用于抗病毒治疗的 CARBA- 核苷类似物 技术领域 本发明总体地涉及具有抗病毒活性的化合物， 更具体地， 涉及具有抗黄病毒科感 染活性的核苷， 最具体地， 涉及丙型肝炎病毒 RNA- 依赖性的 RNA 聚合酶的抑制剂。
背景技术 包括黄病毒科的病毒包括至少 3 个可区分的属， 包括瘟病毒属、 黄病毒属和丙型 肝炎病毒属 (Calisher， 等人， J.Gen.Virol.， 1993， 70， 37-43)。 尽管瘟病毒属会造成许多经 济上重要的动物疾病， 例如牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)、 经典的猪霍乱病毒 (CSFV， 猪霍乱 ) 和羊边境病 (BDV)， 它们在人疾病中的重要性尚未明确表征 (Moennig， V.， 等人， Adv.Vir. Res.1992， 48， 53-98)。 黄病毒属会引起重要的人疾病， 例如登革热和黄热病， 而丙型肝炎病 毒属会造成人的丙型肝炎病毒感染。 由黄病毒科造成的其它重要的病毒感染包括西尼罗病 毒 (WNV) 日本脑炎病毒 (JEV)， 蜱传脑炎病毒， Junjin 病毒， 墨累山谷脑炎， 圣路易斯脑炎， 鄂木斯克出血热病毒和济卡病毒 (Zika virus)。来自黄病毒科病毒的混合感染， 会在世界 范围内造成显著的死亡率、 发病率和经济损失。 因此， 需要为黄病毒科病毒感染开发有效的 治疗。
丙 型 肝 炎 病 毒 (HCV) 是 全 世 界 的 慢 性 肝 病 的 主 要 原 因 (Boyer， N. 等 人 J Hepatol.32 ： 98-112， 2000)， 所以目前的抗病毒研究的主要焦点指向开发治疗人的慢性 HCV 感染的改进的方法 (Di Besceglie， A.M. 和 Bacon， B.R.， Scientific American， Oct. ： 80-85， (1999) ； Gordon， C.P.， 等人， J.Med.Chem.2005， 48， 1-20 ； Maradpour， D. ； 等人， Nat. Rev.Micro.2007， 5(6)， 453-463)。Bymock 等人在 Antiviral Chemistry& Chemotherapy， 11 ： 2； 79-95(2000) 中综述了许多 HCV 治疗。
RNA- 依赖性的 RNA 聚合酶 (RdRp) 是为开发新颖的 HCV 治疗剂而研究的最好 的靶物之一。NS5B 聚合酶是处于早期人临床试验中的抑制剂靶物 (Sommadossi， J.， WO 01/90121A2， US 2004/0006002 A1)。利用鉴别选择性抑制剂的筛选测定法 (De Clercq， E.(2001)J.Pharmacol.Exp.Ther.297 ： 1-10 ； De Clercq， E.(2001)J.Clin.Virol.22 ： 73-89)， 已经在生化和结构水平广泛地表征了这些酶。生化靶物例如 NS5B 在开发 HCV 疗法 中是重要的， 因为 HCV 不能在实验室中复制， 且存在开发基于细胞的测定法和临床前动物 系统的困难。
目 前， 主 要 存 在 2 类 抗 病 毒 化 合 物， 利巴韦林 ( 一种核苷类似物 ) 和干扰 素 -α(α)(IFN)， 它们用于治疗人的慢性 HCV 感染。单独的利巴韦林不能有效地降低病毒 RNA 水平， 具有显著的毒性， 且已知会诱发贫血。已经报道， IFN 和利巴韦林的组合可以有效 地治疗慢性丙型肝炎 (Scott， L.J.， 等人 Drugs 2002， 62， 507-556)， 但是小于半数接受该 治疗的患者表现出持久的益处。 公开了核苷类似物用于治疗丙型肝炎病毒的用途的其它专 利申请包括 WO 01/32153， WO 01/60315， WO 02/057425， WO 02/057287， WO 02/032920 和 WO 02/18404， 但是 HCV 感染的其它治疗仍然不可用于患者。因此， 迫切需要具有提高的抗病毒 和药物代谢动力学性质的药物， 其具有针对 HCV 抗性的发展的增强的活性、 提高的口服生
物利用度、 更大的功效、 更少的不希望的副作用和延长的体内有效半衰期 (De Francesco， R. 等人 (2003)Antiviral Research 58 ： 1-16)。
在 Carbohydrate Research 2001， 331(1)， 77-82 ； Nucleosides &Nucleotides(1996)， 15(1-3)， 793-807 ； Tetrahedron Letters(1994)， 35(30)， 5339-42 ； Heterocycles(1992) ， 34(3) ， 569-74 ； J.Chem.Soc.Perkin Trans.1 1985 ， 3， 621-30 ； J.Chem.Soc.Perkin Trans.1 1984， 2， 229-38 ； WO 2000056734 ； Organic Letters(2001)， 3(6)， 839-842 ； J.Chem.Soc.Perkin Trans.1 1999， 20， 2929-2936 ； 和 J.Med.Chem.1986， 29(11)， 2231-5 中， 已经公开了核碱基吡咯并 [1， 2-f][1， 2， 4] 三嗪、 咪唑并 [1， 5-f][1， 2， 4] 三嗪、 咪唑并 [1， 2-f][1， 2， 4] 三嗪和 [1， 2， 4] 三唑并 [4， 3-f][1， 2， 4] 三嗪的某些核 苷。但是， 尚未公开这些化合物用于治疗 HCV。Babu， Y.S.， WO2008/089105 和 WO2008/41079 公 开 了 具 有 抗 病 毒、 抗 -HCV 和 抗 -RdRp 活 性 的 吡 咯 并 [1， 2-f][1， 2， 4] 三 嗪 核 碱 基 (nucleobases) 的核苷。
发明概述
本发明提供了抑制黄病毒科病毒的化合物。本发明也包含这样的化合物， 其抑制 病毒核酸聚合酶、 尤其是 HCV RNA- 依赖性的 RNA 聚合酶 (RdRp)， 而不抑制细胞核酸聚合酶。 因此， 本发明的化合物可用于治疗人和其它动物的黄病毒科感染。
在一个方面， 本发明提供了式 I 的化合物 ：式I
或其药学上可接受的盐 ；
其中 ：
R1、 R2、 R3、 R4 或 R5 中的至少一个是 N(Ra)2、 N3、 CN、 NO2、 S(O)nRa、 卤素、 (C1-C8) 烷基、 (C4-C8) 碳环基烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 炔 1 2 3 4 5 基、 (C2-C8) 取代的炔基或芳基 (C1-C8) 烷基， 并且每个剩余的 R 、 R、 R、 R 或 R 独立地是 H、 a a a OR 、 N(R )2、 N3、 CN、 NO2、 S(O)nR 、 卤素、 (C1-C8) 烷基、 (C4-C8) 碳环基烷基、 (C1-C8) 取代的烷 基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 炔基、 (C2-C8) 取代的炔基或芳基 (C1-C8) 1 2 3 4 5 烷基， 或在邻近碳原子上的任意 2 个 R 、 R、 R、 R 或 R 一起形成 -O(CO)O-， 或与它们结合的 环碳原子一起形成双键 ；
每个 n 独立地是 0、 1或2； a
每个 R 独立地是 H、 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 炔基、 芳基 (C1-C8) 烷
基、 (C4-C8) 碳环基烷基、 -C( ＝ O)R11、 -C( ＝ O)OR11、 -C( ＝ O)NR11R12、 -C( ＝ O)SR11、 -S(O) 11 11 11 11 11 12 R 、 -S(O)2R 、 -S(O)(OR )、 -S(O)2(OR )、 -SO2NR R ； 7 11
R 是 H、 -C( ＝ O)R 、 -C( ＝ O)OR11、 -C( ＝ O)NR11R12、 -C( ＝ O)SR11、 -S(O) 11 11 11 11 11 12 R 、 -S(O)2R 、 -S(O)(OR )、 -S(O)2(OR )、 -SO2NR R 、 或
+ + 每个 Y 或 Y1 独立地是 O、 S、 NR、 N(O)(R)、 N(OR)、 N(O)(OR)、 或 N-NR2 ； 1 2 3 y 3 1 2 3
W 和 W 一起形成 -Y (C(R )2)3Y - ； 或 W 或 W 之一与任一个 R 或 R4 一起形成 -Y3-， 且 W1 或 W2 中的另一个是式 Ia ； 或 W1 和 W2 各自独立地是式 Ia 的基团 ：
式 Ia
其中 ： + +
每个 Y2 独立地是键、 O、 CR2、 NR、 N(O)(R)、 N(OR)、 N(O)(OR)、 N-NR2、 S、 S-S、 S(O) 或 S(O)2 ；
每个 Y3 独立地是 O、 S 或 NR ；
M2 是 0、 1或2； x
每个 R 独立地是 Ry 或下式 ：
其中 ：
每个 M1a、 M1c 和 M1d 独立地是 0 或 1 ；
M12c 是 0， 1， 2， 3， 4， 5， 6， 7， 8， 9， 10， 11 或 12 ； y
每 个 R 独 立 地 是 H、 F、 Cl、 Br、 I、 OH、 R、 -C( ＝ Y1)R、 -C( ＝ Y1)OR、 -C( ＝ Y1) N(R)2、 -N(R)2、 -+N(R)3、 -SR、 -S(O)R、 -S(O)2R、 -S(O)(OR)、 -S(O)2(OR)、 -OC( ＝ Y1)R、 -OC( ＝ 1 1 1 1 1 Y )OR、 -OC( ＝ Y )(N(R)2)、 -SC( ＝ Y )R、 -SC( ＝ Y )OR、 -SC( ＝ Y )(N(R)2)、 -N(R)C( ＝ Y1)
R、 -N(R)C( ＝ Y1)OR、 -N(R)C( ＝ Y1)N(R)2、 -SO2NR2、 -CN、 -N3、 -NO2、 -OR 或 W3 ； 或在同一个碳 y 原子上的 2 个 R 一起形成 3-7 个碳原子的碳环 ；
每个 R 独立地是 H、 (C1-C8) 烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取 代的链烯基、 (C2-C8) 炔基、 (C2-C8) 取代的炔基、 C6-C20 芳基、 C6-C20 取代的芳基、 C2-C20 杂环 基、 C2-C20 取代的杂环基、 芳烷基或取代的芳烷基 ； 3 4 5 4
W 是W 或W ； W 是 R、 -C(Y1)Ry、 -C(Y1)W5、 -SO2Ry 或 -SO2W5 ； 且 W5 是碳环或杂环， 其 5 y 中 W 独立地被 0-3 个 R 基团取代 ；
每个 X1 或 X2 独立地是 C-R10 或 N， 其中 X1 或 X2 中的至少一个是 N ；
每个 R8 独立地是卤素、 NR11R12、 N(R11)OR11、 NR11NR11R12、 N3、 NO、 NO2、 CHO、 CN、 -CH( ＝ 11 11 11 11 11 12 11 12 NR )、 -CH ＝ NHNR 、 -CH ＝ N(OR )、 -CH(OR )2、 -C( ＝ O)NR R 、 -C( ＝ S)NR R 、 -C( ＝ O) 11 OR 、 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 炔基、 (C4-C8) 碳环基烷基、 任选地取代的芳基、 任选地取代的杂芳基、 -C( ＝ O)(C1-C8) 烷基、 -S(O)n(C1-C8) 烷基、 芳基 (C1-C8) 烷基、 OR11 或 SR11 ；
每个 R9 或 R10 独立地是 H、 卤素、 NR11R12、 N(R11)OR11、 NR11NR11R12、 N3、 NO、 NO2、 CHO、 11 11 11 11 11 12 CN、 -CH( ＝ NR )、 -CH ＝ NHNR 、 -CH ＝ N(OR )、 -CH(OR )2、 -C( ＝ O)NR R 、 -C( ＝ S) 11 12 11 11 11 11 NR R 、 -C( ＝ O)OR 、 R 、 OR 或 SR ； 每个 R11 或 R12 独立地是 H、 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 炔基、 (C4-C8) 碳 环基烷基、 任选地取代的芳基、 任选地取代的杂芳基、 -C( ＝ O)(C1-C8) 烷基、 -S(O)n(C1-C8) 11 12 烷基或芳基 (C1-C8) 烷基 ； 或 R 和 R 与它们二者结合的氮一起形成 3-7 元杂环， 其中所述 a 杂环的任意一个碳原子可以任选地被替换为 -O-、 -S- 或 -NR - ； 1 2 3 4 5 11 12
其中每个R、 R、 R、 R、 R、 R 或 R 的 每 个 (C1-C8) 烷 基、 (C2-C8) 链 烯 基、 (C2-C8) 炔基或芳基 (C1-C8) 烷基独立地任选地被一个或多个卤素、 羟基、 CN、 N3、 N(Ra)2 或 ORa 取代 ； 且其中每个所述 (C1-C8) 烷基的一个或多个非末端碳原子可以被任选地替换 为 -O-、 -S- 或 -NRa-。
在另一个方面， 本发明包括式 I 的化合物和其药学上可接受的盐和它们的所有外 消旋物、 对映异构体、 非对映异构体、 互变异构体、 多晶型物、 假多晶型物和无定型形式。
在另一个方面， 本发明提供了新的式 I 的化合物， 其具有抗传染性黄病毒科病毒 的活性。不希望受理论的约束， 本发明的化合物可以抑制病毒 RNA- 依赖性的 RNA 聚合酶， 并从而抑制病毒的复制。它们可用于治疗受到人病毒例如丙型肝炎感染的人患者。
在另一个方面， 本发明提供了药物组合物， 其包含有效量的式 I 化合物或其药学 上可接受的盐与药学上可接受的稀释剂或载体的组合。
在另一个实施方案中， 本申请提供了药剂组合， 其包含 ：
a) 第一种药物组合物， 其包含式 I 化合物或其药学上可接受的盐、 溶剂化物或酯 ； 和
b) 第二种药物组合物， 其包含至少一种选自下述的其它治疗剂 ： 干扰素、 利巴韦 林类似物、 NS3 蛋白酶抑制剂、 NS5a 抑制剂、 α- 葡萄糖苷酶 1 抑制剂、 亲环蛋白抑制剂、 保 肝药、 HCV 的非核苷抑制剂和用于治疗 HCV 的其它药物。
在另一个实施方案中， 本申请提供了抑制 HCV 聚合酶的方法， 其包括使受到 HCV 感 染的细胞接触有效量的式 I 化合物或其药学上可接受的盐、 溶剂化物和 / 或酯。
在另一个实施方案中， 本申请提供了抑制 HCV 聚合酶的方法， 其包括使受到 HCV 感 染的细胞接触有效量的式 I 化合物或其药学上可接受的盐、 溶剂化物和 / 或酯 ； 和至少一种 其它治疗剂。
在另一个实施方案中， 本申请提供了治疗和 / 或预防由病毒感染造成的疾病的方 法， 其中所述病毒感染由选自下述的病毒造成 ： 登革热病毒、 黄热病病毒、 西尼罗病毒、 日本 脑炎病毒、 蜱传脑炎病毒、 Junjin 病毒、 墨累山谷脑炎病毒、 圣路易斯脑炎病毒、 鄂木斯克出 血热病毒、 牛病毒性腹泻病毒、 济卡病毒和丙型肝炎病毒 ； 其中对有此需要的受试者施用治 疗有效量的式 I 化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中， 本申请提供了治疗患者中的 HCV 的方法， 其包括对所述患 者施用治疗有效量的式 I 化合物 ； 或其药学上可接受的盐、 溶剂化物和 / 或酯。
在另一个实施方案中， 本申请提供了治疗患者中的 HCV 的方法， 其包括对所述患 者施用治疗有效量的式 I 化合物 ； 或其药学上可接受的盐、 溶剂化物和 / 或酯 ； 和至少一种 其它治疗剂。
本发明的另一个方面提供了治疗或预防受感染的动物中 HCV 感染的症状或效应 的方法， 其包括将药物组合组合物或制剂施用给 ( 即治疗 ) 所述动物， 所述组合物或制剂包 含有效量的式 I 化合物和具有抗 -HCV 性质的第二种化合物。
在另一个方面， 本发明也提供了抑制 HCV 的方法， 其包括对受到 HCV 感染的哺乳动 物施用能有效地抑制所述哺乳动物的受感染细胞中 HCV 复制的量的式 I 化合物。
在另一个方面， 本发明也提供了可用于制备本发明式 I 化合物的方法和本文公开 的新的中间体。
在其它方面， 提供了用于合成、 分析、 分开、 分离、 纯化、 表征和测试本发明的化合 物的新的方法。
示例性实施方案的详述
现在涉及针对本发明某些实施方案的详细描述， 其中的实施例通过附加的描述、 结构和式说明。 尽管会结合列出的实施方案描述本发明， 但是可以理解， 它们无意将本发明 限定为那些实施方案。 相反， 本发明意图覆盖可以包括在本发明范围内的所有替代方案、 改 变和等价物。
在另一个方面， 式 I 的化合物由式 II 表示 ：
式 II或其药学上可接受的盐 ；
其中 ：
R1、 R2、 R3、 R4 或 R5 中的至少一个是 N(Ra)2、 N3、 CN、 NO2、 S(O)nRa、 卤素、 (C1-C8) 烷基、 (C4-C8) 碳环基烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 炔 1 2 3 4 5 基、 (C2-C8) 取代的炔基或芳基 (C1-C8) 烷基， 并且每个剩余的 R 、 R、 R、 R 或 R 独立地是 H、 a a a OR 、 N(R )2、 N3、 CN、 NO2、 S(O)nR 、 卤素、 (C1-C8) 烷基、 (C4-C8) 碳环基烷基、 (C1-C8) 取代的烷 基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 炔基、 (C2-C8) 取代的炔基或芳基 (C1-C8) 1 2 3 4 5 烷基， 或在邻近碳原子上的任意 2 个 R 、 R、 R、 R 或 R 一起形成 -O(CO)O-， 或与它们结合的 环碳原子一起形成双键 ；
每个 n 是 0、 1或2； a
每个 R 独立地是 H、 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 炔基、 芳基 (C1-C8) 烷 11 11 11 12 基、 (C4-C8) 碳环基烷基、 -C( ＝ O)R 、 -C( ＝ O)OR 、 -C( ＝ O)NR R 、 -C( ＝ O)SR11、 -S(O) 11 11 11 11 11 12 R 、 -S(O)2R 、 -S(O)(OR )、 -S(O)2(OR )、 -SO2NR R ； 7 11
R 是 H、 -C( ＝ O)R 、 -C( ＝ O)OR11、 -C( ＝ O)NR11R12、 -C( ＝ O)SR11、 -S(O) 11 11 11 11 11 12 R 、 -S(O)2R 、 -S(O)(OR )、 -S(O)2(OR )、 -SO2NR R 或
+ + 每个 Y 或 Y1 独立地是 O、 S、 NR、 N(O)(R)、 N(OR)、 N(O)(OR) 或 N-NR2 ； 1 2 3 y 3 1 2
W 和 W 一起形成 -Y (C(R )2)3Y - ； 或 W 或 W 之一与任一个 R3 或 R4 一起形成 -Y3-， 且 W1 或 W2 中的另一个是式 Ia ； 或 W1 和 W2 各自独立地是式 Ia 的基团 ：
式 Ia
其中 ： + +
每个 Y2 独立地是键、 O、 CR2、 NR、 N(O)(R)、 N(OR)、 N(O)(OR)、 N-NR2、 S、 S-S、 S(O) 或 S(O)2 ；
每个 Y3 独立地是 O、 S 或 NR ；
M2 是 0、 1或2； x
每个 R 独立地是 Ry 或下式 ：
其中 ：
每个 M1a、 M1c 和 M1d 独立地是 0 或 1 ；
M12c 是 0， 1， 2， 3， 4， 5， 6， 7， 8， 9， 10， 11 或 12 ； y
每 个 R 独 立 地 是 H、 F、 Cl、 Br、 I、 OH、 R、 -C( ＝ Y1)R、 -C( ＝ Y1)OR、 -C( ＝ Y1) N(R)2、 -N(R)2、 -+N(R)3、 -SR、 -S(O)R、 -S(O)2R、 -S(O)(OR)、 -S(O)2(OR)、 -OC( ＝ Y1)R、 -OC( ＝ 1 1 1 1 1 Y )OR、 -OC( ＝ Y )(N(R)2)、 -SC( ＝ Y )R、 -SC( ＝ Y )OR、 -SC( ＝ Y )(N(R)2)、 -N(R)C( ＝ Y1) R、 -N(R)C( ＝ Y1)OR、 -N(R)C( ＝ Y1)N(R)2、 -SO2NR2、 -CN、 -N3、 -NO2、 -OR 或 W3 ； 或在同一个碳 y 原子上的 2 个 R 一起形成 3-7 个碳原子的碳环 ；
每个 R 独立地是 H、 (C1-C8) 烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取 代的链烯基、 (C2-C8) 炔基、 (C2-C8) 取代的炔基、 C6-C20 芳基、 C6-C20 取代的芳基、 C2-C20 杂环 芳烷基或取代的芳烷基 ； 基、 C2-C20 取代的杂环基、 3 4 5 4
W 是W 或W ； W 是 R、 -C(Y1)Ry、 -C(Y1)W5、 -SO2Ry 或 -SO2W5 ； 且 W5 是碳环或杂环， 其 5 y 中 W 独立地被 0-3 个 R 基团取代 ；
每个 X1 或 X2 独立地是 C-R10 或 N， 其中 X1 或 X2 中的至少一个是 N ；
每个 R8 独立地是卤素、 NR11R12、 N(R11)OR11、 NR11NR11R12、 N3、 NO、 NO2、 CHO、 CN、 -CH( ＝ 11 11 11 11 11 12 11 12 NR )、 -CH ＝ NHNR 、 -CH ＝ N(OR )、 -CH(OR )2、 -C( ＝ O)NR R 、 -C( ＝ S)NR R 、 -C( ＝ O) 11 OR 、 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 炔基、 (C4-C8) 碳环基烷基、 任选地取代的芳基、 任选地取代的杂芳基、 -C( ＝ O)(C1-C8) 烷基、 -S(O)n(C1-C8) 烷基、 芳基 (C1-C8) 烷基、 OR11 或 SR11 ；
每个 R9 或 R10 独立地是 H、 卤素、 NR11R12、 N(R11)OR11、 NR11NR11R12、 N3、 NO、 NO2、 CHO、 11 11 11 11 11 12 CN、 -CH( ＝ NR )、 -CH ＝ NHNR 、 -CH ＝ N(OR )、 -CH(OR )2、 -C( ＝ O)NR R 、 -C( ＝ S) 11 12 11 11 11 11 NR R 、 -C( ＝ O)OR 、 R 、 OR 或 SR ； 11 12
每个 R 或 R 独立地是 H、 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 炔基、 (C4-C8) 碳 环基烷基、 任选地取代的芳基、 任选地取代的杂芳基、 -C( ＝ O)(C1-C8) 烷基、 -S(O)n(C1-C8) 11 12 或 R 和 R 与它们二者结合的氮一起形成 3-7 元杂环， 其中所述 烷基或芳基 (C1-C8) 烷基 ； a 杂环的任意一个碳原子可以任选地被替换为 -O-、 -S- 或 -NR - ； 1 2 3 4 5 11 12
其中每个R、 R、 R、 R、 R、 R 或 R 的 每 个 (C1-C8) 烷 基、 (C2-C8) 链 烯 基、 (C2-C8) 炔基或芳基 (C1-C8) 烷基独立地任选地被一个或多个卤素、 羟基、 CN、 N3、 N(Ra)2 或 ORa 取代 ； 且其中每个所述 (C1-C8) 烷基的一个或多个非末端碳原子可以被任选地替换 为 -O-、 -S- 或 -NRa。
在式 II 的一个实施方案中， R1 是 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基或 (C2-C8) 炔基。在 1 另一个实施方案中， R 是 (C1-C8) 烷基。在另一个实施方案中， R1 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯 1 1 基或乙炔基。在一个优选的实施方案中， R 是甲基。在另一个优选的实施方案中， R 是 H。 2 a a a
在式 II 的一个实施方案中， R 是 H、 OR 、 N(R )2、 N3、 CN、 NO2、 S(O)nR 、 卤素、 (C1-C8)
烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 炔基或 (C2-C8) 取 2 a a 代的炔基。在该实施方案的另一个方面， R 是 H、 OR 、 N(R )2、 N3、 CN、 SRa 或卤素。在该实施 方案的另一个方面， R2 是 H、 OH、 NH2、 N3、 CN 或卤素。在该实施方案的另一个方面， R2 是 ORa 或卤素， 且 R1 是 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基或 (C2-C8) 炔基。在该实施方案的另一个方面， 2 a 1 R 是 OR 或 F， 且 R 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基。在该实施方案的一个优选方面， 2 1 R 是 OH， 且 R 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基。在该实施方案的另一个优选方面， R2 是 OH， R1 是 H， 且 R3 或 R5 中的至少一个不是 H。在该实施方案的另一个优选方面， R2 是 F， 且 R1 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基。在该实施方案的另一个优选方面， R2 是 ORa， 且 1 2 1 R 是甲基。在该实施方案的一个特别优选方面， R 是 OH， 且 R 是甲基。 3 a a
在式 II 的一个实施方案中， R 是 H、 OR 、 N(R )2、 N3、 CN、 SRa、 卤素、 (C1-C8) 烷基、 3 (C2-C8) 链烯基或 (C2-C8) 炔基。在该实施方案的一个方面， R 是 H 或 F。在该实施方案的 3 3 一个优选方面， R 是 H。在该实施方案的另一个优选方面， R 是 H， R2 是 ORa 或卤素， 且 R1 是 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基或 (C2-C8) 炔基。在该实施方案的另一个方面， R3 是 H， R2 是 ORa 或 F， 且 R1 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基。在该实施方案的另一个方面， R3 是 H， R2 是 ORa， 且 R1 是甲基。在该实施方案的另一个方面， R3 是 H， R2 是 OH， 且 R1 是甲基。在该 实施方案的另一个方面， R3 和 R1 是 H， R2 是 OH， 且 R5 不是 H。 在式 II 的一个实施方案中， R4 是 H、 ORa、 N(Ra)2、 N3、 CN、 SRa、 卤素、 (C1-C8) 烷基、 4 a (C2-C8) 链烯基或 (C2-C8) 炔基。在该实施方案的一个优选方面， R 是 OR 。在该实施方案的 4 a 2 a 1 另一个优选方面， R 是 OR ， R 是 OR 或卤素， 且 R 是 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基或 (C2-C8) 4 a 2 a 炔基。在该实施方案的另一个优选方面， R 是 OR ， R 是 OR 或卤素， R1 是 H， 且 R5 不是 H。 在该实施方案的另一个优选方面， R4 是 ORa， R2 是 ORa 或卤素， R3 是 H， 且 R1 是 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基或 (C2-C8) 炔基。在该实施方案的另一个优选方面， R4 是 ORa， R2 是 ORa 或 F， 且 R1 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基。在该实施方案的另一个优选方面， R4 是 ORa， R2 是 ORa 或 F， R3 是 H， 且 R1 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基。在该实施方案的另一个优 4 2 a 1 选方面， R 和 R 独立地是 OR ， 且 R 是甲基。在该实施方案的另一个优选方面， R4 和 R2 独 立地是 ORa， R3 是 H， 且 R1 是甲基。在该实施方案的另一个优选方面， R4 或 R2 之一是 ORa， 且 4 2 4 2 a a R 或 R 中的另一个是 OH。在该实施方案的另一个优选方面， R 或 R 之一是 OR ， 其中 R 不 4 2 3 1 是 H， 且 R 或 R 中的另一个是 OH， R 是 H， 且 R 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基。在该 4 2 3 1 实施方案的另一个优选方面， R 和 R 是 OH， R 是 H， 且 R 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙 4 2 3 炔基。在该实施方案的另一个优选方面， R 和 R 一起形成 -O(CO)O-， R 是 H， 且 R1 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基。
在式 II 的一个实施方案中， R5 是 H、 ORa、 N(Ra)2、 N3、 CN、 SRa、 卤素、 (C1-C8) 烷基、 5 (C2-C8) 链烯基或 (C2-C8) 炔基。在该实施方案的另一个方面， R 是 H、 N3、 CN、 (C1-C8) 烷基、 5 (C2-C8) 链烯基或 (C2-C8) 炔基。在该实施方案的另一个方面， R 是 H、 N3、 CN、 甲基、 CH2OH、 4 a 3 5 4 乙烯基或乙炔基 ； R 是 OR ， 且 R 是 H。在该实施方案的另一个方面， R 是 H 或 N3， R 是 ORa， R3 是 H， 且 R2 是 F 或 ORa。在该实施方案的另一个方面， R5 是 H 或 N3， R4 是 ORa， R3 是 H， R2 是 ORa， 且 R1 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基。在该实施方案的另一个方面， R3 和 R5 是 H， R2 和 R4 独立地是 ORa， 且 R1 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基。在该实施方案的另一个 3 5 2 4 1 方面， R 和 R 是 H， R 和 R 是 OH， 且 R 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基。在该实施方
案的另一个方面， R1 和 R3 是 H， R2 和 R4 独立地是 ORa 且 R5 是 N3。在该实施方案的另一个方 面， R4 和 R2 一起形成 -O(CO)O-， R3 是 H， 且 R1 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基。 2 4 a 1 3
在式 II 的一个实施方案中， R 和 R 均是 OR ， 且R、 R 或 R5 中的至少一个不是 H。 在该实施方案的另一个方面， R2 和 R4 均是 ORa， 且 R1 是 (C1-C8) 烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 炔基、 (C2-C8) 取代的炔基或芳基 (C1-C8) 烷 2 4 a 基。在该实施方案的另一个方面， R 和 R 均是 OR ， 且 R3 是 (C1-C8) 烷基、 (C1-C8) 取代的烷 基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 炔基、 (C2-C8) 取代的炔基或芳基 (C1-C8) 2 4 a 烷基。在该实施方案的另一个方面， R 和 R 均是 OR ， 且 R5 是 ORa、 N(Ra)2、 N3、 CN、 NO2、 S(O) a 卤素、 (C1-C8) 烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) nR 、 炔基、 (C2-C8) 取代的炔基或芳基 (C1-C8) 烷基。
在式 II 的另一个实施方案中， R1 和 R2 均是 H ； R3 或 R4 之一是 ORa， 且 R3 或 R4 中的 另一个是 (C1-C8) 烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 3 炔基、 (C2-C8) 取代的炔基或芳基 (C1-C8) 烷基。在该实施方案的另一个方面， R 或 R4 之一 是 OH。在该实施方案的另一个方面， R5 是 ORa、 N(Ra)2、 N3、 CN、 NO2、 S(O)nRa、 卤素、 (C1-C8) 烷 基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 炔基、 (C2-C8) 取代 的炔基或芳基 (C1-C8) 烷基。
在式 II 的一个实施方案中， R7 是 H、 -C( ＝ O)R11、 -C( ＝ O)OR11、 -C( ＝ O)SR11 或
在该实施方案的一个优选方面， R7 是 H。在该实施方案的另一个优选方面， R7 是 -C( ＝ O)R11。在该实施方案的另一个优选方面， R7 是 -C( ＝ O)R11， 其中 R11 是 (C1-C8) 烷基。在该实施方案的另一个优选方面， R7 是
在式 II 的一个实施方案中， X1 是 N 或 CR10。在该实施方案的另一个方面， X1 是 N。 在该实施方案的另一个方面， X1 是 CR10。在该实施方案的另一个方面， X1 是 CR10， 且 R10 是 H、 卤素或 CN。在该实施方案的另一个方面， X1 是 CR10， 且 R10 是 H 或 F。在该实施方案的另 一个方面， X1 是 CH。在该实施方案的另一个方面， 每个 X1 和 X2 是 N。在该实施方案的另一 个方面， X1 是 N， 且 X2 是 CR10。在该实施方案的另一个方面， X1 是 N， 且 X2 是 CR10， 其中 R10 是 H、 卤素或 CN。在该实施方案的另一个方面， X1 是 N， 且 X2 是 CR10， 其中 R10 是 H 或 F。在该实 施方案的另一个方面， X1 是 N， 且 X2 是 CH。在该实施方案的另一个方面， X1 是 N ； X2 是 CH ； R1 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基 ； R3 是 H ； 且每个 R2 和 R4 是 ORa。在该实施方案的另一 个方面， X1 是 N ； X2 是 CH ； R1 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基 ； 每个 R3 和 R5 是 H ； 且每 2 4 a 个 R 和 R 是 OR 。
在式 II 的另一个实施方案中， X2 是 N 或 CR10。在该实施方案的另一个方面， X2 是
N， 且 X1 是 CR10。在该实施方案的另一个方面， X2 是 N， 且 X1 是 CR10， 其中 R10 是 H、 卤素或 CN。 2 1 10 10 在该实施方案的另一个方面， X 是 N， 且 X 是 CR ， 其中 R 是 H 或 F。在该实施方案的另一 2 1 个方面， X 是 N， 且 X 是 CH。
在 式 II 的 另 一 个 实 施 方 案 中， 每 个 R8 独 立 地 是 卤 素、 NR11R12、 N(R11)OR11、 NR11NR11R12、 N3、 NO、 NO2、 CHO、 CN、 -CH( ＝ NR11)、 -CH ＝ NHNR11、 -CH ＝ N(OR11)、 -CH(OR11)2、 -C( ＝ 11 12 11 12 11 O)NR R 、 -C( ＝ S)NR R 、 -C( ＝ O)OR 、 (C1-C8) 烷 基、 (C2-C8) 链 烯 基、 (C2-C8) 炔 基、 (C4-C8) 碳环基烷基、 任选地取代的芳基、 任选地取代的杂芳基、 -C( ＝ O)(C1-C8) 烷基、 -S(O) 11 11 8 芳基 (C1-C8) 烷基、 OR 或 SR 。在该实施方案的另一个方面， 每个 R 独立地 n(C1-C8) 烷基、 11 12 11 11 11 11 12 11 11 是卤素、 NR R 、 N(R )OR 、 NR NR R 、 OR 或 SR 。在该实施方案的另一个方面， 每个 R8 独 立地是卤素、 NR11R12、 N(R11)OR11、 NR11NR11R12、 OR11 或 SR11， 且 R1 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或 8 11 12 11 11 乙炔基。在该实施方案的另一个方面， 每个 R 独立地是卤素、 NR R 、 N(R )OR 、 NR11NR11R12、 OR11 或 SR11， 且 R9 是 H、 卤素或 NR11R12。在该实施方案的另一个方面， 每个 R8 独立地是卤素、 NR11R12、 N(R11)OR11、 NR11NR11R12、 OR11 或 SR11， 且 R9 是 H、 卤素或 NR11R12， 且 R1 是甲基、 CH2OH、 8 9 CH2F、 乙烯基或乙炔基。在该实施方案的另一个优选方面， R 是 NH2， 且 R 是 H 或卤素。在 8 9 1 该实施方案的另一个优选方面， R 是 NH2， 且 R 是 H 或卤素， 且 R 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯 8 9 基或乙炔基。在该实施方案的另一个优选方面， R 和 R 各自是 NH2。在该实施方案的另一 8 9 1 个优选方面， R 和 R 各自是 NH2， 且 R 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基。在该实施方案 8 9 的另一个优选方面， R 是 OH， 且 R 是 NH2。在该实施方案的另一个优选方面， R8 是 OH， 且 R9 是 NH2， 且 R1 是甲基、 CH2OH、 CH2F、 乙烯基或乙炔基。
在 式 II 的 另 一 个 实 施 方 案 中， 每 个 R10 独 立 地 是 H、 卤 素、 NR11R12、 N(R11)OR11、 NR11NR11R12、 N3、 NO、 NO2、 CHO、 CN、 -CH( ＝ NR11)、 -CH ＝ NHNR11、 -CH ＝ N(OR11)、 -CH(OR11)2、 -C( ＝ 11 12 11 12 11 11 11 11 O)NR R 、 -C( ＝ S)NR R 、 -C( ＝ O)OR 、 R 、 OR 或 SR 。在该实施方案的另一个方面， 每 10 个 R 是 H、 卤素、 CN 或任选地取代的杂芳基。
在式 II 的另一个实施方案中， R11 或 R12 独立地是 H、 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯 基、 (C2-C8) 炔基、 (C4-C8) 碳环基烷基、 任选地取代的芳基、 任选地取代的杂芳基、 -C( ＝ O)(C1-C8) 烷 基、 -S(O)n(C1-C8) 烷 基 或 芳 基 (C1-C8) 烷 基。 在 另 一 个 实 施 方 案 中， R11 和 R12 连同它们所连接的氮形成 3-7 元杂环， 其中所述杂环的任意一个碳原子可任选地 a 被 -O-、 -S- 或 -NR - 替代。因此， 作为实例， 但不作为限制， 部分 -NR11R12 可由下述杂环表 示：
等。在式 II 的另一个实施方案中， R1、 R2、 R3、 R4、 R5、 R11 或 R12 独立地是 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 炔基或芳基 (C1-C8) 烷基， 其中所述 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 炔基或芳基 (C1-C8) 烷基独立地任选地被一个或多个卤素、 羟基、 CN、 N3、 N(Ra)2 或 ORa 取代。因此， 作为实例， 但不作为限制， R1、 R2、 R3、 R4、 R5、 R11 或 R12 可以表示， 例如 -CH(NH2) CH3、 -CH(OH)CH2CH3、 -CH(NH2)CH(CH3)2、 -CH2CF3、 -(CH2)2CH(N3)CH3、 -(CH2)6NH2 等的部分。 1 2 3 4 5 11 12
在式 II 的另一个实施方案中， R、 R、 R、 R、 R、 R 或 R 是 (C1-C8) 烷基， 其中每个 a 所述 (C1-C8) 烷基的一个或多个非末端碳原子可任选地被 -O-、 -S- 或 -NR - 替代。因此， 作 1 2 3 4 5 11 12 为实例， 但不作为限制， R、 R、 R、 R、 R、 R 或 R 可以表示， 例如 -CH2OCH3、 -CH2OCH2CH3、 -CH2OCH(CH3)2、 -CH2SCH3、 -(CH2)6OCH3、 -(CH2)6N(CH3)2 等的部分。
在另一个方面， 式 I 的化合物由式 III 表示 ：
式 III
或其药学上可接受的盐 ； 其中其所有的变量如式 I 所定义。
在式 III 的一个实施方案中， R2 是 H、 ORa、 N(Ra)2、 N3、 CN、 NO2、 S(O)nRa、 卤素、 (C1-C8) 烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 炔基或 (C2-C8) 取 2 a a 代的炔基。在该实施方案的另一个方面， R 是 H、 OR 、 N(R )2、 N3、 CN、 SRa 或卤素。在该实施 方案的另一个方面， R2 是 H、 OH、 NH2、 N3、 CN 或卤素。在该实施方案的另一个方面， R2 是 ORa 或卤素。在该实施方案的一个优选方面， R2 是 OH。在该实施方案的另一个优选方面， R2 是 OH， 且 R3 或 R5 中的至少一个不是 H。在该实施方案的另一个优选方面， R2 是 F。在该实施方 案的另一个优选方面， R2 是 ORa。在该实施方案的另一个优选方面， R2 是 OH。
在式 III 的一个实施方案中， R3 是 H、 ORa、 N(Ra)2、 N3、 CN、 SRa、 卤素、 (C1-C8) 烷基、 3 (C2-C8) 链烯基或 (C2-C8) 炔基。在该实施方案的一个方面， R 是 H 或 F。在该实施方案的 3 3 一个优选方面， R 是 H。在该实施方案的另一个优选方面， R 是 H， 且 R2 是 ORa 或卤素。在 该实施方案的另一个优选方面， R3 是 H， 且 R2 是 ORa 或 F。在该实施方案的另一个方面， R3 是 H， 且 R2 是 ORa。在该实施方案的另一个方面， R3 是 H， 且 R2 是 OH。在该实施方案的另一 个方面， R3 是 H， R2 是 OH 且 R5 不是 H。
在式 III 的一个实施方案中， R4 是 H、 ORa、 N(Ra)2、 N3、 CN、 SRa、 卤素、 (C1-C8) 烷基、 4 a (C2-C8) 链烯基或 (C2-C8) 炔基。在该实施方案的一个优选方面， R 是 OR 。在该实施方案的 4 a 2 a 另一个优选方面， R 是 OR ， 且 R 是 OR 或卤素。在该实施方案的另一个优选方面， R4 是 ORa，
且 R2 是 ORa 或卤素， 且 R5 不是 H。在该实施方案的另一个优选方面， R4 是 ORa， R2 是 ORa 或 卤素且 R3 是 H。在该实施方案的另一个优选方面， R4 是 ORa， 且 R2 是 ORa 或 F。在实施方案 的另一个优选方面， R4 是 ORa， R2 是 ORa 或 F， 且 R3 是 H。在该实施方案的另一个优选方面， R4 和 R2 独立地是 ORa。在该实施方案的另一个优选方面， R4 和 R2 独立地是 ORa， 且 R3 是 H。 在该实施方案的另一个优选方面， R4 或 R2 之一是 ORa， 且 R4 或 R2 中的另一个是 OH。在该实 施方案的另一个优选方面， R4 或 R2 之一是 ORa， 其中 Ra 不是 H， 且 R4 或 R2 中的另一个是 OH， R4 和 R2 是 OH， 且 R3 是 H。在该实施方案的另 且 R3 是 H。在该实施方案的另一个优选方面， 一个优选方面， R4 和 R2 一起形成 -O(CO)O- 且 R3 是 H。
在式 III 的一个实施方案中， R5 是 H、 ORa、 N(Ra)2、 N3、 CN、 SRa、 卤素、 (C1-C8) 烷基、(C2-C8) 链烯基或 (C2-C8) 炔基。在该实施方案的另一个方面， R5 是 H、 N3、 CN、 (C1-C8) 烷基、 5 (C2-C8) 链烯基或 (C2-C8) 炔基。在该实施方案的另一个方面， R 是 H、 N3、 CN、 甲基、 CH2OH、 4 a 3 5 4 乙烯基或乙炔基， R 是 OR ， 且 R 是 H。在该实施方案的另一个方面， R 是 H 或 N3， R 是 ORa， R3 是 H， 且 R2 是 F 或 ORa。在该实施方案的另一个方面， R5 是 H 或 N3， R4 是 ORa， R3 是 H， 且 R2 是 ORa。在该实施方案的另一个方面， R3 和 R5 是 H， 且 R2 和 R4 独立地是 ORa。在该实施方案 的另一个方面， R3 和 R5 是 H， 且 R2 和 R4 是 OH。在该实施方案的另一个方面， R3 是 H， R2 和 R4 独立地是 ORa， 且 R5 是 N3。在该实施方案的另一个优选方面， R2 和 R4 一起形成 -O(CO)O-， 且 3 R 是 H。
在式 III 的一个实施方案中， R2 和 R4 均是 ORa， 且 R3 或 R5 中的至少一个不是 H。在 该实施方案的另一个方面， R2 和 R4 均是 ORa。在该实施方案的另一个方面， R2 和 R4 均是 ORa， 且 R3 是 (C1-C8) 烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 2 炔基、 (C2-C8) 取代的炔基或芳基 (C1-C8) 烷基。在该实施方案的另一个方面， R 和 R4 均是 ORa， 且 R5 是 ORa、 N(Ra)2、 N3、 CN、 NO2、 S(O)nRa、 卤素、 (C1-C8) 烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 炔基、 (C2-C8) 取代的炔基或芳基 (C1-C8) 烷基。 2
在式 III 的另一个实施方案中， R 是 H， R3 或 R4 之一是 ORa， 且 R3 或 R4 中的另一 个是 (C1-C8) 烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 炔 3 基、 (C2-C8) 取代的炔基或芳基 (C1-C8) 烷基。在该实施方案的另一个方面， R 或 R4 之一是 OH。在该实施方案的另一个方面， R5 是 ORa、 N(Ra)2、 N 3、 CN、 NO2、 S(O)nRa、 卤素、 (C1-C8) 烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 炔基、 (C2-C8) 取代的炔 基或芳基 (C1-C8) 烷基。
在式 III 的一个实施方案中， R7 是 H、 -C( ＝ O)R11、 -C( ＝ O)OR11、 -C( ＝ O)SR11 或
在该实施方案的一个优选方面， R7 是 H。在该实施方案的另一个优选方面， R7 是 -C( ＝ O)R11。在该实施方案的另一个优选方面， R7 是 -C( ＝ O)R11， 其中 R11 是 (C1-C8) 烷基。在该实施方案的另一个优选方面， R7 是
在式 III 的一个实施方案中， X1 是 N 或 CR10。在该实施方案的另一个方面， X1 是 N。 在该实施方案的另一个方面， X1 是 CR10。在该实施方案的另一个方面， X1 是 CR10 且 R10 是 H、 卤素或 CN。在该实施方案的另一个方面， X1 是 CR10 且 R10 是 H 或 F。在该实施方案的另一 个方面， X1 是 CH。在该实施方案的另一个方面， 每个 X1 和 X2 是 N。在该实施方案的另一个 方面， X1 是 N 且 X2 是 CR10。在该实施方案的另一个方面， X1 是 N 且 X2 是 CR10， 其中 R10 是 H、 卤素或 CN。在该实施方案的另一个方面， X1 是 N 且 X2 是 CR10， 其中 R10 是 H 或 F。在该实施 方案的另一个方面， X1 是 N 且 X2 是 CH。在该实施方案的另一个方面， X1 是 N ； X2 是 CH ； R3 是
H； 且每个 R2 和 R4 是 ORa。在该实施方案的另一个方面， X1 是 N ； X2 是 CH ； 每个 R3 和 R5 是 H ； 且每个 R2 和 R4 是 ORa。
在式 III 的另一个实施方案中， X2 是 N 或 CR10。在该实施方案的另一个方面， X2 是 N 且 X1 是 CR10。在该实施方案的另一个方面， X2 是 N 且 X1 是 CR10， 其中 R10 是 H、 卤素或 CN。 2 1 10 10 在该实施方案的另一个方面， X 是 N 且 X 是 CR ， 其中 R 是 H 或 F。在该实施方案的另一 2 1 个方面， X 是 N 且 X 是 CH。
在 式 III 的 另 一 个 实 施 方 案 中， 每 个 R8 独 立 地 是 卤 素、 NR11R12、 N(R11)OR11、 NR11NR11R12、 N3、 NO、 NO2、 CHO、 CN、 -CH( ＝ NR11)、 -CH ＝ NHNR11、 -CH ＝ N(OR11)、 -CH(OR11)2、 -C( ＝ 11 12 11 12 11 O)NR R 、 -C( ＝ S)NR R 、 -C( ＝ O)OR 、 (C1-C8) 烷 基、 (C2-C8) 链 烯 基、 (C2-C8) 炔 基、 (C4-C8) 碳环基烷基、 任选地取代的芳基、 任选地取代的杂芳基、 -C( ＝ O)(C1-C8) 烷基、 -S(O) 11 11 8 芳基 (C1-C8) 烷基、 OR 或 SR 。在该实施方案的另一个方面， 每个 R 独立地 n(C1-C8) 烷基、 11 12 11 11 11 11 12 11 11 是卤素、 NR R 、 N(R )OR 、 NR NR R 、 OR 或 SR 。在该实施方案的另一个方面， 每个 R8 独 立地是卤素、 NR11R12、 N(R11)OR11、 NR11NR11R12、 OR11 或 SR11， 且 R9 是 H、 卤素或 NR11R12。在该实施 方案的另一个优选方面， R8 是 NH2， 且 R9 是 H 或卤素。在该实施方案的另一个优选方面， R8 和 R9 各自是 NH2。在该实施方案的另一个优选方面， R8 是 OH， 且 R9 是 NH2。
在式 III 的另一个实施方案中， 每个 R10 独立地是 H、 卤素、 NR11R12、 N(R11)OR11、 NR11NR11R12、 N3、 NO、 NO2、 CHO、 CN、 -CH( ＝ NR11)、 -CH ＝ NHNR11、 -CH ＝ N(OR11)、 -CH(OR11)2、 -C( ＝ 11 12 11 12 11 11 11 11 O)NR R 、 -C( ＝ S)NR R 、 -C( ＝ O)OR 、 R 、 OR 或 SR 。在该实施方案的另一个方面， 每 10 个 R 是 H、 卤素、 CN 或任选地取代的杂芳基。
在式 III 的一个实施方案中， R11 或 R12 独立地是 H、 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯 基、 (C2-C8) 炔基、 (C4-C8) 碳环基烷基、 任选地取代的芳基、 任选地取代的杂芳基、 -C( ＝ O) 11 (C1-C8) 烷基、 -S(O)n(C1-C8) 烷基或芳基 (C1-C8) 烷基。在另一个实施方案中， R 和 R12 与它 们二者结合的氮一起形成 3-7 元杂环， 其中所述杂环的任意一个碳原子可以任选地被替换 a 为 -O-、 -S- 或 -NR 。因此， 作为实例且不作为限制， 部分 -NR11R12 可以由下述杂环表示 ：
等。在式 III 的另一个实施方案中， R1、 R2、 R3、 R4、 R5、 R11 或 R12 独立地是 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 炔基或芳基 (C1-C8) 烷基， 其中所述 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 炔基或芳基 (C1-C8) 烷基独立地任选地被一个或多个卤素、 羟基、 CN、 N3、 N(Ra)2 或 ORa取代。因此， 作为实例且不作为限制， R1、 R2、 R3、 R4、 R5、 R11 或 R12 可以表示部分， 例如 -CH(NH2) CH3、 -CH(OH)CH2CH3、 -CH(NH2)CH(CH3)2、 -CH2CF3、 -(CH2)2CH(N3)CH3、 -(CH2)6NH2 等。 1 2 3 4 5 11 12
在式 III 的另一个实施方案中， R、 R、 R、 R、 R、 R 或 R 是 (C1-C8) 烷基， 其中每 个所述 (C1-C8) 烷基的一个或多个非末端碳原子可以被任选地替换为 -O-、 -S- 或 -NRa-。因 此， 作为实例且不作为限制， R1、 R2、 R3、 R4、 R5、 R11 或 R12 可以表示部分， 例如 -CH2OCH3、 -CH2OCH -CH2OCH(CH3)2、 -CH2SCH3、 -(CH2)6OCH3、 -(CH2)6N(CH3)2 等。 2CH3、
依然在另一个实施方案中， 在下面以表格形式 ( 表 6) 命名式 I、 式 II 或式 III 的 化合物， 作为通式 IV 的化合物 ：
式 IV
其中 X1 和 X2 表示如下面在表 1-2 中定义的结合到四氢呋喃基环的取代基 ； B是 下面在表 4 中定义的嘌呤 ； 且 X3 表示下面在表 3 中所述的嘌呤碱基 B 的环元件。
在 X1、 X2 和 B 的每个结构中， 指示了核心结构核糖的结合点。在每个结构 X3 中， 指示了核心结构嘌呤的结合点。在表 1-4 中的每个结构由字母数字 “代码” 代表。因而， 使 用下述的排列， X1.X2.X3.B， 通过组合代表每个结构部分的 “代码” ， 可以以列表形式指定式 IV 化合物的每个结构。因而， 例如， X1a.X2c.X3a.B1 表示下述结构 ：
表1： X1 结构 代码 X1a X1b X1c X1d 结构 CN H N3 CH2OH
表2： X2 结构
表3： X3 结构 代码 X3a X3b 代码 X3c 结构 -N ＝ -CH ＝ 结构 -CF ＝
表4： B 结构表6： 式 IV 的化合物的列表
X1a.X2b.X3a.B1、 X1a.X2b.X3a.B2、 X1a.X2b.X3a.B3、 X1a.X2b.X3a.B4、 X1a.X2b. X3b.B1、 X1a.X2b.X3b.B2、 X1a.X2b.X3b.B3、 X1a.X2b.X3b.B4、 X1a.X2b.X3c.B1、 X1a.X2b. X3c.B2、 X1a.X2b.X3c.B3、 X1a.X2b.X3c.B4、 X1a.X2c.X3a.B1、 X1a.X2c.X3a.B2、 X1a.X2c. X3a.B3、 X1a.X2c.X3a.B4、 X1a.X2c.X3b.B1、 X1a.X2c.X3b.B2、 X1a.X2c.X3b.B3、 X1a.X2c. X3b.B4、 X1a.X2c.X3c.B1、 X1a.X2c.X3c.B2、 X1a.X2c.X3c.B3、 X1a.X2c.X3c.B4、 X1b.X2b. X3a.B1、 X1b.X2b.X3a.B2、 X1b.X2b.X3a.B3、 X1b.X2b.X3a.B4、 X1b.X2b.X3b.B1、 X1b.X2b. X3b.B2、 X1b.X2b.X3b.B3、 X1b.X2b.X3b.B4、 X1b.X2b.X3c.B1、 X1b.X2b.X3c.B2、 X1b.X2b. X3c.B3、 X1b.X2b.X3c.B4、 X1b.X2c.X3a.B1、 X1b.X2c.X3a.B2、 X1b.X2c.X3a.B3、 X1b.X2c. X3a.B4、 X1b.X2c.X3b.B1、 X1b.X2c.X3b.B2、 X1b.X2c.X3b.B3、 X1b.X2c.X3b.B4、 X1b.X2c. X3c.B1、 X1b.X2c.X3c.B2、 X1b.X2c.X3c.B3、 X1b.X2c.X3c.B4、 X1c.X2a.X3a.B1、 X1c.X2a. X3a.B2、 X1c.X2a.X3a.B3、 X1c.X2a.X3a.B4、 X1c.X2a.X3b.B1、 X1c.X2a.X3b.B2、 X1c.X2a. X3b.B3、 X1c.X2a.X3b.B4、 X1c.X2a.X3c.B1、 X1c.X2a.X3c.B2、 X1c.X2a.X3c.B3、 X1c.X2a.
X3c.B4、 X1c.X2b.X3a.B1、 X1c.X2b.X3a.B2、 X1c.X2b.X3a.B3、 X1c.X2b.X3a.B4、 X1c.X2b. X3b.B1、 X1c.X2b.X3b.B2、 X1c.X2b.X3b.B3、 X1c.X2b.X3b.B4、 X1c.X2b.X3c.B1、 X1c.X2b. X3c.B2、 X1c.X2b.X3c.B3、 X1c.X2b.X3c.B4、 X1c.X2c.X3a.B1、 X1c.X2c.X3a.B2、 X1c.X2c. X3a.B3、 X1c.X2c.X3a.B4、 X1c.X2c.X3b.B1、 X1c.X2c.X3b.B2、 X1c.X2c.X3b.B3、 X1c.X2c. X3b.B4、 X1c.X2c.X3c.B1、 X1c.X2c.X3c.B2、 X1c.X2c.X3c.B3、 X1c.X2c.X3c.B4、 X1d.X2a. X3a.B1、 X1d.X2a.X3a.B2、 X1d.X2a.X3a.B3、 X1d.X2a.X3a.B4、 X1d.X2a.X3b.B1、 X1d.X2a. X3b.B2、 X1d.X2a.X3b.B3、 X1d.X2a.X3b.B4、 X1d.X2a.X3c.B1、 X1d.X2a.X3c.B2、 X1d.X2a. X3c.B3、 X1d.X2a.X3c.B4。
在另一个实施方案中， 式 I-III 是选自下述的化合物
或其药学上可接受的盐。
定义除非另有说明， 本文使用的术语和短语具有如下含义 ：
当在本文中使用商品名时， 申请人意在独立地包括商品名产品和该商品名产品的 活性药物组分。
本文使用的 “本发明的化合物” 或 “式 I 的化合物” 是指式 I 的化合物或其药学上 可接受的盐。类似地， 就可分离的中间体而言， 短语 “式 ( 编号 ) 的化合物” 是指该式的化 合物及其药学上可接受到盐。
“烷基” 为含正、 仲、 叔或环碳原子的烃。例如， 烷基可以具有 1-20 个碳原子 ( 即 C1-C20 烷 基 )、 1-8 个 碳 原 子 ( 即， C1-C8 烷 基 ) 或 1-6 个 碳 原 子 ( 即 C1-C6 烷 基 )。 合 适 的烷基的实例包括、 但不限于， 甲基 (Me， -CH3)、 乙基 (Et， -CH2CH3)、 1- 丙基 (n-Pr， n- 丙 基， -CH2CH2CH3)、 2- 丙基 (i-Pr， i- 丙基， -CH(CH3)2)、 1- 丁基 (n-Bu， n- 丁基， -CH2CH2CH2CH3)、 2- 甲基 -1- 丙基 (i-Bu， i- 丁基， -CH2CH(CH3)2)、 2- 丁基 (s-Bu， s- 丁基， -CH(CH3)CH2CH3)、 2- 甲 基 -2- 丙 基 (t-Bu， t- 丁 基， -C(CH3)3)、 1- 戊 基 (n- 戊 基， -CH2CH2CH2CH2CH3)、 2- 戊 基 (-CH(CH3)CH2CH2CH3)、 3- 戊 基 (-CH(CH2CH3)2)、 2- 甲 基 -2- 丁 基 (-C(CH3)2CH2CH3)、 3- 甲 基 -2- 丁 基 (-CH(CH3)CH(CH3)2)、 3- 甲 基 -1- 丁 基 (-CH2CH2CH(CH3)2)、 2- 甲 基 -1- 丁 基 (-CH2CH(CH3)CH2CH3)、 1- 己 基 (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、 2- 己 基 (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、 3- 己 基 (-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、 2- 甲 基 -2- 戊 基 (-C(CH3)2CH2CH2CH3)、 3- 甲 基 -2- 戊 基 (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、 4- 甲 基 -2- 戊 基 (-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、 3- 甲 基 -3- 戊 基 (-C(CH3)(CH2CH3)2)、 2- 甲 基 -3- 戊 基 (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、 2， 3- 二 甲 基 -2- 丁 基 (-C(CH3)2CH(CH3)2)、 3， 3- 二甲基 -2- 丁基 (-CH(CH3)C(CH3)3 和辛基 (-(CH2)7CH3)。
“烷氧基” 是指具有式 -O- 烷基的基团， 其中如上述定义的烷基通过氧原子与母体 分子连接。烷氧基的烷基部分可以具有 1-20 个碳原子 ( 即 C1-C20 烷氧基 )， 1-12 个碳原子 ( 即 C1-C12 烷氧基 ) 或 1-6 个碳原子 ( 即 C1-C6 烷氧基 )。合适的烷氧基的实例包括、 但不限 于， 甲氧基 (-O-CH3 或 -OMe)， 乙氧基 (-OCH2CH3 或 -OEt)， t- 丁氧基 (-O-C(CH3)3 或 -OtBu) 等。
“卤代烷基” 为如上述定义的烷基， 其中烷基的一个或多个氢原子被卤原子取代。 卤代烷基的烷基部分可以具有 1-20 个碳原子 ( 即 C1-C20 卤代烷基 )， 1-12 个碳原子 ( 即 C1-C12 卤代烷基 ) 或 1-6 个碳原子 ( 即 C1-C6 烷基 )。合适的卤代烷基的实例包括、 但不限 于， -CF3、 -CHF2、 -CFH2、 -CH2CF3 等。
“链烯基” 是含正、 仲、 叔或环碳原子的烃， 其具有至少一个不饱和位置， 即碳 - 碳 2 sp 双键。例如， 链烯基可以具有 2-20 个碳原子 ( 即， C2-C20 链烯基 )、 2-8 个碳原子 ( 即， C2-C8 链烯基 ) 或 2-6 个碳原子 ( 即， C2-C6 链烯基 )。合适的链烯基的实例包括、 但不限于， 乙烯基 (-CH ＝ CH2)、 烯丙基 (-CH2CH ＝ CH2)、 环戊烯基 (-C5H7) 和 5- 己烯基 (-CH2CH2CH2CH2CH ＝ CH2)。
“炔基” 是含正、 仲、 叔或环碳原子的烃， 其具有至少一个不饱和位置， 即碳 - 碳 sp 三键。 例如， 炔基可以具有 2-20 个碳原子 ( 即， C2-C20 炔基 )、 2-8 个碳原子 ( 即， C2-C8 炔烃 ) 或 2-6 个碳原子 ( 即， C2-C6 炔基 )。合适的炔基的实例包括、 但不限于， 乙炔基 (-C ≡ CH)、 炔丙基 (-CH2C ≡ CH) 等。
“亚烷基” 是指饱和支链或直链或环状烃基， 其具有 2 个通过从母体烷的同一 个或两个不同碳原子上除去两个氢原子衍生出的一价基团中心。例如， 亚烷基可以具有1-20 个碳原子， 1-10 个碳原子或 1-6 个碳原子。典型的亚烷基包括、 但不限于， 亚甲基 (-CH2-)、 1， 1- 乙基 (-CH(CH3)-)、 1， 2- 乙基 (-CH2CH2-)、 1， 1- 丙基 (-CH(CH2CH3)-)、 1， 2- 丙 基 (-CH2CH(CH3)-)、 1， 3- 丙基 (-CH2CH2CH2-)、 1， 4- 丁基 (-CH2CH2CH2CH2-) 等。
“亚烯基” 是指不饱和支链或直链或环状烃基， 其具有 2 个通过从母体烯的同一个 或两个不同碳原子上除去两个氢原子衍生出的一价基团中心。例如， 亚烯基可以具有 1-20 个碳原子， 1-10 个碳原子或 1-6 个碳原子。典型的亚烯基包括、 但不限于， 1， 2- 乙烯 (-CH ＝ CH-)。
“亚炔基” 是指不饱和支链或直链或环状烃基， 其具有 2 个通过从母体炔的同一个 或两个不同碳原子上除去两个氢原子衍生出的一价基团中心。例如， 亚炔基可以具有 1-20 个碳原子， 1-10 个碳原子或 1-6 个碳原子。典型的亚炔基包括、 但不限于， 乙炔 (-C ≡ C-)， 炔丙基 (-CH2C ≡ C-) 和 4- 戊炔基 (-CH2CH2CH2C ≡ C-)。
“氨基” 泛指具有式 -N(X)2 的氮基团， 其可以视作氮的衍生物， 其中每个 “X” 独立地 是 H、 取代的或未取代的烷基、 取代的或未取代的碳环基、 取代的或未取代的杂环基等。 氮的 3 杂化约是 sp 。 氨基的非限制类型包括 -NH2、 -N( 烷基 )2、 -NH( 烷基 )、 -N( 碳环基 )2、 -NH( 碳 环基 )、 -N( 杂环基 )2、 -NH( 杂环基 )、 -N( 芳基 )2、 -NH( 芳基 )、 -N( 烷基 )( 芳基 )、 -N( 烷 基 )( 杂环基 )、 -N( 碳环基 )( 杂环基 )、 -N( 芳基 )( 杂芳基 )、 -N( 烷基 )( 杂芳基 ) 等。术 语 “烷基氨基” 是指被至少一个烷基取代的氨基。 氨基的非限制性实例包括 -NH2、 -NH(CH3)、 N(CH3)2、 -NH(CH2CH3)、 -N(CH2CH3)2、 -NH( 苯基 )、 -N( 苯基 )2、 -NH( 苄基 )、 -N( 苄基 )2 等。 取代 的烷基氨基泛指如上定义的烷基氨基， 其中至少一个本文定义的取代的烷基结合氨基氮原 子。 取代的烷基氨基的非限制性实例包括 -NH( 亚烷基 -C(O)-OH)、 -NH( 亚烷基 -C(O)-O- 烷 基 )、 -N( 亚烷基 -C(O)-OH)2、 -N( 亚烷基 -C(O)-O- 烷基 )2 等。
“芳基” 是指通过从母体芳族环系的单一碳原子上除去一个氢原子衍生的芳族烃 基。例如， 芳基可以具有 6-20 个碳原子， 6-14 个碳原子或 6-12 个碳原子。典型的芳基包 括、 但不限于， 衍生自苯 ( 例如苯基 )、 取代的苯、 萘、 蒽、 联苯等的基团。
“芳烷基” 是指这样的无环烷基， 其中与碳原子 ( 一般为末端或 sp3 碳原子 ) 键合 的氢原子之一被芳基代替。典型的芳烷基包括、 但不限于， 苄基， 2- 苯乙 -1- 基， 萘基甲基， 2- 萘乙 -1- 基， 萘并苄基， 2- 萘并苯乙 -1- 基等。芳烷基可以包含 6-20 个碳原子， 例如烷 基部分为 1-6 个碳原子， 且芳基部分为 6-14 个碳原子。
“芳基链烯基” 是指这样的无环链烯基， 其中与碳原子 ( 一般为末端或 sp3 碳原子， 而且还有 sp2 碳原子 ) 键合的氢原子之一被芳基代替。芳基链烯基的芳基部分可以包括， 例如， 本文披露的任意芳基， 且芳基链烯基的链烯基部分可以包括， 例如， 本文披露的任意 链烯基。芳基链烯基可以包含 6-20 个碳原子， 例如链烯基部分为 1-6 个碳原子， 且芳基部 分为 6-14 个碳原子。
“芳基炔基” 是指这样的无环炔基， 其中与碳原子 ( 一般为末端或 sp3 碳原子， 而且 还有 sp 碳原子 ) 键合的氢原子之一被芳基代替。芳基炔基的芳基部分可以包括， 例如， 本 文披露的任意芳基， 且芳基炔基的炔基部分可以包括， 例如， 本文披露的任意炔基。芳基炔 基可以包含 6-20 个碳原子， 例如炔基部分为 1-6 个碳原子， 且芳基部分为 6-14 个碳原子。
涉及烷基、 亚烷基、 芳基、 芳烷基、 烷氧基、 杂环基、 杂芳基、 碳环基等的术语 “取代 的” ， 例如， “取代的烷基” ， “取代的亚烷基” ， “取代的芳基” ， “取代的芳烷基” ， “取代的杂环基” 和 “取代的碳环基” 分别是指这样的烷基、 亚烷基、 芳基、 芳烷基、 杂环基、 碳环基， 其中一 个或多个氢原子各自独立地被非氢取代基代替。 典型的取代基包括、 但不限于， -X、 -Rb、 -O-、 ＝ O、 -ORb、 -SRb、 -S-、 -NRb2、 -N+Rb3、 ＝ NRb、 -CX3、 -CN、 -OCN、 -SCN、 -N ＝ C ＝ O、 -NCS、 -NO、 -NO2、 b b b ＝ N2、 -N3、 -NHC( ＝ O)R 、 -OC( ＝ O)R 、 -NHC( ＝ O)NR 2、 -S( ＝ O)2-、 -S( ＝ O)2OH、 -S( ＝ b b b b b b O)2R 、 -OS( ＝ O)2OR 、 -S( ＝ O)2NR 2、 -S( ＝ O)R 、 -OP( ＝ O)(OR )2、 -P( ＝ O)(OR )2、 -P( ＝ b b b b O)(O )2、 -P( ＝ O)(OH)2、 -P(O)(OR )(O )、 -C( ＝ O)R 、 -C( ＝ O)X、 -C(S)R 、 -C(O)OR 、 -C(O) b b b b b b b O、 -C(S)OR 、 -C(O)SR 、 -C(S)SR 、 -C(O)NR 2、 -C(S)NR 2、 -C( ＝ NR )NR 2， 其中每个 X 独立地 b 是卤素 ： F、 Cl、 Br 或 I ； 且每个 R 独立地是 H、 烷基、 芳基、 芳烷基、 杂环或保护基或前药部分。 亚烷基、 亚烯基和亚炔基也可以类似地被取代。除非另有说明， 当术语 “取代的” 与诸如芳 烷基等基团结合使用时， 它具有 2 个或多个能取代的部分， 取代基可以结合至芳基部分、 烷 基部分或二者。
本文使用的术语 “前体药物” 是指任意的化合物， 其在对生物系统给药时， 作为自 发化学反应、 酶催化化学反应、 光解和 / 或代谢化学反应的结果， 它生成药物物质， 即活性 成分。前体药物由此是治疗活性化合物的共价修饰的类似物或潜伏形式。
本领域技术人员会认识到， 应选择式 I-III 化合物的取代基和其它部分， 以便提 供足以稳定提供药学有用化合物的化合物， 所述药学有用的化合物可以被配制成可接受的 稳定药物组合物。预期具有这类稳定性的式 I-III 的化合物属于本发明的范围。
“杂烷基” 是指这样的烷基， 其中一个或多个碳原子被杂原子 ( 例如 O， N 或 S) 代替。 例如， 如果与母体分子连接的烷基的碳原子被杂原子 ( 例如 O， N 或 S) 代替， 那么所得杂烷 基分别为烷氧基 ( 例如 -OCH3 等 )， 胺 ( 例如 -NHCH3， -N(CH3)2 等 ) 或硫代烷基 ( 例如 -SCH3)。 如果不与母体分子连接的烷基的非末端碳原子被杂原子 ( 例如 O， N 或 S) 代替， 那么所得杂 烷基分别为烷基醚 ( 例如 -CH2CH2-O-CH3 等 )， 烷基胺 ( 例如 -CH2NHCH3， -CH2N(CH3)2 等 ) 或 硫代烷基醚 ( 例如 -CH2-S-CH3)。如果烷基的末端碳原子被杂原子 ( 例如 O， N 或 S) 代替， 那么所得杂烷基分别为羟基烷基 ( 例如 -CH2CH2-OH)， 氨基烷基 ( 例如 -CH2NH2) 或烷基硫醇 ( 例如 -CH2CH2-SH)。杂烷基可以具有例如， 1-20 个碳原子， 1-10 个碳原子或 1-6 个碳原子。 C1-C6 杂烷基是指具有 1-6 个碳原子的杂烷基。
本文使用的 “杂环” 或 “杂环基” 包括， 作为实例且不作为限制， 描述在下列文献 中的那些杂环 ： Paquette， Leo A. ； Principles of ModernHeterocyclic Chemistry(W. A.Benjamin， New York， 1968)， 特 别 是 第 1， 3， 4， 6， 7 和 9 章； The Chemistry of Heterocyclic Compounds， A Series of Monographs” (John Wiley&Sons， New York， 1950 topresent)， 特别是第 13， 14， 16， 19 和 28 卷 ； 和 J.Am.Chem.Soc.(1960)82 ： 5566。在本发 明的一个具体的实施方案中， “杂环” 包括如本文定义的 “碳环” ， 其中一个或多个 ( 例如 1， 2， 3 或 4) 碳原子已经被杂原子 ( 例如 O， N 或 S) 代替。术语 “杂环” 或 “杂环基” 包括饱和 环、 部分不饱和环和芳族环 ( 即杂芳族环 )。 取代的杂环基包括， 例如， 被本文披露的任意取 代基 ( 包括羰基 ) 取代的杂环。羰基取代的杂环基的非限制性实例为 ：
杂环的实例包括， 作为实例且不作为限制， 吡啶基、 二羟基吡啶基、 四氢吡啶基 ( 哌啶基 )、 噻唑基、 四氢噻吩基、 硫氧化的四氢噻吩基、 嘧啶基、 呋喃基、 噻吩基、 吡咯基、 吡 唑基、 咪唑基、 四唑基、 苯并呋喃基、 噻萘基、 吲哚基、 indolenyl、 喹啉基、 异喹啉基、 苯并咪 唑基、 哌啶基、 4- 哌啶酮基、 吡咯烷基、 2- 吡咯烷酮基、 吡咯啉基、 四氢呋喃基、 四氢喹啉基、 四氢异喹啉基、 十氢喹啉基、 八氢异喹啉基、 吖辛基 (azocinyl)、 三嗪基、 6H-1， 2， 5- 噻二嗪 基、 2H， 6H-1， 5， 2- 二噻嗪基、 噻吩基、 噻蒽基、 吡喃基、 异苯并呋喃基、 色烯基、 呫吨基、 酚黄
素基 (phenoxathinyl)、 2H- 吡咯基、 异噻唑基、 异唑基、 吡嗪基、 哒嗪基、 吲嗪基、 异吲哚基、 3H- 吲哚基、 1H- 吲唑基、 嘌呤基、 4H- 喹嗪基、 酞嗪基、 萘啶基、 喹喔啉基、 喹唑啉基、 噌啉 基、 蝶啶基、 4aH- 咔唑基、 咔唑基、 β- 咔啉基、 菲啶基、 吖啶基、 嘧啶基、 菲咯啉基、 吩嗪基、 吩噻嗪基、 呋咱基、 吩 嗪基、 异苯并二氢吡喃基、 苯并二氢吡喃基、 咪唑烷基、 咪唑啉基、 唑啉基、 靛红酰基 (isatinoyl) 和双 - 四氢呋喃 苯 吡唑烷基、 吡唑啉基、 哌嗪基、 二氢吲哚基、 异二氢吲哚基、 奎宁环基、 吗啉基、 唑烷基、 并三唑基、 苯并异唑基、 羟吲哚基、 苯并 基：
作为实例且不作为限制， 碳键合的杂环键合在吡啶的 2、 3、 4、 5 或 6 位， 哒嗪的 3、 4、 5 或 6 位， 嘧啶的 2、 4、 5 或 6 位， 吡嗪的 2、 3、 5 或 6 位， 呋喃、 四氢呋喃、 硫代呋喃、 噻吩、 吡
咯或四氢吡咯的 2、 3、 4 或 5 位， 唑、 咪唑或噻唑的 2、 4 或 5 位， 异唑、 吡唑或异噻唑的3、 4 或 5 位， 氮丙啶的 2 或 3 位， 氮杂环丁烷的 2、 3 或 4 位， 喹啉的 2、 3、 4、 5、 6、 7 或 8 位或 异喹啉的 1、 3、 4、 5、 6、 7 或 8 位。更一般地， 碳键合的杂环包括 2- 吡啶基、 3- 吡啶基、 4- 吡 啶基、 5- 吡啶基、 6- 吡啶基、 3- 哒嗪基、 4- 哒嗪基、 5- 哒嗪基、 6- 哒嗪基、 2- 嘧啶基、 4- 嘧啶 基、 5- 嘧啶基、 6- 嘧啶基、 2- 吡嗪基、 3- 吡嗪基、 5- 吡嗪基、 6- 吡嗪基、 2- 噻唑基、 4- 噻唑基 或 5- 噻唑基。 作为实例且不作为限制， 氮键合的杂环键合在氮丙啶、 氮杂环丁烷、 吡咯、 吡咯烷、 2- 吡咯啉、 3- 吡咯啉、 咪唑、 咪唑烷、 2- 咪唑啉、 3- 咪唑啉、 吡唑、 吡唑啉、 2- 吡唑啉、 3- 吡唑 啉、 哌啶、 哌嗪、 吲哚、 二氢吲哚、 1H- 吲唑的 1 位， 异吲哚或异二氢吲哚的 2 位， 吗啉的 4 位和 咔唑或 β- 咔啉的 9 位。更一般地， 氮键合的杂环包括 1- 吖啶基 (1-aziridyl)、 1- 氮杂环 丁二烯基 (azetedyl)、 1- 吡咯基、 1- 咪唑基、 1- 吡唑基和 1- 哌啶基。
“杂环基烷基” 是指这样的无环烷基， 其中与碳原子 ( 一般为末端或 sp3 碳原子 ) 键合的氢原子之一被杂环基 ( 即杂环基 - 亚烷基 - 部分 ) 代替。典型的杂环基烷基包括、 但不限于， 杂环基 -CH2-、 2-( 杂环基 ) 乙 -1- 基等， 其中 “杂环基” 部分包括上述任意的杂环 基、 包括描述在 Principles of Modern Heterocyclic Chemistry 中的那些。本领域技术
人员还可以理解， 杂环基可以通过碳 - 碳键或碳 - 杂原子键与杂环基烷基的烷基部分连接， 只要所得基团为化学稳定的。杂环基烷基包含 6-20 个碳原子， 例如， 芳烷基的烷基部分为 1-6 个碳原子， 且杂环基部分为 5-14 个碳原子。 杂环基烷基的实例包括， 作为实例且不作为 限制， 5- 元含硫、 氧和 / 或氮的杂环， 诸如噻唑基甲基、 2- 噻唑基乙 -1- 基、 咪唑基甲基、 唑基甲基、 噻二唑基甲基等、 6- 元含硫、 氧和 / 或氮的杂环、 诸如哌啶基甲基、 哌嗪基甲基、 吗啉基甲基、 吡啶基甲基、 吡啶基甲基 (pyridizylmethyl)、 嘧啶基甲基、 吡嗪基甲基等。
“杂环基烯基” 是指这样的无环链烯基， 其中与碳原子 ( 一般为末端或 sp3 碳原子， 还有 sp2 碳原子 ) 键合的氢原子之一被杂环基 ( 即杂环基 - 亚链烯基 - 部分 ) 代替。杂 环基链烯基的杂环基部分包括本文所述的任意杂环基， 包括描述在 Principles of Modern Heterocyclic Chemistry 中的那些 ； 杂环基链烯基的链烯基部分包括本文披露的任意链烯 基。本领域技术人员还可以理解， 杂环基可以通过碳 - 碳键或碳 - 杂原子键与杂环基链烯 基的链烯基部分连接， 只要所得基团为化学稳定的。杂环基链烯基包含 6-20 个碳原子， 例 如杂环基链烯基的链烯基部分为 1-6 个碳原子， 且杂环基部分为 5-14 个碳原子。
“杂环基炔基” 是指这样的无环炔基， 其中与碳原子 ( 一般为末端或 sp3 碳原子， 还 有 sp 碳原子 ) 键合的氢原子之一被杂环基 ( 即杂环基 - 亚炔基 - 部分 ) 代替。 杂环基炔基的 杂环基部分包括本文所述的任意杂环基， 包括描述在 Principles of Modern Heterocyclic Chemistry 中的那些， 且杂环基炔基的炔基部分包括本文披露的任意炔基。本领域技术人 员还可以理解， 杂环基可以通过碳 - 碳键或碳 - 杂原子键与杂环基炔基的炔基部分连接， 只 要所得基团为化学稳定的。杂环基炔基包含 6-20 个碳原子， 例如杂环基炔基的炔基部分为 1-6 个碳原子， 且杂环基部分为 5-14 个碳原子。
“杂芳基” 是指在环中具有至少一个杂原子的芳族杂环基。可以在芳族环上包含的 合适杂原子的非限制性实例包括氧、 硫和氮。杂芳基环的非限制性实例包括在 “杂环基” 定 义中所列的所有那些， 包括吡啶基、 吡咯基、 唑基、 吲哚基、 异吲哚基、 嘌呤基、 呋喃基、 噻 吩基、 苯并呋喃基、 苯并噻吩基、 咔唑基、 咪唑基、 噻唑基、 异 啉基、 异喹啉基、 哒嗪基、 嘧啶基、 吡唑基等。
唑基、 吡唑基、 异噻唑基、 喹“碳环” 或 “碳环基” 是指饱和的 ( 即环烷基 )、 部分不饱和的 ( 例如环烯基， 环烷二 烯基等 ) 或芳族环， 其中具有 3-7 个碳原子的作为单环， 具有 7-12 个碳原子的作为双环， 和 具有高达约 20 个碳原子的作为多环。单环碳环具有 3-6 个环原子， 更一般的是 5 或 6 个环 原子。双环碳环具有 7-12 个环原子， 例如排列为双环 [4， 5]、 [5， 5]、 [5， 6] 或 [6， 6] 系统 ； 或 9 或 10 个环原子， 排列为双环 [5， 6] 或 [6， 6] 系统或螺 - 稠合环。单环碳环的非限制性 实例包括环丙基， 环丁基， 环戊基， 1- 环戊 -1- 烯基， 1- 环戊 -2- 烯基， 1- 环戊 -3- 烯基， 环 己基， 1- 环己 -1- 烯基， 1- 环己 -2- 烯基， 1- 环己 -3- 烯基和苯基。双环碳环的非限制性实 例包括萘基。
“碳环基烷基” 是指这样的无环烷基， 其中与碳原子结合的氢原子之一被本文所述 的碳环基代替。碳环基烷基的典型的、 但非限制性的实例包括环丙基甲基、 环丙基乙基、 环 丁基甲基、 环戊基甲基和环己基甲基。
“芳基杂烷基” 是指如本文定义的杂烷基， 其中氢原子 ( 可以与碳原子或杂原子 连接 ) 已经被如本文定义的芳基代替。芳基可以与杂烷基的碳原子或杂烷基的杂原子键 合， 只要所得芳基杂烷基提供化学上稳定的部分。例如， 芳基杂烷基可以具有通式 - 亚烷基 -O- 芳基、 - 亚烷基 -O- 亚烷基 - 芳基、 - 亚烷基 -NH- 芳基、 - 亚烷基 -NH- 亚烷基 - 芳 基、 - 亚烷基 -S- 芳基、 - 亚烷基 -S- 亚烷基 - 芳基等。此外， 上述通式中的任意亚烷基部分 可以进一步被本文定义或例举的任意取代基取代。
“杂芳烷基” 是指如本文定义的烷基， 其中氢原子已经被如本文定义的杂芳基代 替。杂芳烷基的非限制性实例包括 -CH2- 吡啶基、 -CH2- 吡咯基、 -CH2噻吩基、 -CH2- 咔唑基、 -CH2- 咪唑基、 -CH2- 噻唑基、 -CH2- 异 唑基、 -CH2- 吲哚 基、 -CH2- 异吲哚基、 -CH2- 嘌呤基、 -CH2- 呋喃基、 -CH2- 噻吩基、 -CH2- 苯并呋喃基、 -CH2- 苯并 唑基、 -CH2- 吡唑基、 -CH2- 异 唑基、 -CH(CH3)- 吲 -CH2- 异喹啉基、 -CH2- 哒嗪基 (pyridazyl)、 -CH2- 嘧啶基、 -CH2- 吡 噻唑基、 -CH2- 喹啉基、 嗪基 (pyrazyl)、 -CH(CH3)- 吡啶基、 -CH(CH3)- 吡咯基、 -CH(CH3)-CH(CH3)- 嘌 呤 基、 -CH(CH3)- 呋 喃 基、 -CH(CH3)- 噻 吩 哚 基、 -CH(CH3)- 异 吲 哚 基、 基、 -CH(CH3)- 苯 并 呋 喃 基、 -CH(CH3)- 苯 并 噻 吩 基、 -CH(CH3)- 咔 唑 基、 -CH(CH3)- 咪 -CH(CH3)- 异 唑 基、 -CH(CH3)- 噻 唑 基、 唑 基、 -CH(CH3)- 吡 唑 基、 -CH(CH3)- 异 噻 唑 基、 -CH(CH3)- 喹啉基、 -CH(CH3)- 异喹啉基、 -CH(CH3)- 哒嗪基 (pyridazyl)、 -CH(CH3)- 嘧 啶基、 -CH(CH3)- 吡嗪基 (pyrazyl) 等。
涉及式 I-III 化合物的具体部分的术语 “任选地取代的” ( 例如任选地取代的芳 基 ) 是指这样的部分， 其中所有取代基是氢， 或其中该部分的一个或多个氢可以被取代基 ( 例如在 “取代的” 定义下列出的那些 ) 代替。
涉及式 I-III 化合物的具体部分的术语 “任选地替换的” ( 例如， 所述 (C1-C8) 烷基 a 的碳原子可以任选地被 -O-、 -S- 或 -NR - 替换 ) 是指， (C1-C8) 烷基的一个或多个亚甲基可 以被 0、 1、 2 或更多个指定的基团 ( 例如， -O-、 -S- 或 -NRa-) 替换。
涉及烷基、 链烯基、 炔基、 亚烷基、 亚烯基或亚炔基部分的术语 “非末端碳原子” 是 指所述部分的这样的碳原子， 其插入所述部分的第一个碳原子和所述部分的最后一个碳 原子之间。因此， 作为实例且不作为限制， 在烷基部分 -CH2(C ＊ )H2(C ＊ )H2CH3 或亚烷基部 分 -CH2(C ＊ )H2(C ＊ )H2CH2- 中， C ＊原子视作非末端碳原子。
某些 Y 和 Y1 供选方案是氮氧化物， 例如 +N(O)(R) 或 +N(O)(OR)。 这些氮氧化物 ( 如 这里显示的， 结合碳原子 ) 也可以分别由电荷分离的基团例如 表示， 且就描述本发明目的而言， 意在与前述表示等效。
“连接物 (linker)” 或 “连接基 (link)” 是指包含共价键或原子链的化学部分。连 接物包括烷氧基 ( 例如， 聚亚乙基氧， PEG， 聚亚甲基氧 ) 和烷氨基 ( 例如， 聚亚乙基氨基， TM Jeffamine ) 的重复单位 ； 和二酸酯和酰胺， 包括琥珀酸酯、 琥珀酰胺、 二羟乙酸酯、 丙二酸 酯和己酰胺。
术语例如 “氧 - 连接的” 、 “氮 - 连接的” 、 “碳 - 连接的” 、 “硫 - 连接的” 或 “磷 - 连 接的” 是指， 如果通过使用一个部分中的超过一类的原子可以形成 2 个部分之间的键， 则在 所述部分之间形成的键通过指定的原子。例如， 氮 - 连接的氨基酸通过氨基酸的氮原子键 合， 而不是通过氨基酸的氧或碳原子。
除非另有说明， 本发明的化合物的碳原子意在具有 4 个化合价。在有些其中碳原子不具有足够数目的结合变量来生成 4 个化合价的化学结构表示中， 提供 4 个化合价所需 要的剩余碳取代基应当假定为氢。
例如 ，具有与相同的含义。“保护基” 是指掩蔽或改变官能团的性质或化合物整体的性质的化合物部分。保 护基的化学子结构相差很大。保护基的一个功能是， 用作合成母体药物的中间体。化学 保护基和保护 / 去保护的策略是本领域熟知的。参见 ： “Protective Groups in Organic Chemistry” ， Theodora W.Greene(John Wiley & Sons、 Inc.， New York， 1991。保护基经常 用于掩蔽某些官能团的反应性， 辅助希望的化学反应的功效， 例如以有序的和有计划的方 式产生和断裂化学键。除了受保护的官能团的反应性以外， 化合物官能团的保护会改变其 它物理性质， 例如极性、 亲脂性 ( 疏水性 ) 和通过普通分析工具可以测量的其它性质。化学 上受保护的中间体本身可以是生物学上有活性的或无活性的。
受保护的化合物也可以表现出改变的， 且在有些情况下优化的体外和体内性质， 例如穿过细胞膜， 和对酶降解或扣留的抗性。 在该作用中， 具有预期疗效的受保护的化合物 可以称作前药。 保护基的另一个功能是， 将母体药物转化成前药， 由此前药在体内转化后释 放出母体药物。因为有活性的前药可以比母体药物更有效地被吸收， 前药可以具有比母体 药物更大的体内效力。在体外 ( 在化学中间体的情况下 ) 或在体内 ( 在前药的情况下 ) 去 除保护基。利用化学中间体， 在去保护后得到的产物 ( 例如醇 ) 是生理上可接受的并不特 别重要， 尽管通常更希望这样， 如果产物是药理学上无害的。
“前药部分” 是指， 在代谢过程中， 全身地， 在细胞内， 通过水解、 酶切割， 或通过 一些其它过程， 从有活性的抑制性化合物分离出的不稳定的官能团 (Bundgaard， Hans， Textbook of Drug Design andDevelopment(1991) 中的 “Design and Application of Prodrugs” ， P.Krogsgaard-Larsen 和 H.Bundgaard， Eds.Harwood AcademicPublishers、
113-191 页 )。能对本发明的膦酸酯前药化合物产生酶激活机制的酶包括、 但不限于， 酰胺 酶， 酯酶， 微生物酶， 磷脂酶， 胆碱酯酶和磷酸酶 (phosphases)。 前药部分可以用于增强溶解 度、 吸收和亲脂性， 以优化药物递送、 生物利用度和功效。
前药部分可以包括有活性的代谢物或药物本身。
示例性的前药部分包括水解敏感的或不稳定的酰氧基甲基酯 -CH2OC( ＝ O)R30 和 酰氧基甲基碳酸酯 -CH2OC( ＝ O)OR30， 其中 R30 是 C1-C6 烷基、 C1-C6 取代的烷基、 C6-C20 芳基或 C6-C20 取代的芳基。酰氧基烷基酯用作羧酸的前药策略， 然后应用于磷酸酯和膦酸酯， 参见 Farquhar 等人 (1983)J.Pharm.Sci.72 ： 324 ； 和美国专利号 4816570， 4968788、 5663159 和 5792756。在本发明的某些化合物中， 前药部分是磷酸酯基的一部分。酰氧基烷基酯可以用 于递送磷酸穿过细胞膜， 和增强口服生物利用度。酰氧基烷基酯的一种相近变体是烷氧基 羰基氧基烷基酯 ( 碳酸酯 )， 它也可以作为本发明组合的化合物中的前药部分增强口服生 物利用度。 一种示例性的酰氧基甲基酯是特戊酰基氧基甲氧基 (POM)-CH2OC( ＝ O)C(CH3)3。 一种示例性的酰氧基甲基碳酸酯前药部分是特戊酰氧基甲基碳酸酯 (POC)-CH2OC( ＝ O) OC(CH3)3。
磷酸酯基可以是磷酸酯前药部分。前药部分可以对水解敏感， 例如， 但不限于， 包 含特戊酰氧基甲基碳酸酯 (POC) 或 POM 基团的那些。或者， 前药部分可以对酶促切割敏感， 例如乳酸酯或膦酰胺酯 (phosphonamidate)- 酯基团。
据报道， 含磷基团的芳基酯， 尤其是苯基酯会增强口服生物利用度 (DeLambert 等人 (1994)J.Med.Chem.37 ： 498)。也已经描述了含有在磷酸酯邻位的羧酸酯的苯基酯 (Khamnei 和 Torrence， (1996)J.Med.Chem.39 ： 4109-4115)。据报道， 苄基酯会产生母体膦 酸。在有些情况下， 在邻位或对位的取代基可以加速水解。通过诸如酯酶、 氧化酶等酶的作 用， 具有酰化的苯酚或烷基化的苯酚的苄基类似物可以产生酚类化合物， 其又经历在苄基 的 C-O 键处的切割， 产生磷酸和醌甲基化物中间体。这类前药的实例描述在 ： Mitchell 等 人 (1992)J.Chem.Soc.Perkin Trans.I2345 ； Brook 等人 WO 91/19721。已经描述了其它苄 基前药， 其含有与苄基的亚甲基相连的含羧酸酯的基团 (Glazier 等人 WO 91/19721)。 据报 道， 含硫的前药可以用于膦酸酯药物的细胞内递送。这些前酯 (proester) 含有乙硫基， 其 中巯基要么被酰基酯化， 要么与另一个巯基化合， 形成二硫键。去酯化或二硫键的还原， 产 生游离的含巯中间体， 其随后分解成磷酸和环硫化物 (Puech 等人 (1993)Antiviral Res.， 22 ： 155-174 ； Benzaria 等人 (1996)J.Med.Chem.39 ： 4958)。环状膦酸酯也已经被描述为含 磷化合物的前药 (Erion 等人， 美国专利号 6312662)。
应当指出， 本发明包括， 在式 I、 式 II 或式 III 范围内的化合物和其药学上可接受 的盐的所有对映异构体、 非对映异构体和外消旋混合物、 互变异构体、 多晶型物、 假多晶型 物。这些对映异构体和非对映异构体的所有混合物都在本发明的范围内。
式 I-III 化合物和它的药学上可接受的盐可以作为不同的多晶型物或假多晶型 物存在。本文使用的晶体多晶型现象是指晶体化合物以不同晶体结构存在的能力。晶体多 晶型现象可以源自晶体堆积中的差异 ( 堆积多晶型现象 ) 或相同分子的不同构象异构体 之间的堆积差异 ( 构象多晶型现象 )。本文使用的晶体假多晶型现象是指化合物的水合物 或溶剂化物以不同晶体结构存在的能力。 本发明的假多晶型物可以由于晶体堆积中的差异 ( 堆积假多晶型现象 ) 或由于相同分子的不同构象异构体之间的堆积差异 ( 构象假多晶型现象 ) 而存在。本发明包含式 I-III 化合物和它们的药学上可接受的盐的所有多晶型物和 假多晶型物。
式 I-III 化合物和它的药学上可接受的盐也可以作为无定形体存在。本文使用 的无定形体是这样的固体， 其中所述固体中的原子的位置不存在长程有序。当晶体大小是 2 纳米或更小时， 该定义也适用。可以使用包括溶剂在内的添加剂， 建立本发明的无定形形 式。本发明包含式 I-III 化合物和它们的药学上可接受的盐的所有无定形形式。
包含选择的取代基的式 I-III 化合物具有递归度。在该上下文中， “递归取代基” 是指， 取代基可再引用其本身的另一实例。由于这些取代基的递归性质， 理论上， 在任何指 x y y 定的实施方案中可存在大量化合物。例如， R 包含 R 取代基。R 可以是 R。R 可以是 W3。W3 可以是 W4， 且 W4 可以是 R 或包含含有 Ry 的取代基。药物化学领域的普通技术人员懂得， 这 些取代基的总数要受预期化合物的所需性质的合理限制。这些性质包括， 作为实例且不作 为限制， 物理性质例如分子量， 溶解度或 log P， 应用性质例如针对预期目标的活性， 和实践 性质例如易于合成。
作为实例且不作为限制， W3 和 Ry 在某些实施方案中是递归取代基。典型地， 每个 递归取代基可以在给定的实施方案中独立地出现 20、 19、 18、 17、 16、 15、 14、 13、 12、 11、 10、 9、 8、 7、 6、 5、 4、 3、 2、 1 或 0 次。 更典型地， 每个递归取代基可以在给定的实施方案中独立地出现 12 次或更少次。更典型地， 每个递归取代基可以在给定的实施方案中独立地出现 3 次或更 少次。例如， 在给定的实施方案中， W3 出现 0-8 次， Ry 出现 0-6 次。甚至更典型地， 在给定 3 y 的实施方案中， W 出现 0-6 次， R 出现 0-4 次。
递归取代基是本发明的预期方面。 药物化学领域的普通技术人员理解这样的取代 基的多样性。关于递归取代基在本发明的实施方案中的存在程度， 如上所述确定总数。
与数量结合使用的修饰词 “约” 包含所述的值， 且具有上下文指示的含义 ( 例如， 包括与特定数量的测量有关的误差程度 )。
式 I-III 的化合物可以包含磷酸基作为 R7， 其可以是前药部分+ + 其中每个 Y 或 Y1 独立地是 O、 S、 NR、 N(O)(R)、 N(OR)、 N(O)(OR) 或 N-NR2 ； W1 和 W2 一起形 成 -Y3(C(Ry)2)3Y3- ； 或 W1 或 W2 之一与任一个 R3 或 R4 形成 -Y3-， 且 W1 或 W2 中的另一个是式 Ia ； 或 W1 和 W2 各自独立地是式 Ia 的基团 ：
其中 ：+ + 每个 Y2 独立地是键、 O、 CR2、 NR、 N(O)(R)、 N(OR)、 N(O)(OR)、 N-NR2、 S、 S-S、 S(O) 或 S(O)2 ；
每个 Y3 独立地是 O、 S 或 NR ；
M2 是 0、 1或2； y
每 个 R 独 立 地 是 H、 F、 Cl、 Br、 I、 OH、 R、 -C( ＝ Y1)R、 -C( ＝ Y1)OR、 -C( ＝ Y1) N(R)2、 -N(R)2、 -+N(R)3、 -SR、 -S(O)R、 -S(O)2R、 -S(O)(OR)、 -S(O)2(OR)、 -OC( ＝ Y1)R、 -OC( ＝ 1 1 1 1 1 Y )OR、 -OC( ＝ Y )(N(R)2)、 -SC( ＝ Y )R、 -SC( ＝ Y )OR、 -SC( ＝ Y )(N(R)2)、 -N(R)C( ＝ Y1) R、 -N(R)C( ＝ Y1)OR 或 -N(R)C( ＝ Y1)N(R)2、 -SO2NR2、 -CN、 -N3、 -NO2、 -OR、 保护基或 W3 ； 或在 y 同一个碳原子上的 2 个 R 一起形成 3-7 个碳原子的碳环 ；
每个 Rx 独立地是 Ry、 保护基或下式 ：
其中 ：
M1a、 M1c 和 M1d 独立地是 0 或 1 ；
M12c 是 0、 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11 或 12 ；
每个 R 是 H、 卤素、 (C1-C8) 烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代 的链烯基、 (C2-C8) 炔基、 (C2-C8) 取代的炔基、 C6-C20 芳基、 C6-C20 取代的芳基、 C2-C20 杂环、 C2-C20 取代的杂环基、 芳烷基、 取代的芳烷基或保护基 ； 3 4 5 4
W 是W 或W ； W 是 R、 -C(Y1)Ry、 -C(Y1)W5、 -SO2Ry 或 -SO2W5 ； 且 W5 是碳环或杂环， 其 5 y 中 W 独立地被 0-3 个 R 基团取代。
W5 碳环和 W5 杂环可以独立地被 0-3 个 Ry 基团取代。W5 可以是饱和的、 不饱和的或 5 芳族环， 其包含单 - 或二 - 环碳环或杂环。W 可以具有 3-10 个环原子， 例如， 3-7 个环原子。 5 W 环是饱和的 ( 当含有 3 个环原子时 )， 饱和的或单不饱和的 ( 当含有 4 个环原子时 )， 饱 和的或单 - 或二 - 不饱和的 ( 当含有 5 个环原子时 )， 和饱和的、 单 - 或二 - 不饱和的或芳 族的 ( 当含有 6 个环原子时 )。
W5 杂环可以是具有 3-7 个环成员 (2-6 个碳原子和 1-3 个选自 N、 O、 P 和 S 的杂原 子 ) 的单环或具有 7-10 个环成员 (4-9 个碳原子和 1-3 个选自 N、 O、 P 和 S 的杂原子 ) 的双 5 环。W 杂环单环可以具有 3-6 个环原子 (2-5 个碳原子和 1-2 个选自 N、 O 和 S 的杂原子 ) ； 5 或 5 或 6 个环原子 (3-5 个碳原子和 1-2 个选自 N 和 S 的杂原子 )。W 杂环双环具有 7-10 个排列成双环 [4， 5]、 [5， 5]、 [5， 6] 或 [6， 6] 系统的环原子 (6-9 个碳原子和 1-2 个选自 N、 O 和 S 的杂原子 ) ； 或 9-10 个排列成双环 [5， 6] 或 [6， 6] 系统的环原子 (8-9 个碳原子和 5 1-2 选自 N 和 S 的杂原子 )。W 杂环可以通过碳、 氮、 硫或其它原子 ( 通过稳定的共价键 ) 2 结合至 Y 。
W5 杂环包括例如， 吡啶基、 二氢吡啶基异构体、 哌啶、 哒嗪基、 嘧啶基、 吡嗪基、 s- 三
嗪基、 唑基、 咪唑基、 噻唑基、 异5唑基、 吡唑基、 异噻唑基、 呋喃基、 硫代呋喃基、 噻吩基和吡咯基。W 也包括、 但不限于， 下述实例 ：
W5 碳环和杂环可以独立地被 0-3 个如上定义的 R 基团取代。例如， 取代的 W5 碳环包括 ：
取代的苯基碳环的实例包括 ：
式 I-III 化合物的的实施方案包括诸如下述的子结构 ：
其中每个 Y2b 独立地是 O 或 N(R)。在该实施方案的一个优选方面， 每个 Y2b 是 O， 且 x 每个 R 独立地是 ：其中 M12c 是 1、 2 或 3， 且每个 Y2 独立地是键、 O、 CR2 或 S。在该实施方案的另一个 2b x 2b x x 优选方面， 一个 Y -R 是 NH(R)， 且另一个 Y -R 是 O-R ， 其中 Rx 是 ：
其中 M12c 是 2。在该实施方案的另一个优选方面， 每个 Y2b 是 O， 且每个 Rx 独立地是：
其中 M12c 是 2。在该实施方案的另一个优选方面， 每个 Y2b 是 O， 且每个 Rx 独立地是：
其中 M12c 是 1， 且 Y2 是键、 O 或 CR2。 式 I-III 化合物的 的其它实施方案包括诸如下述的子结构 ：
其中每个 Y3 独立地是 O 或 N(R)。在该实施方案的一个优选方面， 每个 Y3 是 O。在 该实施方案的另一个优选方面， 所述子结构是 ：
其中 Ry 是如本文定义的 W5。 的另一个实施方案包括子结构， 其中 W1 或 W2 之
式 I-III 化合物的一与任一个 R3 或 R4 一起形成 -Y3-， 且 W1 或 W2 中的另一个是式 Ia。这样的一个实施方案由 选自下述的式 Ib 化合物表示 ：
在式 Ib 的实施方案的一个优选方面， 每个 Y 和 Y3 是 O。在式 Ib 的实施方案的另 一个优选方面， W1 或 W2 是 Y2b-Rx ； 每个 Y、 Y3 和 Y2b 是 O， 且 Rx 是 ：
其中 M12c 是 1、 2 或 3， 且每个 Y2 独立地是键、 O、 CR2 或 S。在式 Ib 的实施方案的 1 2 2b x 3 2b 另一个优选方面， W 或 W 是 Y -R ； 每个 Y、 Y 和 Y 是 O， 且 Rx 是 ：
其中 M12c 是 2。在式 Ib 的实施方案的另一个优选方面， W1 或 W2 是 Y2b-Rx ； 每个 Y、 3 2b x Y 和 Y 是 O， 且R 是：
其中 M12c 是 1， 且 Y2 是键、 O 或 CR2。 式 I-III 化合物的 的另一个实施方案包括子结构 ：
其中 W5 是碳环， 例如苯基或取代的苯基。在该实施方案的另一个方面， 所述子结构是 ：
其中 Y2b 是 O 或 N(R)， 且所述苯基碳环被 0-3 个 R 基团取代。在所述子结构的该 x 实施方案的另一个方面， R 是：
其中 M12c 是 1、 2 或 3， 且每个 Y2 独立地是键、 O、 CR2 或 S。 式 I-III 的 的另一个实施方案包括子结构 ：
氨基酸和乳酸部分的手性碳可以是 R 或 S 构型或外消旋混合物。
式 I-III 的的另一个实施方案是子结构
其中每个 Y2 独立地是 -O- 或 -NH-。 在该实施方案的另一个优选方面， Ry 是 (C1-C8) 烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 炔基或 (C2-C8) 取 y 代的炔基。 在该实施方案的另一个优选方面， R 是 (C1-C8) 烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取代的链烯基、 (C2-C8) 炔基或 (C2-C8) 取代的炔基 ； 且 R 是 CH3。在该实施 y 方案的另一个优选方面， R 是 (C1-C8) 烷基、 (C1-C8) 取代的烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 取 代的链烯基、 (C2-C8) 炔基或 (C2-C8) 取代的炔基 ； R 是 CH3 ； 且每个 Y2 是 -NH-。在该实施方 案的一个优选方面， W1 和 W2 独立地是氮连接的、 天然存在的氨基酸或天然存在的氨基酸酯。 在该实施方案的另一个优选方面， W1 和 W2 独立地是天然存在的 2- 羟基羧酸或天然存在的 2- 羟基羧酸酯， 其中所述酸或酯通过 2- 羟基连接至 P。
式 I、 式 II 或式 III 的的另一个实施方案是子结构 ：
在该实施方案的一个优选方面， 每个 Rx 独立地是 (C1-C8) 烷基。 在该实施方案的另一个优选方面， 每个 Rx 独立地是 C6-C20 芳基或 C6-C20 取代的芳基。
式 I-III 的的另一个实施方案是
其中 W1 和 W2 独立地选自下面的表 20.1-20.37 和表 30.1 中的式之一。除非另有 说明， 在表 20.1-20.37 中使用的变量 ( 例如， W23、 R21 等 ) 仅属于表 20.1-20.37。
在表 20.1-20.37 中使用的变量具有下面的定义 ：
每个 R21 独立地是 H 或 (C1-C8) 烷基 ；
每个 R22 独立地是 H、 R21、 R23 或 R24， 其中每个 R24 独立地被 0-3 个 R23 取代 ；
每个 R23 独立地是 R23a、 R23b、 R23c 或 R23d， 条件是， 当 R23 结合杂原子时， 则 R23 是 R23c 或 R23d ；
每个 R23a 独立地是 F、 Cl、 Br、 I、 -CN、 N3 或 -NO2 ； 23b 21
每个 R 独立地是 Y ；
每 个 R23c 独 立 地 是 -R2x、 -N(R2x)(R2x)、 -SR2x、 -S(O)R2x、 -S(O)2R2x、 -S(O) 2x 2x 21 2x 21 2x 21 2x 2x (OR )、 -S(O)2(OR )、 -OC( ＝ Y )R 、 -OC( ＝ Y )OR 、 -OC( ＝ Y )(N(R )(R ))、 -SC( ＝ Y21) R2x、 -SC( ＝ Y21)OR2x、 -SC( ＝ Y21)(N(R2x)(R2x))、 -N(R2x)C( ＝ Y21)R2x、 -N(R2x)C( ＝ Y21)OR2x、 或 -N(R2x)C( ＝ Y21)(N(R2x)(R2x)) ；
每个 R23d 独立地是 -C( ＝ Y21)R2x、 -C( ＝ Y21)OR2x 或 -C( ＝ Y21)(N(R2x)(R2x)) ；
每个 R2x 独立地是 H、 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基、 (C2-C8) 炔基、 芳基、 杂芳基 ； 或 2x 2 个 R 与它们二者结合的氮一起形成 3-7 元杂环， 其中所述杂环的任意一个碳原子可以任 21 选地被替换为 -O-、 -S- 或 -NR - ； 且其中每个所述 (C1-C8) 烷基的一个或多个非末端碳原子 可以被任选地替换为 -O-、 -S- 或 -NR21- ；
每个 R24 独立地是 (C1-C8) 烷基、 (C2-C8) 链烯基或 (C2-C8) 炔基 ； 25 24
每个 R 独立地是 R ， 其中每个 R24 被 0-3 个 R23 基团取代 ；
每个 R25a 独立地是 (C1-C8) 亚烷基、 (C2-C8) 亚烯基或 (C2-C8) 亚炔基， 所述 (C1-C8) 23 亚烷基、 (C2-C8) 亚烯基或 (C2-C8) 亚炔基中的任一个被 0-3 个 R 基团取代 ；
每个 W23 独立地是 W24 或 W25 ；
每个 W24 独立地是 R25、 -C( ＝ Y21)R25、 -C( ＝ Y21)W25、 -SO2R25 或 -SO2W25 ；
每个 W25 独立地是碳环或杂环， 其中 W25 独立地被 0-3 个 R22 基团取代 ； 且 21
每个 Y 独立地是 O 或 S。
表 20.1
表 20.2
表 20.3表 20.4
表 20.5
表 20.6
表 20.7
表 20.8
表 20.9
表 20.10
表 20.11
表 20.12
表 20.13
表 20.14
表 20.15
表 20.16
表 20.17
表 20.18
表 20.19
表 20.20
表 20.21
表 20.22
表 20.23表 20.24
表 20.25
表 20.26
表 20.27
表 20.28
表 20.29
表 20.30
表 20.31
表 20.32
表 20.33
表 20.34
表 20.35
表 20.36
表 20.37
表 30.1
式 I-III 化合物的磷酸酯实施方案 作为实例且不作为限制， 式 I-III 的磷酸酯实施方案可以由通式 “MBF” 表示 ：MBF 的每个实施方案描述为取代的核 (Sc)。Sc 描述在下面表 1.1 的式 A-G 中， 其 1 2 中 Sc 是式 I、 式 II 或式 III 的化合物的通式， 且用波浪线指示与 -P(O)Pd Pd 的结合点。
表 1.1
“Sc” 和独立地选自表 30.1 的 Pd1 和 Pd2 的组合， 可以表达为 Sc.Pd1.Pd2 的形式， 其中 Sc 由来自表 1.1 的各个字母 A-G 表示， 且 Pd1 和 Pd2 由来自表 30.1 的各个数字表示。 因而， A.256.256 代表下述化合物 ：
由此， 表 7 列出了式 I-III 的磷酸酯前药的许多具体实例。
表7： MBF 的化合物的列表
A.254.67、 A.254.68、 A.254.69、 A.254.70、 A.254.71、 A.254.258、 A.254.248、 A.254.249、 A.254.250、 A.254.251、 A.254.252、 A.254.253、 B.254.67、 B.254.68、 B.254.69、 B.254.70 、 B.254.71 、 B.254.258 、 B.254.248 、 B.254.249 、 B.254.250 、 B.254.251 、 B.254.252、 B.254.253、 C.254.67、 C.254.68、 C.254.69、 C.254.70、 C.254.71、 C.254.258、 C.254.248 、 C.254.249 、 C.254.250 、 C.254.251 、 C.254.252 、 C.254.253 、 D.254.67 、 D.254.68、 D.254.69、 D.254.70、 D.254.71、 D.254.258、 D.254.248、 D.254.249、 D.254.250、 D.254.251、 D.254.252、 D.254.253、 E.254.67、 E.254.68、 E.254.69、 E.254.70、 E.254.71、 E.254.258 、 E.254.248 、 E.254.249 、 E.254.250 、 E.254.251 、 E.254.252 、 E.254.253 、 F.254.67、 F.254.68、 F.254.69、 F.254.70、 F.254.71、 F.254.258、 F.254.248、 F.254.249、 F.254.250、 F.254.251、 F.254.252、 F.254.253、 G.254.67、 G.254.68、 G.254.69、 G.254.70、 G.254.71 、 G.254.258 、 G.254.248 、 G.254.249 、 G.254.250 、 G.254.251 、 G.254.252 、 G.254.253、 A.255.67、 A.255.68、 A.255.69、 A.255.70、 A.255.71、 A.255.258、 A.255.248、 A.255.249、 A.255.250、 A.255.251、 A.255.252、 A.255.253、 B.255.67、 B.255.68、 B.255.69、 B.255.70 、 B.255.71 、 B.255.258 、 B.255.248 、 B.255.249 、 B.255.250 、 B.255.251 、 B.255.252、 B.255.253、 C.255.67、 C.255.68、 C.255.69、 C.255.70、 C.255.71、 C.255.258、 C.255.248 、 C.255.249 、 C.255.250 、 C.255.251 、 C.255.252 、 C.255.253 、 D.255.67 、 D.255.68、 D.255.69、 D.255.70、 D.255.71、 D.255.258、 D.255.248、 D.255.249、 D.255.250、
D.255.251、 D.255.252、 D.255.253、 E.255.67、 E.255.68、 E.255.69、 E.255.70、 E.255.71、 E.255.258 、 E.255.248 、 E.255.249 、 E.255.250 、 E.255.251 、 E.255.252 、 E.255.253 、 F.255.67、 F.255.68、 F.255.69、 F.255.70、 F.255.71、 F.255.258、 F.255.248、 F.255.249、 F.255.250、 F.255.251、 F.255.252、 F.255.253、 G.255.67、 G.255.68、 G.255.69、 G.255.70、 G.255.71 、 G.255.258 、 G.255.248 、 G.255.249 、 G.255.250 、 G.255.251 、 G.255.252 、 G.255.253、 A.67.67、 A.68.68、 A.69.69、 A.70.70、 A.71.71、 A.258.258、 A.248.248、 A.249.249、 A.250.250、 A.251.251、 A252.252、 A.253.253、 B.67.67、 B.68.68、 B.69.69、 B.70.70、 B.71.71、 B.258.258、 B.248.248、 B.249.249、 B.250.250、 B.251.251、 B252.252、 B.253.253、 C.67.67、 C.68.68、 C.69.69、 C.70.70、 C.71.71、 C.258.258、 C.248.248、 C.249.249、 C.250.250、 C.251.251、 C252.252、 C.253.253、 D.67.67、 D.68.68、 D.69.69、 D.70.70、 D.71.71、 D.258.258、 D.248.248、 D.249.249、 D.250.250、 D.251.251、 D252.252、 D.253.253、 E.67.67、 E.68.68、 E.69.69、 E.70.70、 E.71.71、 E.258.258、 E.248.248、 E.249.249、 E.250.250、 E.251.251、 E252.252、 E.253.253、 F.67.67、 F.68.68、 F.69.69、 F.70.70、 F.71.71、 F.258.258、 F.248.248、 F.249.249、 F.250.250、 F.251.251、 F252.252、 F.253.253、 G.67.67、 G.68.68、 G.69.69、 G.70.70、 G.71.71、 G.258.258、 G.248.248、 G.249.249 、 G.250.250 、 G.251.251 、 G252.252 、 G.253.253 、 A.256.257 、 B.256.257 、 C.256.257 、 D.256.257、 E.256.257 、 F.256.257 、 G.256.257 、 A.256.254 、 B.256.254 、 C.256.254 、 D.256.254 、 E.256.254 、 F.256.254 、 G.256.254 、 A.256.250 、 B.256.250 、 C.256.250、 D.256.250、 E.256.250、 F.256.250、 G.256.250、 A.256.69、 B.256.69、 C.256.69、 D.256.69、 E.256.69、 F.256.69、 G.256.69、 A.256.71、 B.256.71、 C.256.71、 D.256.71、 E.256.71、 F.256.71、 G.256.71、 A.256.255、 B.256.255、 C.256.255、 D.256.255、 E.256.255、 F.256.255、 G.256.255。 x
R 的实施方案包括酯、 氨基甲酸酯、 碳酸酯、 硫代酸酯、 酰胺、 硫代酰胺和脲基团 ：
任意提及的本文所述的本发明的化合物也包括其生理上可接受的盐。 本发明的化 合物的生理上可接受的盐的实例包括源自适当碱的盐， 所述碱例如碱金属或碱土金属 ( 例 + + + +2 +2 + 如， Na 、 Li 、 K、 Ca 和 Mg )、 铵和 NX4 ( 其中 X 是 C1-C4 的烷基 )。氮原子或氨基的生理上 可接受的盐包括 ： (a) 与无机酸形成的酸加成盐， 所述无机酸例如， 氢氯酸、 氢溴酸、 硫酸、 氨基磺酸、 磷酸、 硝酸等 ； (b) 与有机酸形成的盐， 所述有机酸例如， 醋酸、 草酸、 酒石酸、 琥 珀酸、 马来酸、 延胡索酸、 葡糖酸、 柠檬酸、 苹果酸、 抗坏血酸、 苯甲酸、 羟乙磺酸、 乳糖酸、 鞣 酸、 棕榈酸、 海藻酸、 聚谷氨酸、 萘磺酸、 甲磺酸、 对甲苯磺酸、 苯磺酸、 萘二磺酸、 聚半乳糖醛 酸、 丙二酸、 磺基水杨酸、 羟乙酸、 2- 羟基 -3- 萘甲酸盐、 双羟萘酸盐、 水杨酸、 硬脂酸、 苯二 甲酸、 苦杏仁酸、 乳酸、 乙磺酸、 赖氨酸、 精氨酸、 谷氨酸、 甘氨酸、 丝氨酸、 苏氨酸、 丙氨酸、 异 亮氨酸、 亮氨酸等 ； 和 (c) 与元素阴离子形成的盐， 所述元素阴离子例如， 氯、 溴和碘。羟基
化合物的生理上可接受的盐包括所述化合物的阴离子与诸如 Na+ 和 NX4+( 其中 X 独立地选 自 H 或 C1-C4 的烷基 ) 的适当阳离子的组合。
对于治疗用途， 本发明化合物的活性成分的盐是生理上可接受的， 即它们是源自 生理上可接受的酸或碱的盐。但是， 也可以使用不是生理上可接受的酸或碱的盐， 例如， 用 于制备或纯化生理上可接受的化合物。 所有盐， 无论是否源自生理上可接受的酸或碱， 都在 本发明的范围内。
最后， 应当理解， 本文的组合物包含处于它们的未离子化以及两性离子形式的本 发明化合物， 和与化学计量的水的组合， 如在水合物中。
由式 I-III 例证的本发明的化合物可以具有手性中心， 例如手性碳或磷原子。本 发明化合物因此包括所有立体异构体的外消旋混合物， 包括对映异构体、 非对映体和阻转 异构体。另外， 本发明的化合物包括在任何或所有的不对称的手性原子处富集或拆分的旋 光异构体。 换句话说， 与描述近似的手性中心以手性异构体或外消旋混合物的形式提供。 外 消旋的和非对映的混合物， 以及分离或合成的、 基本上不含其对映异构体或非对映异构体 配偶体的单独的旋光异构体， 都在本发明的范围之内。通过公知技术将外消旋混合物拆分 为它们的单独的、 基本上旋光纯的异构体， 所述公知技术例如， 分离与旋光活性助剂 ( 例如 酸或碱 ) 形成的非对映异构体的盐， 之后将其转变回旋光活性物质。在多数情况下， 从所需 原料的适当的立体异构体开始， 通过立体特异性反应， 合成所需的旋光异构体。
术语 “手性的” 是指具有镜像配偶体的不可重叠性质的分子， 而术语 “非手性的” 是 指可以在其镜像配偶体上可重叠的分子。
术语 “立体异构体” 指具有同一化学构成， 但是原子或基团在空间的排列不同的化 合物。
“非对映异构体” 指具有两个或更多个手性中心并且其分子互相不是镜像的立体 异构体。非对映异构体具有不同的物理性质， 例如熔点， 沸点， 光谱性质和反应性。在高分 辨率的分析方法 ( 例如电泳和色谱法 ) 下， 可以分离非对映体的混合物。
“对映异构体” 指为互相非可重叠镜像的化合物的两种立体异构体。
本 文 应 用 的 立 体 化 学 的 定 义 和 惯 例 一 般 遵 循 S.P.Parker， Ed.， McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill BookCompany， New York ； 和 Eliel， E. 和 Wilen， S.， Stereochemistry ofOrganic Compounds(1994)John Wiley & Sons、 Inc.， New York。许多有机化合物以光学活性形式存在， 即它们具有旋转平面偏振光的平面的能 力。在描述光学活性化合物中， 字首 D 和 L 或 R 和 S 被用于指代有关分子手性中心的分子 绝对构型。字首的 d 和 l、 D 和 L 或 (+) 和 (-) 被用于指示平面偏振光被化合物旋转的标 志， S、 (-) 或 l 表示化合物是左旋的。字首带 R、 (+) 或 d 的化合物是右旋的。对于给定的 化学构造来说， 除了它们是互为镜像之外， 这些立体异构体是相同的。 一种特殊的立体异构 体也被称为对映异构体， 并且这类异构体的混合物常被称作对映异构体混合物。对映异构 体的 50 ∶ 50 混合物被称为外消旋混合物或外消旋物， 当在化学反应或过程中没有立体选 择性或立体特异性时， 它可以产生。术语 “外消旋混合物” 和 “外消旋物” 是指两种对映异 构体物种的等摩尔混合物， 缺乏旋光性。
每当本文描述的化合物被多于一个相同的指定基团 ( 例如， “R” 或 “R1” ) 取代时， 应当理解， 这些基团可相同或不同， 即， 各个基团被独立选择。波浪线 表示与相邻的子结构、 基团、 部分或原子连接的共价键部位。
在某些情况下， 本发明的化合物也可以以互变异构体的形式存在。尽管只可描述 一种离域的共振结构， 但所有这些形式都在本发明的范围之内。 例如， 嘌呤、 嘧啶、 咪唑、 胍、 脒和四唑系统可以存在烯 - 胺互变异构体， 它们所有可能的互变异构形式都在本发明的范 围之内。
本领域技术人员会认识到， 咪唑并 [1， 5-f][1， 2， 4] 三嗪基、 [1， 2， 4] 三唑并 [4， 3-f][1， 2， 4] 三嗪基和咪唑并 [1， 2-f][1， 2， 4] 三嗪基杂环可以以互变异构体形式存在。 例 如， 但不作为限制， 结构 (a) 和 (b) 可以具有如下所示的等价互变异构体形式 ：
所有实施方案中的杂环的所有可能的互变异构体形式都在本发明的范围内。
抑制 HCV 聚合酶的方法
本发明的另一方面涉及抑制 HCV 聚合酶活性的方法， 包括使用本发明的组合物处 理怀疑含有 HCV 的样品的步骤。
本发明的组合物可用作 HCV 聚合酶抑制剂、 用作这类抑制剂的中间体或具有如下 所述的其它用途。这种抑制剂会结合到具有对 HCV 聚合酶独有的几何形状的 HCV 聚合酶的 表面上或腔中的位置。结合 HCV 聚合酶的组合物可以不同的可逆程度结合。那些基本上不 可逆结合的化合物是用于本发明这种方法的理想候选物。一旦被标记， 那些基本上不可逆 结合的组合物可以用作检测 HCV 聚合酶的探针。因此， 本发明涉及检测疑似包含 HCV 聚合 酶的样品中的 HCV 聚合酶的方法， 包括以下步骤 ： 用包含与标记物结合的本发明化合物的 组合物处理疑似含有 HCV 聚合酶的样品 ； 并观察样品对标记物活性的影响。适宜的标记物 是诊断学领域公知的， 并包括稳定的自由基、 荧光团、 放射性同位素、 酶、 化学发光基团和色 原。使用官能团 ( 例如羟基、 羧基、 巯基或氨基 )， 以常规方式标记本文的化合物。
在本发明上下文中， 疑似含有 HCV 聚合酶的样品包括天然或人造的材料， 例如活 生物 ； 组织或细胞培养物 ； 生物样品， 例如生物材料样品 ( 血、 血清、 尿、 脑脊液、 泪、 痰、 唾 液、 组织样品等 ) ； 实验室样品 ； 食物、 水或空气样品 ； 生物制品样品， 例如细胞提取物， 特别 是合成所需糖蛋白的重组细胞等。一般而言， 所述样品将被怀疑包含生产 HCV 聚合酶的生 物， 经常是病原生物， 例如 HCV。样品可被包含在任何介质中， 包括水和有机溶剂 / 水混合 物。样品包括活生物， 例如人和人造的材料， 例如细胞培养物。
本发明的处理步骤包括向所述样品中添加本发明的组合物， 或它包括向所述样品 中添加所述组合物的前体。添加步骤包括上面描述的任意施用方法。
如果需要， 通过任何方法， 包括直接和间接的检测 HCV 聚合酶活性的方法， 可以观 察在施用组合物后的 HCV 聚合酶活性。检测 HCV 聚合酶活性的定量的、 定性的和半定量方 法全部被构思的。 典型地， 应用上述筛选方法之一， 然而， 也可应用任何其它方法， 例如观测 活生物的生理性能。
含有 HCV 聚合酶的生物包括 HCV 病毒。本发明的化合物适用于治疗或预防动物或 人中的 HCV 感染。
然而， 在筛选能够抑制人免疫缺陷病毒的化合物的过程中， 应牢记， 酶试验的结果 可能与细胞培养物试验不相关。因此， 基于细胞的试验应为主要的筛选工具。
HCV 聚合酶抑制剂的筛选
通过评价酶活性的任意常规技术， 筛选本发明组合物对 HCV 聚合酶的抑制活性。 在本发明的上下文中， 典型地， 首先筛选组合物的 HCV 聚合酶体外抑制活性， 然后筛选表现 -6 -7 出抑制活性的组合物的体内活性。具有小于约 5X10 M、 一般小于约 1X10 M、 优选小于约 -8 5X10 M 的体外 Ki( 抑制常数 ) 的组合物优选在体内使用。
已经详细描述了有用的体外筛选， 这里不再赘述。 但是， 实施例描述了合适的体外 试验。
药物制剂
本发明的化合物用常规载体和赋形剂配制， 它们将按照常规实践进行选择。片剂 将包含赋形剂、 助流剂、 填充剂、 粘合剂等。含水制剂以无菌的形式制备， 并且当预期以口 服给药以外形式递送时， 它通常将是等渗的。所有制剂将任选包含赋形剂， 例如 “Handbook ofPharmaceutical Excipients” (1986) 中列举的那些。赋形剂包括抗坏血酸和其它抗氧 化剂、 螯合剂例如 EDTA、 碳水化合物例如葡聚糖、 羟基烷基纤维素、 羟基烷基甲基纤维素、 硬 脂酸， 等等。制剂的 pH 值范围从约 3 到约 11， 通常是约 7 到 10。
尽管能够将活性成分单独给药， 但是优选将它们制成药物制剂。 本发明的制剂， 无 论是用于兽类还是人类应用， 均包含至少一种如上定义的活性成分与一种或多种可接受的 载体， 且任选包含其它治疗组分。 载体必须是 “可接受的” ， 其含义是与制剂中的其它组分相 容， 并且在生理上对其接受者而言无害。
制剂包括适合于上述给药途径的那些。可以将制剂便利地制成单位剂型， 并且可 以通过制药领域众所周知的任意方法制成制剂。技术和制剂一般可以在 Remington ′ s Pharmaceutical Sciences(MackPublishing Co.， Easton， PA.) 中找到。这类方法包括将 活性成分与构成一种或多种辅助组分的载体混合的步骤。 一般而言， 如下制备制剂 ： 通过均 匀和紧密混合活性成分与液体载体或固体载体细粉或它们两者， 且然后如果必要， 使产物成形。 可以将适合于口服给药的本发明制剂制成分散单位， 诸如各自包含预定量活性成 分的胶囊、 糯米纸囊剂或片剂 ； 粉末或颗粒 ； 在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液 ； 或水 包油型液体乳剂或油包水型液体乳剂。 还可以将活性成分作为大丸剂、 药糖剂或糊剂给药。
通过任选使用一种或多种辅助组分压制或模制制备片剂。 可以通过在合适的机器 中压制自由流动形式的任选混合了粘合剂， 润滑剂， 惰性稀释剂， 防腐剂， 表面活性剂分散 剂的活性成分， 诸如粉末或颗粒制备压制片。可以通过在合适的机器中模制使用经惰性液 体稀释剂湿润的粉状活性成分混合物制备模制片。可以任选给片剂包衣或刻痕， 并且任选 配制以使活性成分从中缓慢或受控释放。
就眼或其它外部组织诸如口腔和皮肤感染而言， 优选将制剂作为局部用软膏 剂或霜剂施用， 其含例如， 0.075-20 ％ w/w 的用量的活性成分 ( 包括的活性成分范围是 0.1％ -20％， 以 0.1％ w/w 递增， 诸如 0.6％ w/w， 0.7％ w/w 等 )， 优选 0.2-15％ w/w 且最优 选 0.5-10％ w/w。当配制成软膏剂时， 可以将活性成分与石蜡或与水易混溶的软膏剂基质 一起使用。或者， 可以使用水包油型霜剂基质将活性成分配制成霜剂。
如果需要， 霜剂基质的水相可以包括， 例如， 至少 30 ％ w/w 的多元醇， 即具有两 个或多个羟基的醇， 诸如丙二醇， 丁 1， 3- 二醇， 甘露醇， 山梨醇， 甘油和聚乙二醇 ( 包括 PEG400) 及其混合物。局部用制剂可以理想地包括促进活性成分通过皮肤或其它受侵害区 域吸收或渗透的化合物。这类透皮促进剂的实例包括二甲亚砜和相关类似物。
本发明乳剂的油相可以由已知组分按照已知方式构成。 尽管该相可以仅包含乳化 剂 ( 也称作利泄剂 )， 但是理想的是包含至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油的混合 物。优选包括亲水性乳化剂与作为稳定剂起作用的亲脂性乳化剂。还优选包括油和脂肪。 乳化剂与或不与稳定剂共同构成所谓的乳化蜡并且该蜡与油和脂肪共同构成所谓的乳化 软膏剂基质， 该基质形成霜剂的油分散相。
适用于本发明制剂的利泄剂和乳剂稳定剂包括十六醇十八醇混合物、 苄醇、 肉豆蔻醇、 单硬脂酸甘油酯和十二烷基硫酸钠。
用于制剂的合适的油或脂肪的选择基于实现所需的化妆品特性。 霜剂应优选为具 有合适的稠度的非油腻性的无染色和可洗涤的产品， 以避免从管或其它容器中渗漏。可以 使用直链或支链一 - 或二元烷基酯类， 诸如二 - 异己二酸酯、 硬脂酸异鲸蜡酯、 椰子油脂肪 酸丙二醇二酯、 肉豆蔻酸异丙酯、 油酸癸酯、 棕榈酸异丙酯、 硬脂酸丁酯、 棕榈酸 2- 乙基己 酯或称作 Crodamol CAP 的支链酯类的掺合物， 最后三种为优选的酯类。可以单独或以组合 方式使用它们， 这取决于所需的特性。或者， 使用高熔点脂质， 诸如白软石蜡和 / 或液体石 蜡或其它矿物油。 本发明的药物制剂包含根据本发明的组合与一种或多种药学上可接受的载体或 赋形剂和任选的其它治疗剂。 含有活性成分的药物制剂可以适合于指定给药方法的任意形 式。当用于口服应用时， 例如， 可以制备片剂、 糖锭、 锭剂、 水或油悬浮液、 可分散粉末或颗 粒、 乳剂、 硬或软胶囊、 糖浆剂或酏剂。可以按照制备药物组合物领域公知的任意方法制备 指定用于口服应用的组合物， 并且这类组合物可以包含一种或多种试剂， 包括甜味剂、 矫味 剂、 着色剂和防腐剂， 以便提供适口的制剂。 包含活性成分与适合于制备片剂的无毒性药学 上可接受赋形剂的片剂为接受的。这些赋形剂可以为， 例如， 惰性稀释剂， 诸如碳酸钙或碳
酸钠、 乳糖、 磷酸钙或磷酸钠 ； 制粒剂和崩解剂， 诸如玉米淀粉或藻酸 ； 粘合剂， 诸如淀粉、 明胶或阿拉伯胶 ； 和润滑剂， 诸如硬脂酸镁、 硬脂酸或滑石粉。可以给片剂不包衣或通过公 知技术， 包括微囊化包衣以便延缓在胃肠道中崩解和吸收且由此在延长时间期限内提供持 续作用。 例如， 可以使用延时材料， 诸如单独或与蜡混合的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油 酯。
还可以将口服使用的制剂制成硬胶囊， 其中将活性成分与惰性固体稀释剂 ( 例如 磷酸钙或高岭土 ) 混合， 或软胶囊， 其中将活性成分与水或油介质混合， 诸如花生油、 液体 石蜡或橄榄油。
本发明的含水悬浮液包含活性物质与适合于制备含水悬浮液的赋形剂的混合物。 这类赋形剂包括悬浮剂， 诸如羧甲基纤维素钠、 甲基纤维素、 羟丙基甲基纤维素、 藻酸钠、 聚 乙烯吡咯烷酮、 黄蓍树胶和阿拉伯树胶和分散或湿润剂， 诸如天然存在的磷脂 ( 例如卵磷 脂 )、 1， 2- 环氧烷烃与脂肪酸的缩合产物 ( 例如聚氧乙烯硬脂酸酯 )、 环氧乙烷与长链脂族 醇的缩合产物 ( 例如十七乙烯氧基鲸蜡醇 (heptadecaethyleneoxycetanol))、 环氧乙烷与 衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物 ( 例如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯 )。含水 悬浮液还可以包含一种或多种防腐剂， 诸如对 - 羟基 - 苯甲酸乙酯或对 - 羟基 - 苯甲酸正 丙酯， 一种或多种着色剂， 一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂， 诸如蔗糖或糖精。
可以通过将活性成分悬浮于植物油中配制油悬剂， 诸如花生油、 橄榄油、 芝麻油或 椰子油或矿物油， 诸如液体石蜡。 口服悬浮剂可以包含增稠剂， 诸如蜂蜡、 硬石蜡或鲸蜡醇。 可以加入甜味剂， 诸如上面所述的那些和矫味剂以便提供适口的口服制剂。可以通过添加 抗氧化剂， 诸如抗坏血酸对这些组合物防腐。
适合于通过添加水制备含水悬浮液的本发明的可分散粉末和颗粒提供了活性成 分与分散剂或湿润剂、 悬浮剂和一种或多种防腐剂的混合物。通过以上述披露举例说明那 些合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂。还可以存在其它赋形剂， 例如甜味剂、 矫味剂和着色 剂。
本发明的药物组合物还可以为水包油型乳剂的形式。油相可以为植物油， 诸如橄 榄油或花生油、 矿物油， 诸如液体石蜡或它们的混合物。合适的乳化剂包括天然存在的树 胶， 诸如阿拉伯树胶和黄蓍树胶， 天然存在的磷脂类， 诸如大豆卵磷脂、 衍生自脂肪酸和己 糖醇酐的酯类或偏酯类， 诸如失水山梨糖醇单油酸酯和这些偏酯与环氧乙烷的缩合产物， 诸如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯。 该乳剂还可以包含甜味剂和矫味剂。 可以使用甜味剂， 诸如甘油、 山梨醇或蔗糖配制糖浆剂和酏剂。这类制剂还可以包含缓和剂、 防腐剂、 矫味剂 或着色剂。
本发明的药物组合物可以为无菌可注射制剂形式， 诸如无菌可注射的水或油悬浮 剂。 可以按照公知技术， 使用上面所述的合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬剂。 无 菌可注射制剂还可以为在无毒性肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬 浮剂， 诸如在 1， 3- 丁 - 二醇中的溶液或制备成冻干粉末。在可以使用的可接受的媒介物和 溶剂中有水、 林格液和等渗氯化钠溶液。此外， 无菌固定油常用作溶剂或悬浮介质。为了这 一目的， 可以使用任意温和的固定油， 包括合成的甘油一或二酯类。 此外， 脂肪酸， 诸如油酸 同样可以用于制备可注射制剂。
可以与载体物质合并产生单一剂型的活性成分的量根据所治疗宿主和特定给药方式的不同而改变。例如， 指定用于对人体口服给药的定时释放制剂可以包含混合了适当 和适宜用量的载体物质的约 1-1000mg 活性成分， 所述的载体物质的适当和适宜用量可以 占总组合物的约 5- 约 95％ ( 重量∶重量 )。可以制备该药物组合物以便提供易于给药的 可测定用量。例如， 指定用于静脉内输注的水溶液可以包含约 3-500μg 活性成分 / 毫升溶 液， 以便可以约 30mL/hr 的速率输注适当的体积。
适合于对眼局部给药的制剂也包括滴眼剂， 其中将活性成分溶于或悬浮于合适的 载体， 尤其是用于活性成分的含水溶剂中。活性成分优选以 0.5-20％， 有利的是 0.5-10％， 特别是约 1.5％ w/w 的浓度存在于这类制剂中。
适合于在口腔中局部给药的制剂包括包含在矫味基质 ( 通常为蔗糖和阿拉伯胶 或黄蓍胶 ) 中的活性成分的锭剂 ； 包括在惰性基质 ( 诸如明胶和甘油， 或蔗糖和阿拉伯胶 ) 中的活性成分的软锭剂 ； 和包括在合适的液体载体中的活性成分的漱口药。
可以将用于直肠给药的制剂制成含合适的基质的栓剂， 所述的合适的基质例如为 可可脂或水杨酸酯。
适合于肺内或鼻部给药的制剂具有例如 0.1-500 微米的粒度， 例如 0.5， 1， 30， 35 等， 通过经鼻道快速吸入或通过经口腔吸入给药， 以便达到肺泡囊。 合适的制剂包括活性成 分的水或油溶液。 可以按照常规方法制备适合于气雾剂或干粉给药的制剂并且可以使其与 其它治疗剂一起递送， 诸如迄今所用治疗或预防如下所述的 HCV 感染的化合物。
可以将适合于阴道给药的制剂制成阴道栓剂、 棉塞、 霜剂、 凝胶剂、 糊剂、 泡沫剂或 喷雾剂， 其除包含活性成分外还包含诸如本领域公知的合适的这类载体。
适合于肠胃外给药的制剂包括 ： 水性和非水性的无菌注射溶液， 其可以包含抗氧 化剂、 缓冲剂、 抑菌剂和赋予制剂与指定接受者血液等渗的溶质 ； 和可以包括悬浮剂和增稠 剂的水和非水的无菌混悬剂。
将制剂提供在单位剂量或多剂量容器中， 例如密封安瓿和小瓶并且可以将其储存 在冷冻干燥 ( 冻干 ) 条件下， 这仅需要在使用前即刻添加无菌液体载体， 例如注射用水。由 上述类型的无菌粉末， 颗粒和片剂制备临时注射溶液和混悬液。优选的单位剂量制剂为包 含如上文所述活性成分的每日剂量或单位每日亚剂量或其适当部分的那些制剂。
应理解， 除上面具体提到的组分外， 本发明的制剂可以包括本领域中常规有关所 讨论制剂类型的其它试剂， 例如适合于口服给药的那些可以包括矫味剂。
本发明进一步提供了兽用组合物， 其包含至少一种如上定义的活性成分与用于此 的兽用载体。
兽用载体为用于给予组合物目的的物质并且可以为固体， 液体或气态物质， 另外 其为惰性的或兽药领域中可接受的且与活性成分相容。可以通过口服， 肠胃外或通过任意 其它所需途径给予这些兽用组合物。
本发明的化合物用于提供控释药物制剂， 其含有作为活性成分的一种或多种本发 明化合物 (“控释制剂” )， 其中活性成分的释放受到控制和调节， 以实现更低频率剂量给药 或改善给定活性成分的药代动力学或毒性性质。
活性成分的有效剂量至少取决于要治疗病症的性质、 毒性 ( 不管化合物是预防使 用 ( 更低剂量 ) 还是抵抗活性病毒感染 )、 递送的方法和药物制剂， 且将通过临床医生使用 常规剂量递增研究而决定。可以预期剂量为每天约 0.0001 到约 100mg/kg 体重 ； 典型地，每天约 0.01 到约 10mg/kg 体重 ； 更典型地， 每天约 .01 到约 5mg/kg 体重 ； 最典型地， 每天 约 .05 到约 0.5mg/kg 体重。例如， 对于大约 70kg 体重的成年人来说， 每日候选剂量将在 1mg 到 1000mg 的范围内， 优选为 5mg 到 500mg， 且可采取单或多剂量的形式。
给药途径
本发明的一种或多种化合物 ( 本文称为活性成分 ) 通过适合于受治疗的病况的 任何途径给药。合适的途径包括口服、 直肠、 鼻、 局部 ( 包括颊黏膜和舌下 )、 阴道和胃肠外 ( 包括皮下、 肌内、 静脉内、 皮内、 鞘内和硬膜外 ) 等。 应当理解， 优选的途径可随着例如受试 者的状况而变化。本发明化合物的益处是它们是口服生物可利用的且可以口服给药。
联合治疗
本发明的组合物也可以与其它活性成分组合使用。优选地， 其它活性治疗成分或 药剂是干扰素、 利巴韦林类似物、 NS3 蛋白酶抑制剂、 NS5a 抑制剂、 α- 葡萄糖苷酶 1 抑制 剂、 保肝药、 HCV 的非核苷抑制剂和用于治疗 HCV 的其它药物。
典型地， 基于要治疗的病症、 成分的交叉反应性和组合的药学性质， 选择式 I-III 的化合物的组合。例如， 当治疗感染 ( 例如， HCV) 时， 本发明的组合物与其它活性治疗剂 ( 例如本文所述的那些 ) 相组合。
可与式 I-III 的化合物组合的适合活性治疗剂或成分可以包括干扰素、 例如， 聚 乙二醇化的 rIFN-α2b、 聚乙二醇化的 rIFN-α2a、 rIFN-α2b、 IFN α-2b XL、 rIFN-α2a、 共 有 的 IFNα、 干 复 津、 利 比、 locteron、 AVI-005、 PEG- 干 复 津、 聚 乙 二 醇 化 的 IFN-β、 口服干扰素 α、 β- 干扰素、 reaferon、 intermaxα、 r-IFN-β、 干复津 + 干扰素 γ-1b、 IFN-ω 与 DUROS 和白蛋白 - 干扰素 α ； 利巴韦林类似物， 例如， rebetol、 copegus、 VX-497 和 viramidine(taribavirin) ； NS5a 抑 制 剂， 例 如， A-831、 A-689 和 BMS-790052 ； NS5b 聚 合 酶 抑 制 剂， 例 如， NM-283、 伐 洛 他 滨、 R1626、 PSI-6130(R1656)、 HCV-796、 BILB 1941、 MK-0608、 NM-107、 R7128、 VCH-759、 PF-868554、 GSK625433 和 XTL-2125 ； NS3 蛋 白 酶 抑 制 剂， 例如， SCH-503034(SCH-7)、 VX-950( 替拉瑞韦 )、 ITMN-191 和 BILN-2065 ； α- 葡萄糖 苷酶 1 抑制剂， 例如， MX-3253( 西戈韦 ) 和 UT-231B ； 保肝药， 例如， IDN-6556、 ME 3738、 MitoQ 和 LB-84451 ； HCV 的非核苷抑制剂， 例如， 苯并咪唑衍生物、 苯并 -1， 2， 4- 噻二嗪衍 生物和苯丙氨酸衍生物 ； 和用于治疗 HCV 的其它药物， 例如， 日达仙、 硝唑沙奈 (alinea)、 BIVN-401(virostat)、 DEBIO-025、 VGX-410C、 EMZ-702、 AVI 4065、 巴 土 昔 单 抗、 奥谷法 奈、 PYN-17、 KPE02003002、 actilon(CPG-10101)、 KRN-7000、 civacir、 GI-5005、 ANA-975、 XTL-6865、 ANA 971、 NOV-205、 tarvacin、 EHC-18 和 NIM811。
在另一个实施方案中， 本申请公开了药物组合物， 其包含本发明的化合物或其药 学上可接受的盐、 溶剂化物和 / 或酯， 以及至少一种其它治疗剂， 并且包含药学上可接受的 载体或赋形剂。
根据本发明， 与本发明的化合物组合使用的治疗剂可以是， 当与本发明的化合物 组合使用时具有治疗效果的任意药剂。例如， 与本发明的化合物组合使用的治疗剂可以是 干扰素、 利巴韦林类似物、 NS3 蛋白酶抑制剂、 NS5a 抑制剂、 α- 葡萄糖苷酶 1 抑制剂、 亲环 蛋白抑制剂、 保肝药、 HCV 的非核苷抑制剂和用于治疗 HCV 的其它药物。
在另一个实施方案中， 本申请提供了药物组合物， 其包含本发明的化合物或其药 学上可接受的盐、 溶剂化物和 / 或酯， 以及至少一种选自下述的其它治疗剂 ： 聚乙二醇化的 rIFN-α2b、 聚乙二醇化的 rIFN-α2a、 rIFN-α2b、 IFN α-2b XL、 rIFN-α2a、 共有的 IFNα、 干复津、 利比、 locteron、 AVI-005、 PEG- 干复津、 聚乙二醇化的 IFN-β、 口服干扰 素 α、 β- 干扰素、 reaferon、 intermaxα、 r-IFN-β、 干复津 + 干扰素 γ-1b、 IFN-ω 与 DUROS、 白蛋白 - 干扰素 α、 rebetol、 copegus、 VX-497、 viramidine(taribavirin)、 A-831、 A-689、 NM-283、 伐洛他滨、 R1626、 PSI-6130(R1656)、 HCV-796、 BILB 1941、 MK-0608、 NM-107、 R7128、 VCH-759、 PF-868554、 GSK625433、 XTL-2125、 SCH-503034(SCH-7)、 VX-950( 替拉瑞 韦 )、 ITMN-191 和 BILN-2065、 MX-3253( 西戈韦 )、 UT-231B、 IDN-6556、 ME 3738、 MitoQ 和 LB-84451、 苯并咪唑衍生物、 苯并 -1， 2， 4- 噻二嗪衍生物和苯丙氨酸衍生物、 日达仙、 硝唑 沙奈 (alinea)、 BIVN-401(virostat)、 DEBIO-025、 VGX-410C、 EMZ-702、 AVI 4065、 巴土昔单 抗、 奥谷法奈、 PYN-17、 KPE02003002、 actilon(CPG-10101)、 KRN-7000、 civacir、 GI-5005、 ANA-975、 XTL-6865、 ANA 971、 NOV-205、 tarvacin、 EHC-18 和 NIM811 和药学上可接受的载 体或赋形剂。
在另一个实施方案中， 本申请提供了组合药剂， 其包含 ：
a) 第一种药物组合物， 其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐、 溶剂化物 或酯 ； 和
b) 第二种药物组合物， 其包含至少一种选自下述的其它治疗剂 ： 抑制 HIV 蛋白酶 的化合物， 反转录酶的 HIV 非核苷抑制剂， 反转录酶的 HIV 核苷抑制剂， 反转录酶的 HIV 核 苷酸抑制剂， HIV 整合酶抑制剂， gp41 抑制剂， CXCR4 抑制剂， gp120 抑制剂， CCR5 抑制剂， 干扰素， 利巴韦林类似物， NS3 蛋白酶抑制剂， NS5a 抑制剂， α- 葡萄糖苷酶 1 抑制剂， 亲环 蛋白抑制剂， 保肝药， HCV 的非核苷抑制剂， 和用于治疗 HCV 的其它药物， 及其组合。
可以选择式 I-III 的化合物和其它活性治疗剂的组合， 以治疗患者的 HCV 感染和 其它病症， 例如 HIV 感染。因此， 式 I-III 的化合物可以与用于治疗 HIV 的一种或多种化合 物相组合， 例如抑制 HIV 蛋白酶的化合物， 反转录酶的 HIV 非核苷抑制剂， 反转录酶的 HIV 核苷抑制剂， 反转录酶的 HIV 核苷酸抑制剂， HIV 整合酶抑制剂， gp41 抑制剂， CXCR4 抑制 剂， gp120 抑制剂， CCR5 抑制剂， 干扰素， 利巴韦林类似物， NS3 蛋白酶抑制剂， NS5a 抑制剂， α- 葡萄糖苷酶 1 抑制剂， 亲环蛋白抑制剂， 保肝药， HCV 的非核苷抑制剂， 和用于治疗 HCV 的其它药物。
更具体地， 本发明的一种或多种化合物可以与一种或多种选自下述的化合物相 组合 ： 1)HIV 蛋白酶抑制剂， 例如， 氨普那韦、 阿扎那韦、 呋山那韦、 茚地那韦、 洛匹那韦、 利托那韦、 洛匹那韦 + 利托那韦、 奈非那韦、 沙奎那韦、 替拉那韦、 布瑞那韦、 达芦那韦、 TMC-126、 TMC-114、 莫 折 那 韦 (mozenavir)(DMP-450)、 JE-2147(AG1776)、 AG1859、 DG35、 L-756423、 RO0334649、 KNI-272、 DPC-681、 DPC-684 和 GW640385X、 DG17、 PPL-100， 2) 反 转录酶的 HIV 非核苷抑制剂， 例如， 卡普韦林、 乙米韦林、 地位韦啶、 依法韦仑、 奈韦拉 平、 (+) 胡 桐 素 A、 依 曲 韦 林、 GW5634、 DPC-083、 DPC-961、 DPC-963、 MIV-150 和 TMC-120、 TMC-278( 利匹韦林 )、 依法韦仑、 BILR 355BS、 VRX 840773、 UK-453,061、 RDEA806， 3) 反转 录酶的 HIV 核苷抑制剂， 例如， 齐多夫定、 恩曲他滨、 去羟肌苷、 司他夫定、 扎西他滨、 拉米夫 定、 阿巴卡韦、 氨多索韦、 艾夫西他滨、 阿洛夫定、 MIV-210、 racivir(±-FTC)、 D-d4FC、 恩曲 他滨、 叠氮膦 (phosphazide)、 福齐夫定替酯、 磷夫定酯 (fosalvudine tidoxil)、 阿立他滨 (apricitibine)(AVX754)、 amdoxovir、 KP-1461、 阿巴卡韦 + 拉米夫定、 阿巴卡韦 + 拉米夫定 + 齐多夫定、 齐多夫定 + 拉米夫定， 4) 反转录酶的 HIV 核苷酸抑制剂， 例如， 替诺福韦、 富马酸替诺福韦酯 + 恩曲他滨、 富马酸替诺福韦酯 + 恩曲他滨 + 依法韦仑、 和阿德福韦， 5) HIV 整合酶抑制剂， 例如， 姜黄素、 姜黄素衍生物、 菊苣酸、 菊苣酸衍生物、 3， 5- 二咖啡酰奎 尼酸、 3， 5- 二咖啡酰奎尼酸衍生物、 金精三羧酸、 金精三羧酸衍生物、 咖啡酸苯乙酯、 咖啡酸 苯乙酯衍生物、 酪氨酸磷酸化抑制剂、 酪氨酸磷酸化抑制剂衍生物、 槲皮素、 槲皮素衍生物、 S-1360、 zintevir(AR-177)、 L-870812 和 L-870810、 MK-0518( 雷 特 格 韦 )、 BMS-707035、 MK-2048、 BA-011、 BMS-538158、 GSK364735C， 6)gp41 抑 制 剂， 例 如， 恩 夫 韦 肽、 西夫韦肽 (sifuvirtide)、 FB006M、 TRI-1144、 SPC3、 DES6、 Locus gp41、 CovX 和 REP 9， 7)CXCR4 抑制 剂， 例如 AMD-070， 8) 进入抑制剂， 例如 SP01A、 TNX-355， 9)gp120 抑制剂， 例如 BMS-488043 和 BlockAide/CR， 10)G6PD 和 NADH- 氧化酶抑制剂， 例如， immunitin， 10)CCR5 抑制剂， 例 如阿拉韦罗、 维立韦罗、 INCB9471、 PRO-140、 INCB15050、 PF-232798、 CCR5mAb004 和马拉 韦罗， 11) 干扰素， 例如， 聚乙二醇化的 rIFN-α2b、 聚乙二醇化的 rIFN-α2a、 rIFN-α2b、 IFNα-2b XL、 rIFN-α2a、 共有的 IFNα、 干复津、 利比、 locteron、 AVI-005、 PEG- 干复津、 聚 乙二醇化的 IFN-β、 口服干扰素 α、 β- 干扰素、 reaferon、 intermaxα、 r-IFN-β、 干复津 + 干扰素 γ-1b、 IFN-ω 与 DUROS 和白蛋白 - 干扰素 α， 12) 利巴韦林类似物， 例如， rebetol、 copegus、 VX-497 和 viramidine(taribavirin)13)NS5a 抑 制 剂， 例 如， A-831、 A-689 和 BMS-790052， 14)NS5b 聚合酶抑制剂， 例如， NM-283、 伐洛他滨、 R1626、 PSI-6130(R1656)、 HCV-796 、 BILB 1941 、 MK-0608 、 NM-107 、 R7128 、 VCH-759 、 PF-868554 、 GSK625433 和 XTL-2125， 15)NS3 蛋白酶抑制剂， 例如， SCH-503034(SCH-7)、 VX-950( 替拉瑞韦 )、 ITMN-191 和 BILN-2065， 16)α- 葡萄糖苷酶 1 抑制剂， 例如， MX-3253( 西戈韦 ) 和 UT-231B， 17) 保 肝药， 例如， IDN-6556、 ME 3738、 MitoQ 和 LB-84451， 18)HCV 的非核苷抑制剂， 例如， 苯并咪 唑衍生物、 苯并 -1， 2， 4- 噻二嗪衍生物和苯丙氨酸衍生物， 19) 用于治疗 HCV 的其它药物， 例如， 日达仙、 硝唑沙奈 (alinea)、 BIVN-401(virostat)、 DEBIO-025、 VGX-410C、 EMZ-702、 AVI 4065、 巴土昔单抗、 奥谷法奈、 PYN-17、 KPE02003002、 actilon(CPG-10101)、 KRN-7000、 civacir、 GI-5005、 ANA-975、 XTL-6865、 ANA 971、 NOV-205、 tarvacin、 EHC-18 和 NIM811， 19) 药物代谢动力学增强剂， 例如， BAS-100 和 SPI452， 20) 核糖核酸酶 (RNAse)H 抑制剂， 例如， ODN-93 和 ODN-112， 21) 其它抗 -HIV 剂， 例如， VGV-1、 PA-457(bevirimat)、 阿普林 津、 HRG214、 cytolin、 polymun、 VGX-410、 KD247、 AMZ 0026、 CYT 99007、 A-221 HIV、 BAY 50-4798、 MDX010( 伊匹木单抗 (iplimumab))、 PBS119、 ALG889 和 PA-1050040。
还可能使本发明的任意化合物与一种或多种其它活性治疗剂相组合， 以单位剂型 同时或依次施用给患者。联合治疗可以作为同时或依次方案来施用。当依次施用时， 可以 在两次或更多次给药中施用该组合。
本发明化合物与一种或多种其它活性治疗剂的共同给药一般是指， 同时或依次施 用本发明的化合物与一种或多种其它活性治疗剂， 使得治疗有效量的本发明化合物和一种 或多种其它活性治疗剂均存在于患者体内。
共同给药包括在施用单位剂量的一种或多种其它活性治疗剂之前或之后施用单 位剂量的本发明的化合物， 例如， 在施用一种或多种其它活性治疗剂的数秒、 数分钟或数小 时内， 施用本发明的化合物。例如， 可以首先施用单位剂量的本发明的化合物， 随后在数秒 或数分钟内， 施用单位剂量的一种或多种其它活性治疗剂。 或者， 可以首先施用单位剂量的一种或多种其它治疗剂， 随后在数秒或数分钟内， 施用单位剂量的本发明的化合物。 在有些 情况下， 可能需要首先施用单位剂量的本发明的化合物， 在数小时 ( 例如 1-12 小时 ) 后， 施 用单位剂量的一种或多种其它活性治疗剂。在其它情况下， 可能需要首先施用单位剂量的 一种或多种其它活性治疗剂， 在数小时 ( 例如 1-12 小时 ) 后， 施用单位剂量的本发明的化 合物。
联合治疗可提供 “增效作用” 和 “协同作用” ， 换言之， 当活性成分一起使用时获得 的效果大于分开使用化合物所得效果之和。当活性成分 ： (1) 被共同配制并以组合制剂形 式同时给药或递送 ； (2) 作为单独的制剂交替给药或平行给药 ； 或 (3) 通过一些其它给药方 案时， 可获得协同作用。当以交替治疗递送时， 当化合物依次给药或递送时， 例如以单独的 片剂、 丸剂或胶囊剂， 或通过单独注射器的不同注射， 可获得协同作用。 通常， 在交替治疗期 间， 有效剂量的每种活性成分被依次施用， 即连续地施用， 而在联合治疗中， 有效剂量的两 种或多种活性成分被一起施用。协同的抗病毒作用表示， 大于所述组合中的单个化合物的 预测的纯累加效应的抗病毒作用。
在另一个实施方案中， 本申请提供了抑制细胞中的 HCV 聚合酶的方法， 其包括使 受到 HCV 感染的细胞接触有效量的式 I-III 化合物或其药学上可接受的盐、 溶剂化物和 / 或酯， 由此抑制 HCV 聚合酶。
在另一个实施方案中， 本申请提供了抑制细胞中的 HCV 聚合酶的方法， 其包括使 受到 HCV 感染的细胞接触有效量的式 I-III 化合物或其药学上可接受的盐、 溶剂化物和 / 或酯， 和至少一种其它活性治疗剂， 由此抑制 HCV 聚合酶。
在另一个实施方案中， 本申请提供了抑制细胞中的 HCV 聚合酶的方法， 其包括使 受到 HCV 感染的细胞接触有效量的式 I-III 化合物或其药学上可接受的盐、 溶剂化物和 / 或酯， 和至少一种选自下述的其它活性治疗剂 ： 干扰素、 利巴韦林类似物、 NS3 蛋白酶抑制 剂、 NS5a 抑制剂、 α- 葡萄糖苷酶 1 抑制剂、 保肝药、 HCV 的非核苷抑制剂和用于治疗 HCV 的 其它药物。
在另一个实施方案中， 本申请提供了治疗患者中的 HCV 的方法， 其包括对所述患 者施用治疗有效量的式 I-III 化合物或其药学上可接受的盐、 溶剂化物和 / 或酯。
在另一个实施方案中， 本申请提供了治疗患者中的 HCV 的方法， 其包括对所述患 者施用治疗有效量的式 I-III 化合物或其药学上可接受的盐、 溶剂化物和 / 或酯， 和至少一 种其它活性治疗剂， 由此抑制 HCV 聚合酶。
在另一个实施方案中， 本申请提供了治疗患者中的 HCV 的方法， 其包括对所述患 者施用治疗有效量的式 I-III 化合物或其药学上可接受的盐、 溶剂化物和 / 或酯， 和至少一 种选自下述的其它活性治疗剂 ： 干扰素、 利巴韦林类似物、 NS3 蛋白酶抑制剂、 NS5a 抑制剂、 α- 葡萄糖苷酶 1 抑制剂、 亲环蛋白抑制剂、 保肝药、 HCV 的非核苷抑制剂和用于治疗 HCV 的 其它药物。
在另一个实施方案中， 本申请提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐、 溶 剂化物和 / 或酯在制备药剂中的用途， 所述药剂用于治疗患者的 HCV 感染。
本发明化合物的代谢产物
本文所述化合物的体内代谢产物也落在本发明的范围之内， 其程度是， 这样的产 物相对于现有技术是新颖的且非显而易见的。 这些产物可产生自， 例如， 施用的化合物的氧化、 还原、 水解、 酰胺化、 酯化等， 主要是由于酶过程。 因此， 本发明包括通过以下方法生产的 新颖的且非显而易见的化合物， 该方法包括， 使本发明化合物与哺乳动物接触足够产生其 14 代谢产物的一段时间。 此类产物典型如下鉴定 ： 制备放射标记 ( 例如， C 或 3H) 的本发明化 合物， 将它以可检测的剂量 ( 例如大于约 0.5mg/kg) 肠胃外地施用给动物， 例如大鼠、 小鼠、 豚鼠、 猴或人， 允许发生代谢的足够时间 ( 典型地， 约 30 秒到 30 小时 )， 并从尿、 血或其它 生物样品中分离它的转化产物。由于它们被标记， 这些产物很容易分离 ( 其它是使用能结 合残留在代谢产物中的表位的抗体来分离 )。代谢产物的结构以常规方式测定， 例如用 MS 或 NMR 分析。一般而言， 代谢产物的分析以与本领域技术人员公知的常规药物代谢研究相 同的方法进行。转化产物， 只要它们不以其他方式在体内被发现， 即使它们自身不具有 HCV 聚合酶抑制活性， 也可用于本发明化合物的治疗给药的诊断测定。
用于测定化合物在替代胃肠分泌物中的稳定性的配方和方法是已知的。 在本文中 将化合物定义为在胃肠道中是稳定的， 其中在 37℃温育 1 小时后， 少于约 50 摩尔百分比的 受保护基团在肠或胃液的替代物中脱保护。不能仅仅因为化合物对胃肠道是稳定的， 就认 为它们在体内不会水解。本发明的前药典型地在消化系统中是稳定的， 但是它们通常在消 化腔、 肝脏或其它代谢器官中或在细胞内基本上水解为母体药物。
实施例
在描述实验细节时， 使用了某些缩写和缩略词。尽管它们中的大多数能被本领域 技术人员所理解， 表 1 包含了许多这样的缩写和缩略词的列表。
表 1. 缩写和缩略词的列表
缩写 Ac2O AIBN Bn BnBr BSA BzCl CDI DABCO DBN DDQ含义 醋酸酐 2， 2’ - 偶氮二 (2- 甲基丙腈 ) 苄基 苄基溴 双 ( 三甲基甲硅烷基 ) 乙酰胺 苯甲酰氯 碳酰二咪唑 1， 4- 二氮杂双环 [2.2.2] 辛烷 1， 5- 二氮杂双环 [4.3.0] 壬烯 -5 2， 3- 二氯 -5， 6- 二氰基 -1， 4- 苯醌75102046626 A CN 102046630说DBU DCA DCC DCM DMAP DME DMTCl DMSO DMTr DMF EtOAc ESI HMDS HPLC LDA LRMS MCPBA MeCN MeOH MMTC m/z 或 m/e MH+ MH-明书68/101 页1， 5- 二氮杂双环 [5.4.0] 十一碳烯 -5 二氯乙酰胺 二环己基碳二亚胺 二氯甲烷 4- 二甲氨基吡啶 1， 2- 二甲氧基乙烷 二甲氧基三苯甲基氯 二甲基亚砜 4， 4’ - 二甲氧基三苯甲基 二甲基甲酰胺 醋酸乙酯 电喷射离子化 六甲基二硅氮烷 高压液相色谱法 二异丙氨基锂 低分辨率质谱 间氯过苯甲酸 乙腈 甲醇 单甲氧基三苯甲基氯 质荷比 质量 +1 质量 -176102046626 A CN 102046630说MsOH MS 或 ms NBS rt 或 r.t. TBAF TMSCl TMSBr TMSI TEA TBA TBAP TBSCl TEAB TFA TLC 或 tlc Tr Tol δ 甲磺酸 质谱明书69/101 页N- 溴琥珀酰亚胺 室温 氟化四丁铵 氯化三甲基硅烷 溴代三甲基硅烷 碘代三甲基硅烷 三乙胺 三丁胺 三丁基铵焦磷酸盐 叔丁基二甲基甲硅烷基氯 三乙基铵碳酸氢盐 三氟乙酸 薄层色谱法 三苯基甲基 4- 甲基苯甲酰基 每百万份， 离四甲基硅烷的低场
化合物的制备 化合物 1
在 0 ℃， 使 用 滴 液 漏 斗， 在 30min 的 时 间 段 内， 向 1a(22.0g， 54.9mmol， 根据在 J.O.C.， 2004， 6257 中所述的方法制备 ) 在甲醇 (300mL) 中的溶液中， 逐滴加入乙酰氯 (22mL)， 然后在室温搅拌 16h。浓缩混合物， 重新溶于醋酸乙酯 (400mL) 中， 用冰冷的 2N + NaOH 洗涤， 并浓缩至干燥， 得到粗制的甲醚 1b， 为油状物。MS ＝ 437.2(M+Na )。
向 1b( 从前一步得到 ) 在甲醇 (300mL) 中的溶液中， 加入 0.5M 甲醇钠的甲醇溶液 (20mL， 10mmol)， 并在室温搅拌 16h。用 4.0N HCl 的二氧六环溶液 (2.5mL， 10mmol) 淬灭反 + 应。然后浓缩混合物， 得到粗制的 1c。MS ＝ 201.0(M+Na )。
在 连 接 Dean-Stark 气 水 分 离 器 的 情 况 下， 将 1c( 从 前 一 步 得 到 )、 Tritron X-405(70％在水中， 6.0g)、 50％ KOH( 在水中， 85g) 在甲苯 (500mL) 中的混合物加热至回流。 1h 收集～ 25ml 水后， 加入苄基氯 (33g， 260mmol)， 并继续在搅拌下回流 16h。 然后冷却混合 物， 并在醋酸乙酯 (400mL) 和水 (300mL) 之间分配。用水 (300mL) 洗涤有机层， 并浓缩。通 过硅胶柱色谱法 ( ～ 20％ EtOAc/ 己烷 ) 纯化残余物， 得到甲醚 1d， 为油状物 (22.0g， 89％ 1 在 3 步中 )。 H NMR(300MHz， CDCl3) ： δ7.3(m， 15H)， 4.5-4.9(m， 7H)， 4.37(m， 1H)， 3.87(d， 1H)， 3.56(m， 2H)， 3.52(S， 3H)， 1.40(S， 3H)。
向 1d(22.0g， 49.0mmol) 在醋酸 (110mL) 中的溶液中， 加入～ 3M 硫酸 ( 通过混合 4.8g 浓硫酸和 24ml 水来制备 )， 并在 70℃搅拌 8h。将混合物浓缩至体积～ 20mL， 并在醋酸 乙酯和冰冷的 2N NaOH 之间分配。浓缩醋酸乙酯层， 并通过硅胶柱色谱法 ( ～ 35％ EtOAc/ 己烷 ) 纯化， 得到 1e， 为油状物 (17.0g， 80％ )。MS ＝ 457.2(M+Na+)。
将 1e(4.58g， 10.6mmol) 溶解于 MeCN(7mL) 之中， 将溶液转移至微波管。将管装满 ( 乙酯基亚甲基 ) 三苯基正膦 (7.33g， 21.2mmol) 并在 Ar 下密封。使混合物在 180℃经历 微波加热 1 小时。在真空下除去溶剂并将混合物用 Et2O(50mL) 搅拌 15min。过滤产生的固 体， 用 Et2O(3×10mL) 洗涤， 在真空下除去溶剂。将混合物上样于 120g SiO2Combiflash 柱 色谱 (0-30％ EtOAc- 己烷梯度 )， 得到作为异构体混合物的 1f(4.04g， 76％ ) ： 澄清的油 ； + MS(ESI)m/z 527[M+Na ]。
将 1f(69.18g， 137mmol) 在 PhCH3(540mL) 中冷却至 -78℃， 并用 DIBAL-H( 在己烷 中 1.0M， 151mL， 151mmol) 处理。 将溶液搅拌 1 小时， 加入 MeOH(500mL)， 将溶液加热至室温。 通过 Celite 过滤混合物， 用 Et2O(3×100mL) 洗涤固体。在真空下除去溶剂， 通过粗多孔玻 璃过滤器过滤混合物。将混合物上样于 330g SiO2 Combiflash 柱色谱 (0-30％ EtOAc- 己 1 烷梯度 )， 得到作为异构体混合物的 1g(35.46g， 56％ )( 两种异构体的数据 ) ： 澄清的油 ； H NMR(CDCl3， 300MHz)9.76(s， 1/2H)， 9.73(s， 1/2H)， 7.26(br m， 15H)， 4.86(d， J ＝ 11.1Hz， 2H)， 4.50(m， 13H)， 4.21(m， 3H)， 3.88(d， J ＝ 6.9Hz， 1H)， 3.60(m， 5H)， 2.75(m， 2H)， 2.50(m， 2H)， 1.36(s， 3/2H)， 1.19(s， 3/2H)。
将 1g(20.0g ， 43.4mmol) 在 MeCN(200mL) 中 用 K2CO 3(24.0g ， 173mmol) 和 Ac2O(16.4mL， 173mmol) 处理， 将混合物在回流下搅拌 16 小时。将混合物冷却并通过粗 制烧结玻璃过滤器过滤， 用 MeCN(3×25mL) 洗涤固体。在真空下除去溶剂， 混合物悬浮于 DCM(100mL) 中， 通过烧结玻璃过滤器介质过滤。将混合物上样于 330g SiO2Combiflash 柱 色谱 (0-30％ EtOAc- 己烷梯度 )， 得到作为异构体混合物的 1h(10.3g， 47％ )( 所有异构体 1 的数据 ) ： 澄清的油 ； H NMR(CDCl3， 300MHz)7.30(br m， 15H)， 5.44(m， 1H)， 4.99(br m， 1H)， 4.60(m， 7H)， 4.21(m， 1H)， 3.72(m， 1H)， 3.62(m， 1H)， 2.11(s， 3H)， 2.03(2， 3H)， 1.31(s， 3H)， 1.26(s， 3H) ； MS(ESI)m/z 501[M-H] 。
将在 DMSO(100mL) 中的 1h(12.6g， 25.1mmol) 用 H2O(904μL， 50.2mmol) 和重结晶 的 NBS(8.93g， 50.2mmol) 处理， 并将混合物搅拌 16 小时。 将混合物用饱和 NaHCO3(50mL) 处 理， 用 EtOAc(250mL) 萃取溶液。用 H2O(3×50mL) 洗涤有机层并通过 MgSO4 干燥。在真空下 除去溶剂并将混合物上样于 330g SiO2Combiflash 柱色谱 (0-25％ EtOAc- 己烷梯度 )， 得 1 到作为异构体混合物的 1i(4.53g， 33％ )( 所有异构体的数据 ) ： 黄色的油 ； H NMR(CDCl3， 300MHz)9.35(d， J ＝ 5.1Hz， 1/2H)， 9.33(d， J ＝ 6.0Hz， 1/2H)， 9.27(s， 1H)， 9.25(s， 1H)， 7.26(br m， 15H)， 3.50-4.61( 复合 m， 12H)， 1.32(s， 3/2H)， 1.25(s， 3/2H)。
将 在 PhCH3(250mL) 中 的 1i(4.5g， 8.3mmol) 用 1j(1.6g， 8.3mmol 处 理 ； 根据 J.Chem.Soc.， Perkin Trans.11999， 2929-2936 中发现的方法制备 ) 和 K2CO3(1.4g， 10mmol) 处理， 将混合物在回流下搅拌 16 小时， 同时除去水。将混合物冷却， 通过烧结玻璃过滤 器介质过滤， 用 EtOAc(3×10mL) 洗涤固体。在真空下除去溶剂， 将混合物上样于 120g SiO2Combiflash 柱色谱 (0-40 ％ EtOAc- 己烷梯度 )， 得到作为异构体混合物的 1k(1.0g， 1 19 ％ )( 主 要 的 β- 异 构 体 的 数 据 ) ： 浅黄色固体 ； H NMR(CDCl3， 300MHz)7.78(s， 1H)， 7.26(brm， 15H)， 5.71(s， 1H)， 4.74(s， 2H)， 4.59(m， 4H)， 4.35(br m， 1H)， 4.00(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 3.83(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 3.66(d， J ＝ 10.8Hz， 1H)， 2.63(s， 3H)， 2.45(s， 3H)， 1.05(s， 3H) ； MS(ESI)m/z 629[M+H]+。
将 1k(1.0g， 1.59mmol) 用液体 NH3(20mL) 处理， 将混合物在钢制反应釜中在 80℃ 搅拌 16 小时。将混合物冷却， 除去 NH3， 将混合物上样于 120g SiO2Combiflash 柱色谱 (0-70％ EtOAc- 己烷梯度 )， 得到作为异构体混合物的 1l(707mg， 74％ )( 主要的 β- 异构 1 体的数据 ) ： 浅黄色的固体 ； H NMR(CDCl3， 300MHz)7.81(s， 1H)， 7.26(br m， 15H)， 5.71(s， 1H)， 4.74(s， 2H)， 4.58(m， 4H)， 4.40(m， 1H)， 4.06(d， J ＝ 7.2Hz， 1H)， 3.83(d， J ＝ 11.4Hz， 1H)， 3.68(d， J ＝ 10.2Hz， 1H)， 2.47(s， 3H)， 1.18(s， 3H) ； MS(ESI)m/z 598[M+H]+。
1l 可代替的合成
将无水 DMSO(6mL) 和无水乙酸酸酐 (4mL， 42.4mmol) 加入到干燥、 用氩气吹扫的圆 底烧瓶 (100mL) 中。然后加入化合物 1e(1.0g， 2.3mmol)， 将反应混合物在室温搅拌直到原 料完全消失。在 17 小时之后， 将烧瓶置于冰浴中， 加入饱和 NaHCO3(6mL) 以中和反应。然
后使用 EtOAc(3x10mL) 萃取有机物， 使用 MgSO4 干燥合并的有机层。在减压下除去溶剂， 使 用快速色谱 ( 己烷 /EtOAc) 纯化粗制物质。分离了 955mg(96％ ) 所期望的物质 13。LC/MS ＝ 433.2(M+H+)。1HNMR(300MHz， CDCl3) ： δ7.33(m， 15H)， 4.80(d， 1H)， 4.64(m， 6H)， 4.06(d， 1H)， 3.79(dd， 1H)， 3.64(dd， 1H)， 1.54(s， 3H)。
在 -78℃将 BuLi(1.6M， 在己烷中， 1.75mL， 2.81mmol) 逐滴加入到 7- 溴 -2， 4- 双甲 基磺烷基咪唑 [2， 1-f][1， 2， 4] 三嗪 ( 根据 WO2008116064 制备， 600mg， 2.06mmol) 在无水 THF(6mL) 中的悬浮液中。在 5min 之后悬浮液变为红棕色溶液， 然后将在 THF(0.6mL) 中的 13(810mg， 1.87mmol) 逐滴加入至混合物中。 然后将混合物加热至室温。 在 30min 之后， 加入 将混合物用乙酸乙酯稀释。 将有机层用盐水洗涤并在真空中浓缩。 饱和 NH4Cl 以淬灭反应。 通过硅胶柱色谱 ( ～ 40％ EtOAc/ 己烷 ) 纯化残余物， 得到作为异构体混合物的 14(0.77g， + 64％ )。MS ＝ 645.2(M+H )。
将 化 合 物 14(2.0g， 3.10mmol) 转 移 至 钢 制 反 应 釜 反 应 器 中 并 冷 却 至 -78 ℃。 在 -78℃采集液态氨 ( ～ 20mL) 并加入至反应釜反应器。 将反应釜反应器牢固密封， 并加热 至室温， 然后在 50℃加热 20 小时。反应完成。在排出气体之后， 通过硅胶柱色谱 (EtOAc/ 己烷 ) 纯化残余物， 得到作为浅黄色固体的 15(1.78g， 94 ％ )。将三氟化硼乙醚络合物 (2.2mL， 17.4mmol) 和三乙基硅烷 (2.8mL， 17.4mmol) 加入到在 -78℃在 CH2Cl2(15mL) 中的 产物中。然后将混合物在 0 至 10℃搅拌 3 小时。缓慢加入饱和 NaHCO3 水溶液以淬灭反应，
然后加入 CH2Cl2 以稀释混合物。 用盐水洗涤有机层， 并在真空下浓缩。 通过硅胶柱色谱 ( ～ 50 ％ EtOAc/ 己烷 ) 纯化残余物， 得到作为白色固体的 1l(0.81g， 47 ％ )。1HNMR(300MHz， CDCl3) ： δ7.67(s， 1H)， 7.20-7.45(m， 15H)， 5.77(s， 1H)， 4.80-4.92(m， 2H)， 4.57-4.72(m， 4H)， 4.43(d， J ＝ 7.8Hz， 1H)， 4.08(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 3.95(d， J ＝ 10.8Hz， 1H)， 3.74(d， J + ＝ 10.8Hz， 1H)， 2.48(s， 3H)， 1.16(s， 3H)。MS ＝ 598.3(M+H )。
将在 DCM(20mL) 中的 1l(707mg， 1.18mmol) 用 mCPBA(460mg， 2.66mmol) 处理， 将混 合物搅拌 16 小时。 加入另外的 mCPBA(203mg， 1.18mmol)， 将混合物搅拌 8 小时。 将混合物用 饱和 NaHCO3(10mL) 处理， 用 EtOAc(250mL) 萃取溶液。 用饱和 NaHCO3(10mL) 和盐水 (10mL) 洗 将混合物上样于 40g SiO2Combiflash 柱色 涤有机层， 通过 MgSO4 干燥。在真空下除去溶剂， 谱 (0-100％ EtOAc- 己烷梯度 )， 得到作为异构体混合物的 1m(571mg， 77％ )( 主要的 β- 异 1 构体的数据 ) ： 白色固体 ； H NMR(CDCl3， 300MHz)7.77(s， 1H)， 7.26(br m， 15H)， 5.61(s， 1H)， 4.59(m， 6H)， 4.35(br m， 1H)， 4.00(d， J ＝ 7.2Hz， 1H)， 3.83(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 3.70(d， + J ＝ 10.8Hz， 1H)， 3.06(s， 3H)， 1.05(s， 3H) ； MS(ESI)m/z 630[M+H] 。
用 NaBH4(68mg， 1.8mmol) 处 理 在 1 ∶ 1MeOH-CHCl3(18mL) 中 的 1m(565mg， 0.90mmol)， 将混合物搅拌 1 小时。加入另外的 NaBH4(170mg， 4.5mmol)， 将混合物搅拌 2 小 时。 加入另外的 NaBH4(340mg， 9.0mmol)， 将混合物搅拌 2 小时。 将混合物用 H2O(10mL) 处理， 用 EtOAc(100mL) 萃取溶液。 用饱和 NaHCO3(10mL) 和盐水 (2×10mL) 洗涤有机层， 通过 MgSO4 干燥。 在真空下除去溶剂， 将混合物上样于 40g SiO2Combiflash 柱色谱 (0-100％ EtOAc- 己 烷梯度 )， 得到作为异构体混合物的 1n(144mg， 29％ )( 主要的 β- 异构体的数据 ) ： 白色固 1 体； H NMR(CDCl3， 300MHz)8.08(s， 1H)， 7.87(s， 1H)， 7.26(brm， 15H)， 5.63(s， 1H)， 4.76(m， 2H)， 4.62(m， 6H)， 4.36(br m， 1H)， 4.00(d， J ＝ 7.2Hz， 1H)， 3.81(m， 1H)， 3.63(m， 1H)， + 1.07(s， 3H) ； MS(ESI)m/z 552[M+H] 。
将 在 DCM(5.2mL) 中 的 1n(144mg， 0.26mmol) 冷 却 至 -78 ℃， 用 BBr3( 在 DCM 中， 1.0M， 1.3mL， 1.3mmol) 处理， 将混合物搅拌 2 小时。将混合物用 4 ∶ 1MeOH- 吡啶 (500μL) 处理， 将溶液加热至室温。在真空下除去溶剂， 将混合物用浓 NH4OH(2mL) 处理， 接着进行溶 剂 (×3) 的移除。将混合物上样于反相 HPLC(0-95％ MeCN-H2O 梯度 )， 得到 1(21mg， 30％ ) ： 1 白色固体 ； H NMR(D2O， 300MHz)7.85(s， 1H)， 7.45(s， 1H)， 5.26(s， 1H)， 3.82(m， 2H)， 3.78(m， + 1H)， 3.68(dd， J ＝ 12.6， 4.5Hz， 1H)， 0.81(s， 3H) ； MS(ESI)m/z 282[M+H] 。
化合物 3
将 MCPBA(610mg， 2.72mmol) 加入至在 0℃的 1l(0.81g， 1.36mmol) 在 CH2Cl2(7mL) 中的溶液中。将混合物在 0℃搅拌 3 小时。加入 1M 在 H2O(2mL) 中的 Na2S2O3 淬灭反应。在 室温搅拌 10min 之后， 将有机层用饱和 Na2CO3 水溶液 (10mLx2) 和盐水洗涤、 干燥 (Na2SO4) 并在真空下浓缩。然后将残余物转移至钢制反应釜反应器， 在 -78℃冷却。在 -78℃采集 液态氨 ( ～ 10mL) 并加入至反应釜反应器。将反应釜反应器牢固密封并加热至室温。然 后将混合物在 110 ℃加热 48 小时。反应完成。通过硅胶柱色谱 (100 ％ EtOAc/ 己烷 ) 纯 化残余物， 得到作为白色固体的 3a(0.63g， 74％ )。1H NMR(300MHz， CDCl3) ： δ7.55(s， 1H)， 7.20-7.45(m， 15H)， 5.65(s， 1H)， 4.50-4.82(m， 6H)， 4.38-4.42(m， 1H)， 4.05(d， J ＝ 7.8Hz， 1H)， 3.87(d， J ＝ 9.9Hz， 1H)， 3.71(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 1.17(s， 3H)。MS ＝ 567.3(M+H+)。
将 三 氯 化 硼 ( 在 CH2Cl2 中， 1M， 1.5mL， 1.5mmol) 加 入 至 在 -78 ℃ 的 3a(61mg， 0.11mmol) 在 CH2Cl2(1mL) 中的溶液中。将反应混合物在 -78 ℃搅拌 3 小时， 然后通过添 加吡啶 /MeOH(1 ∶ 2， 14mL) 淬灭。将混合物加热至室温。将混合物浓缩以移除所有溶 剂。然后将残余物与 MeOH(5mLx3) 共蒸发， 然后将残余物与 27％ NH4Cl 水溶液 (5mLx3) 共 蒸发。通过 RP-HPLC(MeCN-H2O 梯度 ) 纯化粗品， 得到作为白色固体的化合物 3(16.8mg)。 1 H NMR(300MHz， D2O) ： δ7.31(s， 1H)， 5.20(s， 1H)， 3.82-3.88(m， 3H)， 3.68-3.71(m， 1H)， + 0.89(s， 3H)。MS ＝ 297.2(M+H )。
化合物 17
将 甲 基 胺 ( 在 THF 中 2M， 0.46ml， 0.92mmol) 加 入 至 14(120mg， 0.186mmol) 在 THF(0.5mL) 中的溶液中。将密封的反应混合物在 45℃加热 15min。将混合物在真空中浓 缩并进一步在高度真空中干燥。将三氟化硼乙醚络合物 (136uL， 1.086mmol) 和三乙基硅 烷 (174uL， 1.086mmol) 加入至在 -78 ℃的在 CH2Cl2(1mL) 中的粗品中。然后将混合物在 0 然后加入 CH2Cl2 稀释混合物。 至 10℃搅拌 3 小时。缓慢加入饱和 NaHCO3 水溶液淬灭反应， 用盐水洗涤有机层， 并在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱 ( ～ 50％ EtOAc/ 己烷 ) 纯化残余 物， 得到作为白色固体的 17a(74mg， 67 ％通过 2 步 )。1H NMR(300MHz， CDCl3) ： δ7.83(b， 1H)， 7.63(s， 1H)， 7.20-7.45(m， 15H)， 5.76(s， 1H)， 4.80-4.92(m， 2H)， 4.57-4.72(m， 4H)，
4.42(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 4.08(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 3.93(d， J ＝ 10.5Hz， 1H)， 3.72(d， J＝ + 11.1Hz， 1H)， 2.50(s， 3H)， 1.15(s， 3H)。MS ＝ 612.3(M+H )。
将 用 水 洗 涤 至 中 性 的 拉 尼 镍 ( ～ 500mg) 加 入 至 在 乙 醇 (10mL) 中 的 化 合 物 17a(180mg， 0.29mmol) 中。然后将混合物在 80 ℃加热 4 小时。通过过滤移除催化剂和 用 MeOH(5mLx6) 冲洗。在真空中浓缩滤液。通过硅胶柱色谱 ( ～ 50 ％ EtOAc/ 己烷 ) 纯 化残余物， 得到作为白色固体的 17b(118m g， 71 ％ )。1H NMR(300MHz， CD3OD) ： δ8.10(s， 1H)， 7.63(s， 1H)， 7.20-7.45(m， 15H)， 5.69(s， 1H)， 4.54-4.80(m， 6H)， 4.27-4.32(m， 1H)， 4.15(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 3.84-3.89(m， 1H)， 3.70-3.76(m， 1H)， 3.11(s， 3H)， 1.09(s， 3H)。MS + ＝ 566.3(M+H )。
将 三 氯 化 硼 ( 在 CH2Cl2 中 1M， 3.2mL， 3.2mmol) 加 入 至 17b(117mg， 0.207mmol) 在 -78 ℃在 CH2Cl2(4mL) 中的溶液中。将反应混合物在 -78 ℃搅拌 3 小时， 然后通过添加 吡啶 /MeOH(1 ∶ 2， 20mL) 淬灭。然后将混合物加热至室温。将混合物浓缩至移除所有溶 剂。然后将残余物与 MeOH(10mLx3) 共蒸发， 然后将残余物与 27％ NH4Cl 水溶液 (10mLx3) 共蒸发。通过 RP-HPLC(MeCN-H2O 梯度 ) 纯化粗品得到作为白色固体 (45mg， 74％ ) 的化合 1 物 17。 H NMR(300MHz， CD3OD) ： δ8.11(s， 1H)， 7.62(s， 1H)， 5.44(s， 1H)， 3.90-4.00(m， 3H)， + 3.73-3.84(m， 1H)， 3.13(s， 3H)， 1.00(s， 3H)。MS ＝ 296.1(M+H )。
化合物 4
将 3(220mg) 在约 1000ml 水中的溶液用牛脾 IX 型腺苷脱氨基酶 (0.125 单位 /mL， Sigma) 在 37℃处理 4 小时。浓缩混合物， 通过 RP-HPLC 纯化残余物， 得到化合物 4(152mg)。
86102046626 A CN 1020466301说明书79/101 页H NMR(300MHz， D2O) ： δ7.34(s， 1H)， 5.21(s， 1H)， 3.82-3.87(m， 3H)， 3.70(d， 1H)， 0.93(s， + 3H)， 1.00(s， 3H)。MS ＝ 298.1(M+H )。
化合物 5
将草酰氯 (275μl) 逐滴加入至在 0℃的 5a(1.27g， 2.32mmol， 根据类似于描述于 Synthetic Communications， 1992， 2815 的方法制备 ) 在二氯甲烷 (30ml) 中的溶液， 接着加 入 3 滴 DMF。将混合物在室温搅拌 1.5 小时。然后在真空中移除溶剂。将残余物与甲苯共 蒸发。将粗品 5b 溶解于无水 THF(43mL) 之中， 并将其在超过 30min 的时间边搅拌边逐滴加 入至 5c 在含有氢氧化钾 (278mg， 4.2mmol) 的水 (4.3mL) 中冷却的 (0-5℃ ) 溶液中。加入 氯仿以提取混合物。在真空中浓缩有机层。通过 RP HPLC( 乙腈 / 水 ) 纯化残余物， 得到作 + 为白色固体的 5d(0.41g， 34％ )。MS ＝ 671.5(M+H )。
在 200℃微波下， 将 5d(200mg， 0.30mmol) 在乙二醇 (5.5ml) 中的溶液在密封的微 波管中保持 2.5 小时。 用 MeOH 稀释混合物， 通过 RP HPLC( 乙腈 / 水 ) 纯化， 得到作为白色固 体的 5e(80mg， 41％ )。NMR(300MHz， CD3OD) ： δ7.95(d， J ＝ 7.8Hz， 2H)， 7.92(d， J ＝ 7.8Hz， 2H)， 7.79(d， J ＝ 8.1Hz， 2H)， 7.26(d， J ＝ 7.8Hz， 2H)， 7.21(d， J ＝ 8.1Hz， 2H)， 7.14(d， J ＝ 7.5Hz， 2H)， 6.01(s， 1H)， 5.97(d， J ＝ 4.8Hz， 1H)， 4.72-4.84(m， 2H)， 4.60-4.68(m， 1H)， + 2.40(s， 3H)， 2.37(s， 3H)， 2.36(s， 3H)， 1.74(s， 3H)。MS ＝ 653.5(M+H )。
将 1M 甲 醇 钠 在 甲 醇 (150μl) 中 的 溶 液 加 入 至 5e(80mg， 0.12mmol) 在 无 水 甲 醇 (4mL) 中的溶液中， 在室温搅拌 18 小时。加入 1.0NHCl 水溶液调节 pH 至 7。通过 RP 1 HPLC( 乙腈 / 水 ) 纯化混合物， 得到作为白色固体的 5(30mg， 84％ )。 H NMR(300MHz， CD3OD) ： δ5.28(s， 1H)， 3.9-4.0(m， 2H)， 3.86(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 3.72-3.78(m， 1H)， 0.93(s， 3H)。MS + ＝ 299.0(M+H )。
化合物 6
将 5e(220mg， 0.34mmol) 和无水二氧六环 (20mL) 加入至干燥、 用氩气吹扫过的圆 底烧瓶 (100mL) 中。然后加入 P2S5(200mg， 0.44mmol) 和 DMAP(28mg， 0.23mmol)， 将反应混 合物加热至温和回流 25min。加入另一部分的 P2S5(200mg， 0.44mmol)， 反应再回流 45min。 然后将反应冷却至室温， 倒入含有冰水 (10mL) 的锥形瓶中。用 NaCl 饱和水溶液之后， 用 氯仿萃取有机物。用 MgSO4 干燥合并的有机层， 在减压下移除溶剂。使用快速色谱 ( 己 烷 /EtOAc) 纯化粗制物。分离到 200mg(88％ ) 所期望的物质 6a。LC/MS ＝ 669.2(M+H+)。 1 HNMR(300MHz， CDCl3) ： δ7.99(m， 2H)， 7.89(m， 4H)， 7.19(m， 2H)， 7.16(t， 4H)， 6.31(s， 1H)， 5.11(m， 1H)， 4.92(m， 1H)， 4.76(m， 2H)， 2.45(s， 3H)， 2.40(s， 3H)， 2.37(s， 3H)， 2.01(s， 2H)， 1.74(s， 3H)。
将 6a(200mg， 0.30mmol)、 无水 DMF(4mL) 和无水 CH2Cl2(4mL) 加入至干燥、 氩气吹扫 过的圆底烧瓶 (50mL) 中。 然后加入 NaH(20mg， 0.50mmol， 在矿物油中 60％ )， 将不均匀的混 合物在室温搅拌 30min。将 MeI(60mg， 0.42mmol) 加入至烧瓶中， 将反应混合物在室温持续 搅拌 2 小时。然后将烧瓶置于冰浴中， 使用 1M HCl 将 pH 调节至 5。用 EtOAc 萃取有机物， 使用 MgSO4 干燥合并的层。在减压下除去溶剂， 使用 Gilson Preparatory HPLC 系统 ( 乙 腈 / 水 ) 纯化粗制物。分离到 150mg(74％ ) 的所期望的物质 6b。LC/MS ＝ 683.2(M+H+)。 1 H NMR(300MHz， CDCl3) ： δ7.99(m， 2H)， 7.89(m， 4H)， 7.19(m， 2H)， 7.16(t， 4H)， 6.31(s， 1H)， 5.13(m， 1H)， 4.92(m， 1H)， 4.76(m， 2H)， 2.69(s， 3H)， 2.44(s， 3H)， 2.40(s， 3H)， 2.37(s， 3H)，
2.01(s， 2H)， 1.74(s， 3H)。
将 6b(225mg， 0.33mmol) 和无水 THF(21mL) 加入至干燥、 氩气吹扫过的圆底烧瓶 (100mL) 中。 然后加入叔丁基亚硝酸酯 (0.30mL， 2.32mmol)， 将烧瓶置于在 50℃预热的油浴 中。在搅拌 2.5 小时之后， 将反应混合物冷却至室温， 在减压下除去溶剂。然后将烧瓶置于 高度真空中过夜， 使用 Gilson Preparatory HPLC 系统 ( 乙腈 / 水 ) 纯化粗制物。 分离得到 + 1 190mg(86％ ) 所期望的物质 6c。LC/MS ＝ 668.2(M+H )。 H NMR(300MHz， CDCl3) ： δ7.99(m， 3H)， 7.89(m， 4H)， 7.19(m， 2H)， 7.16(t， 4H)， 6.31(s， 1H)， 5.13(m， 1H)， 4.92(m， 1H)， 4.76(m， 2H)， 2.69(s， 3H)， 2.44(s， 3H)， 2.40(s， 3H)， 2.37(s， 3H)， 1.76(s， 3H)。
将 6c(190mg， 0.28mmol) 加入至干燥、 氩气吹扫过的帕尔反应釜容器中。然后加入NH3/MeOH(60mL， 7M 溶液 )， 将反应釜放置于在 80℃预热的油浴中。在 18h 之后， 将反应釜冷 却至室温， 在减压下除去溶剂。使用 Gilson Preparatory HPLC 系统 ( 乙腈 / 水 ) 纯化粗 制物， 分离得到 56mg(70％ ) 所期望的产物 6。LC/MS ＝ 283.1(M+H+)。1HNMR(300MHz， D2O) ： δ8.09(s， 1H)， 5.54(s， 1H)， 4.19(m， 1H)， 4.11(m， 1H)， 3.99(m， 1H)， 3.85(m， 1H)， 1.01(s， 3H)。
化合物 7
将 TEA(0.365g， 3.61mmol) 加入至 7a(1.7g， 2.64mmol) 和 7b(0.516g， 2.91mmol， 根 据描述于 J.Heterocycl.Chem， 1984， 21， 697 的方法制备 ) 在 DMF(10mL) 中的悬浮液的混合 物中。 将产生的混合物在室温搅拌 1 小时， 然后在 45℃再搅拌 1 小时。 用乙酸乙酯稀释反应 混合物， 用水洗涤。通过 MgSO4 干燥有机相， 过滤， 浓缩。通过硅胶色谱纯化残余物， 用 15％ 甲醇 - 乙酸乙酯洗脱， 得到作为无色固体的化合物 7c(0.45g， 26％ )。MS ＝ 670.0(M+H+)。
将 POCl3(0.56g， 3.6mmol) 加入至 7c(0.45g， 0.67mmol) 在 1， 2- 二氯乙烷 (50mL) 中的悬浮液中。将反应混合物在 82 ℃搅拌 8 小时。在冷却至室温之后， 将反应混合物用 并浓缩。将残余物在乙酸乙酯和水之间分配。分离 NaHCO3(5g) 和水 (0.5mL) 处理 3 小时， 有机相， 通过 MgSO4 干燥， 过滤和浓缩。通过硅胶色谱纯化残余物， 用乙酸乙酯洗脱， 得到化 1 合物 8d(0.26g， 59％ )。 H NMR(300MHz， DMSO-d6) ： δ11.0(s 1H)， 7.95(d， J ＝ 7.8Hz， 2H)， 7.85(m， 4H)， 7.77(s， 1H)， 7.36(d， J ＝ 7.8Hz， 2H)， 7.27(m， 4H)， 6.33(s， 2H)， 6.20(d， J ＝ 6.9Hz， 1H)， 6.11(s， 1H)， 4.6(m， 3H)， 2.40(s， 3H)， 2.37(s， 3H)， 2.35(s， 3H)， 1.62(s， 3H)。 MS + ＝ 652.1(M+H )。
将 NaOMe(0.1mL， 4.3M) 加入至在 0 ℃的 7d(0.26g， 0.399mmol) 在 MeOH(10mL) 和 THF(10mL) 中的溶液。 将产生的混合物在 0℃搅拌 0.5 小时， 然后在室温搅拌 2 小时。 将反应 混合物冷却至 0℃， 用 HCl(1mL， 0.5N) 中和， 用 NaHCO3(0.1g) 处理， 然后浓缩。 通过 C-18HPLC 1 纯化残余物， 得到化合物 7(0.1g， 84％ )。H NMR(300MHz， D2O) ： δ7.63(s， 1H)， 5.31(s， 1H)， + 3.70-3.95(m， 4H)， 0.88(s， 3H)。MS ＝ 298.0(M+H )。
化合物 11
将 7d(40mg， 0.067mmol) 和无水二氧六环 (4mL) 加入至干燥、 氩气吹扫过的圆底烧 瓶 (50mL)。然后加入 P2S5(68.2mg， 0.15mmol) 和 DMAP(6.1mg， 0.05mmol)， 将反应混合物加 热至温和回流， 持续 25min。加入另一部分 P2S5(50mg)， 反应再回流 45min。然后将反应冷 却至室温， 倒入包含冰水 (3.0mL) 的锥形瓶中。用 NaCl 饱和水溶液之后， 用氯仿萃取有机 物。使用 MgSO4 干燥合并的有机层， 在减压下除去溶剂。粗制物 (20mg) 用于下一步转化。 + LC/MS ＝ 668.2(M+H )。
将硫酮加合物 11a(20mg， 0.03mmol)、 无水 DMF(0.25mL) 和无水 CH2Cl2(0.25mL) 加 入至干燥、 氩气吹扫过的圆底烧瓶 (5mL) 中。然后加入 NaH(1.4mg， 0.035mmol， 在矿物油中 60％ )， 将不均匀的混合物在室温搅拌 40min。将 MeI(4.69mg， 0.033mmol) 加入至烧瓶中， 将反应混合物在室温持续搅拌 2 小时。然后将烧瓶放置在冰浴中， 使用 1M HCl 将 pH 调节 至 5。在减压下除去溶剂， 粗制产物 11b(10mg) 用于下一步转化。LC/MS ＝ 682.2(M+H+)。
将甲基硫化物加合物 11b(10mg， 0.0147mmol) 和无水 THF(1mL) 加入至干燥、 氩 气吹扫过的圆底烧瓶 (5mL)。然后加入叔丁基亚硝酸酯 (0.012mL， 0.10mmol)， 将烧瓶放 置于 50 ℃预热的油浴。在搅拌 3 小时之后， 将反应混合物冷却至室温， 在减压下除去溶 剂。然后将烧瓶放置于高度真空中过夜， 将粗制物 11c(10mg) 用于下一步反应。LC/MS ＝ + 667.2(M+H )。
将粗制还原的甲基硫化物加合物 11c(30mg， 0.107mmol) 加入至干燥、 氩气吹扫过 的帕尔反应釜容器。然后加入 NH3/MeOH(5mL， 7M 溶液 )， 将反应釜放置于在 80℃预热的油 浴中。在 18h 之后， 将反应釜冷却至室温， 在减压下除去溶剂。使用 Gilson Preparatory HPLC( 乙腈 / 水 ) 纯化粗制物， 分离到 2mg(50％ ) 所期望的产物 11。 LC/MS ＝ 282.1(M+H+)。 1 H NMR(300MHz， D2O) ： δ7.99(s， 1H)， 7.34(s， 1H)， 5.45(s， 1H)， 4.01(s， 1H)， 3.90(m， 1H)， 3.79(m， 1H)， 3.69(m， 1H)， 0.91(s， 3H)。
磷酸酯前药
包括本发明的非限制实施例的磷酸酯前药可以根据一般方案 1 制备。
方案 1
一般方法包括， 氨基酸酯盐 2b( 例如， HCl 盐 ) 与芳基二氯磷酸酯 2a 在约 2 至 10 个当量的适合的碱存在的情况下得到氨基磷酸酯 2c 的反应。适合的碱包括， 但是不限于， 咪唑、 例如二甲基吡啶和 DMAP 的吡啶、 例如三乙基胺和 DABCO 的叔胺， 以及例如 DBN 和 DBU 的取代的脒。特别优选叔胺。优选地， 每步的产物直接用于随后步骤而没有采用重结晶或 色谱法。特别地， 但是非限制地， 可以在 WO2006/121820 中找到 2a、 2b 和 2c 的实施例， 其通 过引用完整地并入本文。核苷碱 2d 与氨基磷酸酯 2c 在适合的碱存在的情况下反应。适合
的碱包括， 但是不限于， 咪唑、 例如二甲基吡啶和 DMAP 的吡啶、 例如三乙基胺和 DABCO 的叔 胺， 以及例如 DBN 和 DBU 的取代的脒。可以通过重结晶和 / 或色谱分离产物 2e。
磷酸酯前药类型的另外的实例公开于 J.Med.Chem.2007， 50(16)3891-96 中， 其通 过引用完整地并入本文。
化合物 8
根据使用 1- 甲基咪唑作为碱得到化合物 8(20mg， 50％的收率 ) 的一般方案， 将化 合物 7 用磷酸氯化物 8a( 根据 McGuigan 等人， J.Med.Chem.1993， 36， 1048-1052 制备 ) 处理。 1 H NMR(300MHz， CD3OD) ： δ7.61(s， 1H)， 7.20-7.32(m， 4H)， 5.47(s， 1H)， 4.9(m， 1H)， 4.5(m， 31 2H)， 4.18(brs， 2H)， 3.9(m， 1H)， 1.3(m， 3H)， 1.15(m， 6H)， 0.99(brs， 3H)。 P NMR(300MHz， + CD3OD) ： 4.04， 4.09。MS ＝ 601.0(M+H )。
化合物 9
根据使用 1- 甲基咪唑作为碱的一般方案， 用磷酸氯化物 8a( 根据 McGuigan 等 人， J.Med.Chem.1993， 36， 1048-1052 制备 ) 处理化合物 5， 得到化合物 9。1H NMR(300MHz， CD3OD) ： δ7.14-7.27(m， 4H)， 5.37(s， 1H)， 4.9(m， 1H)， 4.5(m， 2H)， 4.20(brs， 2H)， 3.9(m， 31 19 1H)， 1.3(m， 3H) ， 1.14(m ， 6H)， 1.02(brs ， 3H) 。 P NMR(300MHz ， CD 3OD) ： 4.00， 4.06 ； F + NMR(CD3OD， 282MHz)-78(s， 3F) ； MS ＝ 601.9(M+H )。
化合物 12
根据与化合物 8 和 9 的制备描述的相同的方法制备化合物 12。1HNMR(300MHz， CD3OD) ： δ8.08(2s， 1H)， 7.1-7.4(m， 4H)， 5.58(s， 1H)， 4.75(m， 1H， 与溶剂峰重叠 )， 4.5(m， 1H)， 4.45(m ， 1H)， 4.25(m， 2H) ， 3.85(m， 1H) ， 1.3(m ， 3H) ， 1.2(m ， 6H) ， 1.02(brs ， 3H) 。 31pNMR(300MHz， CD3OD) ： 3.91， 4.02 ； MS ＝ 586.3(M+H+)。
化合物 16
将 1H- 四唑 (9.5mg， 0.132mmol) 加入至化合物 3(13mg， 0.044mmol) 在三甲基磷 酸酯 (0.4mL) 中的溶液中， 接着在 0 ℃加入 2， 2- 二甲基 - 硫代丙酸 S-(2-{ 二异丙基氨 基 -[2-(2， 2- 二甲基 - 丙酰基硫烷基 )- 乙氧基 ]- 磷烷基氧基 (phosphanyloxy)}- 乙基 ) 酯 (40mg， 0.088mmol)。 在搅拌 2h 之后， 将在 H2O(60uL) 中 30％的过氧化氢加入至混合物中。 然 后将混合物加热至室温。 在搅拌 30min 之后， 加入 1M 在 H2O(2mL) 中的 Na2S2O3 以淬灭反应。 用 饱和 Na2CO3 水溶液 (10mLx2) 和盐水洗涤有机层， 在真空中浓缩。 通过 RP-HPLC(MeCN-H2O 梯 1 CDCl3) ： δ7.45(s， 度 ) 纯化残余物， 得到作为白色固体 (6mg) 的化合物 16。H NMR(300MHz， 1H)， 5.29(s， 1H)， 4.40-4.50(m， 1H)， 4.28-4.40(m， 1H)， 4.10-4.25(m， 6H)， 3.14-3.21(m， 31 4H)， 1.237(s， 9H)， 1.227(s， 9H)， 1.06(s， 3H) ；P NMR(121.4MHz， CDCl3) ： δ-1.322.MS ＝ + 665.0(M+H )。
化合物 18
将三甲基原甲酸酯 (36uL， 0.32mmol) 和对甲苯磺酸单水合物 (8mg， 0.04mmol) 加 入至 17(12mg， 0.04mmol) 在丙酮 (0.5mL) 和 DMF(0.1mL) 中的溶液。将混合物加热回流， 持 续 1 小时。 加入 28％ NH4OH 以中和混合物， 将混合物浓缩至干燥。 通过硅胶填料的短柱 ( 含 10％ MeOH 的 CH2Cl2) 分离产物。将白色固体溶解于 CH3CN(0.4ml) 之中， 加入 1H- 四唑， 接 着在 0℃加入在 CH3CN(0.2mL) 中的 2， 2- 二甲基 - 硫代丙酸 -(2-{ 二异丙基氨基 -[2-(2， 2- 二甲基 - 丙酰基硫烷基 )- 乙氧基 ]- 磷烷基氧基 }- 乙基 ) 酯 (41mg， 0.09mmol)。在搅拌 40min 之后， 将混合物冷却至 -40℃。 将在 CH2Cl2 中的 MCPBA(40mg， 009mmol) 加入至混合物。 然后将混合物加热至室温。在搅拌 10min 之后， 加入 1M 在 H2O(2mL) 中的 Na2S2O3 淬灭反应。 用饱和 Na2CO3 水溶液 (10mLx2) 和盐水洗涤有机层， 在真空中浓缩。通过 RP-HPLC(MeCN-H2O 梯度 ) 纯化残余物， 得到作为白色固体的偶联产物。将固体溶解于冷却的 75％在 H2O 中的 TFA 中。将混合物在 0 至 10℃搅拌 3 小时。用 EtOAc 稀释产生的混合物， 用饱和 NaHCO3 洗 涤， 在真空中浓缩。通过 RP-HPLC(MeCN-H2O 梯度 ) 纯化残余物， 得到作为白色固体的产物 1 化 合 物 18(12mg， 通 过 4 个 步 骤 44 ％ )。 H NMR(300MHz， CDCl3) ： δ8.17(s， 1H)， 7.52(s， 1H)， 7.24(b， 1H)， 5.38(s， 1H)， 4.57(b， 1H)， 4.34-4.45(m， 2H)， 4.11-4.25(m， 5H)， 3.97(d， J ＝ 5.4Hz， 1H)， 3.88(b， 1H)， 3.21(d， J ＝ 4.8Hz， 3H)， 3.16(t， J ＝ 6.6Hz， 4H)， 1.234(s，
31 6H)， 1.230(s， 6H)， 1.227(s， 6H)， 1.03(s， 3H) ； P NMR(121.4MHz， CDCl3) ： δ-1.347。MS ＝ + 664.0(M+H )。
化合物 20
将在约 3mL 的 THF 中的约 3.1mmol 的苯基甲氧基氨基丙酰基磷酸氯化物 ( 根据 McGuigan 等人， J.Med.Chem.1993， 36， 1048-1052 制备 ) 加入至约 0.5mmol 的化合物 4 和在 约 3mL THF 中约 3.8mmol 的 N- 甲基咪唑的混合物中。将反应搅拌约 24 小时， 在减压下除 去溶剂。通过反相 HPLC 纯化残余物， 得到化合物 20。
化合物 21
将在约 3mL 的 THF 中的约 3.1mmol 的 4- 氯苯基 2- 丙基氧基氨基丙酰基磷酸氯化 物 ( 根据 McGuigan 等人， J.Med.Chem.1993， 36， 1048-1052 制备 ) 加入至约 0.5mmol 的化 合物 1 和在约 3mL THF 中约 3.8mmol 的 N- 甲基咪唑的混合物中。将反应搅拌约 24 小时， 在减压下除去溶剂。通过反相 HPLC 纯化残余物， 得到化合物 21。
化合物 22
将约 0.52mmol 的化合物 1、 约 12mL 的无水丙酮、 约 0.7mL 的 2， 2， - 二甲氧基丙烷 和约 1.28mmol 的二 - 对硝基苯基磷酸的混合物搅拌约 24 小时至约 7 天。 用约 20mL 的 0.1N NaHCO3 中和反应混合物， 蒸除丙酮。将所期望的物质分配至氯仿中， 氯仿溶液是无水的， 蒸 除溶剂。通过常规方法从残余物中纯化化合物 22。
化合物 23
将约 0.53mmol 的化合物 22 在约 5mL 的 DMF 中的溶液用约 1mL 的叔丁基氯化镁在 THF 中的 1M 溶液处理。在约 30min 至约 5 小时之后， 加入约 0.65mmol 的反式 4-[(S)- 吡 啶 -4- 基 ]-2-(4- 硝基苯氧基 )-2- 氧代 -1， 3， 2- 二氧杂磷杂环己烷 (Reddy， Tetrahedron Letters2005， 4321-4324) 的溶液， 将反应搅拌约 1 至约 24 小时。在真空中浓缩溶液， 通过 色谱纯化残余物， 得到化合物 23。
化合物 24
将约 70％的三氟乙酸水溶液冷却至 0℃， 用约 0.32mmol 的化合物 23 处理约 1 至 24 小时。浓缩溶液， 通过色谱纯化残余物， 得到化合物 24。
化合物 25
将约 1.56mmol 的化合物 24 在约 15mL 的 THF 中的溶液用约 4.32mmol 的 CDI 处理。 在约 1 至约 24 小时之后， 蒸发溶剂， 通过色谱纯化残余物， 得到化合物 25。
化合物 26
将在约 3mL 的 THF 中约 3.1mmol 的 4- 氯苯基 2- 乙氧基氨基丙酰基磷酸氯化物 ( 根据 McGuigan 等人， J.Med.Chem.1993， 36， 1048-1052 制备 ) 加入至约 0.5mmol 的化合物 1 和约 3.8mmol 的 N- 甲基咪唑在约 3mL THF 中的混合物中。将反应搅拌约 24 小时， 在减压 下除去溶剂。通过反相 HPLC 纯化残余物， 得到化合物 26。
化合物 27
将化合物 26 在 DMSO 中的溶液用约 3 摩尔当量的叔丁氧钾处理约 15min 至 24 小 时。用 1N HCl 淬灭反应， 通过反相 HPLC 分离化合物 27。
化合物 28
将约 0.05mmol 的化合物 1 和约 0.5mL 的三甲基基磷酸酯的混合物密封于容器中 约 1 至约 48 小时。将混合物冷却至约 -10 至约 10 摄氏度， 加入约 0.075mmol 的三氯氧化 磷。在约 1 至约 24 小时之后， 用约 0.5mL 的 1M 碳酸氢四乙基铵淬灭反应， 通过离子交换色 谱分离所期望的级分。然后通过反向色谱将适当的级分脱盐得到化合物 28。
化合物 29
通过用五氧化磷在真空中过夜干燥化合物 28( 约 1.19mmol)。干燥的物质悬浮 在约 4mL 的无水 DMF 和约 4.92mmol DIPEA 中。加入约 7.34mmol 的异丙基氯甲基碳酸酯 (Antiviral Chemistry &Chemotherapy 8 ： 557(1997))， 将混合物加热至约 25 至约 60 摄氏 度约 30min 至约 24 小时。移除加热约 1 至约 48 小时， 过滤反应。用水稀释滤液， 将化合物 29 分配至 CH2Cl2 中， 干燥和蒸发有机溶液， 通过反相 HPLC 纯化残余物分离化合物 29。
化合物 30
通过用约 1 至约 5 当量的在吡啶中的 DCC 处理化合物 28 制备化合物 30， 加热反应 至回流， 持续约 1 至约 24 小时。通过常规离子交换和反相 HPLC 分离化合物 30。
化合物 31
将约 0.4mmol 的化合物 30 在约 10mL 的 DMF 中的溶液用约 0.8mmol 的 DIPEA 和约 0.8mmol 的氯甲基异丙基碳酸酯处理 (WO2007/027248)。将反应加热至约 25 至约 80 摄氏 度约 15min 至约 24 小时。在真空下除去溶剂， 通过 HPLC 纯化残余物， 得到化合物 31。
化合物 34
将化合物 3( 约 0.22mmmol) 溶解于无水吡啶 ( 约 2mL) 之中， 加入三甲基氯硅烷 ( 约 0.17mL)。将混合物在约 0 至约 25 摄氏度搅拌约 1 至约 24 小时。加入另外的三甲基 氯硅烷 ( 约 0.1mL)， 将反应搅拌约 1 至约 24 小时。连续加入 4， 4’ - 二甲氧基三苯甲基氯 ( 约 0.66mmol) 和 DMAP( 约 0.11 至约 0.22mmol)。将混合物搅拌约 1 至约 24 小时。加入 TBAF(1.0M， 约 0.22mL) 在 THF 中的溶液， 将反应搅拌约 1 至约 24 小时。混合物在乙酸乙酯 和水之间分配。 干燥和浓缩乙酸乙酯层。 通过色谱纯化残余物， 得到化合物 34， 其可以是单 和二 - 三苯甲基化合物的混合物。
化合物 35
将约 1.25mmol 的化合物 34 和约 1.9mmol 的三乙基铵 2-(2， 2- 二甲基 -3-( 三苯 甲氧基 ) 丙酰基硫烷基 ) 乙基膦酸酯 (WO2008082601) 的混合物溶解于无水吡啶 ( 约 19mL) 之中。在约 -30 至约 0 摄氏度逐滴加入新戊酰氯 ( 约 2.5mmol)， 将溶液搅拌约 30min 至约 24 小时。用二氯甲烷稀释反应， 用氯化铵水溶液 (agueous)( 约 0.5M) 中和反应。蒸发二氯 甲烷相， 干燥残余物， 通过色谱纯化， 得到化合物 35， 其可以是单 - 和二 - 三苯甲基化合物的 混合物。
化合物 36
将苄胺 ( 约 2.45mmol) 逐滴加入至约 0.49mmol 的化合物 35 在无水四氯化碳 ( 约5mL) 中的溶液中。将反应混合物搅拌约 1 至约 24 小时。蒸发溶剂， 通过色谱纯化残余物， 得到化合物 36， 其可以是单和二 - 三苯甲基化合物的混合物。
化合物 37
将约 2mmol 的化合物 36 在二氯甲烷 ( 约 10mL) 中的溶液用三氟乙酸水溶液 (90％， 约 10mL) 处理。在约 25 至约 60 摄氏度， 将反应混合物搅拌约 1 至约 24 小时。用乙醇稀释 反应混合物， 蒸发挥发物， 通过色谱纯化残余物， 得到化合物 37。
化合物 38
将在 THF 中约 90mM 的化合物 1 冷却至约 -78 摄氏度， 加入约 2.2 至约 4.4 当量的氯 化叔丁基镁 ( 约 1M， 在 THF 中 )。 将混合物加热至约 0 摄氏度约 30min， 再次冷却至约 -78 摄 氏度。逐滴加入 (2S)-2-{[ 氯 (1- 苯氧基 ) 磷酰基 ] 氨基 } 丙基新戊酸酯 (WO2008085508) ( 在 THF 中 1M， 约 2 当量 ) 的溶液。除去冷却的， 将反应搅拌约 1 至约 24 小时。用水淬灭 反应， 用乙酸乙酯萃取混合物。干燥和蒸发提取物， 通过色谱纯化残余物， 得到化合物 38。
核苷的三磷酸酯
包括核苷的三磷酸酯的本发明的非限制实例， 可以根据一般方案 2 制备。
方案 2.
将核苷 2d( ～ 20mg) 装入烧瓶 (5-15mL) 中。加入三甲基磷酸酯 (0.5-1.0mL)。用 冰 - 水浴将溶液冷却。 加入 POCl3(40-45mg)， 在 0℃搅拌直到反应完成 (1 至 4 小时 ； 通过离 子 - 交换 HPLC 监测反应过程 ； 通过吸取 3uL 的反应混合物并用 1.0M Et3NH2CO3(30-50uL)) 稀 释 制 备 分 析 的 样 品。 然 后 加 入 焦 磷 酸 -Bu3N(250mg) 和 Bu3N(90-105mg) 在 MeCN 或 DMF(1-1.5mL) 中的溶液。将混合物在 0℃搅拌 0.3 至 2.5 小时， 然后用 1.0M Et3NH2CO3( ～ 5mL) 淬灭反应。加热至室温的同时将产生的混合物再搅拌 0.5-1 小时。将混合物浓缩至干 燥， 再溶解在水 (4mL) 中， 通过离子交换 HPLC 纯化。将含有所期望的产物的级分浓缩至干 燥， 用水共蒸发。将残余物溶解在水 ( ～ 5mL) 中。加入 NaHCO3( ～ 30mg)， 将混合物蒸发至 干燥。将残余物溶解在水中， 再次蒸发。将残余物用 C-18HPLC 纯化， 得到作为钠盐的所期 望的产物。
化合物 10
根据起始于化合物 1 所描述的方法制备三磷酸酯 10(4mg， 四 - 钠盐， 35 ％ )。1H NMR(300MHz， D2O) ： δ7.96(s， 1H)， 7.68(s， 1H)， 5.40(s， 1H)， 4.07-4.30(m， 4H)， 0.91(s， 31 D2O) ： -5.6(d， J ＝ 48Hz)， -10.6(d， J ＝ 48Hz)， -21.5(t， J ＝ 48Hz)。 3H)。 P NMR(300MHz， + MS ＝ 521.8(M+H )。
化合物 19
根据用于三磷酸酯合成的标准的方法由 17 开始制备化合物 19。1HNMR(300MHz， D2O) ： δ7.97(s， 1H)， 7.60(s， 1H)， 5.37(s， 1H)， 4.00-4.30(m， 4H)， 2.97(s， 3H)， 0.91(s， 31 3H) ；P NMR(121.4MHz， D2O) ： δ-21.6(t， J ＝ 19.4Hz)， -10.6(d， J ＝ 18.7Hz)， -5.7(d， J ＝ 20.1Hz)。
抗病毒活性
本发明的另一个方面涉及抑制病毒感染的方法， 其包括用本发明的组合物处理疑 似需要这种抑制的样品或受试者的步骤。
在本发明的上下文中， 疑似含有病毒的样品包括天然的或人造的材料， 例如活生 物； 组织或细胞培养物 ； 生物样品， 例如生物材料样品 ( 血、 血清、 尿、 脑脊液、 泪、 痰、 唾液、 组织样品等 ) ； 实验室样品 ； 食物、 水或空气样品 ； 生物制品样品， 例如细胞提取物， 特别是 合成所需糖蛋白的重组细胞等。 一般而言， 样品将被怀疑含有诱导病毒感染的生物体， 经常 是病原生物， 例如肿瘤病毒。样品可被包含在任何介质中， 包括水和有机溶剂 / 水混合物。 样品包括活生物， 例如人和人造的材料， 例如细胞培养物。
如果需要， 通过任何方法， 包括直接和间接的检测活性的方法， 可以观察在施用组
合物后本发明化合物的抗病毒活性。检测该活性的定量的、 定性的和半定量方法全部是预 期的。 典型地， 应用上述筛选方法之一， 然而， 也可应用任何其它方法， 例如观测活生物的生 理性能。
使用已知的标准筛选方法， 可以测量本发明化合物的抗病毒活性。 例如， 使用下述 的一般方法， 可以测量化合物的抗病毒活性。
基于细胞的黄病毒属免疫检测测定法
用胰蛋白酶处理 BHK21 或 A549 细胞， 计数， 并在添加了 2％胎牛血清 (FBS) 和 1％ 青霉素 / 链霉素的 Hams F-12 培养基 (A549 细胞 ) 或 RPMI-1640 培养基 (BHK21 细胞 ) 中稀 释至 2x105 细胞 /mL。以 2x104 细胞 / 孔， 分配进干净的 96- 孔组织培养板， 并在 37℃、 5％ CO2 放置过夜。 次日， 在有不同浓度的实验化合物存在下， 在 37℃， 以 0.3 的感染复数 (MOI)， 用病毒感染细胞 1 小时， 并在 5％ CO2 保持另外 48 小时。用 PBS 洗涤细胞 1 次， 并用冷甲醇 固定 10min。用 PBS 洗涤 2 次后， 用含有 1％ FBS 和 0.05％吐温 -20 的 PBS 在室温封闭固定 的细胞 1 小时。然后以在含有 1％ FBS 和 0.05％吐温 -20 的 PBS 中 1 ∶ 20 至 1 ∶ 100 的浓 度， 加入一抗溶液 (4G2)3 小时。然后用 PBS 洗涤细胞 3 次， 后用辣根过氧化物酶 (HRP)- 缀 合的抗 - 小鼠 IgG(Sigma， 1 ∶ 2000 稀释度 ) 温育 1 小时。用 PBS 洗涤 3 次后， 将 50 微升 3， 3’ ， 5， 5’ - 四甲基联苯胺 (TMB) 底物溶液 (Sigma) 加入每个孔中， 保持 2 分钟。通过加入 0.5M 硫酸， 终止反应。在 450nm 读平板的吸光度， 以定量病毒载量。测量后， 用 PBS 洗涤细 TM 胞 3 次， 然后用碘化丙锭温育 5min。在 TecanSafire 读数器 ( 激发 537nm， 发射 617nm) 中 读平板， 以定量细胞数。根据平均吸光度相对于实验化合物的浓度的 log， 绘制剂量响应曲 线。通过非线性回归分析， 计算 EC50。可以使用阳性对照， 例如 N- 壬基 - 脱氧野尻霉素。
基于细胞的黄病毒属致细胞病变效应测定法
关于抗西尼罗病毒或日本脑炎病毒测试， 用胰蛋白酶处理 BHK21 细胞， 并在添加 5 了 2％ FBS 和 1％青霉素 / 链霉素的 RPMI-1640 培养基中稀释至 4x10 细胞 /mL 的浓度。关 于抗登革热病毒测试， 用胰蛋白酶处理 Huh& 细胞， 并在添加了 5％ FBS 和 1％青霉素 / 链霉 5 素的 DMEM 培养基中稀释至 4x10 细胞 /mL 的浓度。将每孔 50 微升细胞悬浮液 (2x104 细 胞 ) 分配进 96- 孔光底 (optical bottom) 的基于 PIT 聚合物的平板 (Nunc)。在 37℃、 5％ CO2， 在培养基中使细胞生长过夜， 然后在有不同浓度的实验化合物存在下， 用 MOI ＝ 0.3 的 西尼罗病毒 ( 例如 B956 株 ) 或日本脑炎病毒 ( 例如 Nakayama 株 ) 或 MOI ＝ 1 的登革热病 毒 ( 例如 DEN-2NGC 株 ) 感染。在 37℃、 5％ CO2， 进一步温育含有所述病毒和所述化合物的 平板 72 小时。在温育结束时， 将 100 微升 CellTiter-GloTM 试剂加入每个孔。在定轨摇床 上混合内容物 2 分钟， 以诱导细胞裂解。在室温温育平板 10 分钟， 以稳定化发光信号。使 用平板读数器， 记录发光读数。可以使用阳性对照， 例如 N- 壬基 - 脱氧野尻霉素。
在登革热感染的小鼠模型中的抗病毒活性
在 登 革 热 病 毒 感 染 的 小 鼠 模 型 (Schul 等 人 J.Infectious Dis.2007 ； 195 ： 665-74) 中， 在体内测试化合物。将 6-10 周龄 AG129 小鼠 (B&K Universal Ltd， Hll， UK) 单个地饲养在通风的笼子中。对小鼠腹膜内注射 0.4mL TSV01 登革热病毒 2 悬浮液。在异 氟烷麻醉下， 通过眶后穿刺， 采取血样。将血样收集在装有柠檬酸钠的试管中， 至 0.4％的 终浓度， 并立即在 6000g 离心 3 分钟， 以得到血浆。在 780 微升 RPMI-1640 培养基中稀释血 浆 (20 微升 )， 并在液氮中快速冷冻， 用于噬菌斑测定分析。 将剩余的血浆保藏， 用于细胞因子和 NS1 蛋白水平测定。小鼠发展登革热病毒血症， 在几天中上升， 在感染后第 3 天达到峰 值。
关于抗病毒活性的测试， 将本发明的化合物溶于载体液， 例如 10％乙醇， 30％ PEG 300 和 60％ D5W(5％右旋糖在水中 ； 或 6N HCl(1.5 当量 ) ∶ 1N NaOH(pH 调至 3.5) ∶ 100mM 柠檬酸盐缓冲液 pH 3.5(0.9％ v/v ∶ 2.5％ v/v ∶ 96.6％ v/v)。将 36 只 6-10 周龄 AG129 小鼠分成 6 组， 每组 6 只小鼠。如上所述用登革热病毒感染所有小鼠 ( 第 0 天 )。给组 1 经 口管饲 200mL/ 小鼠的 0.2mg/kg 本发明化合物， 每天 2 次 ( 凌晨一次， 傍晚一次 )， 从第 0 天 开始连续 3 天 ( 第一个给药在即将登革热感染之前 )。对组 2、 3 和 4 以相同方式分别施用 1mg/kg、 5mg/kg 和 25mg/kg 的化合物。可以使用阳性对照， 例如 (2R， 3R， 4R， 5R)-2-(2- 氨 基 -6- 羟基 - 嘌呤 -9- 基 )-5- 羟甲基 -3- 甲基 - 四氢 - 呋喃 -3， 4- 二醇， 以与前述组相同 的方式， 经口管饲 200 微升 / 小鼠。另一组仅用载体液处理。
在感染后第 3 天， 在异氟烷麻醉下， 通过眶后穿刺， 从小鼠采取约 100 微升血样 ( 用柠檬酸钠抗凝结 )。通过离心， 从每个血样得到血浆， 并在液氮中快速冷冻， 用于噬菌斑 测定分析。如 Schul 等人所述， 通过噬菌斑测定分析收集的血浆样品。也如 Schul 所述， 分 TM 析细胞因子。使用 Platelia 试剂盒 (Biorad Laboratories)， 分析 NS1 蛋白水平。细胞 因子水平和 / 或 NS1 蛋白水平的降低， 指示抗病毒效应。
典型地， 用 5-50mg/kg 的本发明化合物的宣称剂量 (bid dosage)， 使病毒血症降 低约 5-100 倍， 更典型地 10-60 倍， 最典型地 20-30 倍。
HCV IC50 测定
测定方法 ： 通过将 28μL 聚合酶混合物 ( 终浓度 ： 50mM Tris-HClpH 7.5， 10mM KCL， 5mM MgCl2， 1mM DTT， 10mM EDTA， 4ng/μL RNA 模板和 75nM HCV Δ21 NS5b 聚合酶 ) 加 入测定平板， 随后加入 4μL 化合物稀释液， 进行 NS5b 聚合酶测定 (40μL)。将聚合酶和化 合物在 35℃预温育 10 分钟， 然后加入 8μL 核苷酸底物混合物 ( 在 KM 的 33P-α- 标记的竞 争核苷酸和 0.5mM 的剩余 3 种核苷酸 )。覆盖测定平板， 并在 35℃温育 90min。然后在真空 下， 通过 96- 孔 DEAE-81 过滤平板， 过滤反应物。 然后在真空下用多个体积的 0.125MNaHPO4、 水和乙醇洗涤过滤平板， 以去除未掺入的标记。然后在 TopCount 上计数平板， 以评估相对 于背景对照的产物合成水平。使用 Prism 拟合程序， 确定 IC50 值。
优选地， 本文所述的化合物抑制 NS5b 聚合酶， 其 IC50 低于 1000μM， 更优选低于 100μM， 且最优选低于 10μM。 下列表 30 显示了本发明化合物活性的代表性实例， 其中 A 代 表 IC50 低于 10μM， B 代表 IC50 从 10 至 200μM， C 代表 IC50 高于 200μM。
表 30 下列实施例的三磷酸酯的代表性 IC50。
HCV EC50 测定
以 8x103 细胞 / 孔的密度， 将复制子细胞接种进 96- 孔平板内的 100μL 培养基， 其不含有遗传霉素。在 100％ DMSO 中系列稀释化合物， 然后以 1 ∶ 200 稀释度加给细胞， 达 到 0.5％ DMSO 的终浓度和 200μL 的总体积。在 37℃温育平板 3 天， 然后去除培养基， 并在 由 Promega 的萤光素酶测定系统提供的裂解缓冲液中裂解细胞。按照生产商的说明书， 将 100μL 萤光素酶底物加给裂解的细胞， 并在 TopCount 发光计中测量萤光素酶活性。优选 地， 本文所述的化合物具有低于 1000μM、 更优选低于 100μM， 且最优选低于 10μM 的 EC50。 例如， 化合物 1、 17 和 18 的 EC50 小于 10μM， 而化合物 9 和 3 的 EC50 小于 250μM。
使用下面的一般方法， 可以测定本发明化合物的细胞毒性。
细胞毒性细胞培养物测定法 (CC50 的测定 ) ：
该测定法是基于， 使用代谢底物评价测试的化合物的细胞毒性效应。
测定 CC50 的试验方法 ：
1. 在添加了 5％胎牛血清和抗生素的 RPMI-1640 培养基中， 培养 MT-2 细胞。
2. 将细胞分配进 96- 孔平板 ( 每孔 100μl 培养基中含 20,000 个细胞 )， 并一式 三份加入不同浓度的实验化合物 (100μl/ 孔 )。包括未处理的对照。
3. 在 37℃温育细胞 5 天。
4. 在黑暗中， 在磷酸缓冲盐水 pH 7.4 中， 以 2mg/ml 的浓度， 制备 XTT 溶液 (6ml/ 测定平板 )。在 55℃水浴中加热溶液 5min。向每 6ml XTT 溶液加入 50μl 甲硫酸 N- 甲基
吩嗪
(5μg/ml)。5. 从测定平板上的每个孔取出 100μl 培养基， 并向每个孔加入 100μl XTT 底物 溶液。在 CO2 培养箱中在 37℃温育 45-60min。
6. 向每个孔加入 20μl 2％ Triton X-100， 以终止 XTT 的代谢转化。
7. 读出在 450nm 的吸光度， 并减去在 650nm 的背景。
8. 相对于未处理的对照绘制百分比吸光度， 并估计 CC50 值， 作为导致细胞生长抑 制 50％的药物浓度。认为吸光度与细胞生长直接成比例。
在上文引用的所有出版物、 专利和专利文件， 都通过参考并入本文， 如同单个地通 过引用并入本文。
已经参考不同的具体的和优选的实施方案和技术描述了本发明。但是， 本领域技术人员会理解， 当保持在本发明的精神和范围内时， 可以作出许多变化和修改。109