针对表皮生长因子受体的缺失突变体的抗体及其使用.pdf

1、(10)申请公布号 CN 102558352 A (43)申请公布日 2012.07.11 CN 102558352 A *CN102558352A* (21)申请号 201110233784.9 (22)申请日 2004.06.25 60/483,145 2003.06.27 US 60/525,570 2003.11.26 US 60/562,453 2004.04.15 US 200480018260.6 2004.06.25 C07K 16/28(2006.01) C12N 5/09(2010.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (

2、71)申请人 艾默根佛蒙特有限公司 地址 美国加利福尼亚州 (72)发明人 理查德韦伯 冯晓 奥里特福德 拉里格林 琼古达斯 布鲁斯基特 刘颖 帕拉尼拉塔纳斯瓦米 罗伯特拉亚 杨晓东 乔斯克尔瓦兰 伊恩福尔茨 贾小池 贾斯帕康 查德威克T金 斯科特L克拉坎普 巧娟简苏 (74)专利代理机构 北京律盟知识产权代理有限 责任公司 11287 代理人 王允方 (54) 发明名称 针对表皮生长因子受体的缺失突变体的抗体 及其使用 (57) 摘要 本发明涉及新颖抗体， 尤其涉及针对表皮生 长因子受体的缺失突变体的抗体， 而且尤其涉及 III 型缺失突变体 EGFRvIII。本发明也涉及针对 表皮生长因子

3、受体的缺失突变体的人类单克隆抗 体， 而且尤其为 EGFRvIII。本发明也提供这些抗 体的诊断和治疗調配物， 及其免疫偶联物。 (30)优先权数据 (62)分案原申请数据 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 85 页 序列表 43 页 附图 80 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 85 页 序列表 43 页 附图 80 页 1/1 页 2 1. 一种经分离的人类单克隆抗体， 其特异性结合至包含序列 LEEKKGNYVVTDHC(SEQ ID NO ： 56) 的肽亚抑制表皮生长因子 (EGF) 与表皮生长因子受体 vI

4、II(EGFRvIII) 的结合， 其 中所述抗体与选自由Auristatin E毒素(AEFP)、 单甲基auristatin E(MMAE)、 Auristatin E、 Maytansinoid(DM-1) 和 - 相关蛋白 (ZAP) 所组成群组的毒素缔合。 2.根据权利要求1所述的经分离人类单克隆抗体， 其特异性结合至EGFRvIII的抗原决 定基， 其中所述抗原决定基包含序列 LEEKKGNYVVTDHC(SEQ ID NO ： 56)。 3. 根据权利要求 1 所述的人类单克隆抗体， 其中所述抗体特异性识别一包含 LEEKKGNYVVTDHC(SEQ ID NO ： 56) 之抗

5、原决定基於位置 6 处的甘氨酸残基。 4. 根据权利要求 1 所述的人类单克隆抗体， 其中所述抗体进一步结合具有序列 EEKKGNYVVT(SEQ ID NO ： 57) 的肽。 5. 根据权利要求 1 所述的单克隆抗体， 其中所述抗体与医药上可接受的载体或稀释剂 缔合。 6. 根据权利要求 1 所述的单克隆抗体， 其中所述单克隆抗体是完全人类单克隆抗体。 7. 根据权利要求 6 所述的抗体， 其中所述抗体具有小于 1.310-9M 的 KD。 8. 根据权利要求 6 所述的抗体， 其中所述抗体具有小于 500pM 的 KD。 9. 根据权利要求 1 所述的抗体， 其中所述抗体可被内在化。 1

6、0. 根据权利要求 1 所述的抗体， 其与医药上可接受的载体或稀释剂缔合。 11. 一种在活体外杀死靶细胞的方法， 其包括 ： 使靶细胞接触与毒素缔合的抗体， 其中所述抗体结合至具有序列 LEEKKGNY(SEQ ID NO ： 133) 的肽且所述肽是由所述靶细胞所表达， 并且其中毒素是 Auristatin E 毒素 (AEFP)、 单甲基auristatin E(MMAE)、 Auristatin E、 Maytansinoid(DM-1)或-相关蛋白 (ZAP)。 12. 根据权利要求 11 所述的方法， 其中与所述毒素缔合的所述抗体对所述靶细胞的毒 性比对不表达所述肽的细胞的毒性大至

7、少十倍。 13. 根据权利要求 11 所述的方法， 其中所述抗体经由肽连接子与所述毒素缔合。 14. 根据权利要求 11 所述的方法， 其中所述抗体经由第二抗体与所述毒素缔合。 15. 一种根据权利要求 1 至 10 所述的抗体於制备供处理表达表皮生长因子受体 vIII(EGFRvIII) 癌细胞的药物中的用途。 16. 根据权利要求 15 所述的用途， 其中所述癌细胞是上皮细胞。 17. 根据权利要求 15 所述的用途， 其中所述癌细胞是选自由肺癌、 结肠癌、 胃癌、 肾癌、 前列腺癌、 乳腺癌、 胶质母细胞瘤或卵巢癌细胞所组成的群组。 权 利 要 求 书 CN 102558352 A 2

8、1/85 页 3 针对表皮生长因子受体的缺失突变体的抗体及其使用 0001 本 申 请 是 如 下 申 请 的 分 案 申 请 ： 申 请 日 为 2004 年 6 月 25 日、 申 请 号 为 200480018260.6、 发明名称为针对表皮生长因子受体的缺失突变体的抗体及其使用 技术领域 0002 本实施例涉及新颖抗体， 尤其涉及针对表皮生长因子受体的缺失突变体的抗体， 而且尤其涉及III型缺失突变体EGFRvIII。 本实施例也涉及针对表皮生长因子受体的缺失 突变体的人类单克隆抗体， 而且尤其为 EGFRvIII。本实施例也涉及这些抗体的变体。本发 明也提供这些抗体的诊断和治疗配方，

9、 及其免疫偶联物。 背景技术 0003 自上世纪以来， 已寻求有助于更好诊断和治疗人类和动物癌症的肿瘤特异分子。 除了那些基于病毒诱导癌症并包含由病毒基因规定的分子结构的癌症之外， 在大多数类型 的人类癌症中， 很难提供对基于分子结构资料的肿瘤特异物质的确切证据。极少有关于基 于新颖分子结构的肿瘤特异分子的实例。 在恶性人类神经胶质瘤和其它与表皮生长因子受 体分子的放大或变化潜在相关的肿瘤 ( 诸如乳腺癌和其它人类癌症 ) 的情况下， 尚无关于 具有独特序列的结构变化分子的明确论证。 0004 表皮生长因子受体 (EGFR) 是原致癌基因 c-erb B 的 170 千道尔顿 (kilodal

10、ton) 膜糖蛋白产物。已知 EGFR 基因的序列 (Ullrich 等人， 1984)。 “Human Epidermal Growth Factor Receptor cDNA Sequence and Aberrant Expression of the Amplified Gene in A431 Epidermoid Carcinoma Cells.” Nature 309 ： 418-425)。EGFR 基因是最初在鸟 类红细胞增多症病毒中识别的 erb B 致癌基因的细胞同系物 (Downward 等人 (1984)。 “Close Similarity of Epidermal

11、 Growth Factor Receptor and v-erb B Oncogene Protein Sequence.” Nature 307 ： 521-527， Ullrich 等人 (1984)。已在各种人类肿瘤 中观察到这种致癌基因通过基因放大的活化 (Haley 等人 (1987A)。 “The Epidermal Growth Factor Receptor Gene in ： Oncogenes， Genes， and Growth Factors” ， Guroff， G 编， 第 12 版， 第 2 章， 第 40-76 页， Wiley， N.Y.， 且尤其为神经胶质

12、源性的那些表皮生 长 因 子 受 体 基 因 (Libermann 等 人， (1985)。 “Amplification， Enhanced Expression and Possible Rearrangement of EGF Receptor Gene in Primary Human Brain Tumours of Glial Origin” ， Nature 313 ： 144-147 ； Wong 等人， (1987)。 “Increased Expression of the Epidermal Growth Factor Receptor Gene in Malignant

13、 Gliomas is Invariably Associated with Gene Amplification.” Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84 ： 6899-6903 ； Yamazaki 等人， (1988)。 “Amplification of the Structurally and Functionally Altered Epidermal Growth Factor Receptor Gene(c-erbB)in Human Brain Tumors.” Molecular and Cellular Biology 8 ： 1816-1820， Maid

14、en 等人， (1988)。 “Selective Amplification of the Cytoplasmic Domain of the Epidermal Growth Factor Receptor Gene in Glioblastoma Multiforme.” Cancer Research 4 ： 2711-2714)。 说 明 书 CN 102558352 A 3 2/85 页 4 0005 已证实 EGF-r 在多种类型的人类固体肿瘤中过量表达。Mendelsohn Cancer Cells7 ： 359(1989)， Mendelsohn Cancer Biology

15、 1 ： 339-344(1990)， Modjtahedi and Dean Int lJ.Oncologv 4 ： 277-296(1994)。例如， 已在某些肺癌、 乳腺癌、 结肠癌、 胃癌、 脑癌、 膀胱癌、 头颈癌、 卵巢癌、 肾癌和前列腺癌中观察到 EGFR 过量表达。Modjtahedi and Dean Int l J.Oncology 4 ： 277-296(1994)。已证实表皮生长因子 (EGF) 和转化生长因 子 -(TGF-) 都结合至 EGF-r， 而且导致细胞增殖和肿瘤生长。 0006 v-erb B 致癌基因和正常 EGFR 基因之间的一个主要区别在于病毒致癌基

16、因是 正常受体截断氨基的变型 ； 它们缺少大部分细胞质外结构域， 但保留了跨膜和酪氨酸激酶 结构域 (Fung 等人， (1984)。Activation of the Cellular Oncogene c-erb B by LTR Insertion ： Molecular Basis for Induction of Erythroblastosis by Avian Leukosis Virus.Cell 33 ： 357-368 ； Yamamoto 等人， (1983)。 “A New Avain Erythroblastosis Virus，AEV-H Carries erbB

17、Gene Responsible for the Induction of Both Erythroblastosis and Sarcoma.” Cell 34 ： 225-232， Nilsen 等人， (1985)。 “c-erbB Activation in ALV-Induced Erythroblastosis ： Novel RNA Processing and Promoter Insertion Results in Expression of an Amino-Truncated EGF Receptor.” Cell 41 ： 719-726 ； Gammett 等人，

18、(1986)。 “Differences in Sequences Encoding the Carboxy-Terminal Domain of the Epidermal Growth Factor Receptor Correlate with Differences in the Disease Potential of Viral erbB Genes.” Proc.Natl.Acad.Sci. USA 83 ： 6053-6057)。这导致了不可以结合表皮生长因子 (EGF)， 但仍可以磷酸化其它物质 的蛋白质 (Gilmore 的， (1985)。 “Protein Phosph

19、orlytion at Tyrosine is Induced by the v-erb B Gene Product in Vivo and In Vitro.Cell 40 ： 609-618 ； Kris等人， (1985)。 Antibodies Against a Synthetic Peptide as a Probe for the Kinase Activity of the Avian EGF Receptor and v-erB Protein.” Cell40 ： 619-625)， 且导致以下推测 ： v-erb B 蛋白质为致癌基因性的是因为激酶结构域未经调节且结构上

20、为活性的 (Downward 等人， 1984)。 0007 各种基因变化都可以发生于病毒性 erb B 致癌基因中， 例如， 基因的羧基末端 中发生氨基酸的取代和缺失。然而， 可获得的证据表明氨基截断对于致癌作用尤为关 键。氨基截断是所有 v-erb B 致癌基因的一个特征， 包括由启动子的插入或逆转录病毒转 导引起的那些氨基截断 (Nilsen 等人， (1985)。 “c-erbB Activation in ALV-Induced Erythroblastosis ： Novel RNA Processing and Promoter Insertion Results in Expr

21、ession of an Amino-Truncated EGF Receptor.” Cell 41 ： 719-726 ； Gammett 等人， (1986)。 “Differences in Sequences Encoding the Carboxy-Terminal Domain of the Epidermal Growth Factor Receptor Correlate with Differences in the Disease Potential of Viral erbB Genes.” Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83 ： 6053-6057)。

22、 0008 相反， 羧基 - 末端缺失似乎只与由逆转录病毒转导引起的肿瘤有关， 而且似 乎决定了宿主范围和肿瘤类型的特异性 (Gammett 等人， 1986 ； Raines 等人， (1985)。 “c-erbB Activation in Avian Leukosis Virus-Induced Erythroblastosis ： Clustered Integration Sites and the Arrangement of Provirus in the c-erbB Alleles.” Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82 ： 2287-2291)。以氨基 -

23、截断鸟类 c-erb B 基因 说 明 书 CN 102558352 A 4 3/85 页 5 或感染性病毒致癌基因 - 人类 EGF 受体的转染实验表明该缺失单独即足以产生转化蛋白 质 (Pelley 等 人， (1988)。 “Proviral-Activated c-erbB is Leukemogenic but not Sarcomagenic ： Characterization of a Replication-Competent Retrovirus Containing the Activated c-erbB.” Journal of Virology 62 ： 1840-

24、1844 ； Wells 等 人， (1988)。 “Genetic Determinants of Neoplastic Transformation by the Retroviral Oncogene v-erbB.” Proc.Natl.Acad.Sci.USA85 ： 7597-7601)。 0009 EGFR基因的放大发生于40的恶性人类神经胶质瘤中(Libermann等人， (1985)。 “Amplification， Enhanced Expression and Possible Rearrangement of EGF Receptor Gene in Primary H

25、uman Brain Tumours of Glial Origin” ， Nature 313 ： 144-147 ； Wong等 人， (1987)。“Increased Expression of the Epidermal Growth Factor Receptor Gene in Malignant Gliomas is Invariably Associated with Gene Amplification.” Proc.Natl. Acad.Sci.USA 84 ： 6899-6903)， 受体基因的重排在许多具有基因放大的肿瘤中较为明显。 结构变化似乎优先影响基因的氨基末端

26、一半 (Yamazaki 等人， (1985)。 “Amplification， Enhanced Expression and Possible Rearrangement of EGF Receptor Gene in Primary Human Brain Tumours of Glial Origin” ， Nature 313 ： 144-147 ； Maiden 等人， (1988)。 “Selective Amplification of the Cytoplasmic Domain of the Epidermal Growth Factor Receptor Gene in

27、Glioblastoma Multiforme.” Cancer Research4 ： 2711-2714)， 但重排的性质当时并未在任何肿瘤中准确表征。 0010 已报导在若干人类癌症中的大小变体EGFR基因和放大(Humphrey等人， (1988)。 “Amplification and Expression of the， Epidermal Growth Factor Receptor Gene in Human Glioma Xenografts” .Cancer Research 48 ： 2231-2238 ； Bigner 等人， (1988) J.Neuropathol.

28、Exp.Neural.， 47 ： 191-205 ； Wong 等 人， (1987)。 “Increased Expression of the Epidermal Growth Factor Receptor Gene in Malignant Gliomas is Invariably Associated with Gene Amplification” .Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84 ： 6899-6903 ；和 Humphrey 等人。表皮生长因子受体基因在人类神经胶质瘤异种移植中的放大和表达， Cancer Res.48(8) ： 2231-8(1988)

29、。然而， 尚无关于细胞中经改变 EGFR 分子的分子基的 测定。1989 年， Drs.Bigner 和 Vogelstein 的著作说明已知为 III 型突变体的 EGF 受体突 变体的序列 ( 也称为 -EGFr 或 EGFRvIII)。此著作描述于美国专利第 6,455,498 号、 第 6,127,126 号、 第 5,981,725 号、 第 5,814,317 号、 第 5,710,010 号、 第 5,401,828 号和第 5,212,290 号中。 0011 EGFR 变体是由基因重排伴随 EGFR 基因放大而引起的。存在八种主要的 EGFr 变 体， 已知为 ： (i)EG

30、FRvI 缺少 EGFR 的大部分细胞外结构域， (ii)EGFRvII 由 EGFR 的细胞外 结构域中的 83aa 框内缺失组成， (iii)EGFRvIII 由 EGFR 的细胞外结构域中的 267aa 框内 缺失组成， (iv)EGFRvIV 含有 EGFR 的细胞质结构域中的缺失， (v)EGFRvV 含有 EGFR 的细胞 质结构域中的缺失， (vi)EGFR.TDM/2-7 含有 EGFR 的细胞外结构域中的外显子 2-7 的重复， (vii)EGFR.TDM/18-25 含有 EGFR 的酪氨酸激酶结构域中的外显子 18-26 的重复， 和 (viii) EGFR.TDM/18

31、-26 含有 EGFR 的酪氨酸激酶结构域中的外显子 18-26 的重复 (Kuan 等人， EGF 突变体受体vIII在治疗癌症中作为分子目标， Endocr Relat Cancer.8(2) ： 83-96(2001)。 另外， 存在第二种更为罕见的具有第二种在外显子 11 和 14 之间的连接点引入新颖组氨酸 说 明 书 CN 102558352 A 5 4/85 页 6 残基的缺失的 EGFRvIII 突变体 (EGFRvIII/12-13)(Kuan 等人， EGF 突变体受体 vIII 在 治疗癌症中作为分子目标， Endocr Relat Cancer.8(2) ： 83-96

32、(2001)。 0012 EGFRvIII 是在人类癌症中表皮生长因子 (EGF) 受体最常见发生的变体 (Kuan 等人， EGF 突变体受体 vIII 在治疗癌症中作为分子靶标， Endocr Relat Cancer.8(2) ： 83-96(2001)。在基因放大的过程中， 在细胞外结构域中发生 267 个氨基酸缺失， 产生肿 瘤特异单克隆抗体可指向的新颖连接点。EGF 受体的这种变体以配位体独立的方式有助于 肿瘤通过组成型信号发出而发展。已知 EGFrVIII 未表达于任何正常组织上 (Wikstrand， CJ. 等人，“Monoclonal antibodies against

33、EGFRVIII are tumor specific and react with breast and lung carcinomas malignant gliomas.” Cancer Research 55(14) ： 3140-3148(1995) ； Olapade-Olaopa， EO. 等人 Evidence for the differential expression of a variant EGF receptor protein in human prostate cancer. Br J Cancer.82(1) ： 186-94(2000)。然而， EGFRvI

34、II 显示在肿瘤细胞中的显著表达， 例如， 27 76乳腺癌活组织检查表达 EGFRvIII(Wikstrand， CJ. 等人 Monoclonal antibodies against EGFRVIII are tumor specific and react with breast and lung carcinomas malignant gliomas. Cancer Research 55(14) ： 3140-3148(1995) ； Ge H. 等人，“Evidence of high incidence of EGFRvIII expression and coexpress

35、ion with EGFR in human invasive breast cancer by laser capture microdissection and immunohistochemical analysis.” Int J Cancer.98(3) ： 357-61(2002)， 50 70 神 经 胶 质 癌 表 达 EGFRvlII(Wikstrand， CJ. 等 人，“Monoclonal antibodies against EGFRvIII are tumor specific and react with breast and lung carcinomas ma

36、lignant gliomas.” Cancer Research 55(14) ： 3140-3148(1995) ； Moscatello， G. 等人，“Frequent expression of a mutant epidermal growth factor receptor in 0013 multiple human tumors.” Cancer Res.55(23) ： 5536-9(1， 995)， 16 NSCL 癌 症表达 EGFRvIII(Garcia de Palazzo， IE. 等人，“Expression of mutated epidermal growt

37、h factor receptor by non-small cell lung carcinomas.” Cancer Res.53(14) ： 3217-20(1993)， 75卵巢癌表达 EGFRvIII(Moscatello， G. 等人，“Frequent expression of a mutant epidermal growth factor receptor in multiple human tumors.” Cancer Res.55(23) ： 5536-9(1995)。 0014 和 68前列腺癌表达 EGFRvIII(Olapade-Olaopa， EO. 等人，“

38、Evidence for the differential expression of a variant EGF receptor protein in human prostate cancer.” Br J Cancer.82(1) ： 186-94(2000)。 0015 缺失 267 个氨基酸并替换为甘氨酸产生可定靶抗体的独特连接。此外， 鉴于 EGFRvIII 在某些肿瘤中的表达及其在正常组织中的表达缺乏， EGFRvIII 在肿瘤治疗中可 作为用于定靶药物的理想靶标。具体而言， EGFRvIII 似乎可作为肿瘤免疫偶联物治疗的理 想候选物 ( 例如， 与抗肿瘤剂或毒素偶联的抗体

39、)。另一种治疗过量表达 EGFRvIII 的癌症 的方法涉及使用特异性定靶至未分离正常 EGFR 的变体受体的肿瘤特异性核酶。发现核酶 在无胸腺裸鼠中显著抑制乳腺癌生长 (Luo 等人， Int.J.Cancer.104(6) ： 716-21(2003)。 已描述用于整个 EGFRvIII 蛋白质的通用抗体。 0016 见国际专利申请案第 WO 01/62931 号和 Kuan 等人，“EGF mutant receptor 说 明 书 CN 102558352 A 6 5/85 页 7 vIII as a molecular target in cancer therapy.” Endoc

40、r Relat Cancer.8(2) ： 83-96(2001) ； Kuan 等人，“EGFRvIII as a promising target for antibody-based brain tumor therapy.” Brain Tumor Pathol.17(2) ： 71-78(2000) ； Kuan 等人， “Increased binding affinity enhances targeting of glioma xenografts by EGFRvIII-specific scFv.” International Journal of Cancer.88(6)

41、 ： 962-969(2000) ； Landry 等 人，“Antibody recognition of a conformational epitope in a peptide antigen ： Fv-peptide complex of an antibody fragment specific for the mutant EGF receptor， EGFRvIII.” Journal of Molecular Biology.308(5) ： 883-893(2001) ； Reist 等 人，“Astatine-211 labeling of internalizing a

42、nti-EGFRvIII monoclonal antibody using N-succinimidyl 5-211Atastato-3-pyridinecarboxylate.” Nuclea r Medicine and Biology.26(4) ： 405-411(1999) ； Reist 等人，“In vitro and in vivo behavior of radiolabeled chimeric anti-EGFRvIII monoclonal antibody ： comparison with its murine parent.” Nuclear Medicine

43、and Biology.24(7) ： 639-647(1997) ； Wikstrand 等人，“Generation of anti-idiotypic reagents in the EGFRvIII tumor-associated antigen system.” Cancer Immunology， Immunotherapy.50(12) ： 639-652(2002) ； Wikstrand等人，“Monoclonal antibodies against EGFRvIII are tumor specific and react with breast and lung ca

44、rcinomas malignant gliomas.” Cancer Research.55(14) ： 3140-3148(1995) ； Wikstrand 等人，“The class III variant of the epidermal growth factor receptor(EGFRvIII) ： characterization and utilization as an immunotherapeutic target.” J.Neurovirol.4(2) ： 148-158(1998) ； Wikstrand 等人，“The class III variant of

45、 the epidermal growth factor receptor(EGFRvIII) ： characterization and utilization as an immunotherapeutic target.” J.Neurovirol.4(2) ： 148-158(1998) ； Jungbluth 等人，“A monoclonal antibody recognizing human cancers with amplification/overexpression of the human epidermal growth factor receptor.” Proc

46、 Natl Acad Sci USA.100(2) ： 639-44(2003) ； Mamot 等人，“Epidermal Growth Factor Receptor(EGFR)-targeted Immunoliposomes Mediate Specific and Efficient Drug Delivery to EGFR-and EGFRvIII-overexpressing Tumor Cells.” Cancer Research 63 ： 3154-316l(2003)。然 而， 每一种上述抗体在变化和 / 或恒定区内都具有或含有鼠科序列。 0017 这些鼠科衍生蛋白质的

47、存在可导致抗体的快速清除或可导致抵抗患者体内抗体 的免疫反应的产生。 另外， 即使在亲和力成熟之后， 这些抗体仍具有2.2x10-8至1.5x10-9级 别的相对低的亲和力。(Kuan 等人，“EGF mutant receptor vIII as a molecular target in cancer therapy.” ， Endocr Relat Cancer.8(2) ： 83-96(2001)。 0018 为避免使用鼠科或大鼠衍生抗体， 研究者已将人类抗体功能引入啮齿动物以 使得啮齿动物可产生完全人类抗体， 见例如 Mendez 等人，“Functional transplant

48、of megabase human immunoglobulin loci recapitulates human antibody response in mice.” Nat Genet.15(2) ： 146-56(1997)。这种方法已结合针对野生型 EGFR 的成功抗体 的产生而使用， 见例如 Yang X 等人，“Development of ABX-EGF， a fully human anti-EGF receptor monoclonal antibody， for cancer therapy.” Crit Rev Oncol Hemato 38(1) ： 说 明 书 CN

49、 102558352 A 7 6/85 页 8 17-23(2001) ； Yang X-D 等人，“Eradication of Established Tumors by a Fully Human Monoclonal Antibody to the Epidermal Growth Factor Receptor without Concomitant Chemotherapy” ， Cancer Research 59(6) ： 1236-1243(1999) 和美国专利第 6,235,883 号。 发明内容 0019 在一个实施例中， 本发明包含特异性结合至 EGFRvIII 的经分离人类单克隆抗体 和包含序列 L E E K K G N Y V V T D H C 的肽 (SEQ ID NO ： 56)。在另一个实施例中， 本 发明包含特异性结合至于包含 L EEKKGNYVVTDHC 的序列 (SEQ ID NO ： 56) 中含有的表位的 经分离人类单克隆抗体， 其中如由 SPOTs 排列中的丙氨酸扫描所测定， 结合所需的残余物 选自由 EEK、 KKNYV、 LEK、 EKNY 和 EEKGN 组成的群组。 0020 另外的实施例包括包含由 VH3-33 基因编码的重链可变区氨基酸序列的经分离人