改良的 Raf 抑制剂 发明领域 本发明提供吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮的衍生物。这些化合物是诸如 Raf 的激酶 的抑制剂， 包括显示了针对细胞 ( 包括针对肿瘤细胞 ) 的抗增殖活性的化合物， 且可用于治 疗包括癌症在内的疾病。
发明背景
激酶是重要的细胞酶， 其执行基本的细胞功能诸如调节细胞分裂和增殖， 且似乎 在许多疾病状态中诸如在以失控的细胞增殖和分化为特征的疾病状态中起决定性作用。 这 些疾病状态包含多种细胞类型和病诸如癌症、 动脉粥样硬化和再狭窄。
靶向激酶的药物且尤其是基于抑制激酶活性的小分子化合物的药物是可以为遍 及全世界的人显著改进健康、 寿命或生活质量的重要的药物， 所述的人包括遭受高度使人 虚弱的疾病 (debilitating disease) 如癌症的患者。实际上， 药物 “伊马替尼” (GLEEVEC/ GLIVEC ； Novartis) 就是这种抑制激酶的药物， 且用于成功地治疗某些类型的癌症， 包括特 定类型的白血病 (CML) 和胃肠癌 (GIST)。相比之前的对 CML 的标准治疗其改进的功效， 和 其基本上是良好的耐受的， 显示轻的副作用， 以及其它原因已经导致其已经成为 TIME 杂志 的封面， 在该杂志中其被描述为搏斗癌症的 “子弹” 。
酪氨酸激酶对于导致细胞周期进展、 细胞增殖、 细胞分化和细胞转移的生长因子 信号转导的传播是必需的。酪氨酸激酶包括细胞表面生长因子受体酪氨酸激酶 (RTK) 诸如 FGFr 和 PDGFr 以及非受体酪氨酸激酶包括 c-Src 和 Lck。已经表明对这些酶的抑制引起抗 肿瘤活性和抗血管生成活性 (Hamby 等人， Pharmacol.Ther， 1999 ； 82(2-3) ： 169-193)。
调节细胞增殖和存活的分子机制和信号传导途径正作为抗癌药物开发的潜在靶 受到相当多的关注。
近来， 已经显著加大了针对靶向 MAPK 途径的尝试， 该途径整合由较宽范围的 PTK 和 G 蛋白偶联受体引发的增殖信号。
MAPK 信号级联包括已知为 Ras 的 G 蛋白， 其在由三种激酶 Raf、 MEK1/2 和 ERK1/2 组成的核心模块的上游起作用。在这一信号级联中， Raf( 丝氨酸 / 苏氨酸激酶 ) 磷酸化并 因此活化 MEK1/2， 这又最后导致 ERK1/2 的活化。 对信号传导中 Raf 功能的理解被这样的事 实复杂化 ： 在哺乳动物中 Raf 被由三种基因 (A-raf、 B-raf 和 C-raf(raf-1)) 组成的基因 家族编码， 其编码高度保守的 68 至 74kD 蛋白 (Daum 等人， Trends Biochem.Sci.1994， 19 ： 474-480)， 所述蛋白共享高度保守的氨基末端调节区和羧基端的催化结构域。Raf 蛋白一 般是细胞溶质的但被小的 G 蛋白 Ras 补充到质膜， 这对于生长因子、 细胞活素和激素类活化 Raf 是必需的步骤。位于膜的 Raf 活化通过高度复杂的过程发生， 包括构象变化、 结合到其 它蛋白、 结合到脂质和一些残基的磷酸化作用以及脱磷酸化作用。
Raf 激酶、 尤其是 B-Raf， 因其作为癌症相关的信号转导的潜在测试点的重要性， 所以一直被认为是药物开发和治疗介入的有吸引力的靶 (Tuveson 等人， Cancer Cell， 2003， 4： 95-98 ； Strumberg 和 Seeber， Onkologie， 2005， 28 ： 101-107 ； Beeram 等人， J.Clin. Oncol.2005， 23 ： 6771-6790)。
在发现人体肿瘤内大量的 B-Raf 的活化突变之后， MAPK 信号级联对肿瘤细胞的增 殖和存活的重要性近来已经增大。活化 Raf 突变已经在黑素瘤、 甲状腺癌、 结肠癌以及其 他癌症中得到确认 (Davies 等人， Nature， 2002， 417 ： 949-954 ； Cohen 等人， J.Natl.Cancer Inst.， 2003， 95 ： 625-627 ； Mercer 和 Pritchard， Biochim Biophys Acta， 2003， 1653 ： 25-40 ； Oliveira 等 人， Oncogene， 2003， 22 ： 9192-9196 ； Pollock 等 人， Nat.Genet.2003， 33 ： 19-20 ； Domingo 等人， Genes Chromosomes Cancer 2004， 39 ： 138-142 ； Shih 和 Kurman， Am.J.Pathol.， 2004， 164 ： 1511-1518)。因此， 除了在控制具有 Ras 突变或活化的生长因子 受体的肿瘤中的作用之外， Raf 激酶的抑制剂对携带 B-Raf 致癌基因的肿瘤具有治疗潜能 (Sharma 等人， Cancer Res.2005， 65 ： 2412-2421)。
已经发现许多试剂干扰 Raf 激酶， 包括反义寡核苷酸和小分子。这些抑制剂防止 Raf 蛋白表达， 阻断 Ras/Raf 相互作用或阻碍其激酶活性。siRNA 对 B-raf 活性下调导致 了 1205Lu 细胞的致瘤可能性降低 (Sharma 等人， Cancer Research， 2005， 65 ： 2412-2421)， 并且激酶抑制剂 BAY43-9006( 索拉非尼， Sorafenib) 对 B-raf 活性下调使黑素瘤细胞的 增长得以抑制 (Panka 等人， Cancer Research.， 2006， 66 ： 1611-9)。目前正在进行临床评 价的 Raf 抑制剂显示出具有非常耐受的安全特征的抗癌效果的有前景的迹象。最新进展 是 Raf 抑制剂索拉非尼 它已经处于用于治疗转移性肾细胞癌的临床试验中 (Ratain 等人， Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.(ASCO 会议摘要 )， 2004， 23 ： 摘要 4501 ； Motzer 等 人， J.Clin.Oncol.2006， 24 ： 16-24) 且当癌症不可手术时， 在 2007 年由 EMEA 批准用于治疗 患有晚期肾细胞癌 (RCC) 或肾癌患者， 他们已经在之前的基于干扰素 α 或白细胞介素 -2 的治疗中失败或被认为不适用于这些治疗， 且由 FDA 批准用于患有被称为肝细胞癌的一种 肝癌形式的患者。
促分裂原活化蛋白 (MAP) 激酶家族是脯氨酸定向丝氨酸 / 苏氨酸激酶， 其通过双 重磷酸化作用活化它们的底物。 该激酶通过多种信号活化， 所述信号包括营养和渗透应激、 UV 光、 生长因子、 内毒素和炎性细胞因子。一组 MAP 激酶是 p38 激酶组， 其包括不同的同种 型 ( 如， p38a、 p39ss、 p38 或 p388)。
p38 激酶负责磷酸化并活化转录因子以及其他激酶， 并且被物理和化学应激、 促炎 细胞因子和细菌脂多糖活化。
更重要的是， p38 磷酸化的产物已经显示出介导炎性细胞因子 ( 包括 TNF、 IL-1 和 环氧化酶 -2) 的产生。这些细胞因子与许多疾病状态和病况有牵连。例如， TNF-α 是主要 由活化的单核细胞和巨噬细胞产生的细胞因子。 其过度的且不受调节的产生被认为是在类 风湿性关节炎的病因中起成因性作用。更近期， 抑制 TNF 的产生已经显示出在治疗炎症、 炎 性肠病、 多发性硬化症和哮喘方面具有广泛的应用。 TNF 也与病毒感染有牵连， 所述病毒诸如 HIV、 流感病毒以及疱疹病毒， 疱疹病毒 包括单纯疱疹病毒 1 型 (HSV-1)、 单纯疱疹病毒 2 型 (HSV-2)、 巨细胞病毒 (CMV)、 水痘 - 带 状疱疹病毒 (VZV)、 EB(Epstein Barr) 病毒、 人疱疹病毒 6 型 (HHV-6)、 人疱疹病毒 7 型 (HHV-7)、 人疱疹病毒 8 型 (HHV-8)、 伪狂犬病和鼻气管炎以及其它。
类似地， IL-1 由活化的单核细胞和巨噬细胞产生， 且在包括类风湿性关节炎、 发烧 和骨吸收减少的许多病理生理学响应方面起作用。
另外， p38 与中风、 阿尔茨海默病、 骨关节炎、 肺损伤、 败血性休克、 血管生成、 皮炎、
银屑病和异位性皮炎有牵连， 参见， 如 J.Exp.Opin.Ther.Patents.(2000)10(1)。
通过抑制 p38 激酶来抑制上述细胞因子可以有利于控制、 减轻和 / 或缓解这些疾 病状态中的一种或多种。
尽管已经取得了进展， 但是对用于治疗多种疾病的低分子量的激酶抑制剂化合 物， 尤其是抑制 Raf 激酶的化合物的研究还在继续， 这些疾病包括癌症、 肿瘤和其他增殖性 病症或疾病， 包括再狭窄、 血管生成、 糖尿病视网膜病变、 银屑病、 手术粘连、 黄斑变性和动 脉粥样硬化， 或上述其他病症或疾病。因而， 非常需要提供具有激酶抑制活性 ( 特别是针对 一种或多种 Raf 激酶的抑制活性 ) 或具有针对细胞如肿瘤细胞的抗增殖活性的组合物、 药 物和 / 或药剂。这种组合物、 药物和 / 或药剂不仅可以具有这样的活性， 而且还可以表现出 可耐受的、 可接受的或与其他抗增殖剂相比降低的副作用。 而且， 对用这种组合物、 药物和 / 或药剂进行治疗有响应的肿瘤或其他疾病的范围可以是广的。这种组合物、 药物和 / 或药 剂的活性成分可以作为单一制剂， 和 / 或在联合疗法中适合于所提到的适应症， 所述活性 成分在联合疗法中与其他治疗剂、 放射、 手术 / 外科手术过程、 热治疗或所提到的适应症中 已知的任何其他治疗结合。
已知以特定方式取代的特定类型的吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶具有药学上有用的特性。 尤其是， 已知吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮的特定衍生物具有抗增殖活性。然而， 这些化合物 在结构上并不类似于本发明的化合物。 WO 96/34867 公开了 2- 取代的和 2， 8- 二取代的 6- 芳基 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧 啶 -7- 酮和其 7- 亚氨基衍生物， 它们显示出抑制酪氨酸激酶且在肿瘤模型中具有某些活性 ( 还参见 US5,620,981 和 US5,733,914)。WO 01/55147 公开了具有类似活性的 5， 6- 二取 代的 2， 7- 二氨基 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶。WO01/70741 公开了取代的 2- 氨基 -5-( 烷基， 芳基 )- 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮， 其显示出具有 Cdk 抑制剂活性。WO 02/18380 公开了 8- 未取代的和 8- 取代的 2- 氨基 -6- 芳基 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮， 其显示出抑制蛋 白激酶， 包括 p38。WO 02/18380 和 WO 03/088972 公开了 2， 4， 8- 三取代的吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮， 其显示出抑制激酶且因而能够抑制各种细胞因子的产生。 WO02/064594 公开了 8- 未取代的和 8- 取代的 2- 氨基 -6-( 氨基， 氧 )- 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮和其 7- 亚氨 基衍生物， 它们显示出抑制蛋白激酶， 包括 p38。WO03/062236 公开了 2-( 吡啶 -2- 基 ) 氨 基 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮 ( 在 5、 6 和 / 或 8 位被任选地取代 )， 其显示出是 Cdk 4 的 有效抑制剂。WO 03/066630 公开了 6-( 单环基 )- 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮 ( 在 2、 4和 / 或 5 位被任选地取代 )， 其显示出是 Cdk 的抑制剂以及在缺血性中风模型中显示出活性。 WO2004/063195 公开 2- 氨基 -8- 甲基 -6- 苯基 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮的衍生物， 其 显示出抑制 Bcr-Abl 激酶。
特别地， PCT 公布 WO 03/062236 公开了作为 Cdk 4( 以及 Cdk 6) 的有效且选择性 的抑制剂的 2-( 吡啶 -2- 基 ) 氨基 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮和 2-( 吡啶 -2- 基 ) 氨 基 - 二氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮 ( 在 5、 6 和 / 或 8 位被任选地取代 )， 且将某些这种 化合物与 WO 98/33798 和 WO 01/70741 中公开的它们的 C2- 苯基氨基类似物进行了比较。 WO 03/062236 中公开并要求保护的一类马库什结构包括， 所建议的 8 位氮的取代基以及其 他取代基， 从属类上描述的取代基是 “C1 到 C8 烷氧基” 。WO 07/136465 公开了一些 6-( 烷 氧基 - 氨基羰基苯基 )- 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮用于治疗与异常的激酶活性相关的疾
病和病症。 WO 07/136465 中公开的和要求保护的一般性 Markush 结构包括一般描述的取代 7 基 -O-R ， -R7 包括″ C1-8 烷基″以及 8 位氮上建议的其它取代基。
发明概述
我们发明了一类 8- 取代的吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮， 其包括表现出令人惊奇的 特性的化合物， 这些特性包括作为诸如 C-Raf 和 B-Raf 或 p38 的许多蛋白激酶的抑制剂的 活性， 和针对诸如肿瘤细胞等细胞的抗增殖活性。吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮的这类衍生 物提供了研制与激酶失调或细胞增殖有关的疾病 ( 诸如癌症或炎性病症 ) 的新而有效的疗 法的机会。
本发明的化合物是吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮的特定的衍生物， 这将在下面更详 细讨论。 与前面描述的某些吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮类似， 本发明的化合物适于针对治疗 包括癌症、 增殖性、 变性、 炎性以及其他病症和疾病在内的多种病症和疾病的进一步的临床 前或临床的研究和开发。本发明提供了尤其用于使人虚弱的疾病的有效的疗法和治疗剂， 诸如癌症和包括本文列出的疾病和病症在内的其他疾病和病症。
本发明的一个方面涉及具有由下面提供的式 (I) 所表示的结构的 8- 氧基 - 吡啶 并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮或其互变异构形式或立体异构形式， 它们可用作激酶抑制剂， 并因而 可用于治疗本文提到的病症或疾病， 包括增殖性病症或疾病如癌症和炎性病症或疾病。 在另一个方面， 本发明涉及药物组合物， 其包含药学上可接受的稀释剂、 赋形剂或 载体以及诸如治疗有效量的量的这些激酶抑制剂， 例如， 被期望改善包括增殖性病症或疾 病如癌症和炎性病症或疾病在内的本文提到的病症或疾病的影响的激酶抑制剂。
本发明的另一个方面涉及包括这种药物组合物和说明书的药物包装， 说明书表明 所述药物组合物可以用于治疗罹患本文提到的病症或疾病 ( 包括诸如癌症的增殖性病症 或疾病和炎性病症或疾病 ) 的患者。
在另一个方面， 本发明涉及包括将治疗有效量的本文公开的化合物或药物组合物 施用至或接触受治疗者、 细胞、 组织、 器官或有机体的方法。这些方法包括， 但不限于， 预防 和 / 或治疗本文提到的病症或疾病， 包括增殖性病症或疾病如癌症和炎性病症或疾病。
在另一个方面， 本发明涉及本发明的化合物在制备用于治疗本文提到的病症或疾 病 ( 包括诸如癌症的增殖性病症或疾病 ) 的药剂中的用途。
在另一个方面， 本发明涉及本发明的化合物在制备用于治疗炎性病症或疾病的药 剂中的用途。
本发明的另一个方面涉及合成本发明化合物的方法， 并涉及这些化合物的中间 体。
因此， 本发明提供了具有由通式 (I) 表示的结构的化合物或其任何互变异构形式 或其任何药学上可接受的盐或 N- 氧化物 ：
其中
R1 选自氢、 -NH2 和取代的或未取代的 ： -NH-C1-6- 烷基、 -NH- 环烷基、 -NH- 杂环烷 7 7 基、 -NH- 芳基、 -NH- 杂芳基、 -NH-C1-6- 亚烷基 -OR 和 -NH-C1-6- 亚烷基 -NR 2 ； 2
R 选自氢、 卤素、 甲基、 -CH2F、 -CHF2、 -CF3、 -O- 甲基、 -O-CH2F、 -O-CHF2 和 -O-CF3 ； 3 4 6
R 和 R 之一是氢且另一个是 -NH-C( ＝ O)-(NH)x-(CH2)y-R ， 其中 x 和 y 独立地选 自0和1；
R5 选自氢和取代的或未取代的 ： 烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 环烯基、 -(C- 连接的杂 环烷基 )、 -(C- 连接的杂环烯基 )、 芳基和杂芳基 ； 6
R 选自取代的或未取代的芳基和取代的或未取代的杂芳基 ；
R7 独立地选自氢和 -C1-6- 烷基 ；
然而， 条件是 (i)R1 不是取代的或未取代的 -NH- 苯基 ； 且 (ii) 化合物 (A) 除外 ：
通过下面的详细描述以及权利要求， 本发明的其他特点和优势将是明显的。
发明详述
定义
术语 “烷基” 指具有 1 到约 20 个碳原子的直链或支链饱和烃基， 包括具有 1 到约 7 个碳原子的基团。在某些实施方案中， 烷基取代基可以是低级烷基取代基。术语 “低级烷 基” 指具有 1 到 6 个碳原子、 且在某些实施方案中具有 1 到 4 个碳原子的烷基。烷基的示例 包括， 但不限于， 甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 仲丁基、 叔丁基、 正戊基、 仲戊基和正 己基。
术语 “烯基” 指具有 2 到约 20 个碳原子的基团， 其中至少一个碳 - 碳键是双键， 而 其他键可以是单键或另外的双键。术语 “炔基” 在本文指具有 2 到约 20 个碳原子的基团， 其中至少一个碳 - 碳键是三键， 而其他键可以是单键、 双键或另外的三键。烯基的示例包括 乙烯基、 1- 丙烯基、 2- 丙烯基、 1- 丁烯基、 2- 丁烯基、 3- 丁烯基、 2- 甲基 -1- 丙烯基、 2- 甲 基 -2- 丙烯基以及类似基团。炔基的示例包括乙炔基、 1- 丙炔基、 2- 丙炔基等等。
如本文使用的， 术语 “环烷基” 意在指成为任何稳定的单环或多环系统的一部分的 环， 其中所述环具有 3 到约 12 个碳原子， 但是不含杂原子， 且所述环是完全饱和的， 并且术
语 “环烯基” 意在指成为任何稳定的单环或多环系统的一部分的环， 其中所述环具有 3 到 约 12 个碳原子， 但是不含杂原子， 且所述环是至少部分不饱和的 ( 但是将任何芳环排除在 外 )。环烷基的示例包括， 但不限于， 环丙基、 环丁基、 环戊基、 环己基、 环庚基、 金刚烷基、 环 辛基、 二环烷基或螺环化合物， 所述二环烷基包括二环辛烷 ( 诸如 [2.2.2] 二环辛烷 )、 二环 壬烷 ( 诸如 [4.3.0] 二环壬烷 ) 和二环癸烷 ( 诸如 [4.4.0] 二环癸烷 ( 萘烷 ))。环烯基的 示例包括， 但不限于， 环戊烯基或环己烯基。为了清楚， 如果取代基是如上所述的其中一个 环是至少部分不饱和的多环系统， 那么如果经由该至少部分不饱和的环发生取代， 这种取 代基将会被称为 “环烯基” ， 而如果经由完全饱和的环发生取代， 则称为 “环烷基” 。
当术语 “Cx-y-” 与本文定义的基团结合使用时， 其意在表明存在于相应基团 ( 不包 括取代基 ) 中的碳原子的范围。例如， 术语 “C1-6- 烷基” 指具有一个碳原子 ( 即， 甲基 ) 和 6 个碳原子 ( 例如， 正己基 ) 之间的烷基 ； 术语 “C3-6- 环烷基” 指具有三个碳原子 ( 即， 环丙 基 ) 和六个碳原子 ( 即， 环己基 ) 之间的环烷基。
如本文使用的， 术语 “杂环烷基” 和 “杂环烯基” 意在指成为任何稳定的单环或多 环系统的一部分的环， 其中所述环具有 4 到约 12 个原子， 且所述环由碳原子和至少一个杂 原子， 尤其是至少一个独立地选自由 N、 O 和 S 组成的组的杂原子组成， 且杂环烷基指完全饱 和的这样的环， 以及杂环烯基指至少部分不饱和的环 ( 但将任何芳环或杂芳环排除在外 )。 为了清楚， 如果取代基是本文所述的其中一个环含有至少一个杂原子的多环系统， 那么如 果经由含有杂原子的环发生取代， 所述取代基将会被称为 “杂环烷基 / 杂环烯基” 。杂环烷 基和杂环烯基可以经由碳环原子 ( 分别是 “C- 连接 - 杂环烷基” 和 “C- 连接 - 杂环烯基” )， 或经由氮环原子 ( 分别是 “N- 连接 - 杂环烷基” 和 “N- 连接杂环烯基” ) 连接到其他基团。 诸如氮和硫的杂原子可以任选地被氧化以分别形成 N- 氧化物或亚砜和砜。在某些实施方 案中， 杂环上的氮可以被季铵化。在某些实施方案中， 当杂环上的 S 和 O 原子的总数目超过 1 时， 那么这些杂原子彼此并不相邻。在具体的实施方案中， 杂环上的 S 原子的总数目不大 于 1。
杂环烷基的示例包括， 但不限于， 吡咯烷基、 四氢呋喃基、 吗啉基、 硫代吗啉基、 哌 嗪基、 哌啶基和十氢喹啉基 ( 当经由哌啶基部分连接时 )。 杂环烯基的示例包括， 但不限于， 吡咯啉基和吲哚烯基 (indolenyl)( 当经由 5 元环连接时 )。 在当连接含杂原子的环的每种 情况下， 还包括含有例如任何一种上述杂环的稠环系统和螺环化合物。
术语 “芳基” 意在指成为任何稳定的单环或多环系统的一部分的环或环系统， 其 中所述环或环系统具有 3 到约 20 个碳原子， 但不含杂原子， 且其中所述环或环系统由通过 “(4n+2)π 电子规则” 定义的芳香部分组成。为了清楚， 如果取代基是多环系统， 其中所述 多环系统中包含的一个环或环系统由本文定义的芳香部分组成， 那么如果经由所述芳香部 分发生取代， 则所述取代基将会被称为 “芳基” 。 这包括但不限于苯基和稠合的苯环系统， 例 如， 萘、 蒽或菲环系统， 或例如稠合到一个或多个环烷基部分以形成例如茚满基、 芴基或四 氢萘基 ( 萘满 ) 的苯环， 或稠合到一个或多个例如在吲哚烯基中的杂环烷基环的苯环， 然而 条件是在每种这些情况中的这种稠合系统作为取代基经由芳香部分被连接。
如本文使用的， 术语 “杂芳基” 指成为任何稳定的单环或多环系统的一部分的环或 环系统， 其中所述环或环系统具有 3 到约 20 个原子， 所述环或环系统由通过 “(4n+2)π 电 子规则” 定义的芳香部分组成且其含有碳原子和一个或多个氮、 硫和 / 或氧杂原子。为了清楚， 如果取代基是多环系统， 其中所述多环系统中包含的一个环或环系统由本文定义的含 有杂原子的芳香部分组成， 那么如果经由含有杂原子的芳香部分发生取代， 则所述取代基 将会被称为 “杂芳基” 。在某些实施方案中， 杂芳基上的 N、 S 和 O 原子的总数目在 1 和约 4 个之间。在某些实施方案中， 芳香杂芳基上的 S 和 O 原子的总数目不超过 1。在某些实施方 案中， 杂环上的氮可以被季铵化或氧化成 N- 氧化物。杂芳基的示例包括但不限于吡咯基、 吡唑基、 咪唑基、 吲哚基、 苯并咪唑基、 呋喃基、 苯并呋喃基、 噻吩基、 苯并噻吩基、 吡啶基、 嘧 啶基、 吡嗪基、 三嗪基、 喹啉基、 喹唑啉基。
术语杂芳基还包括稠合杂芳基， 其含有例如稠合到环烷基或杂环烷基的以上的杂 芳基 ( 条件是在每种情况中这种稠合系统作为取代基经由含有至少一个杂原子的芳香部 分被连接 )。
无论在本文何处标明， 烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 环烯基、 杂环烷基、 杂环烯基、 芳 基和杂芳基以及在子结构中包含至少一个氢的任何其他子结构可以被一个或多个取代基 取代。
“取代的” 意在表明在使用 “取代的” 表达中所标明的原子或基团上的一个或多个 氢被从标明的基团中选择的基团替换， 条件是所标明的原子是正常的化合价， 或者被取代 的基团的合适的原子的化合价未被超过， 并且取代产生了稳定的化合物。 术语 “取代的或未 取代的” 或 “任选地取代的” 意在指给定的化合物或化合物的子结构是未取代的或如本文所 定义用一个或多个取代基取代的， 如下面所示或定义。
在取代的部分中， 除非明确提供了取代基的特定列表， 取代的部分 “M” 的至少一个 Sm 氢原子用取代基 -[(R )n] 替换， 其中 m 是从 1 至 n 的整数， 其中 n 是从 1 至约 15 的任何数 Sm 值， 其中各 R 独立地选自以下列表 (A) 和 (B) ：
(A) ： 烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 环烯基、 C- 连接的杂环烷基、 C- 连接的杂环烯基、 a a a a 芳基、 C- 连接的杂芳基、 -O-R 、 -O-N(R )2)、 -S-R 、 -S-N(R )2、 N- 连接的杂环烷基、 N- 连接 a a a a a a a a 的杂芳基、 -N(R )-R 、 -N(R )-OR 、 -N(R )-SR 、 -N(R )-N(R )2、 -F、 -Cl、 -Br、 -I ； a a a a
(B) ： -C( ＝ O)-R 、 -C( ＝ S)-R 、 -C( ＝ NR )-R 、 -C( ＝ N-ORa)-Ra、 -C( ＝ a a a a a a N-N(R )2)-R 、 -C( ＝ O)-OR 、 -C( ＝ S)-OR 、 -C( ＝ O)-N(R )2、 -C( ＝ S)-N(R )2、 -C( ＝ a a a a a a a a NR )-N(R )2、 -C( ＝ N-OR )-N(R )2、 -C( ＝ N-N(R )2)-N(R )2、 -C( ＝ O)-N(R )-N(R )2、 -C( ＝ a a a a a a a S)-N(R )-N(R )2、 -C( ＝ NR )-N(R )-N(R )2、 -CN、 -O-N ＝ C(R )2、 -O-C( ＝ O)-R 、 -O-C( ＝ a a a a a a a S)-R 、-O-C( ＝ NR )-R 、-O-C( ＝ N-OR )-R 、-O-C( ＝ N-N(R ) 2 )-R 、-O-C( ＝ NR a )-OR a 、-O-C( ＝ NR a )-SR a 、-O-C( ＝ NR a )-N(R a ) 2 、-S-N(R a )-N(R a ) 2 、-S-N ＝ C(Ra)2、 -S-N ＝ NR ″、 -SO-Ra、 -SO-ORa、 -SO-SRa、 -SO-N(Ra)2、 -SO-N(Ra)-N(Ra)2、 -SO2-Ra 、 -SO2-ORa、 -SO2-SR8、 -SO2-N(Ra)2、 -SO2-N(Ra)-N(Ra)2、 -N(Ra)-N ＝ C(Ra)2、 -N(Ra)-C( ＝ O)-Ra、 -N(Ra)-C( ＝ S)-Ra、 -N(Ra)-C( ＝ NRa)-Ra、 -N(Ra)-C( ＝ N-ORa)-Ra、 -N(Ra)-C( ＝ N - N ( R a ) 2 ) - R a 、- N ( R 3 ) - C ( ＝ O ) - O R a 、- N ( R a ) - C ( ＝ S ) - O R a 、- N ( R a ) - C ( ＝ NR a )-OR a 、-N(R a )-C( ＝ N-OR a )-OR a 、-N(R a )-C( ＝ N-N(R a ) 2 )-OR a 、-N(R a )-C( ＝ O)-N(R a ) 2 、-N(R a )-C( ＝ S)-N(R a ) 2 、-N(R a )-C( ＝ NR a )-N(R a ) 2 、-N(R a )-C( ＝ N-ORa)-N(Ra)2、 -N(Ra)-C( ＝ N-N(Ra)2)-N(Ra)2、 -N(Ra)-C( ＝ O)-N(Ra)-N(Ra)2、 -N(Ra)-C( ＝ S ) - N ( R a ) - N ( R a ) 2 、- N ( R a ) - C ( ＝ N R a ) - N ( R a ) - N ( R a ) 2 、- N ( R a ) - C ( ＝ N-OR a )-N(R a )-N(R a ) 2 、-N(R a )-C( ＝ N-N(R a ) 2 )-N(R a )-N(R a ) 2 、-N(R a )-N(R a )-C( ＝O)-R a、 -N(R a)-N(R a)-C( ＝ S)-R a、 -N(R a)-N(R a)-C( ＝ NR a)-R a、 -N(R a)-N(R a)-C( ＝ N-ORa)-Ra、 -N(Ra)-N(Ra)-C( ＝ N-N(Ra)2)-Ra、 -N(Ra)-N(Ra)-C( ＝ O)-ORa、 -N(Ra)-N(Ra)-C( ＝ S)-ORa、 -N(Ra)-N(Ra)-C( ＝ NRa)-ORa、 -N(Ra)-N(Ra)-C( ＝ N-ORa)-ORa、 -N(Ra)-N(Ra)-C( ＝ N - N ( R a ) 2 ) - O R a 、- N ( R a ) - N ( R a ) - C ( ＝ O ) - N ( R a ) 2 、- N ( R a ) - N ( R a ) - C ( ＝ S ) - N ( R a ) 2 、- N ( R a ) - N ( R a ) - C ( ＝ N R a ) - N ( R a ) 2 、- N ( R a ) - N ( R a ) - C ( ＝ N - O R a ) - N ( R a ) 2 、- N ( R a ) - N ( R a ) - C ( ＝ N - N ( R a ) 2 ) - N ( R a ) 2 、- N ( R a ) - N ( R a ) - C ( ＝ O)-N(Ra)-N(Ra)2、 -N(Ra)-N(Ra)-C( ＝ S)-N(Ra)-N(Ra)2、 -N(Ra)-N(Ra)-C( ＝ NRa)-N(Ra)-N(Ra )2、 -N(Ra)-N(Ra)-C( ＝ N-ORa)-N(Ra)-N(Ra)2、 -N(Ra)-N(Ra)-C( ＝ N-N(Ra)2)-N(Ra)-N(Ra)2、 -N( a a a a a a a a a a R )-N(R )-C( ＝ NR )-N ＝ C(R )2、 -N(R )-N(R )-C( ＝ N-OR )-N ＝ C(R )2、 -N(R )-N(R )-C( ＝ a a a a a a a N-N(R )2)-N ＝ C(R )2、 -N(R )-SO-R 、 -N(R )-SO-OR 、 -N(R )-SO-N(Ra)2、 -N(Ra)-SO-NRa -N(Ra)2、 -N(Ra)-SO2-Ra、 -N(Ra)-SO2-ORa、 -N(Ra)-SO2-N(Ra)2、 -N(Ra)-SO2-NRa-N(Ra)2、 -NO2a 、 -N 、 -F、 -Cl、 -Br、 -I ； a
其中各 R 独立地选自 -H 和 Rb， Rb 独立地选自烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 环烯基、 C- 连接的杂环烷基、 C- 连接的杂环烯基、 芳基和 C- 连接的杂芳基， 且其中可选择地， 当连接 b 到同一氮原子时， 两个取代基 R 可以与它们连接的氮原子一起形成杂环烷基、 杂环烯基或 杂芳基， 且其中 RS1 连接到所述部分 M， 且其中， 如果存在的话， 任何其它 RSx 取代基团 RSy 的 残基 Rb 中的氢原子， 且 x ＞ y。
环烷基、 环烯基、 杂环烷基和杂环烯基部分的环中存在的亚甲基也可以用选自以 S 下列表 (C) 中的取代基 R 取代 ：
(C) ： ＝ O、 ＝ S、 ＝ NRa、 ＝ N-ORa 和＝ N-N(Ra)2， 其中对于每个这样的取代基， 未取 代部分的亚甲基上的两个氢均被替换。
含氮的子结构诸如胺或含氮的杂环也可以通过形成季铵或 N- 氧化物而被取代， S 其中 R 是烷基或 -O。
例如， 取代基 -CH2-O-CH2-CH2-F 可以被描述为 -[(RSm)3]， RS3 是 -F， 其取代 RS2 中 的氢原子， RS2 是 O-C2- 烷基， 其中所述 RS2 取代 RS1 中氢原子， RS1 是 C1 烷基。在这一示例 中， -[(RSm)3] 中的单个元素 RSm 以 “直线” 形式排列， 因为每个 RSx 连接到 RSy， x ＝ y+1( 即， S3 S2 R 连接到 R 等 )。
作为第二个示例， 取代基 -CH2-O-CH2-CF3 可以被描述为 -[(RSm)5]， 各 RS3、 RS4 和 RS5 是 -F 原子， 其取代 RS2 中的氢原子， RS2 是 O-C2- 烷基， 其中所述 RS2 取代 RS1 中氢原子， RS1 是 C1- 烷基。在这一示例中， -[(RSm)6] 中的单个元素 RSm 以 “分支” 形式排列， 因为至少一个 Sx S4 S5 Sy S2 R ( 此处， 例如， R 或 R ) 连接到 R ( 此处 R ) 上， x ＞ y+1。
对于本领域任一普通技术人员将是显然的是， 存在多种可能的单个元素 RS 的组 合。然而， 对于本领域普通技术人员也是显然的是， 存在某些组合， 其导致较不利的排列且 将在设计和合成根据本发明的化合物中不被考虑， 因为低稳定性、 高反应性或不利的物理 化学性质， 诸如低溶解度。 示例包括但不限于半缩醛或缩酮 (-O-CR2-OH)、 Michael 系统 ( 例 如 -C( ＝ O)-CR ＝ CR2)、 α- 卤素羰基化合物 ( 例如 -C( ＝ O)-CR2-Br)、 多环芳香系统及类 似物。
在具体的实施方案中， 选自上面列出的列表 (B) 和 (C) 的取代基 -[(RSm)n] 中元素
RS 的数目不多于二。在具体的实施方案中， 取代基 -[(RSm)n] 中存在不多于一个的元素 RS， 其选自上面列出的列表 (B) 或 (C)。
在具体的实施方案中， 取代基 [(RSm)n] 中的 n 是 1 至约 12、 1 至约 10、 1 至约 8、 或 1 至约 6 的任何数值。
在具体的实施方案中， 对于不同于 -F 或 -Cl 的所有取代基， 取代基 -[(RSm)n] 中的 n 是 1 至约 6、 1 至约 5、 1 至约 4、 或 1 至约 3 的任何数值。
在具体实施方案中， 取代基 -[(RSm)n] 中的原子数目是 1 至约 80、 1 至约 60、 1 至约 50、 1 至约 40、 1 至约 30、 1 至约 20、 1 至约 15， 或 1 至约 10 的任何数值。 Sm
在具体实施方案中， 取代基 -[(R )n] 中的所有原子的结合分子量 (combined molecular weight) 是 1 至约 360、 1 至约 300、 1 至约 240、 1 至约 180、 1 至约 120、 1 至约 90 或 1 至约 60 的任何数值。
术语 “卤素” 或 “卤代” 指氟、 氯、 溴和碘取代基。
如本文使用的， 术语 “立体异构体” 和 “互变异构体” 包括本发明化合物的所有可 能的立体异构形式和互变异构形式。当本发明的化合物包含一个或多个手性中心时， 所有 可能的对映异构体和非对映异构体形式都被包括在内。 本发明意在包括本化合物上出现的原子的所有同位素。 同位素是具有相同的原子 序数、 但具有不同质量数的原子。通过一般的示例且没有限制， 氢的同位素是氚和氘。碳的 12 14 同位素包括 C 和 C。
如本文使用的， 术语 “代谢产物” 指通过新陈代谢或通过代谢过程产生的任何物 质。如本文使用的， 新陈代谢指细胞、 组织、 系统、 身体、 动物、 个体、 患者或人中发生的分子 或化合物的转变中涉及的各种物理 / 化学 / 生物化学 / 药理学反应。
如本文使用的， 术语 “IC50” 指可测量的活性、 表型或响应， 如细胞 ( 诸如肿瘤细胞 ) 的生长或增殖被抑制 50％时的浓度。IC50 值可以通过合适的剂量 - 响应曲线估计， 如通过 眼睛或通过使用合适的曲线拟合或统计软件来估计。更准确地说， 可以使用非线性回归分 析来确定 IC50 值。
如本文使用的， “个体” 意指多细胞生物体， 如动物， 诸如哺乳动物， 包含灵长类。除 了诸如人类的灵长类之外， 可以根据利用了本发明的一种或多种化合物的方法治疗各种其 他动物。 例如， 哺乳动物包括， 但不限于， 母牛、 绵羊、 山羊、 马、 狗、 猫、 豚鼠、 大鼠或可以使用 其他牛、 羊、 马、 犬、 猫、 啮齿类或小鼠物种。
如本文使用的， “增殖性病症” 或 “增殖性疾病” 包括影响细胞生长、 分化或增殖过 程的病症或疾病。
如本文使用的， “细胞生长、 分化或增殖过程” 是一种过程， 通过该过程细胞的数 量、 大小或含量增大， 通过该过程细胞发展成不同于其他细胞的特定的一组特征， 或通过该 过程细胞更靠近或更远离特定的位置或刺激。细胞生长、 分化或增殖过程包括氨基酸输送 和降解以及细胞的其他代谢过程。 细胞增殖性病症可以表征为异常调节的细胞生长、 增殖、 分化或迁移。细胞增殖性病症包括致瘤性疾病或病症。
如本文使用的， “致瘤性疾病或病症” 包括表征为异常调节的细胞生长、 增殖、 分 化、 粘连或迁移的疾病或病症， 这可能导致产生肿瘤或产生肿瘤的倾向。 如本文使用的， “肿 瘤” 包括良性或恶性组织块。细胞生长或增殖性病症的示例包括， 但不限于， 肿瘤、 癌症、 自
身免疫性疾病、 病毒性疾病、 真菌性疾病、 神经变性病症和心血管疾病。
如本文使用的， 术语 “抗癌剂” 或 “抗增殖剂” 分别指具有抗癌特性和抗增殖特性 的化合物。这些化合物包括， 但不限于， 六甲蜜胺、 白消安、 瘤可宁、 环磷酰胺、 异环磷酰胺、 双氯乙基甲胺、 美法仑、 硫替派、 克拉屈滨、 氟脲嘧啶、 氟尿苷、 吉西他滨、 硫鸟嘌呤、 喷司他 丁、 甲氨蝶呤、 6- 颈基嘌呤、 阿糖胞苷、 卡氯芥、 洛莫司汀、 链脲霉素、 卡铂、 顺铂、 奥沙利铂、 吡铂、 LA-12、 异丙铂、 四铂、 洛铂、 JM216、 JM335、 赛特铂、 氟达拉滨、 氨鲁米特、 氟他胺、 戈 舍瑞林、 亮丙瑞林、 醋酸甲地孕酮、 醋酸环丙氯地孕酮、 他莫昔芬、 阿那曲唑、 比卡鲁胺、 地 塞米松、 己烯雌酚、 强的松、 博来霉素、 更生霉素、 道诺霉素、 多柔比星 (doxirubicin)、 伊达 比星、 米托蒽醌、 洛索蒽醌、 丝裂霉素 -c、 普卡霉素、 紫杉醇、 多烯紫杉醇、 拓扑替康、 伊立替 康、 9- 氨基喜树碱 (9-amino camptothecan)、 9- 硝基喜树碱、 GS-211、 JM 118、 依托泊甙、 替尼泊甙、 长春花碱、 长春新碱、 长春瑞滨、 甲苄肼、 天门冬酰胺酶、 培门冬酶、 奥曲肽、 雌莫 司汀和羟基脲。所述术语还包括， 但不限于， 非小分子治疗剂， 诸如抗体， 如 WO01/87337 和 WO 01/97338 中描述的 1D09C3 和其他抗 -HLA-DR 抗体， 如描述在美国专利 5,736,137、 5,776,456、 5,843,437 中的利妥昔单抗 (Rituxan)、 4D5、 Mab225、 C225、 达利珠单抗 ( 赛尼 哌 )、 Antegren， CDP 870、 CMB-401、 MDX-33、 MDX-220、 MDX-477、 CEA-CIDE、 AHM、 Vitaxin、 3622W94、 Therex、 5Gl.1、 IDEC-131、 HU-901、 麦 罗 塔 (Mylotarg)、 Zamyl(SMARTM195)、 MDX-210、 Humicade、 LymphoCIDE、 ABX-EGF、 17-1A、 曲妥珠单抗 ( 帕珠单抗、 西妥昔单抗 托西莫单抗 M195、 Id10、 Hu1D10( 帕妥珠单抗 ( 伊莫单抗 (Ibritumomab tiuxetan) 阿泊珠单抗 )、 Danton/DN1924、 “HD” 抗体 ( 诸如 HD4 或 rhuMAb)、 依 2C4)、 R3、 CDP860、 贝伐单抗HD8)、 CAMPATH-1 和 CAMPATH-1H 或它们的其他变体、 片段、 共轭物、 衍生物和修饰， 或具有改 进或优化特性的其他等同的组合物， 以及蛋白质或肽， 如 Trends in Biotechnology( 生物 技术的趋势 )(2003)， 21(12)， 第 556-562 页中描述的那些。
如本文使用的， “炎性病症” 或 “炎性疾病” 包括由发炎过程造成或伴有发炎过程的 疾病或病症。这包括， 但不限于如下疾病或病症 ： 诸如关节炎， 包括但不限于类风湿性关节 炎、 未分化脊柱关节病、 痛风性关节炎、 骨关节炎、 系统性红斑狼疮和少年期关节炎、 骨关节 炎、 痛风性关节炎以及其他关节炎疾患 ； 肺部病症或肺发炎， 包括成人呼吸窘迫综合征、 肺 结节病、 哮喘、 硅肺病和慢性肺部炎性疾病 ； 病毒和细菌感染， 包括败血症、 败血性休克、 革 兰氏阴性败血症、 疟疾、 脑膜炎、 感染或恶性肿瘤的继发性恶病质、 获得性免疫缺陷综合征 (AIDS) 的继发性恶病质、 AIDS、 ARC( 与 AIDS 有关的综合症 )、 肺炎和疱疹病毒 ； 骨吸收疾 病， 诸如骨质疏松症， 内毒素休克、 毒素休克综合征、 再灌注损伤、 自身免疫性疾病包括移植 物抗宿主反应和同种异体移植物排斥， 心血管疾病包括动脉粥样硬化、 血栓症、 充血性心力 衰竭、 以及心脏再灌注损伤、 肾再灌注损伤、 肝脏疾病和肾炎、 以及因感染导致的肌痛 ； 阿尔 茨海默氏疾病、 流感、 多发性硬化症、 癌症、 糖尿病、 系统性红斑狼疮 (SLE)、 与皮肤有关的疾 患， 诸如银屑病、 湿疹、 灼伤、 皮炎、 瘢痕疙瘩形成以及疤痕组织形成 ； 胃肠疾患， 诸如炎性肠 病、 克罗恩疾病、 胃炎、 肠易激综合征和溃疡性结肠炎 ； 眼部疾病， 诸如视网膜炎、 视网膜病、 葡萄膜炎、 眼睛畏光以及对眼组织的急性损伤 ； 血管生成， 包括瘤形成 ； 转移 ； 眼科疾患 ； 诸 如角膜移植排斥、 眼部新血管形成、 视网膜新血管形成， 包括损伤或感染后的新血管形成， 糖尿病视网膜病变、 晶状体后纤维增生症和新生血管性青光眼 ； 溃疡性疾病， 诸如胃溃疡 ；病态的但非恶性的疾患， 诸如血管瘤， 包括婴幼儿血管瘤、 鼻咽纤维血管瘤和缺血性骨坏 死； 糖尿病性肾病和糖尿病性心肌病 ； 以及诸如子宫内膜异位的女性生殖系统病症。
如本文使用的， “药学上可接受的盐” 指所公开的化合物的衍生物， 其中母体化合 物通过形成其酸式盐或碱式盐而被改性。 药学上可接受的盐的示例包括， 但不限于， 诸如胺 的碱性残基的无机酸盐或有机酸盐 ； 诸如羧酸的酸性残基的碱金属盐或有机盐 ； 以及类似 盐。药学上可接受的盐包括如， 由无毒性无机或有机酸形成的母体化合物的常规的无毒性 的盐或季铵盐。例如， 这种常规的无毒性的盐包括由无机酸衍生的盐， 所述无机酸诸如盐 酸、 氢溴酸、 硫酸、 氨基磺酸、 磷酸、 硝酸以及类似的酸 ； 以及由有机酸制备的盐， 所述有机酸 诸如乙酸、 丙酸、 琥珀酸、 乙醇酸、 硬脂酸、 乳酸、 苹果酸、 酒石酸、 柠檬酸、 抗坏血酸、 扑酸、 马 来酸、 羟基马来酸、 苯乙酸、 谷氨酸、 苯甲酸、 水杨酸、 磺胺酸、 2- 乙酸基苯甲酸、 富马酸、 甲苯 磺酸、 甲磺酸、 乙二磺酸、 草酸、 羟乙基磺酸以及类似的酸。
本发明的药学上可接受的盐可以通过常规的化学方法， 由含有碱性部分或酸性部 分的母体化合物合成。一般而言， 这种盐可以通过使游离酸或游离碱形式的该类化合物在 水或有机溶剂或两者的混合物中与化学计算量的合适的碱或酸反应来制备 ； 一般而言， 优 选不含水的介质， 像醚、 EtOAc、 乙醇、 异丙醇或乙腈。合适的盐的目录见于 Remington′ s Pharmaceutical Sciences( 雷 明 顿 药 物 科 学 )， 第 18 版， Mack Publishing Company， Easton， PA， 1990， 第 1445 页， 其公开内容在此通过引用方式并入。
保留了本文所包含的化合物的期望的生物活性以及呈现了极少或没有不希望的 或毒理作用的任何盐都预期包括在本文。 药学上可接受的盐包括从药学上可接受的有机酸 或无机酸和碱衍生得到的盐。非药学上可接受的酸和碱也用于本文， 例如， 用于合成和 / 或 纯化所关注的化合物。因而， 所有的 “盐” 也被包括在本发明的范围内。
合适的盐的非限制性的示例包括从无机酸衍生得到的盐， 所述无机酸诸如， 如盐 酸、 氢溴酸、 硫酸、 磷酸、 硝酸、 二碳酸、 碳酸 ； 以及与有机酸形成的盐诸如， 如甲酸、 乙酸、 草 酸、 酒石酸、 琥珀酸、 苹果酸、 丙二酸、 抗坏血酸、 柠檬酸、 苯甲酸、 丹宁酸、 棕榈酸、 海藻酸、 聚 谷氨酸、 对甲基苯磺酸、 甲磺酸、 萘磺酸、 萘二磺酸、 α- 酮戊二酸、 β- 甘油磷酸和聚半乳糖 醛酸。合适的盐包括从诸如锂、 钾和钠的碱金属， 从诸如钙和镁的碱土金属， 以及从药学领 域的技术人员公知的其他酸衍生得到的盐。其他合适的盐包括从诸如锌、 铋、 钡或铝的金 属阳离子， 或用从胺形成的阳离子衍生得到的盐， 所述胺诸如氨水、 N， N- 二苄基乙 - 二胺、 D- 葡萄糖胺、 四乙铵或乙二胺。 而且， 合适的盐包括从酸和碱的组合衍生得到的盐， 诸如， 如 丹宁酸锌盐。
在本文采用的短语 “药学上可接受的” 指在合理的医学判断范围内， 适于与人体和 动物的组织接触使用， 而无过度的毒性、 刺激、 过敏反应， 或其他问题或并发症， 并伴有合理 的收益 / 风险比的那些化合物、 材料、 组合物和 / 或剂型。
如本文使用的， 术语 “前药” 指在体内转化成药学活性的母体药物 ( 诸如本文定义 的化合物 ) 的物质。术语 “前药” 包括任何共价键合的载体， 该载体在所述前药施用至动物 时释放本发明的活性母体药物。因为已知前药增强了药物的许多所需的特性 ( 如溶解度、 生物利用度、 制造、 输送、 药代动力学等 )， 所以本发明的化合物可以以前药的形式输送。例 如， 前药例如可以是通过口服施用而可生物利用的， 即使母体药物不可以。因而， 本发明意 在覆盖目前要求保护的化合物的前药， 输送该前药的方法以及包含该前药的组合物。通过如下方式修饰存在于化合物上的官能团制备本发明的前药 ： 所述修饰以常规操作或者在体 内被裂解为母体化合物。 前药包括其中羟基、 氨基、 巯基被键合到任何基团上的本发明的化 合物， 当本发明的前药被施用至哺乳动物受治疗者时， 其裂解以分别形成游离的羟基、 游离 的氨基或游离的巯基。 前药的示例包括， 但不限于， 本发明化合物上的醇和胺官能团的乙酸 酯、 甲酸酯和苯甲酸酯衍生物。
一般来说， 前药是药物本身的衍生物， 其在施用药物之后转化或新陈代谢成生理 活性的物质。此转化可以是自发的 ( 诸如生理环境中的水解 ) 或可以是酶催化的。前药包 括可以被氧化、 还原、 胺化、 脱氨基、 羟基化、 脱羟基、 水解、 酯化、 烷基化、 脱烷基、 酰化、 脱酰 基、 磷酸化和 / 或脱去磷酸以生成活性化合物的化合物。
前述示例引自通常专注于前药的许多科学文献， 例如 ： Gangwar 等人， “Prodrug， molecular structure and percutaneous delivery( 前药、 分子结构和经皮输送 )” ， Des. Biopharm.Prop.Prodrugs Analogs， [Symp.] 会 议 日 期 1976， 409-21.(1977) ； Nathwani 和 Wood， “Penicillins ： a current review of their clinical pharmacology and therapeutic use( 青 霉 素 ： 其 临 床 药 理 学 和 治 疗 应 用 现 状 的 综 述 )” ， Drugs 45(6) ： 866-94(1993) ； Sinhababu 和 Thakker， “Prodrugs of anticancer agents( 抗 癌 剂 的 前 药 )” ， Adv.Drug Delivery Rev.19(2) ： 241-273(1996) ； Stella 等人， “Prodrugs.Do they have advantages in clinical practice ？ ( 前药。它们在临床实践中有优势吗？ )” ， Drugs 29(5) ： 455-73(1985) ； Tan 等 人 “Development and optimization of anti-HIV nucleoside analogs and prodrugs ： A review of their cellular pharmacology， structure-activity relationships and pharmacokinetics( 抗 HIV 核 苷 类 似 物 和 前药的发展和优化 ： 它们的细胞药理学、 构效关系和药代动力学的综述 )” ， Adv.Drug Delivery Rev.39(1-3) ： 117-151(1999) ； Design ofProdrugs( 前 药 设 计 )(Bundgaard H. 等人编辑 )1985Elsevier Science Publishers B.V.( 生物医学组 )， 第1章； Design of Prodrugs ： Bioreversible derivatives for various functional groups and chemical entities( 前药的设计 ： 用于不同官能团和化学实体的生物可逆的衍生物 ) (Hans Bundgaard) ； Bundgaard 等人 Int.J.of Pharmaceutics 22(1984)45-56(Elsevier) ； Bundgaard 等 人 Int.J.of Pharmaceutics 29(1986)19-28(Elsevier) ； Bundgaard 等 人 J.Med.Chem.32(1989)2503-2507Chem.Abstracts 93， 137935y(Bundgaard 等 人 ) ； Chem. Abstracts 95， 138493f(Bundgaard 等 人 ) ； Chem.Abstracts 95， 138592n(Bundgaard 等 人 )； Chem.Abstracts 110 ， 57664p(Alminger 等 人 ) ； Chem.Abstracts 115 ， 64029s(Buur 等 人 ) ； Chem.Abstracts 115， 189582y(Hansen 等 人 ) ； Chem.Abstracts 117， 14347q(Bundgaard 等 人 ) ； Chem.Abstracts 117， 55790x(Jensen 等 人 ) ； 以 及 Chem. Abstracts 123， 17593b(Thomsen 等人 )。
术 语 “施 用 (administrated)” 、 “施 用 (administration)” 或 “施 用 (administrating)” 化合物应理解成意指通过使需要治疗的个体与本发明的任何化合物接 触， 或以其他方式使所述个体暴露于所述化合物而向所述个体提供所述化合物， 所述个体 包括动物。
术语 “体外的” 指在人工条件下， 在身体外部的生物实体、 生物过程或生物反应。 例 如， 体外的细胞生长应理解成在身体外部的环境中， 如在试管、 培养板或微量滴定板中生长的细胞。 术语 “治疗有效量” 意指将引起正在由研究者、 科学家、 药理学家、 药剂师、 兽医、 内 科医生或其他临床医生所探求的细胞、 组织、 系统、 身体、 动物、 个体、 患者或人类的生物、 生 理、 药理、 治疗或医学响应的主题化合物的量， 所述响应如， 减轻了诸如增殖性病症或疾病 ( 例如癌症或肿瘤 ) 的病症或疾病的影响 / 症状， 或者杀死增殖细胞 ( 诸如肿瘤细胞 ) 或抑 制其生长。治疗有效量可以通过标准过程， 包括在下面 “剂量” 部分中描述的那些过程来确 定。
术语 “进 一 步 治 疗” 、 “进 一 步 施 用 (further administer)”或 “进 一 步 施 用 (further administered)” 意指不同的治疗剂或化合物可以被一起施用， 交替地施用或间 歇地施用。 这种进一步施用可以是时间上或空间上分隔的， 如在不同的时刻， 在不同天或经 由不同的施用方式或途径。
本发明的某些化合物
本发明的一方面涉及具有由式 (I) 表示的结构的化合物或其任何互变异构或立 体异构形式， 其中在一个或多个 R1、 R5 和 / 或 R6 中标明为 “取代的或未取代的” 部分中的一 Sm 个或多个氢原子可以用一个或多个取代基 -[(R )n] 独立地取代， 如上所述。 6 6
表 4 表示具有取代的芳基或杂芳基作为 R 即基团 -R -[(RSm)n] 的本发明的示例性 化合物的选择， 和怎样将基团 -[(RSm)n] 在各情况下切断。
本发明的一方面涉及具有由式 (I) 表示的结构的化合物或其任何互变异构或立 体异构形式， 如上定义， 其中 R1 不是取代的或未取代的 -NH- 吡啶 -2- 基。
本发明的一方面涉及具有由式 (I) 表示的结构的化合物或其任何互变异构或 立 体 异 构 形 式， 其 中 R1 选 自 氢、 -NH2 和 取 代 的 或 未 取 代 的 ： -NH-C1-6- 烷 基、 -NH- 环 烷 7 7 2 3 基、 -NH- 杂环烷基、 -NH-C1-6- 亚烷基 -OR 和 -NH-C1-6- 亚烷基 -NR 2， 且其中 R 、 R、 R 4、 R5 和 R7 如上面所定义。
本发明的一个进一步的方面涉及具有由式 (I) 表示的结构的化合物或其任何互 变异构或立体异构形式， 其中 R1 是取代的或未取代的 -NH-C1-6- 亚烷基 -NR72， 其中 R2、 R3、 R4、 R5 和 R7 如上面所定义。
本发明的另一方面涉及具有由式 (I) 表示的结构的化合物或其任何互变异构或 立体异构形式， 其中 R2 选自氢和氯， 且其中 R1、 R3、 R4 和 R5 如上面所定义。在某些实施方案 中， R2 是 - 氯。
本发明的另一方面涉及具有由由式 (I) 表示的结构的化合物或其任何互变异构 或立体异构形式， 其中 R3 是氢且 R4 是 -NH-C( ＝ O)-(NH)x-(CH2)y-R6， 其中 x 和 y 独立地选 1 2 5 6 自 0 和 1， 且其中 R 、 R、 R 和 R 如上面所定义。在具体的实施方案中， y 是 0。
本发明的另一方面涉及具有由式 (I) 表示的结构的化合物或其任何互变异构或 立体异构形式， 其中 R4 是氢且 R3 是 -NH-C( ＝ O)-(NH)x-(CH2)y-R6， 其中 x 和 y 独立地选自 1 2 5 6 0 和 1， 且其中 R 、 R、 R 和 R 如上面所定义。在某些实施方案中， x 是 0。在其它实施方案 中， y 是 0。在具体实施方案中， x 和 y 是 0。
本发明的另一方面涉及具有由式 (I) 表示的结构的化合物或其任何互变异构或 立体异构形式， 其中 R5 选自取代的或未取代的 ： 烷基和环烷基， 且其中 R1、 R2、 R3 和 R4 如上 面所定义。在某些实施方案中， R5 选自取代的或未取代的 ： -C1-6- 烷基和 -C3-8- 环烷基。在
某些实施方案中， R5 是取代的或未取代的 -C1-6- 烷基， 且在具体实施方案中， R5 是甲基。
本领域的技术人员将会认识到， 本文公开的化合物的可变区的各个可能残基的所 1 2 3 4 5 有特定的组合， 即R、 R、 R、 R 和 R 的特定的组合， 都在本发明的范围内。
在本发明的一个实施方案中， 本发明的化合物具有 350 到 1000 之间， 特别地在 400 到 800 之间， 更特别地在 400 到 600 之间， 且更加特别地在 400 到 550 之间的分子量。在 某些实施方案中， 本发明的化合物具有以下特征的一个或多个 ： (i) 不超过 5 个氢键供体， (ii) 不超过 10 个氢键受体， 以及 (iii) 不超过 10 个可旋转的键 ( 排除到端原子的键 )。 在某些实施方案中， 式 (I) 的化合物符合 Lipinski 的 “五规则” (Lipinski， Adv.Drug Del. Rev.1997 ； 23 ： 3)， 具有低于 500 的分子量， 不超过 5 个氢键供体， 不超过 10 个氢键受体以 及 -2 到 5 之间的 cLogP 值。
在本发明的一个实施方案中， 本发明的化合物是 B-Raf 活性的抑制剂。在某些实 施方案中， 本发明的化合物抑制 B-Raf 活性， 且其 IC50 值小于 1μM， 这种 IC50 值是根据下面 显示的实施例中描述的 B-Raf 抑制测定来确定。在某些实施方案中， IC50 值小于 0.5μM， 小 于 0.2μM， 小于 0.1μM 或小于 0.01μM。
在本发明的另一个实施方案中， 本发明的化合物是 p38 活性的抑制剂。在某些实 施方案中， 本发明的化合物抑制 p38 活性， 且其 IC50 值小于 1μM。在某些实施方案中， IC50 值小于 0.5μM， 小于 0.2μM， 小于 0.1μM 或小于 0.01μM。
在本发明的一个实施方案中， 本发明的化合物具有大于 90 ％、 大于 95 ％、 大于 98％或大于 99％的纯度。这样的化合物可以一种或多种晶体形式存在， 所述晶体包括两种 或更多种多晶形式， 并且可以干燥固体或以包含确定量溶剂的溶剂化物存在， 所述溶剂化 物包括包含确定量水的水合物。
在另一个实施方案中， 本发明的化合物是计划内的且有意而为之的合成化学方案 的产物， 即通过在反应容器内进行的特定且有计划的化学过程产生， 而不是通过降解、 新陈 代谢或发酵， 也不是作为其他化合物合成中的杂质或副产物而产生。
例如， 在某些实施方案中， 本发明的化合物被纯化或分离以具有至少 80％、 优选至 少 90％、 更优选至少 95％如至少 97％、 至少 98％或甚至至少 99％的纯度。如本文使用的， 纯度可以指绝对纯度或相对纯度。绝对纯度指在一个或多个纯化步骤之前或之后， 作为合 成化学方案的产物获得的本发明的化合物的量。 相对纯度指本发明的化合物相对于如可以 存在于合成化学方案的产物中的一种或多种杂质的量， 杂质诸如副产物、 降解产物 ( 如， 代 谢产物、 氧化或水解的产物等 ) 和 / 或降解以形成本发明的化合物的化合物 ( 如， 前体或前 药 )。因而， 绝对纯度指化合物相对于所有其他化合物的量， 而相对纯度通常不受添加不相 关化合物的影响， 所述不相关化合物诸如赋形剂、 稳定剂或用于联合施用的其他药剂。 纯度 可以基于一种化合物相对于其他化合物的重量、 体积或摩尔比来评估。纯度可以通过多种 分析技术来测量， 分析技术包括元素丰度、 UV- 可见光光谱法、 HPLC、 GC-MS、 NMR、 质谱和薄层 色谱法， 优选通过 HPLC、 GC-MS 或 NMR 来测量。
本发明的又一个方面涉及上述化合物的前药。 具体实施方案
在具体的方面， 本发明涉及由式 (Ia) 表示的结构的化合物或其任何互变异构或立体异构形式，
其中 X 选自 -O- 和 -NR7-， 且其中 R3、 R4 和 R7 如上面所描述， 然而， 条件是化合物 (A) 除外 ：
在某些实施方案中， X 是 -NR7-。在具体的这些实施方案中， 两个 R7 都是甲基。
在其它一些实施方案中， R3 是氢且 R4 是 -NH-C(O)-(NH)x-(CH2)y-R6， 其中 x 和 y 独 6 立地选自 0 和 1， 且 R 如上面所定义。在具体的实施方案中， y 是 0。 4 3
在其它一些实施方案中， R 是氢且 R 是 -NH-C(O)-(NH)x-(CH2)y-R6， 其中 x 和 y 独 6 立地选自 0 和 1， 且 R 如上面所定义。在某些实施方案中， x 是 0。在其它实施方案中， y是 0。在具体实施方案中， x 和 y 是 0。
在式 I 的某些实施方案中， 化合物选自 ：
4- 氯 -N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
5- 叔丁基 -2H- 吡唑 -3- 羧酸 {4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧 基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }- 酰胺 ；
3， 4- 二氯 -N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }- 苯甲酰胺 ；
5- 叔丁基 -2- 甲基 -2H- 吡唑 -3- 羧酸 {4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨 基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }- 酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3- 氟 -4- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
1- 甲基 -1H- 吲哚 -2- 羧酸 {4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧 基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }- 酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡
啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-2- 甲氧基 -5- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-2- 甲氧基 -4- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-2-(4- 氯 -3- 三氟甲基 - 苯基 )- 乙酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-4- 氟 -3- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
3- 氯 -N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }- 苯甲酰胺 ；
5- 叔丁基 -N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-2- 甲氧基 - 苯甲酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-2- 氟 -4- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
3- 氯 -N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-4- 甲氧基 - 苯甲酰胺 ；
3， 5- 二氯 -N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }- 苯甲酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-2- 氟 -5- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-2-(3- 三氟甲基 - 苯基 )- 乙酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-2- 吗啉 -4- 基 - 异烟酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-4- 苯氧基 - 苯甲酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3- 氟 -5- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
2- 氯 -N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-5- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
4- 氯 -N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3- 三氟甲氧基 - 苯甲酰胺 ；
5- 叔丁基 -2- 苯基 -2H- 吡唑 -3- 羧酸 {4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨 基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }- 酰胺 ；
3- 氯 -N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-4-(3- 氟 - 苄氧基 )- 苯甲酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }- 苯甲酰胺 ；N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-4- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3， 5- 双 - 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
2- 氯 -N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }- 苯甲酰胺 ；
4- 叔丁基 -N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }- 苯甲酰胺 ；
4- 氯 -N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }- 苯甲酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-2- 氟 -3- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
6- 氟 -1H- 苯并咪唑 -2- 羧酸 {4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧 基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }- 酰胺 ；
1-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3-(3- 氯 -4- 甲氧基 - 苯基 )- 脲 ；
1-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3-(4- 三氟甲基 - 苯基 )- 脲 ；
1-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3-(4- 氟 -3- 三氟甲基 - 苯基 )- 脲 ；
1-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3-(3- 氯 - 苯基 )- 脲 ；
1-(4- 叔 丁 基 - 苯 基 )-3-{4- 氯 -3-[2-(2- 二 甲 基 氨 基 - 乙 基 氨 基 )-8- 甲 氧 基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }- 脲 ；
1-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3-(4- 苯氧基 - 苯基 )- 脲 ；
1-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3-(4- 氯 - 苯基 )- 脲 ；
1-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3-(4- 甲基 -3- 三氟甲基 - 苯基 )- 脲 ；
1-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3-(2- 氟 -3- 三氟甲基 - 苯基 )- 脲 ；
1-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3-(2- 氟 -5- 三氟甲基 - 苯基 )- 脲 ；
1-(3， 5- 双 - 三氟甲基 - 苯基 )-3-{4- 氯 -3-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲 氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }- 脲 ；
4- 氯 -N-{3- 氯 -4-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
N-{3- 氯 -4-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-2- 甲氧基 -4- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
4- 氯 -N-{3- 氯 -4-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3- 三氟甲氧基 - 苯甲酰胺 ；
N-{3- 氯 -4-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-4-(4- 甲基 - 哌嗪 -1- 基甲基 )- 苯甲酰胺 ；
N-{3- 氯 -4-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-2- 吗啉 -4- 基 - 异烟酰胺 ；
3- 氯 -N-{3- 氯 -4-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-4-(3- 氟 - 苄氧基 )- 苯甲酰胺 ；
5- 叔丁基 -2- 苯基 -2H- 吡唑 -3- 羧酸 {3- 氯 -4-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨 基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }- 酰胺 ；
N-{3- 氯 -4-[2-(2- 二甲基氨基 - 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-2-(4- 氯 -3- 三氟甲基 - 苯基 )- 乙酰胺 ；
2， 6- 二氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )- 异烟酰胺 ；
2- 氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-6- 吡咯烷 -1- 基 - 异烟酰胺 ；
2- 氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-6- 二甲基氨基 - 异烟酰胺 ；
2- 氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-6- 哌啶 -1- 基 - 异烟酰胺 ；
2- 氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-6- 吗啉 -4- 基 - 异烟酰胺 ；
2- 氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-6-(4- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 异烟酰胺 ；
2- 氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-6- 二乙基氨基 - 异烟酰胺 ；
2- 氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-6- 乙基氨基 - 异烟酰胺 ；
2- 氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-6- 异丙基氨基 - 异烟酰胺 ；
2- 氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-6-(2- 二甲基氨基乙基氨基 )- 异烟酰胺 ；
2- 氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-6-(1- 甲基 - 哌啶 -4- 基氨基 )- 异烟酰胺 ；
2- 氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-6-(4-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 )- 苄基氨基 )- 异烟酰 胺；
N-(4- 氯 -3-(8- 甲氧基 -2-(2- 甲氧基 - 乙基氨基 )-7- 氧代 -7， 8- 二氢吡啶并[2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 )- 苯基 )- 苯甲酰胺 ；
N-(4- 氯 -3-(2- 乙 基 氨 基 -8- 甲 氧 基 -7- 氧 代 -7， 8- 二 氢 吡 啶 并 [2， 3-d] 嘧 啶 -6- 基 ) 苯基 )-3- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
N-(3-(2- 氨 基 -8- 甲 氧 基 -7- 氧 代 -7， 8- 二 氢 吡 啶 并 [2， 3-d] 嘧 啶 -6- 基 )-4- 氯 - 苯基 )-3- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
N-(4- 氯 -3-(8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 )- 苯 基 )-3- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
N-{4- 氯 -3-[2-(3- 二甲基氨基 - 丙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢 - 吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ]- 苯基 }-3- 三氟甲基 - 苯甲酰胺 ；
其中所述化合物具有如下面的表 1 所公开的结构。在上面给出的化学名称和表 1 中所示的相应结构之间不一致的情形下， 认为结构是正确的， 且相应地修改名称。
制剂、 剂量和应用
本发明进一步提供了包含上述化合物或其前药和药学上可接受的稀释剂、 赋形剂 或载体的药物组合物， 包括含有治疗有效量的所述化合物或前药的药物组合物。
制剂
可以配制并施用本发明的组合物以治疗有需要的个体， 这是通过使活性成分在个 体身体内与活性成分作用位点 ( 诸如细胞 ) 产生接触的任何方法。可以通过可用于与药物 结合使用的任何常规的方法， 以单独的治疗活性成分或治疗活性成分的组合来施用该本发 明组合物。它们可以单独施用， 但通常与根据所选的施用途径和标准药物实践选择的药学 上可接受的稀释剂、 赋形剂或载体一起施用。
也可以使用包含小于治疗有效量的上述的任何化合物或其前药的药物组合物， 诸 如当与诸如抗癌剂的另一种药物组合物组合使用， 使得该组合是治疗上有效的， 或可以用 于预防性治疗时。
根据本发明使用的药物组合物可以以常规的方式， 使用一种或多种药学上可接受 的稀释剂、 赋形剂或载体来配制。 可以配制本发明的药物组合物用于多种施用途径， 包括全 身性施用和局部施用或局域施用。 技术和制剂通常可以见于 Remington’ s Pharmaceutical Sciences( 雷明顿药学 )， Meade Publishing Co.， Easton， PA。如下面所详细描述， 本发明 的药物组合物可以被专门配制用于以固体或液体形式施用， 包括适用于下述方式的施用 ： (1) 口服施用， 如灌服剂 (drench)( 水或非水溶液或悬浮液 )、 片剂、 胶囊、 大丸剂、 粉剂、 颗 粒剂、 用于施用至舌的糊剂 ； (2) 肠胃外施用， 作为例如无菌溶液或悬浮液通过皮下肌内注 射或静脉内注射 ； (3) 局部施用， 作为例如施用至皮肤的乳剂、 软膏或喷雾剂 ； 或 (4) 阴道内 或直肠内， 例如作为阴道栓剂、 乳剂或泡沫剂。在某些实施方案中， 药物制剂可以是无热原 的， 即基本上不会升高患者的体温。
润湿剂、 乳化剂和润滑剂， 诸如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁， 以及着色剂、 释放剂、 包衣剂、 甜味剂、 调味剂和加香剂、 防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中。
药学上可接受的抗氧化剂的示例包括 ： (1) 水溶性抗氧化剂， 诸如抗坏血酸、 盐酸 半胱氨酸、 硫酸氢钠、 偏亚硫酸氢钠、 亚硫酸钠以及类似物 ； (2) 油溶性抗氧化剂， 诸如抗坏 血酸棕榈酸酯、 丁基化羟基苯甲醚 (BHA)、 丁基化羟基甲苯 (BHT)、 卵磷脂、 没食子酸丙酯、 α- 生育酚以及类似物 ； 以及 (3) 金属鳌合剂， 诸如柠檬酸、 乙二胺四乙酸 (EDTA)、 山梨糖醇、 酒石酸、 磷酸以及类似物。
本发明的制剂包括适合于口服施用、 鼻施用、 局部施用 ( 包括口腔和舌下 )、 直肠 施用、 阴道施用和 / 或肠胃外施用的那些制剂。制剂可方便地以单位剂量形式提供且可以 通过药学领域中所公知的任何方法来制备。 可以与载体材料结合以制备单剂量形式的活性 成分的量将会根据待治疗的宿主以及具体施用模式来改变。 可以与载体材料结合以制备单 剂量形式的活性成分的量通常将是产生疗效的抑制剂的量。 通常而言， 以百分比计， 该活性 成份的量的范围将会是约 1％到约 99％， 优选约 5％到约 70％， 最优选约 10％到约 30％。
制备这些制剂或组合物的方法包括使本发明的化合物与载体以及任选一种或多 种附加成分结合的步骤。 一般而言， 通过使本发明的化合物与液体载体、 或细碎固体载体或 两者均匀且紧密地结合、 然后必要时使产物成形来制备制剂。
对全身性施用来说， 优选注射， 包括肌内、 静脉内、 腹膜内和皮下 ( 分别是 i.m.、 i.v.、 i.p. 和 s.c.)。如本文使用的， 短语 “全身性施用 (systemic administration)” “全 、 身性施用 (administered systemically)” 、 “外周施用 (peripheral administration)” 和 “外周施用 (administered peripherally)” 意指直接施用于中枢神经系统以外的化合物、 药物或其他材料的施用， 其使得化合物、 药物或其他材料进入患者全身且因而经受代谢和 其他类似的过程， 所述施用如皮下施用。 对注射来说， 本发明的药物组合物可以在液体溶液中， 优选在诸如 Hank 溶液或 Ringer 溶液的生理上相容的缓冲液中配制。 此外， 药物组合物可以配制成固体形式， 并且在 即将使用前再溶解或悬浮。还包括冻干形式。
可以配制成适于口服施用的本发明的药物组合物可以是胶囊、 扁胶囊剂、 香囊 (sachet)、 丸剂、 片剂、 锭剂 ( 使用调味的基质， 通常是蔗糖和阿拉伯树胶或黄蓍胶 )、 粉剂、 颗粒剂的形式， 或是于水或非水液体中的溶液或悬浮液， 或是水包油或油包水的液体乳液， 或是酏剂或糖浆， 或是软锭剂 ( 使用惰性基质， 诸如明胶和甘油， 或蔗糖和阿拉伯树胶 ) 和 / 或是漱口剂以及类似制剂， 每一种都包含预先确定量的本发明的化合物作为活性成分。本 发明的化合物还可以作为大丸剂、 药糖剂或糊剂施用。
在制备用于口服 (p.o.) 施用的固体剂型 ( 胶囊、 片剂、 丸剂、 糖衣药丸、 粉剂、 颗粒 剂以及类似剂型 ) 的本发明的药物组合物时， 作为活性成分的本发明的化合物与一种或多 种药学上可接受的载体 ( 诸如柠檬酸钠或磷酸二钙 ) 和 / 或下面中的任何一种混合 ： (1) 填充剂或补充剂， 诸如淀粉、 乳糖、 蔗糖、 葡萄糖、 甘露醇和 / 或硅酸 ； (2) 粘合剂， 诸如， 如羧 (3) 湿润剂， 诸如甘 甲基纤维素、 海藻酸盐、 明胶、 聚乙烯吡咯烷酮、 蔗糖和 / 或阿拉伯树胶 ； 油； (4) 崩解剂， 诸如琼脂、 碳酸钙、 马铃薯淀粉或木薯淀粉、 海藻酸、 某些硅酸盐以及碳酸 钠； (5) 溶液阻滞剂 (solution retarding agents)， 诸如石蜡 ； (6) 吸收加速剂， 诸如季铵 化合物 ； (7) 润湿剂， 诸如， 如十六烷醇和单硬脂酸甘油酯 ； (8) 吸收剂， 诸如高岭土和膨润 土； (9) 润滑剂， 诸如滑石、 硬脂酸钙、 硬脂酸镁、 固体聚乙二醇、 十二烷基硫酸钠及其混合 物； 以及 (10) 着色剂。在胶囊、 片剂和丸剂的情况下， 药物组合物还可以包括缓冲剂。还可 以采用类似类型的固体组合物作为软填充明胶胶囊和硬填充明胶胶囊中的填充剂， 使用诸 如乳糖或奶糖 (milk sugar)、 高分子量的聚乙二醇以及类似物的赋形剂。
明胶胶囊包含作为活性成分的本发明的化合物和粉状载体， 载体诸如乳糖、 淀粉、 纤维素衍生物、 硬脂酸镁、 硬脂酸以及类似物。类似的载体可以用于制备压制片剂。片剂和
胶囊都可以被制造成缓释产品以提供药物在数小时的时期内持续释放。压制片剂可以被 糖包衣或薄膜包衣以遮掩任何令人不愉快的气味并保护片剂免受环境的影响， 或被肠溶包 衣以在胃肠道内选择性地崩解。 也可以采用类似类型的固体组合物作为软填充剂明胶胶囊 和硬填充明胶胶囊中的填充剂 ； 在这方面， 优选的材料还包括乳糖或奶糖以及高分子量的 聚乙二醇。在软明胶胶囊中， 优选的制剂是油中的溶液或悬浮液， 油如橄榄油、 Miglyol 或 Capmul。可以酌情添加抗氧化剂以防止长期降解。
可以任选地用一种或多种附加成分， 通过压制或模制来制备片剂。可使用粘合剂 ( 如， 明胶或羟丙基甲基纤维素 )、 润滑剂、 惰性稀释剂、 防腐剂、 崩解剂 ( 如， 淀粉羟乙酸钠 或交联的羧甲基纤维素钠 )、 表面活性剂或分散剂来制备压制的片剂。 可以通过在合适的机 器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉状抑制剂的混合物来制备模制的片剂。
本发明的片剂和的其他固体剂型的药物组合物 ( 诸如糖锭剂、 胶囊、 丸剂和颗粒 剂 ) 可以任选地被标记 (scored) 或制备成带有包衣和外壳， 诸如肠溶包衣和制药领域内公 知的其他包衣。 它们还可以是制剂， 以便提供其内的活性成分的缓释或控释， 使用如变化比 例的羟丙基甲基纤维素 ( 以提供期望的释放曲线 )、 其他聚合物基质、 脂质体和 / 或微球。 它们可以通过例如细菌截留滤器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌， 所 述灭菌剂可以在即将使用前溶解在无菌水或一些其他可注射的无菌介质中。 这些组合物还 可以任选地包含遮光剂且可以是这样一种组合物 ： 它们任选地以延迟方式在某一部分胃肠 道内仅仅或优先释放活性成分。可使用的嵌入式组合物的示例包括聚合物质和蜡。活性成 分还可以是微包封形式， 必要时， 具有一种或多种上述赋形剂。
用于口服施用本发明药物组合物的液体剂型包括药学上可接受的乳状液， 微乳状 液、 溶液、 悬浮液、 糖浆和酏剂。 除了活性成分外， 液体剂型可以包含本领域通常使用的惰性 稀释剂， 如水或其他溶剂、 增溶剂和乳化剂， 诸如乙醇、 异丙醇、 碳酸乙酯、 乙酸乙酯、 苄醇、 苯甲酸苄酯、 丙二醇、 1， 3- 丁二醇、 油 ( 特别是， 棉籽油、 落花生油、 玉米油、 胚芽油、 橄榄油、 蓖麻油和芝麻油 )、 甘油、 四氢呋喃甲醇 (tetrahydrofuryl alcohol)、 聚乙二醇和山梨聚糖 的脂肪酸酯及其混合物。
除了惰性稀释剂， 用于口服施用的药物组合物还可以包括佐剂， 诸如润湿剂、 乳化 和悬浮剂、 甜味剂、 调味剂、 着色剂、 加香剂以及防腐剂。
除了本发明的药物组合物外， 悬浮液可以包含悬浮剂， 如乙氧基化异十八醇、 聚氧 乙烯山梨醇和山梨聚糖酯、 微晶纤维素、 偏氢氧化铝、 膨润土、 琼脂和黄蓍胶及其混合物。
对于口腔施用来说， 药物组合物可以采用以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。
对于通过吸入的施用来说， 本发明的药物组合物使用合适的推进剂， 以由加压包 或喷雾器提供的气溶胶喷雾的形式来方便地输送， 所述推进剂如二氯二氟甲烷、 三氯氟甲 烷、 二氯四氟乙烷、 二氧化碳或其他合适的气体。就加压的气溶胶而言， 剂量单位可以通过 提供阀门以输送计量的量来进行确定。例如， 可以配制包含治疗剂和诸如乳糖或淀粉的合 适粉状基质的粉状混合物的用于吸入器或吹入器的明胶的胶囊和药筒。
药物组合物可以被配制用于通过注射的肠胃外施用， 如通过快速浓射或连续输 注。 用于注射的制剂可以单位剂量形式提供在具有添加的防腐剂的例如安瓿或多剂量容器 中。 药物组合物可以采用诸如油性或水性媒介物中的悬浮液、 溶液或乳状液的形式， 且可以 包含诸如悬浮剂、 稳定剂和 / 或分散剂的配制剂 (formulatory agent)。可选择地， 活性成分可以呈粉末形式， 用于在使用之前用合适的媒介物， 如无热原的无菌水重构。
如本文使用的， 短语 “肠胃外施用 (parenteral administration)” 和 “肠胃外施 用 (administrated parenterally)” 意指除肠内施用和局部施用以外的施用方式， 通常经 由注射， 且包括但不限于， 静脉内、 肌内、 动脉内、 鞘内、 囊内、 眼窝内、 心脏内、 皮内、 腹膜内、 经气管的、 皮下、 表皮下、 关节内、 囊下、 蛛网膜下、 脊柱内和胸骨内注射和输注。
适于肠胃外施用的本发明的药物组合物包括本发明的一种或多种抑制剂与一种 或多种药学上可接受的无菌等渗的水或非水溶液、 分散体、 悬浮液或乳状液、 或可以刚好在 使用前重新构建成可注射的无菌溶液或分散体的无菌粉末， 其可以包含抗氧化剂、 缓冲剂、 抑菌剂、 溶质、 悬浮剂或增稠剂， 所述溶质提供与预期的接受者的血液等渗的制剂。
本发明的药物组合物中可以采用的合适的水和非水载体的示例包括水、 乙醇、 多 元醇 ( 诸如乙二醇、 丙二醇、 聚乙二醇以及类似的醇 ) 以及其合适的混合物， 植物油 ( 诸如 橄榄油 ) 以及可注射的有机酯 ( 诸如油酸乙酯 )。可以通过， 如使用诸如卵磷脂的包衣材 料， 通过维持分散剂情况时所要求的粒径， 以及通过使用表面活性剂来维持合适的流动性。
这些药物组合物还可以包含佐剂， 诸如防腐剂、 润湿剂、 乳化剂和分散剂。通过加 入各种抗菌剂和抗真菌剂可以确保防止微生物起作用， 抗菌剂和抗真菌剂如对羟基苯甲 酸、 氯丁醇、 苯酚山梨酸以及类似物。还可以期望药物组合物包括诸如糖、 氯化钠以及类似 物的等渗剂。此外， 通过加入延迟吸收的物质 ( 诸如一元硬脂酸铝和 / 或明胶 )， 可以使可 注射的药物形式的吸收延长。
除了前述制剂外， 药物组合物还可以被配制成储存制剂 (depot preparation)。 这 种长效制剂可以通过植入 ( 如， 皮下或肌内植入 ) 或通过肌内注射来施用。因而， 例如， 可 以用合适的聚合物材料或疏水性材料 ( 如， 作为可接受的油中的乳状液 ) 或离子交换树脂 来配制药物组合物， 或将其配制为微溶的衍生物， 如微溶的盐。
全身性施用也可以是通过跨黏膜或透皮的方式。对跨黏膜或透皮施用来说， 在制 剂中使用了适合于要透过的屏障的渗透剂。 这种渗透剂在本领域中通常是已知的， 且包括， 如用于跨黏膜施用的胆盐和夫西地酸衍生物。此外， 去污剂可以用于促进渗透。跨黏膜施 用可以是通过鼻喷雾剂或使用栓剂。对局部施用来说， 将本发明的药物组合物配制成如本 领域通常已知的软膏、 药膏、 凝胶或乳剂。洗液可以局部用于治疗损伤或炎症以加快愈合。
在一些情况下， 为了延长抑制剂的疗效， 需要减缓从皮下或肌内注射吸收抑制剂。 这可以通过使用水溶性差的晶体材料或无定形材料的液体悬浮液来实现。那么， 抑制剂的 吸收速率取决于其溶出速率， 而溶出速率又可能取决于晶体大小和晶形。 可选择地， 延迟吸 收肠胃外施用的抑制剂形式是通过将抑制剂溶解或悬浮于油媒介物中来实现。
本发明的药物组合物可以被配制成栓剂用于直肠施用或阴道施用， 此栓剂可以通 过使本发明的一种或多种化合物与一种或多种合适的无刺激性的赋形剂或载体混合来制 备， 赋形剂或载体包括， 如可可油、 聚乙二醇、 栓蜡剂或水杨酸酯， 此栓剂在室温下是固体， 但在体温下是液体， 且因此在直肠或阴道腔内融化并释放活性抑制剂。
适于阴道施用的本发明的药物组合物的制剂还包括含有在本领域中已知是合适 的载体的阴道栓剂、 棉塞、 乳剂、 凝胶、 糊剂、 泡沫剂或喷雾剂。
用于局部或透皮施用本发明的化合物的剂型包括粉剂、 喷雾剂、 软膏、 糊剂、 乳剂、 洗液、 凝胶、 溶液、 贴片和吸入剂。 在无菌条件下， 可以使所述化合物与药学上可接受的载体混合， 并且与可能需要的任何防腐剂、 缓冲剂或推进剂混合。
除了本发明的化合物之外， 软膏、 糊剂、 乳剂和凝胶可以包含赋形剂， 诸如动植物 脂肪、 油、 蜡、 石蜡、 淀粉、 黄蓍胶、 纤维素衍生物， 聚乙二醇、 硅氧烷、 膨润土、 硅酸、 滑石和氧 化锌或其混合物。
除了本发明的化合物之外， 粉剂和喷雾剂可以包含赋形剂， 诸如乳糖、 滑石、 硅酸、 氢氧化铝、 硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。 喷雾剂可以另外包含常规推进剂， 诸 如氯氟烃和未取代的挥发性烃， 诸如丁烷和丙烷。
透皮贴片具有提供了将本发明的化合物受控地输送至身体的额外的优势。 这种剂 型可以通过将本发明的抑制剂溶解或分散在合适的介质中而形成。 也可以使用吸收促进剂 以增大药物穿过皮肤的通量。 这种通量的速率可以通过提供速率控制膜或使本发明的化合 物分散在聚合物基质或凝胶中来控制。
眼制剂， 眼用软膏、 粉剂、 溶液以及类似制剂也被涵盖在本发明的范围内。
必要时， 药物组合物可以被提供在包装或分配器设备中， 包装或分配器设备可以 包含一种或多种含有活性成分的单位剂量形式。包装可以例如包括金属或塑料箔， 诸如泡 罩包装 (blister pack)。包装或分配器设备可以附有施用说明书。在其他实施方案中， 包 装或分配器可以被进一步封装在外盒中。
本发明的药物组合物还可以被配制成缓释和 / 或定时释放的制剂。这种缓释和 / 或定时释放的制剂可以通过本领域的技术人员公知的缓释装置或输送设备来制备， 缓 释装置或输送设备诸如美国专利第 3,845,770 号 ； 第 3,916,899 号 ； 第 3,536,809 号 ； 第 3,598,123 号 ； 第 4,008,719 号 ； 第 4,710,384 号 ； 第 5,674,533 号 ； 第 5,059,595 号 ； 第 5,591,767 号 ； 第 5,120,548 号 ； 第 5,073,543 号 ； 第 5,639,476 号 ； 第 5,354,556 号 ； 以及 第 5,733,566 号中描述的那些， 每一个专利的公开内容在此以引用方式并入。本发明的药 物组合物可以用于提供一种或多种活性成分的缓慢释放或缓释， 其使用， 如羟丙甲基纤维 素、 其他聚合物基质、 凝胶、 渗透膜、 渗透系统、 多层包衣、 微粒、 脂质体、 微球或类似物或其 组合以提供所需的呈变化比例的释放曲线。 可以容易地选择用于本发明的药物组合物的包 括本文描述的那些在内的本领域的普通技术人员已知的合适的缓释制剂。因而， 本发明涵 盖适于持续释放的且适于口服施用的单一单位剂量形式， 诸如但不限于， 片剂、 胶囊、 凝胶 胶囊 (gelcap)、 囊片 (caplet)、 粉剂以及类似剂型。
通过在诸如聚交酯 - 聚乙交酯的可生物降解的聚合物中形成主题抑制剂的微包 封基质制备了可注射的储存形式。根据药物与聚合物的比， 以及所采用的特定聚合物的 性质， 可以控制药物的释放速率。其他可生物降解的聚合物的示例包括聚 ( 原酸酯 ) 和聚 ( 酐 )。还可以通过将药物包埋于与身体组织相容的脂质体或微乳状液中来制备可注射的 储存形式。
当本发明的化合物作为药物被施用至诸如人和动物的个体时， 它们可以自身或作 为含有如 0.1％到 99.5％ ( 在某些实施方案中， 是 0.5％到 90％ ) 的活性成分与药学上可 接受的载体的药物组合物被提供。
本发明提供了通过施用诸如治疗有效量的量的至少一种本文公开的化合物或其 前药、 互变异构体、 药学上可接受的盐、 N- 氧化物或立体异构体形式来治疗包括癌症在内的 增殖性、 退行性以及其他病症或疾病的新方法。本发明还提供了通过施用至少一种这些化合物与另一种抗癌剂或抗增殖剂的治疗有效组合来治疗包括癌症在内的增殖性、 退行性或 其他病症或疾病的方法。
本发明的化合物可以作为盐或前药被施用， 当施用至个体时， 盐或前药能够直接 或间接提供母体化合物， 诸如本文定义的化合物， 或者盐或前药本身呈现出活性。 非限制性 的示例包括药学上可接受的盐， 可选择地被称为 “生理学上可接受的盐” 。 此外， 对化合物进 行的修饰可以影响其生物活性， 在某些情况下使之超过母体化合物的活性。该活性的评估 可以通过制备化合物的盐或前药形式， 并使用本文描述的方法或本领域的技术人员已知的 其他方法来测试其活性。
如对本领域的技术人员来说是明显的， 通过使用给定主题化合物的前药， 用这种 前药施用或治疗的诸如动物的个体将暴露于主题化合物， 且因此被间接施用主题化合物。 这一过程可以使与诸如增殖性疾病或病症 ( 包括癌症 ) 的疾病有关的那些细胞暴露于主题 化合物。
本发明的化合物可以包含不对称取代的碳原子， 且可以以旋光或外消旋形式来分 离。 在本领域中， 如何制备旋光形式是公知的， 诸如通过拆分外消旋形式或通过从旋光的起 始材料合成。 除非明确指出具体的立体化学或异构体形式， 否则结构的所有手性、 非对称异 构体、 外消旋形式和所有的几何异构体形式都是预期的。用于制备本发明的化合物和其中 所制备的中间体的所有方法都被认为是本发明的一部分。
剂量
所施用的剂量将会是足够或由诸如医生、 药剂师或护士的保健专业人士合理预期 引起如癌症或肿瘤的症状改善的化合物的治疗有效量， 当然， 该剂量会根据已知因素来变 化， 因素诸如特定活性成分的药代动力学特征以及其施用方式和途径 ； 接受者的年龄、 性 别、 健康和体重 ； 症状的性质和程度 ； 同时治疗的种类、 治疗频率和所期望的效果等。
主题化合物还可以预防性治疗施用。如果在不期望的疾患 ( 如， 宿主动物的疾病 或其他不期望的状态 ) 的临床表现之前施用该化合物， 那么此治疗就是预防性的 ( 即， 其 保护个体避免引起、 发展或进一步发展不期望的疾患 )。主题化合物还可以被施用以预防 诸如癌症的疾患、 病症或疾病， 或诸如心力衰竭或任何其他医学疾患的综合征 (syndrome complex)。 这包括施用目的是相对于未接受化合物的个体减少个体的医学疾患的症状的频 率或延迟该症状发作的化合物。 因而， 癌症的预防包括， 如相对于未受治疗的对照群体减少 了接受预防性治疗的患者群体中可检测的癌生长、 肿瘤或恶性肿瘤的数目， 相对未受治疗 的对照群体使受治疗的群体中可检测的癌生长延迟出现， 和 / 或延迟了疾病进展和 / 或使 患者生活的质量提升了如统计学上和 / 或临床上显著的量。
本发明药物组合物的毒性和疗效可以通过细胞培养物或实验性动物方面的标准 药物规程来进行确定， 如确定 LD50( 使 50％的群体致死的剂量 ) 和 ED50( 在 50％的群体中治 疗有效剂量 )。毒效与疗效之间的剂量比是治疗指数且其可以被表示为 LD50/ED50 比。呈现 大的治疗指数的治疗剂用于许多情况中。在某些情况中， 甚至似乎呈现出虚弱或毒性副作 用的治疗组合物都可以被使用， 包括其中小心地设计将所述治疗剂靶向至受影响组织的部 位的输送系统以便将对未患病细胞的潜在损伤降至最少且由此降低或限制副作用的情况。
从细胞培养测定和动物研究中获得的数据可以用于配制供人使用的剂量范围。 剂 量优选地在循环浓度的范围内， 该循环浓度包括具有很少的毒性或无毒的 ED50。剂量可以根据所采用的剂型和所使用的施用途径在此范围内变化。 对本发明的方法中使用的任何物 质来说， 治疗有效剂量可以最初由细胞培养测定来估计。可以在动物模型中配制剂量以实 现由在细胞培养中确定的包括 IC50( 即， 实现了半最大的症状抑制或生物活性抑制的试验 治疗剂的浓度 ) 的循环血浆浓度范围。这种信息可以用于更准确地确定对人的有用剂量。 血浆水平可以通过， 如高效液相色谱法来测量。
应理解治疗剂的合适剂量取决于本领域的普通技术人员 ( 如医生 ) 所知的许多因 素。主题化合物的剂量将变化， 例如根据被治疗的受治疗者或样品的身份、 尺寸和情况， 进 一步根据组合物被施用的途径 ( 如适用 ) 以及执业医师所期望的治疗剂对借以调节病因、 症状或效应的靶 ( 例如细胞、 核酸或多肽的靶 ) 具有的效果。
示例性的剂量包括毫克或微克量的本发明的化合物 / 千克受治疗者或样品重量， 如约 1 微克 / 千克到约 500 毫克 / 千克， 约 100 微克 / 千克到约 50 毫克 / 千克或约 1 毫克 / 千克到约 5 毫克 / 千克。
本领域的技术人员将理解还可以基于身体表面来计算剂量。70 千克的人具有约 1.8 平方米的体表面积， 且剂量可以表示为毫克或微克量的化合物 / 受治疗者或样品的体 表面积， 如约 50 微克 / 平方米到约 15 克 / 平方米， 约 5 毫克 / 平方米到约 1.5 克 / 平方米 或约 50 毫克 / 平方米到约 150 毫克 / 平方米。 应用
本发明进一步提供了用于治疗的如上所述的化合物。在其他方面， 本发明提供了 用于预防性用途的本发明的化合物。
在某些实施方案中， 所述治疗或预防性用途是治疗或预防诸如肿瘤或癌症的增殖 性病症或疾病。在某些实施方案中， 所述治疗是治疗可以通过抑制蛋白激酶或其突变体的 活性， 诸如抑制 B-Raf 或其突变体的活性来治疗的癌症。
在某些其他实施方案中， 所述治疗或预防性用途是治疗或预防炎性病症或疾病。 在某些实施方案中， 所述治疗是治疗可以通过抑制蛋白激酶或其突变体的活性， 诸如抑制 p38 或其同种型的活性来治疗的炎性病症或疾病。
因而， 本发明另外提供了用于治疗具有选自由增殖性病症或疾病、 或炎性病症或 疾病组成的组的疾病状态的诸如哺乳动物的个体的方法， 包括将如上所述的治疗有效量的 本发明的化合物、 前药或药物组合物施用至所述个体。在某些实施方案中， 所述个体是人。 在某些实施方案中， 所述增殖性病症或疾病是癌症。在某些实施方案中， 所述治疗是治疗 可以通过抑制蛋白激酶或其突变体的活性， 诸如抑制 B-Raf 或其突变体的活性来治疗的癌 症。 在某些实施方案中， 所述治疗是治疗可以通过抑制蛋白激酶或其突变体的活性， 诸如抑 制 p38 或其同种型的活性来治疗的炎性病症或疾病。
本发明还提供了用于预防性治疗个体的方法， 个体诸如动物， 包括哺乳动物， 尤其 是人， 其目的是相对于未接受组合物的受治疗者， 减少受治疗者的诸如癌症的医学疾患的 症状的频率或延迟该症状的发作。
在进一步的方面， 本发明提供了治疗或预防罹患疾病的诸如哺乳动物的个体的方 法， 哺乳动物包括家养的哺乳动物、 猫、 狗、 马、 绵羊、 牛、 啮齿类和人， 该方法包括使所述个 体暴露于一定量 ( 包括治疗有效量 ) 的主题化合物的步骤。在某些实施方案中， 疾病是增 殖性病症或疾病， 诸如癌症或肿瘤。 在另一个实施方案中， 与所述增殖性病症或疾病有关的
细胞， 包括包含在癌症中的肿瘤细胞， 被暴露于主题化合物。在某些实施方案中， 所述化合 物或其前药被施用至所述个体。在某些实施方案中， 所述治疗是治疗可以通过抑制蛋白激 酶或其突变体的活性， 诸如抑制 B-Raf 或其突变体的活性来治疗的癌症。在某些实施方案 中， 疾病是炎性病症或疾病。 在另一个实施方案中， 与所述炎性病症或疾病有关的细胞被暴 露于主题化合物。在某些实施方案中， 所述化合物或其前药被施用至所述个体。在某些实 施方案中， 所述治疗是治疗可以通过抑制蛋白激酶或其突变体的活性， 诸如抑制 p38 或其 同种型的活性来治疗的炎性病症或疾病。
在进一步的方面， 本发明提供了杀死细胞或抑制细胞增殖或生长的方法， 包括使 细胞与本发明的化合物接触。 在一个实施方案中， 细胞是被体外培养的， 而在可选择的实施 方案中， 细胞存在于个体内。在特定实施方案中， 细胞是癌症细胞， 如来自肿瘤细胞系的细 胞或包括在肿瘤内的细胞， 包括来自可以通过抑制蛋白激酶或其突变体的活性， 诸如抑制 B-Raf 或其突变体的活性来治疗的肿瘤的癌症细胞。
本发明的另一方面涉及如上所述的化合物或其前药在制备治疗或预防增殖性病 症或疾病的药物中的用途， 增殖性病症或疾病包括癌症， 包括可以通过抑制蛋白激酶或其 突变体的活性， 诸如抑制 B-Raf 或其突变体的活性来治疗的癌症。另外， 本发明涉及一种用 于治疗增殖性病症或疾病的药物组合物， 该药物组合物包括如上所述的化合物或其前药以 及药学上可接受的稀释剂、 赋形剂或载体， 增殖性病症或疾病包括癌症， 包括可以通过抑制 蛋白激酶或其突变体的活性， 诸如抑制 B-Raf 或其突变体的活性来治疗的癌症。 本发明的另一方面涉及如上所述的化合物或其前药在制备治疗或预防炎性病症 或疾病的药物中的用途， 炎性病症或疾病包括可以通过抑制蛋白激酶或其突变体的活性， 诸如抑制 p38 或其同种型的活性来治疗的炎性病症或疾病。另外， 本发明涉及一种用于治 疗炎性病症或疾病的药物组合物， 该药物组合物包括如上所述的化合物或其前药以及药学 上可接受的稀释剂、 赋形剂或载体， 炎性病症或疾病包括可以通过抑制蛋白激酶或其突变 体的活性， 诸如抑制 p38 或其同种型的活性来治疗的癌症。
主题化合物用于治疗各种病症或疾病， 包括增殖性病症或疾病以及炎性病症或疾 病。术语 “增殖性病症或疾病” 也是本领域公认的且包括以表现为诸如动物的个体的细胞 子集异常地增殖或以其他方式不期望地增殖的方式来影响个体的病症或疾病。 癌症和肿瘤 是增殖性病症或疾病。包括或衍生自肿瘤的细胞通常将被理解成增殖细胞， 通常是过度增 殖细胞， 且在其他情况中， 肿瘤细胞可以是发育异常的或可能已经增殖的。 在某些实施方案 中， 所述治疗是治疗可以通过抑制蛋白激酶或其突变体的活性， 诸如抑制 B-Raf 或其突变 体的活性来治疗的癌症。
当阅读本发明的公开内容后， 以下对本领域的技术人员是明显的， 包括主题化合 物的方法、 药物组合物和包装药物将会用于治疗其他增殖性病症或疾病， 或者用于杀死或 抑制增殖的细胞， 包括肿瘤细胞。
本发明的化合物可以用在治疗疾病的过程中， 这些疾病过程的特征为异常细胞的 增殖， 诸如过度增殖性疾病， 包括癌症， 良性前列腺增生症、 家族性腺瘤性息肉病、 神经纤维 瘤病、 银屑病、 真菌感染、 内毒素性休克、 肥厚性瘢痕形成、 炎性肠病、 移植排斥、 与动脉粥样 硬化有关的血管平滑肌细胞增殖、 银屑病、 肺纤维化、 关节炎、 肾小球性肾炎、 血管修复术或 血管手术之后的再狭窄， 以及其他术后狭窄和再狭窄。参见， 如美国专利第 6,114,365 号和
第 6,107,305 号。
本文公开的化合物期望用于治疗增殖性或过度增殖性病症或疾病， 诸如癌症、 自 身免疫性疾病、 病毒性疾病、 真菌性疾病、 神经变性疾病和心血管疾病。
在某些实施方案中， 肿瘤可以是实体肿瘤， 其是除了血液、 骨髓或淋巴系统癌症之 外的身体组织的癌症。在其他实施方案中， 肿瘤可以是血液肿瘤， 诸如白血病和淋巴瘤。白 血病是以恶性变化的白细胞增殖为特征的恶性疾病的总称。 起因于淋巴组织的疾病被称为 淋巴瘤。
实体肿瘤可以选自 ： 肝癌、 胃癌 (stomach cancer)、 结肠癌、 乳腺癌、 胰腺癌、 前列 腺癌、 皮肤癌、 肾癌、 骨癌、 甲状腺癌、 皮肤癌， 包括鳞状细胞癌、 食道癌、 肾癌、 膀胱癌、 胆囊 癌、 子宫颈癌、 卵巢癌、 肺癌、 支气管癌、 小和非小细胞肺癌、 胃癌 (gastric cancer) 以及头 颈癌。
血液肿瘤可以是白血病， 诸如急性髓性白血病 (AML)、 急性成淋巴细胞性白血 病 (ALL)、 急性淋巴细胞白血病、 急性白血病、 急性早幼粒细胞白血病、 慢性粒细胞白血病 (CGL)、 慢性白血病、 慢性淋巴细胞白血病 (CLL)、 慢性髓性白血病 (CML)、 慢性髓单核细胞 白血病、 普通型急性成淋巴细胞性白血病、 嗜酸性粒细胞白血病、 红白血病、 结外淋巴瘤、 滤 泡性淋巴瘤、 毛细胞白血病、 单核细胞白血病、 前淋巴细胞白血病。
血 液 肿 瘤 也 可 以 是 淋 巴 瘤， 诸 如 B 细 胞 淋 巴 瘤、 伯 基 特 氏 淋 巴 瘤 (Burkitt Lymphoma)、 皮肤 T 细胞淋巴瘤、 高恶性淋巴瘤、 霍奇金淋巴瘤、 非霍奇金淋巴瘤、 低恶性淋 巴瘤、 成淋巴细胞性淋巴瘤、 套细胞淋巴瘤、 边缘区淋巴瘤、 黏膜相关的淋巴样组织 (MALT) 淋巴瘤、 T 细胞淋巴瘤、 外周 T 细胞淋巴瘤、 多发性骨髓瘤、 原发性血小板增多症、 毛细胞淋 巴瘤、 髓外骨髓瘤、 粒细胞肉瘤。
血液肿瘤也可以是骨髓系的肿瘤， 包括急性和慢性髓性白血病、 骨髓发育异常综 合征和急性早幼粒细胞白血病。
肿瘤也可以是间充质源的 (mesenchymal origin)， 诸如纤维肉瘤和横纹肌肉瘤。 而且， 肿瘤可以是中枢神经系统和外周神经系统的肿瘤， 诸如星形细胞瘤、 成神经细胞瘤、 神经胶质瘤和神经鞘瘤 ； 且肿瘤可以是其他肿瘤， 诸如黑素瘤、 精原细胞瘤、 畸胎癌、 骨肉 瘤、 着色性干皮病 (xenoderoma pigmentosum)、 keratoctanthoma、 甲状腺滤泡状癌和卡波 西肉瘤。
对用其他抗癌剂或抗增殖剂进行治疗有抵抗力或难以治愈的肿瘤也可以受益于 用本发明的方法和药物组合物的治疗。
本文公开的化合物还可以用于癌症的化学预防。 化学预防被定义为通过阻断引发 诱变的事件或通过阻断已经遭受损伤的恶化前细胞的进程 ( 诸如通过阻断肿瘤的生长 ) 或 抑制肿瘤复发来抑制侵入性癌症的发展。
本文公开的化合物还可以用于抑制肿瘤血管生成和转移。
本发明的化合物还可以与已知的诸如放射疗法的抗癌治疗或与抗癌剂、 抗增殖 剂、 细胞抑制剂或细胞毒剂组合使用 ( 一起被施用或按顺序施用 )。可以与本发明的化合 物组合使用的其他抗癌剂和抗增殖剂包括本文描述的那些抗癌剂和抗增殖剂。 在组合治疗 中， 可以进一步施用本发明的化合物与本文公开的任何其他抗癌剂和抗增殖剂。
如果配制成固定剂量， 这种组合产品采用了在本文描述的剂量范围内的本发明的化合物和在其允许的剂量范围内的其他药学活性剂或治疗。例如， 已经发现 cdc2 抑 制剂 olomucine 与已知的细胞毒剂在诱导细胞凋亡方面起协同作用 (J.Cell Sci， 108， 2897(1995))。 当组合制剂不合适时， 还可以按顺序施用本文描述的化合物和已知的抗癌剂 或抗增殖剂。本发明并不限制施用顺序 ； 本文描述的化合物可以在施用已知的抗癌剂或抗 增殖剂之前或之后施用。例如， 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂夫拉平度 (flavopiridol) 的细胞毒活性受到抗癌制剂的施用顺序的影响 (Cancer Research， 57， 3375(1997))。
本发明进一步的方面
本发明的另一个方面提供了药物包装， 其中所述包装包括本发明的任何式的化合 物。 在某些实施方案中， 所述包装包括说明书， 说明书表明所述组合物可以用于治疗需要其 的个体， 包括人。 在某些其他的实施方案中， 药物包装包括与诸如抗癌剂或抗增殖剂的另一 种药物成分配制在一起的一种或多种本发明的化合物。在此情况下， 本发明的化合物和其 他药物成分可以被分别地且以单独的剂量量配制。
可以与本发明的化合物一起或分别配制的其他药物成分包括， 但不限于， 诸如上 述的其他抗癌剂和抗增殖剂。在某些进一步的实施方案中， 药物包装包括治疗需要这种治 疗的患者的说明书。在又一个方面， 本发明提供了用于治疗罹患诸如肿瘤或癌症的增殖性 病症或疾病的个体的药物包装， 其中所述包装包括本发明的至少一种化合物。在某些进一 步的实施方案中， 药物包装包括治疗病症的说明书。
如本文使用的， 术语 “药物包装” 或 “药物包” 指用于存储并分配药物的单个剂量 的任何包装系统。优选地， 药物包装包含适于治疗周期的或有利于患者依从此方案的量的 足够的每日剂量单位。在某些实施方案中， 药物包包括一种或多种储器， 储器包括活性成 分， 如本发明的化合物。 这种储器可以是诸如瓶子、 小瓶、 注射器或胶囊的容器， 或可以是诸 如丸剂的单位剂量形式。活性成分可以药学上可接受的形式被提供在储器中， 或可以提供 为例如冻干粉末。在进一步的实施方案中， 药物包装可以进一步包括溶剂以制备用于施用 的活性成分。 在某些实施方案中， 活性成分可以已经被提供在诸如注射器的输送设备中， 或 合适的输送设备可以被包括在包中。 药物包装可以包括丸剂、 液体、 凝胶、 片剂、 糖锭或任何 其他合适形式的药物制剂。封装可以包含任何数目的每日药物剂量单位。封装可以是任 何形状， 且单位剂量形式可以被设置成任何式样， 诸如圆形、 三角形、 梯形、 六边形或其他式 样。 例如， 可以标明一种或多种剂量或亚单位， 诸如通过采用色码、 标签、 印刷、 压纹、 刻痕或 图案来确认这样的剂量或亚单位， 来帮助医生、 药剂师或患者。 药物包装还可以包括针对患 者、 医生、 药剂师或任何其他相关人员的说明书。
某些实施方案包括施用多于一种的活性成分， 活性成分包括本文公开的化合物。 这种施用可以同时进行或按顺序进行。活性成分可以被一起配制， 使得一次施用输送两种 组分。可选择地， 活性成分可以被分别配制。药物包装可以包括单一制剂中的本发明的化 合物和其他药物成分， 即它们被一起配制， 或单独的制剂中的本发明的化合物和其他药物 成分， 即它们被分别配制。每一种制剂可以包括单个剂量量 ( 近似相同或不同的量 ) 的本 发明的化合物和其他药物成分。 施用本发明的化合物和其他药物成分产生了造成治疗有效 量的组合的浓度。
如本文使用的， 术语 “说明书” 意指产品标签和 / 或文件或其他信息， 它们描述相 关物质或关于试剂盒或封装的药物的组合、 制备或使用的方法。这些材料可以包括下面的任何组合 ： 背景信息、 遵循的步骤或过程、 组分列表、 建议的剂量、 有关可能的副作用的警 告、 施用药物的用法说明、 技术支持以及任何其他相关文件。说明书可以印刷形式被供给， 诸如封装标签或封装内附物。 封装的药物或药物组合物的说明书可以被放入到输送纸盒或 最终的封装中， 如作为封装内附物， 且这样的文件已经被诸如美国食品和药品管理局 (FDA) 的主管当局批准。可选择地或补充地， 说明书还可以电子形式被存储， 如在可计算机读取 的存储介质上， 诸如可计算机读取的存储设备、 中心数据库， 磁性介质， 诸如硬盘、 软盘和磁 带； 光学介质， 诸如光盘、 CD-ROM 和全息设备 ； 磁光介质， 诸如光磁盘 ； 以及专门用于存储并 执行程序码的硬件设备， 诸如专用集成电路 (ASIC)、 可编程的逻辑设备 (PLD) 和 ROM( 只读 存储器 ) 和 RAM( 随机存储器 ) 设备。说明书可以包括因特网网站的网址， 可以从该网站下 载更详细的说明书， 或记载的说明。说明书可以包含一种或多种文件或未来的更新。
因此， 在本发明的一方面中涉及包含本发明的药物组合物和说明书的药物包装， 说明书表明所述药物组合物可以用于需要其的个体的治疗。
在这样的药物包装的某些实施方案中， 所述说明书表明所述药物组合物可以用于 治疗人。
在这样的药物包装的某些实施方案中， 所述说明书表明所述药物组合物可以用于 治疗患有病症或疾病的个体。
在这样的药物包装的某些实施方案中， 所述说明书表明所述药物组合物可以用于 治疗患有病症或疾病的人。
在另一方面本发明涉及用于治疗个体中的病症或疾病的方法， 其包括将包括在所 述病症或疾病中的细胞暴露于本发明的化合物。
在这样的方法的某些实施方案中， 将所述化合物或其前药施用到所述个体。
在这样的方法的某些实施方案中， 所述个体是哺乳动物， 选自 ： 家养哺乳动物、 猫、 狗、 马、 羊、 母牛、 啮齿动物和人。
在这样的方法的某些实施方案中， 所述哺乳动物是人。
在另一方面， 本发明涉及用于抑制细胞增殖的方法， 包括将细胞与本发明的化合 物接触。
在另一方面， 本发明涉及本发明的化合物用于制备用于治疗病症或疾病的药剂的 用途。
在另一方面， 本发明涉及包含本发明的化合物和药学上可接受的载体、 稀释剂或 赋形剂的药物组合物， 其用于治疗病症或疾病。
在本发明的这样的药物组合物、 药物包装、 方法或用途的某些实施方案中， 所述病 症或疾病是增殖性病症或疾病。
在某些这样的实施方案中， 所述增殖性病症或疾病是癌症。
在某些这样的实施方案中， 所述病症或疾病是炎性病症或疾病。
实施例
所选择的在本发明范围内的化合物列在表 1 中。表 1 中的化合物是根据下面的实 施例 1 到 8 合成的， 且表 2 和 3 中分别显示了这些化合物在生物化学测定中令人惊奇的抑 制活性和细胞测定中的抗增殖活性， 如根据实施例 9 到 11 确定的。
A： 8- 羟基 - 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮衍生物 ( 实施例 1-8) 的合成本发明的化合物可以通过方案 1 中显示的合成顺序来制备。例如， 实施例 1-8 详 细显示了方案 1 的合成步骤。如方案 1 所描述的， 8- 氧基吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶酮可以由苯 乙酸羟基酰胺衍生物和 6- 氯 -5- 甲酰 -2- 甲基硫代嘧啶一步形成。本领域的技术人员将 会理解其他合成途径也可以被采用。尤其是， 其他合成途径实际上可以应用于本发明的某 些方面。技术人员参考一般的教科书， 诸如 March 的 Advanced Organic Chemistry( 高等 有机化学 )(Michael B.Smith & Jerry March， Wiley-Interscience， 2000)、 The Practice of Medicinal Chemistry( 药物化学实践 )(Camile G.Wermuth， Academia Press， 2003) 和 Protective Groups in Organic Synthesis( 有机合成中的保护基 )(Theosora W.Greene & Peter G.M.Wuts ； John Wiley & Sons Inc， 1999)。
方案 1
通用 ： 分析型 LCMS ： 系统 1 ： Agilent 1200/Agilent 6120 四极杆 API-ESI-MS/MWD 在 215、 254、 310nm处检测 方法 A ： 溶剂 A 含 1％ MeCN、 0.1％甲酸、 0.2％ 1M 甲酸铵水溶液的水 ； 溶剂 B 含 1％ 水、 0.1 ％甲酸、 0.2 ％甲酸铵水溶液的 MeCN ； 柱 Agilent ZORBAX SB-Aq Narrow-Bore RR 2.1x50mm 3.5μM。
梯度 (0.8mL/min) ：
0 至 0.5min 5％溶剂 B
0.5 至 6min 5 至 95％溶剂 B
6 至 8min 95％溶剂 B
8.0 至 8.1min 100％溶剂 B
8.1 至 10min 100％溶剂 B
10.0 至 10.1min 5％溶剂 B
10.1 至 12min 5％溶剂 B
方法 B ： 溶剂 A 含 1 ％ MeCN、 0.1 ％甲酸、 0.2 ％ 1M 甲酸铵水溶液的水 ； 溶剂 B 含 1 ％水、 0.1 ％甲酸、 0.2 ％甲酸铵水溶液的 MeCN ； 柱 Agilent ZORBAX Bonus-RP 4.6x75mm 3.5μM。
梯度 (0.8mL/min) ：
0 至 0.5min 5％溶剂 B
0.5 至 6min 5 至 95％溶剂 B
6 至 8min 95％溶剂 B
8.0 至 8.1min 100％溶剂 B
8.1 至 10min 100％溶剂 B
10.0 至 10.1min 5％溶剂 B
10.1 至 13min 5％溶剂 B
C18MS
C18MS
系统 2 ： Agilent 1100/Micromass ZQ API-ESI-MS/DAD 在 200-800nm 处检测 方法 C ： 溶剂 A 0.1％甲酸水溶液 ； 溶剂 B 含 0.1％甲酸的 MeCN ； 柱 Waters XTerra 4.6x50mm 5μM。 梯度 (0.8mL/min) ： 0 至 5min 3 至 100％溶剂 B 5.0 至 5.5min 100％溶剂 B 5.50 至 5.51min 3％溶剂 B 5.51 至 6.1min 3％溶剂 B 方法 D ： 溶剂 A0.1％甲酸水溶液 ； 溶剂 B 含 0.1％甲酸的 MeCN ； 柱 Waters XTerra 4.6x50mm 5μM。 梯度 (0.8mL/min) ： 0 至 1.5min 3％溶剂 B 1.5 至 8.5min 3 至 70％溶剂 B 8.5 至 8.6min 70 至 100％溶剂 B 8.6 至 10.6min 100％溶剂 B 10.6 至 10.7min 3％溶剂 B 10.7 至 12min 3％溶剂 B 5.0 至 5.5min 100％溶剂 B 制备型 LCMS 系统 ： Agilent 1100/Agilent 6120 四级杆 API-ESI-MS/MWD 在 215、 254、 310nm 处检测 溶剂 A 水 ； 溶剂 B MeCN ； 柱 Phenomenex Axia Gemini C18 制备型 21.2x100mm 5μM 实施例 1 4- 氯 -2-( 甲硫基 ) 嘧啶 -5- 甲醛将 4- 氯 -2-( 甲 硫 基 ) 嘧 啶 -5- 羧 酸 乙 酯 (67mmol) 溶 解 在 THF(900mL) 中 以 得到黄色溶液。将混合物在氮气气氛下在 -78 ℃冷浴中冷却 ( 内部温度， 约 -70 ℃ )。将 DIBAL-H(THF 中 1M ； 200mmol) 借助注射剂经 45min. 加入。加入之后将反应升温至 -60℃， 且然后允许缓慢升温至 0 ℃过夜。通过缓慢加入饱和的氯化铵水溶液 (200mL) 将反应猝 灭。然后将混合物升温至室温。加入乙醚 (400mL) 和饱和的酒石酸钠钾水溶液 (200mL)。 将混合物剧烈搅拌 30 分钟。分层之后， 将水层用乙醚萃取并将合并的有机物用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤并在真空下浓缩以得到固体状 (4- 氯 -2-( 甲硫基 ) 嘧啶 -5- 基 ) 甲醇 (84％ )。
LCMS( 方法 B)6.07min ； 质量 M+H+191 ； UV 230， 265， 315nm。
将 (4- 氯 -2-( 甲硫基 ) 嘧啶 -5- 基 ) 甲醇 (105mmol) 溶解在 CHCl3(500mL) 中以 得到黄色悬浮液。 将氧化锰 (IV)(546mmol) 经 15min 以 0.5g 一份加入。 将混合物在室温搅 拌 6h。加入更多的氧化锰 (IV)(210mmol)。将混合物在室温搅拌 18h。再加入氧化锰 (IV) (210mmol)。将混合物在室温搅拌 20h， 然后在 40℃搅拌 4h， 且然后在室温搅拌过夜。然后 将混合物在 40℃搅拌 6h， 允许冷却至室温， 滤过硅藻土 (Celite)， 用 400mL CHCl3 洗涤并在 减压下浓缩以得到固体状 4- 氯 -2-( 甲硫基 ) 嘧啶 -5- 甲醛 (72％ )。
LCMS( 方法 B)3.72min ； 质量 M+H+193 ； UV 310nm。
实施例 2
6-(5- 氨基 -2- 氯苯基 )-2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7(8H)- 酮
将 2-(2- 氯苯基 ) 乙酸 (500mmol) 的浓硫酸溶液 (0.7mL/mmol) 冷却至 -10 ℃。 在 -10℃缓慢加入刚配制的发烟硝酸 (809mmol) 和浓硫酸 (1.6mol) 的混合物。允许混合 物经 1h 升温至 0 ℃且在 0 ℃搅拌 4h。将溶液缓慢倒入碎冰 / 水 (3L) 中。将混合物剧烈 搅拌并通过过滤分离形成的沉淀。将白色固体残余物用过量的水 (4L) 洗涤并干燥， 得到 2-(2- 氯 -5- 硝基苯基 ) 乙酸 (80％ )。
LCMS( 方法 A)7.98min ； 质量 M-H-214 ； UV 230， 275， 310nm。
将 2-(2- 氯 -5- 硝基苯基 ) 乙酸 (49.9mmol) 和 CDI(59.9mmol) 溶解在 DMF(300mL) 中以得到黄色溶液。加入 O- 甲基羟胺盐酸盐 (59.9mmol)。将混合物在室温搅拌 4h。然 后将反应混合物在减压下浓缩至约 50mL 并用 300mL 的乙酸乙酯稀释。将有机层用 250mL 的水洗涤两次。然后将水层用盐水饱和并用乙酸乙酯反萃取。合并有机层并随后用 300mL 的 1MHCl 水溶液、 300mL 的饱和 NaHCO3 水溶液和 300mL 的盐水洗涤。分离有机层， 经无水 硫酸钠干燥， 过滤并在减压下浓缩以得到固体状 2-(2- 氯 -5- 硝基苯基 )-N- 甲氧基乙酰胺
(69％ )。
LCMS( 方法 A)7.98min ； 质量 M-H-214 ； UV 235， 270， 305nm。
将 4- 氯 -2-( 甲硫基 ) 嘧啶 -5- 甲醛 (90mmol) 和 2-(2- 氯 -5- 硝基苯基 )-N- 甲 氧基乙酰胺 (98mmol) 溶解在 DMF(1L) 中以得到棕色溶液。将反应混合物冷却至 0℃。加 入碳酸钾 (197mmol)。将混合物在 0℃搅拌 2h 并然后允许升温至室温过夜。将碳酸钾滤出 并将滤液浓缩至约 100mL。将残余物用水 (1L) 稀释并过滤。将滤饼用 350mL 的 EtOH 洗涤 以得到棕色固体， 将其在真空干燥。通过将混合物在 EtOH 中回流 4h 并将悬浮液通过烧结 玻璃漏斗热过滤而分离副产物 (Z)-6-(2- 氯 -5- 硝基苯基 )-2-( 甲硫基 )-7H- 吡喃并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮 O- 甲基肟。将滤液蒸发并干燥得到固体状 6-(2- 氯 -5- 硝基苯基 )-8- 甲 氧基 -2-( 甲硫基 ) 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7(8H)- 酮 (52％ )。
LCMS( 方法 A)5.20min ； 质量 M+H+379 ； UV 220， 240， 290， 345nm。
在氮气气氛下， 在室温向钨酸钠二水合物 (5.26mmol) 在乙酸 (400mL) 中的无色悬 浮液加入 6-(2- 氯 -5- 硝基苯基 )-8- 甲氧基 -2-( 甲硫基 ) 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7(8H)- 酮 (52.3mmol) 和 30％过氧化氢 (160mmol)。将反应混合物在室温搅拌 18h。然后在减压下将 混合物浓缩至约 60mL。在快速搅拌下加入 500mL 水。将沉淀过滤并用过量的水洗涤。将剩 余的固体在真空中干燥过夜以得到固体状 6-(2- 氯 -5- 硝基苯基 )-8- 甲氧基 -2-( 甲磺酰 基 ) 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7(8H)- 酮 (78％ )。
LCMS( 方法 A)4.95min ； 质量 M+H+411 ； UV 220， 275， 325nm。
将 6-(2- 氯 -5- 硝 基 苯 基 )-8- 甲 氧 基 -2-( 甲 基 磺 酰 基 ) 吡 啶 并 [2， 3-d] 嘧 啶 -7(8H)- 酮 (4.87mmol)、 N， N- 二 甲 基 乙 烷 -1， 2- 二 胺 (11.3mmol) 和 浓 盐 酸 水 溶 液 (2.0mL) 放置在微波容器中并溶解在 2- 丙醇 (18mL) 中。 在密封的容器中在 100℃将混合物 用微波辐射法加热 15min。在减压下将反应混合物浓缩并用 EtOAc 萃取。将有机层用水和 含水缓冲液 (KH2PO4 和 NaOH 水溶液 pH7.0) 洗涤。将水层用 EtOAc(4×50mL) 反萃取。将有 机层经 Na2SO4 干燥， 过滤并在减压下浓缩以得到固体状 6-(2- 氯 -5- 硝基苯基 )-2-(2-( 二 甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7(8H)- 酮， 其不经进一步室温纯化 使用 (53％ )。
LCMS( 方法 A)4.53min ； 质量 M+H+419 ； UV 215， 320， 375nm。
向 6-(2- 氯 -5- 硝基苯基 )-2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7(8H)- 酮 (73.2mmol) 在 EtOH(700mL) 中的溶液加入浓的盐酸水溶液 (170mL) 和 铁粉 (732mmol)， 并将混合物在 80℃搅拌 6h。 允许混合物冷却至室温并滤过硅藻土垫。 将滤 液用 EtOAc(700mL) 稀释并用饱和 NaHCO3 水溶液 (700mL) 洗涤。 将水层用 EtOAc(8×300mL) 反萃取。将有机层合并并用饱和 NaCl 水溶液 (1×700mL) 洗涤。将有机层经 Na2SO4 干燥， 随后蒸发溶剂得到粗产物， 将其通过柱色谱在硅胶上 ( 二氯甲烷 / 三乙胺 95 ∶ 5， 随后二 氯甲烷 /MeOH/ 三乙胺 90 ∶ 5 ∶ 5) 纯化。将收集的级份溶解在二氯甲烷中并用水洗涤以 除去三乙胺盐。将水层用二氯甲烷反萃取， 将有机层合并， 经 Na2SO4 干燥， 过滤并蒸发以得 到固体状 6-(5- 氨基 -2- 氯苯基 )-2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7(8H)- 酮 (32％ )。
LCMS( 方法 B)4.90min ； 质量 M+H+389 ； UV 225， 295， 345nm.
实施例 34- 氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-3-( 三氟甲基 ) 苯甲酰胺的代表性制备
在 安 装 有 小 的 三 角 磁 性 搅 拌 棒 的 3ml 小 瓶 中 放 置 6-(5- 氨 基 -2- 氯 苯 基 )-2-(2-( 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 氨 基 )-8- 甲 氧 基 吡 啶 并 [2， 3-d] 嘧 啶 -7(8H)- 酮 (348μmol)。加入三乙胺 (344μmol)， 随后加入 HATU(320μmol) 和 4- 氯 -3-( 三氟甲基 ) 苯甲酸 (129μmol) 的 DMF 储备溶液的等分试样， 且将混合物在室温搅拌过夜。将溶液转移 至最大回收 HPLC 瓶 (maximum recovery HPLC vial) 并通过制备型 HPLC-MS 纯化。将收集 的级份转移至离心瓶并冻干， 得到固体状 4- 氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨 基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )3-( 三氟甲基 ) 苯 甲酰胺 (70％ )。
LCMS( 方法 B)6.81min ； 质量 M+H+595 ； UV 240， 290， 340nm。
实施例 4
1-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢吡 啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-3-(3- 氯 -4- 甲氧基苯基 ) 脲的代表性制备
在 安 装 有 小 的 三 角 磁 性 搅 拌 棒 的 3ml 小 瓶 中 放 置 6-(5- 氨 基 -2- 氯 苯 基 )-2-(2-( 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 氨 基 )-8- 甲 氧 基 吡 啶 并 [2， 3-d] 嘧 啶 -7(8H)- 酮 (165μmol)。加入 2- 氯 -4- 异氰酸根合 -1- 甲氧基苯在 THF(2mL， 129mmol) 中的溶液， 并 将混合物在室温搅拌过夜。允许溶剂蒸发过夜， 并将剩余的固体溶解在 DMSO 中， 转移至最 大回收 HPLC 瓶中并通过制备型 HPLC-MS 纯化。将收集的级份转移至离心瓶并冻干， 得到固 体状 1-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-3-(3- 氯 -4- 甲氧基苯基 ) 脲 (56％ )。
LCMS( 方法 B)6.56min ； 质量 M+H+572 ； UV 230， 260， 345nm。
实施例 5
6-(4- 氨基 -2- 氯苯基 )-2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7(8H)- 酮
在 0℃在氮气气氛下将 NaH(288mmol) 悬浮在 DMF(370mL) 中。将 DMF(30mL) 中的 丙二酸二甲酯 (261mmol) 经 20min 的时间在 0℃滴加并继续在 0℃搅拌 30min。然后在 0℃ 经 20min 期间滴加 DMF(35mL) 中的 1， 2- 二氯 -4- 硝基苯 (130mmol)。将混合物在 70℃搅 拌 15 小时。将反应混合物冷却至室温并用 NH4Cl 猝灭。将溶液连续地用 EtOAc(1×100mL、 1×250mL) 和水 (2×150mL) 洗涤。为了促进分层， 加入饱和 NaCl 水溶液 (20mL)。将有机 层分离并用饱和 NaCl 水溶液 (2×100mL) 洗涤。将水层用 EtOAc(2×50mL) 反萃取。将 有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤并在减压下浓缩。将粗的物质用 EtOH 重结晶以得到固体状 2-(2- 氯 -4- 硝基苯基 ) 丙二酸二甲酯 (74％ )。
LCMS( 方法 C)4.08min ； 质量 M+H+288 ； UV 210， 270nm。
将 2-(2- 氯 -4- 硝基苯基 ) 丙二酸二甲酯 (96mmol) 悬浮在乙酸 (175mL) 中。加 入浓硫酸 (3.5mL) 并将混合物在 80℃搅拌过夜。加入水 (30mL) 并将混合物在 100℃搅拌 2h， 之后加入浓硫酸 (1mL)。将混合物在室温搅拌过夜。将形成的沉淀滤出并用水洗涤。将 剩余的固体在减压下干燥得到固体状 2-(2- 氯 -4- 硝基苯基 ) 乙酸 (80％ )。
LCMS( 方法 C)5.87min ； 质量 (M-H)2-429 ； UV 210， 280nm。
将 2-(2- 氯 -4- 硝基苯基 ) 乙酸 (67.2mmol) 溶解在 DMF(500mL) 中以得到无色 溶液。一次性加入 CDI(87mmol)。将混合物在室温搅拌直到溶液停止冒泡。在室温滴加甲 氧基胺盐酸盐 (87mmol)， 并将产生的混合物在室温搅拌过夜。将产生的悬浮液在减压下浓 缩至 100mL 且然后用 EtOAc(1200mL) 稀释。将产生的溶液用水 (2×700mL) 洗涤， 并将水 层用 EtOAc(2×600mL) 萃回。将有机层合并并用饱和 NaHCO3 水溶液 (1×1200mL) 和饱和 NaCl 水溶液 (1×1200mL) 洗涤。将有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤并在减压下浓缩以得到固体 状 2-(2- 氯 -4- 硝基苯基 )-N- 甲氧基乙酰胺 (85％ )。
LCMS( 方法 C)3.03min ； 质量 M+H+245 ； UV 210， 270nm。
将 2-(2- 氯 -4- 硝 基 苯 基 )-N- 甲 氧 基 乙 酰 胺 (49.3mmol) 和 4- 氯 -2-( 甲 硫 基 ) 嘧啶 -5- 甲醛 (41.2mmol) 溶解在 DMF(600mL) 中。将溶液冷却至 0 ℃并在室温一次 性加入 K2CO3(91mmol)。将混合物在 0℃搅拌 2h 且然后在室温搅拌 48h。将反应混合物过 滤并将滤液在减压下浓缩至 60mL。加入水 (600mL)。将沉淀过滤， 用 EtOH 洗涤两次并干 燥。通过将混合物在 EtOH 中回流 4h 并将悬浮液通过烧结玻璃漏斗热过滤而分离副产物 (Z)-6-(2- 氯 -4- 硝基苯基 )-2-( 甲硫基 )-7H- 吡喃并 [2， 3-d] 嘧啶 -7- 酮 O- 甲基肟。将 滤液蒸发并干燥得到固体状 6-(2- 氯 -4- 硝基苯基 )-8- 甲氧基 -2-( 甲硫基 ) 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7(8H)- 酮 (63％ )。
LCMS( 方法 A)5.22min ； 质量 M+H+379 ； UV 215， 255， 340nm。
将钨酸钠二水合物 (0.633mmol) 悬浮在浓乙酸 (55mL) 中。加入 6-(2- 氯 -4- 硝 基苯基 )-8- 甲氧基 -2-( 甲基硫基 ) 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7(8H)- 酮 (6.33mmol)， 随后加 入 30％过氧化氢水溶液 (2mL)。将混合物在室温搅拌过夜。在减压下浓缩反应混合物至 5mL。将溶液用水 (100mL) 稀释并通过过滤分离沉淀， 用水洗涤并在真空下干燥以得到固体 状 6-(2- 氯 -4- 硝基苯基 )-8- 甲氧基 -2-( 甲基磺酰基 ) 吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7(8H)- 酮 (77％ )。
LCMS( 方法 A)4.97min ； 质量 M+H+411 ； UV 215， 265， 320nm。
向 6-(2- 氯 -4- 硝 基 苯 基 )-8- 甲 氧 基 -2-( 甲 基 磺 酰 基 ) 吡 啶 并 [2， 3-d] 嘧啶 -7(8H)- 酮 (4.74mmol) 在 2- 丙 醇 (15mL) 中 的 悬 浮 液 加 入 N， N- 二 甲 基 氨 基 乙 胺 (47.4mmol)， 随后加入浓盐酸 (300μL)。在密封的容器中在 100℃将混合物用微波辐射法 加热 15min。将二氯甲烷加到反应混合物中直到溶解。然后在减压下浓缩溶液以得到固体 状 6-(2- 氯 -4- 硝基苯基 )-2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基吡啶并 [2， 3-d] 嘧 啶 -7(8H)- 酮 (95％ )。
LCMS( 方法 A)4.47min ； 质量 M+H+419 ； UV 245， 340nm。
向 6-(2- 氯 -4- 硝基苯基 )-2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7(8H)- 酮 (8.36mmol) 在 EtOH(300mL) 和浓盐酸 (20mL) 中的溶液加入铁粉 (91mmol)， 并将混合物在 80℃搅拌 2h。然后允许混合物冷却至室温并滤过硅藻土垫。将滤 液用 EtOAc(300mL) 稀释并用饱和 NaHCO3 水溶液 (300mL) 洗涤。 将水层用 EtOAc(8×150mL) 反萃取。将有机层合并并用盐水洗涤 (1×300mL)。将有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤并蒸发溶 剂以得到固体状 6-(4- 氨基 -2- 氯苯基 )-2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基吡啶 并 [2， 3-d] 嘧啶 -7(8H)- 酮 (43％ )。
LCMS( 方法 B)5.09min ； 质量 M+H+389 ； UV 220， 245， 290， 345nm。
实施例 6 4- 氯 -N-(3- 氯 -4-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-3-( 三氟甲基 ) 苯甲酰胺的代表性制备
在安装有小的三角磁性搅拌棒的 6ml 最大回收 HPLC 瓶中放置 6-(5- 氨基 -2- 氯 苯 基 )-2-(2-( 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 氨 基 )-8- 甲 氧 基 吡 啶 并 [2， 3-d] 嘧 啶 -7(8H)- 酮 (347μmol)。 加 入 三 乙 胺 (344μmol)，随 后 加 入 HATU(320μmol) 和 4- 氯 -3-( 三 氟 甲 基 ) 苯 甲 酸 (129μmol) 的 DMF 储 备 溶 液 的 等 分 试 样， 且将混合物在室温搅拌过 夜。将溶液通过制备型 HPLC-MS 纯化。将收集的级份转移至离心瓶并冻干， 得到固体状 4- 氯 -N-(3- 氯 -4-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢吡啶 并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-3-( 三氟甲基 ) 苯甲酰胺 (85％ )。
LCMS( 方法 B)6.86min ； 质量 M+H+595 ； UV 235， 300， 350nm。
实施例 7
2， 6- 二氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )- 异烟酰胺
向 2， 6- 二氯异烟酸 (0.37g) 在 10ml THF 中的溶液加入二异丙基乙胺 (0.449ml) 随后加入 HATU(0.733g)。10min 之后加入 1ml DCM 和 2mlDMF。然后将 6-(5- 氨基 -2- 氯苯 基 )-2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -7(8H)- 酮 (0.5g) 加 入成为在含 1ml DCM 和 2ml DMF 的 THF(10ml) 中的溶液。将反应在 r.t. 搅拌 1 小时。将 反应混合物用 10mlDCM 稀释， 用 5ml 甲醇处理并在 15g 氧化铝 (alox)( 中性 ) 上蒸发。
将 粗 的 混 合 物 在 二 氧 化 硅 上 使 用 从 90/10/1(DCM/MeOH/TEA) 开 始 至 80/20/1(DCM/MeOH/TEA) 的快速系统 (flashmaster system) 在室温分离以得到 1.09g 粗产 物。
将 50mg 粗产物在制备型 HPLC-MS 上在 MeCN/ 水 (0.1％甲酸 ) 中纯化以得到 25mg 纯化的终产物。
实施例 8
2- 氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基氨基 )-8- 甲氧基 -7- 氧代 -7， 8- 二 氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )-6- 二乙基氨基 - 异烟酰胺
将 40mg 2， 6- 二 氯 -N-(4- 氯 -3-(2-(2-( 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 氨 基 )-8- 甲 氧 基 -7- 氧代 -7， 8- 二氢吡啶并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 基 ) 苯基 )- 异烟酰胺和 50μl 二乙胺溶解 在 5ml DMSO 中并在 100℃在微波中加热 10min。加入更多的二乙胺并重复在微波中加热几 次直到反应完全。将反应混合物在 HPLC-MS 上在 MeCN/ 水 (1％甲酸 ) 中纯化以得到 23mg。
B： 生物活性测定 ( 实施例 9-12)
可通过包括下面更详细描述的那些在内的一种或多种测定来说明本发明化合物 的生物活性和实用性。
实施例 9 ： 抑制激酶活性的 IC50 值的确定
可通过确定本发明化合物的 IC50 值来表征它们针对蛋白激酶的体外抑制活性。
a)C-Raf(MAPH 测定 )
激酶 ： C-Raf Raf-1( 截短的 )， 活性的 (Upstate ； 目录号 14-352)
反应体积 ： 40μl
反应时间 ： 60 分钟
反应温度 ： 室温
测定板 ： 96 孔 U 型底板 (Greiner， 650161)
MultiScreen-PH 板 ： 96 孔 MAPH 过滤板 (Millipore， MAPHNOB50)
过滤洗液 ： 0.75％的 H3PO4
闪烁液体 ： Supermix 液体闪烁器 (PerkinElmer， 1200-439)
对照 ：
阴性对照 (C-) ： 100mM EDTA， 无抑制剂
阳性对照 (C+) ： 无抑制剂
反应缓冲液 ( 最终浓度 ) ：
20mM Tris， pH 7.5
2mM MnCl2
1mM DTT
0.01％吐温 20
最终测定浓度 ：
激酶 ： 使用产生 10％ ATP 周转的激酶浓度， 如在滴定试验中确定的。
ATP ： 5.78μM
腺苷 5’ -[γ-33P] 三磷酸酯 ： 12.5μCi/ml(Amersham Biosciences，
BF1000)
底物 ： 髓鞘碱性蛋白 57.8μM(Invitrogen， 13228-010)
移液顺序 ：
1) 向测定板的每一个孔内添加 10μl 在 3 倍浓缩的反应缓冲液中的 4 倍浓缩的底 物 +4 倍浓缩的 ATP
2) 向除了 C- 和 C+ 孔的每一个孔内添加 10μl 在含 4％ DMSO 的水中的 4 倍浓缩 的抑制剂 ( 开始点 ： 最终抑制剂浓度 10μM ； 基于稀释系列确定 IC50)
3) 向 C- 和 C+ 孔内添加 10μl 在水中的 4％ DMSO
4) 向 C- 孔内添加 10μl 在水中的 500mM 的 EDTA
5) 向每一个孔内添加 10μl 在水中的 50μCi/ml 腺苷 5’ -[γ-33P] 三磷酸酯
6) 向每一个孔内添加 10μl 反应缓冲液中的 4 倍浓缩的激酶
7) 在室温下孵育 1 小时
8) 向除了 C- 孔的每一个孔内添加 10μl 在水中的 50mM 的 EDTA
9) 通过向每一个孔内添加 200μl 0.75％的 H3PO4 来制备 MAPH 板
10) 使用 Millipore 真空台排出 0.75％的 H3PO4
11) 向 MAPH 过滤板的每一个孔内添加 60μl 0.75％的 H3PO4
12) 从测定板的每一个孔中转移 30μl 样品至 MAPH 过滤板的相应孔
13) 在室温下孵育 30 分钟
14) 使用 Millipore 真空台， 用 200μl 0.75％的 H3PO4 来冲洗 MAPH 过滤板的每一 个孔 3 次
15) 向 MAPH 过滤板的每一个孔内添加 20μl 闪烁液体
16) 密封 MAPH 过滤板
17) 将 MAPH 过滤板存储在黑暗中 30 分钟
18) 使用闪烁计数器 (MicroBeta， Perkin-Elmer) 量化放射性
b)C-Raf(IMAP 测定 )
激酶 ： C-Raf Raf-1( 截短的 )， 活性的 (Upstate ； 目录号 14-352)
IMAP 测定 ：
反应体积 ： 8.0108μl
反应时间 ： 60 分钟
反应温度 ： 室温IMAP 孵育时间 ： 60 分钟
测定板 ： 384 孔 U 型底， PP、 黑、 小体积 (Corning， 3676)
化合物板 ： 384 孔 U 型底， PS(Falcon， 3995)
IMAP 结合缓冲液 A ： Molecular Devices， R7282
IMAP 结合缓冲液 B ： Molecular Devices， R7283
IMAP 结合试剂 ： Molecular Devices， R7207
对照 ：
阴性对照 (C-) ： 无激酶， 无抑制剂
阳性对照 (C+) ： 无抑制剂
反应缓冲液 ： 20mM Hepes， pH 7.5
1mM DTT
10mM MnCl2
0.01％ Brij35
最终测定浓度 ：
激酶 ： 产生 50％底物周转的激酶浓度， 如在滴定试验中确定的
C-Raf(Upstate14-352)
ATP ： 4.87μM
底物 ： 5Fl-SGQLIDSMANSFV-NH2 400nM (jpt Peptide Technologies
GmbH， 德国柏林 )
IMAP 结合溶液 ： 75％ IMAP 结合缓冲液 A
25％ IMAP 结合缓冲液 B
IMAP 结合试剂 1 ∶ 800
移液顺序 ：
1) 向测定板的每一个孔内添加 6μl 在 1 倍浓缩的反应缓冲液中的 1.33 倍浓缩的 底物 +1.33 倍浓缩的 ATP
2) 使用针头工具 (pintool)(CyBio， Jena， 德国 ) 向除了 C- 和 C+ 孔的每一个孔内 添加 10.8nl 在 100％ DMSO 中的 740 倍浓缩的抑制剂 ( 开始点 ： 最终抑制剂浓度 10μM ； 基 于稀释系列的 IC50 确定 )
3) 使用针头工具向 C- 和 C+ 孔内添加 10.8nl100％ DMSO
4) 向 C- 孔内添加 2μl 反应缓冲液
5) 向除 C- 孔的每一个孔内添加 2μl 在反应缓冲液中的 4 倍浓缩的激酶
6) 在室温下， 根据反应时间进行孵育
7) 向每一个孔内添加 15μl IMAP 结合溶液
8) 在室温下， 根据 IMAP 孵育时间进行孵育
9) 测量荧光偏振 (Analyst GT， Molecular Devices)
C)B-Raf
激酶 ： B-Rafδ1-415( 如， Upstate 目录号 14-530)
反应体积 ： 40μl
反应时间 ： 60 分钟反应温度 ： 室温 测定板 ： 96 孔 U 型底板 (Greiner， 650161) MultiScreen-PH 板 ： 96 孔 MAPH 过滤板 (Millipore， MAPHNOB 50) 过滤洗液 ： 0.75％的 H3PO4 闪烁液体 ： Supermix 液体闪烁器 (PerkinElmer， 1200-439) 对照 ： 阴性对照 (C-) ： 100mM EDTA， 无抑制剂 阳性对照 (C+) ： 无抑制剂 反应缓冲液 ： 20mM Mops， pH 7.0 10mM MgCl2 0.4mM MnCl2 100mM NaCl 1mM DTT 0.01％ NP40 最终测定浓度 ： 激酶 ： 产生 50％底物周转的激酶浓度， 如在滴定试验中确定的。 ATP ： 27.15μM 腺苷 5’ -[γ-33P] 三磷酸酯 ： 12.5μCi/ml(Amersham Biosciences， BF1000) 底物 ： MEK1 无活性 2μM(Upstate14-420) 移液顺序 ： 1) 向测定板的每一个孔内添加 10μl 在 3 倍浓缩的反应缓冲液中的 4 倍浓缩的底物 2) 向除了 C- 和 C+ 孔的每一个孔内添加 10μl 在水中的 4％ DMSO 的 4 倍浓缩的 抑制剂 ( 开始点 ： 最终抑制剂浓度 10μM ； 基于稀释系列的 IC50 确定 )
3) 向 C- 和 C+ 孔内添加 10μl 在水中的 4％ DMSO
4) 向 C- 孔内添加 10μl 在水中的 500mM 的 EDTA
5) 向每一个孔内添加 10μl 在水中的 50μCi/ml 腺苷 5’ -[γ-33P] 三磷酸酯 +4 倍冷的 ATP
6) 向每一个孔内添加 10μl 在反应缓冲液中的 4 倍浓缩的激酶
7) 在室温下孵育 1 小时
8) 向除了 C- 孔的每一个孔内添加 10μl 在水中的 50mM 的 EDTA
9) 通过向每一个孔内添加 200μl 0.75％的 H3PO4 来制备 MAPH 板
10) 使用 Millipore 真空台排出 0.75％的 H3PO4
11) 向 MAPH 过滤板的每一个孔内添加 60μl 0.75％的 H3PO4
12) 从测定板的每一个孔中移出 30μl 样品至 MAPH 过滤板的相应孔
13) 在室温下孵育 30 分钟
14) 使用 Millipore 真空台， 用 200μl 0.75％的 H3PO4 来冲洗 MAPH 过滤板的每一 个孔 3 次
15) 向 MAPH 过滤板的每一个孔内添加 20μl 闪烁液体
16) 密封 MAPH 过滤板
17) 将 MAPH 过滤板存储在黑暗中 30 分钟
18) 使用闪烁计数器 (MicroBeta， Perkin-Elmer) 量化放射性
d)B-Raf/B-Raf(V600E)(SelectScreenTM 测定 )
在 非 公 开、 非 普 及 和 非 使 用 的 条 件 下， 在 Select ScreenTM 激 酶 谱 分 析 服 务 (Kinase Profiling Service)(Invitrogen Corporation， Madison， WI 53719， USA) 中针对 B-Raf 和 B-Raf(V600E)[ 在由 Invitrogen 使用的术语中″ V599E″ ] 测定选择的本发明的 化合物。
简要地说， 在存在或不存在将激酶 / 测试化合物预孵育 5 小时下， 在 Invitrogen 针对 B-Raf 和 B-Raf(V600E) 测试化合物 11 和 39( 见表 1)。表 9(d) 显示这些实验中观察 到的 IC50 值。令人惊奇地， 比较野生型 B-Raf， 本发明的化合物更强烈地抑制 B-Raf(V600E) 突变体。此外， 在预孵育 5 小时之后观察到低得多的 IC50 值， 表明本发明的化合物优选地结 合在平衡反应中缓慢形成的 B-Raf 激酶的构象异构体。
表 9(d)
e) 其它激酶
还通过使用标准激酶抑制测定可显示本发明的化合物是包括 p38 和 KDR 在内的其 它激酶的抑制剂。
使用本领域已知的测定， 诸如 WO 06/002119 中描述的那些， 测试了本发明的化合 物针对包括酪氨酸激酶和丝氨酸 - 苏氨酸激酶在内的其他激酶的抑制活性。通过比较从这 些测定中获得的 IC50 值研究了特定的化合物或化合物类在各种激酶或激酶家族之间的选 择性。
例如， 在非公开、 非普及和非使用的条件下， 在包括 c-Raf、 p38 和 22 种其它激酶 (Proteros biostructures GmbH， Martinsried/Munich， 德国 ) 在内的标准选择性小组中测 试选择的本发明的化合物。
简要地说， 以 1mM 重复三次针对 c-Raf、 p38 以及针对 Abl、 Akt1、 Aur A、 c-Kit、 c-Raf、 Cdk1/CycB、 Chk1、 FGFR3、 Flt3、 Fyn、 IGF1-R、 INSR、 Lyn、 MAPK-ERKl、 PAK4、 PKCα、 Plk1、 Ret、 ROCK2、 RSK1、 c-Src、 TIE2 和 VEGF-R2 测试选择的本发明的化合物。所有测试化 合物约 70％至约 100％抑制 c-Raf 和 p38。且几乎所有化合物都抑制 c-Kit， 虽然具有较低 4 6 的抑制值 ( 约 50％至约 90％ )。 具有 R ＝ -NH-C( ＝ O)-R 的化合物显示针对 Fyn、 Lyn、 Src 4 的较强至中等抑制活性， 和针对 Abl 和 Ret 的中等抑制活性。具有 R ＝ -NH-C( ＝ O)-NH-R6 的化合物显示针对 Lyn 的中等抑制活性和针对所有其它激酶的较低的抑制活性。在每种情
况下约 13 种激酶以低于约 30％被抑制。
实施例 10 ： 本发明的化合物对 B-Raf 的提高的亲和力
令人惊奇地是， 我们发现本发明的化合物在体外测定中显示了对 B-Raf 蛋白的 提高的结合亲和力， 即使是与式 (I) 中不具有取代基 R3 或 R4 的结构相关的化合物相比， 所述取代基 R3 或 R4 是 ： -NH-C( ＝ O)-(NH)x-(CH2)y-R6( 其中 x 和 y 独立地选自 0 和 1 ； 且 6 R 选自取代的或未取代的芳基和取代的或未取代的杂芳基 )。这些结构相关而无这种取 代的化合物在早期提交的专利申请中描述 ： EP 06122344.2、 PCT/US2007/013299 和 PCT/ IB2007/054209。
使用改良的 FRET 基 ( 荧光共振能量转移 )HTRF( 均相时间分辨荧光 ) 竞争试验评 价本发明化合物的结合亲和力 (Ki)。简要地， 将 7nM GST 和 B-Raf 的激酶域的 N- 端融合物 (″ GST-B-Rafδ1-415″ ) 与 15nM 的铕标记的抗 GST 抗体 (61GSTKLB ； CisBio) 孵育 120min 以形成标有铕供体部分的抗体 / 激酶复合物。加入 1mM 标有 Cy5 作为受体部分的″化合 物 X″之后， 加入各种浓度的本发明的测试化合物， 且化合物 X/B-Raf 相互作用被测试化合 物竞争带来的 FRET 信号的延迟被使用
GT 多功能酶标仪 (Multimode Reader)(Molecular Devices) 的 HTRF 检测模式记录， 其在 340nm 处激发并在 665nm 波长处检测。 从适当地构成的蛋白表达真核载体使用标准程序表达并纯化 GST-B-Rafδ1-415 融合蛋白。
通过标准程序合成化合物 X， 且用 Cy5 标记， 如下面简单描述。
化合物 X 在 摩 尔 当 量 ( 相 对 于 Cy5) 的 DIEA( 二 异 丙 基 乙 胺 ； 碱 ) 存 在 下， 将DMSO(50μl) 中约 400nmol 的化合物 X 添加到 250-350nmol Cy5 单 - 活性染料包 (PA25001 ； Amersham Biosciences) 且在黑暗中在室温孵育过夜。 产生的 Cy5- 标记的化合物 X 通过用 反相柱 (C18， 5μm)、 使用梯度为 TFA 水溶液和 MeCN( 乙腈 ) 的 HPLC 纯化， 且其纯度通过质 谱测定。
由化合物 X/B-Raf 复合物的 HTFR 导致的测试化合物浓度和时间依赖的 FRET 信号的下降被用于评估对于各浓度的测试化合物的 Kobs(Excel Fit， IDBS 使用模式 y ＝ о о y +y *exp(-KobS)t)， 且后面的 Kobs 值对测试化合物浓度曲线能够使用模型 Kobs ＝ Kon[ 测试 化合物 ]+Koff 从这些数据的线性回归评估 Kon 和 Koff。然后对于本发明的各测试化合物， 按照 Ki ＝ Kon/Koff 确定 Ki。
使用这一方法 ( 或确定亲和力的类似的其它方法， 诸如荧光互相关谱 )， 发现与 在式 (I) 的 R3 或 R4 不具有取代的结构上相关的化合物比较， 本发明的化合物通常显示对 B-Raf 的提高的结合亲和力， 所述 R3 或 R4 是 ： -NH-C( ＝ O)-(NH)x-(CH2)y-R6( 其中 x 和 y 独 立地选自 0 和 1 ； 且 R6 选自取代的或未取代的芳基和取代的或未取代的杂芳基 )。例如， 本 发明的化合物通常显示 100nM 以下的 Ki 值 ( 诸如 20nM 和 50nM 之间 ) 且结构上相关的化 合物通常显示大于 100nM 的 Ki 值 ( 诸如 150nM 至 500nM)。
实施例 11 ： 本发明的化合物针对携带 BRAF V600E 突变的癌细胞系增殖的体外抗 增殖活性
我们观察到了令人惊奇的结果 ： 本发明的化合物在抑制 HT-29 肿瘤细胞的增殖方 面是有用的 ( 参见表 3)。
将细胞暴露于适合于确定 IC50 的不同的浓度的测试化合物达 72 小时， 且使用根据 Shekan 等人 (J Natl Cancer Inst(1990)82， 1107-112) 的 SRB 测定来测量细胞增殖以便估 计表 3 中显示的 IC50。
简要地说， 在以表 11.1 中详细说明的密度加入化合物之前将细胞放置在 96 孔盘 中。
表 11.1
移去生长培养基之后加入冰冷的 10％ TCA 来终止测定并将板在 4℃孵育过夜。然 后将板用水洗涤 5 次并向各孔加入 100μl 的磺酰罗丹明 B 溶液 (4％ )。然后将板在室温 孵育 10 分钟之后通过用 1％乙酸洗涤移去未结合的染料。将结合的染料用 10mM 氨基丁三 醇碱 (Trizma base) 溶解并在 OD520 读取吸光度。
以相比于用溶剂 (DMSO) 处理的细胞的细胞增殖的％抑制计算化合物的抑制活 性。表 3 表示本发明的某些化合物抑制细胞增殖的 IC50 值， 其显示化合物显示了清楚且显 著的抗增殖活性， 特别是针对携带 BRAF V600E 突变的癌细胞系。
实施例 12 ： 化合物在异种移植肿瘤模型中的活性 用这一测定， 我们证明了本发明的化合物在体内异种移植模型中针对肿瘤细胞的活性。 方法 ：
化合物制备
为了腹膜内 (i.p.) 施用， 将本发明的化合物 ( 参见表 1) 制备在可生物相容的媒 介物中 ( 例如， 在 10％的 DMA/50％的 PEG300/ 水或在 5％的聚氧乙烯蓖麻油 /5％乙醇 /90％ 生理盐水中 )。所有的制剂都是新制备的且注射体积依体重调整 ( 产生了例如 40mg/kg 到 80mg/kg 小鼠之间的化合物剂量 )。
小鼠 / 饲养
从 Charles River 实验室 (CRL) 获得小鼠， 并将其圈养在静态微隔离器中， 且被随 意提供水和照射标准啮齿类食品 (Purina Pico-Lab 啮齿动物食品 20)。
标准方案
无胸腺小鼠实验
允许来自 CRL 的无胸腺的 nu/nu 雌性小鼠 (6-8 周大 ) 适应至少 4 天。在供给有 10％ FCS 和 1％ Pen/Strep 的 McCoy 培养基 (ATCC) 中培养人 HT-29 细胞 (ATCC) 结肠癌细 胞系。在此研究中使用具有约 80％汇合的第二代细胞。简要地说， 在第 0 天， 用 0.1ml( 总 6 6 共 5×10 个细胞 )HT-29 细胞悬浮液 ( 在 McCoy 培养基中 50×10 个细胞 /ml， 未1∶1补 充混合基质胶 (Matrigel)) 接种小鼠， 这是在浅麻醉下通过皮下注射入右下部肋腹来进行 的。当平均肿瘤重量达到超过 100mg( 第 7 天 ) 时， 选择具有合适肿瘤尺寸 ( 平均约 182mg) 的 70 只动物并随机分成 7 组 ( 每组 10 只动物 )。
监测肿瘤生长和体重且每周记录两次。 通过用数显卡尺确定肿瘤的长度和宽度来 测量肿瘤。使用下式估计肿瘤重量 ： 肿瘤重量 (mg) ＝ (w2×l)/2， 其中 w ＝肿瘤宽度 (mm) 且 l ＝肿瘤长度 (mm)。
肿瘤生长抑制 (TGI)％按下面计算 ： ％ TGI ＝ 100(1-T/C)， 其中 T 是在给定天的 化合物治疗组的平均肿瘤尺寸， 且 C 是同一天媒介物对照组的平均肿瘤尺寸。
毒性死亡被定义为由化合物治疗造成的， 而不是由晚期的疾病状态造成的死亡。 如果动物在最终的化合物治疗之后在 1 周内死亡并且肿瘤尺寸还没有达到 1000mg， 死亡被 认为是毒性的， 在此点之后， ， 与非肿瘤有关的死亡被记录， 但不认为是毒性死亡。
组 1 只用媒介物治疗 (10％ DMA/50％ PEG300/40％ dd 水， po)， 组 2 到 4 用化合物 4 治疗 ( 用于服药 5 天的 40mg/kg， 60mg/kg 和 80mg/kg 剂量 )， 组 5 到 7 用化合物 24 治疗 ( 用于服药 10 天的 40mg/kg， 60mg/kg 和 80mg/kg 剂量 )。
当小鼠的肿瘤达到 1000mm3 终点体积时， 处死小鼠。治疗效果被确定为细胞对数 杀灭 (LCK)。LCK 是计算值， 其确定了在开始治疗后， 推测被杀灭的肿瘤细胞的百分数， 且该 值可以用作效果的量化量度 ： LCK ＝ (T-C)/(3.32)(TD)， 其中 T ＝治疗组小鼠的尺寸达到 1000mg 时所需要的平均时间， C ＝对照组肿瘤的尺寸达到 1000mg 时的平均时间， Td ＝在指 数生长过程中， 从对照组肿瘤的半对数生长曲线的线性回归分析所估计的肿瘤加倍时间， 3.32 ＝种群增大 1-log10 单位所要求的加倍数值。每一个 LCK 单位表示 1-log10 单位的细 胞杀灭 ( 如， 1LCK ＝ 90％杀灭， 2LCK ＝ 99％杀灭等 )。
C： 备选药物的选择和开发
实施例 13
为了选择进入进一步实验的最合适的化合物并评价其在用于治疗诸如癌症的病 症和疾病的治疗组合物中的适用性， 采集了额外的数据。这些数据可以包括诸如激酶的靶 分子的体外抑制， 如通过 IC50 测定， 或一系列肿瘤细胞系的增殖抑制， 以及从体内动物模型 中得到的肿瘤生长抑制或减少数据和存活数据来度量。 此外， 这种试验还可以包括阐明和 / 或确定主题化合物作用机理， 主题化合物的靶或靶特征， 以及主题化合物的其他特征， 诸如 化合物对靶的结合亲和力或化合物对靶的结合位点和药代动力学特性。 这些试验还可以包 括药物 - 靶相互作用的分子模拟以及施用之后所形成的代谢产物的鉴定。可以选择进入进一步实验的化合物， 其显示出靶抑制 IC50、 细胞增殖抑制、 各种肿 瘤细胞系的谱、 肿瘤生长抑制或肿瘤减少数据和 / 或动物存活数据和 / 或其他特征， 包括 ADME、 药代动力学和药效学特性， 的最合适结果。 这种实验可以包括， 例如， 动物的治疗概况 分析和毒理学， 人体的 I 期临床试验和其他临床试验。
***
本领域的技术人员易于理解本发明完全适于实现目的并获得所提到的结果和优 势， 以及其中固有的那些结果和优势。 本文描述的方法和试剂代表优选实施方案， 是示例性 的， 且不预期作为对本发明范围的限制。本领域的技术人员将会想到在其中的修改和其他 应用。这些修改被包括在本发明的精神内且由权利要求的范围界定。
仅使用常规的实验， 本领域的技术人员将会理解或能够确认本文描述的本发明的 具体实施方案的许多等同实施方案。这样的等同实施方案预期被包括在下面的权利要求 中。本领域的技术人员还理解本文描述的实施方案、 方面组合或权利要求特征的所有组合 在本发明的范围内。
表1： 本发明的示例性化合物
表2： 示例性化合物的表征
表3： 示例性化合物的抑制值 ( 列 2 和 3) ； 和肿瘤细胞生长的抑制 ( 列 4 和 5)
表4： 对于示例性化合物在 R6 的取代方式 ： 化合物 32 ： 取代基 R6 ： 取代芳基
芳基＝苯基 取代基 A(m-Cl) ＝ -[(RSm)n] 且 n ＝ 1 ： RS1 ＝ -Cl 取代基 B(p-OR) ＝ -[(RSm)n] 且 n ＝ 3 ： RS1 ＝ -O-Ra ； RS2 ＝芳基 ； RS3 ＝ -F 化合物 52 ： 取代基 R6 ： 取代芳基
芳基＝苯基 取代基 A(p-Cl) ＝ -[(RSm)n] 且 n ＝ 1 ： RS1 ＝ -Cl 取代基 B(m-OCF3) ＝ -[(RSm)n] 且 n ＝ 4 ； RS1 ＝ -O-Ra ； RS2、 RS3、 RS4 ＝ -F 化合物 67 ： 取代基 R6 ： 取代的杂芳基
杂芳基＝吡啶基取代基 A(2-Cl) ＝ -[(RSm)n] 且 n ＝ 1 ： RS1 ＝ -Cl
取代基 B(6-NHR) ＝ -[(RSm)n] 且 n ＝ 4 ： RS1 ＝ -N(Ra)2 ； RS2 ＝芳基 ； RS3 ＝杂环烷基 ； RS4 ＝烷基
等同物
仅使用常规的实验， 本领域的技术人员将会理解或能够确认本文描述的本发明的 具体实施方案的许多等同实施方案。这样的等同实施方案预期被包括在下面的权利要求 中。
所有上面引用的文献和出版物此通过引用并入。75