发明内容
本发明的目的是提供一类具有抗血管性痴呆活性的灯盏乙素苷元前药及其药理上可以接受的无机或有机盐结晶水合物、溶剂合物。
本发明的另一目的是提供上述化合物的制备方法
本发明的再一目的是提供包含上述化合物的药物组合物
本发明的再一目的是提供上述化合物的医药用途
本发明的再一目的是提供上述组合物的医药用途
本发明提供了一类具有以下结构式I，II所示结构的灯盏乙素苷元前药及其药理上可以接受的无机或有机盐结晶水合物、溶剂合物。
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其中，
R1为C1-4烃基；
R2为含氮杂环；
n为0，2，3
优选地，本发明的代表性化合物可以为以下化合物：
1)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-缬氨酸酯
2)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-丙氨酸酯
3)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-亮氨酸酯
4)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-异亮氨酸酯
5)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-苯丙氨酸酯
6)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-脯氨酸酯
7)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-甲硫氨酸酯
8)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-缬氨酸乙基醚
9)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-亮氨酸乙基醚
10)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-异亮氨酸乙基醚
11)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-苯丙氨酸乙基醚
12)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-亮氨酸丙基醚
13)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-异亮氨酸丙基醚
14)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-苯丙氨酸丙基醚
15)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((二乙胺基)甲基)苯甲酸酯
16)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((苄胺基)甲基)苯甲酸酯
17)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-(吗啉基甲基)苯甲酸酯
18)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-(吡咯-1-基甲基)苯甲酸酯
19)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酸酯
20)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((4-哌啶-1-基)甲基)苯甲酸酯
21)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((二乙胺基)甲基)苯甲酸丙基醚
22)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((苄胺基)甲基)苯甲酸丙基醚
23)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-(吗啉基甲基)苯甲酸丙基醚
24)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((二乙胺基)甲基)苯甲酸乙基醚
25)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-(吗啉基甲基)苯甲酸乙基醚
26)5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-(吡咯-1-基甲基)苯甲酸乙基醚
本发明代表化合物的结构式见表1
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表1本发明代表化合物1-14结构式
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表1本发明代表化合物15-26结构式
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本发明还提供了制备上述化合物的方法
制备上述化合物的方法包括以下步骤：
(1)灯盏乙素苷元的制备
根据专利报道方法(车庆明，CN1657042A)，以灯盏乙素半成品为原料，体系在8％硫酸溶液条件下回流水解20h，放冷后抽滤，滤饼用丙酮提取，合并丙酮层，无水硫酸镁干燥、过滤，蒸除溶剂，得到灯盏乙素苷元粗品，所得物再用溶剂重结晶，获得纯度高于90％的灯盏乙素苷元：
(2)灯盏乙素苷元缩酮保护中间体制备
按照文献方法(陈志卫等，药学学报2005，40(11)1001)将灯盏乙素苷元与催化量4-二甲胺基吡啶(DMAP)溶于适量N ，N-二甲基甲酰胺(DME)中，加入与苷元等摩尔的二氯二苯甲烷，将体系升温至160℃-180℃，反应2h，放冷后将溶剂蒸出，残余物硅胶柱层析分离纯化，得到灯盏乙素苷元缩酮保护中间体：
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(3)灯盏乙素苷元4’-L-氨基酸酯类衍生物的合成
N-Boc-L-氨基酸与缩酮保护的灯盏乙素苷元在N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)与4-二甲胺基吡啶(DMAP)存在下，在以四氢呋喃溶剂的反应条件下缩合形成灯盏乙素苷元4’N-Boc-L-氨基酸酯衍生物，所得产物经过CH3COCl/MeOH体系低温反应同时脱去二苯缩酮保护基与N-Boc(N-叔丁氧羰基)保护基得到最终目标化合物：
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(4)灯盏乙素苷元4’-L-氨基酸醚类衍生物的合成
以N-Boc L-氨基酸为底物，通过其与2-溴乙醇或3-溴-1-丙醇在DMAP/DCC条件下缩合得到N-Boc L-氨基酸-2-溴乙酯或3-溴丙基酯，所得化合物与缩酮保护的灯盏乙素苷元在碳酸铯、4![]()
MS存在下缩合得到缩酮保护灯盏乙素苷原4’-N-Boc-L-氨基酸乙基醚与丙基醚，所得产物经过CH3COCl/MeOH体系低温反应同时脱去二苯缩酮保护基与N-Boc(N-叔丁氧羰基)保护基得到最终目标化合物：
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(5)灯盏乙素苷元4’-氨甲基苯甲酸酯类衍生物的合成
对氯甲基苯甲酸与取代胺在无水乙醇条件下缩合，用浓盐酸调节体系pH 3.4析出沉淀后，沉淀用异丙醇提取，异丙醇层蒸出溶剂后残余物经硅胶柱层析分离获得取代胺甲基苯甲酸，所得物与缩酮保护灯盏乙素苷元在以四氢呋喃为溶剂，以DMAP/DCC为缩合试剂条件下，经室温反应获得缩酮保护灯盏乙素苷元4’-取代氨甲基苯甲酸酯，所得物后经CH3COCl/MeOH体系低温反应脱去缩酮保护基，得到目标化合物：
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(6)灯盏乙素苷元4’-氨甲基苯甲酸醚类衍生物的合成
上步获得的取代胺甲基苯甲酸，所得物与2-溴乙醇或3-溴-1-丙醇在DMAP/DCC条件下缩合得到取代胺甲基苯甲酸2-溴乙基酯或3溴丙基酯，后者与缩酮保护灯盏乙素苷元在碳酸铯、4![]()
分子筛存在条件下缩合缩合反应，后经CH3COCl/MeOH体系低温反应脱去缩酮保护基，得到目标化合物：
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具体地目标化合物1-14的制备方法如流程(I)所示：
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其中，a：N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)与4-二甲胺基吡啶(DMAP)，20～65℃；b：N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)与4-二甲胺基吡啶(DMAP)，20～65℃；c：Cs2CO3，N-甲基吡咯烷酮(NMP)，4![]()
分子筛，40～100℃；d：乙酰氯/甲醇，乙酸乙酯，-5℃～25℃。
具体地目标化合物15-26的制备方法如流程(II)所示
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其中，a：无水乙醇，25～80℃；b：N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)与4-二甲胺基吡啶(DMAP)，20～65℃；c：N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)与4-二甲胺基吡啶(DMAP)，20～65℃；d：Cs2CO3，N-甲基吡咯烷酮(NMP)，4![]()
分子筛，40～100℃；e：乙酰氯/甲醇，乙酸乙酯，-5℃～25℃。
流程(I)的实施方式详细说明如下：
1、以缩酮保护灯盏乙素苷元与N-叔丁氧羰基-L-氨基酸为反应原料，按照文献报道方法(Tetrahedron Lett.1979，20，(40)，3811-3814；J.Chem.Res.1991，10，292-302)在N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)与4-二甲胺基吡啶(DMAP)为缩合试剂条件下合成缩酮保护灯盏乙素苷元4’-N-叔丁氧羰基L-氨基酸酯中间体；
2、N-叔丁氧羰基-L-氨基酸与3-溴-1丙醇或2-溴乙醇在DCC/DMAP条件下缩合形成N-叔丁氧羰基-L-氨基酸-2-溴乙基酯与3-溴丙基酯(Tetrahedron Lett.1979，20，(40)，3811-3814)，所得产物与缩酮保护灯盏乙素苷元参考文献报道方法(Bioorg.Med.Chem.Lett.2007，17，959-963)在碳酸铯/4![]()
分子筛存在条件，在40～100℃反应2～24小时，最佳反应条件为N-叔丁氧羰基-L-氨基酸3-溴丙基酯或2-溴乙基酯与缩酮保护灯盏乙素苷元按照比率为1.5～2.0∶1mol，在以碳酸铯为缚酸剂、N-甲基吡咯烷酮为溶剂条件下，在60～80℃下反应4～10小时，得到缩酮保护灯盏乙素苷元4’-N-叔丁氧羰基L-氨基酸乙基与丙基醚中间体；
3、将获得的缩酮保护灯盏乙素苷元4’-N-叔丁氧羰基L-氨基酸酯中间体与缩酮保护灯盏乙素苷元4’-N-叔丁氧羰基L-氨基酸乙基与丙基醚在极性或非极性溶剂中用乙酰氯/甲醇体系，在-10～25℃下，反应0.2～16小时，最佳反应条件为在乙酰氯/甲醇体系中0℃～25℃反应4～8小时，得到目标化合物1-14；
流程(II)的实施方式详细说明如下：
1、以4-氯甲基苯甲酸与取代胺或杂环为反应原料，按照文献报道方法(J.G.Lombardino，US 4623486)在以无水乙醇为反应溶剂条件下，缩合得到4-取代氨甲基苯甲酸中间体；
2、4-取代氨甲基苯甲酸中间体与缩酮保护灯盏乙素苷元按照文献报道方法(J.Chem.Res.1991，10，292-302)在N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)与4-二甲胺基吡啶(DMAP)为缩合试剂条件下合成缩酮保护灯盏乙素苷元4’-氨甲基苯甲酸酯中间体；
3、4-取代氨甲基苯甲酸与3-溴-1丙醇或2-溴乙醇在DCC/DMAP条件下缩合形成4-取代氨甲基苯甲酸-2-溴乙基酯与3-溴丙基酯(Tetrahedron Lett.1979，20，(40)，3811-3814)，所得产物与缩酮保护灯盏乙素苷元参考文献报道方法(Bioorg.Med.Chem.Lett.2007，17，959-963)在碳酸铯/4![]()
分子筛存在条件，在40～100℃反应2～24小时，最佳反应条件为4-取代氨甲基苯甲酸3-溴丙基酯或2-溴乙基酯与缩酮保护灯盏乙素苷元按照比率为1.5～2.0∶1mol，在以碳酸铯为缚酸剂、N-甲基吡咯烷酮为溶剂条件下，在60～80℃下反应4～10小时，得到缩酮保护灯盏乙素苷元4’-氨甲基苯甲酸乙基醚与丙基醚中间体；
3、将获得的缩酮保护灯盏乙素苷元4’-氨甲基苯甲酸酯中间体与缩酮保护灯盏乙素苷元4’-氨甲基苯甲酸乙基醚与丙基醚中间体在极性或非极性溶剂中用乙酰氯/甲醇体系，在-10～25℃下，反应0.2～16小时，最佳反应条件为在乙酰氯/甲醇体系中0℃～25℃反应4～8小时，得到目标化合物15-26。
本发明还提供了包括上述黄酮苷类衍生物的药物组合物，所述组合物包含治疗有效剂量的作为活性组分的本发明的化合物，以及辅剂。
本发明还提供了上述黄酮苷类衍生物在制备用于治疗血管性痴呆中的应用。
本发明还提供了上述药物组合在治疗血管性痴呆的药物中的应用。
除非特别注明，本文所用的术语具有以下定义：
“烷基”表示饱和或不饱和的、取代或非取代的直链、支链烷烃链，具体的可列举如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、2-甲基丙基、己基、异己基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基丁基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、3，3-二甲基丁基等。这些基团中，以甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基等碳原子数为1-4个的烷基为佳，以甲基、乙基、丙基为最佳。
“药学上可接受的盐”具体地可列举与盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、膦酸等无机酸的盐，与甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸等有机酸和天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸的酸加成盐或与赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸等碱性氨基酸形成的盐。
具体实施方式
制备实施例1：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-缬氨酸酯的制备
缩酮保护的灯盏乙素苷元(30mg，67μmol)溶于5ml四氢呋喃(THF)中，后加入N-Boc-L-缬氨酸(18.6mg，81μmol)和4-二甲胺基吡啶(DMAP)(4mg，33μmol)。然后加入3mL N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)(17mg，81μmol)的四氢呋喃溶液，室温搅拌条件下反应14小时。TLC监测至原料转化完全后，减压浓缩残余物以石油醚∶乙酸乙酯∶二氯甲烷＝7∶1∶5为洗脱剂，硅胶柱层析分离得黄色油状目标产物即缩酮保护的灯盏乙素苷元4’-L-缬氨酸酯衍生物30.6mg，产率83％。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：7.93(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.82-7.80(m，4H，Ph-4H)，7.64-7.61(m，4H，Ph-6H)，6.98(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H2，6)，6.62(s，1H，Ar-H8)，6.57(s，1H，Ar-H3)，5.08(d，J＝6.4Hz，1H，NHBoc)，4.21-4.18(m，1H，CHNH)，3.11-3.09(m，1H，CH(CH3)2)，1.41(d，J＝6.4Hz，6H，2×CH3).
冰盐浴条件下，依次将甲醇(27μL，667μmol)和乙酰氯(39μL，556μmol)加入到2ml的乙酸乙酯中，保持冰盐浴搅拌反应3小时候，将之前得到的缩酮保护的灯盏乙素苷元4’-L-缬氨酸酯衍生物(30.6mg，55.6μmol)溶于1.5ml乙酸乙酯后，加到上述反应体系中，继续保持冰盐浴反应2小时后，逐渐将反应温度升至室温，反应12小时，有橘黄色沉淀附壁，反应体系经超声、离心后，所得沉淀用乙酸乙酯洗涤三次得橘黄色油状目标产物12mg，产率56.1％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.59(brs，1H，5-OH)，10.61(brs，1H，7-OH)，8.65(brs，1H，6-OH)，8.18(d，J＝8.4Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.42(d，J＝8.4Hz，2H，Ar’-H3，6)，6.95(s，1H，Ar-H8)，6.65(s，1H，Ar-H3)，4.20(d，J＝4.4Hz，1H，COCHNH2)，2.38-2.33(m，1H，CH(CH3)2)，1.12(d，J＝7.2Hz，3H，CH3)，1.10(d，J＝7.2Hz，3H，CH3)
制备实施例2：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-丙氨酸酯
以缩酮保护的灯盏乙素苷元和N-Boc L-丙氨酸为反应原料按照类似于实施例1方法制备。得橘黄色油状目标产物，产率63.3％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.62(brs，1H，5-OH)，10.74(brs，1H，7-OH)，8.73(brs，1H，6-OH)，8.29(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.42(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，6)，6.98(s，1H，Ar-H8)，6.67(s，1H，Ar-H3)，4.43(m，1H，COCHNH2)，1.33(d，J＝6.8Hz，3H，CH3).
制备实施例3：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-亮氨酸酯
以缩酮保护的灯盏乙素苷元和N-Boc L-亮氨酸为反应原料按照类似于实施例1方法制备。得橘黄色油状目标产物，产率76.5％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.57(brs，1H，5-OH)，10.76(brs，1H，7-OH)，8.74(brs，1H，6-OH)，8.17(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.42(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，6)，6.93(s，1H，Ar-H8)，6.71(s，1H，Ar-H3)，4.27(m，1H，COCHNH2)，1.96-1.79(m，3H，CH2CH(CH3)2)，1.05-1.01(m，6H，2×CH3).
制备实施例4：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-异亮氨酸酯
以缩酮保护的灯盏乙素苷元和N-Boc L-异亮氨酸为反应原料按照类似于实施例1方法制备。得橘黄色油状目标产物，产率69.8％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.57(brs，1H，5-OH)，10.78(brs，1H，7-OH)，8.76(brs，1H，6-OH)，8.17(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.41(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，6)，6.94(s，1H，Ar-H8)，6.65(s，1H，Ar-H3)，4.25(m，1H，COCHNH2)，2.07(m，1H，CH(CH3)C2H5)，1.62-1.59(m，1H，CH2CH3-1H)，1.41-1.37(m，1H，CH2CH3-1H)，1.06(d，J＝6.8Hz，3H，CH(CH3))，0.97(t，J＝7.6Hz，3H，CH2CH3).
制备实施例5：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-苯丙氨酸酯
以缩酮保护的灯盏乙素苷元和N-Boc L-苯丙氨酸为反应原料按照类似于实施例1方法制备。得橘黄色油状目标产物，产率75.4％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.58(brs，1H，5-OH)，10.69(brs，1H，7-OH)，8.83(brs，1H，6-OH)，8.17(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.41-7.32(m，5H，Ph-5H)，7.18(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，6)，6.90(s，1H，Ar-H8)，6.63(s，1H，Ar-H3)，4.59(t，J＝6.8Hz，1H，COCH)，3.25-3.20(m，2H，CH2Ph).
制备实施例6：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-脯氨酸酯
以缩酮保护的灯盏乙素苷元和N-Boc L-脯氨酸为反应原料按照类似于实施例1方法制备。得橘黄色油状目标产物，产率50.7％。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.58(brs，1H，5-OH)，10.48(brs，1H，7-OH)，8.68(brs，1H，6-OH)，8.16(d，J＝8.0Hz，2H，Ar’-H3，5)，6.93(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，6)，6.83(s，1H，Ar-H8)，6.56(s，1H，Ar-H3)，4.23-4.18(m，1H，COCH)，2.29-2.23(m，2H，NHCH2)，2.01-1.88(m，4H，NHCHCH2CH2)
制备实施例7：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-甲硫氨酸酯
以缩酮保护的灯盏乙素苷元和N-Boc L-甲硫氨酸为反应原料按照类似于实施例1方法制备。得橘黄色油状目标产物，产率64.5％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.80(brs，1H，5-OH)，10.41(brs，1H，7-OH)，8.85(brs，1H，6-OH)，8.24(d，J＝9.2Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.57(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，6)，6.98(s，1H，Ar-H8)，6.67(s，1H，Ar-H3)，4.46(t，J＝6.0Hz，1H，COCH)，2.73-2.67(m，2H，CH2SCH3)，2.34-2.29(m，2H，CH2CH2S)，2.11(s，3H，CH3).
制备实施例8：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-缬氨酸乙基醚的制备
缩酮保护的灯盏乙素苷元(50mg，111μmol)，溶于3mlN-甲基吡咯烷酮(NMP)中，然后加入N-叔丁氧羰基-L-缬氨酸3-溴乙基酯(43.5mg，167μmol)，碳酸铯(36.2mg，111μmol)，4![]()
分子筛数粒，80℃下搅拌反应4小时，反应体系除去4![]()
分子筛后加入适量三氯甲烷，然后用0.5％的盐酸溶液洗5次，除去N-甲基吡咯烷酮，三氯甲烷层用无水硫酸镁干燥，溶液减压浓缩，残余物以石油醚∶乙酸乙酯∶二氯甲烷＝7∶1∶5为洗脱剂，硅胶柱层析分离得缩酮保护的灯盏乙素苷元4’-L-缬氨酸乙基醚衍生物23mg，收率30％。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：7.82(d，J＝8.4Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.63-7.60(m，4H，Ph-4H)，7.44-7.37(m，4H，Ph-6H)，7.02(d，J＝8.4Hz，2H，Ar’-H2，6)，6.63(s，1H，Ar-H8)，6.57(s，1H，Ar-H3)，5.04(d，J＝8.8Hz，1H，NHBoc)，4.57-4.48(m，2H，CH2OCO)，4.28-4.25(m，3H，Ar’OCH2，CHNH)，1.87-1.83(m，1H，CH(CH3)2)，0.98(d，J＝6.8Hz，3H，CH3)，0.91(d，J＝6.8Hz，3H，CH3).
冰盐浴条件下，依次将甲醇(16μL，400μmol)和乙酰氯(20μL，333μmol)加入到2ml的乙酸乙酯中，保持冰盐浴搅拌反应3小时后，将之前得到的缩酮保护的灯盏乙素苷元4’-L-缬氨酸乙基醚衍生物(23mg，33.1μmol)溶于1.5ml乙酸乙酯后，加到上述反应体系中，继续保持冰盐浴反应2小时后，逐渐将反应温度升至室温，反应12小时，有橘黄色沉淀附壁，反应体系经超声、离心后所得沉淀用乙酸乙酯洗涤三次得橘黄色油状目标产物8mg，收率56.3％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.71(brs，1H，5-OH)，10.62(brs，1H，7-OH)，8.48(brs，1H，6-OH)，8.13(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.13(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，6)，6.83(s，1H，Ar-H8)，6.62(s，1H，Ar-H3)，4.66-4.63(m，1H，CH2OCO-1H)，4.49-4.46(m，1H，CH2OCO-1H)，4.34(m，2H，Ar’OCH2)，3.95(m，1H，COCH)，2.18-2.14(m，1H，CH(CH3)2)，0.98(d，J＝6.0Hz，3H，CH3)，0.94(d，J＝6.8Hz，3H，CH3).
制备实施例9：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-亮氨酸乙基醚的制备
以缩酮保护的灯盏乙素苷元和N-Boc L-亮氨酸-2-溴乙酯为反应原料按照类似于实施例8方法制备。得橘黄色油状目标产物，产率47.3％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.70(brs，1H，5-OH)，10.65(brs，1H，7-OH)，8.52(brs，1H，6-OH)，8.03(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.11(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，6)，6.84(s，1H，Ar-H8)，6.63(s，1H，Ar-H3)，4.59-4.57(m，1H，CH2OCO-1H)，4.49-4.45(m，1H，CH2OCO-1H)，4.35-4.33(m，2H，Ar’OCH2)，3.99(m，1H，COCH)，1.72-1.70(m，1H，CH(CH3)2)，1.64-1.59(m，2H，CH2CH(CH3)2)，0.83(d，J＝8.0Hz，6H，2×CH3).
制备实施例10：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-异亮氨酸乙基醚的制备
以缩酮保护的灯盏乙素苷元和N-Boc L-异亮氨酸-2-溴乙酯为反应原料按照类似于实施例8方法制备。得橘黄色油状目标产物，产率58.8％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.75(brs，1H，5-OH)，10.75(brs，1H，7-OH)，8.53(brs，1H，6-OH)，8.03(d，J＝8.0Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.11(d，J＝8.0Hz，2H，Ar’-H3，6)，6.83(s，1H，Ar-H8)，6.64(s，1H，Ar-H3)，4.66-4.63(m，1H，CH2OCO-1H)，4.47-4.44(m，1H，CH2OCO-1H)，4.33(m，2H，Ar’OCH2)，3.98(m，1H，COCH)，1.89(m，1H，CH(CH3)C2H5)，1.47-1.44(m，1H，CH2CH3-1H)，1.30-1.23(m，1H，CH2CH3-1H)，1.05(t，J＝6.8Hz，3H，CH(CH3))，0.90(d，J＝6.8Hz，3H，CH2CH3).
制备实施例11：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-苯丙氨酸乙基醚的制备
以缩酮保护的灯盏乙素苷元和N-Boc L-苯丙氨酸-2-溴乙酯为反应原料按照类似于实施例8方法制备。得橘黄色油状目标产物，产率67.5％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.71(brs，1H，5-OH)，10.65(brs，1H，7-OH)，8.56(brs，1H，6-OH)，8.04(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.23(m，5H，Ph-5H)，7.10(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H2，6)，6.84(s，1H，Ar-H8)，6.62(s，1H，Ar-H3)，4.51-4.10(m，2H，CH2OCO)，4.35-4.32(m，1H，COCH)，4.24-4.17(m，2H，OCH2CH2)，3.24-3.16(m，1H，CH2Ph-1H)，3.09-3.04(m，1H，CH2Ph-1H).
1-苯并吡喃-4-L-亮氨酸丙基醚的制备
以缩酮保护的灯盏乙素苷元和N-Boc L-亮氨酸3-溴丙基酯为反应原料按照类似于实施例8方法制备。得橘黄色油状目标产物，产率45.3％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.72(brs，1H，5-OH)，10.58(brs，1H，7-OH)，8.44(brs，1H，6-OH)，8.03(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.13(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H2，6)，6.84(s，1H，Ar-H8)，6.61(s，1H，Ar-H3)，4.33(m，2H，CH2OCO)，4.18(m，2H，PhOCH2)，3.98(m，1H，COCH)，2.13-2.10(m，2H，OCH2CH2CH2O)，1.71-1.58(m，3H，CH2CH(CH3)2)，0.87(d，J＝6.4Hz，6H，2×CH3).
制备实施例13：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-异亮氨酸丙基醚的制备
以缩酮保护的灯盏乙素苷元和N-Boc L-异亮氨酸3-溴丙基酯为反应原料按照类似于实施例8方法制备。得橘黄色油状目标产物，产率51.7％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.72(brs，1H，5-OH)，10.58(brs，1H，7-OH)，8.44(brs，1H，6-OH)，8.13(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.13(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H2，6)，6.83(s，1H，Ar-H8)，6.61(s，1H，Ar-H3)，4.37(m，2H，CH2OCO)，4.17(m，2H，PhOCH2)，3.97(m，1H，COCH)，2.13-2.10(m，2H，OCH2CH2CH2O)，1.45-1.40(m，1H，CH(CH3))，1.27-1.21(m，2H，CH2CH3)，0.89-0.83(m，6H，2×CH3).
制备实施例14：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-L-苯丙氨酸丙基醚的制备
以缩酮保护的灯盏乙素苷元和N-Boc L-苯丙氨酸3-溴丙基酯为反应原料按照类似于实施例8方法制备。得橘黄色油状目标产物，产率58.1％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.70(brs，1H，5-OH)，10.57(brs，1H，7-OH)，8.61(brs，1H，6-OH)，8.12(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.31-7.27(m，5H，Ph-5H)，7.13(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H2，6)，6.85(s，1H，Ar-H8)，6.64(s，1H，Ar-H3)，4.30-4.23(m，3H，CH2OCO，COCH)，3.99-3.97(m，2H，PhOCH2)，3.22-3.16(m，1H，CH2Ph-1H)，3.09-3.03(m，1H，CH2Ph-1H)，2.08-1.98(m，2H，OCH2CH2CH2O).
制备实施例15：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((二乙胺基)甲基)苯甲酸酯的制备
将二乙胺甲基苯甲酸(20mg，95μmol)溶于少量二甲亚砜中，用四氢呋喃定容至5ml，取缩酮保护的灯盏乙素苷元(30mg，67μmol)溶于5ml四氢呋喃(THF)中，依次加入二乙胺甲基苯甲酸的THF溶液5ml和4-二甲胺基吡啶(DMAP)(4mg，33μmol)，向反应体系滴加含有N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)(17mg，81μmol)的3mL四氢呋喃溶液，滴毕，室温搅拌条件下反应14小时。TLC监测至原料转化完全后，体系减压浓缩除去四氢呋喃，后用氯仿-水体系萃取3次，洗出体系中DMSO溶剂，收集氯仿层，加无水硫酸镁干燥1h后过滤，将滤液浓缩，以氯仿∶甲醇＝30∶1为洗脱剂，硅胶柱层析分离得二苯缩酮保护灯盏乙素苷元-4′-对二乙胺甲基苯甲酸酯37.8mg，产率80％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.72(brs，1H，5-OH)，8.12(d，J＝8.0Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.95(d，J＝8.4Hz，2H，Ar’-H2，6)，7.63-7.61(m，2H，Ar”-H3，5)，7.58-7.56(m，2H，Ar”-H2，6)，7.41-7.37(m，10H，2×Ph-5H)，6.67(s，2H，Ar-H3，8)，3.84(s，2H，Ar”-CH2N)，2.73(q，J＝7.2Hz，4H，2×NCH2CH3)，1.15(t，J＝6.8Hz，6H，2×CH3).
在25ml干燥的茄形瓶中，加入3ml乙酸乙酯，冰盐浴(-5℃)搅拌下，依次加入甲醇(0.03ml，0.7mmol)，乙酰氯(0.028ml，0.4mmol)，保温反应3h，向反应体系中滴加含有二苯缩酮保护灯盏乙素苷元-4′-对二乙胺甲基苯甲酸酯(26mg，0.04mmol)的2ml乙酸乙酯溶液，保温反应2h后升至室温反应12h，有黄色沉淀物附着于壁，加适量乙酸乙酯超声、洗涤，得黄色固体目标化合物10mg，收率52.6％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.67(brs，1H，5-OH)，10.67(brs，1H，7-OH)，8.68(brs，1H，6-OH)，8.29-8.17(m，4H，Ar’-H3，5，Ar”-H3，5)，7.89(d，J＝8.0Hz，Ar’-H2，6)，7.53(d，J＝8.4Hz，Ar”-H2，6)，6.97(s，1H，Ar-H8)，6.65(s，1H，Ar-H3)，3.76(s，2H，Ar”-CH2N)，3.06(m，4H，2×NCH2CH3)，1.25-1.23(m，6H，2×CH3).
制备实施例16：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((苄胺基)甲基)苯甲酸酯的制备
以苄胺甲基苯甲酸，缩酮保护的灯盏乙素苷元为反应原料按照类似实例15的方法制备得黄色固体目标产物，收率46.7％
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.63(brs，1H，5-OH)，10.70(brs，1H，7-OH)，8.83(brs，1H，6-OH)，8.28-8.23(m，4H，Ar’-H3，5，Ar”-H3，5)，7.79(d，J＝8.8Hz，Ar’-H2，6)，7.57-7.55(m，5H，Ph-5H)，7.51(d，J＝8.8Hz，Ar”-H2，6)，6.97(s，1H，Ar-H8)，6.66(s，1H，Ar-H3)，4.29(s，2H，Ar”-CH2N)，4.18(s，2H，CH2Ph).
制备实施例17：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((吗啉基)甲基)苯甲酸酯的制备
以吗啉甲基苯甲酸，缩酮保护的灯盏乙素苷元为反应原料按照类似实例15的方法制备得深黄色固体目标产物，收率56.4％
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.63(brs，1H，5-OH)，10.65(brs，1H，7-OH)，8.31(brs，1H，6-OH)，8.31-8.17(m，4H，Ar’-H3，5，Ar”-H3，5)，7.83(d，J＝7.2Hz，Ar’-H2，6)，7.52(d，J＝8.8Hz，Ar”-H2，6)，6.98(s，1H，Ar-H8)，6.65(s，1H，Ar-H3)，3.92(s，2H，Ar”-CH2N)，3.75(m，4H，2×CH2O)，2.52(m，4H，2×CH2N).
制备实施例18：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((四氢吡咯基)甲基)苯甲酸酯的制备
以四氢吡咯甲基苯甲酸，缩酮保护的灯盏乙素苷元为反应原料按照类似实例15的方法制备得棕黄色固体目标产物，收率32.1％
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.65(brs，1H，5-OH)，10.70(brs，1H，7-OH)，8.24-8.19(m，4H，Ar’-H3，5，Ar”-H3，5)，7.88(d，J＝8.8Hz，Ar’-H2，6)，7.52(d，J＝8.8Hz，Ar”-H2，6)，6.99(s，1H，Ar-H8)，6.68(s，1H，Ar-H3)，4.50(s，2H，Ar”-CH2N)，2.54-2.50(m，4H，2×CH2N)，1.69-1.51(m，4H，2×NCH2CH2).
制备实施例19：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酸酯的制备
以(对甲基哌嗪-1-基)甲基苯甲酸，缩酮保护的灯盏乙素苷元为反应原料按照类似实例15的方法制备得棕黄色固体目标产物，收率17.6％
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.68(brs，1H，5-OH)，10.65(brs，1H，7-OH)，8.17(d，J＝8.0Hz，2H，Ar’-H3，5)，7.94(d，J＝8.4Hz，2H，Ar”-H3，5)，7.63-7.61(m，4H，Ar’-H2，6，Ar”-H2，6)，6.97(s，1H，Ar-H8)，6.59(s，1H，Ar-H3)，3.61(s，2H，Ar”-CH2N)，2.52-2.32(m，8H，4×CH2N)，2.30(s，3H，CH3).
制备实施例20：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((哌啶基)甲基)苯甲酸酯的制备
以哌啶甲基苯甲酸，缩酮保护的灯盏乙素苷元为反应原料按照类似实例15的方法制备得棕黄色固体目标产物，收率37.6％
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.68(brs，1H，5-OH)，10.65(brs，1H，7-OH)，8.19(d，J＝8.4Hz，Ar’-H3，5)，7.98(d，J＝8.4Hz，2H，Ar”-H3，5)，7.56-7.46(m，4H，Ar’-H2，6，Ar”-H2，6)，6.97(s，1H，Ar-H8)，6.64(s，1H，Ar-H3)，3.71(s，2H，Ar”-CH2N)，2.59-2.39(m，4H，2×CH2N)，1.84-1.57(m，6H，3×CH2).
制备实施例21：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((二乙胺基)甲基)苯甲酸丙基醚的制备
取干燥二乙胺甲基苯甲酸(0.1g，0.48mmol)，置于50ml茄型瓶中，加少量二甲基亚砜(DMSO)促溶后加入二氯甲烷定溶至15ml，使体系呈澄清溶液，后依次加入3-溴-1-丙醇(0.07g，0.48mmol)，对二甲氨基吡啶(DMAP)(0.025g，0.24mmol)，室温搅拌下滴加含有N，N′-二环己基碳酰亚胺(DCC)(0.069g，0.33mmol)的10ml二氯甲烷溶液，滴毕，室温反应12h，TLC监测反应完全，浓缩，采用氯仿∶甲醇＝30∶1为洗脱剂，经硅胶柱层析纯化得类白色腊状的对二乙胺甲基苯甲酸溴丙酯，85mg，收率71％。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：7.98(d，J＝8.0Hz，2H，Ar-H2，6)，7.43(d，J＝8.0Hz，2H，Ar-H3，5)，4.4(t，J＝6.4Hz，2H，CH2OCO)，3.71-3.57(m，4H，BrCH2，Ar-CH2N)，2.55-2.51(q，J＝6.4Hz，4H，2×NCH2)，2.32-2.29(m，2H，OCH2CH2CH2Br)，1.07(t，6H，J＝6.4Hz，2×CH3).
取干燥的缩酮保护灯盏乙素苷元(50mg，0.11mmol)，对二乙胺甲基苯甲酸溴丙酯(50mg，0.15mmol)，置于25ml茄形瓶中，加入4ml N-甲基吡咯烷酮(NMP)，充分溶解，加入碳酸铯(24mg，0.07mmol)，然后加入数粒分子筛(4A)，100℃条件下，搅拌反应6h。反应毕，反应体系置于氯仿中，后用0.5M稀盐酸洗涤4-6次，洗去反应溶剂N-甲基吡咯烷酮(NMP)，分出有机层，干燥、浓缩，经硅胶柱层析分离，洗脱剂：氯仿∶甲醇＝30∶1，得黄色油状目标产物33mg，收率42.9％。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：12.54(brs，1H，5-OH)，7.98-7.88(m，4H，Ar’-H3，5，Ar”-H3，5)，7.80(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H2，6)，7.41-7.37(m，10H，2×Ph-5H)，7.23(d，J＝8.8Hz，2H，Ar”-H2，6)，6.92(s，1H，Ar-H8)，6.82(s，1H，Ar-H3)，4.77(t，J＝6.0Hz，2H，Ar’-OCH2)，4.37(s，2H，Ar”-CH2N)，4.30(t，J＝6.8Hz，2H，CH2OCO)，3.15-3.09(m，4H，2×NCH2)，2.43-2.36(m，2H，OCH2CH2CH2O)，1.66(t，J＝7.6Hz，2×CH3).
在25ml干燥的茄形瓶中，加入3ml乙酸乙酯，冰盐浴(-5℃)搅拌下，依次加入甲醇(0.03ml，0.7mmol)，乙酰氯(0.028ml，0.4mmol)，保温反应3h，向反应体系中滴加含有二苯缩酮保护灯盏乙素苷元-4′-对二乙胺甲基苯甲酸丙醚(28mg，0.04mmol)的2ml乙酸乙酯溶液，保温反应2h后升至室温反应12h，有黄色沉淀物附着于壁，加适量乙酸乙酯超声、洗涤，得棕色油状目标化合物10mg，收率47.6％。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.64(brs，1H，5-OH)，10.68(brs，1H，7-OH)，8.36(brs，1H，6-OH)，8.04-7.98(m，4H，Ar’-H3，5，Ar”-H3，5)，7.76(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H2，6)，7.13(d，J＝8.8Hz，2H，Ar”-H2，6)，6.82(s，1H，Ar-H8)，6.61(s，1H，Ar-H3)，4.47(t，J＝6.0Hz，2H，Ar’-OCH2)，4.44(s，2H，Ar”-CH2N)，4.26(t，J＝6.8Hz，2H，CH2OCO)，3.05-2.99(m，4H，2×NCH2)，2.23-2.16(m，2H，OCH2CH2CH2O)，1.23(t，J＝7.6Hz，2×CH3).
制备实施例22：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((苄胺基)甲基)苯甲酸丙基醚的制备
以苄胺甲基苯甲酸，3-溴-1-丙醇，缩酮保护的灯盏乙素苷元为反应原料按照类似实例21的方法制备得黄色油状目标产物，收率44.9％
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.68(brs，1H，5-OH)，10.64(brs，1H，7-OH)，8.32(brs，1H，6-OH)，8.22(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H3，5)，8.13(d，J＝8.8Hz，2H，Ar”-H3，5)，7.62-7.47(m，5H，Ph-5H)，7.38-7.31(m，4H，Ar’-H2，6，Ar”-H2，6)，6.97(s，1H，Ar-H8)，6.61(s，1H，Ar-H3)，4.54(d，J＝6.4Hz，2H，Ar’-OCH2)，4.32(d，J＝6.4Hz，2H，CH2OCO)，3.83(s，2H，PhCH2N)，3.72(s，2H，NCH2Ph)，2.19(m，2H，OCH2CH2CH2O).
制备实施例23：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((吗啉基)甲基)苯甲酸丙基醚的制备
以吗啉甲基苯甲酸，3-溴-1-丙醇，缩酮保护的灯盏乙素苷元为反应原料按照类似实例21的方法制备得黄色油状目标产物，收率44.3％
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.85(s，1H，5-OH)，10.65(s，1H，7-OH)，8.05-7.98(m，4H，Ar’-H3，5，Ar”-H3，5)，7.37(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H2，6)，7.13(d，J＝8.8Hz，2H，Ar”-H2，6)，6.82(s，1H，Ar-H8)，6.61(s，1H，Ar-H3)，4.47(t，J＝6.4Hz，2H，Ar’-OCH2)，4.40(s，2H，PhCH2N)，4.25(t，J＝6.0Hz，2H，CH2OCO)，3.78-3.66(m，4H，2×OCH2CH2)，3.17-3.14(m，4H，2×NCH2CH2)，2.21-2.18(m，2H，OCH2CH2CH2O).
制备实施例24：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((二乙胺基)甲基)苯甲酸乙基醚的制备
以二乙胺甲基苯甲酸，溴乙醇，缩酮保护的灯盏乙素苷元为反应原料按照类似实例21的方法制备得棕黄色油状目标产物，收率41.9％.
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.74(brs，1H，5-OH)，10.68(brs，1H，7-OH)，8.36(brs，1H，6-OH)，8.09-8.03(m，4H，Ar’-H3，5，Ar”-H3，5)，7.74(d，J＝8.8Hz，2H，Ar’-H2，6)，7.18(d，J＝8.8Hz，2H，Ar”-H2，6)，6.85(s，1H，Ar-H8)，6.62(s，1H，Ar-H3)，4.67(t，J＝6.0Hz，2H，Ar’-OCH2)，4.48(s，2H，Ar”-CH2N)，4.38(t，J＝6.8Hz，2H，CH2OCO)，3.18-3.05(m，4H，2×NCH2CH3)，1.21(t，J＝7.6Hz，6H，2×CH3).
制备实施例25：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((吗啉基)甲基)苯甲酸乙基醚的制备
以吗啉甲基苯甲酸，溴乙醇，缩酮保护的灯盏乙素苷元为反应原料按照类似实例21的方法制备得棕色油状目标产物，收率13.6％
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.65(s，1H，5-OH)，10.65(s，1H，7-OH)，8.76(brs，1H，6-OH)，8.02-7.98(m，4H，Ar’-H3，5，Ar”-H3，5)，7.70(d，J＝8.0Hz，2H，Ar’-H2，6)，7.14(d，J＝8.8Hz，2H，Ar”-H2，6)，6.81(s，1H，Ar-H8)，6.58(s，1H，Ar-H3)，4.63(m，2H，Ar’-OCH2)，4.44(s，2H，PhCH2N)，4.37(m，2H，CH2OCO)，3.51-3.28(m，4H，2×OCH2CH2)，3.26-3.13(m，4H，2×NCH2CH2).
制备实施例26：5，6，7-三羟基-4-氧-2-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-((吡咯基)甲基)苯甲酸乙基醚的制备
以四氢吡咯甲基苯甲酸，溴乙醇，缩酮保护的灯盏乙素苷元为反应原料按照类似实例21的方法制备得棕色油状目标产物，收率45.5％
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.72(brs，1H，5-OH)，10.81(brs，1H，7-OH)，9.16(brs，1H，6-OH)，8.03-7.99(m，4H，Ar’-H3，5，Ar”-H3，5)，7.94(d，J＝8.4Hz，Ar’-H2，6)，7.16(d，J＝8.8Hz，Ar”-H2，6)，6.83(s，1H，Ar-H8)，6.62(s，1H，Ar-H3)，4.65(s，2H，Ar”-CH2N)，4.20(m，2H，Ar’-OCH2)，4.05-4.01(m，2H，CH2OCO)，3.15-3.04(m，4H，2×CH2N)，2.54-2.50(m，4H，2×CH2N)，1.89-1.83(m，4H，2×NCH2CH2).
实验实施例
1、实验材料及仪器
PC 12细胞株由中国医学科学院医药生物技术研究所提供；测试化合物由贵阳医学院药学院提供；维生素E购自Sigma公司；DMEM高糖培养基购自Gibco公司；胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司；MTT购自Sigma公司；LDH测定试剂盒购至南京建成科技有限公司；酶标仪为伯乐680Model。
2、试验方法
(1)细胞毒性试验
采用四氮唑还原法，3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazoliumbromide，MTT)检测药物对PC12细胞本身生长的抑制作用。将PC12细胞消化为单个细胞悬液，调整细胞密度为5×104个/ml，接种于96孔板(100μl/孔)，37℃、5％CO2培养箱培养过夜。待细胞贴壁后吸去上清，加入含浓度梯度稀释药物(1μM、10μM、50μM、100μM)的培养液，置培养箱中继续培养。于加药后24h，吸去上清，加入含MTT(0.25mg/ml)无血清培养基，培养4小时，吸去培养液，加入100μl DMSO振荡使Formazan结晶溶解，490nm测定各孔吸光值以计算细胞成活率。试验结果见表-1。
(2)对过氧化氢损伤的PC12细胞保护作用试验
选取对数生长期PC12细胞，以每孔100μl，5～10×104个/ml种植于96孔培养板中，将培养板置37℃、5％CO2培养箱中孵育24h。实验分为正常对照组、阳性对照组、加药组。过滤培养基后，取细胞板，小心吸去培养液，换液加药。正常对照组每孔加入100μl的DMEM培养液；模型组每孔加入含有1000μMH2O2的培养液100μl，阳性对照组每孔加入含有1000μM H2O2及20μM维生素E的培养液100μl；加药组每孔加入含有1000μM H2O2及1、10、20μM受试化合物的培养液100μl，作用PC12细胞6h后用LDH释放率检测。取10μl细胞培养液测细胞培养液上清中LDH的活性，然后在弃去培养液再加入100μl的1％Triton X-100，4℃静置10min，裂解细胞，取10μl细胞裂解液测定细胞内LDH的活性。LDH活性的测定方法按南京建成LDH试剂盒说明方法进行，用酶标仪检测490nm波长处每孔吸光度OD值，每个浓度平行4孔，实验重复3次。试验结果见表-2。
3、试验结果
(1)化合物对PC12细胞毒性试验结果
实验结果说明，灯盏乙素苷元及其系列化合物以1-100μM作用PC12细胞24h，对其生长影响较小。其中SC-AG及WX-13、15、16、WZ-3、4、5、8～13对细胞生长无显著影响。(表-1)
(2)化合物对过氧化氢损伤的PC12细胞的保护作用
通过考察LDH释放量评价灯盏乙素苷元及其系列化合物对过氧化氢损伤的PC12细胞的保护作用。实验结果说明，1-20μM的灯盏乙素苷元及其系列化合物与H2O2共同以作用PC12细胞6h，受试化合物均能以无细胞毒的方式保护过氧化物对PC12细胞产生的氧化损伤。其中SC-AG、WX-3、4、7、9、WZ-1、3、11、12、13的作用优于阳性药维生素E。(表-2)
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