z 380(M+H)+。
所需酯起始原料通过3，5-二羟基甲基苯甲酸甲酯用氢化钠/THF和苄基溴烷基化来制备(参见实施例F)：
1H NMR b(d6-DMSO)：3.85(s，3H)4.54(s，2H)4.6(s，2H)7.24-7.39(m，10H)7.59(s，1H)7.85(s，2H)；m/z 394(M+NH4)+
(e)
1H NMRδ(d6-DMSO)：3.86(s，3H)，5.22(s，2H)，7.30-7.49(m，6H)，7.63-7.69(m，2H)，8.28-8.36(m，2H)，8.90(s，1H)；
LCMS(ESI+)397，399(MH+)，(ESI-)395，397(M-H)。
该中间体酯由市售起始原料按照下列方法制备：
(f)所需2-[3-(2-氟苄氧基)-5-羟基甲基]苯甲酰基氨基-5-吡啶甲酸甲酯起始原料通过类似于实施例M所述方法制备：
(g)通过实施例J(Mitsonobu reaction)所述方法、由2-[3-(2-氟苄氧基)-5-羟基甲基]苯甲酰基氨基-5-吡啶甲酸甲酯中间体(脚注(f)所述的通用制备方法)起始制备。
(h)通用烷基化方法B利用2，2，2-三氟乙醇的三氟甲基磺酸酯作为烷基化试剂来进行。
(i)所需3，5二-[2-(2-噻吩基)乙氧基]苯甲酸甲酯起始原料以基本类似于通用烷基化方法A的方法、利用Mitsonobu烷基化条件(三苯基膦/DEAD)制备。
(j)所需3-(Ar)烷基-5-[2-(2-噻吩基)乙氧基]苯甲酸甲酯起始原料按照通用烷基化方法C、由3-羟基-5-[2-(2-噻吩基)乙氧基]苯甲酸甲酯起始制备，该起始原料利用Mitsonobu烷基化条件(三苯基膦/DEAD)制备。
实施例T-其他实施例
下表列出实施例T1-T105，它们利用类似于上述的方法制备。在该表中：
(1)途径是指制备终化合物的方法，如下所述：
途径1参见实施例A；
途径2参见实施例B；
途径3参见实施例C；
途径4参见实施例D；
途径5.参见实施例E；和
途径6参见实施例F。
实施例1-100中R3是H；在实施例101-105中R3是甲基。
No. 途径 2 3 5 MH+ M-H
1 1 H 苄氧基 苄氧基 455
2 1 H 甲氧基 β-萘基甲氧基 429
3 1 H 甲氧基 异噻唑-4-基甲 386 384
氧基
4 1 H (2-甲基苄基)氧基 (1-甲基-咪唑- 473
2-基)甲氧基
5 1 H 甲氧基 (5-甲基-异噁唑 384 382
-3-基)甲氧基
6 1 H CF3 CF3 379 377
7 1 H 乙氧基 乙氧基 329
8 1 H 甲氧基 (2-甲基吡啶-3- 394 392
基)甲氧基
9 1 H (2-氯苄基)氧基 (1-甲基哌嗪-4-
基)甲氧基
10 1 O-苄基 H 甲硫基 395 393
11 1 Cl H 甲硫基 323 321
12 1 I H I 495 493
13 1 Br H 异丙氧基 379 377
14 1 Cl H Cl 311
15 1 Cl H I 403
16 1 H H 2-氰基苯氧基
17 1 H H 2-氯苄氧基
18 1 H H 苯氧基 335 333
19 2 H (2-二氟甲氧基)苄氧基 (2-二氟甲氧基) 587 585
苄氧基
20 2 H 2，6-二氯-苄氧基 (2，6-二氯)苄氧
基
No. 途径 2 3 5 MH+ M-H
21 2 H 2-氯-5-三氟甲基-苄氧 2-氯-5-三氟甲 659 657
基 基-苄氧基
22 2 H 2-氯-6-氟-苄氧基 2-氯-6-氟-苄氧 559 557
基
23 2 H 2-氟-5-三氟甲基-苄氧 2-氟-5-三氟甲 627 625
基 基-苄氧基
24 2 H 2-三氟甲基-苄氧基 2-三氟甲基-苄 591 589
氧基
25 2 H 3-氯-2-氟-苄氧基 3-氯-2-氟-苄氧 559 557
基
26 2 H 2，5-二氟-苄氧基 2，5-二氟-苄氧 527 525
基
27 2 H 2-氰基-苄氧基 2-氰基-苄氧基 505 503
28 2H 2，3-二氟 2，3-二氟-苄氧基 527 525
-苄氧基
29 2 H 3-氰基-苄氧基 3-氰基-苄氧基 503
30 2 H (2-甲基吡啶-3-基)甲 (2-甲基吡啶-3- 485 483
氧基 基)甲氧基
31 2 H (5-甲基-异噁唑-3- (5-甲基异噁唑- 465 463
基)-甲氧基 3-基)-甲氧基
32 2 H 4-羧基苄氧基 4-羧基苄氧基 541
33 2 H (1，2，5-噻二唑-3-基) (1，2，5-噻二唑- 469
甲氧基 3-基)甲氧基
34 2 H 2-氯苄氧基 2-氯苄氧基 523
35 2 H 2-溴苄氧基 2-溴苄氧基
36 2 H 2-甲氧基 2-甲基苄氧基 483 481
37 2 H 2-氟苄氧基 2-氟苄氧基 491 489
38 2 H 3-氯苄氧基 3-氯苄氧基 523
39 2 H 3-甲氧基苄氧基 3-甲氧基苄氧基
40 2 H 3-羧基苄氧基 3-羧基苄氧基
No. 途径 2 3 5 MH+ M-H
41 3 H OH 苄氧基 365 363
42 3 H 2-溴苄氧基 2-氰基苄氧基 558
43 3 H 2-氯苄氧基 2-氰基苄氧基 514
44 3 H 2-甲基苄氧基 2-氰基苄氧基 494 492
45 3 H 2-硝基苄氧基 2-氰基苄氧基 525 523
46 3 H 3-氟-6-甲基-苄氧基 2-氰基苄氧基 512 510
47 3 H 2-三氟甲基-苄氧基 2-氰基苄氧基 548 546
48 3 H 2，6-二氟-苄氧基 2-氰基苄氧基 516
49 3 H 2-氟苄氧基 2-氰基苄氧基 498 496
50 3 H 2-碘苄氧基 苄氧基 581 579
51 3 H 2-溴-5-氟-苄氧基 2-氰基苄氧基
52 3 H 2-氯-6-氟-3-甲基-苄 苄氧基 521 519
氧基
53 3 H 3-氟-6-甲基-苄氧基 苄氧基 487 485
54 3 H 2，5-二氟-苄氧基 2-氰基苄氧基 516 514
55 3 H 2-氰基苄氧基 苄氧基 480 478
56 3 H 2-溴-苄氧基 苄氧基 533
57 3 H 2，5-二氯-苄氧基 苄氧基 523
58 3 H (5-甲基异噁唑基-3- 2-甲基苄氧基 474 472
基)-甲氧基
59 3 H 2，6-二氟-苄氧基 苄氧基 491
60 3 H 3-甲氧基苄氧基 2-氰基苄氧基 510
61 3 H 吡啶-2-基甲氧基 2-甲基苄氧基 470 468
62 3 H 3-甲基苄氧基 2-氰基苄氧基 494 492
63 3 H (2-甲基噻唑-4-基)甲 2-甲基苄氧基 490 488
氧基
64 3 H (1S)-苯基乙氧基 苄氧基 469 467
65 3 H 2-(4-甲基噻唑-基)乙 2-甲基苄氧基
氧基
66 3 H 3-氯苄氧基 2-氰基苄氧基 514
No. 途径 2 3 5 MH+ M-H
67 3 H 环戊氧基 苄氧基 433 431
68 3 H 3-羧基苄氧基 2-氰基苄氧基 524
69 3 H 2-羧基苄氧基 2-氰基苄氧基 524
70 3 H 环己氧基 苄氧基 461 459
71 3 H 3-氰基苄氧基 2-氰基苄氧基 505
72 3 H 正丙氧基 苄氧基 407 405
73 3 H (1R)苯基乙氧基 苄氧基 469 467
74 3 H 2，3，5-三氟苄氧基 苄氧基 509 507
75 3 H 2-苯基-苄氧基 苄氧基 531 529
76 3 H 烯丙氧基 苄氧基 405 403
77 3 H (2-甲基吡啶-3-基)甲 2-甲基苄氧基 484 482
氧基
78 3 H 噻唑-4-基甲氧基 2-甲基苄氧基
79 3 H 吡啶-3-基甲氧基 2-甲基苄氧基
80 3 H (6-甲基吡啶-2-基)甲 2-甲基苄氧基
氧基
81 3 H (5-甲基异噁唑-3-基) 苄氧基 460
甲氧基
82 3 H 2-甲基-3-三氟甲基- 苄氧基 562 560
2-氰基苄氧基
83 3 H 异丙氧基 苄氧基 407 405
84 3 H 环丙基甲氧基 苄氧基 419 417
85 3 H 2-(苯基磺酰基甲基)苄 2-氰基苄氧基 634
氧基
86 3 H 2-(吡啶-2-基)乙氧基 2-甲基苄氧基 484
87 3 H 甲氧基 苄氧基 379 377
88 3 H OH 2-氰基苄氧基 390 388
89 3 H 2-(N-吗啉代)乙氧基 2-氰基苄氧基 503
No. 途径 2 3 5 MH+ M-H
90 3 H (1-甲基哌嗪-4-基) 甲苄氧基 462 460
氧基
91 3 H 2-(N-吗啉代)乙氧基 苄氧基 478
92 3 H 2-(吡啶-4-基)乙氧基 2-甲基苄氧基 484 482
93 3 H (4，6-二甲氧基嘧啶- 2-甲基苄氧基 531 529
2-基)甲氧基
94 3 H 羧基甲氧基 2-甲基苄氧基 437 435
95 4 H 异丙氧基 2-(4-甲基噻唑- 442 440
5-基)乙氧基
96 4 H 异丙氧基 2-甲基苄氧基 421 419
97 4 H 异丙氧基 (5-甲基-异噁唑 412 410
-3-基)甲氧基
98 4 H 异丙氧基 异丁氧基 373 371
99 5 H 2-甲基苯甲酰基氨基 2-甲基苯甲酰基 509
氨基
100 6 H 苯氧基甲基 苯氧基甲基 455
101 5 H 酰氧基 (2-甲基)苄氧基 435
102 5 H H (2-氯)苄氧基
103 5 H 2-二氟甲氧基-苄氧基 2-二氟甲氧基- 601
苄氧基
104 5 H 2-甲基苄氧基 2-氰基苄氧基 508 506
105 5 H 2-(N-吗啉代)乙氧基 苄氧基 492
生物学
试验：
本发明的化合物的生物作用可以在下列试验中测试：
(1)GLK的酶活性可以通过孵育GLK，ATP和葡萄糖来测量。产物生成的速率可以通过将该试验与G-6-P脱氢酶、NADP/NADPH体系并测量340nm下光密度的增加来测定(Matschinsky等1993)。
(2)GLK/GLKRP结合试验用于测量GLK和GLKRP之间的结合作用。该方法可以用来识别通过调节GLK和GLKRP之间的相互作用来调制GLK的化合物。将GLKRP和GLK与抑制浓度的F-6-P、选择性地在试验化合物存在的条件下孵育，并且测量GLK和GLKRP之间的相互作用。置换F-6-P或以某些其他方式减弱GLK/GLKRP之间相互作用的化合物将通过GLK/GLKRP复合物生成量的减少来检测。促进F-6-P结合或以某些其他方式提高GLK/GLKRP相互作用的化合物将提供GLK/GLKRP复合物生成量的增加来测定。此类结合试验的具体实例描述如下。
GLK/GLKRP闪烁计数近接试验
重组人GLK和GLKRP用来显色(develop)″混合和测量″96孔SPA(闪烁计数近接试验(scintillation proximity assay))。(附图3中给出该试验的概图表示)。GLK(Biotinylated)和GLKRP与链霉抗生物素连接的SPA珠(Amersham)在抑制浓度的放射性标记[3H]F-6-P(Amersham Custom Synthesis TRQ8689)的存在下孵育，得到图3所示的信号。置换F-6-P或以某些其他方式打破GLK/GLKRP结合相互作用的化合物使该信号消失。
结合试验在室温下进行2小时。含有50mM Tris-HCl(pH＝7.5)，2mMATP，5mM MgCl2，0.5mM DTT，重组生物素化的GLK(0.1mg)，重组GLKRP(0.1mg)，0.05mCi[3H]F-6-P(Amersham)的反应混合物得到100ml的终体积。随后孵育，通过加入0.1mg/孔抗生物素蛋白结合的SPA珠(Amersham)并在Packard TopCount NXT上闪烁计数来测量GLK/GLKRP复合物形成的程度。
发现当在GLK/GLKRP闪烁计数近接试验中测试时上述例举的化合物在室温下具有至少40％活性。
(3)F-6-P/GLKRP结合试验用测量GLKRP和F-6-P之间的相互作用。这种方法可以用来提供有关所述化合物的作用机理的信息。在GLK/GLKRP结合试验中鉴定的化合物可以通过置换F-6-P或通过以某些其他方式改变GLK/GLKRP相互作用来调制GLK和GLKRP的相互作用。例如，蛋白-蛋白的相互作用一般被认为是通过多个结合位点间的相互作用而发生。所以可能是改变GLK和GLKRP间相互作用的化合物可通过结合一个或多个若干不同结合位点发挥作用。
F-6-P/GLKRP结合试验鉴定出只有那些通过从GLKRP上其结合位点置换F-6-P来调制GLK和GLKRP间相互作用的化合物。
GLKRP与试验化合物和抑制浓度的F-6-P、在GLK不存在的条件下孵育，并且测定F-6-P和GLKRP之间相互作用的程度。
置换F-6-P结合GLKRP的化合物可以通过GLKRP/F-6-P复合物生成量的改变来测定。该结合试验的具体实例如下所述。
F-6-P/GLKRP闪烁计数近接试验
重组人GLKRP用来显色″混合和测量″96孔闪烁计数近接试验。(图4中给出该试验的概图表示)。FLAG-标记的GLKRP与蛋白A涂层的SPA珠(Amersham)和抗FLAG抗体在抑制浓度的放射性标记[3H]F-6-P的存在下孵育。图4中表示生成的信号。置换F-6-P的化合物将使这个信号消失。本试验和所述GLK/GLKRP结合试验的联用将使观察者能够鉴定出通过置换F-6-P打破GLK/GLKRP结合作用的化合物。
结合试验是在室温下进行2小时。含有50mM Tris-HCl(pH＝7.5)，2mM ATP，5mM MgCl2，0.5mM DTT，重组FLAG标记的GLKRP(0.1mg)，抗Flag M2抗体(0.2mg)(IBI Kodak)，0.05mCi[3H]F-6-P(Amersham)的反应混合物得到100ml的终体积。孵育后，通过加入0.1mg/孔抗生物素蛋白结合的SPA珠(Amersham)并在Packard TopCount NXT上闪烁计数来测量F-6-P/GLKRP复合物形成的程度。
重组GLK和GLKRP的制备：
mRNA的制备
人肝脏全mRNA是通过在4M异硫氰酸胍，2.5mM柠檬酸盐，0.5％Sarkosyl，100mM β-巯基乙醇中polytron均化、随后经5.7M CsCl，25mM乙酸钠在135,000g(最大)离心、按照Sambrook J，Fritsch EF &Maniatis T，1989所述来制备。
Poly A+mRNA直接利用FastTrack″M mRNA分离试剂盒(Invitrogen)来制备。
GLK和GLKRP cDNA序列的PCR扩增
人GLK和GLKRP cDNA通过PCR、由人肝脏mRNA、利用Sambrook，Fritsch & Maniatis，1989中所述的建成的技术来获得。按照Tanizawa等1991和Bonthron，D.T.等1994(后者在Warner，J.P.1995修正)中所述的GLK和GLKRP cDNA序列设计PCR引物。
在Bluescript II运载体中克隆
GLK和GLKRP cDNA用pBluescript II克隆在大肠杆菌，pBluescript II(Short等1998)是类似于Yanisch-Perron C等(1985)所用的重组克隆运载体体系，包含带有含多个独特限制位点的多连接体DNA片段的colEI-基复制子，侧面与噬菌体T3和T7启动子序列；复制的丝状噬菌体源和氨苄青霉素耐药性标记基因相连。
转化
大肠杆菌一般由电穿孔(electronporation)携带。菌株DH5a或BL21(DE3)的400ml培养物在L-肉汤中生长至OD 600为0.5且通过在2,000g下离心收获。细胞用冰冷的去离子水洗涤2次，再次悬浮在1ml10％甘油中并以等份试样保存在-70℃。络合混合物用Millipore VseriesTM膜(0.0025mm)孔径)脱盐。40ml的细胞与1ml的络合混合物或质粒DNA在冰上在0.2cm电穿孔比色杯中孵育10分钟，并且随后利用Gene PulserTM仪(BioRad)在0.5kVcm-1，250mF，250？下加脉冲。在补加有10mg/ml四环素或100mg/ml氨苄青霉素的L-琼脂上选择转化体。
表达
GLK由运载体pTB375NBSE表达在E.coli BL21细胞中，产生重组蛋白，该重组蛋白含有紧邻与N-末端蛋氨酸的6-His标记。或者，另一种适当的运载体是pET21(+)DNA，Novagen，登记号697703。该6-His标记用于重组蛋白在装有镍-氮三乙酸琼脂糖购自Qiagen(cat no 30250)的柱上纯化。
GLKRP由运载体pFLAG CTC(IBI Kodak)表达在E.coli BL21细胞中，生成重组蛋白，该重组蛋白含有C-末端FLAG标记。该蛋白首先通过DEAE琼脂糖离子交换提出，随后利用FLAG标记在M2抗-FLAG免疫亲和性柱(购自Sigma-Aldrich(cat no.A1205))上最后纯化。
GLK的生物素化：
GLK通过与购自Sigma-Aldrich(登记号B2643)的生物素氨基己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(生物素-NHS)反应来生物素化。简单来说，靶向蛋白(GLK)的游离氨基与生物素-NHS以指定摩尔比反应形成稳定的酰胺键，得到含有共价结合的生物素的产物。通过渗析除去产物中的过量、未偶联的生物素-NHS。具体而言，将7.5mg的GLK加入到0.31mg的存在于4mL的25mM HEPES pH＝7.3，0.15M KCl，1mM二硫苏糖醇，1mMEDTA，1mM MgCl2(缓冲液A)中的生物素-NHS。该反应混合物相对于100mL的含有22mg生物素-NHS的缓冲液A渗析。4消失后通过对缓冲液A的充分渗析除去过量的生物素-NHS。
药物组合物
下面举例说明本发明的治疗或预防应用于人体中的代表性药物剂型(活性成分称作″化合物X″)：
(a)片剂I mg/片
化合物 .........................100
乳糖，欧洲药典 .................182.75
交联羧甲基纤维素钠...............12.0
玉米淀粉糊(5％w/v糊).............2.25
硬脂酸镁.........................3.0
(b)片剂II mg/片
化合物X ..........................50
乳糖，欧洲药典.....................223.75
交联羧甲基纤维素钠.................6.0
玉米淀粉...........................15.0
聚乙烯吡咯烷酮(5％w/v糊) ..........2.25
硬脂酸镁...........................3.0
(c)片剂III mg/片
化合物X ...............................1.0
乳糖，欧洲药典 .........................93.25
交联羧甲基纤维素钠......................4.0
玉米淀粉糊(5％w/v糊) ...................0.75
硬脂酸镁................................1.0
(d)胶囊 mg/胶囊
化合物X ..............................10
乳糖，欧洲药典........................488.5
镁 ...................................1.5
(e)注射剂I (50mg/ml)
化合物X ..........................5.0％w/v
1M氢氧化钠溶液....................15.0％v/v
0.1M盐酸(调节pH＝to 7.6)
聚乙二醇400.........................4.5％w/v
注射用水至100％
(f)注射剂II (10mg/ml)
化合物X ..........................1.0％w/v
磷酸钠BP..........................3.6％w/v
0.1M氢氧化钠溶液..................15.0％v/v
注射用水至100％
(g)注射剂III (1mg/ml，缓冲至pH＝6)
化合物X ..............................0.1％w/v
磷酸钠BP ..............................2.26％w/v
柠檬酸 ................................0.38％w/v
聚乙二醇400............................3.5％w/v
注射用水至100％
(h)气雾剂I mg/ml
化合物X .................................10.0
脱水山梨糖醇三油酸酯......................13.5
三氯氟甲烷................................910.0
二氯二氟甲烷..............................490.0
(i)气雾剂II mg/ml
化合物X ...................................0.2
脱水山梨糖醇三油酸酯........................0.27
三氯氟甲烷..................................70.0
二氯二氟甲烷................................280.0
二氯四氟乙烷................................1094.0
(j)气雾剂III mg/ml
化合物X ....................................2.5
脱水山梨糖醇三油酸酯 .........................3.38
三氯氟甲烷....................................67.5
二氯二氟甲烷 .................................1086.0
二氯四氟乙烷 .................................191.6
(k)气雾剂IV mg/ml
化合物X .....................................2.5
大豆卵磷脂.....................................2.7
三氯氟甲烷 ....................................67.5
二氯二氟甲烷 ................................1086.0
二氯四氟乙烷 ................................191.6
(l)软膏 ml
化合物X ....................................40mg
乙醇 .......................................300μl
水 .........................................300μl
1-十二微晶氮杂环庚-2-酮.....................50μl
丙二醇......................................至1ml
注
上述制剂是通过药学领域熟知的常规方法获得。片剂(a)-(c)可以通过常规发生肠溶包衣，例如提供乙酸邻苯二甲酸纤维素的包衣。气雾剂(h)-(k)可以与标准、计量给药的气雾分配器结合，并且助悬剂脱水山梨糖醇三油酸酯和大豆卵磷脂可以用其他助悬剂例如脱水山梨糖醇一油酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯、吐温80、聚甘油油酸酯或油酸代替。
参考文献
1 Printz，R.L.，Magnuson，M.A.和Granner，D.K.(1993)AnnualReview of Nutrition 13，463-96
2 DeFronzo，R.A.(1988)Diabetes 37，667-87
3 Froguel，P.，Zouali，H.，Vionnet，N.，Velho，G.，Vaxillaire，M.，Sun，Sun，F.，Lesage，S.，Stoffel，M.，Takeda，J.和Passa，P.(1993)New England Journal of Medicine 328，697 702
4 Bell，G.I.，Pilkis，S.J.，Weber，Weber，I.T.和Polonsky，K.S.(1996)Annual Review of Physiology 58，171-86
5 Velho，G.，Petersen，K.F.，Perseghin，G.，Hwang，J.H.，Rothman，D.L.，Pueyo，M.E.，Cline，G.W.，Froguel，P.和Shulman，G.I.(1996)Journal of Clinical Investigation 98，1755-61
6 Christesen，H.B.，Jacobsen，B.B.，Odili，S.，Buettger，C.，Cuesta-Munoz，A.，Hansen，T.，Brusgaard，K.，Massa，Massa，O.，Magnuson，M.A.，Shiota，C.，Matschinsky，F.M.And Barbetti，F.(2002)Diabetes 51，1240-6
7 Glaser，B.，Kesavan，P.，Heyman，M.，Davis，E.，Cuesta，A.，Buchs，A.，Stanley，C.A.，Thornton，P.S.，Permutt，M.A.，Matschinsky，F.M.和Herold，K.C.(1998)New EnglandJournal of Medicine 338，226-30
8 Caro，J.F.，Triester，S.，Patel，V.K.，Tapscott，E.B.，Frazier，N.L.和Dohm，G.L.(1995)Hormone & Metabolic Research 27，19-22
9 Desai，U.J.，Slosberg，E.D.，Boettcher，B.R.，Caplan，S.L.，Fanelli，B.，Stephan，Z.，Gunther，V.J.，Kaleko，M.和Connelly，S.(2001)Diabetes 50，2287-95
10 Shiota，M.，Postic，C.，Fujimoto，Y.，Jetton，T.L.，Dixon，K.，Pan，D.，Grimsby，J.，Grippo，J.F.，Magnuson，M.A.和Cherrington，A.D.(2001)Diabetes 50，622-9
11 Ferre，T.，Pujol，A.，Riu，E.，Bosch，F.和Valera，A.(1996)Proceedings of the National Academy of Sciences of theUnited States of America 93，7225-30
12 Seoane，J.，Barbera，A.，Telemaque-Potts，S.，Newgard，C.B.和Guinovart，J.J.(1999)Journal of Biological Chemistry274，31833-8
13 Moore，M.C.，Davis，S.N.，Mann，S.L.和Cherrington，A.D.(2001)Diabetes Care 24，1882-714 Alvarez，E.，Roncero，I.，Chowen，J.A.，Vazquez，P.和Blazquez，E.(2002)Journal ofNeurochemistry 80，45-53
15 Lynch，R.M.，Tompkins，L.S.，Brooks，H.L.，Dunn-Meynell，A.A.和Levin，B.E.(2000)Diabetes 49，693-700
16 Roncero，I.，Alvarez，E.，Vazquez，P.和Blazquez，E.(2000)Journal of Neurochemistry 74，1848-57
17 Yang，X.J.，Kow，L.M.，Funabashi，T.和Mobbs，C.V.(1999)Diabetes 48，1763 1772
18 Schuit，F.C.，Huypens，P.，Heimberg，H.和Pipeleers，D.G.(2001)Diabetes 50，1-11
19 Levin，B.E.(2001)International Journal of Obesity 25
20 Alvarez，E.，Roncero，Roncero，I.，Chowen，J.A.，Thorens，B.和Blazquez，E.(1996)Journal of Neurochemistry 66，920-7
21 Mobbs，C.V.，Kow，L.M.和Yang，X.J.(2001)American Journalof Physiology Endocrinology & Metabolism 281，E649-54
22 Levin，B.E.，Dunn-Meynell，A.A.和Routh，V.H.(1999)American Journal of Physiology 276，R1223-31
23 Spanswick，D.，Smith，M.A.，Groppi，V.E.，Logan，S.D.和Ashford，M.L.(1997)Nature 390，521-5
24 Spanswick，D.，Smith，M.A.，Mirshamsi，S.，Routh，V.H.和Ashford，M.L.(2000)Nature Neuroscience 3，757-8
25 Levin，B.E.和Dunn-Meynell，A.A.(1997)Brain Research776，146-53
26 Levin，B.E.，Govek，E.K.和Dunn-Meynell，A.A.(1998)BrainResearch 808，317-9
27 Levin，B.E.，Brown，K.L.和Dunn-Meynell，A.A.(1996)BrainResearch 739，293 300
28 Rowe，1.C.，Boden，P.R.和Ashford，M.L.(1996)Journal ofPhysiology 497，365-77
29 Fujimoto，K.，Sakata，T.，Arase，K.，Kurata，K.，Okabe，Y.和Shiraishi，T.(1985)Life Sciences 37，2475-82
30 Kurata，K.，Fujimoto，K.和Sakata，T.(1989)Metabolism：Clinical & Experimental 38，46-51
31 Kurata，K.，Fujimoto，K.，Sakata，T.，Etou， H.和Fukagawa，K.(1986)Physiology & Behavior 37，615-20