使用ICOS基CARS增强抗肿瘤活性和CAR持久性.pdf

1、10申请公布号CN104159917A43申请公布日20141119CN104159917A21申请号201380010754922申请日2013022261/601,91020120222USC07K14/70520060171申请人宾夕法尼亚大学董事会地址美国宾夕法尼亚州72发明人CH琼S格丹卡里奥Y赵J朔勒74专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人赵蓉民54发明名称使用ICOS基CARS增强抗肿瘤活性和CAR持久性57摘要本发明提供用于治疗人中癌症的组合物和方法。本发明包括施用基因修饰的TH17细胞以表达CAR，其具有抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结

2、构域。30优先权数据85PCT国际申请进入国家阶段日2014082286PCT国际申请的申请数据PCT/US2013/0273662013022287PCT国际申请的公布数据WO2013/126733EN2013082951INTCL权利要求书3页说明书50页序列表9页附图12页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书3页说明书50页序列表9页附图12页10申请公布号CN104159917ACN104159917A1/3页21编码嵌合抗原受体CAR的分离的核酸序列，其中所述CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域。2权利要求1所述的分离的核酸序列，进

3、一步包括CD3信号传导结构域。3权利要求1所述的分离的核酸序列，包括SEQIDNO8的核酸序列。4权利要求1所述的分离的核酸序列，其中所述抗原结合结构域是抗体或其抗原结合片段。5权利要求4所述的分离的核酸序列，其中所述抗原结合片段是FAB或SCFV。6权利要求1所述的分离的核酸序列，其中所述抗原结合结构域结合肿瘤抗原。7权利要求1所述的分离的核酸序列，进一步包括包含共刺激分子的细胞内结构域的共刺激信号传导区，所述共刺激分子选自CD27、CD28、41BB、OX40、CD30、CD40、PD1、淋巴细胞功能相关抗原1LFA1、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7H3、特异性结合CD83的

4、配体，和其任意组合。8权利要求1所述的分离的核酸序列，其中所述ICOS细胞内信号传导结构域由SEQIDNO6的核酸序列编码。9权利要求2所述的分离的核酸序列，其中所述CD3信号传导结构域由SEQIDNO7的核酸序列编码。10细胞，其包括编码嵌合抗原受体CAR的核酸序列，其中所述CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域。11权利要求10所述的细胞，其中所述CAR进一步包括CD3信号传导结构域。12权利要求10所述的细胞，其中所述核酸序列包括SEQIDNO8的核酸序列。13权利要求10所述的细胞，其中所述抗原结合结构域是抗体或其抗原结合片段。14权利要求13所述的细胞，其

5、中所述抗原结合片段是FAB或SCFV。15权利要求10所述的细胞，其中所述抗原结合结构域结合肿瘤抗原。16权利要求10所述的细胞，其中所述CAR进一步包括包含共刺激分子的细胞内结构域的共刺激信号传导区，所述共刺激分子选自CD27、CD28、41BB、OX40、CD30、CD40、PD1、淋巴细胞功能相关抗原1LFA1、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7H3、特异性结合CD83的配体，和其任意组合。17权利要求10所述的细胞，其中所述ICOS细胞内信号传导结构域由SEQIDNO6的核酸序列编码。18权利要求11所述的细胞，其中所述CD3信号传导结构域由SEQIDNO7的核酸序列编码。1

6、9权利要求10所述的细胞，其中所述细胞选自TH17细胞和TC17细胞。20权利要求10所述的细胞，其中当所述抗原结合结构域结合其相应的抗原时，所述细胞展示抗肿瘤免疫性。21用于哺乳动物中刺激T细胞介导的对靶细胞群体或组织的免疫应答的方法，所述方法包括向哺乳动物施用有效量的基因修饰以表达CAR的细胞，其中所述CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域。22权利要求21所述的方法，其中所述CAR进一步包括CD3信号传导结构域。23哺乳动物中提供抗肿瘤免疫性的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用有效量权利要求书CN104159917A2/3页3的基因修饰以表达CAR的细胞，其

7、中所述CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域，从而在所述哺乳动物中提供抗肿瘤免疫性。24权利要求23所述的方法，其中所述CAR进一步包括CD3信号传导结构域。25治疗具有与升高的肿瘤抗原表达相关的疾病、病症或状况的哺乳动物的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用有效量的基因修饰以表达CAR的细胞，其中所述CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域，从而治疗所述哺乳动物。26权利要求25所述的方法，其中所述CAR进一步包括CD3信号传导结构域。27权利要求25所述的方法，其中所述细胞选自自体TH17细胞和自体TC17细胞。28治疗具有癌症的人的方

8、法，所述方法包括向所述人施用基因改造的表达CAR的细胞，其中所述CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域，其中所述细胞选自TH17细胞和TC17细胞。29权利要求28所述的方法，其中所述CAR进一步包括CD3信号传导结构域。30权利要求28所述的方法，其中所述人抵抗至少一种化疗剂。31在诊断有癌症的人中产生基因改造的T细胞的持续性群体的方法，所述方法包括向所述人施用基因改造的表达CAR的细胞，其中所述CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域，其中所述基因改造的细胞的持续性群体在施用之后在所述人中持续至少一个月，并且其中所述细胞选自TH17细胞

9、和TC17细胞。32权利要求31所述的方法，其中所述CAR进一步包括CD3信号传导结构域。33权利要求31所述的方法，其中所述基因改造的T细胞的持续性群体包括选自下述的至少一种细胞施用至所述人的细胞、施用至所述人的细胞的子代，和其组合。34权利要求31所述的方法，其中所述基因改造的T细胞的持续性群体包括记忆T细胞。35权利要求31所述的方法，其中所述基因改造的T细胞的持续性群体在施用之后在所述人中持续至少三个月。36权利要求31所述的方法，其中所述基因改造的T细胞的持续性群体在施用之后在所述人中持续至少四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、十个月、十一个月、十二个月、两年或三年。37

10、权利要求31所述的方法，其中所述癌症被治疗。38在诊断有癌症的人中扩张基因改造的T细胞群体的方法，所述方法包括向所述人施用基因改造的表达CAR的细胞，其中所述CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域，其中所述施用的基因改造的细胞选自TH17细胞和TC17细胞，进一步其中所述施用的基因改造的细胞在所述人中产生子代T细胞的群体。39权利要求38所述的方法，其中所述CAR进一步包括CD3信号传导结构域。40权利要求38所述的方法，其中所述人中的所述子代T细胞包括记忆T细胞。41权利要求38所述的方法，其中所述细胞是自体细胞。42权利要求38所述的方法，其中所述子代T细胞的所

11、述群体在施用之后在所述人中持续至少三个月。43权利要求38所述的方法，其中所述子代T细胞的所述群体在施用之后在所述人中持续至少四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、十个月、十一个月、十二个月、两权利要求书CN104159917A3/3页4年或三年。44权利要求38所述的方法，其中所述癌症被治疗。权利要求书CN104159917A1/50页5使用ICOS基CARS增强抗肿瘤活性和CAR持久性0001相关申请的交叉引用0002本申请要求2012年2月22日提交的美国临时申请系列号61/601,910的优先权，其内容通过引用以它们的整体并入本文。0003发明背景0004基因修饰的表达嵌合抗

12、原受体CAR的T细胞的开发已经为许多新的用于癌症和其他病症的潜在的疗法找到了出路。一般而言，CARS包括细胞外抗原识别结构域和细胞内结构域。细胞内结构域精确的组成可为CAR和表达CAR的细胞群体提供独特的特征。0005CD278或可诱导的T细胞共刺激分子ICOS是一般在活化的T细胞上表达的共刺激分子。已经显示，除了CD28，经可诱导的共刺激分子ICOS，也称为CD278的信号传导对于最佳的细胞因子分泌是必要的，因为两种分子对于通过鼠TH17细胞的最佳的IL17A分泌是必须的PARK等，2005NATIMMUNOL611331141。最近鼠模型中的发现已经揭示ICOS通过诱导转录因子CMAF表达

13、和所以反式激活IL21产生而放大TH17反应BAUQUET等，2009NATIMMUNOL10167175。尽管已经产生了包括ICOS的嵌合受体美国专利出版US2006/0247191，但是不知道ICOS结构域在影响CAR介导的抗肿瘤活性，CAR介导的TREG增殖，或T细胞持久性中起什么作用。0006取决于存在的微环境线索，天然CD4T细胞可分化成数种T辅助TH细胞系，包括TH1、TH2、TH17、TH22之一和调节TTREG细胞OSHEA等，2010SCIENCE32710981102；MURPHY等，2010NATIMMUNOL11674680。加强宿主防御的TH17细胞在粘膜免疫性中起主

14、要作用，增强许多自身免疫病，并且释放细胞因子，包括IL17A和IL17FKORN等，2009ANNUREVIMMUNOL27485517。TH17细胞对肿瘤免疫性的贡献不同，显示对抗肿瘤发生和原致癌性活性二者的潜能ZOU等，2010NATREVIMMUNOL10248256。所以，识别控制TH17应答的机制对于理解肿瘤免疫性是至关重要的。尽管最近在用于治疗癌症的CAR基疗法中取得了进展，但是现在已经有了任何已知的使用遗传改变的TH17细胞的疗法。0007因此，本领域非常需要使用增加遗传改变的TH17细胞抗肿瘤活性和持久性的CAR治疗癌症的组合物和方法。本发明解决了该需求。发明内容0008本发明

15、提供编码嵌合抗原受体CAR的分离的核酸序列，其中CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域。0009在一个实施方式中，CAR的核酸序列进一步包括CD3信号传导结构域。0010在一个实施方式中，分离的CAR的核酸序列包括SEQIDNO8的核酸序列。0011在一个实施方式中，抗原结合结构域是抗体或其抗原结合片段。0012在一个实施方式中，抗原结合片段是FAB或SCFV。0013在一个实施方式中，抗原结合结构域结合肿瘤抗原。在一个实施方式中，肿瘤抗原与血液恶性肿瘤相关。在一个实施方式中，肿瘤抗原与实体瘤相关。说明书CN104159917A2/50页60014在一个实施方式中，

16、肿瘤抗原选自CD19、CD20、CD22、ROR1、间皮蛋白、CD33/IL3RA、CMET、PSMA、糖脂F77、EGFRVIII、GD2、NYESO1TCR、MAGEA3TCR，和其任意组合。0015在一个实施方式中，CAR的核酸序列进一步包括包含共刺激分子的细胞内结构域的共刺激信号传导区，所述共刺激分子选自CD27、CD28、41BB、OX40、CD30、CD40、PD1、淋巴细胞功能相关抗原1LFA1、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7H3、特异性结合CD83的配体，和其任意组合。0016在一个实施方式中，ICOS细胞内信号传导结构域由SEQIDNO6的核酸序列编码。0017

17、在一个实施方式中，CD3信号传导结构域由SEQIDNO7的核酸序列编码。0018本发明也提供载体，其包括编码嵌合抗原受体CAR的核酸序列，其中CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域。0019本发明也提供细胞，其包括编码嵌合抗原受体CAR的核酸序列，其中CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域。0020本发明也提供用于哺乳动物中刺激T细胞介导的对靶细胞群体或组织的免疫应答的方法，所述方法包括向哺乳动物施用有效量的基因修饰以表达CAR的细胞，其中CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域。0021本发明也提供哺乳动物中提

18、供抗肿瘤免疫性的方法，所述方法包括向哺乳动物施用有效量的基因修饰以表达CAR的细胞，其中CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域，从而在哺乳动物中提供抗肿瘤免疫性。0022本发明也提供治疗具有与升高的肿瘤抗原表达相关的疾病、病症或状况的哺乳动物的方法，所述方法包括向哺乳动物施用有效量的基因修饰以表达CAR的细胞，其中CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域，从而治疗哺乳动物。0023在一个实施方式中，细胞选自自体TH17细胞和自体TC17细胞。0024本发明也提供治疗具有癌症的人的方法，所述方法包括向人施用基因改造的表达CAR的细胞，其中CA

19、R包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域，其中细胞选自TH17细胞和TC17细胞。0025在一个实施方式中，人抵抗至少一种化疗剂。0026本发明也提供在诊断有癌症的人中产生基因改造的T细胞的持续性群体的方法，所述方法包括向人施用基因改造的表达CAR的细胞，其中CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域，其中基因改造的细胞的持续性群体在施用之后在人中持续至少一个月，和其中细胞选自TH17细胞和TC17细胞。0027在一个实施方式中，基因改造的T细胞的持续性群体包括选自下述的至少一种细胞施用至人的细胞、施用至人的细胞的子代，和其组合。0028在一个实施

20、方式中，基因改造的T细胞的持续性群体包括记忆T细胞。0029在一个实施方式中，基因改造的T细胞的持续性群体在施用之后在人中持续至少三个月。0030在一个实施方式中，基因改造的T细胞的持续性群体在施用之后在人中持续至少四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、十个月、十一个月、十二个月、两年或三年。0031本发明也提供在诊断有癌症的人中扩张基因改造的T细胞群体的方法，所述方法说明书CN104159917A3/50页7包括向人施用基因改造的表达CAR的细胞，其中CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域，其中施用的基因改造的细胞选自TH17细胞和TC17细胞，进一步其

21、中施用的基因改造的细胞在人中产生子代T细胞的群体。附图说明0032当与附图结合阅读时，将更好地理解本发明的优选实施方式的以下详细描述。为了说明本发明的目的，在附图中显示了目前优选的实施方式。然而，应当理解本发明不限于附图显示的实施方式的精确布置和手段。0033图1描绘SS1ICOSZ的核苷酸序列。含有SS1ICOSZCAR的CDNA序列克隆进入第三代慢病毒载体并且在EF1启动子SEQIDNO16的控制下表达。SS1ICOSZ含有CD8前导序列、识别人间皮蛋白的SS1单链片段、CD8链的铰链区、ICOS跨膜和细胞内结构域和TCRZ信号转导结构域。0034图2，包括图2A和图2B，描绘改变的TH1

22、7细胞的产生。图2A描绘含有SS1单链片段和不同细胞内结构域的一组嵌合受体的示意性表示。新颖性ICOS基CAR含有与ICOS细胞内结构域串联的TCR信号转导结构域。图2B描绘评估SS1SCFV融合蛋白在人初级CD4T细胞上表达的流式细胞术试验的结果，归一化为针对所有受体的60嵌合受体表达。0035图3描绘实施例实验的结果，表明ICOS基CAR改变的TH17细胞释放大量的IL17A、IL17F和CCL20但是少量的IL2。TH17细胞4105，60嵌合受体阳性与2105K562MESO细胞在没有TH17极化细胞因子或IL2的培养基中共培养。共培养24H之后获得上清液，并且通过ELISA分析细胞因

23、子产生。误差棒指示三重样品的标准偏差SD。三个实验的代表。0036图4描绘实施例实验的结果，表明ICOS通过人TH17细胞加强IL17A产生。来自5个不同正常供体的TH17细胞4105，60嵌合受体阳性与2105K562MESO细胞在没有TH17极化细胞因子或IL2的培养基上共培养。共培养24H之后获得上清液，并且通过ELISA分析IL17A产生。0037图5，包括图5A至图5C，描绘实施例实验的结果，表明ICOS基CAR改变的TH17细胞在肿瘤细胞中抗原识别之后释放大量的IL17A和IFN但是少量的IL2。TH17细胞4105，60嵌合受体阳性与2105K562、K562MESO或指示的肿瘤

24、细胞在没有TH17极化细胞因子或IL2的培养基中共培养。共培养24H之后获得上清液，并且通过ELISA分析AIL17A、BIL2和CIFN。误差棒指示两个样品的标准偏差SD。0038图6，包括图6A和图6B，描绘实施例实验的结果，其评估嵌合受体改变的TH17/TC17细胞的溶细胞活性。TC17和TH17细胞的混合物以41的比与用CFSE染色的L55靶细胞以指示的效应子靶ET比例共培养4H。图6A图解特异性细胞溶解，如使用流式细胞术基试验确定。图6B描绘ED50，如对于每个组使用四参数逻辑回归模型确定。四个实验的代表。0039图7，包括图7A和图7B，描绘实施例实验的结果，表明用ICOS基CAR

25、改变的TH17/TC17细胞根除大的预先建立的肿瘤并且显示增强的体内持久性。在NSG小鼠的腰窝中建立人初级M108肿瘤。8周之后，当肿瘤达到体积为500MM3时，小鼠用在61和67天的2个瘤说明书CN104159917A4/50页8内注射10106个TH17/TC17细胞80/60嵌合受体阳性或PBS治疗。图7A描绘平均肿瘤体积/SEM，所有组N9。在通过心脏内穿刺T细胞注入之后51天获得来自用改变的TH17/TC17细胞瘤内注射治疗的负载M108的NSG小鼠的外周血。图7B图解通过FACSTRUCOUNT试验存在的人CD4和CD8T细胞的定量。结果表达为每L外周血的平均绝对T细胞计数/SD所

26、有组N9。0040图8，包括图8A至8D，表明用ICOSZ改变的TH17细胞显示增加CD161的表达。改变的TH17细胞与照射的表达间皮蛋白的APC共培养。图8A和8B描绘通过流式细胞术在指示的时间点分析通过CARCD4T细胞应答间皮蛋白特异性刺激的CD161表达。图8C描绘在第8天在数个不同的正常供体N9中表达CD161的CARCD4T细胞的百分数被绘制。图8D描绘在第8天CAR和CAR细胞中的CD161表达。误差棒表示SEM5个不同的正常供体。0041图9，包括图9A和图9B，描绘使用包括其他共刺激结构域组合的CAR的实施例实验的结果。图9A描绘ICOS基CAR，其含有TCR信号转导结构域

27、，以及ICOS和CD13741BB共刺激结构域三者。图9B描绘下述图，其图解并入CD137信号传导结构域以及ICOS不改变用仅仅含有ICOS共刺激结构域的CAR改变的TH17细胞的细胞因子曲线。TH17细胞4105，60嵌合受体阳性与2105K562、K562MESO或指示的肿瘤细胞在没有外源性细胞因子的情况下共培养。共培养24H之后获得上清液，并且通过ELISA分析IL17A、IL2和IFN。误差棒指示两个样品中的标准偏差SD。0042图10，包括图10A至10C，是一系列图像，表明ICOSZ改变的TH17细胞显示增加的TH17相关的基因表达。改变的TH17细胞用源自固定的酵母的重组体间皮蛋

28、白刺激。基因表达水平在刺激之前第0天并且抗原识别后4H、8H、24H和96H测定。图10A描绘选择的差别表达的基因的归一化的LOG2表达FC2，FDR2倍数变化，错误发现率FDR2倍数变化的基因标记为粗体形式。03090310说明书CN104159917A4037/50页410311说明书CN104159917A4138/50页420312说明书CN104159917A4239/50页430313表2与SS128Z相比在抗原识别后4小时在用SS1ICOSZ改变的TH17细胞中基因差异表达升高。在活化之前第0天和抗原识别后4H对T细胞进行基因表达图谱分析。仅仅显示与28Z细胞相比ICOSZ细胞中

29、差异表达升高2倍数变化，错误发现率FDR2倍数变化的基因标记为粗体形式。03140315表3与SS128Z相比在抗原识别后8小时在用SS1ICOSZ改变的TH17细胞中基因差异表达升高。在活化之前第0天和抗原识别后8H对T细胞进行基因表达图谱分析。仅仅显示与BBZ细胞相比在ICOSZ细胞中的差异表达升高2倍数变化，错误发现率FDR2倍数变化的基因标记为粗体形式。0316说明书CN104159917A4340/50页440317说明书CN104159917A4441/50页450318说明书CN104159917A4542/50页460319表4与SS128Z相比在抗原识别后8小时在用SS1IC

30、OSZ改变的TH17细胞中基因差异表达升高。在活化之前第0天和抗原识别后8H对T细胞进行基因表达图谱分析。仅仅显示与28Z细胞相比ICOSZ细胞中差异表达升高2倍数变化，错误发现率FDR2倍数变化的基因标记为粗体形式。0320说明书CN104159917A4643/50页4703210322表5与SS128Z相比在抗原识别后24小时在用SS1ICOSZ改变的TH17细胞中基因差异表达升高。在活化之前第0天和抗原识别后24H对T细胞进行基因表达图谱分析。仅仅显示与BBZ细胞相比在ICOSZ细胞中的差异表达升高2倍数变化，错误发现率FDR2倍数变化的基因标记为粗体形式。0323说明书CN10415

31、9917A4744/50页480324说明书CN104159917A4845/50页490325表6与SS128Z相比在抗原识别后24小时在用SS1ICOSZ改变的TH17细胞中基因差异表达升高。在活化之前第0天和抗原识别后24H对T细胞进行基因表达图谱分析。仅仅显示与28Z细胞相比ICOSZ细胞中差异表达升高2倍数变化，错误发现率FDR2倍数变化的基因标记为粗体形式。03260327表7与SS128Z相比在抗原识别后96小时在用SS1ICOSZ改变的TH17细胞中基因差异表达升高。在活化之前第0天和抗原识别后96H对T细胞进行基因表达图谱分析。仅仅显示与BBZ细胞相比在ICOSZ细胞中的差异

32、表达升高2倍数变化，错误发现说明书CN104159917A4946/50页50率FDR2倍数变化的基因标记为粗体形式。0328说明书CN104159917A5047/50页510329说明书CN104159917A5148/50页520330表8与SS128Z相比在抗原识别后96小时在用SS1ICOSZ改变的TH17细胞中基因差异表达升高。在活化之前第0天和抗原识别后96H对T细胞进行基因表达图谱分析。仅仅显示与28Z细胞相比ICOSZ细胞中差异表达升高2倍数变化，错误发现率FDR2倍数变化的基因标记为粗体形式。0331说明书CN104159917A5249/50页530332说明书CN104

33、159917A5350/50页540333与编码CD28或41BB信号传导结构域的CAR相比，CART细胞中并入ICOS信号传导结构域赋予新型功能。本文呈现的研究指示用编码ICOS细胞内结构域的CAR改变TH17细胞对于获得具有增强的功能和持久性的有力TH17细胞是至关重要的。此外，本文呈现的数据表明包括ICOS结构域减少释放的IL2的量，其是优选的因为然后CAR不触发T调节细胞的增殖。新型ICOS基CAR的设计具有在临床试验中加强抗肿瘤效应的潜能。0334本文引用的每一和每个专利、专利申请和出版物的公开内容在此都通过引用全文并入本文。尽管已经参考具体实施方式公开了本发明，但显而易见的是可由本

34、领域技术人员想出本发明的其他实施方式和变形，而不脱离本发明的真实精神和范围。所附权利要求意欲被解释为包括所有这样的实施方式和等同变形。说明书CN104159917A541/9页5500010002序列表CN104159917A552/9页560003序列表CN104159917A563/9页570004序列表CN104159917A574/9页580005序列表CN104159917A585/9页590006序列表CN104159917A596/9页600007序列表CN104159917A607/9页610008序列表CN104159917A618/9页620009序列表CN10415991

35、7A629/9页63序列表CN104159917A631/12页64图1说明书附图CN104159917A642/12页65图2A图2B说明书附图CN104159917A653/12页66图3图4说明书附图CN104159917A664/12页67图5A图5B说明书附图CN104159917A675/12页68图5C图6A说明书附图CN104159917A686/12页69图6B图7A图7B说明书附图CN104159917A697/12页70图8A图8B说明书附图CN104159917A708/12页71图8C图8D图9A说明书附图CN104159917A719/12页72图9B说明书附图CN104159917A7210/12页73图10A说明书附图CN104159917A7311/12页74图10B说明书附图CN104159917A7412/12页75图10C说明书附图CN104159917A75