用苯达莫司汀和抗CD20抗体的组合治疗癌症.pdf

1、10申请公布号CN102355907A43申请公布日20120215CN102355907ACN102355907A21申请号201080012323222申请日2010011561/145,21020090116USA61K39/00200601A61K39/39520060171申请人葛兰素史密斯克莱有限责任公司地址美国宾夕法尼亚州72发明人CT托马斯G钱74专利代理机构北京市柳沈律师事务所11105代理人闵丹54发明名称用苯达莫司汀和抗CD20抗体的组合治疗癌症57摘要本发明基本涉及苯达莫司汀与抗CD20抗体组合治疗癌症的用途。所述组合可以各别地、顺序地和/或同时地施用。还公开了药物组合

2、物和药物。30优先权数据85PCT申请进入国家阶段日2011091686PCT申请的申请数据PCT/US2010/0211232010011587PCT申请的公布数据WO2010/083365EN2010072251INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书18页序列表4页附图3页CN102355917A1/2页21治疗或预防患者中癌症的方法，所述方法包括给予患者苯达莫司汀和抗CD20抗体的步骤。2权利要求1所述的方法，其中所述癌症是淋巴瘤。3权利要求1所述的方法，其中所述癌症是表达CD20的肿瘤类型，选自前体B或T细胞肿瘤、成熟B细胞肿瘤、霍奇金淋巴瘤或者

3、免疫缺陷相关的淋巴增生性失调。4权利要求1所述的方法，其中所述癌症是利妥昔单抗耐受的惰性非霍奇金淋巴瘤。5权利要求4所述的方法，其中所述惰性非霍奇金淋巴瘤是滤泡性淋巴瘤6权利要求1所述的方法，其中所述癌症选自NHL非霍奇金淋巴瘤、B细胞淋巴母细胞白血病/淋巴瘤、成熟B细胞肿瘤、B细胞慢性淋巴细胞白血病CLL、小淋巴细胞性淋巴瘤SLL、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤MCL、包括低度、中度和高度恶性FL的滤泡性淋巴瘤FL、皮肤滤泡中心淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤MALT型、节结型和脾型、毛细胞白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、浆细胞瘤、浆细胞骨髓瘤、移植后淋巴增殖

4、性疾病、沃登斯通巨球蛋白血症、间变性大细胞淋巴瘤ALCL、T细胞非霍奇金淋巴瘤和黑素瘤。7权利要求36所述的方法，其中苯达莫司汀和抗CD20的给予是同时进行的。8权利要求1所述的方法，其中苯达莫司汀和抗CD20抗体的给予是顺序进行的，其中首先给予苯达莫司汀。9权利要求1所述的方法，其中苯达莫司汀和抗CD20抗体的给予是顺序进行的，其中首先给予所述抗体。10权利要求1所述的方法，其中苯达莫司汀和抗CD20抗体的给予是交错进行的。11权利要求36所述的方法，其中所述抗CD20抗体是OFATUMUMAB。12权利要求11所述的方法，其中OFATUMUMAB经IV给药，第1轮中，第1天300MG，第8

5、天1000MG；之后在第2到第6轮中，第1天1000MG；苯达莫司汀在第1到第6轮，每28天的第1和第2天给予90MG/M2每轮是每28天。13权利要求12所述的方法，其中结束6轮后，进一步每2个月给予OFATUMUMAB1000MG，给2年。14权利要求12所述的方法，其中结束6轮后，进一步每2个月给予OFATUMUMAB2000MG。15权利要求12所述的方法，其中结束6轮后，进一步每2个月给予OFATUMUMAB500MG。16权利要求12所述的方法，其中结束6轮后，进一步每个月或者每3个月给予OFATUMUMAB500MG、1000MG或2000MG。17权利要求12所述的方法，其中结

6、束6轮后，进一步每2个月给予OFATUMUMAB3002000MG，给两年。18权利要求36所述的方法，其中OFATUMUAMB和苯达莫司汀是IV给药。19包含苯达莫司汀和抗CD20抗体的药物组合物，其中该组合适合分别、顺序和/或同时给药。20权利要求19所述的药物组合物，其中所述抗CD20抗体是OFATUMUMAB。21抗CD20抗体在制备治疗癌症的药物中的用途，其中所述药物用于与苯达莫司汀在权利要求书CN102355907ACN102355917A2/2页3组合疗法中一起给药。22权利要求21所述的用途，其中所述用途包括权利要求2到18中任一项或多项的特性。23抗CD20抗体用于与苯达莫司

7、汀组合治疗癌症。24抗CD20抗体的根据权利要求23的用途，其中所述用途包含权利要求2到18中任一项或多项的特性。权利要求书CN102355907ACN102355917A1/18页4用苯达莫司汀和抗CD20抗体的组合治疗癌症0001相关申请的交叉引用0002本申请要求2009年1月16日提交的美国专利申请序列号61/145210的优先权，该申请通过引用全文并入本文。发明领域0003本发明涉及苯达莫司汀BENDAMUSTINE与抗CD20抗体的组合在治疗癌症中的用途。0004发明背景0005惰性非霍奇金淋巴瘤INDOLENTNONHODGKINSLYMPHOMAS，IL是缓慢生长形式的淋巴瘤。

8、其涵盖工作方案WORKINGFORMULATION中被称为低度和某些中度恶性类别的NHL。如果患者未能在非常早期和低度疾病时被治愈，治疗目的在于缓解。FL在美国和欧洲是第二常见的淋巴瘤，占所有非霍奇金淋巴瘤NHL的11到35WHO2001。滤泡性淋巴瘤FL属于惰性淋巴瘤组，是成熟周边B细胞肿瘤的亚组WHO2001。它被定义为生发中心B细胞中心细胞和中心母细胞淋巴瘤，其具有至少部分的滤泡模式。0006虽然用基于利妥昔单抗RITUXIMAB的疗法可以很好地治疗惰性淋巴瘤，但那些对利妥昔单抗变得耐受的淋巴瘤则选择有限。苯达莫司汀是一种合成氮芥化合物，表现出对耐利妥昔单抗的惰性淋巴瘤的治疗活性并且在耐

9、其他烷基化剂ALKYLATORS的受试对象中显示出活性。但是，在耐受这些早期疗法的受试对象中尤其需要替代的疗法。0007近来有许多关于新一代抗CD20抗体的报道。其中一种这类新抗体是OFATUMUMAB。OFATUMUMAB是新一代人单克隆抗体，其靶向B细胞表面CD20分子的独特膜近侧小的环形表位特异结合位点。这一靶向导致出色地诱导出肿瘤细胞经CDC补体依赖型细胞毒活性被裂解，特别是在具有低CD20密度的细胞中，正如CLL的情况中，与使用利妥昔单抗观察到的肿瘤细胞裂解能力相比，具有类似的ADCC抗体依赖性细胞介导的细胞毒活性。在WO2004/035607中被描述为2F2抗体的OFATUMUMA

10、B正在用于治疗非霍奇金淋巴瘤NHL、慢性淋巴细胞白血病CLL和类风湿性关节炎的临床开发阶段RA。还可参见TEELINGETAL，BLOOD，104，PP17932004；和TEELINGETAL，JIMMUNOLOGY，177，PP3623712007。0008发明概述0009在一个实施方案中，本发明涉及治疗任何表达CD20的癌症肿瘤的方法，所述癌症包括人患者中的前体B和T细胞肿瘤、成熟B细胞肿瘤、霍奇金淋巴瘤以及免疫缺陷相关的淋巴增生性失调，方法包括将抗CD20抗体与苯达莫司汀组合给予患者的步骤。在一个实施方案中，给药是同时进行的。在另一个实施方案中，给药是顺序进行的，其中首先给予苯达莫司汀

11、。再一个实施方案中首先给予抗CD20抗体。还有一个实施方案中，给予抗CD20抗体和苯达莫司汀是交错进行的。0010在一个实施方案中，发明涉及治疗人患者中耐利妥昔单抗的惰性非霍奇金淋巴瘤包括FL滤泡性淋巴瘤的方法，方法包括将抗CD20抗体与苯达莫司汀组合给予患者的说明书CN102355907ACN102355917A2/18页5步骤。在一个实施方案中，给药是同时进行的。在另一个实施方案中，给药是顺序进行的，其中首先给予苯达莫司汀。再一个实施方案中首先给予抗CD20抗体。还有一个实施方案中，给予抗CD20抗体和苯达莫司汀是交错进行的。0011在一个实施方案中，发明涉及包含苯达莫司汀和抗CD20抗体

12、的药物组合物，其中组合适合单独、顺序和/或同时给药。0012在一个实施方案中，抗CD20抗体是分离的人抗CD20抗体，该抗体结合CD20上的一个表位，它不包含或者需要位点172上的氨基酸残基脯氨酸，但是包含或者需要位点163上的氨基酸残基天冬氨酸和位点166的天冬氨酸。可以在WO2004/035607中找到这类抗体的实例。0013在另一个实施方案中，抗CD20抗体是OFATUMUAMB。0014在一个实施方案中，发明涉及抗CD20抗体，特别是OFATUMUMAB在制备治疗癌症特别是耐利妥昔单抗的惰性非霍奇金淋巴瘤的药物中的用途，其中所述药物是用于在和苯达莫司汀的联合治疗中给予。0015在一个实

13、施方案中，发明涉及用于与苯达莫司汀组合治疗癌症特别是耐利妥昔单抗的惰性非霍奇金淋巴瘤的抗CD20抗体特别是OFATUMUAMB。0016附图简述0017图1描述了OFATUMUMAB/苯达莫司汀给药的一个非限制性实例。0018图2描述了CD20在JVM3细胞上的中等水平表达谱。第一个峰MAB对照；第二个峰BDBIOSCIENCE抗CD20抗体克隆2H7；第三个峰瑞图宣RITUXAN；第四个峰OFATUMUMAB。0019图3描述了亚适量的OFATUMUMAB/苯达莫司汀组合的优势OFATUMUMAB2MG/KG苯达莫司汀50MG/KG；N6/组0020图4描述了JVM3CLL模型中的OFATU

14、MUMAB和苯达莫司汀TREANDA组合皮下，24天；N6/组0021发明详述0022滤泡性淋巴瘤治疗策略致力于建立最大程度的疾病控制和延长寿命。已经超越早期阶段和组织学低度恶性的晚期疾病仍是不可治愈的。在实现有效治疗而没有毒性之间存在着平衡。因此，仍需要副作用有限的有效疗法用于治疗多数FL受试对象，特别是那些对烷化剂、嘌呤类似物和利妥昔单抗变得耐受的受试对象。OFATUMUMAB在利妥昔单抗抗性受试对象中显示了活性HAGENBEEK，ETALBLOOD2008；11154865495，而苯达莫司汀在烷化剂和嘌呤类似物抗性受试对象中表现出活性ETAL，ANNONCOL2000；11729734

15、；SOLALCELIGNYETAL，BLOOD2004；10412581265；HEIDERETAL，ANTICANCERDRUGS2001；12725729；BREMERK，JCANCERRESCLINONCOL2002；128603609；FRIEDBERGETAL，JCLINONCOL2008；26204210。OFATUMUMAB和苯达莫司汀的联用给对其他治疗模式已经耐受的受试对象提供了效力与低毒性的结合。0023本发明涉及治疗人患者中利妥昔单抗耐受的惰性非霍奇金淋巴瘤，包括FL滤泡性淋巴瘤的方法，所述方法包括将抗CD20抗体与苯达莫司汀组合给予患者的步骤。在一个实施方案中，给药是同时

16、进行的。在另一个实施方案中，给药是顺序进行的，其中首先给予苯达莫司汀。再一个实施方案中首先给予抗CD20抗体。还有一个实施方案中，给予抗说明书CN102355907ACN102355917A3/18页6CD20抗体和苯达莫司汀是交错进行的。0024本发明还涉及治疗人患者中表达CD20的肿瘤类型的方法，所述方法包括将抗CD20抗体与苯达莫司汀组合给予患者的步骤。在一个实施方案中，给药是同时进行的。在另一个实施方案中，给药是顺序进行的，其中首先给予苯达莫司汀。再一个实施方案中首先给予抗CD20抗体。还有一个实施方案中，给予抗CD20抗体和苯达莫司汀是交错进行的。表达CD20的肿瘤类型的实例包括选自

17、前体B或T细胞肿瘤、成熟B细胞肿瘤、霍奇金淋巴瘤或者免疫缺陷相关的淋巴增生性失调的肿瘤。0025实施例1中示范了苯达莫司汀和OFATUMUAMB的非限制性用药方式。0026本发明还涉及癌症的治疗方法，所述方法包括将OFATUMUAMB和苯达莫司汀给予人患者的步骤，所述癌症选自NHLNONHODGKINSLYMPHOMA，非霍奇金淋巴瘤、B细胞淋巴母细胞白血病/淋巴瘤BCELLLYMPHOBLASTICLEUKEMIA/LYMPHOMA、成熟B细胞肿瘤MATUREBCELLNEOPLASMS、B细胞慢性淋巴细胞白血病BCELLCHRONICLYMHOCYTICLEUKEMIA，CLL、小淋巴细胞

18、性淋巴瘤SMALLLYMPHOCYTICLYMPHOMA，SLL、B细胞幼淋巴细胞白血病BCELLPROLYMPHOCYTICLEUKEMIA、淋巴浆细胞淋巴瘤LYMPHOPLASMACYTICLYMPHOMA、套细胞淋巴瘤MANTLECELLLYMPHOMA，MCL、滤泡性淋巴瘤FOLLICULARLYMPHOMA，FL包括低度、中度和高度恶性FL、皮肤滤泡中心淋巴瘤CUTANEOUSFOLLICLECENTERLYMPHOMA、边缘区B细胞淋巴瘤MARGINALZONEBCELLLYMPHOMAMALT型、节结型和脾型、毛细胞白血病HAIRYCELLLEUKEMIA、弥漫性大B细胞淋巴瘤D

19、IFFUSELARGEBCELLLYMPHOMA、伯基特氏淋巴瘤BURKITTSLYMPHOMA、浆细胞瘤PLASMACYTOMA、浆细胞骨髓瘤PLASMACELLMYELOMA、移植后淋巴增殖性疾病POSTTRANSPLANTLYMPHOPROLIFERATIVEDISORDER、沃登斯通巨球蛋白血症WALDENSTROMSMACROGLOBULINEMIA、间变性大细胞淋巴瘤ANAPLASTICLARGECELLLYMPHOMA，ALCL、T细胞非霍奇金淋巴瘤和黑素瘤。在一个实施方案中，给药是同时进行的。在另一个实施方案中，给药是顺序进行的，其中首先给予苯达莫司汀。再一个实施方案中首先给予

20、抗CD20抗体。还有一个实施方案中，给予抗CD20抗体和苯达莫司汀是交错进行的。0027利妥昔单抗R耐受性惰性淋巴瘤RITUXIMABREFRACTORYINDOLENTLYMPHOMA定义如下。所述淋巴瘤对作为单药治疗给予的或者与任何化疗组合给予的利妥昔单抗耐受，或者对利妥昔单抗加化疗之后作为维持治疗给予的利妥昔单抗耐受。淋巴瘤是耐受的，如果00281对作为单药疗法或者与任何化疗组合的利妥昔单抗没有至少部分反应PR；或者00292使用利妥昔单抗作为单药治疗给予的或者与任何化疗组合给予的，或者在R化疗之后的利妥昔单抗维持治疗期间的同时疾病仍在发展；或者00303在最后一剂利妥昔单抗作为单药治疗

21、给予的或者与任何化疗组合给予的，或者在R化疗之后利妥昔单抗维持治疗方案后6个月之内，疾病又有进展。0031在发明的一个实施方案中，抗CD20抗体是单克隆抗体。0032在一个实施方案中，抗CD20抗体具有FC介导的效应子功能。0033在一个实施方案中，抗CD20抗体具有抗体依赖性细胞介导的细胞毒ADCC效应说明书CN102355907ACN102355917A4/18页7子功能。0034在一个实施方案中，抗CD20抗体具有补体依赖性细胞毒CDC效应子功能。0035在发明的一个实施方案中，抗CD20抗体是嵌合的、人源化的或者人单克隆抗体。0036在一个实施方案中，抗CD20的单克隆抗体抗CD20抗

22、体是选自下述的全长抗体全长IGG1抗体、全长IGG2抗体、全长IGG3抗体、全长IGG4抗体、全长IGM抗体、全长IGA1抗体、全长IGA2抗体、全长分泌型IGA抗体、全长IGD抗体和全长IGE抗体，其中所述抗体在真核细胞中被糖基化。0037在一个实施方案中，抗CD20抗体是全长抗体，比如全长IGG1抗体。0038在一个实施方案中，抗CD20抗体是抗体片段，比如SCFV或UNIBODYTMWO2007/059782中公开的单价抗体。在发明的一个实施方案中，针对CD20的抗体抗CD20抗体是结合结构域免疫球蛋白融合蛋白，其包含I结合结构域多肽，处于SEQIDNO1的重链可变区形式或者SEQIDN

23、O2对轻链可变区形式，该多肽与免疫球蛋白铰链区多肽融合，II与铰链区融合的免疫球蛋白重链CH2恒定区，以及III与CH2恒定区融合的免疫球蛋白重链CH3恒定区。0039在一个实施方案中，抗CD20抗体与突变体P172SCD20位点172的脯氨酸被突变为丝氨酸结合的亲和力至少与和人CD20结合的亲和力相同。0040在发明的一个实施方案中，抗CD20抗体与CD20上的表位结合，所述表位0041I不包含或者不需要位点172的氨基酸残基脯氨酸；0042II不包含或者不需要位点170的丙氨酸或者位点172的脯氨酸；0043III不包含或者不需要位点163的氨基酸残基天冬氨酸和位点166的天冬氨酸；004

24、4IV不包含或者不需要位点172的氨基酸残基脯氨酸，但是包含或者需要位点163的氨基酸残基天冬氨酸和位点166的天冬氨酸；或者0045V不包含或者不需要位点170的氨基酸残基丙氨酸或位点172的脯氨酸，但是包含或者需要位点163的天冬氨酸和位点166的天冬氨酸这些氨基酸残基。0046在一个实施方案中，抗CD20抗体结合位于人CD20的第一个小胞外环中的表位。0047在一个实施方案中，抗CD20抗体结合CD20上的不连续表位。0048在一个实施方案中，抗CD20抗体结合CD20上的不连续表位，其中所述表位包含第一个小胞外环的一部分和第二个胞外环的一部分。0049在一个实施方案中，抗CD20抗体结

25、合CD20上的不连续表位，其中所述表位含有第一个小胞外环的AGIYAP残基和第二个胞外环的MESLNFIRAHTPYI残基。0050在一个实施方案中，抗CD20抗体具有选自下述的一或多个特征0051I能够在有补体的情况下，诱导表达CD20的细胞的补体依赖性细胞毒CDC；0052II能够在有补体的情况下，诱导表达CD20和高水平CD55和/或CD59的细胞的补体依赖性细胞毒CDC；0053III能够诱导表达CD20的细胞的细胞凋亡；0054IV能够在有效应细胞的情况下，诱导表达CD20的细胞的抗体依赖性细胞毒ADCC；0055V能够诱导表达CD20的细胞的同型粘附；说明书CN102355907A

26、CN102355917A5/18页80056VI能够在结合CD20后迁移到脂膜筏LIPIDRAFTS；0057VII能够消除表达CD20的细胞；0058VIII能够消除表达低水平CD20的细胞低CD20细胞；以及0059IX能够在人组织中有效地原位消除B细胞。0060在发明的一个实施方案中，抗CD20抗体包含选自SEQIDNOS5、9或11的VHCDR3序列。0061在一个实施方案中，抗CD20抗体包含SEQIDNO3的VHCDR1、SEQIDNO4的VHCDR2、SEQIDNO5的VHCDR3、SEQIDNO6的VLCDR1、SEQIDNO7的VLCDR2和SEQIDNO8的VLCDR3序列

27、。0062在发明的一个实施方案中，抗CD20抗体包含SEQIDNO10的VHCDR1CDR3跨越序列。0063在发明的一个实施方案中，抗CD20抗体含有人重链和人轻链可变区，所述可变区包含分别如SEQIDNO1和SEQIDNO2所示的氨基酸序列；或者包含分别与SEQIDNO1和SEQIDNO2所示的氨基酸序列有至少95同一性，更优选至少98，或者至少99同一性的氨基酸序列。0064在发明的一个实施方案中，抗CD20抗体选自WO2004/035607中公开的抗CD20抗体之一，比如OFATUMUMAB2F2、11B8或7D8；WO2005/103081中公开的抗体之一，比如2C6；WO2004/

28、103404中公开的抗体之一，AME133由APPLIEDMOLECULAREVOLUTION开发的人源化和优化抗CD20单克隆抗体；US2003/0118592中公开的抗体之一，TRU015CYTOXB20G，由TRUBIONPHARMACEUTICALSINC开发的来源于抗CD20抗体上的关键结构域的小分子IMMUNOPHARMACEUTICAL融合蛋白；WO2003/68821中公开的抗体之一IMMU106人源化抗CD20单克隆抗体；WO2004/56312中公开的抗体之一，OCRELIZUMAB2H7V16，PRO70769，R1594、TOSITUMOMAB和利妥昔单抗。名词“CD2

29、0”和“CD20抗原”在文中可互换使用，包括由细胞天然表达的或者转染了CD20基因的细胞上表达的人CD20的任何变体、同种型和物种同源物。本领域认可的CD20的同义词包括B淋巴细胞表面抗原B1、LEU16和BP35。人CD20的UNIPROTKB/SWISSPROT登记号为P11836。0065用于本文，名词“免疫球蛋白”是指一类结构相关的糖蛋白，其由两对多肽链构成，即一对低分子量轻L链和一对重H链，这四条链通过二硫键相连。免疫球蛋白的结构已研究清楚。参见例如FUNDAMENTALIMMUNOLOGYCH7PAUL，W，ED，2NDEDRAVENPRESS，NY1989。简单来说，每个重链通常

30、由重链可变区文中缩写为VH和重链恒定区。重链恒定区CH一般由三个结构域构成，CH1、CH2和CH3。每个轻链通常由轻链可变区文中缩写为VL和轻链恒定区构成。轻链恒定区一般由一个结构域CL构成。VH和VL区可以进一步分成高度可变的区域或者结构明确的环的序列和/或形式高度可变的区域，又称为补体决定区CDRS，散布于被称为框架区FR的更保守区域中。0066每个VH和VL通常由三个CDRS和四个FRS构成，从氨基端到羧基端以如下顺序排列FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4还可参见CHOTHIAANDLESKJMOLBIOL196，9019171987。通常，这个区域的氨基酸残基

31、的编号按照KABATETAL，SEQUENCESOFPROTEINSOFIMMUNOLOGICALINTEREST，5THEDPUBLICHEALTHSERVICE，NATIONAL说明书CN102355907ACN102355917A6/18页9INSTITUTESOFHEALTH，BETHESDA，MD1991中描述的方法进行文中诸如“KABAT中或者根据KABAT的可变结构域残基编号”的短语是指用于重链可变结构域或轻链可变结构域的该编号系统。采用这种编号系统，肽的实际线性氨基酸序列可能含有减少的或者增加了的氨基酸，对应着缩短了的或者含有插入的可变结构域FR或CDR。例如，重链可变结构域可

32、能包含在VHCDR2残基52后面的单个氨基酸插入例如，根据KABAT，残基52A，和重链FR残基82后面的插入残基例如，根据KABAT，残基82A、82B和82C等。特定抗体的残基KABAT编号可以通过将抗体序列的同源区域与“标准”的KABAT编号序列进行比对来确定。0067用于本文，名词“抗体”是指这样的免疫球蛋白分子，免疫球蛋白分子片段或者它们中之一的衍生物，其具有在典型的生理条件下与抗原特异结合相当一段时间的能力，比如结合至少大约30分钟、至少大约45分钟、至少大约一小时、至少大约两小时、至少大约四小时、至少大约8小时、至少大约12小时、大约24小时或更长、大约3、4、5、6、7或更多天

33、等，或者其他有关的功能限定的时期比如足够诱发、促进、加强和/或调整与抗体结合抗原关联的生理反应的时间，和/或足够抗体召集FC介导的效应子活性的时间。0068免疫球蛋白分子重链和轻链可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可能介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞比如效应细胞和补体系统的成分比如补体活化经典途径中的第一个成分C1Q。0069抗CD20抗体可以是单、双或多特异性的。的确，本发明提供的双特异性抗体、二体等可以在部分CD20之外，结合任何合适的靶分子。0070正如上文指出的，除非另有说明或者上下文清楚地与之抵触，用于本文的名词“抗体”包括通过任何已知技术

34、提供的保留了与抗原特异结合能力的抗体片段，所述技术是比如酶解、肽合成和重组技术。已证实抗体的抗原结合功能可能由全长完整抗体的片段来实现。涵盖在名词“抗体”中的抗原结合片段的例子包括，但不限于IFAB片段，由VL、VH、CL和CH1结构域构成的单价片段；IIFAB2和FAB2片段、包含由铰链区二硫键连接的两个FAB片段的二价片段；III基本由VH和CH1结构域构成的FD片段；IV基本由抗体单个臂的VL和VH结构域构成的FV片段；VDAB片段WARDETAL，NATURE341，5445461989，其基本由VH结构域构成，又称为结构域抗体HOLTETALNOVEMBER2003TRENDSBIO

35、TECHNOL211148490；VICAMELID抗体或纳米抗体REVETSETALJANUARY2005EXPERTOPINBIOLTHER5111124；VII分离的互补决定区CDR，比如VHCDR3，VIIIUNIBODYTM，WO2007/059782中公开的单价抗体；IX单链抗体或单链FVSCFV，参见例如BIRDETAL，SCIENCE242，4234261988和HUSTONETAL，PNASUSA85，587958831988；X二体SCFV二聚体，可以是单特异性或双特异性的关于二体的描述参见例如PNASUSA9014，644464481993、EP404097或WO93/1

36、1161、三体或四体。虽然这些片段通常包含在抗体的定义中，它们全部并且每个单独地是本发明的独特特性，表现出不同的生物属性和用途。这些和其他对于本发明有用的抗体片段在文中有进一步讨论。0071应当明白，名词抗体通常包括单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是人的、人源化的、嵌合的、小鼠的等。所生产的抗体可以具备任何同种型。0072用于本文，名词“人抗体”意图包括含有来自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本发明的人抗体可以包括不是人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基例说明书CN102355907ACN102355917A7/18页10如，通过在体外或体内体细胞突变，随机或定点突变引入的突变。但

37、是，用于本文的名词“人抗体”不包括这样的抗体，这些抗体中来源于另一个哺乳动物物种比如小鼠种系的CDR序列被移植到了人框架序列上。0073用于本文，人抗体如果是利用人免疫球蛋白序列从某系统中获得的，例如通过给携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠免疫接种或者通过筛选人免疫球蛋白文库，并且其中选中的人抗体与种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列有至少95、比如至少95、例如至少96、比如至少97、例如至少98，或者比如至少99的氨基酸序列同一性，则抗体是“来源于”特定种系序列。一般来说，来源于特定人种系序列的人抗体会表现出不超过10个氨基酸的不同，比如与种系免疫球蛋白基因所编码的氨基酸序列有不超过5个，例如

38、不超过4、3、2、或1个氨基酸不同。对于VH抗体序列，VHCDR3结构域不包括在这种比较中。0074名词“嵌合抗体”是指这样的抗体，所述抗体含有一或多个区域来自一个抗体，还有一或多个区域来自一或多个其他抗体。名词“嵌合抗体”包括单价、二价或多价抗体。单价嵌合抗体是由嵌合H链与嵌合L链通过二硫键关联起来形成的二聚体HL。二价嵌合抗体是由两个HL二聚体通过至少一个二硫键桥关联起来的四聚体H2L2。多价嵌合抗体的制备还可以通过例如采用组装到具有2结合位点的分子例如来自IGMH链或链中的CH区。一般来说，嵌合抗体是指这样的抗体，所述抗体中重链和/或轻链的一部分与来源于特定物种的或者属于特定抗体类型或亚

39、型的抗体中的相应序列是相同或者同源的，而链的其他部分与来源于其他物种的或者属于另一个抗体类型或亚型的抗体中的相应序列是相同或者同源的，嵌合抗体还包括所述抗体的片段，只要它们表现出所需的生物活性参见例如US4,816,567和MORRISONETAL，PNASUSA81，685168551984。嵌合抗体是通过本领域已知的重组过程产生的参见例如CABILLYETAL，PNASUSA81，327332771984、MORRISONETAL，PNASUSA81，685168551984、BOULIANNEETAL，NATURE312，6436461984、EP125023、NEUBERGERETAL

40、，NATURE314，2682701985、EP171496、EP173494、WO86/01533、EP184187、SAHAGANETAL，JIMMUNOL137，106610741986、WO87/02671、LIUETAL，PNASUSA84，343934431987、SUNETAL，PNASUSA84，2142181987、BETTERETAL，SCIENCE240，104110431988和HARLOWETAL，ANTIBODIESALABORATORYMANUAL，COLDSPRINGHARBORLABORATORYPRESS，COLDSPRINGHARBOR，NY，1988。0

41、075名词“人源化抗体”是指含有最少来源于非人抗体的序列的人抗体。一般来说，人源化抗体是这样的人免疫球蛋白受体抗体，其中来自受体高变区的残基被来自非人物种供体抗体，比如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类具有所需特异性、亲和力和容量的高可变区残基所替代。0076此外，人源化抗体可能包含受体抗体或者供体抗体中没有的残基。进行这些改动是为了进一步优化抗体的性能。通常，人源化抗体包含至少一个，一般是两个可变结构域的基本全部，其中与非人免疫球蛋白对应的全部或基本全部高变环以及全部或基本全部FR区都是人免疫球蛋白序列。人源化抗体任选还包含人免疫球蛋白恒定区的至少一部分。更多细节参见JONESETAL，NATURE

42、321，5225251986、RIECHMANNETAL，NATURE332，3233291988和PRESTA，CURROPSTRUCTBIOL2，5935961992。0077名词“患者”指人患者。说明书CN102355907ACN102355917A8/18页110078用于本文，名词“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指单分子组合物的抗体分子制品。单克隆抗体组合物表现出对特定表位的单一结合特异性和亲和力。相应地，名词“人单克隆抗体”是指表现出单一结合特异性的含有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。可以由包含从转基因或转染色体非人动物比如转基因小鼠获得的B细胞的杂交瘤来产

43、生人单克隆抗体，所述含有包含人重链转基因和轻链转基因的基因组的B细胞与永生细胞融合。0079用于本文，名词“重组人抗体”包括所有通过重组手段制备、表达、形成或分离的人抗体，比如A抗体，所述抗体分离自人免疫球蛋白基因的转基因或转染色体动物比如小鼠或由此制备的杂交瘤文中其他地方有进一步描述，B抗体，所述抗体分离自被转化用于表达抗体的宿主细胞，比如分离自转染瘤，C抗体，所述抗体分离自重组、组合人抗体文库，和D抗体，所述抗体通过任何其他涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列上的手段制备、表达、形成或分离。这些重组人抗体含有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。但是在某些实施方案中，这些重

44、组人抗体可能接受体外突变或者，在使用人IG序列的转基因动物时，接受体内体细胞突变，因此重组抗体的VH和VL区氨基酸序列，虽然是来源于并且与人种系VH和VL序列有关，但可能并不天然存在于人体内抗体种系库。0080名词“转基因的非人动物”是指这样的非人动物，所述动物的基因组包含一或多个人重链和/或轻链转基因或转染色体整合或者没有整合到动物的天然基因组DNA中并且能够充分地表达人抗体。例如，转基因小鼠可以含有人轻链转基因和人重链转基因或者人重链转染色体，这样小鼠在被免疫接种CD20抗原和/或表达CD20的细胞时会产生人抗CD20抗体。人重链转基因可以整合到小鼠的染色体DNA中，象转基因小鼠的情况中，

45、例如比如HCO7或HCO12小鼠；或者人重链转基因可以维持在染色体外，象WO02/43478中描述的转染色体的情况。这类转基因和转染色体小鼠文中统称为“转基因小鼠”能够通过VDJ重组和同种型转换对给定抗原产生多种同种型的人单克隆抗体比如IGG、IGA、IGM、IGD和/或IGE。转基因非人动物还可以用于通过引入编码特定抗体的基因来产生抗特定抗原的该抗体，例如通过将所述基因与在动物乳汁中表达的基因可操纵地连接。0081对于氨基酸多肽序列而言，名词“同一性”或“同源性”表明在有合适的插入和缺失的情况下，最佳对位排列和比较时两个氨基酸序列之间的一致程度。两个序列之间的同一性百分比是所述序列共用的相同

46、位点数目的函数即同一性相同位点数/位点总数乘以100，并考虑到两序列最佳比对所需要引入的空位数量、每个空位的长度。序列的比较以及确定两个序列之间同一性百分比可以如下所述利用数学算法来实现。0082两个多肽序列之间的同一性百分比可以利用GCG软件包中的GAP程序，使用NWSGAPDNACMP矩阵和40、50、60、70或80的空位权重以及1、2、3、4、5或6的长度权重来确定。两个氨基酸序列之间的同一性百分比还可以利用已被合并到ALIGN程序20版本中的EMEYERS和WMILLERCOMPUTAPPLBIOSCI，411171988的算法，使用PAM120残基权重表、空位长度罚分12和空位罚分

47、4来确定。此外，两个氨基酸序列之间的同一性百分比可以利用已合并到GCG软件包中GAP程序里的NEEDLEMAN和WUNSCHJMOLBIOL484444531970的算法，使用BLOSSUM62矩阵或PAM250矩阵，16、14、12、10、8、6或4的空说明书CN102355907ACN102355917A9/18页12位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重来确定。0083举例来说，多肽序列可能与多肽参照序列例如SEQIDNO1相同，即100同一性；或者可能与参照序列相比，包含最多某整数个氨基酸改变，这样同一性则低于100，比如至少50、60、70、75、80、85、90、95、98或99

48、同一性。这类改变选自至少一个氨基酸缺失、取代包括保守和非保守性取代或者插入，其中所述改变可以发生在参照多肽序列的氨基或者羧基端，或者末端位点之间的任何地方，是各自分散在参照序列中的氨基酸之间或者以一或多个连续群分散在参照序列中。对于给定同一性的氨基酸改变数目是通过将多肽参照序列例如SEQIDNO1所编码的多肽序列中的氨基酸总数乘以分别的百分比同一性除以100的百分数，然后从文中描述的多肽参照序列例如SEQIDNO1中的所述氨基酸总数中减去该乘积，或者0084NAXAXAY，0085其中NA是氨基酸改变的数目；XA是SEQIDNO1所编码的多肽序列中氨基酸的总数；Y对50是050，对60是060

49、，对70是070，对75是075，对80是080，对85是085，对90是090，对95是095，对98是098，对99是099，或者对100是100；代表乘号，其中XA和Y的任何非整数乘积在从XA中减去之前，下舍入最近的整数。0086本发明还提供了包含苯达莫司汀的药物组合物制剂。这种组合物包含治疗有效量的苯达莫司汀，还可能包含药物可接受载体、稀释剂或赋形剂。所述药物载体可以是无菌液体，比如水和油，包括石油、动物、蔬菜或合成来源的油，比如花生油、豆油、矿物油、芝麻油等。当药物组合物是静脉内给予时，可以使用水作为载体。盐溶液以及右旋糖和甘油水溶液也可以作为例如注射液的液体载体。合适的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。如果需要，组合物还可以含有少量的润湿剂或乳化剂，或者PH缓冲剂。这些组合物可以采取溶液、悬浮液、乳液、片剂、丸剂、胶囊、粉剂、缓释制剂等的形式。组合物可以用传统的粘合剂和载体比如甘油三酯配制成锭剂。口服制剂可以包含标准载体，比如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。合适的药物载体的例子在EWMARTIN的REMINGTONSPHARMACEUTIC