一种提取甜茶苷的新方法.pdf

1、(10)申请公布号 CN 104262425 A (43)申请公布日 2015.01.07 CN 104262425 A (21)申请号 201410402940.3 (22)申请日 2014.08.15 C07H 15/256(2006.01) C07H 1/08(2006.01) (71)申请人 桂林莱茵生物科技股份有限公司 地址 541199 广西壮族自治区桂林市临桂县 西城南路秧塘工业园 (72)发明人 赵军 杨文国 李元元 罗勇为 黄华凤 (74)专利代理机构 北京轻创知识产权代理有限 公司 11212 代理人 杨立 (54) 发明名称 一种提取甜茶苷的新方法 (57) 摘要 本发明

2、涉及一种提取甜茶苷的新方法， 包括 ： 原料粉碎、 溶剂提取、 膜浓缩、 离心、 调 pH 值、 大孔 树脂纯化、 碱酸处理、 洗脱、 浓缩、 复合离子交换树 脂层析、 浓缩、 结晶、 干燥后得到成品， 本方法能够 得到纯度 99的甜茶苷产品， 并且产品雪白， 无 苦味， 溶剂残留少， 无农药残留。同时本方法大大 减少了生产工序， 节约生产成本， 工艺稳定性好。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 (10)申请公布号 CN 104262425 A CN 104

3、262425 A 1/1 页 2 1. 一种提取甜茶苷的新方法， 其特征在于， 包括 ： 1) 取甜茶叶干燥品， 粉碎到 10 目， 用纯水于 95浸提 2 次， 第一次加水量是甜茶叶原 料用量的 13 倍， 提取 2H 后分离出滤液备用， 滤渣加纯水继续浸提， 第二次加水量是甜茶叶 原料用量的 11 倍， 提取 2H 后分离出滤液， 合并两次提取的滤液， 得到总滤液 ； 2) 将总滤液过膜浓缩到甜茶叶原料用量的 5 倍量得浓缩液， 膜的参数为 ： 进溶液压力 0.9Mpa, 出溶液压力 0.45Mpa， 冷却浓缩液到 25， 用台式布袋离心进行高速和低速的组合 离心， 离心沉淀弃去， 离心液

4、用酸调 pH 4-5， 搅拌均匀， 使 pH 值不变 ； 3) 将 2) 调好 pH 值的溶液进大孔树脂柱， 流出液用 0.5 3 w/w 的 NaOH 调 pH 7， 尝有甜味和检测甜茶苷含量 2为进柱终点， 进液完毕后， 首先用纯水洗柱， 洗至流出液 无色， 澄清， 再用碱液洗柱， 第三用纯水洗柱， 洗至流出液 pH 7， 第四用酸液洗柱， 最后用 水洗柱， 洗至流出液 pH 7 ； 4) 用 4 倍树脂柱体积的 48乙醇解吸， 流出液从有甜味和检测甜茶苷 2时开始收 集， 到无甜味和检测甜茶苷 7 时为止， 得洗脱液 ； 6)将洗脱液减压浓缩回收乙醇， 制成12波美度的稠膏， 加入稠膏4

5、倍量的溶剂， 搅拌均 匀， 在 4下结晶 24H， 得晶体 ； 7)将晶体用80纯水溶解到固形物30， 100-200目过滤后， 取滤液喷雾干燥， 得到甜 茶苷。 2. 根据权利要求 1 所述的新方法， 其特征在于， 在 2) 中， 所述组合离心为先经 950R/ min 高速离心 1H 后， 再经 450r/min 低速离心 20 分钟。 3. 根据权利要求 1 所述的新方法， 其特征在于， 在 2) 中， 所述酸为 0.5 3 w/w 的 盐酸水溶液或 0.5 3 w/w 的硫酸水溶液。 4. 根据权利要求 1 所述的新方法， 其特征在于， 在 3) 中， 所述大孔树脂种类是 HP-20B

6、、 ADS-7 或 X-6 树脂。 5. 根据权利要求 1 所述的新方法， 其特征在于， 在 3) 中， 所述碱液为 0.5 3 w/w 的氢氧化钠水溶液或 0.5 3 w/w 的氢氧化钾水溶液， 所述碱液的用量为 3 倍树脂柱重 量。 6. 根据权利要求 1 所述的新方法， 其特征在于， 在 3) 中， 所述酸液为 0.5 3 w/w 的盐酸水溶液或 0.5 3 w/w 的硫酸水溶液， 所述酸液的用量为 3 倍树脂柱重量。 7. 根据权利要求 1 所述的新方法， 其特征在于， 在 5) 中， 所述阴离子树脂种类是 700B 离子交换树脂或 700A 离子交换树脂， 所述阳离子树脂种类是 73

7、2 离子交换树脂或 D204 离 子交换树脂。 8. 根据权利要求 1 所述的新方法， 其特征在于， 在 6) 中， 所述溶剂为甲醇、 乙醇、 丙酮、 乙酸乙酯中的一种， 上述溶剂均为分析纯。 权 利 要 求 书 CN 104262425 A 2 1/4 页 3 一种提取甜茶苷的新方法 技术领域 0001 本发明涉及一种提取甜茶苷的新方法， 属于化学领域。 背景技术 0002 甜茶为广西四大名品， 在广东、 湖南、 江西等省也有种植， 甜茶含有大量的生物类 黄铜， 具备普通绿茶的功效外， 同时还具有防治心血管疾病、 预防中风、 防癌作用、 预防牙齿 疾病等药效， 极高的药用价值。 0003 目

8、前国内的大规模生产的甜茶的厂家很少， 主要还是受工艺复杂和操作的困难， 以及关键生产点不好控制影响。生产出来的产品都有苦味， 颜色不够白等问题。质量未能 达到高品质。 发明内容 0004 本发明所要解决的技术问题是提供一种提取甜茶苷的新方法， 本方法能够得到纯 度大于99的甜茶苷产品， 并且产品雪白， 无苦味， 溶剂残留少， 无农药残留。 同时本方法大 大减少了生产工序， 节约生产成本， 工艺稳定性好。 0005 本发明解决上述技术问题的技术方案如下 ： 一种提取甜茶苷的新方法， 包括 ： 0006 1) 取甜茶叶干燥品， 粉碎到 10 目， 用纯水于 95浸提 2 次， 第一次加水量是甜茶

9、叶原料用量的 13 倍， 提取 2H 后分离出滤液备用， 滤渣加纯水继续浸提， 第二次加水量是甜 茶叶原料用量的 11 倍， 提取 2H 后分离出滤液， 合并两次提取的滤液， 得到总滤液 ； 0007 2) 将总滤液过膜浓缩到甜茶叶原料用量的 5 倍量得浓缩液， 膜的参数为 ： 进溶液 压力0.9Mpa,出溶液压力0.45Mpa， 冷却浓缩液到25， 用台式布袋离心进行高速和低速的 组合离心， 离心沉淀弃去， 离心液用酸调 pH 4-5， 搅拌均匀， 使 pH 值不变 ； 0008 3) 将 2) 调好 pH 值的溶液进大孔树脂柱， 流出液用 0.5 3 w/w 的 NaOH 调 pH 7，

10、尝有甜味和检测甜茶苷含量 2为进柱终点， 进液完毕后， 首先用纯水洗柱， 洗至流 出液无色， 澄清， 再用碱液洗柱， 第三用纯水洗柱， 洗至流出液 pH 7， 第四用酸液洗柱， 最 后用水洗柱， 洗至流出液 pH 7 ； 0009 4)用4倍树脂柱体积的48乙醇解吸， 流出液从有甜味和检测甜茶苷2时开始 收集， 到无甜味和检测甜茶苷 7 时为止， 得洗脱液 ； 0011 6)将洗脱液减压浓缩回收乙醇， 制成12波美度的稠膏， 加入稠膏4倍量的溶剂， 搅 拌均匀， 在 4下结晶 24H， 得晶体 ； 0012 7)将晶体用80纯水溶解到固形物30(质量分数)， 100-200目过滤后， 取滤液

11、喷雾干燥， 得到甜茶苷。 说 明 书 CN 104262425 A 3 2/4 页 4 0013 在上述技术方案的基础上， 本发明还可以做如下改进。 0014 进一步， 在 2) 中， 所述组合离心为先经 950R/min 高速离心 1H 后， 再经 450r/min 低速离心 20 分钟。 0015 进一步， 在 2) 中， 所述酸为 0.5 3 w/w 的盐酸水溶液或 0.5 3 w/w 的 硫酸水溶液。 0016 进一步， 在 3) 中， 所述大孔树脂种类是 HP-20B、 ADS-7 或 X-6 树脂 ； 0017 进一步， 在 3) 中， 所述碱液为 0.5 3 w/w 的氢氧化钠水

12、溶液或 0.5 3 w/w 的氢氧化钾水溶液， 所述碱液的用量为 3 倍树脂柱重量。 0018 进一步， 在 3) 中， 所述酸液为 0.5 3 w/w 的盐酸水溶液或 0.5 3 w/w 的硫酸水溶液， 所述酸液的用量为 3 倍树脂柱重量。 0019 进一步， 在 5) 中， 所述阴离子树脂种类是 700B 离子交换树脂或 700A 离子交换树 脂， 所述阳离子树脂种类是 732 离子交换树脂或 D204 离子交换树脂。 0020 进一步， 在 6) 中， 所述溶剂为甲醇、 乙醇、 丙酮、 乙酸乙酯中的一种， 上述溶剂均为 分析纯。 0021 本发明的有益效果是 ： 0022 本发明提供一种

13、提取甜茶苷的新方法， 本方法工艺简单， 工序好控制， 生产成本 低， 甜茶苷的回收率高， 含量高， 生产出来的甜茶苷产品雪白， 无苦味， 甜度高， 解决了企业 规模化大生产的技术难点， 填补市场在 99甜茶苷高回收率这方面的空白。 附图说明 0023 图 1 为本发明实施例 1 制得产品的 HPLC 谱图 ； 0024 图 2 为本发明实施例 2 制得产品的 HPLC 谱图 ； 0025 图 3 为本发明实施例 3 制得产品的 HPLC 谱图 ； 具体实施方式 0026 以下对本发明的原理和特征进行描述， 所举实例只用于解释本发明， 并非用于限 定本发明的范围。 0027 实施例 1 0028

14、 1) 取甜茶叶干燥品 100KG( 经 HPLC 检测甜茶苷的含量为 5.5 )， 粉碎到 10 目， 用纯水于 95浸提 2 次， 第一次加水量是甜茶叶原料用量的 1300L， 提取 2H 后分离出滤液 备用， 滤渣加纯水继续浸提， 第二次加水量是甜茶叶原料用量的 1100L， 提取 2H 后分离出滤 液， 合并两次提取的滤液， 得到总滤液 ； 0029 2) 将总滤液过膜浓缩到 500Kg， 膜的参数为 ： 进溶液压力 0.9Mpa, 出溶液压力 0.45Mpa， 倒出使浓缩液冷到 25， 用台式布袋离心进行高速和低速的组合离心， 所述组合 离心为先经 950R/min 高速离心 1H

15、后， 再经 450r/min 低速离心 20 分钟， 离心沉淀弃去， 离 心液用 0.5 w/w 的盐酸调 pH 4.1， 搅拌均匀， 使 pH 值不变 ； 0030 3) 将 2) 调好 pH 值的溶液进 300KG 大孔树脂柱 HP-20B， 流出液用 0.5 w/w 的 NaOH 调 pH 7， 尝有甜味和检测甜茶苷含量 2为进柱终点， 进液完毕后， 首先用纯水洗 柱， 洗至流出液无色， 澄清， 再用 0.5w/w氢氧化钠洗柱， 用量为 3 倍树脂柱重量， 第三用纯 说 明 书 CN 104262425 A 4 3/4 页 5 水洗柱， 洗至流出液 pH 7， 第四用 0.5w/w的盐酸

16、洗柱， 用量为 3 倍树脂柱重量， 最后用 水洗柱， 洗至流出液 pH 7 ； 0031 4) 用 1200L48乙醇解吸， 流出液从有甜味和检测甜茶苷 2时开始收集， 到无 甜味和检测甜茶苷 7 时为止， 得 900L 洗脱 液 ； 0033 6) 将洗脱液减压浓缩回收乙醇， 制成 12 波美度的稠膏， 加入稠膏 4 倍量的乙醇 ( 分析纯 )， 搅拌均匀， 在 4下结晶 24H， 得晶体 ； 0034 7) 将晶体用 80纯水溶解到固形物 30， 100 目过滤后， 滤液喷雾干燥后得 5.312KG产品， 产品的HPLC谱图见图1， 其中， 甜茶苷的纯度为99.6， 原料中甜茶苷的回收 率

17、为 96.2。 0035 实施例 2 0036 1) 取甜茶叶干燥品 200KG( 经 HPLC 检测甜茶苷的含量为 5.8 )， 粉碎到 10 目， 用纯水于 95浸提 2 次， 第一次加水量是甜茶叶原料用量的 2600L， 提取 2H 后分离出滤液 备用， 滤渣加纯水继续浸提， 第二次加水量是甜茶叶原料用量的 2200L， 提取 2H 后分离出滤 液， 合并两次提取的滤液， 得到总滤液 ； 0037 2) 将总滤液过膜浓缩到 1000L， 膜的参数为 ： 进溶液压力 0.9Mpa, 出溶液压力 0.45Mpa， 倒出使浓缩液冷到 25， 用台式布袋离心进行高速和低速的组合离心， 所述组合

18、离心为先经 950R/min 高速离心 1H 后， 再经 450r/min 低速离心 20 分钟， 离心沉淀弃去， 离 心液用 1.5 w/w 的盐酸调 pH 4.3， 搅拌均匀， 使 pH 值不变 ； 0038 3)将2)调好pH值的溶液进600KG大孔树脂柱ADS-7， 流出液用1.5w/w的NaOH 调 pH 7， 尝有甜味和检测甜茶苷含量 2为进柱终点， 进液完毕后， 首先用纯水洗柱， 洗 至流出液无色， 澄清， 再用 2.5w/w氢氧化钠洗柱， 用量为 3 倍树脂柱重量， 第三用纯水洗 柱， 洗至流出液 pH 7， 第四用 1.5w/w的盐酸洗柱， 用量为 3 倍树脂柱重量， 最后用

19、水洗 柱， 洗至流出液 pH 7 ； 0039 4) 用 2400L48乙醇解吸， 流出液从有甜味和检测甜茶苷 2时开始收集， 到无 甜味和检测甜茶苷 7 时为止， 得 1500L 洗 脱液 ； 0041 6) 将洗脱液减压浓缩回收乙醇， 制成 12 波美度的稠膏， 加入稠膏 4 倍量的丙酮 ( 分析纯 )， 搅拌均匀， 在 4下结晶 24H， 得晶体 ； 0042 7) 将晶体用 80纯水溶解到固形物 30， 200 目过滤后， 取滤液喷雾干燥后得 11.4KG 产品， 产品的 HPLC 谱图见图 2， 其中， 甜茶苷的纯度为 99.5， 原料中甜茶苷的回收 率为 97.8。 0043 实施

20、例 3 说 明 书 CN 104262425 A 5 4/4 页 6 0044 1) 取甜茶叶干燥品 200KG( 经 HPLC 检测甜茶苷的含量为 5.7 )， 粉碎到 10 目， 用纯水于 95浸提 2 次， 第一次加水量是甜茶叶原料用量的 2600L， 提取 2H 后分离出滤液 备用， 滤渣加纯水继续浸提， 第二次加水量是甜茶叶原料用量的 2200L， 提取 2H 后分离出滤 液， 合并两次提取的滤液， 得到总滤液 ； 0045 2) 将总滤液过膜浓缩到 1000L， 膜的参数为 ： 进溶液压力 0.9Mpa, 出溶液压力 0.45Mpa， 倒出使浓缩液冷到 25， 用台式布袋离心进行高

21、速和低速的组合离心， 所述组合 离心为先经 950R/min 高速离心 1H 后， 再经 450r/min 低速离心 20 分钟， 离心沉淀弃去， 离 心液用 2.5 w/w 的盐酸调 pH 4， 搅拌均匀， 使 pH 值不变 ； 0046 3) 将 2) 调好 pH 值的溶液进 600KG 大孔树脂柱 X-6， 流出液用 2.5 w/w 的 NaOH 调 pH 7， 尝有甜味和检测甜茶苷含量 2为进柱终点， 进液完毕后， 首先用纯水洗柱， 洗 至流出液无色， 澄清， 再用 3w/w氢氧化钠洗柱， 用量为 3 倍树脂柱重量， 第三用纯水洗柱， 洗至流出液 pH 7， 第四用 3w/w的盐酸洗柱

22、， 用量为 3 倍树脂柱重量， 最后用水洗柱， 洗 至流出液 pH 7 ； 0047 4) 用 2400L48乙醇解吸， 流出液从有甜味和检测甜茶苷 2时开始收集， 到无 甜味和检测甜茶苷 7 时为止， 得 1550L 洗 脱液 ； 0049 6) 将洗脱液减压浓缩回收乙醇， 制成 12 波美度的稠膏， 加入稠膏 4 倍量的乙酸乙 酯 ( 分析纯 )， 搅拌均匀， 在 4下结晶 24H， 得晶体 ； 0050 7) 将晶体用 80纯水溶解到固形物 30， 100 目过滤后， 滤液喷雾干燥后得 11.1KG 产品， 产品的 HPLC 谱图见图 3， 其中， 甜茶苷的纯度为 99.8， 原料中甜茶苷的回收 率为 97.2。 0051 以上所述仅为本发明的较佳实施例， 并不用以限制本发明， 凡在本发明的精神和 原则之内， 所作的任何修改、 等同替换、 改进等， 均应包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 CN 104262425 A 6 1/1 页 7 图 1 图 2 图 3 说 明 书 附 图 CN 104262425 A 7