中草药与生物菌复混饲料添加剂及其制备方法和用途.pdf

1、(10)申请公布号 CN 103349165 A (43)申请公布日 2013.10.16 CN 103349165 A *CN103349165A* (21)申请号 201310328340.2 (22)申请日 2013.07.31 A23K 1/16(2006.01) A23K 1/14(2006.01) A23K 1/00(2006.01) (71)申请人 刘范涛 地址 154721 黑龙江省佳木斯市汤原县鹤立 镇 (72)发明人 刘范涛 杨子萱 (74)专利代理机构 大连智高专利事务所 ( 特殊 普通合伙 ) 21235 代理人 胡景波 (54) 发明名称 中草药与生物菌复混饲料添加剂

2、及其制备方 法和用途 (57) 摘要 中草药与生物菌复混饲料添加剂及其制备方 法和用途， 将红参 5 份， 板蓝根 5 份， 大青叶 7 份， 黄芪5份， 苏子10份， 昆布25份， 益母草6份， 甘草 5份， 陈皮5份， 树舌 10 份， 在 25 35条件下进 行低温烘干粉碎 60 目过筛混合均匀制得添加剂 ； 再制备微生物发酵添加剂， 二者组合使用， 制得的产品可完全替代抗生素， 喂饲的家畜 （例如 猪） 经屠宰检测不存在药物残留成份， 且可达到比 使用抗生素更优的防病抗病效果。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 8 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发

3、明专利申请 权利要求书2页 说明书8页 (10)申请公布号 CN 103349165 A CN 103349165 A *CN103349165A* 1/2 页 2 1. 中草药与生物菌复混饲料添加剂， 由添加剂和添加剂组成， 其原料包括原料 和微生物发酵原料 ： 所述的上述原料按照重量配比包括以下中草药 ： 红参 5 份， 板蓝根 5 份， 大青叶 7 份， 黄芪 5 份， 苏子 10 份， 昆布 25 份， 益母草 6 份， 甘草 5 份， 陈皮 5 份， 树舌 10 份， 将上述原料在 25 40条件下进行低温烘干粉碎 80 目过筛混合均匀制得添加剂 ； 所述的微生物发酵原料包括豆粕 3

4、0 份麦麸 50 份以及油米糠 20 份， 再加入质量为 豆粕、 麦麸和油米糠总重量0.81.2倍的混合菌悬液混合,将其在2535条件下进行 低温烘干粉碎 60 目过筛得添加剂 ： 所述混合菌悬液是啤酒酵母菌菌悬液、 纳豆芽孢杆菌菌悬液及植物乳杆菌菌悬液按体 积比 2:4:3 比例混合制得 ； 所述啤酒酵母菌菌悬液的制备是 : 1)平板培养活化 ： 将啤酒酵母菌接种于PDA平板培养上， 于25条件下培养2036h, 形成单菌落 ； 2） 将步骤 1） 活化培养的酵母菌接种于 PDA 液体培养中， 于 25 30、 200 240rpm 条件下培养 12 24h, 使其处于对数中后期 ; 3)将

5、步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水稀释 至 1.0 2.01011个 m1 备用 ； 所述纳豆芽孢杆菌菌悬液的制备是 : 1) 平板培养活化 ： 将纳豆芽孢杆菌接种于 LB 平板培养上， 于 35 40条件下培养 14 30h, 形成单菌落 ； 2） 将步骤1） 活化培养的纳豆芽孢杆菌菌种接种于LB液体培养中， 于3540、 180 240rpm 条件下培养 8 16h, 使其处于对数中后期 ; 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水稀释 至 1.0 2.01011个 m1 备用 ； 所述植物乳杆菌菌

6、悬液的制备是 : 1)平板培养活化 ： 将植物乳杆菌接种于MRS平板培养上， 于3040条件下培养24 36h, 形成单菌落 ； 2） 将步骤 1） 活化培养的植物乳杆菌接种于 MRS 液体培养中， 于 30 40条件下培养 12 24h, 使其处于对数中后期 ; 权 利 要 求 书 CN 103349165 A 2 2/2 页 3 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水稀释 至 1.0 2.01011个 m1 备用。 2. 如权利要求 1 所述的中草药与生物菌复混饲料添加剂， 其特征在于 ： 所述的原料 还包括微量元素、 维生素 A 维生素 D

7、 和氨基酸共 12-14 质量份。 3. 如权利要求 2 所述的中草药与生物菌复混饲料添加剂， 其特征在于 ： 所述的微量元 素选自铁、 铜、 锌、 锰、 碘、 硒中的 1-6 种。 4. 如权利要求 1 所述的中草药与生物菌复混饲料添加剂， 其特征在于 ： 所述的原料 还包括 12-44 质量份的沸石粉。 5. 如权利要求 1 所述的中草药与生物菌复混饲料添加剂， 其特征在于 ： 所述的原料 进一步包括山楂 7 份、 蒲公英干粉 5 份， 车前草 5 份。 6. 一种如权利要求 1-5 所述的中草药与生物菌复混饲料添加剂的制备方法， 是将原料 按其各自的重量配比混合后粉碎通过 80 目筛混合

8、均匀成品包装即可， 使用时再和微生 物发酵原料同时添加到饲料里混合均匀即可。 7. 一种饲料， 其特征是含有权利要求 1-5 之一的中草药与生物菌复混饲料添加剂。 8.如权利要求7所述的饲料， 其特征在于含有质量百分数13%的添加剂与质量百 分数 1% 的添加剂。 9. 权利要求 1-5 所述中草药与生物菌复混饲料添加剂的用途， 其特征在于饲喂鸡、 鸭、 鹅、 鱼、 牛、 羊、 驴或猪。 10. 权利要求 7-8 所述饲料的用途， 其特征在于饲喂鸡、 鸭、 鹅、 鱼、 牛、 羊、 驴或猪。 权 利 要 求 书 CN 103349165 A 3 1/8 页 4 中草药与生物菌复混饲料添加剂及其制

9、备方法和用途 技术领域 0001 本发明涉及饲料加工领域， 尤其涉及一种饲料添加剂及其制备方法和用途。 背景技术 0002 目前， 肉制品行业以速生畜禽为肉制品供应为主流。以上市售存在的弊病是抗生 素在肉体中大量沉淀， 对人体造成潜在危害已成共识， 而且肉的口感腥味、 药味重， 口感差。 市售的少量的散养猪、 溜达猪等虽然在一定程度上减少了上述问题的发生， 在一定程度上 增加了肉制品的口感性和安全性， 单仍然不能完全取消抗生素的使用， 而且这种养殖条件 需要庞大的养殖空间， 对生态然环境， 破坏及为严重， 例如一万平方米生态环境如果放养 2 万头猪， 将寸草不生， 树皮全部扒光， 是一种实际上

10、无法解决规模化养殖的问题， 没有可持 续性和发展性。 发明内容 0003 本发明的目的在于提供一种中草药与生物菌复混饲料添加剂。 0004 本发明的另一个目的是提供中草药与生物菌复混饲料添加剂的制备方法。 0005 同时， 还提供一种饲料及其用途。 0006 本发明所提供的中草药与生物菌复混饲料添加剂中草药与生物菌复混饲料添加 剂， 由添加剂和添加剂组成， 其原料包括原料和微生物发酵原料 ： 0007 所述的上述原料按照重量配比包括以下中草药 ： 0008 红参 5 份， 0009 板蓝根 5 份， 0010 大青叶 7 份， 0011 黄芪 5 份， 0012 苏子 10 份， 0013 昆

11、布 25 份， 0014 益母草 6 份， 0015 甘草 5 份， 0016 陈皮 5 份， 0017 树舌 10 份， 0018 将上述原料在2540条件下进行低温烘干粉碎80目过筛混合均匀制得添加 剂 ； 0019 所述的微生物发酵原料包括豆粕 30 份麦麸 50 份以及油米糠 20 份， 再加入质 量为豆粕、 麦麸和油米糠总重量0.81.2倍的混合菌悬液混合均匀,将其在2535条 件下进行低温烘干粉碎 60 目过筛得添加剂 ： 0020 所述混合菌悬液是啤酒酵母菌菌悬液、 纳豆芽孢杆菌菌悬液及植物乳杆菌菌悬液 按体积比 2:4:3 比例混合制得 ： 说 明 书 CN 103349165

12、 A 4 2/8 页 5 0021 所述啤酒酵母菌菌悬液的制备是 : 0022 1)平板培养活化 ： 将啤酒酵母菌接种于PDA平板培养上， 于25条件下培养20 36h, 形成单菌落 ； 0023 2）将步骤 1）活化培养的酵母菌接种于 PDA 液体培养中， 于 25 30、 200 240rpm 条件下培养 12 24h, 使其处于对数中后期 ; 0024 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水 稀释至 1.0 2.01011个 m1 备用 ； 0025 所述纳豆芽孢杆菌菌悬液的制备是 : 0026 1) 平板培养活化 ： 将纳豆芽孢杆菌接种于

13、 LB 平板培养上， 于 35 40条件下培 养 14 30h, 形成单菌落 ； 0027 2） 将步骤 1） 活化培养的纳豆芽孢杆菌菌种接种于 LB 液体培养中， 于 35 40、 180 240rpm 条件下培养 8 16h, 使其处于对数中后期 ; 0028 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水 稀释至 1.0 2.01011个 m1 备用 ； 0029 所述植物乳杆菌菌悬液的制备是 : 0030 1)平板培养活化 ： 将植物乳杆菌接种于MRS平板培养上， 于3040条件下培养 24 36h, 形成单菌落 ； 0031 2） 将步骤 1）

14、 活化培养的植物乳杆菌接种于 MRS 液体培养中， 于 30 40条件下 培养 12 24h, 使其处于对数中后期 ; 0032 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水 稀释至 1.0 2.01011个 m1 备用。 0033 优选的， 所述的原料还包括微量元素、 维生素 A 维生素 D 和氨基酸共 12-14 质量 份。所述的微量元素选自铁、 铜、 锌、 锰、 碘、 硒中的 1-6 种。 0034 优选的， 所述的原料还包括 12-44 质量份的沸石粉。 0035 优选的， 所述的原料进一步包括山楂 7 份、 蒲公英干粉 5 份， 车前草 5

15、份。 0036 中草药与生物菌复混饲料添加剂的制备方法， 是将原料按其各自的重量配比混 合后粉碎通过 80 目筛混合均匀成品包装即可， 使用时再和生物菌发酵原料同时添加到 饲料里混合均匀即可。 0037 本发明要求保护一种饲料， 其含有上述的中草药与生物菌复混饲料添加剂。 0038 优选的， 所述的饲料含有质量百分数 1 3% 的添加剂与质量百分数 1% 的添加 剂。 0039 该饲料或饲料添加剂的用途在于饲喂鸡、 鸭、 鹅、 鱼、 牛、 羊、 驴或猪。 0040 未使用时， 添加剂和添加剂分袋包装 0041 本发明的技术效果在于 ： 0042 1） 本产品可完全替代抗生素， 喂饲的家畜 （例

16、如猪） 经屠宰检测不存在药物残留成 份， 且可达到比使用抗生素更优的防病抗病效果， 增加家畜自身免疫力， 经试验， 死亡率较 不添加本品对比组降低了 85% 以上， 较使用抗生素的对比组发病率降低了 15%， 死亡率降低 了 8% ； 达到了明显大幅度降低得效果 ； 本专利所述的添加剂的添加大大提高了饲料的适口 性， 提高饲料转化率， 降低养殖成本 ； 说 明 书 CN 103349165 A 5 3/8 页 6 0043 2） 屠宰后检测证实 ： 使用本专利提供的饲料添加剂或饲料生产而得的猪肉是一 种低胆固醇、 低脂肪、 高蛋白、 高氨基酸等绿色营养健康型肉制品 ； 使用该饲料喂养的家畜，

17、肉质整体胶原蛋白更佳丰富， 各种氨基酸含量明显高于普通猪肉， 甚至优于新日樱花猪肉 （注 ： 新日樱花猪肉在猪肉养殖领域的级别相当于神户牛肉在牛肉养殖领域的级别） ； 详见 表 1、 表 2 ： 0044 表 1 猪肉氨基酸含量对比表 0045 每 100 克鲜猪肉中氨基酸含量 0046 0047 表 2 鲜肉成分对比表 0048 每 100 克鲜猪肉中含量 0049 说 明 书 CN 103349165 A 6 4/8 页 7 名称普通猪肉本品饲喂而得的猪肉 脂肪88.6g15.4g 胆固醇109mg29.2mg 0050 3） 使用本专利提供的饲料添加剂或饲料能进行大规模产业化养殖， 口感

18、和品质超 过普通肉的品质， 详见表 3 ； 且养殖过程对生态环境构成破坏程度极小 ； 0051 表 3 本品喂饲的猪肉食用口感等特征表 0052 0053 * 上述描述是 30 位有经验的评定人员综合评定意见得出的结论 具体实施方式 0054 下面通过实施例进一步对本发明进行阐述。 0055 实施例 1 0056 中草药与生物菌复混饲料添加剂， 由添加剂和添加剂组成， 其原料包括原料 和微生物发酵原料 ： 0057 所述的上述原料按照重量配比包括以下中草药 ： 0058 红参5份， 板蓝根5份， 大青叶7份， 黄芪5份， 苏子10份， 昆布25份， 益母草6份， 甘草 5 份， 陈皮 5 份，

19、 树舌 10 份 ； 0059 将上述原料在2535条件下进行低温烘干粉碎80目过筛混合均匀制得添加 剂 ； 所述的微生物发酵原料包括豆粕 30 份麦麸 50 份以及油米糠 20 份， 再加入质量 为豆粕、 麦麸和油米糠总重量0.81.2倍的混合菌悬液混合,将其在2535条件下进 说 明 书 CN 103349165 A 7 5/8 页 8 行低温烘干粉碎 60 目过筛得添加剂 ： 0060 所述混合菌悬液是啤酒酵母菌菌悬液、 纳豆芽孢杆菌菌悬液及植物乳杆菌菌悬液 按体积比 2:4:3 比例混合制得 ： 所述啤酒酵母菌菌悬液的制备是 : 0061 1)平板培养活化 ： 将啤酒酵母菌接种于PDA

20、平板培养上， 于25条件下培养20 36h, 形成单菌落 ； 0062 2）将步骤 1）活化培养的酵母菌接种于 PDA 液体培养中， 于 25 30、 200 240rpm 条件下培养 12 24h, 使其处于对数中后期 ; 0063 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水 稀释至 1.0 2.01011个 m1 备用 ； 0064 所述纳豆芽孢杆菌菌悬液的制备是 : 0065 1) 平板培养活化 ： 将纳豆芽孢杆菌接种于 LB 平板培养上， 于 35 40条件下培 养 14 30h, 形成单菌落 ； 0066 2） 将步骤 1） 活化培养的纳豆

21、芽孢杆菌菌种接种于 LB 液体培养中， 于 35 40、 180 240rpm 条件下培养 8 16h, 使其处于对数中后期 ; 0067 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水 稀释至 1.0 2.01011个 m1 备用 ； 0068 所述植物乳杆菌菌悬液的制备是 : 0069 1)平板培养活化 ： 将植物乳杆菌接种于MRS平板培养上， 于3040条件下培养 24 36h, 形成单菌落 ； 0070 2） 将步骤 1） 活化培养的植物乳杆菌接种于 MRS 液体培养中， 于 30 40条件下 培养 12 24h, 使其处于对数中后期 ; 007

22、1 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水 稀释至 1.0 2.01011个 m1 备用。 0072 饲料中的添加量 ： 0073 乳猪饲料中添加 ： 质量百分数 1% 的添加剂与质量百分数 1% 的添加剂。 0074 仔猪饲料中添加 ： 质量百分数 1.5% 的添加剂与质量百分数 1% 的添加剂。 0075 育肥猪饲料中添加 ： 质量百分数 2% 3% 的添加剂与质量百分数 1% 的添加剂 。 0076 实施例 2 0077 中草药与生物菌复混饲料添加剂， 由添加剂和添加剂组成， 其原料包括原料 和微生物发酵原料 ： 0078 所述的上述原料按

23、照重量配比包括以下中草药 ： 0079 红参5份， 板蓝根5份， 大青叶7份， 黄芪5份， 苏子10份， 昆布25份， 益母草6份， 甘草 5 份， 陈皮 5 份， 树舌 10 份 ； 山楂 7 份、 蒲公英干粉 5 份， 车前草 5 份 ； 0080 将上述原料在2540条件下进行低温烘干粉碎80目过筛混合均匀制得添加 剂 ； 所述的微生物发酵原料包括豆粕 30 份麦麸 50 份以及油米糠 20 份， 再加入质量 为豆粕、 麦麸和油米糠总重量0.81.2倍的混合菌悬液混合,将其在2535条件下进 行低温烘干粉碎 60 目过筛得添加剂 ： 所述混合菌悬液是啤酒酵母菌菌悬液、 纳豆芽孢杆 菌菌悬

24、液及植物乳杆菌菌悬液按体积比 2:4:3 比例混合制得 ； 所述啤酒酵母菌菌悬液的制 说 明 书 CN 103349165 A 8 6/8 页 9 备是 : 0081 1)平板培养活化 ： 将啤酒酵母菌接种于PDA平板培养上， 于25条件下培养20 36h, 形成单菌落 ； 0082 2）将步骤 1）活化培养的酵母菌接种于 PDA 液体培养中， 于 25 30、 200 240rpm 条件下培养 12 24h, 使其处于对数中后期 ; 0083 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水 稀释至 1.0 2.01011个 m1 备用 ； 0084 所

25、述纳豆芽孢杆菌菌悬液的制备是 : 0085 1) 平板培养活化 ： 将纳豆芽孢杆菌接种于 LB 平板培养上， 于 35 40条件下培 养 14 30h, 形成单菌落 ； 0086 2） 将步骤 1） 活化培养的纳豆芽孢杆菌菌种接种于 LB 液体培养中， 于 25 35、 180 240rpm 条件下培养 8 16h, 使其处于对数中后期 ; 0087 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水 稀释至 1.0 2.01011个 m1 备用 ； 0088 所述植物乳杆菌菌悬液的制备是 : 0089 1)平板培养活化 ： 将植物乳杆菌接种于MRS平板培养

26、上， 于3040条件下培养 24 36h, 形成单菌落 ； 0090 2） 将步骤 1） 活化培养的植物乳杆菌接种于 MRS 液体培养中， 于 30 40条件下 培养 12 24h, 使其处于对数中后期 ; 0091 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水 稀释至 1.0 2.01011个 m1 备用。 0092 饲料中的添加量 ： 0093 乳猪饲料中添加 ： 质量百分数 1% 的添加剂与质量百分数 1% 的添加剂。 0094 仔猪饲料中添加 ： 质量百分数11.5%的添加剂与质量百分数1%的添加剂。 0095 育肥猪饲料中添加 ： 质量百分数

27、 3% 的添加剂与质量百分数 1% 的添加剂。 0096 实施例 3 0097 中草药与生物菌复混饲料添加剂， 由添加剂和添加剂组成， 其原料包括原料 和微生物发酵原料 ： 0098 所述的上述原料按照重量配比包括以下中草药 ： 0099 红参 5 份， 板蓝根 5 份， 大青叶 7 份， 黄芪 5 份， 苏子 10 份， 昆布 25 份， 益母草 6 份， 甘草 5 份， 陈皮 5 份， 树舌 10 份 ； 原料还包括微量元素、 维生素 A 维生素 D 和氨基酸共 12-14 质量份 ； 所述的微量元素选自铁、 铜、 锌、 锰、 碘、 硒中的 1-6 种。所述的原料还包括 12-44 质量份

28、的沸石粉。 0100 将上述原料在2540条件下进行低温烘干粉碎80目过筛混合均匀制得添加 剂 ； 所述的微生物发酵原料包括豆粕 30 份麦麸 50 份以及油米糠 20 份， 再加入质量 为豆粕、 麦麸和油米糠总重量 0.8 1.2 倍的混合菌悬液混合， 将其在 25 35条件下进 行低温烘干粉碎 60 目过筛得添加剂 ： 所述混合菌悬液是啤酒酵母菌菌悬液、 纳豆芽孢杆 菌菌悬液及植物乳杆菌菌悬液按体积比 2:4:3 比例混合制得 ； 所述啤酒酵母菌菌悬液的制 备是 : 说 明 书 CN 103349165 A 9 7/8 页 10 0101 1)平板培养活化 ： 将啤酒酵母菌接种于PDA平板

29、培养上， 于25条件下培养20 36h, 形成单菌落 ； 0102 2）将步骤 1）活化培养的酵母菌接种于 PDA 液体培养中， 于 25 30、 200 240rpm 条件下培养 12 24h, 使其处于对数中后期 ; 0103 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水 稀释至 1.0 2.01011个 m1 备用 ； 0104 所述纳豆芽孢杆菌菌悬液的制备是 : 0105 1) 平板培养活化 ： 将纳豆芽孢杆菌接种于 LB 平板培养上， 于 35 40条件下培 养 14 30h, 形成单菌落 ； 0106 2） 将步骤 1） 活化培养的纳豆芽孢

30、杆菌菌种接种于 LB 液体培养中， 于 35 40、 180 240rpm 条件下培养 8 16h, 使其处于对数中后期 ; 0107 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水 稀释至 1.0 2.01011个 m1 备用 ； 0108 所述植物乳杆菌菌悬液的制备是 : 0109 1)平板培养活化 ： 将植物乳杆菌接种于MRS平板培养上， 于3040条件下培养 24 36h, 形成单菌落 ； 0110 2） 将步骤 1） 活化培养的植物乳杆菌接种于 MRS 液体培养中， 于 30 40条件下 培养 12 24h, 使其处于对数中后期 ; 0111

31、3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水 稀释至 1.0 2.01011个 m1 备用。 0112 饲料中的添加量 ： 0113 乳猪饲料中添加 ： 质量百分数 2% 的添加剂与质量百分数 1% 的添加剂。 0114 仔猪饲料中添加 ： 质量百分数 2.5% 的添加剂与质量百分数 1% 的添加剂。 0115 育肥猪饲料中添加 ： 质量百分数 3% 的添加剂与质量百分数 1% 的添加剂。 0116 实施例 4 0117 中草药与生物菌复混饲料添加剂， 由添加剂和添加剂组成， 其原料包括原料 和微生物发酵原料 ： 0118 所述的上述原料按照重量配比包

32、括以下中草药 ： 0119 红参5份， 板蓝根5份， 大青叶7份， 黄芪5份， 苏子10份， 昆布25份， 益母草6份， 甘草 5 份， 陈皮 5 份， 树舌 10 份 ； 山楂 7 份、 蒲公英干粉 5 份， 车前草 5 份。原料还包括微 量元素、 维生素A维生素D和氨基酸共14质量份 ； 所述的微量元素选自铁、 铜、 锌、 锰、 碘、 硒 中的 1-6 种。所述的原料还包括 44 质量份的沸石粉。 0120 将上述原料在2535条件下进行低温烘干粉碎80目过筛混合均匀制得添加 剂 ； 所述的微生物发酵原料包括豆粕 30 份麦麸 50 份以及油米糠 20 份， 再加入质量 为豆粕、 麦麸和油

33、米糠总重量0.81.2倍的混合菌悬液混合,将其在2535条件下进 行低温烘干粉碎 60 目过筛得添加剂 ； 所述混合菌悬液是啤酒酵母菌菌悬液、 纳豆芽孢杆 菌菌悬液及植物乳杆菌菌悬液按体积比 2:4:3 比例混合制得 ： 所述啤酒酵母菌菌悬液的制 备是 : 0121 1)平板培养活化 ： 将啤酒酵母菌接种于PDA平板培养上， 于25条件下培养20 说 明 书 CN 103349165 A 10 8/8 页 11 36h, 形成单菌落 ； 0122 2）将步骤 1）活化培养的酵母菌接种于 PDA 液体培养中， 于 25 30、 200 240rpm 条件下培养 12 24h, 使其处于对数中后期

34、 ; 0123 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水 稀释至 1.0 2.01011个 m1 备用 ； 0124 所述纳豆芽孢杆菌菌悬液的制备是 : 0125 1) 平板培养活化 ： 将纳豆芽孢杆菌接种于 LB 平板培养上， 于 35 40条件下培 养 14 30h, 形成单菌落 ； 0126 2） 将步骤 1） 活化培养的纳豆芽孢杆菌菌种接种于 LB 液体培养中， 于 35 40、 180 240rpm 条件下培养 8 16h, 使其处于对数中后期 ; 0127 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生

35、理盐水 稀释至 1.0 2.01011个 m1 备用 ； 0128 所述植物乳杆菌菌悬液的制备是 : 0129 1)平板培养活化 ： 将植物乳杆菌接种于MRS平板培养上， 于3040条件下培养 24 36h, 形成单菌落 ； 0130 2） 将步骤 1） 活化培养的植物乳杆菌接种于 MRS 液体培养中， 于 30 40条件下 培养 12 24h, 使其处于对数中后期 ; 0131 3)将步骤2） 获得的菌液体于4、 4000rpm条件下离心收集菌体， 用无菌生理盐水 稀释至 1.0 2.01011个 m1 备用。 0132 饲料中的添加量 ： 0133 乳猪饲料中添加 ： 质量百分数 1% 的添加剂与质量百分数 1% 的添加剂。 0134 仔猪饲料中添加 ： 质量百分数11.5%的添加剂与质量百分数1%的添加剂。 0135 育肥猪饲料中添加 ： 质量百分数 3% 的添加剂与质量百分数 1% 的添加剂。 说 明 书 CN 103349165 A 11