原料药材山楂指纹图谱测定方法 技术领域：
本发明涉及中药材指纹图谱的构建方法，尤其是山楂药材高效液相色谱指纹图谱地构建方法及其标准指纹图谱。属于药物分析技术领域。
背景技术：
中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。
中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。“整体性”和“模糊性”为其显著特点。
目前，中药指纹图谱技术已涉及众多方法，包括薄层扫描(TLCS)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)和高效毛细管电泳法(HPCE)等色谱法以及紫外光谱法(UV)、红外光谱法(IR)、质谱法(MS)、核磁共振法(NMR)和X-射线衍射法等光谱法。其中色谱方法为主流方法，尤其是HPLC、TLCS和GC已成为公认的三种常规分析手段。由于HPLC具有分离效能高、选择性高、检测灵敏度高、分析速度快、应用范围广等特点；中药成分绝大多数可在高效液相色谱仪上进行分析检测，且积累较丰富的应用经验。因此高效液相色谱法已成为中药指纹图谱技术的首选方法。随着HPLC-MS和GC-MS等联用技术的应用，中药指纹图谱技术更趋完善。
山楂为蔷薇科山楂属植物山里红CrataeguspinnatifidaBge.var.majorN.E.Br.或山楂C.rinnatifMa Bge.的干燥成熟果实，用于肉食积滞，胃脘胀满，泻痢腹痛，瘀血经闭，产后瘀阻，心腹刺痛，疝气疼痛；高脂血症。其化学成分主要为有机酸和黄酮类。
发明内容：
本发明的目的是提供一种山楂药材指纹图谱的构建方法，以及由此方法所得到的山楂药材标准指纹图谱。为实现此目的，本发明通过对山楂药材高效液相色谱指纹图谱的研究，提出了一种较好的山楂药材质量控制方法，弥补了现有质量控制技术的不足，使山楂药材的质量控制更加完善和科学。
本发明的山楂药材高效液相色谱指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈(A)-水(B)-甲醇(C)为流动相梯度洗脱：0～10min(10％A～85％B～5％C)，20min(10％A～82％B～8％C)，30min(12％A～80％B～8％C)，60min(17％A～75％B～8％C)。流速1.0mL/min，柱温25℃，检测波长272nm。
内标物溶液的制备：取芦丁对照品适量，用60％甲醇制成每1mL含1.2524mg的溶液。
供试品溶液的制备：取山楂药材粉末适量精密称定，置于锥形瓶中，精密加入60％甲醇溶液适量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用60％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，制成50mg/ml的溶液，滤过，取续滤液3mL于5mL量瓶中，精密加入内标物溶液1mL，加60％的甲醇至刻度，即得。
测定方法：分别精密吸取供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，记录60min色谱图，将供试品溶液的指纹图谱与对照品共有模式图谱经计算机辅助相似度评价软件比较。