《一种纯化白芷香豆素的方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种纯化白芷香豆素的方法.pdf（6页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、10申请公布号CN101955490A43申请公布日20110126CN101955490ACN101955490A21申请号201010275733822申请日20100907C07D493/0420060171申请人浙江大学地址310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号72发明人王龙虎梅彦红刘雪松陈勇余立雁74专利代理机构杭州求是专利事务所有限公司33200代理人张法高赵杭丽54发明名称一种纯化白芷香豆素的方法57摘要本发明提供一种纯化白芷香豆素的方法，是以白芷提取浓缩物为原料，采用结晶工艺来纯化、制备香豆素的工艺方法。首先将香豆素浓缩物溶解于热的石油醚或混合溶剂中，然后慢慢降温，控制结晶。
2、过程以析出目标产物。溶液静置后过滤，得到结晶状产品。经高效液相色谱法定量分析，含欧前胡素、珊瑚菜素和异欧前胡素三种香豆素化合物之和达98以上。本发明方法具有工艺简单、成本低、收率高、条件温和、产品质量稳定等优点，具有很好的工业化应用前景。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页附图1页CN101955490A1/1页21一种纯化白芷香豆素的方法，其特征在于，采用溶剂结晶纯化白芷香豆素浓缩物，所述方法包括将白芷提取浓缩物溶解在溶剂中，加热至完全溶解，然后缓慢降温结晶，静置，过滤后得到白芷香豆素晶体。2根据权利要求1所述的一种纯化白芷香豆素的方法，其特。
3、征在于，白芷香豆素浓缩物采用超临界萃取溶剂萃取复合技术提取得到。3根据权利要求1所述的一种纯化白芷香豆素的方法，其特征在于，其中用于香豆素结晶的溶剂为石油醚或添加了氯仿或乙酸乙酯的石油醚，其中氯仿或乙酸乙酯的加入量体的积比为010。4根据权利要求1所述的一种纯化白芷香豆素的方法，其特征在于，其中香豆素浓缩物与溶剂的重量体积比为130150G/ML。5根据权利要求1所述的一种纯化白芷香豆素的方法，其特征在于，其中溶解香豆素浓缩物的温度为4560。6根据权利要求1所述的一种纯化白芷香豆素的方法，其特征在于，降温结晶的温度控制在420，其中优选510。7根据权利要求1所述的一种纯化白芷香豆素的方法，。
4、其特征在于，降温结晶时间为2460小时。8根据权利要求1所述的一种纯化白芷香豆素的方法，其特征在于，降温结晶时，投入015重量的晶种。9根据权利要求1所述的一种纯化白芷香豆素的方法，其特征在于，过滤后的剩余母液可以合并，浓缩成浸膏后再进行结晶。权利要求书CN101955490A1/3页3一种纯化白芷香豆素的方法技术领域0001本发明属天然化合物的分离纯化技术，主要涉及从中药白芷提取物制备高纯度香豆素类化合物的方法。背景技术0002香豆素是自然界很重要的一大类天然有机化合物，它具有明显的抗癌、抗HIV、降压、抗心律失常、抗骨质疏松、镇痛、平喘及抗菌等多方面的生理活性。现阶段，从天然植物中发现香豆。
5、素类化合物，完善香豆素类化合物提取分离工艺，寻找有效的先导化合物，合成并筛选出高效低毒的香豆素类衍生物，已成为药物研发工作的重要方向之一。但是，目前香豆素的分离纯化方法多采用大孔树脂、高效制备液相等工艺，存在着工艺复杂、操作难度大、生产成本高等问题，迫切需要改进和优化。0003白芷中的香豆素类成分主要为呋喃香豆素，已分离鉴定的香豆素类化合物有近30种，其中以欧前胡素、异欧前胡素、珊瑚菜内酯、白当归素为主。专利CN2007100795719公开了一种白芷香豆素提取方法，将白芷以乙醇回流提取，提取液经滤过、浓缩、醇沉后，用石油醚和氯仿进行萃取。专利CN2007100198099则采用溶剂提取与大孔。
6、树脂结合工艺制备白芷的香豆素提取物。专利CN021149577开发了一种应用超临界提取和细胞膜色谱筛选从白芷获得香豆素有效部位的方法。专利200410070996X则公开了一种芦荟双氢香豆素的分离，芦荟浸膏通过有机溶剂提取后，再经过多次萃取和柱层析可得到双氢香豆素。上述制备香豆素类成分工艺技术各有特长，但均属于初步的提取纯化，所得到的产物是浸膏或浓缩物，还需要进一步的纯化工艺，才能获得纯度较高的香豆素。专利CN011388730提出一种从白芷中提取欧前胡素的方法，用乙醇提取白芷，然后用氯仿对提取液进行萃取，再通过硅胶柱层析和反相高效液相色谱法在制备液相上制备欧前胡素。专利CN200810200。
7、2538公开了一种用甲醇提取白芷，再用大孔树脂和高效制备液相色谱分离纯化其中的欧前胡素和白当归素的方法。上述方法虽然能得到高纯度的香豆素，但是工艺复杂，生产成本较高，制约了其工业化的应用。0004为了提高白芷植物资源的利用价值，在大量实验研究的基础上，本发明提出一种通过溶剂结晶工艺来纯化白芷香豆素的新方法。采用本发明的工艺方法，可从含量仅为40的香豆素浓缩物制备香豆素精制产品，其纯度达到98以上。发明内容0005本发明的目的是针对现有的白芷香豆素纯化技术的工艺复杂、过程繁长等缺点，提出一种纯化白芷香豆素的方法，是一种简单可行的用结晶纯化白芷香豆素浓缩物，制备高纯度白芷香豆素的方法。本发明采用结。
8、晶方法，从含量仅为40的白芷香豆素浓缩物中获得纯度98以上的香豆素结晶，从而提供一条高效、快速、低成本的纯化香豆素的工艺方法。0006为实现这一目的，本发明首先在一定温度下，将白芷香豆素浓缩物溶解在过量结说明书CN101955490A2/3页4晶溶剂中，加热至完全溶解后，缓慢降温冷却，放置结晶，结晶完全后，过滤，真空干燥得香豆素白色针状结晶。0007本发明的具体方法是00081首先，在4560下，将香豆素浓缩物按重量体积比130150G/ML溶于选定的溶剂中。所用溶剂为溶剂石油醚或其中添加体积比110的其它溶剂，其它溶剂可以是但不限于氯仿或乙酸乙酯。00092香豆素浓缩物溶液经过过滤后，转移到。
9、结晶釜中，然后缓慢冷却。冷却过程溶液可以搅拌，也可以静止放置。结晶过程将溶液置于420下，优选510，结晶时间为2460小时。根据溶液性状，可投入015重量的晶种，加快香豆素化合物的结晶。00103结晶完成后，溶液静置数小时，然后过滤。所得产物再经真空干燥为白色针状香豆素晶体。取样品少许，测定其中白芷香豆素含量。0011白芷香豆素浓缩物采用超临界萃取溶剂萃取复合技术提取得到。0012本发明以欧前胡素、珊瑚菜素和异欧前胡素为指标，采用高效液相色谱方法来测定原料和产物中香豆素的含量。三种白芷香豆素的分子结构式001300141欧前胡素2珊瑚菜素3异欧前胡素0015本发明的特点在于，充分利用白芷香豆。
10、素和杂质的溶解特性的差异性，简化将中药提取物的纯化工艺。与现行的香豆素的分离纯化技术相比，本发明所提出的制备高纯度的香豆素的工艺路线，不但简单易行，而且成本低廉、便于工业化生产，因此，具有显著的技术优势和经济价值。附图说明0016图1为白芷香豆素浓缩物的高效液相色谱图。0017图2为结晶产品的高效液相色谱图。具体实施方式0018本发明结合附图和下面实施例作进一步的说明。0019实施例10020称取5KG白芷原料粉碎至30目，分5批放入5升超临界萃取器中。设定萃取温度和压力分别为40和30MPA，分离温度和压力分别为35和5MPA，用CO2萃取2小时后，收集提取物。重复提取5次，共得白芷浸膏状提。
11、取物251G。按重量体积比110计，加入说明书CN101955490A3/3页5250ML石油醚沸程6090，使提取物完全溶解。然后用3倍石油醚体积的水萃取2次，弃去水层。石油醚层再用与其体积比为125的60甲醇萃取3次，收集甲醇溶液，减压浓缩除去溶剂，得产物123G。经液相色谱分析，所得产物中总香豆素含量4072。其色谱图参见图1。图中1为欧前胡素，2为珊瑚菜素，3为异欧前胡素。0021本发明以欧前胡素、珊瑚菜素和异欧前胡素为指标，采用高效液相色谱方法来测定原料和产物中香豆素的含量。其中，高效液相色谱条件为甲醇水梯度洗脱，洗脱过程流动相梯度变化为05MIN，80甲醇；57MIN，8068甲醇。
12、；712MIN，68甲醇。检测波长为249NM，流动相流速09ML/MIN。欧前胡素和异欧前胡素直接用其对照品配置标准溶液，绘制标准曲线，确定线性范围。然后测定样品中二者的峰面积，再通过外标法计算二者的含量。由于珊瑚菜素与欧前胡素同属于呋喃香豆素类化合物，分子式仅相差一个甲氧基，参照以芦丁为标准来测定黄酮类化合物含量的方法，本发明以欧前胡素为标准来测定珊瑚菜素的近似含量。0022实施例20023称取0800G实施例1所得的白芷香豆素浓缩物，加入100ML石油醚沸程6090，下同，在55下加热使之全部溶解。在4下冷却结晶24小时，过滤，真空干燥，得香豆素晶体03268G。参照实施例1的测量方法，。
13、经液相色谱分析，所得结晶产物中总香豆素含量为9850，其中欧前胡素含量为8680，珊瑚菜素含量为425，异欧前胡素含量为745。其色谱图参见图2。图中1为欧前胡素，2为珊瑚菜素，3为异欧前胡素。0024实施例30025称取0800G实施例1所得的白芷香豆素浓缩物，加入含乙酸乙酯2体积比的石油醚84ML，在65下加热使之全部溶解。在15下冷却结晶36小时，过滤，真空干燥，得香豆素晶体03032G。参照实施例1，经液相色谱分析，其纯度为9802，其中欧前胡素含量为8522，珊瑚菜素含量为446，异欧前胡素含量为811。0026实施例40027称取0803G实施例1所得的白芷香豆素浓缩物香豆素含量为。
14、4168，加入含氯仿4体积比的石油醚74ML，在45下加热使之全部溶解。在20下冷却结晶48小时，过滤，真空干燥，得香豆素晶体03538G。参照实施例1，经液相色谱分析，其纯度为9889，其中欧前胡素含量为8132，珊瑚菜素含量为489，异欧前胡素含量为1268。0028实施例50029称取0705G实施例1所得的白芷香豆素浓缩物香豆素含量为3972，加入含氯仿2体积比的石油醚105ML，在50下加热使之全部溶解。在4下冷却结晶60小时，过滤，真空干燥，得香豆素晶体03024G。参照实施例1，经液相色谱分析，其纯度为9843，其中欧前胡素含量为7809，珊瑚菜素含量为501，异欧前胡素含量为1533。说明书CN101955490A1/1页6图1图2说明书附图。