双特异性抗HER抗体.pdf

1、10申请公布号CN102356092A43申请公布日20120215CN102356092ACN102356092A21申请号201080012374522申请日2010031961/210,56220090320USC07K16/28200601C07K16/3220060171申请人霍夫曼拉罗奇有限公司地址瑞士巴塞尔72发明人吉曼福加布里埃莱谢弗劳里奇哈贝马克X斯利沃克斯基74专利代理机构中科专利商标代理有限责任公司11021代理人张莹程金山54发明名称双特异性抗HER抗体57摘要本发明提供抗HER抗体，包括多特异性抗HER抗体，包含这些抗体的组合物和使用这些抗体的方法。本文还提供比传统E

2、GFR拮抗剂更低毒性的EGFR/HER3多特异性抗体。30优先权数据85PCT申请进入国家阶段日2011091986PCT申请的申请数据PCT/US2010/0280232010031987PCT申请的公布数据WO2010/108127EN2010092351INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书79页序列表44页附图32页CN102356102A1/2页21多特异性抗体，其包含特异性结合EGFR和HER3的抗原结合结构域，其中所述抗体的毒性低于EGFR拮抗剂的毒性。2权利要求1的抗体，其中所述毒性是皮肤病学毒性。3权利要求1的抗体，其中所述EGFR拮抗

3、剂是西妥昔单抗。4权利要求1的抗体，其中所述抗体抑制EGFR和HER3中至少一个的生物学活性。5权利要求2的抗体，其中所述抗体抑制EGF结合EGFR。6权利要求2的抗体，其中所述抗体抑制TGF诱导的EGFR磷酸化。7权利要求1的抗体，其中所述抗体抑制肿瘤细胞生长。8权利要求1的抗体，其中所述抗体结合EGFR的结构域III。9权利要求1的抗体，其中所述抗体以低于106M的KD结合EGFR和HER3。10权利要求9的抗体，其中所述抗体以低于106M的KD结合EGFR并且以低于107M的KD结合HER3。11权利要求1的抗体，其中所述抗体包含AHVRH1，其包含氨基酸序列LSGDWIHSEQIDNO

4、48；BHVRH2，其包含氨基酸序列VGEISAAGGYTDSEQIDNO51；和CHVRH3，其包含氨基酸序列ARESRVSFEAAMDYSEQIDNO53；和DHVRL1，其包含氨基酸序列NIATDVASEQIDNO55；EHVRL2，其包含氨基酸序列SASFSEQIDNO56；和FHVRL3，其包含氨基酸序列SEPEPYTSEQIDNO57。12权利要求1的抗体，包含A重链可变结构域，其与氨基酸序列SEQIDNO30具有至少95的序列同一性；B轻链可变结构域，其与氨基酸序列SEQIDNO29具有至少95的序列同一性；或C如A中的重链可变结构域和如B中的轻链可变结构域。13权利要求12的抗

5、体，包含SEQIDNO30的重链可变结构域。14权利要求12的抗体，包含SEQIDNO29的轻链可变结构域序列。15多特异性抗体，其包含SEQIDNO30的重链可变结构域序列和SEQIDNO29的轻链可变结构域序列。16权利要求1的抗体，其中所述抗体是全长IGG1抗体。17分离的核酸，其编码权利要求1的抗体。18宿主细胞，其包含权利要求17的核酸。19多特异性抗体，其包含特异性结合EGFR和HER3的抗原结合结构域，其中所述抗体包含AHVRH1，其包含氨基酸序列LSGDWIHSEQIDNO48；BHVRH2，其包含氨基酸序列VGEISAAGGYTDSEQIDNO51；和CHVRH3，其包含氨基

6、酸序列ARESRVSFEAAMDYSEQIDNO53；和DHVRL1，其包含氨基酸序列NIATDVASEQIDNO55；EHVRL2，其包含氨基酸序列SASFSEQIDNO56；和FHVRL3，其包含氨基酸序列SEPEPYTSEQIDNO57。20多特异性抗体，其包含特异性结合EGFR和HER3的抗原结合结构域，其中所述抗体权利要求书CN102356092ACN102356102A2/2页3包含A重链可变结构域，其与氨基酸序列SEQIDNO30具有至少95的序列同一性；B轻链可变结构域，其与氨基酸序列SEQIDNO29具有至少95的序列同一性；或C如A中的重链可变结构域和如B中的轻链可变结构域

7、。21权利要求20的抗体，其包含SEQIDNO30的重链可变结构域。22权利要求20的抗体，其包含SEQIDNO29的轻链可变结构域序列。23产生抗体的方法，其包括培养权利要求18的宿主细胞从而产生所述抗体。24免疫缀合物，其包含权利要求1的抗体和细胞毒性剂。25药物制剂，其包含权利要求1的抗体和药用载体。26治疗患有癌症的个体的方法，包括向所述个体施用有效量的权利要求1的抗体。27权利要求26的抗体，其中所述癌症包含表达EGFR和HER3的细胞。28权利要求26的抗体，其中所述癌症选自由乳腺癌，结肠直肠癌，胰腺癌，头和颈癌，黑素瘤，卵巢癌，前列腺癌和非小细胞肺癌组成的组。29抑制个体中HER

8、受体的生物学活性的方法，包括向所述个体施用有效量的权利要求1的抗体以抑制HER受体的生物学活性。30权利要求1的抗体，其用作药物。31权利要求1的抗体，其用于治疗癌症。32权利要求31的抗体，其中所述癌症是乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、头和颈癌、黑素瘤、卵巢癌、前列腺癌或非小细胞肺癌。33权利要求1的抗体，其用于抑制HER受体的生物学活性。34权利要求1的抗体在制备药物中的用途。35权利要求34的用途，其中所述药物用于治疗癌症。36权利要求35的用途，其中所述癌症是乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、头和颈癌、黑素瘤、卵巢癌、前列腺癌或非小细胞肺癌。37权利要求34的用途，其中所述药物用于抑制HER受体

9、的生物学活性。权利要求书CN102356092ACN102356102A1/79页4双特异性抗HER抗体0001相关申请0002本申请根据35USC119E要求2009年3月20日提交的美国临时申请号61/210562的优先权的权益，其公开的全文通过引用并入本文。发明领域0003本发明涉及抗HER抗体，包括多特异性抗HER抗体，其具有对于至少两种不同HER受体的结合特异性，以及所述抗体治疗疾病或病症的用途。0004发明背景0005受体酪氨酸激酶的HER家族是细胞生长、分化和存活的重要介质。该受体家族包括四个独特的成员，包括表皮生长因子受体EGFR、ERBB1或HER1、HER2ERBB2或P1

10、85NEU、HER3ERBB3和HER4ERBB4或TYRO2。0006由ERBB1基因编码的EGFR已被认为是人类恶性肿瘤的病因。具体而言，在乳腺癌、膀胱癌、肺癌、头癌、颈癌和胃癌以及成胶质细胞瘤中已经观察到EGFR表达的升高。EGFR受体表达的升高常常与由同样的肿瘤细胞的EGFR配体，转化生长因子TGF的产量增加有关，其通过自分泌刺激途径导致受体活化。BASELGA和MENDELSOHNPHARMACTHER药学理论641271541994。针对EGFR或其配体TGF和EGF的单克隆抗体已经作为治疗此类恶性肿瘤的治疗剂进行了评估。参见例如BASELGA和MENDELSOHN，见上文；MAS

11、UI等，CANCERRESEARCH癌症研究44100210071984；和WU等，JCLININVEST临床研究杂志95189719051995。0007HER家族的第二个成员HER2P185NEU最初被鉴定成转化基因的产物，来自经化学处理的大鼠的成神经细胞瘤。NEU原癌基因的活化形式产生自所编码蛋白质跨膜区中的点突变缬氨酸变成谷氨酸。在乳腺癌和卵巢癌中观察到NEU的人同系物的扩增，而且这与预后不良有关SLAMON等，SCIENCE科学，2351771821987；SLAMON等，SCIENCE科学，2447077121989；和美国专利4,968,603。在其它癌瘤中也已观察到HER2的过

12、表达频繁但不均一，原因在于基因扩增，所述癌瘤包括胃、子宫内膜、唾液腺、肺、肾、结肠、甲状腺、胰和膀胱的癌瘤。参见KING等，SCIENCE科学，2299741985；YOKOTA等，LANCET柳叶刀17657671986；FUKUSHIGE等，MOLCELLBIOL分子细胞生物学，69559581986；GUERIN等，ONCOGENERES癌基因研究，321311988；COHEN等，ONCOGENE癌基因，481881989；YONEMURA等，CANCERRES癌症研究，5110341991；BORST等，GYNECOLONCOL，383641990；WEINER等，CANCERRES

13、癌症研究，504214251990；KERN等，CANCERRES癌症研究，5051841990；PARK等，CANCERRES癌症研究，4966051989；ZHAU等，MOLCARCINOG分子致癌作用，32542571990；AASLAND等，BRJCANCER英国癌症杂志573583631988；WILLIAMS等，PATHOBIOLOGY病理学5946521991；和MCCANN等，CANCER癌症，6588921990等。HER2可在前列腺癌中过表达GU等，CANCERLETT癌症通讯9918591996；ROSS等，HUMPATHOL人类病理学28827331997；ROSS等，

14、CANCER癌说明书CN102356092ACN102356102A2/79页5症792162701997；和SADASIVAN等，JUROL泌尿学杂志150126311993。0008已经描述了针对大鼠P185NEU和人HER2蛋白质产物的抗体。DREBIN及其同事制备了针对大鼠NEU基因产物，P185NEU的抗体。参见例如DREBIN等，CELL细胞416957061985；MYERS等，METHENZYM酶学方法1982772901991；和WO94/22478。DREBIN等，ONCOGENE癌基因22732771988报道了与P185NEU的两个独特区域有反应性的抗体混合物对植入裸鼠

15、的NEU转化NIH3T3细胞产生协同的抗肿瘤作用。还可参见1998年10月20日颁发的美国专利5,824,311。0009HUDZIAK等，MOLCELLBIOL分子细胞生物学93116511721989描述了一组HER2抗体的生成，并利用人乳房肿瘤细胞系SKBR3鉴定。通过72小时后单层细胞的结晶紫染色测定了暴露于抗体后SKBR3细胞的相对细胞增殖。利用此测定法，用称作4D5的抗体获得了最大抑制，它抑制细胞增殖达56。该组其它抗体在此测定法中将细胞增殖降低至较低程度。还发现抗体4D5使过表达HER2的乳房肿瘤细胞系对TNF的细胞毒性作用变得敏感。还可参见1997年10月14日颁发的美国专利5

16、,677,171。HUDZIAK等人的文章中讨论的HER2抗体还在以下文献中进行了表征FENDLY等，CANCERRESEARCH癌症研究50155015581990；KOTTS等，INVITRO体外26359A1990；SARUP等，GROWTHREGULATION生长调节172821991；SHEPARD等，JCLINIMMUNOL临床免疫学1131171271991；KUMAR等，MOLCELLBIOL分子细胞生物学1129799861991；LEWIS等，CANCERIMMUNOLIMMUNOTHER癌症免疫学和免疫疗法372552631993；PIETRAS等，ONCOGENE癌基因

17、9182918381994；VITETTA等，CANCERRESEARCH癌症研究54530153091994；SLIWKOWSKI等，JBIOLCHEM生物化学杂志2692014661146651994；SCOTT等，JBIOLCHEM生物化学杂志2661430051991；DSOUZA等，PROCNATLACADSCI美国国家科学院学报91720272061994；LEWIS等，CANCERRESEARCH癌症研究56145714651996；和SCHAEFER等，ONCOGENE癌基因15138513941997。0010鼠HER2抗体4D5的重组人源化型式HUMAB4D58，RHUMA

18、BHER2，曲妥珠单抗TRASTUZUMAB或美国专利5,821,337在临床上对患有HER2过表达的转移性乳腺癌并已接受广泛的早期抗癌疗法的患者起作用BASELGA等，JCLINONCOL临床肿瘤学杂志147377441996。曲妥珠单抗在1998年9月25日得到了食品和药品管理局的销售许可，可用于治疗所患肿瘤过表达HER2蛋白质的转移性乳腺癌患者。0011以下文献中描述了具有各种特性的其它HER2抗体TAGLIABUE等，INTJCANCER国际癌症杂志479339371991；MCKENZIE等，ONCOGENE癌基因45435481989；MAIER等，CANCERRES癌症研究515

19、36153691991；BACUS等，MOLECULARCARCINOGENESIS分子致癌作用33503621990；STANCOVSKI等，PNASUSA88869186951991；BACUS等，CANCERRESEARCH癌症研究52258025891992；XU等，INTJCANCER国际癌症杂志534014081993；WO94/00136；KASPRZYK等，CANCERRESEARCH癌症研究52277127761992；HANCOCK等，CANCERRES癌症研究51457545801991；SHAWVER等，CANCERRES癌症研究54136713731994；ARTEA

20、GA等，CANCERRES癌症研究54375837651994；HARWERTH等，JBIOLCHEM生物化学杂志26715160151671992；美国专利5,783,186；和说明书CN102356092ACN102356102A3/79页6KLAPPER等，ONCOGENE癌基因14209921091997。0012同源性筛选使得HER受体家族的两个其它成员得以鉴定HER3美国专利5,968,511，5,183,884和5,480,968以及KRAUS等，PNASUSA86919391971989和HER4欧洲专利申请599,274；PLOWMAN等，PROCNATLACADSCIUSA

21、，美国国家科学院学报，90174617501993；和PLOWMAN等，NATURE自然，3664734751993。这两种受体均在至少有些乳腺癌细胞系中展示出表达升高。0013通常发现HER受体在细胞中有多种组合，而且认为它的异二聚化增加了对各种HER配体的细胞应答的多样性EARP等，BREASTCANCERRESEARCHANDTREATMENT乳腺癌研究和治疗351151321995。EGFR受到6种不同配体的结合表皮生长因子EGF、转化生长因子TGF、双调蛋白、肝素结合表皮生长因子HBEGF、动物纤维素和EPIREGULINGROENEN等，GROWTHFACTORS生长因子11235

22、2571994。由单一基因的可变剪接产生的一个调蛋白蛋白质家族是HER3和HER4的配体。调蛋白HEREGULIN家族包括、和调蛋白HOLMES等，SCIENCE科学，256120512101992；美国专利5,641,869；和SCHAEFER等，ONCOGENE癌基因15138513941997；NEU分化因子NDFS；神经胶质生长因子GGFS乙酰胆碱受体诱导活性ARIA；及感觉和运动神经元衍生因子SMDF。有关综述参见GROENEN等，GROWTHFACTORS生长因子112352571994；LEMKE，GMOLECCELLNEUROSCI分子和细胞神经科学72472621996和LE

23、E等，PHARMREV药学综述4751851995。还鉴定了另外三种HER配体神经调节蛋白2NRG2，据报道它结合HER3或HER4CHANG等，NATURE自然3875095121997；和CARRAWAY等，NATURE自然3875125161997；神经调节蛋白3，它结合HER4ZHANG等，PNASUSA9418956271997；和神经调节蛋白4，它结合HER4HARARI等，ONCOGENE癌基因182681891999。HBEGF、动物纤维素和EPIREGULIN也结合HER4。0014尽管EGF和TGF不结合HER2，但是EGF刺激EGFR和HER2形成异二聚体，它活化EGFR

24、并导致异二聚体中HER2的转磷酸作用。二聚化作用和/或转磷酸作用似乎活化HER2酪氨酸激酶。参见EARP等，见上文。同样，当HER3与HER2共表达时，形成有活性的信号复合物，而针对HER2的抗体能破坏此复合物SLIWKOWSKI等，JBIOLCHEM生物化学杂志，2692014661146651994。此外，在与HER2共表达时，HER3对调蛋白HRG的亲和力提高到了更高的亲和力状态。关于HER2HER3蛋白质复合物还可参见LEVI等，JOURNALOFNEUROSCIENCE神经科学杂志15132913401995；MORRISSEY等，PROCNATLACADSCIUSA美国国家科学院学

25、报92143114351995；和LEWIS等，CANCERRES癌症研究，56145714651996。HER4，与HER3类似，与HER2形成有活性的信号复合物CARRAWAY和CANTLEY，CELL细胞78581994。0015目前靶向HER途径的治疗剂用于治疗疾病诸如乳腺癌、非小细胞肺癌、结肠直肠癌、头和颈癌和胰腺癌。尽管这些治疗剂具有一些成功，存在涉及天然和诱导抗性和毒性的问题。ARTEAGACLJCLINONCOL临床肿瘤学杂志2128991S2003；HOSHIS，等，GANTOKAGAKURYOHO311209132004；VILORIAPETITAM，和KERBELRSIN

26、TJRADIATONCOLBIOLPHYS58914262004；BIANCOR，等，ENDOCRRELATCANCER12S159712005；ENGELMANJA，和JANNEPA，CLINCANCERRES临床癌症说明书CN102356092ACN102356102A4/79页7研究14289592008；DAVOLIA，等，CANCERCHEMOTHERPHARMACOL癌症化疗药学654611232010；POHLMANNPR，等，CLINCANCERRES临床癌症研究1524747974912009。具体地，靶向HER1EGFR的治疗剂常常与不希望的副作用相关，诸如显著水平的皮肤毒

27、性。ROBERT，等，LANCETONCOLOGY柳叶刀肿瘤学649150020050016因此，存在开发靶向HER途径的改善的治疗剂的需要。0017发明概述0018本发明提供多特异性抗体，其包含特异性结合至少两个HER受体的抗原结合结构域，所述HER受体选自由AEGFR和HER2，BEGFR和HER3，和CEGFR和HER4组成的组。所述抗体抑制至少一个所述HER受体的生物学活性。在具体的实施方案中，所述多特异性抗体特异性结合其靶标HER受体并且不特异性结合非靶标HER受体。因此，在一个实施方案中，所述抗体特异性结合EGFR和HER3但是不特异性结合HER2或HER4。在另一个实施方案中，所

28、述抗体特异性结合EGFR和HER2但是不特异性结合HER3或HER4。在另一个实施方案中，所述抗体特异性结合EGFR和HER4但是不特异性结合HER2或HER3。本发明也提供特异性结合靶标HER受体的单特异性抗体。0019本发明一方面提供能够特异性结合EGFR和另一个HER受体的多特异性抗体，其比传统EGFR拮抗剂，诸如西妥昔单抗CETUXIMAB毒性更低。在一个实施方案中，所述毒性是皮肤病学毒性。在一个实施方案中，多特异性HER抗体包含特异性结合EGFR和HER3的抗原结合结构域。0020一方面，本发明提供多特异性抗体，其包含特异性结合EGFR和HER3的抗原结合结构域。在一个实施方案中，所

29、述多特异性抗体比EGFR拮抗剂毒性更低。在一个实施方案中，所述多特异性抗体抑制EGFR和HER3中至少一个的生物学活性。在一个实施方案中，所述抗体抑制EGF结合EGFR。在另一个实施方案中，所述抗体抑制TGF诱导的EGFR磷酸化。在一些实施方案中，所述抗体抑制肿瘤细胞生长。在一个实施方案中，所述多特异性抗体特异性结合EGFR和HER3但是不特异性结合HER2或HER4。0021在一个实施方案中，所述多特异性抗体包含以低于106M的KD特异性结合EGFR和HER3的抗原结合结构域。在一个实施方案中，所述多特异性抗体包含以低于106M的KD特异性结合EGFR并且以低于107M的KD特异性结合HER

30、3的抗原结合结构域。0022在一个实施方案中，包含特异性结合EGFR和HER3的抗原结合结构域的多特异性抗体包含AHVRH1，其包含氨基酸序列LSGDWIHSEQIDNO48；BHVRH2，其包含氨基酸序列VGEISAAGGYTDSEQIDNO51；和CHVRH3，其包含氨基酸序列ARESRVSFEAAMDYSEQIDNO53；和DHVRL1，其包含氨基酸序列NIATDVASEQIDNO55；EHVRL2，其包含氨基酸序列SASFSEQIDNO56；和FHVRL3，其包含氨基酸序列SEPEPYTSEQIDNO57。0023在一个实施方案中，包含特异性结合EGFR和HER3的抗原结合结构域的多特

31、异性抗体包含A重链可变结构域，其与氨基酸序列SEQIDNO30具有至少95的序列同一性；B轻链可变结构域，其与氨基酸序列SEQIDNO29具有至少95的序列同一性；或C如A中的重链可变结构域序列和如B中的轻链可变结构域序列。在一个实施方案中，包含特异性结合EGFR和HER3的抗原结合结构域的多特异性抗体包含SEQIDNO30的重链可变结构域序列。在一个实施方案中，包含特异性结合EGFR和HER3的抗原结合结构说明书CN102356092ACN102356102A5/79页8域的多特异性抗体包含SEQIDNO29的轻链可变结构域序列。在另一个实施方案中，包含特异性结合EGFR和HER3的抗原结合

32、结构域的多特异性抗体包含SEQIDNO30的重链可变结构域序列和SEQIDNO29的轻链可变结构域序列。0024在一些实施方案中，包含特异性结合EGFR和HER3的抗原结合结构域的多特异性抗体是全长IGG1抗体。0025本发明的一方面提供编码所述多特异性HER抗体的分离的核酸。另一方面提供包含编码所述多特异性HER抗体的核酸的宿主细胞。还一方面提供产生多特异性HER抗体的方法，包括培养包含编码所述多特异性HER抗体的核酸的宿主细胞，从而产生所述的抗体。0026本发明一方面提供包含多特异性HER抗体和细胞毒性剂的免疫缀合物。另一方面提供包含多特异性HER抗体和药用载体的药物制剂。0027本发明一

33、方面提供治疗患有癌症的个体的方法，包括向所述个体施用有效量的多特异性HER抗体。在一个实施方案中，所述多特异性HER抗体包含特异性结合EGFR和HER3的抗原结合结构域。在一个实施方案中，通过所述多特异性HER抗体治疗的癌症包含表达EGFR和HER3的细胞。在一个实施方案中，通过所述多特异性HER抗体治疗的癌症是乳腺癌BREASTCANCER、结肠直肠癌COLORECTALCANCER、胰腺癌PANCREATICCANCER、头和颈癌HEADANDNECKCANCER、黑素瘤MELANOMA、卵巢癌OVARIANCANCER、前列腺癌PROSTATECANCER或非小细胞肺癌NONSMALLL

34、UNGCELLCANCER。0028本发明另一方面提供抑制个体中HER受体生物学活性的方法，包括向所述个体施用有效量的多特异性HER抗体。在一个实施方案中，所述多特异性HER抗体包含特异性结合EGFR和HER3的抗原结合结构域。0029本发明一方面提供用作药物的多特异性HER抗体。另一方面提供用于治疗癌症，诸如乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、头和颈癌、黑素瘤、卵巢癌、前列腺癌或非小细胞肺癌的多特异性HER抗体。另一方面提供用于抑制HER受体的生物学活性的多特异性HER抗体。在一个实施方案中，所述多特异性HER抗体包含特异性结合EGFR和HER3的抗原结合结构域。0030本发明另一方面提供用于制备药

35、物的多特异性HER抗体。在一个实施方案中，所述药物可用于治疗癌症，诸如乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、头和颈癌、黑素瘤、卵巢癌、前列腺癌或非小细胞肺癌。在一个实施方案中，所述药物用于抑制HER受体的生物学活性。在一个实施方案中，所述多特异性HER抗体包含特异性结合EGFR和HER3的抗原结合结构域。在一个实施方案中，所述多特异性HER抗体比传统EGFR拮抗剂，诸如西妥昔单抗毒性更低。0031附图简述0032图1显示在A431异种移植模型中通过抗EGFR抗体D15抑制肿瘤生长。0033图2显示具有双重特异性的克隆的结合特异性。0034图3显示使用选择的具有双重特异性抗EGFR/HER3和抗EGFR/

36、HER2抗体的抗体抑制TGF诱导的EGFR磷酸化。0035图4显示抗EGFR/HER3抗体阻断调蛋白结合HER3ECDFC。0036图5显示在MCF7细胞中通过抗EGFR/HER3双特异性抗体抑制HRG诱导的受体磷酸化。0037图6显示通过抗EGFR/HER3抗体抑制MDA175细胞的细胞增殖。说明书CN102356092ACN102356102A6/79页90038图7是显示在4D5FV结构上定位的D15100热点的图。0039图8概述了使用鸟枪文库对于D15100EGFRHER3抗体亲和力成熟的策略。0040图9显示两个选择的亲和力成熟的抗体DL7和DL11对于EGFR和HER3两者是特异

37、性的。0041图10A显示亲和力成熟的抗体DL7和DL11与母体抗体D15对于EGFR的抑制功能的比较。B显示亲和力成熟的抗体DL7和DL11与单特异性抗HER3抗体DL36对于HER3反式激活的抑制功能的比较。0042图11A提供图显示DL11与培妥珠单抗PERTUZUMAB，抗EGFR抗体，和抗HER3抗体，或DL36，D15，或D15DL36的组合相比对于H1666细胞生长抑制功能的比较，所述细胞是NSCLC细胞系，表达HER2，HER3，EGFR和EGFR配体，生长用HRG刺激。B提供图显示DL11与培妥珠单抗，抗EGFR抗体和抗HER3抗体，或DL36，D15或D15DL36的组合相

38、比对于H1666HSCLC系生长抑制功能的比较，生长用HRG和TGF刺激。0043图12A提供图显示通过DL11与PMAB，抗EGFR抗体，和抗HER3抗体相比较抑制HCA7细胞的增殖，该细胞是结肠直肠癌细胞系，表达HER2，HER3和EGFR。细胞生长用HRG刺激。B提供图显示如图12A中的HCA7细胞生长的抑制，除了细胞生长用HRGTGF刺激。0044图13显示CALU3细胞增殖的抑制，所述细胞是NSCLC系，过表达HER2并且具有正常水平的HER3和EGFR。细胞生长用HRG刺激，抗体以剂量依赖方式测试。0045图14概述了对于D15201亲和力成熟的分选策略。0046图15显示通过DL

39、11，DL11B和DL11F抑制MDA175细胞增殖。0047图16显示DL11F抑制调蛋白诱导的HER3磷酸化和TGF诱导的EGFR磷酸化。0048图17是显示在HCA7肿瘤移植模型中通过DL11和DL11F抑制肿瘤生长的图。0049图18是显示在H358NSCLC异种移植模型中通过DL11F抑制肿瘤生长的图。0050图19显示通过DL311B，DL36B和DL36抑制HRG诱导的HER3磷酸化。0051图20通过DL311B，DL36B和DL36抑制MDA175细胞增殖。0052图21是显示在FADU癌症模型中通过DL11F抑制肿瘤生长的图。0053图22是显示在BXPC3胰腺癌模型中通过

40、DL11F抑制肿瘤生长的图。0054图23是显示在CALU3非小细胞肺癌模型中通过DL11F抑制肿瘤生长的图。0055图24是显示在A431上皮癌模型中通过DL11F抑制肿瘤生长的图。0056图25是显示在MAXF44乳腺癌模型中通过DL11F抑制肿瘤生长的图。0057图26是显示在DU145前列腺癌模型中通过DL11F抑制肿瘤生长的图。0058图27是显示在OVXF550卵巢癌模型中通过DL11F抑制肿瘤生长的图。0059图28显示在数个细胞系中DL11F诱导ADCC。0060图29显示DL11FN297A缺少ADCC活性。0061图30显示在H292NSCLC癌症模型中通过DL11F和DL

41、11FN297A抑制肿瘤生长。0062图31AC是提供关于EGFR拮抗剂疗法观察到的非临床和临床毒性信息的表。0063图32是提供关于疹/脱屑和痤疮/痤疮样疹分级信息的表。0064图33提供具有KABAT编号的数个抗HER抗体的重链可变结构域和轻链可变结构域的氨基酸比对。图33A显示下述抗体的轻链可变结构域D1SEQIDNO58；D15SEQ说明书CN102356092ACN102356102A7/79页10IDNO24；D15100SEQIDNO40；DL11SEQIDNO27；DL11BSEQIDNO29；DL11FSEQIDNO29。图33B显示下述抗体的重链可变结构域D1SEQIDNO

42、25；D15SEQIDNO25；D15100SEQIDNO25；DL11SEQIDNO28；DL11BSEQIDNO28；DL11FSEQIDNO30。0065发明详述0066I定义0067除非另有定义，本文使用的所有专门术语、符号和其它科学术语意图具有本发明所属领域技术人员普遍理解的含义。在一些情况下，为了清楚和/或易于引用，本文定义了具有普遍理解含义的术语，并且本文包含此类定义没有必要解释为其代表了与本领域通常理解的实质上的差异。本文中描述或提到的技术和程序一般得到了本领域技术人员的充分理解，而且利用常规方法得以普遍采用，诸如例如下列文献中记载的广泛应用的分子克隆的方法SAMBROOK等人

43、，MOLECULARCLONINGALABORATORYMANUAL分子克隆实验室指南第二版1989COLDSPRINGHARBORLABORATORYPRESS，COLDSPRINGHARBOR，NY。如果合适，涉及使用市售的试剂盒和试剂的程序一般根据制造商规定的方案和/或参数进行，除非另有说明。0068在描述本发明的方法、试剂盒及其用途之前，应当理解本发明不限于所述具体方法、方案、细胞系、动物种或属、构建物和试剂，因为它们当然可以变化。还应当理解本文所用术语只是为了描述具体实施方案，并非意图限制本发明的范围，只有所附权利要求才对本发明范围进行了限制。0069必须注意的是，在用于本文及所附权

44、利要求时，除非上下文另有明确规定，单数形式“一个”、“一种”和“所述包括复数所指物。0070在本说明书和权利要求书全文中，词语“包括”或变体诸如“包含”或“含有”，应当理解为意指包括所述的整数整体或整数整体的组，但是不排除任何其它整数整体或整数整体的组。0071本文中术语“抗体”以其最广义使用，特别是涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体和抗体片段，只要它们表现出所希望的生物学活性。术语“多特异性抗体”以最广义使用，具体涵盖包含这样的抗原结合结构域的抗体，所述抗原结合结构域具有多表位特异性即，能够特异性结合一种生物分子上的两个或多个不同表位或能够特异性结合在两种或多种不同生物分子上的表位。抗

45、原结合结构域的一个具体实例是VHVL单元，其由重链可变结构域VH和轻链可变结构域VL构成。此类多特异性抗体包括但不限于全长抗体、具有两个或多个VL和VH结构域的抗体、抗体片段如FAB、FV、DSFV、SCFV、双抗体DIABODIES、双特异性双抗体和三链抗体TRIABODIES、已被共价或非共价连接的抗体片段。“双特异性抗体”是包含这样的抗原结合结构域的多特异性抗体，所述抗原结合结构域能够特异性结合一个生物分子上的两个不同表位，或能够特异性结合两个不同生物分子上的表位。双特异性抗体在本文中也称为具有“双特异性”或是“双特异性的”。0072在某些实施方案中，本发明的抗体对于其靶标HER或HER

46、S具有的解离常数KD1M，100NM，10NM，1NM，01NM，001NM，或0001NM例如108M以下，例如108M至1013M，例如，109M至1013M。0073基本的4链抗体单元是由两条相同的轻链L和两条相同的重链H构成的异四说明书CN102356092ACN102356102A8/79页11聚体糖蛋白IGM抗体由5个基本的异四聚体单元及称作J链的另外多肽组成，因此包含10个抗原结合位点；而分泌型IGA抗体可聚合形成包含25个基本的4链单元及J链的多价装配物。在IGG的情况中，4链单元通常约150,000道尔顿。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而取决于重链的同种型，通过一个或

47、多个二硫键彼此连接两条重链。每条重链和轻链还具有间隔规律的链内二硫桥。每条重链在N末端具有一个可变结构域VH，接着是三个对于每种和链和四个对于和同种型恒定结构域CH。每条轻链在N末端具有一个可变结构域VL，接着是其另一端的一个恒定结构域CL。VL与VH排列在一起，而CL与重链的第一恒定结构域CH1排列在一起。特定的氨基酸残基被认为在轻链和重链可变结构域之间形成界面。成对的VH和VL一起形成一个抗原结合位点。关于不同类别抗体的结构和性质，参见如BASICANDCLINICALIMMUNOLOGY基本和临床酶学，第八版，DANIELPSTITES，ABBAITERR和TRISTRAMGPARSLO

48、W编辑，APPLETONLANGE，NORWALK，CT，1994，第71页和第6章。0074来自任何脊椎动物物种的轻链，根据其恒定结构域氨基酸序列，可归入两种称作和的截然不同型中的一种。根据其重链恒定结构域CH氨基酸序列，免疫球蛋白可归入不同的类或同种型。有五类免疫球蛋白IGA、IGD、IGE、IGG和IGM，分别具有称作、和的重链。根据CH序列和功能的相对较小差异，和类可进一步分为亚类，例如人表达下列亚类IGG1、IGG2、IGG3、IGG4、IGA1和IGA2。0075术语“可变的”指可变结构域中的某些区段在抗体序列中差异广泛的情况。V结构域介导抗原结合并限定特定抗体对其特定抗原的特异性

49、。然而，变异性并非均匀分布于可变结构域跨越的110个氨基酸。而V区由1530个氨基酸，称作构架区FR的相对不变异的区段及将构架区分开的称作“高变区”或HVR的极度变异的较短区域组成。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FRS，它们大多采取折叠构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成折叠结构一部分的三个高变区连接。每条链中的高变区通过FR非常接近的保持在一起，并与另一条链的高变区一起促成抗体的抗原结合位点的形成参见KABAT等，SEQUENCESOFPROTEINSOFIMMUNOLOGICALINTEREST免疫学感兴趣的蛋白质的序列，第五版PUBLICHEALTHSERVICE公共卫生署，NATIONALINSTITUTESOFHEALTH国立卫生研究所，BETHESDA，MD1991。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应子功能，如在抗体依赖性细胞介导的细胞毒性ADCC中抗体的参与。0076术语“高变区”、“HVR”或“HV”在用于本文时指抗体可变结构域中序列上高度可变和/或形成结构上定义的环的区域。通常，抗体包含六个HVR三个在VH中HVRH1、HVRH2、HVRH3，三个在VL中HVRL1、HVRL2、HVRL3。在天然抗体中，H3和L3展示这六个HVR