具有 NOS 抑制活性的苯并噁嗪、 苯并噻嗪及相关化合物 相关申请的引用
本申请要求 2008 年 7 月 3 日提交的美国临时申请 No.61/133,887 的优先权， 将其 引入本文以供参考。
技术领域
本发明涉及苯并噁嗪、 苯并噻嗪及相关化合物领域， 并涉及前述化合物的医学用 途。 背景技术 一氧化氮 (NO) 在健康与致病过程中均扮演多种角色， 包括调节血压、 神经传 导、 及 巨 噬 细 胞 防 卫 系 统 (Snyder， S.H.and Bredt， D.S.， Scientific American， May ； 266(5)1992 ： 68)。NO 由一氧化氮合成酶的三种异构型所合成， 分别为内皮细胞中的组成 型 (eNOS)、 神经细胞中的组成型 (nNOS)、 及巨噬细胞中的诱导型 (iNOS)。这些酶为同源 二聚体 (homodimeric) 蛋白， 催化 L- 精氨酸 (arginine) 的 5 个电子氧化， 产生 NO 及瓜氨 酸 (citrulline)。由每种 NOS 异构型形成的 NO 各扮演相当独特的角色。单一 NOS 异构型 的过度刺激或过度生成， 特别是 nNOS 及 iNOS， 在多种疾病中扮演角色， 包括败血症休克、 关节炎 (BoughtoN-Smith et al.， IDrugs 1 ： 321-334， 1998 and Cochrane et al.， Med. Res.Rev.16 ： 547-563， 1996)、 糖尿病、 缺血性再灌注损伤、 疼痛 (Larson et al.， Pain 86 ： 103-111， 2000)、 及多种神经退化性疾病 (Kerwin et al.， J.Med.Chem.38 ： 4343， 1995)， 而 eNOS 抑制作用导致有害的效应， 例如增强的白血球及血小板活化、 高血压、 及加强的动脉粥 样硬化 (Valance et al.， Nature Rev.Drug Disc.1 ： 939， 2002)。
NOS 抑制剂可作为多种疾病的治疗剂。 但是， 对生理上重要的一氧化氮合成酶功能 的保留， 暗示着对于发展优先抑制 nNOS、 或 nNOS 或 iNOS 的异构型选择性抑制剂的渴求， 更 胜于 eNOS。具体地说， 选择性 NOS 抑制剂， 特别是 nNOS 或 iNOS， 候选用于治疗慢性疼痛状 态， 例如神经性疼痛 (neuropathic pain)、 慢性压力型头痛或转换性偏头痛 (transformed migraine)， 该疼痛状态来自于周围神经和 / 或中枢神经敏感作用的持续。
发明内容
本发明的特征在于具有下式的化合物 ：其中，
Q 为 -O-(CHR6)1-3 或 -S-(CHR6)1-3- ；
R1 及每个 R6 独立为 H、 可选取代的 C1-6 烷基、 可选取代的 C1-4 烷芳基、 可选取代的 C1-4 烷杂环基、 可选取代的 C2-9 杂环基、 可选取代的 C3-8 环烷基、 可选取代的 C1-4 烷环烷基 1A 1B 1C 1D 或 -(CR R )nNR R ；
R1A 及 R1B 独立为 H、 羟基、 卤素 ( 如氟 )、 可选取代的 C1-6 烷基、 可选取代的 C1-6 烷氧 基、 可选取代的 C1-4 烷环烷基、 可选取代的 C1-4 烷芳基、 可选取代的 C1-4 烷杂环基、 可选取代 1A 1B 的 C1-4 烷杂芳基、 可选取代的 C3-8 环烷基、 或可选取代的 C2-9 杂环基， 或 R 及 R 结合形成
＝O； R1C 及 R1D 独立为 H、 羟基、 可选取代的 C1-6 烷基、 可选取代的 C1-6 烷氧基、 可选取代 的 C1-4 烷环烷基、 可选取代的 C1-4 烷芳基、 可选取代的 C1-4 烷杂环基、 可选取代的 C1-4 烷杂芳 基、 可选取代的 C3-8 环烷基、 可选取代的 C2-9 杂环基、 或 N- 保护基， 或 R1C 及 R1D 结合形成可 选取代的 C2-9 杂环基或 N- 保护基 ；
n 为 1-6 的整数 ；
R2 及 R3 各自独立为 H、 卤素、 可选取代的 C1-6 烷基、 可选取代的 C6-10 芳基、 可选取代 的 C1-6 烷芳基、 可选取代的 C2-9 杂环基、 羟基、 可选取代的 C1-6 烷氧基、 可选取代的 C1-6 硫代 2A 2A 烷氧基、 (CH2)r2NHC(NH)R 、 或 (CH2)r2NHC(S)NHR 、 或可选取代的 C1-4 烷杂环基 ； 2A
其中， r2 为 0-2 的整数， R 为可选取代的 C1-6 烷基、 可选取代的 C6-10 芳基、 可选取 代的 C1-4 烷芳基、 可选取代的 C2-9 杂环基、 可选取代的 C1-4 烷杂环基、 可选取代的 C1-6 硫代烷 氧基、 可选取代的 C1-4 硫烷芳基、 可选取代的芳酰基、 可选取代的 C1-4 硫烷杂环基、 或可选取 代的氨基 ；
R4 及 R5 各自独立为 H、 卤素、 (CH2)r2NHC(NH)R2A、 或 (CH2)r2NHC(S)NHR2A ；
其中， Y1 及 Y2 分别为 H， 或 Y1 及 Y2 一起为＝ O， 或 Y1 及 Y2 独立为 H、 可选取代的 C1-6 烷基、 可选取代的 C6-10 芳基、 可选取代的 C1-6 烷芳基、 可选取代的 C2-9 杂环基、 羟基、 可选取 代的 C1-6 烷氧基、 可选取代的 C1-6 硫代烷氧基、 或可选取代的 C1-4 烷杂环基 ； 2 3 4 5
其中， R、 R、 R、 及 R 中只有一个为 (CH2)r2NHC(NH)R2A 或 (CH2)r2NHC(S)NHR2A ；
或其药用盐或其前药。
在一些实施例中， R1 及 R6 中的一个不是 H。
在一些实施例中， R6 为 H。
在一些实施例中， R1C 及 R1D 独立为 H、 可选取代的 C1-6 烷基、 可选取代的 C1-6 烷氧 基、 可选取代的 C1-4 烷环烷基、 可选取代的 C1-4 烷芳基、 可选取代的 C1-4 烷杂环基、 可选取代
的 C1-4 烷杂芳基、 可选取代的 C3-8 环烷基、 可选取代的 C2-9 杂环基、 或 N- 保护基， 或 R1C 及 R1D 结合形成可选取代的 C2-9 杂环基或 N- 保护基。
在一些实施例中， Y1 及 Y2 分别为 H， 或 Y1 及 Y2 一起为＝ O， 或 Y1 及 Y2 独立为 H、 可 选取代的 C1-6 烷基、 可选取代的 C6-10 芳基、 可选取代的 C1-6 烷芳基、 可选取代的 C2-9 杂环基、 可选取代的 C1-6 烷氧基、 可选取代的 C1-6 硫代烷氧基、 或可选取代的 C1-4 烷杂环基。 2 3 4 5
在一些实施例中， R、 R、 R、 或 R 可具有下式 ：
在另一些实施例中， R2A 具有下式 ：其中， X1、 X2、 X4、 及 X5 各自独立选自 O、 S、 NR7、 N、 或 CR8 ； X3 选自 N 或 C ；
R7 为 H、 可选取代的 C1-6 烷基、 或 N- 保护基 ； 8
R 为 H、 卤素、 可选取代的 C1-6 烷基、 羟基、 可选取代的 C1-6 烷氧基、 或可选取代的 C1-6 硫代烷氧基 ；
其中， X1、 X2、 X4、 及 X5 中的至少一个不是 CR8。特别是， R2A 可具有下式 ：
其中， X1 及 X2 各自独立选自 O、 S、 NH、 N、 或 CH ； 且其中， X1 及 X2 中的至少一个不是 CH。在一些其他的实施例中， X1 为 CH， X2 为 S。在还有一些实施例中， X1 为 CH， X2 为 O。
在一些实施例中， 前述化合物具有选自以下的结构 ：
其中， R4 及 R5 中的一个具有以下结构 ：且其中 X2 为 O 或 S。
在一些实施例中， Q 为 O-(CHR6)1-2 或 S-(CHR6)1-2 ； 且 R1 及每个 R6 独立为 H、 可选取 代的 C1-6 烷基、 可选取代的 C1-4 烷芳基、 可选取代的 C1-4 烷杂环基、 或可选取代的 C2-9 杂环基。 1 2 6
在其它实施例中， Y 及 Y 分别为 H， 且 Q 为 O-CHR 、 O-(CHR6)2、 或 O-(CHR6)3 ； 或 Y1 及 Y2 一起为＝ O， 且 Q 为 O-CHR6、 O-(CHR6)2、 或 O-(CHR6)3。
在其它实施例中， Y1 及 Y2 分别为 H， 且 Q 为 S-CHR6、 S-(CHR6)2、 或 S-(CHR6)3 ； 或 Y1 及 Y2 一起为＝ O， 且 Q 为 S-CHR6、 S-(CHR6)2、 或 S-(CHR6)3。
在一些实施例中， R1 为可选取代的 C1-6 烷基、 可选取代的 C2-9 杂环基、 可选取代的 1A 1B 1C 1D 1 C1-4 烷杂环基、 可选取代的 C3-8 环烷基、 或 -(CR R )nNR R 。在其它实施例中， R 为氨基 C1-6 1为 烷基。在其它实施例中， R 可选取代的 C1-4 烷杂环基， 其中该杂环基为 5- 或 6- 元环胺。在 特定的实施例中， 5- 元环胺被羧酸、 酯 ( 如 C1-6 酯 )、 或酰胺取代。在一些实施例中， R1 为可 选取代的 C2-9 杂环基。在其它实施例中， 该杂环基为可选取代的吡咯烷基或可选取代的哌 啶基， 例如 ：
其中， R9 为 H、 可选取代的 C1-6 烷基或 N- 保护基。在特定的实施例中， R9 为 H。在 其它实施例中， R1 为 -(CR1AR1B)nNR1CR1D。在特定实施例中， R1A 及 R1B 分别为 H。在其他实施 例中， n 为 2 或 3。在其它实施例中， NR1C 为 H， NR1D 为 -CH3、 -CH2CH3、 -(CH2)2OH、 或 -CH2CO2H。 在其它实施例中， R1 为 -CH2CH2N(CH3)2。在其它实施例中， R1 为 -CH2CH2NHCH3。
在特定的实施例中， R1 为可选取代的 C3-8 环烷基。在某些实施例中， C3-8 环烷基被 可选取代的氨基所取代。
其它实施例中， R4 或 R5 中的一个为 H 或 F。
式 (I) 的化合物的具体优选化合物包括 ：
或其药用盐， 如二盐酸盐。
本发明的特征还在于一种药物组合物， 包括式 (I) 的化合物或其药用盐或其前 药， 以及药用赋形剂。
本发明的化合物优选选择性抑制神经性一氧化氮合成酶 (nNOS)， 特别相对于内皮 性一氧化氮合成酶 (eNOS) 或诱导性一氧化氮合成酶 (iNOS) 或这两者。
观察到该化合物对 nNOS 的 IC50 或 Ki 值优选比 eNOS 和 / 或 iNOS 低至少 2 倍。该 IC50 或 Ki 值更优选低至少 5、 20、 50 或 100 倍 ( 即， 在 nNOS 中较为有效 )。一种实施例中， IC50 或 Ki 值低 2 倍 -100 倍之间。另一实施例中， 对 eNOS 的 IC50 或 Ki 值高于 10μM。eNOS 的 IC50 更优选高于 20μM， eNOS 的 IC50 或 Ki 值最优选高于 30μM， 可能需要达到 eNOS 的阈 值水平以避免任何直接的人血管组织的 eNOS 介导的阻塞。
本发明的另一实施例中， iNOS 及 nNOS 的 IC50 或 Ki 比 eNOS 低 2-100 倍之间。nNOS 或 iNOS 的 IC50 或 Ki 优选低至少 20、 50、 或 100 倍。另一实施例中， 本发明的化合物为选择 性 nNOS 抑制剂。
本发明的特征还在于一种治疗或预防哺乳类动物 ( 如人 ) 因一氧化氮合成酶 (NOS)( 例如 nNOS) 作用造成的疾病的方法， 包括给予该哺乳动物有效量的本发明的化合 物。前述疾病的实例包括 ： 头痛 ( 如偏头痛 ( 有或无先兆 )、 慢性紧张型头痛 (CTTH)、 有异 常性疼痛 ( 触痛， allodynia) 的偏头痛、 药物滥用头痛、 丛集性头痛、 慢性头痛、 或转换性偏 头痛 (transformed migraine)) ； 神经性疼痛 (AIDS 伴随性疼痛神经病变、 中枢中风后疼 痛 (CPSP)、 糖尿病型神经病变、 化学治疗引发的神经性疼痛 ( 如紫杉醇 (paclitaxel)、 顺铂 (cis-Platin)、 多柔比星 (Doxorubicin) 等 )、 疱疹后神经痛 (postherpetic neuralgia)、 或三叉神经痛 (trigeminal neuralgia))、 慢性炎性痛 ( 如因骨关节炎、 风湿性关节炎、 僵 直性脊椎炎、 银屑病关节炎、 未分化脊椎关节病变、 或反应性关节炎造成的疼痛 ) ； 内脏痛 ； 神经炎症 ； 药物治疗引发的痛觉过敏 (hyperalgesia) 和 / 或异常性疼痛 (allodynia)( 如 阿片类 (opioid) 引发的痛觉过敏 / 异常性疼痛或曲普坦 (triptan)(5-HT1D/1B 激动剂 ) 引发 的痛觉过敏和 / 或异常性疼痛 ) ； 急性疼痛 ( 可选地结合阿片类治疗 ) ； 慢性疼痛 ； 骨癌痛 ； 化学品依赖或成瘾 ( 如药物成瘾、 可卡因成瘾、 尼古丁成瘾、 甲基苯丙胺 (metamphetamine) 引发的神经毒性、 酒精耐受性、 依赖性、 或脱瘾 ( 断瘾， withdrawal)、 或吗啡 / 阿片类引发 的耐受性、 依赖性、 痛觉过敏、 或脱瘾 ) ； CNS 疾病 ( 如癫痫、 焦虑症、 抑郁症 ( 单一或组合 )、 注意力缺陷多动症 (ADHD)、 精神病 (psychosis)、 或痴呆症 ) ； 神经退化疾病或神经损伤 ( 如急性脊髓受伤、 AIDS 伴随性痴呆症、 帕金森病 (Parkinson’ s disease)、 阿尔茨海默 症 (Alzheimer’ s disease)、 肌肉萎缩脊髓侧索硬化症 (ALS)、 亨廷顿病 (Huntington’ s disease)、 多发性硬化、 神经毒性、 或头创伤 ) ； 心血管相关疾病 ( 例如中风、 冠状动脉旁路 移植 (CABG) 相关的神经受损、 体温过低心脏停止 (hypothermic cardiac arrest ； HCA)、 中 风后疼痛、 心源性休克、 再灌注损伤、 或血管性痴呆症 ) ； 或肠胃疾病 ( 例如回肠造口相关的 痢疾或倾倒综合征 (dumping syndrome))。
其它实施例中， 本发明的化合物可用于中枢敏化 (central sensitization) 的 慢性疼痛的治疗。其它实施例中， 具有中枢敏化成分的疼痛 (pain with components of central sensitization) 为神经性疼痛。 其它实施例中， 神经性疼痛选自疱疹后神经痛、 糖 尿病神经病变、 中枢 ( 视丘 ) 痛、 中风后痛、 HIV- 相关疼痛、 幻肢疼痛 (phantom limb pain)、 因手术后创伤或神经受伤造成的神经性疼痛、 及化学治疗引发的神经病变。
其它实施例中， 本发明的化合物可用于慢性发炎疼痛的治疗。 其它实施例中， 该慢 性发炎疼痛涉及僵直性脊椎炎、 反应性关节炎 ( 莱特氏综合征 (Reiter’ s syndrome))、 银 屑病关节炎、 未分化脊椎关节病变 (undifferentiated spondyloarthropathy)、 风湿性关 节炎、 及骨关节炎。
其它实施例中， 本发明的化合物可用于中枢敏化的潜在机制的头痛的治疗。其它 实施例中， 头痛选自偏头痛、 慢性紧张型头痛 (CTTH)、 丛集性头痛、 转换性偏头痛、 及药物滥 用造成的头痛。
其它实施例包括本发明的化合物在治疗间质性膀胱炎或阿片类药物脱瘾 (opiate withdrawal) 或预防偏头痛中的应用。本发明的化合物也可与一种或多种其它治疗剂组合， 用于预防或治疗前述疾病中的一种。 可 与 本 发 明 化 合 物 组 合 的 示 例 性 药 剂， 包 括 阿 片 类 (opioids)、 抗 抑 郁 剂、 抗 癫 痫 剂、 非 类 固 醇 的 抗 炎 药 (NSAID)、 抗 心 律 不 齐 药、 GABA-B 拮 抗 剂、 α-2- 肾 上 腺 素 (adrenergic) 受 体 激 动 剂、 5- 羟 色 胺 (serotonin)5HT1B/1D 激 动 剂、 N- 甲 基 -D- 天 冬 氨 酸 (aspartate) 拮 抗 剂、 胆 囊 收 缩 素 (cholecystokinin)B 拮 抗 剂、 P 物质拮抗剂 (NK1)、 抗 炎 化 合 物、 DHP- 敏 感 性 L- 型 钙 离 子 通 道 (calcium channel) 拮 抗 剂、 ω- 芋 螺毒素 (conotoxin)- 敏感性 N- 型钙离子通道拮抗剂、 P/Q- 型钙离子通道拮抗剂、 腺苷 (adenosine) 激酶拮抗剂、 腺苷受体 A1 激动剂、 腺苷受体 A2a 拮抗剂、 腺苷受体 A3 激动剂、 腺苷脱胺酶抑制剂、 腺苷核苷转运抑制剂 (transport inhibitors)、 香草酸 (vanilloid) VR1 受体激动剂、 大麻酯 (cannabinoid)CB1/CB2 激动剂、 AMPA 受体拮抗剂、 红藻氨酸盐 (kainate) 受体拮抗剂、 钠离子通道阻断剂 ( 例如神经性疼痛用的 Nav1.8 阻断剂 )、 尼古 丁乙酰胆碱 (nicotinic acetylcholine) 受体激动剂、 KATP 钾离子通道、 KV1.4 钾离子通道、 2+ Ca - 活化的钾离子通道、 SK 钾离子通道、 BK 钾离子通道、 IK 钾离子通道、 或 KCNQ2/3 钾离 子通道开放剂、 毒蕈碱 (muscarinic)M3 拮抗剂、 毒蕈碱 (muscarinic)M1 激动剂、 毒蕈碱 (muscarinic)M2/M3 部分激动 / 拮抗剂、 及抗氧化剂。 可用于与本发明化合物组合的治疗剂 的具体实例如表 1 所示。其它种类包括 CB1/CB2 激动剂， 例如迪萨那比诺 (dexanabinol) (HU-211)、 脂肪酸酰胺水解酶抑制剂、 P2X 嘌呤能 (purinergic) 阻断剂、 及 NGF 拮抗剂。
表 1 用于与本发明化合物组合的治疗剂
其 它 可 用 于 治 疗 疼 痛 的 化 合 物 如 WO2003/034900 及 美 国 专 利 公 开 案 US20030082225 所述， 这两件专利文献均并入本案作为参考。
NMDA 拮抗剂与 nNOS 抑制剂的组合可特别用于治疗如发炎及神经性疼痛、 创伤性 脑损伤、 及帕金森病的疾病 (Drug Discovery Today 7(7) ： 403-406， 2002)。
本发明的化合物也可与 FAAH 抑制剂组合使用， 如 J.Med.Chem.49 ： 4650-4656， 2006 ； Neuropharmacology 50 ： 814-823， 2006 ； Current Opinion in Chemical Biology 7 ： 469-475， 2003 ； 和 Pain 109 ： 319-327， 2004 所述， 其均并入本案作为参考。
本发明的任何化合物中可存在不对称或手性中心。本发明预期有多种立体异构 体及其混合物。本发明化合物的单独立体异构体由市售的具有不对称或手性中心的起始 材料合成制备， 或由该技术领域中周知的对映异构化合物 (enantiomer) 的混合物拆分 (resolution) 所制备。这些拆分方法例如 (1) 使标记为 (+/-) 的对映异构体的外消旋混 合物附着于手性辅助物， 经由再结晶或层析法分离所得的非对映异构体 (diastereomer)， 由该辅助物中释放出光学纯产物， 或 (2) 在手性层析柱上直接分离光学对映异构体的混合 物。 可替换地， 该手性化合物可经由非对称合成方法制备， 该非对称合成方法相对于一种对 映异构体有利于制备另一种对映异构体。或者， 可使用手性库 ( 池， pool) 的合成 ( 从对映 异构纯的构建单元 (building block) 开始 )， 其中该手性基 (chiral group) 或中心保留于 中间产物或终产物中。本文中对映异构体以符号 “R” 或 “S” 表示， 根据手性原子周围的取 代基构造 (configuration) 决定。或者对映异构体以 (+) 或 (-) 表示， 分别根据该对映异
构体溶液使偏振光 (polarized light) 顺时针或逆时针转动来决定。在其它情况下， 非对 映异构体， 例如顺式 (cis) 及反式 (trans) 异构体， 可由柱层析法、 手性层析法、 或再结晶分 离。一些情况下， 衍生化可改善这些混合物的分离。
几何异构体也可存在于本发明化合物中。本发明包括多种几何异构体及其混合 物， 来自碳碳双键周围的取代基排列， 标出如 Z 或 E 构造的异构体。已知也可以是互变异构 (tautomeric) 形式的结构， 对互变异构型的说明等同于对两种互变异构型的说明， 除非有 Q I Q T T Q 特别说明。例如， 式 -C( ＝ NR )NHR 及 -C(NHR ) ＝ NR 的脒结构， 其中 R 及 R 不同， 为相等 的互变异构 (tautomeric) 结构， 对其中之一的说明隐含对另一个的说明。
应当理解， 本发明化合物的取代基及取代形式 (substitution patterns) 可由本 领域技术人员选择， 提供化学稳定的化合物及由容易获得的起始材料以本领域已知的技术 及以下所述技术容易合成的化合物。 如果取代基本身被多于一个的基团取代， 则应当理解， 这些多个基团可在相同碳原子上或在不同碳原子上， 只要结果是稳定的结构。
其它特征及优点由以下说明和权利要求而变得显而易见。
定义
在本文中交互使用的 “酰基” 或 “烷酰基” 表示本文定义的烷基或以羰基使氢连接 于母分子基 (parent molecular group)， 例如甲酰基、 乙酰基、 丙酰基、 丁酰基等。 未取代的 酰基例如包括 2-7 个碳原子。
本文中的 “Cx-y 烷芳基” 表示式 -RR’ 的化学取代基， 其中 R 为 x-y 个碳原子的亚烷 基 (alkylene group)， R’ 为本文定义的芳基。同样地， 术语 “Cx-y 烷杂芳基” 表示式 -RR” 的 化学取代基， 其中 R 为 x-y 个碳原子的亚烷基 (alkylene group)， R” 为本文定义的杂芳基。 其它基团前缀为” 烷 -” 具有相同定义。未取代的烷芳基例如包括 7-16 个碳原子。
“烷环烷基” 表示环烷基以亚烷基 (alkylene) 连接至母分子基。
本文使用的 “亚烷基 (alkenyl)” ， 除非有特别限定， 否则表示包括一种以上的碳碳 双键的 2-6 个碳原子的单价直链或支链基团， 例如乙亚烷基 (ethenyl)、 1- 丙烯基、 2- 丙烯 基、 2- 甲基 -1- 丙烯基、 1- 丁烯基、 2- 丁烯基等。
术语 “烷杂环基” 表示杂环基以亚烷基 (alkylene) 连接至母分子基。未取代的烷 杂环基例如具有 2-14 个碳原子。
术语 “烷氧基” 表示式 -OR 的化学取代基， 其中 R 为 1-6 个碳原子的烷基， 除非有 特别限定。
术语 “烷氧烷基” 表示烷基被烷氧基取代。未取代的烷氧烷基例如包括 2-12 个碳 原子。
本文使用的属于 “烷基” 及前缀” 烷 -” 包括 1-6 个碳原子的直链及支链饱和基 团， 除非有特别指明。烷基例如为甲基、 乙基、 正 - 及异 - 丙基、 正 -、 仲 -、 异 - 及叔 - 丁 基、 新戊基等， 可选以 1、 2、 3 个取代基取代， 或在 2 个以上碳原子的烷基的情况下以 4 个 取代基取代， 取代基独立地选自 ： (1)1-6 个碳原子的烷氧基 ； (2)1-6 个碳原子的烷亚磺酰 基； (3)1-6 个碳原子的烷磺酰基 ； (4) 氨基 ； (5) 芳基 ； (6) 芳基烷氧基 ； (7) 芳酰基 ； (8) 叠 氮基 ； (9) 醛基 (carboxaldehyde) ； (10)3-8 个碳原子的环烷基 ； (11) 卤素 ； (12) 杂环基 ； (13)( 杂环 ) 氧基 ； (14)( 杂环 ) 酰基 ； (15) 羟基 ； (16)N- 保护氨基 ； (17) 硝基 ； (18) 氧 代； (19)3-8 个碳原子的螺环基 (spirocyclyl) ； (20)1-6 个碳原子硫代烷氧基 ； (21) 硫醇基 (thiol) ； (22)-CO2RA， 其中 RA 选自 (a) 烷基、 (b) 芳基、 (c) 烷芳基、 及 (d) 氢构成的组， B C B 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； (23)-C(O)NR R ， 其中 R 及 RC 分别独立选自 (a) 氢、 (b) 烷基、 (c) 芳基、 及 (d) 烷芳基构成的组， 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； D D (24)-SO2R ， 其中 R 选自 (a) 烷基、 (b) 芳基及 (c) 烷芳基构成的组， 其中亚烷基 (alkylene) E F E F 为 1-6 个碳原子 ； (25)-SO2NR R ， 其中 F 及 F 分别独立选自 (a) 氢、 (b) 烷基、 (c) 芳基、 及 G H G (d) 烷芳基构成的组， 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； 及 (26)-NR R ， 其中 R 及 RH 分别独立选自 (a) 氢 ； (b)N- 保护基 ； (c)1-6 个碳原子的烷基 ； (d)2-6 个碳原子的亚烷基 (alkenyl) ； (e)2-6 个碳原子的炔基 ； (f) 芳基 ； (g) 烷芳基， 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； (h)3-8 个碳原子的环烷基 ； 及 (i) 烷环烷基， 其中环烷基为 3-8 个碳原子， 亚烷 基 (alkylene) 为 1-10 个碳原子， 其中在一个实施例中没有 2 个基团以羰基或磺酰基连接 至氮原子。
本文使用的术语 “亚烷基 (alkylene)” 表示饱和二价烃基， 衍生自直链或支链的饱 和烃基移除 2 个氢原子， 例如亚甲基、 亚乙基、 亚异丙基等。
本文使用的术语 “烷亚磺酰基 (alkylsufinyl)” 表示烷基以 -S(O)- 基连接至母分 子基。未取代的烷亚磺酰基例如具有 1-6 个碳原子。
本文使用的术语 “烷基磺酰基 (alkylsufonyl)” 表示烷基以 -SO2- 基连接至母分 子基。未取代的烷磺酰基例如具有 1-6 个碳原子。
本文使用的术语 “烷亚磺酰基烷基” 表示如本文定义的烷基被烷亚磺酰基取代。 未 取代的烷亚磺酰基烷基例如具有 2-12 个碳原子。
本文使用的术语 “烷磺酰基烷基” 表示如本文定义的烷基被烷磺酰基取代。未取 代的烷磺酰基烷基例如具有 2-12 个碳原子。
本文使用的术语 “炔基” 表示 2-6 个碳原子的单价直链或支链基团， 包括碳碳三 键， 例如乙炔基、 1- 丙炔基等。
本文使用的 “脒基 (amidine)” 表示 -C( ＝ NH)NH2 基。
本文使用的术语 “氨基” 表示 -NH2、 -NHRN1、 或 -N(RN1)2， 其中 RN1 分别独立为 H、 OH、 N2 N2 N2 N2 NO2、 NH2、 NR 2、 SO2OR 、 SO2R 、 SOR 、 可选取代的 C1-6 烷基、 可选取代的 C1-6 烷氧基、 可选取 代的 C1-4 烷环烷基、 可选取代的 C1-4 烷芳基、 可选取代的 C1-4 烷杂环基、 可选取代的 C1-4 烷 杂芳基、 可选取代的 C3-8 环烷基、 可选取代的 C2-9 杂环基、 或 N- 保护基， 或两个 RN1 结合形成 可选取代的 C2-9 杂环基、 或 N- 保护基， 其中 RN2 各自独立为 H、 可选取代的烷基、 或可选取代 N1 N1 的芳基。一个优选实施例中， 氨基为 -NH2 或 -NHR ， 其中 R 分别独立为 OH、 NO2、 NH2、 NRN22、 SO2ORN2、 SO2RN2、 SORN2、 可选取代的烷基、 或可选取代的芳基， 及 RN2 可分别独立为 H、 可选取代 的烷基、 或可选取代的芳基。
本文使用的术语 “氨烷基” 表示如本文定义的烷基被氨基取代。
本文使用的术语 “芳 基”表 示 具 有 1 或 2 个 芳 环 的 单 环 或 双 环 的 碳 环 系 统 (carbocyclic ring system)， 例如苯基、 萘基、 1， 2- 二氢萘基、 1， 2， 3， 4- 四氢萘基、 芴基 (fluorenyl)、 二氢茚基 (indanyl)、 茚基 (indenyl) 等， 可选以 1、 2、 3、 4 或 5 个取代基取 代， 该取代基独立地选自以下构成的组中 ： (1)1-6 个碳原子的烷酰基 ； (2)1-6 个碳原子的 烷基 ； (3)1-6 个碳原子的烷氧基 ； (4) 烷氧烷基， 其中烷基及亚烷基 (alkylene) 分别为 1-6 个碳原子 ； (5)1-6 个碳原子的烷亚磺酰基 ； (6) 烷亚磺酰基烷基， 其中烷基及亚烷基(alkylene) 各自为 1-6 个碳原子 ； (7)1-6 个碳原子的烷磺酰基 ； (8) 烷磺酰基烷基， 其中烷 基及亚烷基 (alkylene) 各自为 1-6 个碳原子 ； (9) 芳基 ； (10) 氨基 ； (11)1-6 个碳原子的氨 烷基 ； (12) 杂芳基 ； (13) 烷芳基， 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； (14) 芳酰基 ； (15) 叠氮基 ； (16)1-6 个碳原子的叠氮烷基 ； (17) 醛基 (carboxaldehyde) ； (18)( 醛基 ) 烷基 ((carboxaldehyde)alkyl)， 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； (19)3-8 个碳 原子的环烷基 ； (20) 烷环烷基， 其中环烷基为 3-8 个碳原子， 亚烷基 (alkylene) 为 1-10 个 碳原子 ； (21) 卤素 ； (22)1-6 个碳原子的卤烷基 ； (23) 杂环基 ； (24)( 杂环 ) 氧基 ； (25)( 杂 环 ) 酰基 ； (26) 羟基 ； (27)1-6 个碳原子的羟烷基 ； (28) 硝基 ； (29)1-6 个碳原子的硝烷基 ； (30)N- 保护基 ； (31)N- 保护的氨烷基， 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； (32) 氧代 (oxo) ； (33)1-6 个碳原子的硫代烷氧基 ； (34) 硫烷氧烷基， 其中烷基及亚烷基 (alkylene) A 各自为 1-6 个碳原子 ； (35)-(CH2)qCO2R ， 其中 q 为 0-4 整数， RA 选自 (a) 烷基、 (b) 芳基、 (c) B C 烷芳基、 及 (d) 氢构成的组， 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； (36)-(CH2)qCONR R ， B C 其中 q 为 0-4 整数， R 及 R 分独立选自 (a) 氢、 (b) 烷基、 (c) 芳基、 及 (d) 芳烷基构成的 D 组， 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； (37)-(CH2)qSO2R ， 其中 q 为 0-4 整数， RD 选 自 (a) 烷基、 (b) 芳基及 (c) 烷芳基构成的组， 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； E F E F (38)-(CH2)qSO2NR R ， 其中 q 为 0-4 整数， R 及 R 分别独立选自 (a) 氢、 (b) 烷基、 (c) 芳基、 G H 及 (d) 烷芳基构成的组， 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； (39)-(CH2)qNR R ， 其中 q G H 为 0-4 整数， R 及 R 分别独立选自以下构成的组中 ： (a) 氢 ； (b)N- 保护基 ； (c)1-6 个碳原 子的烷基 ； (d)2-6 个碳原子的亚烷基 (alkenyl) ； (e)2-6 个碳原子的炔基 ； (f) 芳基 ； (g) 烷 芳基， 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； (h)3-8 个碳原子的环烷基 ； 及 (i) 烷环烷 基， 其中环烷基为 3-8 个碳原子， 亚烷基 (alkylene) 为 1-10 个碳原子， 一个实施例中， 没有 两个基团以羰基或磺酰基连接至氮原子 ； (40) 硫醇基 (thiol) ； (41) 全氟烷基 ； (42) 全氟 烷氧基 ； (43) 芳氧基 ； (44) 环烷氧基 ； (45) 环烷基烷氧基 ； 及 (46) 芳烷氧基。
本文使用的术语 “芳烷氧基” 表示烷芳基以氧原子连接至母分子基。未取代的芳 烷氧基例如具有 7-16 个碳原子。
术语 “芳氧基” 表示式 -OR’ 的化学取代基， 其中 R’ 为 6-18 个碳原子的芳基， 除非 另外特别限定。
本文使用的术语 “芳酰基 (aryloyl)” 表示芳基以羰基连接至母分子基。未取代的 芳酰基例如具有 7-11 个碳原子。
术语 “叠氮基” 表示 N3 基。
术语 “叠氮烷基” 表示叠氮基以烷基连接至母分子基。
本文使用的术语 “羰基” 表示 C(O) 基， 也可表示为 C ＝ O。
术语 “醛基 (carboxyaldehyde)” 表示 CHO 基。
术语 “醛烷基 (carboxaldehydealkyl)” 表示醛基以亚烷基 (alkylene) 连接至母 分子基。
本文使用的术语 “慢性紧张型头痛” (CTTH) 表示一种紧张型头痛， 符合国际头痛协 nd 会分类 (International Headache Society Classification， 2 Edition(ICHD-2)) 定义 的诊断特征， 例如每个月头痛发生至少 15 次， 平均持续＞ 3 个月 ( 每年至少 180 天 )。
本文使用的术语 “慢性偏头痛” ， 亦称为” 转换性偏头痛” ， 是指 ICHD-2 中提供的定义， 即 “在无药物滥用下， 每月发生偏头痛 15 天以上， 超过 3 个月” 。也可找到诊断慢性偏头 痛的临床指南， 例如在 ICHD-2 及 Oleson 等人， Cephalalgia， 26(6) ： 742-746， 2006 中。
本文使用的术语 “环烷基” ， 除非另外限定， 否则表示 3-8 个碳原子的单价饱和或 不饱和非芳环烃基， 例如环丙基、 环丁基、 环戊基、 环己基、 环庚基、 双环 [2.2.1.] 庚基等。 本发明的环烷基可选被以下所取代 ： (1)1-6 个碳原子的烷酰基 ； (2)1-6 个碳原子的烷基 ； (3)1-6 个碳原子的烷氧基 ； (4) 烷氧烷基， 其中烷基及亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原 子； (5)1-6 个碳原子的烷亚磺酰基 ； (6) 烷亚磺酰基烷基， 其中烷基及亚烷基 (alkylene) 分别为 1-6 个碳原子 ； (7)1-6 个碳原子的烷磺酰基 ； (8) 烷磺酰基烷基， 其中烷基及亚烷 基 (alkylene) 分别独立为 1-6 个碳原子 ； (9) 芳基 ； (10) 氨基 ； (11)1-6 个碳原子的氨烷 基； (12) 杂 芳 基 ； (13) 烷 芳 基， 其 中 亚 烷 基 (alkylene) 为 1-6 个 碳 原 子 ； (14) 芳 酰 基 ； (15) 叠氮基 ； (16)1-6 个碳原子的叠氮烷基 ； (17) 醛基 ； (18)( 醛基 ) 烷基， 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； (19)3-8 个碳原子的环烷基 ； (20) 烷环烷基， 其中环烷基为 3-8 个碳原子， 亚烷基 (alkylene) 为 1-10 个碳原子 ； (21) 卤素 ； (22)1-6 个碳原子的卤烷 基； (23) 杂环基 ； (24)( 杂环 ) 氧基 ； (25)( 杂环 ) 酰基 ； (26) 羟基 ； (27)1-6 个碳原子的羟 烷基 ； (28) 硝基 ； (29)1-6 个碳原子的硝烷基 ； (30)N- 保护基 ； (31)N- 保护的氨烷基， 其中 亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； (32) 氧代 ； (33)1-6 个碳原子的硫代烷氧基 ； (34) 硫 A 烷氧烷基， 其中烷基及亚烷基 (alkylene) 各自为 1-6 个碳原子 ； (35)-(CH2)qCO2R ， 其中 q 为 A 0-4 的整数， R 选自以下构成的组 ： (a) 烷基、 (b) 芳基、 (c) 烷芳基、 及 (d) 氢， 其中亚烷基 B C B (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； (36)-(CH2)qCONR R ， 其中 q 为 0-4 的整数， R 及 RC 分别独立 选自以下构成的组 ： (a) 氢、 (b) 烷基、 (c) 芳基、 及 (d) 烷芳基， 其中亚烷基 (alkylene) 为 D D 1-6 个碳原子 ； (37)-(CH2)qSO2R ， 其中 q 为 0-4 的整数， R 选自以下构成的组 ： (a) 烷基、 (b) E F 芳基及 (c) 烷芳基， 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； (38)-(CH2)qSO2NR R ， 其中 q E F 为 0-4 的整数， R 及 R 分别独立选自以下构成的组 ： (a) 氢、 (b) 烷基、 (c) 芳基、 及 (d) 烷 G H 芳基， 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； (39)-(CH2)qNR R ， 其中 q 为 0-4 的整数， RG 及 RH 分别独立选自以下构成的组 ： (a) 氢 ； (b)N- 保护基 ； (c)1-6 个碳原子的烷基 ； (d)2-6 个碳原子的亚烷基 (alkenyl) ； (e)2-6 个碳原子的炔基 ； (f) 芳基 ； (g) 烷芳基， 其中亚烷基 (alkylene) 为 1-6 个碳原子 ； (h)3-8 个碳原子的环烷基 ； 及 (i) 烷环烷基， 其中环烷基为 3-8 个碳原子， 亚烷基 (alkylene) 为 1-10 个碳原子， 前提是， 没有两个基团以羰基或磺酰基 连接至氮原子 ； (40) 硫醇基 ； (41) 全氟烷基 ； (42) 全氟烷氧基 ； (43) 芳氧基 ； (44) 环烷氧 基； (45) 环烷基烷氧基 ； 及 (46) 芳烷氧基。
本文中交互使用的术语 “环烷基氧基” 或 “环烷氧基” 表示如本文定义的环烷基， 以氧原子连接至母分子基。未取代的环烷氧基例如为 3-8 个碳原子。
本文中使用的术语化合物的 “有效量” ， 表示足以产生有效或希望的结果 ( 例如临 床结果 ) 的量， 同样地， “有效量” 依赖于所施用的情境。例如， 在给予 NOS 抑制剂的药剂的 情境中， 药剂有效量为， 相比于未给予该药剂的反应， 例如足以达到 NOS 活性降低的量。
本文使用的术语 “卤素” 或 “卤” 表示溴、 氯、 碘、 或氟。
本文使用的术语 “杂芳基” 表示如上定义的为芳族的杂环子集， 即在单环或多环系 统中含有 4n+2 个 pi 电子。
本文中交互使用的术语 “杂环”或 “杂环基”表示 5、 6、 7 元环， 除非另外限定，包 括 1、 2、 3 或 4 个 杂 原 子， 独 立 选 自 氮、 氧 及 硫 原 子 构 成 的 组。5- 元 环 具 有 0-2 个 双 键， 6、 7- 元 环 具 有 0-3 个 双 键。 术 语 杂 环 基 “也 表 示 为 杂 环 化 合 物， 具有桥接的多环 结构， 其中一个或多个碳原子和 / 或杂原子桥接单环中的 2 个非相邻成员， 例如奎宁 环 基 (quinuclidinyl)。 术 语 “杂 环”包 括 双 环、 三 环 及 四 环 基 团， 其中任何一种上述 的杂环与 1、 2 或 3 个环稠合 (fuse)， 例如芳环、 环己烷环、 环己烯环、 环戊烷环、 环戊烯 环、 及另一种单环杂环， 例如吲哚基 (indolyl)、 喹啉基 (quinolyl)、 异喹啉基、 四氢喹 啉 基、 苯 并 呋 喃 基 (benzofuryl)、 苯 并 噻 吩 基 (benzothienyl) 等。 稠 合 的 杂 环 的 实 例 包 括 托 品 烷 (tropane) 及 1， 2， 3， 5， 8， 8a- 六 氢 吲 嗪 (indolizine)。 杂 环 包 括 吡 咯 基 (pyrrolyl)、 吡 咯 啉 基 (pyrrolinyl)、 吡 咯 烷 基 (pyrrolidinyl)、 吡 唑 基 (pyrazolyl)、 吡 唑 啉 基 (pyrazolinyl)、 吡 唑 烷 基 (pyrazolidinyl)、 咪 唑 基 (imidazolyl)、 咪唑啉基 (imidazolinyl)、 咪唑烷基 (imidazolidinyl)、 吡啶基 (pyridyl)、 哌啶基 (piperidinyl)、 高 哌 啶 基 (homopiperidinyl)、 吡 嗪 基 (pyrazinyl)、 哌 嗪 基 (piperazinyl)、 嘧啶基 (pyrimidinyl)、 哒嗪基 (pyridazinyl)、 噁唑基 (oxazolyl)、 噁唑烷基 (oxazolidinyl)、 异 噁 唑 基 (isoxazolyl)、 异 噁 唑 烷 基 (isoxazolidiniyl)、 吗 啉 基 (morpholinyl)、 硫 代 吗 啉 基 (thiomorpholinyl)、 噻 唑 基 (thiazolyl)、 噻 唑 烷 基 (thiazolidinyl)、 异噻 唑 基 (isothiazolyl)、 异 噻 唑 烷 基 (isothiazolidinyl)、 吲 哚 基 (indolyl)、 喹啉基 (quinolinyl)、 异喹啉基 (isoquinolinyl)、 苯并咪唑基 (benzimidazolyl)、 苯并噻唑基 (benzothiazolyl)、 苯 并 噁 唑 基 (benzoxazolyl)、 呋 喃 基 (furyl)、 噻 吩 基 (thienyl)、 噻 唑 烷 基 (thiazolidinyl)、 异 噻 唑 基 (isothiazolyl)、 异 吲 唑 酰 基 (isoindazoyl)、 三 唑 基 (triazolyl)、 四 唑 基 (tetrazolyl)、 噁 二 唑 基 (oxadiazolyl)、 优 利 基 ( 尿 苷 基， uricyl)、 噻二唑基 (thiadiazolyl)、 嘧啶基 (pyrimidyl)、 四氢呋喃基、 二氢呋喃基、 四 氢噻吩基 (tetrahydrothienyl)、 二氢噻吩基、 二氢吲哚基、 四氢喹啉基、 四氢异喹啉基、 吡 喃 基 (pyranyl)、 二 氢 吡 喃 基、 二 噻 唑 基、 苯 并 呋 喃 基 (benzofuranyl)、 苯并噻吩基 (benzothienyl) 等。杂环基还包括下式的基团
其中， F’ 选自 -CH2-、 -CH2O- 及 -O- 构成的组， G’ 选自 -C(O)- 及 -(C(R′ )(R” )) 其中， R’ 及 R” 分别独立选自氢或 1-4 个碳原子的烷基构成的组， v 为 1-3， 包括 v- 构成的组， 例如 1， 3- 苯并二氧基 (benzodioxolyl)、 1， 4- 苯并二噁烷基 (benzodioxanyl) 等的基团。 本文所述任何杂环基可选由 1、 2、 3、 4 或 5 个取代基取代， 该取代基独立选自以下基团构成 的组 ： (1)1-6 个碳原子的烷酰基 ； (2)1-6 个碳原子的烷基 ； (3)1-6 个碳原子的烷氧基 ； (4) 烷氧烷基， 其中该烷基及亚烷基 (alkylene group) 独立为 1-6 个碳原子 ； (5)1-6 个碳原子 的烷亚磺酰基 ； (6) 烷亚磺酰基烷基， 其中该烷基及亚烷基 (alkylene group) 独立为 1-6 个 碳原子 ； (7)1-6 个碳原子的烷磺酰基 ； (8) 烷磺酰基烷基， 其中该烷基及亚烷基 (alkylene
group) 独立为 1-6 个碳原子 ； (9) 芳基 ； (10) 氨基 ； (11)1-6 个碳原子的氨烷基 ； (12) 杂芳 基； (13) 烷芳基， 其中亚烷基 (alkylene group) 为 1-6 个碳原子 ； (14) 芳酰基 ； (15) 叠氮 基； (16)1-6 个碳原子的叠氮烷基 ； (17) 醛基 (carboxaldehyde) ； (18)( 醛基 ) 烷基， 其中亚 烷基 (alkylene group) 为 1-6 个碳原子 ； (19)3-8 个碳原子的环烷基 ； (20) 烷环烷基， 其中环烷基为 3-8 个碳原子， 亚烷基 (alkylene group) 为 1-10 个碳原子 ； (21) 卤素 ； (22)1-6 个碳原子的卤烷基 ； (23) 杂环基 ； (24)( 杂环 ) 氧基 ； (25)( 杂环 ) 酰基 ； (26) 羟基 ； (27)1-6 个碳原子的羟烷基 ； (28) 硝基 ； (29)1-6 个碳原子的硝烷基 ； (30)N- 保护的氨基 ； (31)N- 保 护的氨烷基， 其中亚烷基 (alkylene group) 为 1-6 个碳原子 ； (32) 氧代 ； (33)1-6 个碳原 子的硫代烷氧基 ； (34) 硫代烷氧烷基， 其中烷基及亚烷基 (alkylene group) 独立为 1-6 个 A 碳原子 ； (35)-(CH2)qCO2R ， 其中 q 为 0-4 的整数， RA 选自以下构成的组 ： (a) 烷基、 (b) 芳基、 (c) 烷芳基、 及 (d) 氢， 其中亚烷基 (alkylene group) 为 1-6 个碳原子 ； (36)-(CH2)qCONRBRC， 其中 q 为 0-4 的整数， RB 及 RC 分别独立选自以下构成的组 ： (a) 氢、 (b) 烷基、 (c) 芳基、 及 D (d) 芳烷基， 其中亚烷基 (alkylene group) 为 1-6 个碳原子 ； (37)-(CH2)qSO2R ， 其中 q 为 D 0-4 的整数， R 选自以下构成的组 ： (a) 烷基、 (b) 芳基及 (c) 烷芳基， 其中亚烷基 (alkylene E F group) 为 1-6 个碳原子 ； (38)-(CH2)qSO2NR R ， 其中 q 为 0-4 的整数， RE 及 RF 分别独立选自 以下构成的组 ： (a) 氢、 (b) 烷基、 (c) 芳基、 及 (d) 芳烷基， 其中亚烷基 (alkylene group) G H 为 1-6 个碳原子 ； (39)-(CH2)qNR R ， 其中 q 为 0-4 的整数， RG 及 RH 分别独立选自以下构成 的组 ： (a) 氢 ； (b)N- 保护基 ； (c)1-6 个碳原子的烷基 ； (d)2-6 个碳原子的烯基 (alkenyl) ； (e)2-6 个碳原子的炔基 ； (f) 芳基 ； (g) 烷芳基， 其中亚烷基 (alkylene group) 为 1-6 个碳 原子 ； (h)3-8 个碳原子的环烷基 ； 及 (i) 烷基环烷基， 其中环烷基为 3-8 个碳原子， 亚烷基 (alkylene group) 为 1-10 个碳原子， 其中在一个实施例中， 没有两个基团以羰基或磺酰基 连接至氮原子 ； (40) 硫醇基 ； (41) 全氟烷基 ； (42) 全氟烷氧基 ； (43) 芳氧基 ； (44) 环烷氧 基； (45) 环烷基烷氧基 ； 及 (46) 芳烷氧基。
本文使用的术语 “( 杂环 ) 氧基” 表示如前述定义的杂环基以氧原子连接至母分子 本文使用的术语 “( 杂环 ) 酰基” 表示如前述定义的杂环基以羰基连接至母分子基。
基。 本文使用的术语 “羟基” 表示 -OH 基。
本文使用的术语 “羟烷基” 表示如前述定义的烷基以 1-3 个羟基取代， 前提是不超 过 1 个羟基可连接于烷基的单一碳原子， 例如羟甲基、 二羟丙基等。
本文使用的术语 “N- 保护的氨基” 表示如前述定义的氨基连接于如下定义的 N- 保 护基。
本文使用的术语 “N- 保护基”表示倾向保护氨基的基团， 防止合成过程中不希 望的反应发生。一般使用的 N- 保护基披露于 Greene， Protective Groups in Organic rd New York， 1999)， 在此并入作为参考。N- 保 Synthesis， 3 Edition(John Wiley & Sons， 护基包括酰基、 芳酰基、 或氨基甲酰基 (carbamyl)， 例如甲酰基、 乙酰基、 丙酰基、 三甲 基乙酰基、 叔丁基乙酰基、 2- 氯乙酰基、 2- 溴乙酰基、 三氟乙酰基、 三氯乙酰基、 酞酰基 (phthalyl)、 o- 硝基苯氧基乙酰基、 α- 氯丁酰基、 苯酰基、 4- 氯苯酰基、 4- 溴苯酰基、 4- 硝基苯酰基、 及助剂附属物， 例如保护或未保护的 D-、 L-、 或 D， L- 氨基酸， 例如丙氨 酸 (alanine)、 亮 氨 酸 (leucine)、 苯 丙 氨 酸 (phenylalanine) 等 ； 磺 酰 基， 例如苯磺酰 基、 对甲苯磺酰基等 ； 氨基甲酸酯形成基， 例如苄氧基羰基 (benzyloxycarbonyl)、 p- 氯 苄氧基羰基、 p- 甲氧基苄氧基羰基、 p- 硝基苄氧基羰基、 2- 硝基苄氧基羰基、 p- 溴苄氧 基羰基、 3， 4- 二甲氧基苄氧基羰基、 3， 5- 二甲氧基苄氧基羰基、 2， 4- 二甲氧基苄氧基羰
基、 4- 甲氧基苄氧基羰基、 2- 硝基 -4， 5- 二甲氧基苄氧基羰基、 3， 4， 5- 三甲氧基苄氧基羰 基、 1-(p- 二苯基 )-1- 甲基乙氧基羰基、 α， α- 二甲基 -3， 5- 二甲氧基苄氧基羰基、 二 苯甲氧基羰基 (benzhydryloxy carbonyl)、 t- 丁氧基羰基、 二异丙基甲氧基羰基、 异丙氧 基羰基、 乙氧基羰基、 甲氧基羰基、 烯丙氧基羰基、 2， 2， 2- 三氯乙氧基羰基、 苯氧基羰基、 4- 硝基苯氧基羰基、 芴基 (fluorenyl)-9- 甲氧基羰基、 环戊氧基羰基、 金刚烷氧基羰基 (adamantyloxycarbonyl)、 环己氧基羰基、 苯基硫羰基等， 芳烷基例如苯甲基、 三苯甲基、 苄 氧基甲基等， 及硅烷基例如三甲基硅烷基等。优选的 N- 保护基为甲酰基、 乙酰基、 苯甲酰 基、 三甲基乙酰基 (pivaloyl)、 t- 丁基乙酰基、 丙氨酸、 苯磺酰基、 苯甲基、 t- 丁氧基羰基 (Boc)、 及苯甲氧基羰基 (Cbz)。
本文使用的术语 “硝基” 表示 -NO2 基。
本文使用的术语 “氧代” 表示＝ O。
本文使用的术语 “全氟烷基” 表示烷基， 如前定义， 其中连接至该烷基的每个氢原 子均被氟原子取代。全氟烷基例如为三氟甲基、 五氟乙基等。
本文使用的术语 “全氟烷氧基” 表示烷氧基， 如前定义， 其中连接至该烷氧基的每 个氢原子均被氟原子取代。
本文使用的术语 “药物组合物” 表示组合物包括本文所述的化合物 ( 例如任一 (1) ～ (33) 化合物及式 (I) 化合物 )， 其与药用赋形剂配制， 并典型地制备或以政府管理的 代理商证明销售， 作为部分治疗法用于治疗哺乳动物疾病。药物组合物可配制用于， 例如 单一剂型的口服给予 ( 例如片剂、 胶囊、 囊片 (caplet)、 囊锭 (gelcap)、 或糖浆 ) ； 局部给予 ( 例如霜、 胶、 乳液或油膏 ) ； 静脉给予 ( 例如无特定栓 (emboli) 的无菌溶液及适合静脉使 用的溶剂系统 ) ； 或任何本文所述的其他剂型。
本文使用的术语 “药用赋形剂” 表示除前述化合物以外的任何成分 ( 例如可悬浮 或溶解该活性化合物的载体 (vehicle， 赋形剂 ))， 以及在患者体内具有无毒及非炎特性 的成分。赋形剂可包括例如抗附着剂、 抗氧化剂、 粘结剂、 涂层剂、 压缩助剂、 崩解剂、 染料 ( 颜料 )、 软化剂、 乳化剂、 填充剂 ( 稀释剂 )、 成膜剂或涂层剂、 调味剂、 香料、 助流剂 ( 流 动促进剂 )、 润滑剂、 防腐剂、 印刷油墨、 吸收剂、 悬浮或分散剂、 甜味剂、 或水合水 (waters of hydration)。示例性赋形剂包括但不限于丁基化羟基甲苯 (BHT)、 碳酸钙、 磷酸钙 ( 二 碱 )、 硬脂酸钙、 交联羧甲基纤维素 (croscarmellose)、 交联的聚乙烯吡咯烷酮、 柠檬酸、 交联聚维酮 (crospovidone)、 半胱氨酸、 乙基纤维素、 明胶、 羟丙基纤维素、 羟丙基甲基 纤维素、 乳糖、 硬脂酸镁、 麦芽糖醇、 甘露糖醇、 甲硫氨酸、 甲基纤维素、 对羟基苯甲酸甲酯 (methyl paraben)、 微晶纤维素、 聚乙二醇、 聚乙烯吡咯烷酮、 聚维酮 (povidone)、 预胶凝 化淀粉、 对羟基苯甲酸丙酯 (propyl paraben)、 视黄素棕榈酸酯 ( 棕榈酸视黄酯， retinyl palmitate)、 虫胶 (shellac)、 二氧化硅、 羧甲基纤维素钠、 柠檬酸钠、 羟基乙酸淀粉钠、 山梨 糖醇、 淀粉 ( 玉米 )、 硬脂酸、 硬脂酸、 蔗糖、 滑石、 二氧化钛、 维生素 A、 维生素 E、 维生素 C、 及 木糖醇。
本文使用的术语 “药用前药” 表示本发明化合物的前药 (prodrug)， 在深度医学判 断 (sound medical judgement) 范畴中， 前述前药适合用于与人及动物组织接触而不具有 过度的毒性、 刺激、 过敏反应等， 具有合理的受益 / 风险比例， 有效于其预期的使用， 如果可 能， 也包括本发明化合物的两性离子形式 (zwitterionic form)。本文使用的术语 “药用盐” 表示在深度医学判断范畴中， 前述盐适合用于与人及动 物组织接触而不具有过度的毒性、 刺激、 过敏反应等， 具有合理的受益 / 风险比例。药用盐 在该技术领域中已熟知。例如药用盐描述于 ： Berge et al.， J.Pharmaceutical Sciences 66 ： 1-19， 1977 and in Pharmaceutical Salts ： Properties， Selection， and Use， (Eds. P.H.Stahl and C.G.Wermuth)， Wiley-VCH， 2008.。这些盐可在本发明化合物最后分离及 纯化时原位制备或与游离碱基及适当有机酸的反应分别制备。代表性酸加成盐包括乙酸 盐、 己二酸盐、 藻酸盐、 败血酸盐、 天冬氨酸盐、 苯磺酸盐、 苯甲酸盐、 重硫酸盐、 硼酸盐、 丁酸 盐、 樟脑酸盐、 樟脑磺酸盐、 柠檬酸盐、 环戊烷丙酸盐、 二葡糖酸盐、 十二烷硫酸盐、 乙烷磺酸 盐、 富马酸盐、 葡糖庚酸盐、 甘油磷酸盐、 半硫酸盐、 庚酸盐、 己酸盐、 氢溴酸盐、 盐酸盐、 氢碘 酸盐、 2- 羟基 - 乙烷磺酸盐、 乳糖酸盐、 乳酸盐、 月桂酸盐、 月桂基硫酸盐、 苹果酸盐、 马来酸 盐、 丙二酸盐、 甲烷磺酸盐、 2- 萘磺酸盐、 尼古丁酸盐、 硝酸盐、 油酸盐、 草酸盐、 棕榈酸盐、 棕 榈酰酸盐 (pamoate)、 果胶酸盐、 过硫酸盐、 3- 苯基丙酸盐、 磷酸盐、 苦味酸盐、 三甲基醋酸 盐、 丙酸盐、 硬脂酸盐、 琥珀酸盐、 硫酸盐、 酒石酸盐、 硫氰酸盐、 甲苯硫酸盐、 十一酸盐、 戊酸 盐等。 代表性碱金属或碱土金属盐包括钠、 锂、 钾、 钙、 镁等， 及无毒铵、 季铵、 及胺阳离子， 包 括但不限于铵、 四甲基铵、 四乙基铵、 甲基胺、 二甲基胺、 三甲基胺、 三乙基胺、 乙基胺等。
本文使用的术语 “药用溶剂化物” 或” 溶剂化物 (solvate)” 表示适当溶剂的分子 加入本发明的化合物的晶格中。适当溶剂在剂量给予时为生理可耐受的。例如溶剂化物可 由结晶、 再结晶、 或自溶液中沉淀而制备， 其包括有机溶剂、 水、 或其混合物。适当的溶剂的 实例有乙醇、 水 ( 例如单、 二、 三水合物 )、 N- 甲基吡咯烷酮 (NMP)、 二甲基亚砜 (DMSO)、 N， N’ - 二甲基甲酰胺 (DMF)、 N， N’ - 二甲基乙酰胺 (DMAC)、 1， 3- 二甲基 -2- 咪唑啉酮 (DMEU)、 1， 3- 二甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2-(1H)- 嘧啶酮 (DMPU)、 乙腈 (ACN)、 丙二醇、 乙酸乙酯、 苯甲 醇、 2- 吡咯烷酮、 苯甲酸苄酯等。当水为溶剂时， 溶剂化物称为 “水合物” 。
本文使用的术语 “Ph” 为苯基。
本文使用的术语 “预防” 表示预防性处理或处理以预防本文所述的疾病 ( 例如急 性疼痛、 慢性疼痛、 发炎性疼痛、 神经性疼痛、 严重疼痛、 癌性疼痛、 偏头痛 ( 具有或不具有 预兆或触觉痛 ) 或慢性紧张型头痛 ) 的一种以上的疾病、 失调或症状。 预防性处理可开始于 例如在疾病、 失调或症状发作之前的事件 ( 例如暴露于偏头痛触发点、 疼痛的其它原因、 或 致病菌 ) 之前 (“暴露前的预防” ) 或之后 (“暴露后的预防” )。预防性处理包括给予本发 明的化合物、 或其药物组合物， 可为急性、 短期或慢性的。给予剂量可在预防处理流程中变 化。 也参见 ： Kaniecki et al.“ ，Treatment of Primary Headache ： Preventive Treatment of Migraine.” In ： Standards of Care for Headache Diagnosis and Treatment. Chicago(1L) ： National Headache Foundation ； 2004.p.40-52.。
本文使用的术语 “前药” 表示化合物快速在体内转化成上式母体化合物 ( 例如 式 (I) 化合物及化合物 (1)-(33))， 例如在血液中水解。本发明的化合物前药可为常用酯 类。一些用作前药的一般酯类为苯酯、 脂族 (C7-C8 或 C8-C24) 酯、 胆固醇酯、 乙酰氧基甲酯、 氨基甲酸酯、 及氨基酸酯。例如， 本发明的化合物包括 OH 基， 在其前药形式中， 在该位置 上本发明的化合物被酰化。完整的讨论描述于 ： T.Higuchi and V.Stella， Pro-drugs as Novel Delivery Systems， Vol.14 of the A.C.S.Symposium Series， Edward B.Roche， ed.， Bioreversible Carriers in Drug Design， American Pharmaceutical Associationand Pergamon Press， 1987，及 Judkins et al.， Synthetic Communications 26(23) ： 4351-4367， 1996， 在此并入作为参考。本发明的化合物的前药优选为药用前药。
“选择性抑制 nNOS” 或 “选择性 nNOS 抑制剂” 均表示相比于 eNOS 和 / 或 iNOS 异 构体在体外分析的结果 ( 例如下述的分析法 )， 更有效抑制或结合 nNOS 异构体的物质。选 择性抑制可由 IC50 值、 Ki 值或百分比抑制的相反值来表示， 当该物质在 nNOS 分析中测试比 在 eNOS 和 / 或 iNOS 分析中测试时， 其为较低的％抑制率或反向地较高的％抑制率。 该 IC50 值或 Ki 值优选低 2 倍。该 IC50 值或 Ki 值更优选低 5、 10、 50 倍或甚至超过 100 倍。
本文使用的术语 “螺环 (spirocycle)”表示亚烷二基 (alkylene diradical)， 两端均连接至母体基团的相同碳原子， 形成螺环基， 还表示杂亚烷二基 (heteroalkylene diradical)， 两端均连接至相同原子。
本文使用的术语 “磺酰基” 表示 -S(O)2- 基。
本文使用的术语 “硫代烷芳基” 表示硫代烷氧基被芳基取代。
本文使用的术语 “硫代烷杂环基” 表示硫代烷氧基被杂环基取代。
本文使用的术语 “硫代烷氧基” 表示烷基以硫原子连接于母体分子基。示例性未 取代的硫代烷氧基为 1-6 个碳原子。
术语 “硫醇基” 表示 -SH 基。
如本文所述及该技术领域中熟知的， “治疗” 为一种获得有利或希望的结果 ( 例如 临床结果 ) 的方法。有利或希望的结果可包括但不限于减轻或消除一种以上的疾病或病 症； 疾病、 失调或症状程度消失 ； 疾病、 失调或症状的稳定 ( 即不恶化 ) 状态 ； 疾病、 失调或 症状散播的预防 ； 疾病、 失调或症状进展的延迟或缓慢进行 ； 疾病、 失调或症状的消灭或缓 和； 及消失 ( 部分或全部 )， 不论可检测或不可检测。 “治疗” 也可表示相比于未接受治疗的 预期存活寿命而延长生命。 “缓和” 一疾病、 失调或症状表示相比于无该治疗的疾病程度或 时程， 该疾病、 失调或症状的程度和 / 或不希望的临床表现减轻和 / 或进展的时程变慢或延 长。
由以下详细说明、 附图及权利要求， 本发明的其它特征及优点将变得明显。 附图说明 图 1 显示 Chung 神经性疼痛模式中测试热痛觉过敏的流程。L5/L6 脊髓神经经外 科手术结扎 (ligate)， 使动物复原 7-10 天。此期间内动物发展神经性疼痛。在用于与手 术前基线水平 (BL) 比较的诱导期之后， 测量红外线热刺激后 (SNL 后 ) 的掌缩回时间 ( 掌 缩回潜伏期， paw withdrawal latency) 的缩短。给予药物后， 测量多个时间点的热痛觉过 敏。
图 2 显示 Chung 神经性疼痛模式中测试机械性异常性疼痛的方法。L5/L6 脊髓神 经经外科手术结扎， 使动物复原 7-10 天。此期间内动物发展神经性疼痛。在用于与手术前 基线水平 (BL) 比较的诱导期之后， 测量触觉阈值 (SNL 后 ) 的减少。给予药物后， 以校准的 von-Frey 丝 (von-Frey filaments) 测量多个时间点的触觉异常性疼痛。
图 3 显示神经性疼痛的 L5/L6 脊髓神经结扎模式 (Chung 模式 ) 中， 腹腔内给予化 合物 (8)(30mg/kg) 后大鼠的热痛觉过敏的回复 (reversal)。
图 4 显示 L5/L6 脊髓神经结扎 (Chung 模式 ) 后的大鼠， 腹腔内给予化合物 (8)
(30mg/kg 剂量 ) 后对大鼠触觉异常性疼痛回复的效应。
图 5 显示偏头痛硬膜炎模式中给予化合物 (8)(30mg/kg p.o.) 的抗异常性疼痛效 应。
图 6 显示炎性痛的角叉胶 ( 卡拉胶， Carrageenan) 模式中给予化合物 (8)(60、 100、 或 200mg/kg， p.o.) 后的机械性异常性疼痛的回复。
图 7 显示炎性痛的角叉胶模式中给予化合物 (8)(60、 100、 或 200mg/kg， p.o.) 后 的热痛觉过敏的回复。 具体实施方式
本发明的特征为具有一氧化氮合成酶 (nNOS) 抑制活性的新型苯并噁嗪、 苯并噻 嗪及其相关化合物， 含有它们的医药及诊断组合物， 以及它们的医药用途。 本发明的例示化 合物如表 2 所示。
表2
对合成本发明化合物的例示方法描述如下。
制备本发明化合物的方法
本发明的化合物可类似该技术领域中建立的步骤制备， 例如经流程图 1-5 所示的 反应顺序。此流程图中的编号不必对应于本说明书或权利要求中的编号。
式 C 化合物可在标准烷基化条件下使式 A 化合物与式 B 化合物、 或其适当保护的 衍生物反应而制备， “LG” 表示离去基， 例如氯、 溴、 碘、 或磺酸基 ( 如甲磺酸基、 甲苯磺酸基、 或三氟甲磺酸基 (triflate))。使式 A 化合物与式 B 化合物烷基化的条件包括在溶剂存在 或不存在下， 优选在适当溶剂存在下， 例如 DMF， 可选在适当碱存在下， 例如碳酸钾或碳酸钠 或氢化钠， 加热式 A 化合物及式 B 化合物 ( 见流程图 1)。
流程图 1
式 D 化合物可在流程图 1 的标准条件下由式 C 化合物或适当的保护衍生物上的硝 基还原而制备。一个实施例中， 标准的还原条件包括在回流温度下使用极性溶剂 ( 例如甲 醇 ) 中的雷尼镍 (Raney Nickel)。 可替换地， 式 D 化合物可由乙醇、 或其它溶剂或溶剂的组 合中的适当催化剂 ( 例如钯碳 )， 使式 C 化合物氢化而制备。如流程图 1 所示， 式 F 化合物 可根据先前步骤由式 E 化合物与式 D 化合物反应而制备 (US 专利公开 No.20060258721A1， 在此并入供参考 )。
可替换地， 式 K 化合物与式 H 化合物及式 I 化合物在标准烷基化条件的反应有关， 如流程图 2， 其中式 K 化合物的 R1 为 (CH2)nX1， 该 X1 为
R1A、 R1B、 R1C、 R1D、 Y1 为 CH2、 O、 S、 NR1， n1、 p1、 及 q1 如实施例定义 ； 式 H 化合物的 LG 为适当的离去基， 例如氯、 溴、 碘、 或磺酸基 ( 如甲磺酸基、 甲苯磺酸基、 或三氟甲磺酸基 (triflate))。 当 LG 为醛基或酮基时， 标准还原胺化条件 ( 例如 Abdel-Maiid et al.J.Org. Chem.61 ： 3849-3862， 1996) 可使用在醇溶剂 ( 例如乙醇 ) 中的适当还原剂， 例如 NaBH4、 NaBH(OAc)3、 NaCNBH4 和类似物， 以制备化合物 J。还原胺化可在一反应中进行， 或者在原位 混合式 H 化合物与式 I 化合物预先形成亚胺， 之后以适当还原剂依序还原。化合物 J 经硝 基还原转换成化合物 K， 之后再如流程图 1 的类似步骤进行酰胺化。
流程图 2
式 L 化合物由式 D 化合物以氢化铝锂在非质子溶剂中酰胺还原反应制备 ( 流程图 3)。可替换地， 化合物 L 可使用适当还原剂 ( 例如 BH3) 还原。这些化合物然后如流程图 1 与试剂 E 结合 (couple)， 转换成式 M 化合物。
流程图 3
通式 P 化合物可由化合物 N 及通式 O 化合物在标准还原胺化条件下制备 ( 流 程图 4； Abdel-Maiid et al.J.Org.Chem.61 ： 3849-3862， 1996)。 通 式 R 化 合 物 可 由 已 知 的 步 骤 经 通 式 P 化 合 物 的 芳 族 卤 化 反 应 制 备 ( 例 如 de laMare， “Electrophilic Halogenation， ” Cambridge University Press， Cambridge(1976))。优选的条件包括使 通式 P 化合物与 N- 溴化琥珀酰亚胺在中性条件下反应。式 S 化合物可由在适当氨等同物 ( 例如二苯甲酮亚胺 (benzophenone imine)、 LiN(SiMe3)2、 Ph3SiNH2、 NaN(SiMe3)2、 或酰胺 锂 (Huang and Buchwald， Org.Lett.3(21) ： 3417-3419， 2001)) 中使式 R 化合物经金属催 化的胺化反应制备， 化合物 R 的 X 为氯、 溴、 碘 (Wolfe et al.J.Org.Chem.65 ： 1158-1174， 2000)。 优选的卤素为溴， 在钯 (0) 或钯 (II) 催化剂存在下。 适当的金属催化剂的实例包括 与适当配体 (ligand) 配合的钯催化剂。 钯的适当配体可非常不同， 可包括 4， 5- 双 ( 二苯基 膦基 )-9， 9- 二甲基氧杂蒽 (XantPhos)、 2， 2′ - 双 ( 二苯基膦基 )-1， 1′ - 二萘 (BINAP)、 双 (2- 二苯基膦基苯基 ) 醚 (DPEphos)、 1， 1 ′ - 双 ( 二苯基膦基 ) 二茂铁 (ferrocene) (dppf)、 1， 2- 双二苯基膦基丁烷 (dppb)、 1， 3- 双 ( 二苯基膦基 ) 丙烷 (dPPP)、 (o- 二苯 基 )-P(t-Bu)2、 (o- 二苯基 )-P(Cy)2、 P(t-Bu)3、 P(Cy)3 及其它 ( 例如 Huang and Buchwald， Org.Lett.3(21) ： 3417-3419， 2001)。优选的配体为 P(t-Bu)3。钯催化的胺化反应在室温至 回流温度间， 在适当溶剂中进行， 例如 THF、 二噁烷、 甲苯、 二甲苯、 DME 等。化合物 S 转换成 化合物 T 在流程图 1 的条件下进行。
流程图 4
式 V 化合物可由化合物 U 与化合物 O( 流程图 5) 在如流程图 4 所述的标准还原胺 化条件下制备， 化合物 V 的 hal ＝ F、 Cl、 Br 或 I。当 hal ＝ F 或 Cl 时， 式 z 化合物可由式 V 化合物在碱性条件下与 W 反应制备。适当碱例如 K2CO3， 在适当溶剂中例如 DMF。一些情形 下， 此转换反应可能需要加热。可替换地， 当 hal ＝ Cl、 Br、 或 I 时， 化合物 Z 可由化合物 V 与 W 经过渡金属催化反应制备。 优选的条件涉及使用钯催化剂， 例如 Pd(OAc)2 或 Pd2(dba)3， t 及膦配体例如 Josiphos 或 CyPF Bu(Hartwig， Acc.Chem.Res.， 2008， 41， 1534)。采用标准条
件， 化合物 z 的羟基可转换成 LG， 例如氯、 溴、 碘、 或磺酸基 ( 如甲磺酸基、 甲苯磺酸基、 或三 氟甲磺酸基 (triflate))， 形成通式 Y 化合物。优选的离去基为碘， 可由三苯基膦及碘在适 当溶剂如 THF 中制备。化合物 Y 可经与碱如 K2CO3 在适当溶剂如 DMF 中加热， 转环化成化合 物 Z。式 Z 化合物可经硝基还原、 再经如流程图 1 所述的脒结合 (amidine coupling) 而转 换成本发明化合物 A1。
流程图 5
一些情况中， 上述化学式可被修饰， 例如使用保护基避免因反应基， 例如连接的 取代基造成的副反应 (side reaction)。此可由常规保护基的方式实现 ( 如 Protective Groups in Organic Chemistry， McOmie， Ed.， Plenum Press， 1973 and in Greene and Wuts， Protective Groups in Organic Synthesis， John Wiley & Sons， 3rd Edition， 1999 中所描述的 )。
本发明的化合物及制备本发明化合物的中间产物可使用习知技术由其反应混合 物中分离及纯化 ( 如果需要时 )， 包括萃取、 层析法、 蒸馏、 及再结晶法。
可使用标准技术形成所希望的化合物盐类。 例如将中性化合物以适当溶剂中的酸 处理， 形成的盐经过滤、 萃取、 或任何其他适当方法分离。
本发明化合物的溶剂化物的形成可根据化合物及溶剂化物而异。一般而言， 溶剂 化物由将化合物溶于适当溶剂而形成， 并冷却或加入抗溶剂分离该溶剂化物。该溶剂化物 通常在大气条件下干燥或共沸化 (azeotroped)。
本发明化合物的光学异构体的制备可经适当的光学活性起始材料在不会造成外 消旋作用的反应条件下反应形成。可替换地， 个别对映异构体可使用标准技术经分离外消 旋混合物而分离， 例如分级结晶 (fractional crystallization) 或手性 HPLC。
本发明的放射标记的化合物可使用本领域中已知的标准方法制备。例如， 使用标 准技术将氚导入本发明化合物中， 例如使用氚气及催化剂将适当前体氢化形成本发明化合 物。可替换地， 含放射性碘的本发明化合物可由对应的三烷基锡 ( 优选为三甲基锡 ) 衍生 物使用标准碘化条件， 例如 [125I] 碘化钠在适当溶剂 ( 如二甲基甲酰胺 ) 中的氯胺 -T 存在 下制备。三烷基锡化合物可由对应的非放射性卤素 ( 优选为碘 ) 化合物使用标准钯催化的 锡化 (stannylation) 条件， 例如六甲基锡在惰性溶剂 ( 如二噁烷 ) 中的四 ( 三苯基膦 ) 钯 (0) 存在下及蒸发温度 ( 优选为 50-100℃ ) 下制备。
医药用途
本发明特征为本发明化合物的所有用途， 包括在治疗方法中的用途， 不论是单独 使用或与其它治疗物质组合使用， 其在用于抑制 NOS 活性的组合物中的用途， 例如 nNOS， 及 其在诊断分析中的用途， 及其作为研究工具的用途。
本发明的化合物具有有效的 NOS 抑制活性， 因此可用于治疗因 NOS 活性降低而减 轻的疾病或症状， 或降低该疾病或症状的风险。该疾病或症状包括其中一氧化氮的合成或 过度合成为造成该疾病或症状的贡献部份的疾病或症状。
数 据 显 示， 一 氧 化 氮 (NO) 的 角 色 为 神 经 传 递、 突 触 可 塑 性 (synaptic plasticity)、 中枢及周围神经系统的病理性疼痛的媒介物 (Snyder， Science 1992， 257 ： 494-496 ； Meller et al.， Pain 52 ： 127-136， 1993 ； Praset et al.， A.Prog.Neurobiol.64 ： 51-68， 2001 ； and Choi et al.， J.Neurol.Sci.138(1-2) ： 14-20， 1996)。 多 篇 动 物 模 型及基因敲除的研究推测， NO 及 nNOS 在敏感性痛 ( 如神经性疼痛 ) 的病理生物学中 (Choi et al.， J.Neurol.Sci.138(1-2) ： 14-20， 1996)， 及相关的行为反应， 如热痛觉过敏 (thermal hyperalgesia)(Meller et al.， Neurosci.50 ： 7-10， 1992 ； Yamamoto et al.， Anesthesiology 82 ： 1266-1273， 1995)、 及 机 械 性 异 常 性 疼 痛 (mechanical allodynia) 中 (Hao et al.Pain， 66 ： 313-319， 1996 ； Pan et al.， Anesthesiology 89(6) ： 1518-23， 1998)， 扮演重要角色。例如， 小鼠的脊髓神经损伤导致野生型的机械性超敏性发展， 但 在 nNOS 敲除鼠中却未产生 (Guan et al.， Mol.Pain， 3： 29， 2007)。同样地， 系统性或脑 脊髓膜内给予 NOS 抑制剂， 例如 L-NAME 或 7-NI， 可减少神经损伤所诱导的机械性超敏 性 (hypersensitivity)。 在 同 侧 L5 背 根 神 经 结 (dorsal root ganglion)7 天 后 神 经 (post-nerve) 损伤中， 该机械性超敏伴随 nNOS 蛋白质的表达增加， 但 eNOS、 iNOS 并不会因 此增加 (Guan et al.， Mol.Pain， 3： 29， 2007)。基因表达的研究显示， 调节 nNOS 酶活性的 蛋白 NIDD， 在神经性疼痛或炎性痛的大鼠模式中， 在脊髓及背根神经结 (DRG) 中为向上调 节 (Chen et al.J.Mol.Histol.39(2) ： 125-33， 2008)。在 Chung 神经性疼痛 ( 选择性神经结扎或 SNL) 的模式中， NOS 抑制剂， 例如 L-NAME， 可减少类似神经性疼痛的行为反应， 例 如机械性及冷觉异常性疼痛、 进行中的疼痛 (ongoing pain)(Yoon et al.， NeuroReport 9： 367-372， 1998)、 及 热 痛 觉 过 敏 ( 参 见 例 如 US 专 利 No.7,375,219 及 PCT 公 开 No.WO 2009/062318， 均并入作为参照 )。NOS 抑制剂在其它具有中枢敏化成份 (sensitization components) 的敏感疼痛状态中有效， 例如芬克里斯丁 (vincristine)( 化疗 ) 诱导的疼 痛 的 神 经 病 变 (Kamei et al.Pain.117(1-2) ： 112-20， 2005)、 完 全 弗 氏 佐 剂 (complete Frund’ s adjuvant)(CFA) 诱导的慢性炎性痛 (Chun et al.， Pain 119 ： 113-123， 2005)、 角叉胶 (carrageenan) 诱导的机械性及热痛觉过敏 (Handy et al.， Neuropharmacology 37 ： 37-43， 1998 ； Osborne et al.， Br.J.Pharmacol.126(8) ： 1840-1846， 1999)、 大肠内灌注 西莫森 (zymosan) 后的内脏痛觉过敏 (Coutinho et al.Eur.J.Pharmacol.429 ： 319-325， 2001)、 及疱疹后的异常性疼痛 (SasaKi et al.Neuroscience， 150(2) ： 459-466， 2007)。
因此， 本发明特征为一种治疗、 预防由 NOS 活性引起的疾病或症状或降低其风险 的方法， 包括给予需治疗或预防的细胞或动物有效量的本发明化合物。 该疾病或症状包括， 例如偏头痛 ( 有或无先兆 )、 慢性紧张型头痛 (CTTH)、 有异常性疼痛的偏头痛、 药物滥用的 头痛、 丛集性头痛 ； 神经性疼痛例如 AIDS 伴随的疼痛神经病变、 中枢中风后疼痛 (CPSP)、 慢性头痛、 糖尿病型神经病变、 化学治疗引发的神经性疼痛 ( 如紫杉醇 (paclitaxel)、 顺 铂 (cis-Platin)、 多柔比星 (Doxorubicin) 等 )、 疱疹后神经性疼痛、 三叉神经性疼痛 ； 慢 性炎性痛， 起因于骨关节炎、 风湿性关节炎、 僵直性脊椎炎、 银屑病关节炎、 未分化脊椎关节 病变、 反应性关节炎 ； 内脏痛 ； 神经炎症 ； 药物治疗引发的痛觉过敏和 / 或异常性疼痛， 例 如阿片类引发的痛觉过敏或曲普坦 (triptan)(5-HT1D/1B 激动剂 ) 引发的痛觉过敏和 / 或 异常性疼痛 ； 急性疼痛 ； 慢性疼痛 ； 糖尿病神经病变 ； 骨癌痛 ； 化学品依赖或成瘾， 如药物成 瘾、 吸食可卡因、 吸食尼古丁、 甲基苯丙胺引发的神经毒性、 酒精耐受性、 依赖性、 或脱瘾、 或 吗啡 / 阿片类引发的耐受性、 依赖、 痛觉过敏、 或脱瘾 ； CNS 疾病， 包括但不限于癫痫、 焦虑、 抑郁 ( 单一或组合 )、 注意力缺陷多动症 (ADHD)、 精神错乱、 或痴呆症 ； 神经退化疾病或神 经损伤， 如急性脊髓损伤、 AIDS 伴随的痴呆、 帕金森病 (Parkinson’ s disease)、 阿尔茨海 默症 (Alzheimer’ s disease)、 肌肉萎缩脊髓侧索硬化症 (ALS)、 亨廷顿病 (huntington’ s disease)、 多发性硬化、 神经毒性、 或头创伤 ； 心血管相关疾病， 例如中风、 冠状动脉旁路移 植 (CABG) 相关的神经受损、 体温过低心脏停止 (HCA)、 心源性休克、 再灌注损伤、 或血管性 痴呆 ； 或肠胃疾病， 例如回肠造口相关的痢疾 ； 或倾倒综合征 (dumping syndrome)。
以下说明为连结 NOS 抑制作用 ( 特别是 nNOS 或 nNOS 及 iNOS) 与一些疾病的摘要 及基础。
偏头痛 ( 有或无先兆 )
由 Asciano Sobrero 在 1847 年首度发现少量的硝基甘油 (NO 释放剂 ) 导致严重头 痛， 因此形成偏头痛的一氧化氮假设 (Olesen et al.， Cephalagia 15 ： 94-100， 1995)。 血清 胺 (serotonergic)5HT1D/1B 激动剂， 例如临床用于治疗偏头痛的舒马普坦 (sumatriptan)， 已 知 在 偏 头 痛 发 作 时 可 防 止 平 脑 (lissencephalic brain) 或 脑 皱 折 (gyrencephaic brain) 中皮质扩散的抑郁， 该过程导致 NO 广泛释放。的确已知在大鼠灌注三硝酸甘油后， 舒马普坦 (sumatriptan) 修饰该人工促进皮质 NO 浓度 (Read et al.， Brain Res.847 ： 1-8， 1999 ； ibid， 870(1-2) ： 44-53， 2000)。已观察到人体偏头痛的随机双盲临床试验中， 在单一静脉注射 L-NG 甲基精氨酸盐酸盐 (L-NMMA， NOS 抑制剂 ) 后有 67％反应速率。此效果 并非因为单一 eNOS 介导的血管收缩所造成， 因为中脑室内的经颅多普勒 (transcranial doppler) 确认速度无效 (Lassen et al.， Lancet 349 ： 401-402， 1997)。 近期因治疗急性偏 头痛所设计的调整临床试验中， 给予 5-180mg 剂量的选择性 iNOS 抑制剂 GW274150， 在治疗 后 2 小时无疼痛感的个体比例方面， 效果与安慰剂无异。相同化合物在偏头痛预防的临床 试验 ( 每日 120mg， 进行 12 周 ) 中评估， 同样在降低偏头痛发作的频率上无效果 (Hoye et al.Cephalalgia， 2009， 29， 132)。然而， 在一项开放先驱研究中， 使用 NO 清除剂羟钴胺素 (hydroxycobalamin)， 观察到在 53％患者中偏头痛发作的频率降低 50％， 还观察到偏头痛 发作的总持续时间减少 (van der Kuy et al.， Cephalgia (7) ： 513-519， 2002)。由这些临 床试验的结果推测， iNOS 或 eNOS 在偏头痛的形成中并非发挥重要角色， 但却指出 nNOS 在偏 头痛作为关键的同种型。本发明的化合物 ( 例如式 (I) 化合物， 如化合物 (1) ～ (33)) 也 可用于偏头痛预防。
具异常性疼痛的偏头痛
临 床 研 究 显 示， 多 达 75 ％ 患 者 在 偏 头 痛 发 作 时 发 展 出 皮 肤 的 异 常 性 疼 痛 (allodynia)( 放 大 的 (exaggerated) 皮 肤 敏 感 )， 而该异常性疼痛在偏头痛时产生 则 不 利 于 曲 普 坦 (triptan)5HT1D/1B 激 动 剂 的 抗 偏 头 痛 作 用 (Burstein et al.， Ann. Neurol.47 ： 614-624， 2000 ； Burstein et al.， Brain， 123 ： 1703-1709， 2000)。 虽 然 早 期给予曲普坦 (triptan)， 例如舒马普坦 (sumatriptan)， 可终止偏头痛， 但是舒马普坦 (sumatriptan) 介入的后期无法终止偏头痛或改变已伴随异常性疼痛的偏头痛患者的放大 皮肤敏感 (Burstein et al.， Ann.Neurol.DOI ： 10.1002/ana.10785， 2003 ； Burstein and Jakubowski， Ann.Neurol.， 55 ： 27-36， 2004)。周围及中枢敏化的发展与偏头痛的临床表现 有关。偏头痛患者， 头痛发作后的 5-20 分钟悸动发生， 而皮肤异常性疼痛开始于 20-120 分钟 (Burstein et al.， Brain， 123 ： 1703-1709， 2000)。大鼠中， 实验诱导的脑膜伤害 感受器 (meningeal nociceptor) 的周围敏感， 发生在给予脑硬膜 (dura) 发炎效应浓汤 (inflammatory soup ； I.S.) 后 5-20 分钟 (Levy andStrassman， J.Physiol.， 538 ： 483-493， 2002)， 而三叉神经的中枢敏感发生在 I.S. 给予后的 20-120 分钟 (Burstein et al.， J.Neurophysiol.79 ： 964-982， 1998)。早期或晚期给予抗偏头痛的曲普坦 (triptans)( 例 如舒马普坦 (sumatriptan)) 对中枢敏华发展的平行效果， 已在大鼠中确认 (Burstein and Jakubowski， 参阅上文 )。因此， 早期而非晚期的舒马普坦 (sumatriptan)， 避免中枢三叉神 经脉管 ( 与偏头痛强度临床上相关 ) 中观察到的 I.S. 诱导自发活性的长期增加。而且， 大 鼠体中舒马普坦 (sumatriptan) 晚期介入不能预防对眼睛周围皮肤机械性刺激的 I.S. 诱 导的神经敏感， 也不能预防对热的阈值降低 ( 与眼睛周围区域的机械及热异常性疼痛患者 临床上相关 )。相反地， 早期舒马普坦 (sumatriptan) 防止因诱导热及机械超敏性的 I.S.。 在中枢敏感发展后， 舒马普坦 (sumatriptan) 晚期介入反转了脑硬膜接受区域的扩大及增 加脑硬膜皱折 (dural indentation) 的敏感度 ( 由于过度弯折而恶化的痛悸动临床上相 关 )， 而早期介入防止其发展。
先 前 对 偏 头 痛 化 合 物 的 研 究， 例 如 舒 马 普 坦 (sumatriptan)(Kaube et al.， Br.J.Pharmacol.109 ： 788-792， 1993)、 佐米曲坦 (zolmitriptan)(Goadsby et al.， Pain 67 ： 355-359， 1996)、 那 拉 曲 坦 (naratriptan)(Goadsby et al.， Br.J.Pharmacol.， 328 ：37-40， 1997)、 利札曲普坦 (rizatriptan)(Cumberbatch et al.， Eur.J.Pharmacol.， 362 ： 43-46， 1998)、 或 L-471-604(Cumberbatch et al.， Br.J.Pharmacol.126 ： 1478-1486， 1999)， 检查其在非敏感的中枢三叉神经脉管神经元 ( 在正常条件下 ) 的效应， 因此并未 反映其在偏头痛的病理生理条件下的效应。虽然曲普坦 (triptans) 不论早期或晚期给 予都可有效淬灭偏头痛的悸动， 但在晚期介入后， 舒马普坦 (sumatriptan) 的周围作用却 不能经由三叉神经脉管神经元的中枢敏化效应来淬灭具异常性疼痛的偏头痛。曲普坦 (triptans) 的限制推测， 改良偏头痛的治疗可经由使用使进行中的中枢敏感减退的药物， 例如本发明的化合物， 来实现。
已经表明系统性给予硝化甘油 4 小时后， 会增加大鼠三叉神经尾核 (trigeminal nucleus caudalis) 中 nNOS 水平及 c-Fos- 免疫反应性神经元 ( 一神经元活化的标识 物 (marker))， 推测 NO 可能介导三叉神经元的中枢敏化 (Pardutz et al.， Neuroreport 11(14) ： 3071-3075， 2000)。而且， 在延长 (2 小时 ) 电刺激上矢状窦 (superior sagittal sinus) 后， L-NAME 可 减 少 三 叉 神 经 尾 核 中 Fos 的 表 达 (Hoskin et al.Neurosci. Lett.266(3) ： 173-6， 1999)。结合 NOS 抑制剂的能力， 使急性偏头痛发作降低 (Lassen et al.， Cephalalgia 18(1) ： 27-32， 1998)， 本发明的组合物， 不论单独使用或与其它抗疼痛剂 (antinociceptive agents) 组合使用， 都表现为在患者出现异常性疼痛后使偏头痛减退的 优良候选治疗剂。
慢性头痛 (CTTH)
NO 对 周 围 (Aley et al.， J.Neurosci.1 ： 7008-7014， 1998) 及 中 枢 神 经 系 统 (Meller and Gebhart， Pain 52 ： 127-136， 1993) 的感觉传递具有贡献。实质的试验证据指 出， 由来自周围的延长疼痛输入 (nociceptive input) 所产生的中枢敏感， 会增加 CNS 中神 经元的可激发行， 且起因于或伴随 NOS 活化及 NO 合成的增加 (Bendtsen， Cephalagia 20 ： 486-508， 2000 ； Woolf and Salter， Science 288 ： 1765-1769， 2000)。已经表明 NO 供体三 硝酸甘油的的试验性灌注， 会诱导患者头痛。 在双盲研究中， 具有慢性紧张型头痛的患者接 受 L-NMMA(NOS 抑制剂 )， 在头痛强度上有明显的减轻 (Ashina and Bendtsen， J.Headache Pain 2 ： 21-24， 2001 ； Ashina et al.， Lancet 243(9149) ： 287-9， 1999)。因此， 本发明的 NOS 抑制剂可用于慢性紧张型头痛的治疗。
急性脊髓神经损伤及慢性或神经性疼痛
人体中在皮下注射时 NO 会唤起疼痛 (Holthusen and Arndt， Neurosci.Lett.165 ： 71-74， 1994)， 因此显示疼痛中 NO 的直接参与。而且， NOS 抑制剂在正常情形下的疼痛传 递具有极少效力或不具效力 (Meller and Gebhart， Pain 52 ： 127-136， 1993)。NO 涉及 周围、 脊髓神经及脊椎上 (supraspinal) 水平的疼痛 (nociceptive) 信息的传递及调整 (Duarte et al.， Eur.J.Pharmacol.217 ： 225-227， 1992 ； Haley et al.， Neuroscience 31 ： 251-258， 1992)。CNS 中的受损或功能丧失可能导致慢性疼痛症状发展， 例如已知为中枢疼 痛， 包括自发性疼痛、 痛觉过敏、 及机械性与冷觉异常性疼痛 (Pagni， Textbook of Pain， Churchill Livingstone， Edinburgh， 1989， pp.634-655 ； Tasker In ： The Management of Pain， pp.264-283， J.J.Bonica(Ed.)， Lea and Febiger， Philadelphia， PA， 1990 ； Casey， Pain and Central Nervous System Disease ： The Central Pain Syndromes， pp.1-11 K.L.Casey(Ed.)， Raven Press， New York， 1991)。 已确信系统性给予 (i.p.)NOS 抑制剂 7-NI及 L-NAME 会舒缓脊髓神经受伤的大鼠的类似慢性异常性疼痛的症状 (Hao and Xu， Pain66 ： 313-319， 1996)。7-NI 的效应不会伴随显著的镇定剂效应， 而且会因 L- 精氨酸 (NO 前体 ) 而复原。热痛觉过敏的维持被认为是由腰椎神经 (lumbar spinal cord) 中的一氧化氮所 介导， 而可由脑脊髓膜给予一氧化氮合成酶抑制剂， 如 L-NAME 或可溶性鸟苷酸环化酶抑制 剂亚甲蓝 (methylene blue) 所阻断 (Neuroscience 50(1) ： 7-10， 1992)。
神经性疼痛可能是由于周围神经系统 ( 如三叉神经性疼痛 ) 或中枢神经系统 ( 如 视丘痛 ) 的基本原因。然而， 导致因周围神经损伤而形成的神经性疼痛状态的病理生理， 可能经时间而传播至其它部位， 影响背根神经节中更高阶 (higher order) 的神经元或改 变脑中枢的脊髓痛传递的下行抑制， 该脑中枢例如中脑导水管周围灰质 (periaqueductal gray)、蓝 斑 核 (locus corealis)(Zimmermann， Eur.J.Pharmacol.429 ： 23-27， 2001) 或 改 变 凸 室 中 脊 骨 髓 (rostroventromedial medulla)(RVM) 中 下 行 加 速 路 径 (Bee and Dickenson， Pain， 140(1) ： 209-23， 2008)。
因此， 本发明的 NOS 抑制剂可用于慢性或神经性疼痛的治疗。
糖尿病性神经病变
内源性聚胺代谢物鲱精胺 (agmatine) 为精氨酸的代谢物， 精氨酸为 NOS 抑制剂 及 N- 甲基 -D- 天冬氨酸 (NMDA) 通道拮抗剂。鲱精胺 (agmatine) 有效于神经性疼痛的脊 髓神经结扎 (SNL) 模式及糖尿病性神经病变的链脲霉素 (streptozotocin) 模式 (Karadag et al.， Neurosci.Lett.339(1) ： 88-90， 2003)。因此， 具有 NOS 抑制活性的化合物， 例如式 I 化合物、 NOS 抑制剂及 NMDA 拮抗剂的组合， 应该有效于治疗糖尿病性神经病变及其它神经 性疼痛的病症。
发炎性疾病及神经炎症
一种已知的药学工具 LPS， 在静脉内给予时， 可诱导许多组织中发炎反应， 及活化 所有脑区域中的 NFκB。 当局部注射 LPS 于纹状体 (striatum) 时， 可活化促炎性基因 (Stern et al.， J.Neuroimmunology， 109 ： 245-260， 2000)。目前已表明 NMDA 受体拮抗剂 MK801 及 脑选择性 nNOS 抑制剂 7-NI 均减少脑中 NFκB 活化， 因此显示谷氨酸盐及 NO 路径在神经炎 症中的明确角色 (Glezer et al.， Neuropharmacology 45(8) ： 1120-1129， 2003)。因此， 本发明化合物的给予， 不论单独或与 NMDA 拮抗剂组合， 都会有效治疗因神经炎症引起的疾 病。
中风及再灌注损伤
脑缺血中 NO 的角色可根据缺血过程的发展阶段及根据细胞区室生成 NO 而决定 为保护性或破坏性的 (Dalkara et al.， Brain Pathology 4 ： 49， 1994)。当由 eNOS 产生 的 NO 可能通过作为血管舒张剂发挥作用而有利于改善血流至受伤部位 (Huang et al.， J.Cereb.Blood Flow Metab.16 ： 981， 1996)， 由 nNOS 产生的 NO 对缺血半暗带 (penumbra) 的起始代谢破坏有贡献， 导致更大的梗塞 (Hara et al.， J.Cereb.Blood Flow Metab.16 ： 605， 1996)。在缺血及之后再灌注中发生的代谢扰乱， 导致数种细胞因子表达及释放， 该 细胞因子在数种细胞类型中使 iNOS 活化， 包括一些中枢神经系统。NO 可在细胞毒性水平 由 iNOS 产生， 增加的 iNOS 水平使半暗带 (penumbra) 中的组织受伤加深， 导致更大的梗塞 (Parmentier et al.， Br.J.Pharmacol.127 ： 546， 1999)。iNOS 的抑制显示减少大鼠的脑缺 血伤害 (Am.J.Physiol.268 ： R286， 1995)。已经表明， 协同的神经保护效应已在 NMDA 拮抗剂 ( 如 MK-801 或 LY293558) 与 nNOS 选择性抑制剂 (7-NI 或 ARL17477) 的组合给予于球状大脑缺血后观察到 (Hicks et al.， Eur.J.Pharmacol.381 ： 113-119， 1999)。 因此， 本发明的化合物， 不论单独或与 NMDA 拮抗剂 或具有 nNOS/NMDA 混合活性的化合物组合给予， 都可有效治疗中风或其它神经变性疾病的 症状。
来自冠状动脉旁路手术的并发症
脑部损伤及认知功能障碍仍然是进行冠状动脉旁路手术 (CABG) 患者主要的并发 症 (Roch et al.， N.Eng.J.Med.335 ： 1857-1864， 1996 ； Shaw et al.， O.J.Med.58 ： 59-68， 1986)。此手术后的脑部受损是因为手术前脑部微栓塞 (microembolism) 引起的缺血所造 成。 NMDA 拮抗剂瑞马西胺胺 (remacemide) 的随机试验中， 患者除了缺陷减少外在学习能力 上出现明显的整体术后改善 (Arrowsmith et al.， Stroke 29 ： 2357-2362， 1998)。由于涉 及因谷氨酸盐过量释放及钙涌入造成的兴奋性中毒， 预期神经保护剂， 如本发明化合物或 NMDA 拮抗剂， 不论单独或组合给予 ( 如上讨论 )， 具有改善 CABG 后的神经病学结果的有益 效果。
AIDS- 伴随的痴呆症
HIV-1 感染可造成痴呆症。HIV-1 外壳蛋白 gp-120 在低皮摩尔 (picomolar) 水 平的基础皮层培养中会杀死神经元并且需要外来的谷氨酸及钙 (Dawson et al.， 90(8) ： 3256-3259， 1993)。 此毒性可因单独或与其它治疗剂组合给予神经保护剂而减轻， 神经保护 剂例如为本发明化合物， 其它治疗剂例如为 NMDA 拮抗剂 ( 如上讨论 )。
其它化合物的实例， 例如 NMDA 拮抗剂， 可用于本发明任何的组合， 包括阿替加 奈 (aptiganel)、 贝 索 普 迪 (besonprodil)、 布 地 平 (budipine)、 芋 螺 毒 素 (conantokin G)、 迪 鲁 西 明 (delucemine)、 迪 萨 那 比 诺 (dexanabinol)、 费 巴 曼 (felbamate)、 氟 费 巴 曼 (fluorofelbamate)、 卡 希 克 里 定 (gacyclidine)、 甘 氨 酸 (glycine)、 伊培沙 宗 (ipenoxazone)、 凯 托 塞 伐 林 (kaitocephalin)、 拉 尼 西 明 (lanicemine)、 利可替奈 (licostinel)、 米达福太 (midafotel)、 米那普仑 (milnacipran)、 奈拉美生 (neramexane)、 奥芬那君 (orphenadrine)、 瑞马西胺胺 (remacemide)、 托吡酯 (topiramate)、 (αR)-α- 氨 基 -5- 氯 -1-( 膦酰基甲基 )-1H- 苯并咪唑 -2- 丙酸 ； 1- 氨基环戊烷 - 羧酸 ； [5-( 氨甲 基 )-2-[[[(5S)-9- 氯 -2， 3， 6， 7- 四 氢 -2， 3- 二 氧 代 -1H-， 5H- 吡 啶 并 [1， 2， 3-de] 喹 噁 啉 -5- 基 ] 乙 酰 基 ] 氨 基 ] 苯 氧 基 ]- 乙 酸 ； α- 氨 基 -2-(2- 膦 酰 基 乙 基 )- 环 己 烷 丙 酸； α- 氨基 -4-( 膦酰基甲基 )- 苯并乙酸 ； (3E)-2- 氨基 -4-( 膦酰基甲基 )-3- 庚酸 ； 3-[(1E)-2- 羧基 -2- 苯基乙烯基 ]-4， 6- 二氯 -1H- 吲哚 -2- 羧酸 ； 8- 氯 -2， 3- 二氢哒嗪并 [4， 5-b] 喹啉 -1， 4- 二酮 5- 氧化物盐与 2- 羟基 -N， N， N- 三甲基 - 乙铵 (ethanaminium) ； N′ -[2- 氯 -5-( 甲硫基 ) 苯基 ]-N- 甲基 -N-[3-( 甲硫基 ) 苯基 ]- 胍 ； N′ -[2- 氯 -5-( 甲 硫基 ) 苯基 ]-N- 甲基 -N-[3-[(R)- 甲基亚磺酰基 ] 苯基 ]- 胍 ； 6- 氯 -2， 3， 4， 9- 四氢 -9- 甲 基 -2， 3- 二氧代 -1H- 茚并 [1， 2-b] 吡嗪 -9- 乙酸 ； 7- 氯硫代犬尿酸 (kynurenic acid) ； (3S， 4aR， 6S， 8aR)- 十 氢 -6-( 膦 酰 基 甲 基 )-3- 异 喹 啉 羧 酸 ； (-)-6， 7- 二 氯 -1， 4- 二 氢 -5-[3-( 甲氧基甲基 )-5-(3- 吡啶基 )-4-H-1， 2， 4- 三唑 -4- 基 ]-2， 3- 喹噁啉二酮 ； 4， 6- 二氯 -3-[(E)-(2- 氧代 -1- 苯基 -3- 吡咯烷亚基 (pyrrolidinylidene)) 甲基 ]-1H- 吲 哚 -2- 羧酸 ； (2R， 4S)-rel-5， 7- 二氯 -1， 2， 3， 4- 四氢 -4-[[( 苯氨基 ) 羰基 ] 氨基 ]-2- 喹啉羧酸 ； (3R， 4S)-rel-3， 4- 二氢 -3-[4- 羟基 -4-( 苯甲基 )-1- 哌啶基 -]-2H-1- 苯并吡 喃 -4， 7- 二醇 ； 2-[(2， 3- 二氢 -1H- 茚 -2- 基 ) 氨基 ]- 乙酰胺 ； 1， 4- 二氢 -6- 甲基 -5-[( 甲 氨 基 ) 甲 基 ]-7- 硝 基 -2， 3- 喹 噁 啉 二 酮 ； [2-(8， 9- 二 氧 代 -2， 6- 二 叠 氮 双 环 [5.2.0] 壬 -1(7)- 烯 -2- 基 ) 乙基 ]- 膦酸 ； (2R， 6S)-1， 2， 3， 4， 5， 6- 六氢 -3-[(2S)-2- 甲氧基丙 基 ]-6， 11， 11- 三甲基 -2， 6- 甲烷 -3- 苯并吗啡烷 (benzazocin)-9- 醇 ； 2- 羟基 -5-[[( 五氟 苯基 ) 甲基 ] 氨基 ]- 苯甲酸 ； 1-[2-(4- 羟基苯氧基 ) 乙基 ]-4-[(4- 甲基苯基 ) 甲基 ]-4- 哌 啶醇 (piperidinol) ； 1-[4-(1H- 咪唑 -4- 基 )-3- 丁炔基 ]-4-( 苯基甲基 )- 哌啶 ； 2- 甲 基 -6-( 苯基乙炔基 )- 吡啶 ； 3-( 膦酰基甲基 )-L- 苯基丙氨酸 ； 及 3， 6， 7- 四氢 -2， 3- 二氧 代 -N- 苯基 -1H， 5H- 吡啶并 [1， 2， 3-de] 喹噁啉 -5- 乙酰胺或如美国专利 No.6,071,966 ； 6,034,134 及 5,061,703 中所描述的。
心源性休克
心源性休克 (CS) 是导致急性心肌梗塞患者死亡的主要原因， 该急性心肌梗塞 与 NO 及发炎细胞因子的水平提高一致。高水平的 NO 及过氧亚硝酸盐具有许多效应， 包 括直接抑制心肌收缩性、 抑制心肌线粒体呼吸作用、 改变葡萄糖代谢作用、 降低儿茶酚胺 (catecholamine) 反 应 性、 及 诱 导 全 身 性 血 管 舒 张 (Hochman， Circulation 107 ： 2998， 2003)。在 11 位持续性休克患者的临床研究中， 给予 NOS 抑制剂 L-NMMA 会造成排尿及血压 增加， 至 30 天时的存活率为 72％ (Cotter et al.， Circulation 101 ： 1258-1361， 2000)。 在 30 位患者的随机试验中， 已描述 L-NAME 降低患者死亡率， 由 67％降至 27％ (Cotter et al.， Eur.Heart.J.24(14) ： 1287-95， 2003)。 同样地， 给予本发明化合物， 不论单独或组合其 它治疗剂给予， 可用于心源性休克的治疗。
焦虑症及抑郁症
最近大鼠及小鼠的强制游泳测试 (FST) 研究中显示， NOS 抑制剂在小鼠中具有 抗抑郁活性 (Harkin et al.Eur.J.Pharm.372 ： 207-213， 1999)， 并显示该效应由 5- 羟色 胺 (serotonin) 依赖机制所介导 (Harkin et al.， Neuropharmacology 44(5) ： 616-623， 1993)。在大鼠迷宫测试中虽确信 7-NI 的抗焦虑活性 (Yildiz et al.， Pharmacology， Biochemistry and Behavior 65 ： 199-202， 2000)， 但选择性 nNOS 抑制剂 TRIM 在光 - 暗隔 间试验的抑郁及焦虑症的 FST 模式中均有效 (Volke et al.， Behavioral Brain Research 140(1-2) ： 141-7， 2003)。 给予患者本发明化合物， 不论单独或组合其它治疗剂给予， 例如抗 抑郁剂， 均可用于治疗焦虑症或抑郁症。
注意力缺乏过动症
对 环 境 刺 激 非 选 择 性 注 意 (NSA) 的 自 发 性 高 血 压 (Spontaneously Hypertensive ； SHR) 及那不勒斯低兴奋性 (Naples Low-Excitability ； NHE) 的大鼠， 被作 为注意力缺乏过动症 (ADHD) 的动物模型 (Aspide et al.， Behav.Brain Res.95(1) ： 23-33， 1998)。 这些基因上改变的动物出现以后脚站立的情形增加， 这些情形较正常动物所观察到 的具有较短的持续时间。单独注射 10mg/kg 的 L-NAME 造成后脚站立持续时间加长。同样 地， 使用较多神经选择性 7-NINA， 在快速给予 (i.p.) 后， 观察到后脚站立持续时间加长， 然 而缓慢释放单独释放剂量或缓慢的多重释放剂量 (s.c 在 DMSO 中 ) 会造成相反效果。 因此， 本发明化合物的给予可用于治疗 ADHD。
精神病迷幻药 (Phencyclidine ； PCP) 是一种非竞争性 NMDA 通道阻断剂， 造成人及哺乳动 物的行为上副作用， 与精神病患者所观察到的一样。 在两种精神病的动物模型中， nNOS 选择 性抑制剂 AR-R17477 对 PCP- 诱导的快速移动 (hyperlocomotion) 及 PCP- 诱导的听觉反应 惊吓的前刺激抑制缺陷进行拮抗 (Johansson et al.， Pharmacol.Toxicol.84(5) ： 226-33， 1999)。此结果推测 nNOS 参与精神病。因此， 给予本发明化合物至患者可用于治疗精神病 或相关疾病或失调。
头创伤
头创伤患者的神经受伤机制与中风的机制平行， 与过度谷氨酸盐释放造成的钙 涌入的兴奋性中毒、 氧化性压力、 及因线粒体功能障碍及发炎而产生自由基有关 (Drug & Market Development 9(3) ： 60-63， 1998)。以一氧化氮合成酶 (NOS) 抑制剂 ( 例如 7-NI、 3- 溴 -7- 硝基吲唑 ) 处理的动物， 出现试验创伤脑受伤 (TBI) 后神经缺陷的改善 (Mesenge et al.， J.Neurotrauma 13 ： 209-14， 1996)。 本发明化合物给予患者也可用于治疗头创伤受 伤的神经伤害。
低温心脏停止
低温心脏停止 (HCA) 是用于在心脏手术期间当血流中断过程中脑对伤害敏感时 保护心脏不受缺血伤害的技术。 多种神经保护剂在 HCA 期间用作附属剂 (adjunt agents)， 并且 HCA 期间对一氧化氮生成的降低， 预期导致改善神经功能。此结论基于先前的研究， 其 显示谷氨酸盐兴奋性中毒在 HCA- 诱导的神经伤害中扮演角色 (Redmond et al.， J.Thorac. Cardiovasc.Surg.107 ： 776-87， 1994 ； Redmond et al.， Ann.Thorac.Surg.59 ： 579-84， 1995)， 以及 NO 介导谷氨酸盐兴奋性中毒 (Dawson and Snyder， J.Neurosci.14 ： 5147-59， 1994)。在 32 只狗进行 18℃下 2 小时的 HCA 的研究中， 神经元 NOS 抑制剂显示为降低脑部 NO 生成， 明显减少神经元坏死 (necrosis)， 并造成较高的神经功能 ( 相比于对照 )(Tseng et al.， Ann.Thorac.Surg.67 ： 65-71， 1999)。给予本发明化合物也可用于保护患者免受在 心脏手术中的缺血伤害。
神经毒性及神经退化疾病
线粒体功能障碍、 谷氨酸盐兴奋性中毒、 及自由基诱导的氧化伤害， 显然为许多神 经退化疾病的潜在致病机理， 包括肌萎缩性侧索硬化症 (ALS)、 帕金森病 (PD)、 阿尔茨海默 氏症 (AD)、 及亨丁顿氏症 (HD)(Schulz et al.， Mol.Cell.Biochem.174(1-2) ： 193-197， 1997 ； Beal， Ann.Neurol.38 ： 357-366， 1995)， NO 是这些机制的主要媒介物。例如 Dawson et al.， in PNAS 88(14) ： 6368-6371， 1991 显示， NOS 抑制剂， 例如 7-NI 及 L-NAME， 可避免 N- 甲基 -D- 天冬氨酸及相关兴奋性氨基酸所引发的神经毒性。
(a) 帕金森病 (Parkinson’ s Disease)
研究显示 NO 在 1- 甲基 -4- 苯基 -1， 2， 3， 6- 四氢吡啶 (MPTP) 神经毒性中扮演重 要角色， 其为常用的帕金森病的动物模型 (Matthews et al.， Neurobiology of Disease 4： 114-121， 1997)。MPTP 经 MAO-B 转 变 成 MPP+， 并 快 速 地 由 多 巴 胺 转 运 体 (dopamine transporter) 获取送至含神经元的多巴胺线粒体， 之后 nNOS 活化， 造成神经元死亡。缺 乏 nNOS 基因 ( 但不缺乏 eNOS 基因 ) 的突变鼠， 在注射纹状体 (striatum)MPP+ 后黑质 (substantia nigra) 中的损伤减少。在基础研究中， 7-NI 造成 MPTP 挑战后深度的神经保 护及抗帕金森病效应 (Hantraye et al.， Nature Med.2 ： 1017-1021， 1996)， 非特异性抑制剂 L-NAME 造成相同的效果 (T.S.Smith et.al.Neuroreport 1994， 5， 2598-2600)。这些结 果推测给予适当剂量的 NOS 抑制剂， 例如本发明化合物， 可有利于治疗帕金森病。
(b) 阿尔茨海默氏症 (AD)
AD 的 病 因 与 活 化 小 神 经 胶 质 (microglia) 及 星 状 细 胞 (astrocytes) 渗 入 的 β- 淀粉状蛋白斑有关。当培养的大鼠小神经胶质暴露在 β- 淀粉状蛋白时， 有显著的小 神经胶质释放一氧化氮， 特别是在 γ- 干扰素存在时 (Goodwin et al.， Brain Research 692(1-2) ： 207-14， 1995)。在皮质神经元培养中， 以一氧化氮合成酶抑制剂处理提供神 经保护以对抗人体 β- 淀粉状蛋白引起的毒性 (Resink et al.， Neurosci.Abstr.21 ： 1010， 1995)。 与 神 经 退 化 疾 病 的 兴 奋 性 中 毒 的 谷 氨 酸 盐 假 设 一 样， 弱 NMDA 拮 抗 剂 金 刚 胺 (amantadine) 增 加 PD 患 者 的 寿 命 (Uitti et al.， Neurology 46(6) ： 1551-6， 1996)。在血管型或阿尔茨海默型痴呆症患者的预先安慰剂对照研究中， NMDA 拮抗剂美 金刚 (memantine) 与老人患者级数的改变及行为分级的临床全球概念 (Clinical Global Impression of Change and Behavioral Rating Scale for Geriatric Patients scores) 的改善有关 (Winblad and Poritis， Int.J.Geriatr.Psychiatry 14 ： 135-46， 1999)。结果 推测给予适当剂量的 NOS 抑制剂， 例如本发明化合物， 可有利于治疗 AD。
(c) 肌萎缩性侧索硬化症
肌萎缩性侧索硬化症 (ALS) 是一种致命的神经退化疾病， 特征为选择性的运动神 经元死亡。累积的证据推测 ALS 的病因为经谷氨酸转运体转移的谷氨酸未完全清除及脊椎 运动神经元中 Ca2+- 可穿透的 AMPA 受体的特异性分布， 显示谷氨酸 - 诱导的神经毒性。 增加 的 nNOS 免疫反应性被发现在脊椎神经 (Sasaki et al.， Acta Neuropathol.(Berl)101(4) ： 351-7， 2001) 及 ALS 患者的神经胶细胞 (Anneser et al.， Exp.Neurol.171(2) ： 418-21， 2001)， 暗示 NO 为 ALS 病因的重要因素。此结果推测给予适当剂量的 NOS 抑制剂， 例如本发 明化合物， 可有利于治疗 ALS。
(d) 亨丁顿氏症
亨丁顿氏症 (HD) 的病因来自 Htt 蛋白的突变， 与兴奋性中毒、 氧化性压力及 细胞凋亡 (apoptosis) 有关， 其中过度的 NO 扮演清楚的角色 (Peterson et al.， Exp. Neurol.157 ： 1-18， 1999)。氧化性伤害为能量代谢作用中缺陷的主要结果之一， 存在于 注射兴奋性毒素与线粒体抑制剂后的 HD 模型中 (A.Petersen et.al.， Exp.Neurol.157 ： 1-18， 1999)。线粒体功能障碍与 HD 中选择性及进展性神经元丧失有关 (Brown et al.， Ann.Neurol.41 ： 646-653， 1997)。NO 可直接修复线粒体呼吸链复合物 IV(Calabrese et al.， Neurochem.Res.25 ： 1215-41， 2000)。条纹中型脊髓神经元 (Striatal medium spiny neurons) 显然为 HD 中形成运动功能障碍的基础标靶。这些神经元的 NMDA 受体的过磷酸 化及活化可能参与运动功能障碍的形成。临床上显示 NMDA 拮抗剂金刚胺 (amantadine) 改 善 HD 的舞蹈症运动困难 (choreiformdyskinesias)(Verhagen Metman et al.， Neurology 59 ： 694-699， 2002)。考虑 nNOS 在 NMDA 介导的神经毒性中的角色， 预期 nNOS 抑制剂， 特别 是具有混合 nNOS/NMDA 的那些或与具有 nNOS 和 NMDA 活性的药剂的组合， 也可用于改善 HD 效应和或发展。例如以 7- 硝基吲唑预处理大鼠会减缓因立体定位 (stereotaxic) 注射丙 二酸引起的纹状体损伤， 此损伤会导致类似亨丁顿氏症的病症 (Hobbs et.al.， Ann.Rev. Pharm.Tox.39 ： 191-220， 1999)。在表达人突变 htt 外显子 1(116 个 CAG 重复 ) 的 R6/1 转基因小鼠 HD 模型中， 小鼠在 11、 19、 35 周显示脂肪过氧化的进展性增加， 在 11 周时的超氧 化物歧化酶 (SOD) 正常水平类似于野生型 (WT) 小鼠 ； 最大水平在 19 周， 超过 WT 小鼠中观 察到的水平， 且对应于疾病发展的早期 ； 最后该水平在 35 周降低， 低于 WT 小鼠中观察到的 水平 (Pérez-Sevriano et al.， Brain Res.951 ： 36-42， 2002)。SOD 活性的增加可致力于 互补的神经保护机制， 在 35 周的降低活性对应于失效的保护机制。伴随 SOD 水平的钙依赖 性 NOS 的水平， 对于 11 周小鼠， 在 WT 及 R6/1 小鼠体内的水平相同， 但在 19 周明显增加， 在 35 周降低 ( 相比于 WT 对照小鼠 )。nNOS 表达水平也在 19 周相对于对照而明显增加， 但在 35 周时相对于对照而明显降低。 在 eNOS 的表达水平上未观察到显著差异， 在该疾病发展中 也未检测到 iNOS 蛋白。该疾病的发展表型表达， 如测量增加的体重减轻、 喂食紧握行为、 及 水平与垂直移动， 与 NOS 活性及 nNOS 表达的改变一致。最后， 给予 R6/2 转基因 HD 小鼠及 WT 小鼠 L-NAME， 显示在给予 10mg/kg 剂量时改善紧握行为水平 ( 类似于对照 )， 在最高剂量 500mg/kg 时则劣化 (Deckel et al.， Brain Res.919(1) ： 70-81， 2001)。HD 小鼠的体重增 加的改善也在 10mg/kg 剂量时明显出现， 但在高剂量水平的 L-NAME 时相对于对照降低。此 结果表明给予适当剂量的 NOS 抑制剂， 例如本发明化合物， 可有利于治疗 HD。
(e) 多发性硬化症 (MS)
MS 是 一 种 与 细 胞 因 子 及 其 它 发 炎 媒 介 物 有 关 的 CNS 的 发 炎 性 髓 鞘 脱 失 (demyelinating) 疾病。 许多研究推测 NO 及其反应性衍生的过氧亚硝酸盐暗含于 MS 病因中 (Acar et al.J.Neurol.250(5) ： 588-92， 2003 ； Calabrese et al.， Neurochem.Res.28(9) ： 1321-8， 2003)。在试验的自体免疫脑脊髓炎 (EAE)， MS 模型中， nNOS 水平在 EAE 大鼠脊髓 中轻微增加， 以 7- 硝基吲唑处理造成 EAE 麻痹发作的明显延缓 (Shin， J. Vet.Sci.2(3) ： 195-9， 2001)。此结果推测给予适当剂量的 NOS 抑制剂， 例如本发明化合物， 可有利于治疗 MS。
(f) 甲基苯丙胺 (Methamphetamine) 诱导的神经毒性
甲 基 苯 丙 胺 (Methamphetamine) 由 于 在 体 内 破 坏 多 巴 胺 (dopamine) 神 经 末 端而为神经毒性的。已经表明， 甲基苯丙胺诱导的神经毒性可经体外 (Sheng et al.， Ann.N.Y.Acad.Sci.801 ： 174-186， 1996) 及体内动物模型 (Itzhak et al.， Neuroreport 11(13) ： 2943-6， 2000) 的 NOS 抑制剂处理而减轻。类似地， nNOS 选择性抑制剂 AR-17477AR 以 5mg/kg s.c 给予小鼠， 可防止小鼠脑中甲基苯丙胺诱导的神经丝蛋白 (neurofilament protein)NF68 丧失及避免纹状体多巴胺 (striatal dopamine) 与高香草酸 (homovanillic acid(HVA)) 的 丧 失 (Sanchez et al.， J.Neurochem.85(2) ： 515-524， 2003)。 此 结 果 推 测 给 予 适 当 剂 量 的 NOS 抑 制 剂， 例 如 本 发 明 化 合 物， 可有利于治疗甲基苯丙胺 (Methamphetamine) 诱导的神经毒性。
本发明化合物的给予， 不论单独或组合其它治疗剂， 例如 NMDA 拮抗剂， 均可用于 保护或治疗本文所述的任何神经退化疾病。 而且本发明的化合物可在用于评估神经保护作 用的标准分析下测试 ( 参见例如 Am.J.Physiol.268 ： R286， 1995)。
化学品依赖及药物成瘾 ( 例如对药物、 酒精、 尼古丁的依赖性 )
药物诱导的回报 (reward) 及依赖性过程中的关键步骤在于多巴胺由中脑缘多巴 胺能神经元 (mesolimbic dopaminergic neurons) 释放的调节。可卡因的慢性使用会改变 控制多巴胺 - 多巴胺转运体 (DAT) 的突触水平的该关键蛋白的表达。(a) 可卡因成瘾
研究显示动物可靠性静脉内自我给予 (self-administer) 刺激物， 及多巴胺在其 加强效应中是关键的。 目前在纹状体 (striatum) 及腹侧覆盖区 (ventral tegmental area) 中显示含神经元的 NO 与多巴胺共存， 且 NO 可调节刺激物引发的多巴胺 (DA) 释放。给予 多巴胺 D1 受体拮抗剂可降低作为 NOS 活性标识物 (marker) 的纹状体 NADPH- 黄递酶染色 (striatal NADPH-diaphorase staining) 水平， 但 D2 拮抗剂则产生相反效果。NOS 的底 物 L- 精氨酸也为 DA 释放的有效调节物。而且， 多种 NO- 产生剂在体内外均会增加 DA 流出 或抑制再吸收。L-NAME 已表明在成功注射可卡因之间， 经由减少自我给予的量及增加相互 反应时间 (inter-response time)， 可明显改变可卡因的加强能力 (Pudiak and Bozarth， Soc.Neurosci.Abs.22 ： 703， 1996)。这表明由本发明的化合物的 NOS 抑制可有利于治疗可 卡因成瘾。
(b) 吗啡 / 阿片类诱导的耐受性及脱瘾症
有许多证据支持成年及婴儿动物中阿片依赖性的 NMDA 及 NO 路径的角色。注射吗 啡硫酸盐的成年或新生啮齿类， 在给予那屈酮 (naltrexone) 后发展出行为上的脱瘾。那屈 酮 (naltrexone) 开始后的脱瘾疾病可经给予 NOS 抑制剂而减轻， 例如 7-NI 或 L-NAME(Zhu and Barr， Psychopharmacology 150(3) ： 325-336， 2000)。在相关研究中， 显示愈多 nNOS 选择性抑制剂 7-NI， 相比于较少的选择性化合物， 可减轻愈多吗啡诱导的脱瘾症状， 包括咀 嚼、 流唾液、 及生殖器影响 (Vaupel et al.， Psychopharmacology(Berl.)118(4) ： 361-8， 1995)。此显示由本发明的化合物抑制 NOS 可有利于治疗吗啡 / 阿片诱导的耐受性及脱瘾 症。
(c) 酒精耐受性及依赖性
在影响酒精依赖性的因素中， 对酒精影响的耐受性为重要一员， 因为耐受性偏 好过度引用酒精类饮料 ( and Kiianmaa， Psychopharmacology (Berl.)94 ： 479-483， 1988)。在大鼠研究中， 对运动协调及低体温的酒精耐受性发展快速， 可在不改变脑部酒精 浓度下由 i.cv. 给予 7-NI 而阻断 (Wazlawik and Morato， Brain Res.Bull.57(2) ： 165-70， 2002)。 在其它研究中， 以 L-NAME 抑制 NOS(Rezvani et al.， Pharmacol.Biochem.Behav.50 ： 265-270， 1995) 或 以 i.cv. 注 射 nNOS 反 义 链 抑 制 NOS(Naassila et.al.， Pharmacol. Biochem.Behav.67 ： 629-36， 2000)， 会减少在前述动物体内的酒精消耗。 这表明由本发明的 化合物抑制 NOS 可用于治疗酒精耐受性及依赖性。
本发明化合物的给予， 不论单独或组合另一种治疗剂， 例如 NMDA 拮抗剂， 均可用 于治疗化学品依赖性及药物成瘾。
癫痫
7-NI 与 特 定 抗 痉 挛 剂 ( 如 卡 马 西 平 (carbamazepine)) 共 同 给 予， 以不能改 变 旋 转 棒 表 现 (roto-rod performance) 的 浓 度， 在大鼠中显示抗杏仁核 - 激动发作 (amygdale-kindled seizures) 的 协 同 保 护 效 应 (Borowicz et al.， Epilepsia 41(9 ： 112-8， 2000)。因此， NOS 抑制剂， 例如本发明的化合物， 不论单独或组合另一种治疗剂， 例如抗癫痫剂， 可用于治疗癫痫或类似疾病。可用于本发明的组合的抗癫痫剂的实例包 括 卡 马 西 平 (carbamazepine)、 加 巴 喷 丁 (gabapentin)、 拉 莫 三 嗪 (lamotrigine)、 奥卡 西 平 (oxcarbazepine)、 苯 妥 英 (phenyloin)、 托 吡 酯 (topiramate) 及 2- 丙 基 戊 酸 钠(valproate)。
糖尿病性神经病变
链脲霉素 (streptozotocin) 治疗后的糖尿病大鼠的 NO 副产物尿液排泄增加， 增 加的 NO 合成推测与糖尿病肾小球超滤过 (glomerular hyperfiltration) 有关。神经元同 种型 nNOS 在肾亨利氏环 (loop of Henle) 及致密斑 (mucula densa) 中表达， 并且使用 7-NI 抑制该同种型可在不影响肾小动脉压或肾血流下， 减少肾小球滤过 (Sigmon et al.， Gen. Pharmacol.34(2) ： 95-100， 2000)。非选择性 NOS 抑制剂 L-NAME 及 nNOS 选择性 7-NI 均可 使糖尿病动物的肾高滤过正常化 (Ito et al.， J.Lab Clin.Med.138(3) ： 177-185， 2001)。 因此， 给予本发明化合物可用于治疗糖尿病性神经病变。
药物滥用头痛
药物滥用头痛 (MOH) 与组合止痛剂、 阿片类药物、 巴比妥酸盐 (barbiturates)、 阿 斯 匹 林 (aspirin)、 非 类 固 醇 类 消 炎 止 痛 药 (NSAIDS)、 咖 啡 因 及 曲 普 坦 (triptans) 的 过 度 使 用 有 关， 是 限 制 前 述 药 物 有 用 性 的 普 遍 问 题 (Diener and Limmroth. MedicatioN-overuse headache ： a worldwide problem.Lancet Neurol.2004 ： 3， 475-483)。MOH 通 常 定 义 为 每 月 出 现 多 于 15 天 的 头 痛 (Headache Classification Committee.The International Classification of Headache Disorders(2 nd Ed). Cephalalgia 2004 ： 24(Supple.1) ； 9-160)。已充分证明偏头痛或紧张型头痛的患者的急 性处理， 如果急性药物使用过量， 会增加头痛恶化的风险、 发展出每日头痛、 或可能变得难 以治疗 (Zeeberg et.al.Cephalalgia 2006 ： 26， 1192-1198)。MOH 患者通常对预防性药物 没有反应而过度使用药物。目前治疗 MOH 的选择是停药， 但通常伴随脱瘾症状， 例如恶心、 呕吐、 及睡眠干扰。当偏头痛或紧张型头痛患者遭受 MOH 而停药 2 个月， 头痛频率会降低 (45％ )， 但是仍然有许多患者在脱瘾后未改变 (48％ ) 或出现头痛恶化 (Zeeberg et.al. Cephalalgia 2006 ： 26， 1192-1198)。因此， 对 MOH 患者仍然存在较大未满足的需求。
一些 MOH 的特征， 例如增加的头痛频率、 头痛范围扩张、 及皮肤异常性疼痛的 发展， 相信是药物引发的三叉神经疼痛路径及周围导管灰质区 (periacqueductal grey area) 的中枢敏感结果 (Waeber and Moskowitz.Therapeutic implications of central and peripheral neurologic mechanisms in migraine.Neurology ： 2003， 61(Suppl.4) ； S9-20)。类似于对精神刺激物 (psychostimulants) 的行为敏感， 重复给予头痛药物 ( 例 如曲普坦 (triptans)) 会导致治疗头痛的不同药物间交叉敏感。突触可塑性 (synaptic plasticity) 的改变涉及细胞内钙及一氧化氮水平的改变。慢性头痛、 偏头痛患者及 MOH 患者显示血小板的硝酸盐水平增加。因此， MOH 的敏感发展可能由 CNS 中的 NO 及钙水平 变化来介导 (Sarchielli et.al.Nitric oxide pathway， Ca2+， and serotonin content in platelets from patients suffering from chronic daily headache.Cephalalgia 1999 ： 19 ； 810-816)。已知中枢敏化的发展是由 nNOS 介导 (Cizkova et.al.Brain.Res. Bull.2002 ； 58(2) ： 161-171， Choi et.al.J.Neurol.Sci.1996 ； 138(1-2) ： 14-20)， 这样则 可预期神经元一氧化氮合成酶抑制剂， 如本发明化合物， 与其它头痛药物一起可用于预防 及治疗 MOH。也可预期的是， 以 nNOS 抑制剂治疗 CTTH 与偏头痛不会导致 MOH 发展。
胃肠疾病
nNOS 构成小肠中所有 NOS 的多于 90 ％。虽然也组成性存在有 iNOS， 但仅占总NOS 活性的少于 10 ％， eNOS 在肠内基本检测不到 (Qu XW et.al.Type I nitric oxide synthase(NOS)is the predominant NOS in rat small intestine.Regulation by platelet-activating factor.Biochim Biophys Acta 1999 ； 1451 ： 211-217)。 肠 中 nNOS 的主要功能相信是在神经系统的 NANC 成分中经神经元信号传递调节肠动性 (gut motility)。NO 调节下食道中的括约肌、 幽门、 Oddi 氏扩约肌、 及肛门的肌肉张力。NO 也 调节底部 (fundus) 的调节反射 (accommodation reflex) 及肠的蠕动反射 (peristaltic reflex)。 NOS 抑制剂已知会延长胃排空及结肠通过 (T.Takahashi J.Gastroenterol.2003 ； 38(5) ： 421-30)。因此 nNOS 抑制剂可为 GI 疾病的治疗剂， 有效避免延缓胃排空或缓慢的结 肠通过。倾倒综合征 (Dumping syndrome) 是一种疾病， 因为食物从胃中过快排空， 使未消 化食物进入小肠， 该未消化食物并非适当准备使小肠可有效吸收的营养， 通常在胃切除术 后被观察到。因此， 给予本发明化合物可用于治疗胃肠疾病， 例如倾倒综合征。本发明的化 合物也可用于治疗其它肠易激综合症 (irritiable bowel syndromes)。
内脏痛
内脏痛是最常见的疼痛形式， 也是最难治疗的疼痛形式之一。 内脏痛与胃痛不同， 通常描述为来自身体内部腔室或器官的疼痛， 具有 5 种重要的临床及感官特征 ： (1) 不会由 所有内脏器官 ( 例如肝、 肾、 肺 ) 引起 ； (2) 通常与内脏受伤无关 ( 例如切割肠不会引起疼 痛)； (3) 会扩散 ； (4) 与其它部位有关 ； 及 (5) 与其它自主反射及运动反射有关 ( 例如恶 心、 因肾绞痛造成的下背肌肉紧张 )(Lancet 353， 2145-48， 1999)。对于内脏痛的机制已提 出书中理论。一种理论提出， 内脏有不同种类神经元分布， 一种考虑与自主调节有关， 另一 种与感觉现象 ( 例如痛 ) 有关。 第二种理论推测为一种单一同源种类的感觉受体， 该感觉受 体在活化作用的低频率 ( 正常调节信号 ) 或高频率 ( 由深度疼痛信号引发 ) 中被活化。 然而 研究显示， 内脏分布有两类疼痛感觉感受器 ： 高阈值强度编码感受器 (coding receptors) ( 绝大多数机械性受体， 发现在心、 静脉、 肺、 呼吸道、 食道、 胆道系统 (bilary system)、 小 肠、 结肠、 输尿管、 膀胱、 及子宫， 其由毒性刺激活化 ) ； 及低阈值强度编码感受器 ( 对无毒及 有毒的刺激有反应 ( 心、 食道、 结肠、 膀胱、 及睾丸 ))。 然而， 另一种理论推测， 传入纤维的成 分正常地对刺激不反应 ( 静止的疼痛感受器 (nociceptor))， 但该刺激可在发炎过程中变 成活化或敏感的 (Trends Neurosci.15， 374-78， 1992)。一旦敏感， 这些疼痛受体才会对无 毒刺激反应， 该无毒刺激正常发生在内在器官中， 造成强化阻碍汇聚性输入至脊髓， 之后引 发中枢机制， 放大周围输入的效应。
内脏痛可起因于肿瘤、 感染或受伤。例如内脏痛可由内脏器官的疾病或受伤而造 成， 被认为是身体其它部位疼痛。本发明的化合物也可用于治疗例如继发于肠易激综合 症 (irritiable bowel syndromes)、 发炎性结肠症、 胰腺炎、 憩室炎、 克隆氏症 (Crohn’ s disease)、 腹膜炎、 心包炎、 肝炎、 盲肠炎、 结肠炎、 胆囊炎、 肠胃炎、 子宫内膜异位、 痛经、 间 质性膀胱炎、 前列腺炎、 胸膜炎、 上胃肠道消化不良、 肾绞痛、 或胆绞痛的内脏痛 ； 继发于肝、 肾、 卵巢、 子宫、 膀胱、 肠 (bowel)、 胃、 食道、 回肠、 肠 (intestine)、 结肠、 脾、 胰、 盲肠、 心、 或 腹膜疾病的内脏痛 ； 因肿瘤或创伤造成的内脏痛 ； 或因感染造成的内脏痛。以本发明方法 治疗的内脏痛可为发炎或非发炎内脏痛。
内 脏 痛 模 型 及 分 析 方 法 在 此 技 术 领 域 中 是 已 知 的 ( 如 Bourdu et al.， Gastroenterology 128 ： 1996-2008， 2005 ； Vera-Portocarrero et al.， Gastroenterology130 ： 2155-2164， 2006 ； 及 Sparmann et al.， Gastroenterology112 ： 1664-1672， 1997)。
组合配方及其使用
除上述的配方外， 本发明的一个以上的化合物可与其它治疗剂组合使用。例 如本发明的一种以上的化合物可与另一种 NOS 抑制剂组合。应用于此目的的示例性抑 制剂包括但不限于美国专利 No.6,235,747、 7,141,595 及 7,375,219 ； 美国专利申请序 列 号 No.09/127,158、 09/325,480、 09/403,177、 09/802,086、 09/826,132、 09/740,385、 09/381,887、 10/476,958、 10/483,140、 10/484,960、 10/678,369、 10/819,853、 10/938,891、 11/436,393、 11/787,167、 12/054,083、 及 12/272,656 ； 国际专利公开 No.WO 97/36871、 WO 98/24766、 WO 98/34919、 WO 99/10339、 WO 99/11620 及 WO 99/62883 中描述的那些。
另一实施例中， 本发明的一种以上的化合物可与抗心律不齐剂结合。示例性抗心 律不齐剂包括利多卡因 (lidocaine) 及美西律 (mixiletine)， 但不限于此。
GABA-B 激 动 剂、 α-2- 肾 上 腺 素 受 体 激 动 剂、 胆 囊 收 缩 素 拮 抗 剂、 5HT1B/1D 激 动 剂、 或 CGRP 拮 抗 剂 也 可 与 本 发 明 的 一 种 以 上 化 合 物 组 合 使 用。α-2- 肾 上 腺 素 受 体 激 动 剂 的 非 限 制 性 实 例 包 括 可 乐 定 (clonidine)、 洛 非 西 定 (lofexidine) 及 普 萘 洛 尔 (propanolol)。 胆 囊 收 缩 素 拮 抗 剂 的 非 限 制 性 实 例 包 括 L-365， 260 ； CI-988 ； LY262691 ； S0509， 或描述于美国专利 No.5,618,811 中的那些。可与本发明化合物组合 使 用 的 5HT1B/1D 激 动 剂 的 非 限 制 性 实 例 包 括 二 氢 艾 格 塔 明 (dihydroegotamine)、 依来 曲 普 坦 (eletriptan)、 夫 罗 曲 坦 (frovatriptan)、 那 拉 曲 坦 (naratriptan)、 利札曲普 坦 (rizatriptan)、 舒 马 普 坦 (sumatriptan)、 多 尼 普 曲 坦 (donitriptan)、 或佐米曲坦 (zolmitriptan)。可与本发明化合物组合使用的 CGRP 拮抗剂的非限制性实例包括描述于 国际专利公开 No.WO9709046 的喹宁类似物 ； 描述于国际专利公开 WO0132648， WO0132649， WO9811128， WO9809630， WO9856779， WO0018764 的非肽拮抗剂 ； 或其它如 SB-(+)-273779 或 BIBN-4096BS 的拮抗剂。
P 物质拮抗剂， 也称为 NK1 受体拮抗剂， 也可用于与本发明的一种以上化合物组合。 可用于此目的的示例性抑制剂包括但不限于披露于美国专利 No.3,862,114， 3,912,711， 4,472,305 ， 4,481,139 ， 4,680,283 ， 4,839,465 ， 5,102,667 ， 5,162,339 ， 5,164,372 ， 5,166,136 ， 5,232,929 ， 5,242,944 ， 5,300,648 ， 5,310,743 ， 5,338,845 ， 5,340,822 ， 5,378,803 ， 5,410,019 ， 5,411,971 ， 5,420,297 ， 5,422,354 ， 5,446,052 ， 5,451,586 ， 5,525,712 ， 5,527,811 ， 5,536,737 ， 5,541,195 ， 5,594,022 ， 5,561,113 ， 5,576,317 ， 5,604,247， 5,624,950，及 5,635,510 ；国 际 专 利 公 开 WO 90/05525， WO 91/09844， WO 91/12266， WO 92/06079， WO 92/12151， WO 92/15585， WO 92/20661， WO 92/20676， WO 92/21677， WO 92/22569， WO 93/00330， WO 93/00331， WO 93/01159， WO 93/01160， WO 93/01165， WO 93/01169， WO 93/01170， WO 93/06099， WO 93/10073， WO 93/14084， WO 93/19064， WO 93/21155， WO 94/04496， WO 94/08997， WO 94/29309， WO 95/11895， WO 95/14017， WO 97/19942， WO 97/24356， WO 97/38692， WO 98/02158， 及 WO 98/07694 ； 欧洲 专 利 公 开 Nos.284942， 327009， 333174， 336230， 360390， 394989， 428434， 429366， 443132， 446706， 484719， 499313， 512901， 512902， 514273， 514275， 515240， 520555， 522808， 528495， 532456 及 591040 中的那些化合物。
可与本发明化合物组合使用的抗抑郁剂的适当类别包括但不限于降肾上腺 素 再 摄 取 抑 制 剂、 选 择 性 5- 羟 色 胺 再 摄 取 抑 制 剂 (SSRI)、 选择性去甲肾上腺素 (noradrenaline)/ 降肾上腺素 (norepinephrine) 再摄取抑制剂 (NARI)、 单胺氧化酶抑制 剂 (MAO)、 单胺氧化酶可逆性抑制剂 (RIMA)、 双重 5- 羟色胺 / 去甲肾上腺素再摄取抑制剂 (SNRI)、 α- 肾上腺素受体拮抗剂、 去甲肾上腺素及特异性 5- 羟色胺抗抑郁剂 (NaSSA)、 及 非典型抗抑郁剂。
降 肾 上 腺 素 再 摄 取 抑 制 剂 的 非 限 制 性 实 例 包 括 叔 胺 三 环 及 仲 胺 三 环， 例如 阿 地 唑 仑 (adinazolam)、 阿 米 庚 酸 (amineptine)、 阿 莫 沙 平 (amoxapine)、 布替林 (butriptyline)、 地 美 替 林 (demexiptiline)、 去 甲 替 林 (desmethylamitriptyline)、 脱 甲 基 克 罗 普 拉 明 (desmethylclomipramine)、 地 美 替 林 (demexiptiline)、 去甲丙咪 嗪 (desipramine)、 多 虑 平 (doxepin)、 度 琉 平 (dothiepin)、 氟 啶 胺 (fluacizine)、 丙 咪 嗪 (imipramine)、 丙 咪 嗪 氧 化 物 (imipramine oxide)、 伊 普 吲 哚 (iprindole)、 洛非 帕 明 (lofepramine)、 马 普 罗 替 林 (maprotiline)、 美 利 曲 辛 (melitracen)、 美他帕明 (metapramine)、 诺克里普拉明 (norclolipramine)、 去甲替林 (nortriptyline)、 诺昔替 林 (noxiptilin)、 奥 匹 哌 醇 (opipramol)、 哌 拉 平 (perlapine)、 比 左 芬 (pizotifen)、 苯 噻 啶 (pizotyline)、 丙 吡 西 平 (propizepine)、 普 罗 替 林 (protriptyline)、 奎纽胺 (quinupramine)、 噻奈普汀 (tianeptine)、 曲米帕明 (trimipramine)、 曲米帕明 - 阿密替林 氧化物 (trimipramineamiltriptylinoxide)、 及其药用盐。
选 择 性 5- 羟 色 胺 再 摄 取 抑 制 剂 的 非 限 制 性 实 例 包 括， 例如氯米帕 明 (clomipramine)、非 莫 西 汀 (femoxetine)、氟 西 汀 (fluoxetine)、氟 伏 沙 明 (fluvoxamine)、 帕罗西汀 (paroxetine)、 及舍曲林 (sertraline)、 及其药用盐。
选 择 性 去 甲 肾 上 腺 素 / 降 肾 上 腺 素 再 摄 取 抑 制 剂 的 非 限 制 性 实 例 包 括， 例 如 托 莫 西 汀 (atomoxetine)、 布 普 品 (bupropion)、 瑞 波 西 汀 (reboxetine)、 托莫西汀 (tomoxetine) 及维洛沙秦 (viloxazine)， 及其药用盐。
选择性单胺氧化酶抑制剂的非限制性实例包括， 例如异唑肼 (isocarboxazid)、 苯乙肼 (phenelzine)、 反苯环丙胺 (tranylcypromine) 及塞雷吉林 (selegiline)、 及其 药用盐。其它可与本发明组合使用的单胺氧化酶抑制剂包括， 克罗吉林 (clorgyline)、 西莫沙酮 (cimoxatone)、 贝氟沙酮 (befloxatone)、 溴法罗明 (brofaromine)、 巴嗪普令 (bazinaprine)、 BW-616U(Burroughs Wellcome)、 BW-1370U87、 (Burroughs Wellcome)、 CS-722(RS-722)(Sankyo)、 E-2011(Eisai)、 哈 尔 明 (harmine)、 骆 驼 蓬 碱 (harmaline)、 吗 氯 贝 胺 (moclobemide)、 PharmaProjects 3975(Hoechst)、 RO 41-1049(Roche)、 RS-8359(Sankyo)、 T-794(Tanabe Seiyaku)、 托 咯 沙 酮 (toloxatone)、 K-Y 1349(Kalir and Youdim)、 LY-51641(Lilly)、 LY-121768(Lilly) 、 M&B 9303(May & Baker) 、 MDL 72394(Marion Merrell)、 MDL 72392(Marion Merrell)、 塞克罗雷明 (sercloremine)、 及 MO 1671、 及其药用盐。可用于本发明的适当的单胺氧化酶可逆性抑制剂包括， 例如吗氯贝胺 (moclobemide)、 及其药用盐。
双重 5- 羟色胺 / 去甲肾上腺素再吸收阻断剂的非限制性实例包括， 例如度洛西汀 (duloxetine)、 米那普仑 (milnacipran)、 米氮平 (mirtazapine)、 奈法唑酮 (nefazodone)、 及文拉法辛 (venlafaxine)。
其 它 可 用 于 本 发 明 方 法 的 抗 抑 郁 剂 的 非 限 制 性 实 例 包 括， 例如阿地唑仑 (adinazolam)、阿 拉 丙 酯 (alaproclate)、阿 米 庚 酸 (amineptine)、安 米 替 林 (amitriptyline)、 安 米 替 林 / 氯 二 氮 平 组 合 剂 (amitriptyline/chlordiazepoxide combination)、 阿 替 美 唑 (atipamezole)、 米 氮 平 (azamianserin)、 巴 嗪 普 令 (bazinaprine)、苯 呋 拉 林 (befuraline)、二 苯 美 仑 (bifemelane)、苯 奈 达 林 (binodaline)、 比培那醇 (bipenamol)， 溴法罗明 (brofaromine)、 卡罗沙酮 (caroxazone)、 西 文 氯 胺 (cericlamine)、 氰 帕 明 (cianopramine)、 西 莫 沙 酮 (cimoxatone)、 西酞普兰 (citalopram)、 氯 美 醇 (clemeprol)、 氯 伏 胺 (clovoxamine)、 氮 卓 尼 尔 (dazepinil)、 二 甲 基 乙 醇 胺 (deanol)、 地 美 替 林 (demexiptiline)、 二 苯 西 平 (dibenzepin)、 二甲他 林 (dimetacrine)、 度 琉 平 (dothiepin)、 屈 昔 多 巴 (droxidopa)、 乙 非 辛 (enefexine)、 艾 司 唑 仑 (estazolam)、 依 托 哌 酮 (etoperidone)、 酚 加 宾 (fengabine)、 非唑拉明 (fezolamine)、氟 曲 辛 (fluotracen)、亚 达 唑 散 (idazoxan)、吲 达 品 (indalpine)、 茚 洛 秦 (indeloxazine)、 左 丙 替 林 (levoprotiline)、 利 托 西 汀 (litoxetine)、 美地 沙 明 (medifoxamine)、 美 曲 吲 哚 (metralindole)、 米 安 色 林 (mianserin)、 米那普林 (minaprine)、 孟 替 瑞 林 (montirelin)、 奈 拉 西 坦 (nebracetam)、 平 痛 新 (nefopam)、 尼 亚 拉 胺 (nialamide)、 诺 米 芬 辛 (nomifensine)、 诺 氟 西 汀 (norfluoxetine)、 奥替瑞林 (orotirelin)、 奥 沙 弗 森 (oxaflozane)、 匹 那 西 泮 (pinazepam)、 匹 林 酮 (pirlindone)、 利 坦 色 林 (ritanserin)、 洛 利 普 利 (rolipram)、 塞 克 罗 雷 明 (sercloremine)、 司普 替 林 (setiptiline)、西 布 曲 明 (sibutramine)、舒 布 硫 胺 (sulbutiamine)、舒 必 利 (sulpiride)、替 尼 沙 秦 (teniloxazine)、托 扎 啉 酮 (thozalinone)、塞 蒙 理 贝 林 (thymoliberin)、替 氟 卡 宾 (tiflucarbine)、托 芬 那 辛 (tofenacin)、托 非 索 泮 (tofisopam)、 托洛沙酮 (toloxatone)、 维拉必利 (veralipride)、 维喹啉 (viqualine)、 苯 吡烯胺 (zimelidine)、 及左美他平 (zometrapine)， 及其药用盐， 及圣约翰草 (St.John′ s wort herb) 或金丝桃 (Hypencuin perforatum) 或其萃取物。
另一实施例中， 阿片类可与本发明的一种以上化合物组合使用。适用于此目 的 的 示 例 性 阿 片 类 包 括 但 不 限 于， 阿 芬 太 尼 (alfentanil)、 布 托 啡 诺 (butorphanol)、 丁 丙 诺 啡 (buprenorphine)、 右 吗 拉 胺 (dextromoramide)、 地 佐 辛 (dezocine)、 右丙氧 芬 (dextropropoxyphene)、 可待因 (codeine)、 二羟基可待因 (dihydrocodeine)、 地芬诺 酯 (diphenoxylate)、 埃 托 啡 (etorphine)、 芬 太 尼 (fentanyl)、 氢 可 酮 (hydrocodone)、 氢 吗 啡 酮 (hydromorphone)、凯 托 米 酮 (ketobemidone)、洛 哌 丁 胺 (loperamide)、 左 啡 诺 (levorphanol)、左 美 沙 酮 (levomethadone)、美 吡 利 啶 (meperidine)、美 普 他 酚 (meptazinol)、美 沙 酮 (methadone)、吗 啡 (morphine)、吗 啡 -6- 葡 萄 糖 苷 酸 (morphine-6-glucuronide)、那 不 菲 (nalbuphine)、纳 洛 酮 (naloxone)、氧 可 酮 (oxycodone)、 氧吗啡酮 (oxymorphone)、 戊唑辛 (pentazocine)、 哌替啶 (pethidine)、 哌 腈 米 特 (piritramide)、 丙 氧 芬 (propoxylphene)、 瑞 芬 太 尼 (remifentanil)、 舒芬太尼 (sulfentanyl)、 替利定 (tilidine)、 及曲马多 (tramadol)。
另一实施例中， 抗炎化合物， 例如类固醇剂或非类固醇抗炎药 (NSAID) 可与本发 明的一种以上化合物组合使用。类固醇剂的非限制性实例包括泼尼松龙 (prednisolone) 及可的松 (cortisone)。NSAID 的非限制性实例包括阿西美辛 (accmetacin)、 阿司匹林 (aspirin)、 塞 来 昔 布 (celecoxib)、 地 拉 考 昔 (deracoxib)、 待 克 菲 那 (diclofenac)、 二氟尼柳 (diflunisal)、 乙氧基苯甲酰胺 (ethenzamide)、 依托芬那酯 (etofenamate)、 依 托 考 昔 (etoricoxib)、 菲 诺 洛 芬 (fenoprofen)、 氟 芬 那 酸 (flufenamic acid)、 富帝芬 (flurbiprofen)、 氯那唑酸 (lonazolac)、 氯诺昔康 (lornoxicam)、 布洛芬 (ibuprofen)、 吲 哚美辛 (indomethacin)、 伊索昔康 (isoxicam)、 凯布宗 (kebuzone)、 酮洛芬 (ketoprofen)、 酮 咯 酸 (ketorolac)、 萘 普 生 (naproxen)、 萘 丁 美 酮 (nabumetone)、 尼 氟 酸 (niflumic acid)、 舒 林 酸 (sulindac)、 托 美 丁 (tolmetin)、 匹 洛 西 卡 (piroxicam)、 甲氯芬那酸 片 (meclofenamic acid)、 甲灭酸 (mefenamic acid)、 美洛西卡 (meloxicam)、 麦它明作 (metamizol)、 单 苯 保 泰 松 (mofebutazone)、 羟 基 保 泰 松 (oxyphenbutazone)、 帕瑞昔布 (parecoxib)、 芬尼定 (phenidine)、 苯保泰松 (phenylbutazone)、 匹洛西卡 (piroxicam)、 丙帕他莫 (propacetamol)、 异丙安替比林 (propyphenazone)、 罗菲可西保 (rofecoxib)、 水 杨酸酰胺 (salicylamide)、 舒洛芬 (suprofen)、 噻洛芬酸 (tiaprofenic acid)、 滕诺息卡 (tenoxicam)、 伐地考昔 (valdecoxib)、 4-(4- 环己基 -2- 甲基噁唑 -5- 基 )-2- 氟代苯并磺 酰胺、 N-[2-( 环己氧基 )-4- 硝苯基 ] 甲烷磺酰胺、 2-(3， 4- 二氟苯基 )-4-(3- 羟基 -3- 甲 基丁氧基 )-5-[4-( 甲基磺酰基 ) 苯基 ]-3(2H)- 哒嗪酮 (pyridazinone)、 及 2-(3， 5- 二 氟苯基 )-3-[4-( 甲基磺酰基 ) 苯基 ]-2- 环戊 -1- 酮 )。本发明的化合物也可与醋氨酚 (acetaminophen) 组合使用。
任何上述的组合可用于治疗任何适当的疾病、 失调或症状。本发明的化合物与另 一种治疗剂的组合的示例性使用如下所述。
阿片 -NOS 抑制剂组合对慢性神经性疼痛
神经受伤可导致称为神经性疼痛的异常疼痛状态。一些临床疾病包括触摸异常 性疼痛 ( 对正常无毒的机械性刺激的疼痛反应 )、 痛觉过敏 ( 响应于正常疼痛刺激的疼痛 强度放大 )、 及自发性疼痛。大鼠的脊椎神经结扎 (SNL) 是神经性疼痛的动物模型， 该神经 性疼痛产生自发性疼痛、 异常性疼痛、 及触觉过敏， 与人体观察到的临床疾病相似 (Kim and Chung， Pain 50 ： 355-363， 1992 ； Seltzer， Neurosciences 7 ： 211-219， 1995)。
神经性疼痛特别对阿片类治疗不敏感 (Benedetti et al.， Pain 74 ： 205-211， 1998)， 更 被 认 为 对 阿 片 类 止 痛 剂 有 相 当 的 顽 固 性 (MacFarlane et al.， Pharmacol. Ther.75 ： 1-19， 1997 ； Watson， Clin.J.Pain 16 ： S49-S55， 2000)。虽然提高剂量可以克服 降低的阿片效应， 但受限于增加的副作用及耐受性。吗啡给予已知会活化 NOS 系统， 其限 制吗啡的止痛作用 (Machelska et al.， NeuroReport 8 ： 2743-2747， 1997 ； Wong et al.， Br.J.Anaesth.85 ： 587， 2000 ； Xiangqi and Clark， Mol.Brain.Res.95 ： 96-102， 2001)。然 而已表明吗啡与 L-NAME 的组合全身性给予在次阈值 (subthreshold) 剂量下， 可减轻机械 性及冷觉的异常性疼痛， 但在各药剂单独给予下是无效的 (Ulugol et al.， Neurosci.Res. Com.30(3) ： 143-153， 2002)。 与吗啡止痛剂共同给予的 L-NAME 的效应， 显示由 nNOS 介导， 因 为在 nNOS 裸 - 突变小鼠中 L-NAME 缺乏强化吗啡止痛剂效力的能力 (Clark and Xiangqi， Mol.Brain.Res.95 ： 96-102， 2001)。以 L-NAME 或 7-NI 与 μ-、 δ- 或 κ- 选择性阿片激动 剂共同给予， 在弹尾 (tail-flick) 模式或掌压 (paw pressure) 模式中已被确认具有强化 的止痛 (Machelska et al.， J.Pharmacol.Exp.Ther.282 ： 977-984， 1997)。
虽然阿片类在中度至重度疼痛的治疗中为重要疗法， 但是其通常出现的副作用限 制其使用， 一些阿片类引发的痛觉过敏的矛盾表现， 可能确实使患者对疼痛更敏感， 且潜在地 加 重 该 疼 痛 (Angst and Clark， Anesthesiology， 2006， 104(3)， 570-587 ； Chu et.al. J.Pain 2006， 7(1)43-48)。耐受性及阿片类引发的痛觉过敏的发展， 与脑中 NO 形成的水平 提高一致。对阿片类的止痛反应降低， 是因为 NO- 诱导的向上调节痛觉过敏反应 (Heinzen and Pollack， Brain Res.2004， 1023， 175-184)。
因此， nNOS 抑制剂与阿片类组合 ( 例如， 上述那些组合 )， 可促进神经性疼痛中的 阿片止痛效果， 及预防阿片耐受性及阿片引发的痛觉过敏的发展。
对慢性疼痛、 神经性疼痛、 慢性头痛、 或偏头痛的抗抑郁剂 -NOS 抑制剂组合
许多抗抑郁剂用于治疗神经性疼痛 (McQuay et al.， Pain 68 ： 217-227， 1996) 及偏头痛 (TomKins et al.， Am.J.Med.111 ： 54-63， 2001)， 经 5- 羟色胺系统或去甲肾上 腺素系统而作用。NO 用作前述系统的神经调节剂 (Garthwaite and Boulton， Annu.Rev. Physiol.57 ： 683， 1995)。7-NI 已显示可经由尼古丁乙酰胆碱受体激动剂 DMPP， 经由去 甲 肾 上 腺 素 (noradrenaline ； NA) 转 运 体， 加 强 NA 释 放 (Kiss et al.， Neuroscience Lett.215 ： 115-118， 1996)。局部给予抗抑郁剂， 例如帕罗西汀 (paroxetine)、 噻奈普汀 (tianeptine)、 及丙咪嗪 (imipramine)， 已显示会降低海马趾 (hippocampal) 的 NO 浓度 (Wegener et al.， Brain Res.959 ： 128-134， 2003)。NO 可能在抗抑郁剂有效治疗疼痛及抑 郁的机制中是重要的， 而 nNOS 抑制剂与抗抑郁剂的组合， 例如上述的组合， 将产生更好的 治疗。
偏头痛中 5- 羟色胺 5HT1B/1D/1F 激动剂或 CGRP 拮抗剂与 NOS 抑制剂组合
NO 供体三硝酸甘油 (GTN) 的给予引发正常个体立即头痛， 并造成 4-6 小时潜伏 期的偏头痛患者出现延缓的偏头痛发作 (Iversen et al.， Pain 38 ： 17-24， 1989)。在偏 头痛发作的患者中， 有效的血管舒张剂 CGRP( 降血钙素基因相关胜肽 ； Calcitonin Gene Related Peptide) 在颈动脉中的水平与偏头痛发作的开始及消失相关 (Durham， Curr Opin Investig Drugs 5(7) ： 731-5， 2004)。对 5HT1B、 5HT1D、 及 5HT1F 受体有亲和性的抗偏头痛药 舒马普坦 (sumatriptan)， 会降低 GTN- 引发的立即性头痛 (immediate headache) 及同时 使脑动脉及脑外 (extracerebral) 动脉收缩 (Iversen and Olesen， Cephalagia 13(Suppl 13) ： 186， 1993)。抗偏头痛药利札曲普坦 (rizatriptan) 也会减少偏头痛减轻后的 CGRP 的 血浆水平 (Stepien et al.， Neurol.Neurochir.Pol.37(5) ： 1013-23， 2003)。因此 NO 及 CGRP 均被暗示为偏头痛的起因。5- 羟色胺 5HT1B/1D 激动剂已显示阻断脑皮质切片中 NMDA 受体 - 引起的 NO 信号传递 (Strosznajder et al.， Cephalalgia 19(10) ： 859， 1999)。此 结果推测本发明化合物与选择性或非选择性 5HT1B/1D/1F 激动剂或 CGRP 拮抗剂组合 ( 例如上 述的组合 )， 可用于偏头痛的治疗。
药物组合物
本发明的化合物优选配制成药物组合物， 用于以适合体内给予的生物相容形式给 予人对象。因此， 在另一方面， 本发明提供一药物组合物， 包括本发明的化合物与适当稀释 剂、 载体或赋形剂混和。
本发明的化合物可以游离碱、 盐、 溶剂化物及前药的形式使用。 所有形式均在本发 明范围内。根据本发明方法， 所述化合物或其盐、 溶剂化物、 或前药可根据所选的给予路径 以多种形式给予患者， 如该技术领域中技术人员所理解的。 本发明的化合物可经例如口服、 非消化道、 口腔、 舌下、 鼻腔、 直肠内、 贴片、 泵、 或经皮给予， 该药物组合物可根据给予路径配制。 非消化道给予包括静脉内、 腹腔内、 皮下、 肌肉内、 经上皮、 鼻腔、 经肺、 经脑脊髓膜、 直 肠内、 及局部给予模式。非消化道给予可在选择的时间段内连续灌注。
本发明的化合物可为口服给予， 例如与惰性稀释剂或与可吸收的可食载体， 或其 包覆于硬或软壳明胶胶囊中， 或可压缩成片剂， 或直接加入饮食的食物中。 在口服治疗给予 时， 本发明化合物可与赋形剂结合， 以可消化片剂、 口含片剂、 栓剂、 胶囊、 酏剂、 悬浮剂、 糖 浆、 糯米纸等形式使用。
本发明的化合物也可经非消化道给予。 本发明化合物的溶液可在适当与表面活性 剂 ( 例如羟丙基纤维素 ) 混合的水中制备。分散体也可在甘油、 液态聚乙二醇、 DMSO 及其 具有或不具有乙醇的混合物、 及油中制备。在存放及使用的一般条件下， 这些制备品可包 括防腐剂， 以避免微生物生长。用于选择和制备适合制剂的常规步骤及成分已描述于， 例 如 Remington′ s Pharmaceutical Sciences(2003-20th edition) 及 The United States Pharmacopeia ： The National Formulary(USP 24 NF 19)(1999 年出版 ) 中。
适合注射的医药形式， 包括无菌水溶液或分散体及用于临时制备无菌注射溶液或 分散体的无菌粉末。在所有情况下， 该形式必须是无菌的且必须是可经注射器容易给予的 程度的液体。
鼻腔给予的组合物可简易配制为气溶胶、 液滴、 胶、 及粉末。气溶胶剂型典型包括 活性物质在生理可接受水性或非水性溶剂中的溶液或细悬浮液， 通常以无菌形式的单或多 剂量存在于密封容器中， 其可采用药筒 (cartridge) 形式或以雾化装置再填充使用。可替 换地， 该密封容器可为单一配量装置 (unitary dispensing device)， 例如固定有使用后丢 弃的剂量阀的单剂量鼻吸入器或气溶胶配量器 (dispenser)。剂量形式包括气溶胶配量器 时， 可包含推进剂 (propellant)， 其可以是压缩气体， 如压缩空气或有机推进剂， 例如氟氯 烃。气溶胶剂量形式也可为泵雾化器形式。
适合口腔或舌下给予的组合物， 包括片剂、 锭剂、 及药锭 (pastilles)， 其中活性成 分以载体配制， 例如糖、 阿拉伯胶、 角叉胶、 或明胶及甘油。 直肠给予的组合物可简便地为含 有常用栓剂基质如椰子油的栓剂。
本发明的化合物可单独或与药用载体组合而给予动物， 例如人， 如上所述， 由该化 合物的溶解度及化学性质、 所选的给予路径、 及标准制药操作， 来决定该化合物的比例。
本发明化合物和 / 或含本发明化合物的组合物的剂量， 可根据许多因素而异， 例 如根据该化合物的药效性质 ； 给予模式 ； 受体的年龄、 健康、 及体重 ； 疾病的本质及程度 ； 治 疗频率 ； 如果有， 目前的治疗形式 ； 及治疗动物中该化合物的清除速度。本领域中的技术人 员可根据上述因素确定适当剂量。本发明的化合物可在开始时根据临床反应， 根据需要调 整而给予适当剂量。一般而言， 每日给予人 0.05mg-3000mg( 固体形式测量 ) 本发明的化合 物时， 可得满意的结果。优选的剂量范围在 0.05-500mg/kg， 更优选为 0.5-50mg/kg。
本发明的化合物可单独使用或与其它具有 NOS 抑制活性的药剂组合使用， 或与其 它治疗、 预防中风、 神经病变性疼痛或偏头痛或其它因 NOS 抑制作用造成的疾病和 / 或降低 上述疾病风险的治疗形式 ( 可或不可抑制 NOS 的治疗 ) 组合使用。在组合治疗中， 一种以 上的该治疗化合物的剂量在单独给予时可较标准剂量降低。在此情况下， 组合时的该化合 物剂量会提供治疗效果。
除上述治疗使用之外， 本发明化合物也可用于诊断分析、 筛选分析中， 并可作为研究工具使用。
诊断分析中， 本发明化合物可用于鉴定或检测 NOS 活性。关于此应用， 该化合物可 为放射性标记的 ( 如本文其他篇幅所述 )， 以及与有机体细胞群接触。 细胞上存在放射性标 记可表示 NOS 活性。
筛选分析中， 本发明化合物可用于鉴定其它抑制 NOS 的化合物， 如第一代药物 (first generation drugs)。作为研究工具时， 本发明的化合物可用于酶分析及研究 NOS 活性位置的分析中。前述信息可用于， 例如诊断或监测疾病状态或进展。在前述分析中， 本 发明化合物也可为放射性标记的。
NOS 体外抑制分析
本发明的化合物已被发现对 NOS 神经元同种型表现出选择性抑制。本领域技术人 员可检查化合物优先抑制 nNOS， 胜于 iNOS 和 / 或 eNOS 的功效， 例如可使用实施例 34 及下 文所述的方法。
以下非限制实施例是对本发明的解释说明 ：
实施例
实施例 1 ： N-(4-(2-(1- 甲基吡咯烷 (pyrrolidin)-2- 基 ) 乙基 )-3- 氧代色满 (oxochroman)-7- 基 ) 噻吩 (thiophene)-2- 甲脒 (carboximidamide)(1) 的合成
7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 (oxazin)-3(4H)- 酮 ： 根 据 J.Chem. Research(M)2003， 1120-1128 中描述的步骤制备。
4-(2-(1- 甲基吡咯烷 -2- 基 ) 乙基 )-7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 ： 7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 (0.5g， 2.575mmol)、 2-(2- 氯乙基 )-1- 甲基 吡咯烷盐酸盐 (0.94g， 5.150mmol)、 NaI(0.19g， 1.287mmol)、 及 K2CO3(2.13g， 15.452mmol) 在干 DMF(10mL) 中的悬浮液， 在室温下搅拌过夜 (18 小时 )。此反应以水 (150mL) 稀释， 该 产物以乙酸乙酯 (2×25mL) 萃取。合并的乙酸乙酯层以盐水 (20mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)。 蒸发溶剂后， 粗产物以柱层析法 (3 ∶ 97(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2) 纯化， 获得黄色 1 固体的标题化合物 (0.525g， 67 ％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ1.47-1.65(m， 4H)， 1.79-2.13(m， 4H)， 2.18(s， 3H)， 2.89-2.95(m， 1H)， 3.98(t， 2H， J ＝ 7.8Hz)， 4.79(s， 2H)， 7.40(d， 1H， J＝ 9.0Hz)， 7.80(d， 1H， J ＝ 2.7Hz)， 7.98(dd， 1H， J ＝ 2.4， 9.0Hz) ； ESI-MS(m/z， ％)： 306(MH+， 100)。
7- 氨基 -4-(2-(1- 甲基吡咯烷 -2- 基 ) 乙基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 ：
将 4-(2-(1- 甲 基 吡 咯 烷 -2- 基 ) 乙 基 )-7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -3(4H)- 酮 (0.49g， 1.604mmol) 在干乙醇 (5mL) 中的溶液， 以 Pd-C( ～ 0.05g) 处理， 并用氢气吹洗。 对该烧瓶抽真空， 并用氢气吹洗两次。此反应在室温下于氢气氛围 ( 气囊压力 (balloon pressure)) 下搅拌 2 小时。此反应经 Celite 床过滤， 甲醇 (3×10mL) 清洗。蒸发合并 1 的有机层， 获得固体粗标题化合物 (0.44g， 定量 )。 H NMR(DMSO-d6)δ1.39-1.51(m， 2H)， 1.56-1.66(m， 2H)， 1.76-2.06(m， 4H)， 2.16(s， 3H)， 2.88-2.94(m， 1H)， 3.74-3.86(m， 2H)， 4.46(s， 2H)， 5.01(s， 2H)， 6.22(d， 1H， J ＝ 2.4Hz)， 6.26(dd， 1H， J ＝ 2.1， 8.4Hz)， 6.82(d， + 1H， J ＝ 8.4Hz) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 276(MH ， 100)。
N-(4-(2-(1- 甲 基 吡 咯 烷 -2- 基 ) 乙 基 )-3- 氧 代 色 满 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲 脒 (1) ： 7- 氨基 -4-(2-(1- 甲基吡咯烷 -2- 基 ) 乙基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 (0.12g， 0.435mmol) 在 干 乙 醇 (5mL) 中 的 溶 液， 室 温 下 以 噻 吩 -2- 亚 胺 亚 甲 基 硫 甲 酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘 酸 盐 (0.24g， 0.871mmol) 处 理。 所 得 混 合 物 搅 拌 过 夜 (18 小 时 )。 同 时， 加 入 额 外 的 噻 吩 -2- 亚 胺 亚 甲 基 硫 甲 酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (0.24g， 0.871mmol)， 此反应再搅拌 24 小时。 以饱 和 NaHCO3 溶液 (25mL) 稀释此反应物， 此产物然后以 CH2Cl2(2×20mL) 萃取。合并的 CH2Cl2 层以盐水 (15mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)。蒸发溶剂， 以柱层析法 (5 ∶ 95(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2) 纯化该粗产物， 获得固体的标题化合物 1(0.155g， 93％ )。1H NMR(DMSO-d6) δ 1.46-1.65(m ， 4H) ， 1.64-2.13(m ， 4H) ， 2.20(s ， 3H) ， 2.90-2.96(m ， 1H) ， 3.86-3.93(m ， 2H)， 4.58(s， 2H)， 6.49-6.58(m， 4H)， 7.07-7.10(m， 2H)， 7.60(d， 1H， J ＝ 5.4Hz)， 7.73(d， + 1H， J ＝ 3.0Hz) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 385(MH ， 68)， 274(46)， 193(100) ； ESI-HRMS 计 算 + C20H25N4O2S(MH )， 计算值 ： 385.1692， 观察值 ( 实际值， observed) ： 385.1687 ； HPLC 纯度 98％ ( 以面积计 (by area))。
实施例 2 ： N-(4-(2-(1- 甲 基 吡 咯 烷 -2- 基 ) 乙 基 ) 色 满 (chroman)-7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(2) 的合成
7- 氨基 -4-(2-(1- 甲基吡咯烷 -2- 基 ) 乙基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 ： 详细的制备方法及光谱数据如实施例 1 所述。
4-(2-(1- 甲基吡咯烷 -2- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -7- 胺 ： 在 0 ℃下对 LiAlH4(4.21mL， 4.212mmol， 1.0M 溶液在 THF 中 ) 溶液用干 THF(5mL) 中 7- 氨 基 -4-(2-(1- 甲 基 吡 咯 烷 -2- 基 ) 乙 基 )-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -3(4H)- 酮 (0.29g， 1.053mmol) 逐滴处理。所得混合物置于室温中并搅拌过夜。反应物依序加入水 (0.16mL)、 2N NaOH 溶 液 (0.16mL)、 水 (0.16mL)， 小 心 冷 却。 室 温 下 搅 拌 30 分 钟 后， 过滤此反应 物， 以 CH2Cl2(3×10mL) 清洗。蒸发合并的 CH2Cl2 层， 粗产物经柱层析法 (5 ∶ 95(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2) 纯 化， 获 得 浆 状 的 标 题 化 合 物 (0.23g， 84 ％ )。1H NMR(DMSO-d6)
δ1.28-1.45(m， 2H)， 1.56-1.65(m， 2H)， 1.75-2.10(m， 4H)， 2.18(s， 3H)， 2.88-2.95(m， 1H)， 3.03-3.10(m， 4H)， 4.08(t， 2H， J ＝ 4.8Hz)， 4.36(s， 2H)， 6.00(d， 1H， J ＝ 2.4Hz)， 6.06(dd， + 1H， J ＝ 2.4， 8.5Hz)， 6.43(d， 1H， J ＝ 8.4Hz) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 262(MH ， 100)， 163(33)， 112(42).
N-(4-(2-(1- 甲 基 吡 咯 烷 -2- 基 ) 乙 基 ) 色 满 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲 脒 (2) ： 4-(2-(1- 甲基吡咯烷 -2- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -7- 胺 (0.21g， 0.803mmol) 在 干 乙 醇 (5mL) 中 的 溶 液， 室 温 下 以 噻 吩 -2- 亚 胺 亚 甲 基 硫 甲 酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (0.45g， 1.606mmol) 处理。所得混合物在室温下 搅拌 24 小时。此反应物以饱和 NaHCO3 溶液 (20mL) 稀释， 产物经 CH2Cl2(2×20mL) 萃取。合 并的 CH2Cl2 层以盐水 (15mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)。 蒸发溶剂， 粗产物经柱层析法 (5 ∶ 95(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2) 纯化， 获得固体标题化合物 2(0.22g， 75％ )。1H NMR(DMSO-d6) δ1.35-1.52(m， 2H)， 1.58-1.68(m， 2H)， 1.82-2.08(m， 4H)， 2.21(s， 3H)， 2.90-2.97(m， 1H)， 3.18-3.32(m， 4H)， 4.16(t， 2H， J ＝ 4.5Hz)， 6.22-6.34(m， 4H)， 6.63(d， 1H， J ＝ 8.4Hz)， 7.06(dd， 1H， J ＝ 3.9， 5.1Hz)， 7.55(d， 1H， J ＝ 5.1Hz)， 7.68(d， 1H， J ＝ 3.6Hz) ； ESI-MS(m/ + + z， ％)： 371(MH ,86)， 260(56)， 186(100)， 128(81) ； ESI-HRMS 计算 C20H27N4OS(MH )， 计算值 ： 371.1900， 观察值 ： 371.1903 ； HPLC 纯度 98.2％ ( 以面积计 )。
实施例 3 ： N-(3- 氧代 -4-(2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(3) 的合成
7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -3(4H)- 酮 ： 根 据 J.Chem.Research(M)2003， 1120-1128 中描述的步骤制备。
7- 硝基 -4-(2- 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 ： 7- 硝 基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 (0.5g， 2.575mmol)、 1-(2- 氯乙基 ) 吡咯烷盐酸盐 (0.43g， 2.575mmol)、 及 K2CO3(1.06g， 7.726mmol) 在干 DMF(5mL) 中的悬浮液， 在 100 ℃搅 拌过夜 (18 小时 )。将反应物置于室温， 以水 (100mL) 稀释， 产物经乙酸乙酯 (2×25mL) 萃 取。该合并的乙酸乙酯层以盐水 (20mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)。蒸发溶剂， 粗产物经柱层 析法 (3 ∶ 97(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2) 纯化， 获得固体标题化合物 (0.49g， 65 ％ )。 1 H NMR(DMSO-d6)δ1.62-1.70(m， 4H)， 2.46-2.54(m， 4H，并 入 DMSO-d6 中 )， 2.60(t， 2H， J
＝ 6.9Hz)， 4.08(t， 2H， J ＝ 6.9Hz)， 4.80(s， 2H)， 7.44(d， 1H， J ＝ 9.3Hz)， 7.80(d， 1H， J＝ + 2.4Hz)， 7.96(dd， 1H， J ＝ 2.7， 9.0Hz) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 292(MH ， 100)。
7- 氨基 -4-(2- 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 ： 将 7- 硝 基 -4-(2- 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 (0.46g， 1.579mmol) 在干乙醇 (5mL) 中的溶液， 以 Pd-C( ～ 0.05g) 处理， 用氢气吹洗。此反应在氢气氛围 ( 气 囊压力 ) 搅拌 4 小时。此反应经 Celite 床过滤， 甲醇 (3×10mL) 清洗。蒸发合并的有机 层， 真空下干燥， 获得固体粗标题化合物 (0.4g， 97 ％ )。1H NMR(DMSO-d6)δ1.61-1.70(m， 4H)， 2.44-2.56(m， 6H， 并入 DMSO-d6 中 )， 3.90(t， 2H， J ＝ 7.2Hz)， 4.47(s， 2H)， 5.01(s， 2H)， 6.22(d， 1H， J ＝ 2.4Hz)， 6.25(dd， 1H， J ＝ 2.4， 8.2Hz)， 6.84(d， 1H， J ＝ 8.7Hz) ； ESI-MS(m/ + z，％ ) ： 262(MH ， 100)， 191(44)。
N-(3- 氧 代 -4-(2-( 吡 咯 烷 -1- 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(3) ： 将 7- 氨基 -4-(2- 吡咯烷 -1- 基 ) 乙 基 )-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -3(4H)- 酮 (0.125g， 0.478mmol) 在 干 乙 醇 (5mL) 中 的 溶 液， 室温下以噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘 酸盐 (0.27g， 0.956mmol) 处理。所得混合物搅拌 2 天。然后此反应物以饱和 NaHCO3 溶液 (20mL) 稀释， 此产物经 CH2Cl2(2×20mL) 萃取。合并的 CH2Cl2 层以盐水 (15mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)。蒸发溶剂， 以柱层析法 (3 ∶ 97(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2) 纯化该粗产物， 获 1 得固体的标题化合物 3(0.16g， 90％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ1.64-1.72(m， 4H)， 2.46-2.54(m， 4H， 并入 DMSO-d6 共振中 )， 2.60(t， 2H， J ＝ 7.2Hz)， 3.99(t， 2H， J ＝ 7.2Hz)， 4.58(s， 2H)， 6.47-6.57(m， 4H)， 7.06-7.12(m， 2H)， 7.60(d， 1H， J ＝ 4.2Hz)， 7.73(d， 1H， J ＝ 3.3Hz) ； + ESI-MS(m/z，％ ) ： 371(MH ， 66)， 150(63)， 128(100) ； ESI-HRMS 计算 C19H23N4O2S(MH+)， 计算 值： 371.1536， 观察值 ： 371.1548 ； HPLC 纯度 93.17％ ( 以面积计 ).
实施例 4 ： N-(4-(2-( 吡 咯 烷 -1- 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(4) 的合成
7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -3(4H)- 酮 ： 根 据 J.Chem.Research(M)2003， 1120-1128 中的文献步骤制备。
7- 硝 基 -3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 ： 7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -3(4H)- 酮 (300mg， 1.545mmol) 在 THF(3mL) 中的悬浮液， 以 BH3-THF 复合物 (15.45mL，
15.45mmol， 1.0M 在 THF 中 ) 处 理， 所 得 橘 色 溶 液 回 流 过 夜。 冰 浴 冷 却 反 应 物。 加 入 MeOHc15mL)， 然后浓缩反应物。再加入第二部分的 MeOH(20mL)， 此溶液回流 2 小时。此时， 浓缩此反应物， 残余物进行硅胶柱的快速层析法 (flash chromatography)(10 ％ EtOAc ： 90 ％ 己 烷， 之 后 30 ％ EtOAc ： 70 ％ 己 烷 )。 减 压 干 燥 后， 获 得 橘 色 固 体 (240mg， 86 ％ )。 1 H-NMR(DMSO-d6)δ7.68(dd， J ＝ 2.4， 8.9Hz， 1H)， 7.54(s， 1H)， 7.47(d， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 6.63(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 4.15(t， J ＝ 4.2Hz， 2H)， 3.45-3.40(m， 2H)。
7- 硝基 -4-(2- 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 ： 7- 硝 基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 (300mg， 1.665mmol) 在 DMF(10mL) 中的溶液， 0℃下 以 NaH(213mg， 5.33mmol， 60％ wt 在矿物油中 ) 处理， 获得亮橘色悬浮液。此混合物搅拌 10 分钟。然后加入 2- 氯乙基 - 吡咯烷盐酸盐 (566mg， 3.33mmol)， 此反应物转为亮红色悬浮 液。 此反应物加热至 90℃ 1 小时， 然后冷却至室温。 此混合物然后以水 (20mL) 稀释， 移到分 液漏斗中， 经 EtOAc(2×15mL) 萃取。该合并有机层以盐水 (3×5mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)、 过滤及浓缩。残余物进行硅胶柱的快速层析法 (flashchromatography)( 使用 CH2Cl2， 之 1 后 5 ∶ 95(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)， 形成一固体 (330mg， 72 ％ )。 H-NMR(DMSO-d6) δ7.75(dd， J ＝ 2.7， 9.3Hz， 1H)， 7.47(d， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 6.80(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 4.18(t， J ＝ 4.2Hz， 2H)， 3.58-3.55(m， 4H)， 2.63(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.58-2.48(m， 4H)， 1.70-1.63(m， + 4H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 278(MH ， 100)， 98(20)。
N-(4-(2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (4) ： 7- 硝基 -4-(2- 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 (330mg， 1.190mmol) 及 Pd-C(252mg， 0.238mmol， 10 ％ wt) 在干 EtOH(10mL) 中的悬浮 液， 用氢气吹洗。此反应在氢气氛围 ( 气囊压力 ) 下于室温下搅拌 1.5 小时。该反应混合 物经 Celite 垫过滤， EtOH(25mL) 清洗。该滤过物以噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (0.678g， 2.377mmol) 处理， 室温下搅拌 3 天。以 饱和 NaHCO3 溶液 (50mL) 稀释此反应物， 该产物经 CH2Cl2(3×25mL) 萃取。干燥合并的有 机层 (Na2SO4) 及浓缩。残余物进行硅胶柱的快速层析法 (flashchromatography)( 使用 2 ∶ 98MeOH ∶ CH2Cl2， 之后 5 ∶ 95(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)， 获得黄色固体 (150mg， 1 36％ )。H-NMR(DMSO-d6)δ7.70(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 7.57(dd， J ＝ 5.1， 0.9Hz， 1H)， 7.08(dd， J ＝ 5.1， 3.9Hz， 1H)， 6.65(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 6.34(dd， J ＝ 2.4， 8.4Hz， 1H)， 6.252(d， J＝ 2.4， 1H)， 6.36-6.25(m， 2H)， 4.15(t， J ＝ 4.2Hz， 2H)， 3.38-3.30(m， 4H)， 2.64(t， J ＝ 7.2Hz， + 2H)， 2.58-2.48(m， 4H)， 1.70-1.67(m， 4H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 357(MH ， 100)， 260(40)， + 98(27) ； ESI-HRMS 计 算 C19H25N4OS(MH ) ： 357.1743， 观察值 ： 357.1734 ； HPLC 纯 度 ： 95.8 ％ ( 以面积计 )。
实施例 5 ： N-(4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3- 氧代 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(5) 的合成
7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -3(4H)- 酮 ： 根 据 J.Chem.Research(M)2003， 1120-1128 中描述的步骤制备。
4-(2-( 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -3(4H)- 酮 ： 7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 (0.5g， 2.575mmol)、 2- 氯 -N， N- 二甲基乙胺 (ethanamine) 盐 酸 盐 (0.37g， 2.575mmol)、 及 K2CO3(1.06g， 7.726mmol) 在 干 DMF(5mL) 中 的悬浮液， 100℃下搅拌过夜 (18 小时 )。此反应移至室温， 以水 (100mL) 稀释， 产物经乙酸 乙酯 (2×25mL) 萃取。合并的乙酸乙酯层以盐水 (20mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)。蒸发溶剂， 粗产物以柱层析法 (3 ∶ 97(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2) 纯化， 获得黄色固体的标题化合 1 物 (0.52g， 76％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ2.17(s， 6H)， 2.42(t， 2H， J ＝ 6.6Hz)， 4.07(t， 2H， J ＝ 6.6Hz)， 4.79(s， 2H)， 7.45(d， 1H， J ＝ 9.0Hz)， 7.80(d， 1H， J ＝ 2.7Hz)， 7.96(dd， 1H， J＝ + 2.4， 9.0Hz) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 266(MH ， 100)， 221(66)。
7- 氨 基 -4-(2-( 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -3(4H)- 酮 ： 4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 (0.5g， 1.884mmol) 在干乙醇 (5mL) 中的溶液， 以 Pd-C( ～ 0.05g) 处理， 用氢气吹洗。对烧瓶抽真空， 用氢 气吹洗 ( 两次 )， 室温下在氢气氛围下 ( 气囊压力 ) 搅拌 2 小时。此反应经 Celite 床过 滤， 甲醇 (3×10mL) 清洗。蒸发合并的有机层， 获得固体粗标题化合物 (0.44g， 定量 )。1H NMR(DMSO-d6)δ2.16(s， 6H)， 2.36(t， 2H， J ＝ 6.9Hz)， 3.88(t， 2H， J ＝ 6.9Hz)， 4.47(s， 2H)， 5.01(s， 2H)， 6.21(d， 1H， J ＝ 2.1Hz)， 6.25(dd， 1H， J ＝ 2.7， 8.5Hz)， 6.84(d， 1H， J＝ + 8.4Hz) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 236(MH ， 31)， 191(100)。
N-(4-(2-( 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3- 氧 代 -3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (5) ： 7- 氨基 -4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 (0.125g， 0.531mmol) 在干乙醇 (10mL) 中的溶液， 室温下以噻吩 -2- 亚 胺 亚 甲 基 硫 甲 酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘 酸 盐 (0.3g， 1.062mmol) 处理， 并搅拌过夜 (18 小时 )。同时， 加入额外的噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (0.3g， 1.062mmol)， 再持续搅拌 24 小时。以饱 和 NaHCO3 溶液 (20mL) 稀释此反应物， 此产物经 CH2Cl2(2×20mL) 萃取。该合并的 CH2Cl2 层以盐水 (15mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)。蒸发溶剂， 以柱层析法 (5 ∶ 95(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2) 纯化该粗产物， 获得固体的标题化合物 5(0.16g， 88 ％ )。1HNMR(DMSO-d6) δ2.19(s， 6H)， 2.43(t， 2H， J ＝ 6.9Hz)， 3.97(t， 2H， J ＝ 6.9Hz)， 4.58(s， 2H)， 6.48-6.58(m，
4H)， 7.06-7.14(m， 2H)， 7.60(d， 1H， J ＝ 5.1Hz)， 7.74(d， 1H， J ＝ 3.3Hz) ； ESI-MS(m/ + + z，％ ) ： 345(MH ， 100)， 128(85) ； ESI-HRMS 计算 C17H21N4O2S(MH )， 计算值 ： 345.1379 ； 观察 值： 345.1384 ； HPLC- 纯度 ： 93.15％ ( 以面积计 ).
实施例 6 ： N-(4-(2-( 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(6) 的合成
7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 ： 完整详细的制备方法及光谱数据如 实施例 4 所述。
N， N- 二 甲 基 -2-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 胺 (ethanamine) ： 7- 硝 基 -3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 (240mg， 1.33mmol) 在 DMF(10mL) 中的溶液， 在 0 ℃下以 NaH(170mg， 4.26mmol， 60 ％ wt 在矿物油中 ) 处理， 获得 橘色混合物。此混合物然后以 2- 氯 -N， N- 二甲基乙胺盐酸盐 (384mg， 2.66mmol) 处理， 获得暗红色混合物。此反应室温下搅拌 1 小时。此时， 此反应物随后加热至 90℃， 再搅拌 45 分钟。此反应冷却至室温， 加水 (15mL)， 经 EtOAc(2×12mL) 萃取。合并的有机层以盐 水 (3×5mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)、 过滤及浓缩。残余物进行硅胶柱的快速层析法 (flash chromatography)(CH2Cl2， 之后 5 ∶ 95(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)， 获得黄 / 橘色固体 1 (210mg， 63％ )。 H-NMR(DMSO-d6)δ7.75(dd， J ＝ 2.7， 9.0Hz， 1H)， 7.48(d， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 6.82(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 4.18(t， J ＝ 4.5Hz， 2H)， 3.57-3.53(m， 4H)， 2.54-2.45(m， 2H)， 2.23(s， 6H)。
N-(4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒 (6) ： N， N- 二甲基氨基 -2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 胺 (ethanamine)(210mg， 0.836mmol) 及 Pd-C(10 ％ wt， 89mg， 0.084mmol) 在干 EtOH(15mL) 中的悬浮液， 用氢气吹洗。此反应在氢气氛围 ( 气囊压力 ) 室温下搅拌 3 小时。该反应混
合物然后经 Celite 垫过滤， EtOH(15mL) 清洗。淡紫色的滤过物经浓缩获得粗 4-(2-( 二甲 基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -7- 胺。该粗 4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -7- 胺 (185mg， 0.836mmol) 在 干 EtOH(10mL) 中 的溶液， 以噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (477mg， 1.672mmol) 处理， 室温下搅拌过夜。 以饱和 NaHCO3 溶液 (50mL) 稀释此反应物， 产物 经 CH2Cl2(3×25mL) 萃取。干燥合并的有机层 (Na2SO4) 及浓缩。残余物进行硅胶柱的快速 层析法 (flash chromatography)( 使用 2 ∶ 98MeOH ∶ CH2Cl2， 之后 5 ∶ 95(2M NH3 在 MeOH1 中 ) ∶ CH2Cl2)， 获得黄色固体 (150mg， 54％ )。 H-NMR(DMSO-d6)δ7.69(dd， J ＝ 3.6， 0.9Hz， 1H)， 7.56(dd， J ＝ 5.1， 0.9Hz， 1H)， 7.07(dd， J ＝ 5.1， 3.9Hz， 1H)， 6.64(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 6.35-6.26(m， 4H)， 4.14(t， J ＝ 3.9Hz， 2H)， 3.33-3.29(m， 4H)， 2.42(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， + 2.19(s， 6H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 331(MH ， 100)， 260(25) ； ESI-HRMS 计 算 C17H23N4OS(MH+) ： 331.1587， 观察值 ： 331.1594 ； HPLC 纯度 ： 99.0％ ( 以面积计 )。
实施例7： N-(4-(2-( 乙 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide) 二盐酸盐 (7) 的合成
7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 ： 完整详细的制备方法及光谱数据如 实施例 4 所述。
2- 氯 -1-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone) ： 7- 硝 基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 (8g， 44.4mmol) 在无水甲苯 (100mL) 中的悬浮液， 在正氩气压下以 2- 氯乙酰氯 (3.91mL， 48.8mmol) 逐滴处理。此混合物回流加热 25 分钟， 变成亮黄色溶液。此溶液冷却至室温， 加入饱和 NaHCO3 溶液 (150mL)。此混合物移到分液 漏斗中， 产物经 CH2Cl2(2×200mL) 萃取。合并的有机层经硅胶垫过滤， 以 CH2Cl2(50mL) 清 1 洗， 浓缩至黄色固体 (10g， 88％ )。 H-NMR(DMSO-d6)δ8.22(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 7.80(dd， J ＝ 2.7， 9.3Hz， 1H)， 7.72(d， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 4.74(s， 2H)， 4.40(t， J ＝ 4.2Hz， 2H)， 3.94(t， + + J ＝ 4.8Hz， 2H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 279(MNa ， 30)， 257(MH ， 100)。
2-( 乙氨基 )-1-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone) ：
2- 氯 -1-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone)(9.9g， 38.6mmol) 在无水乙腈 (250mL) 中的溶液， 在正氩气压下以 K2CO3(42.7g， 309mmol) 处理， 获得黄色悬 浮液。此混合物冷却至 0℃， 以乙胺盐酸盐 (15.7g， 193mmol) 处理。此反应置于室温， 搅拌 2.5 小时。此混合物然后经 Celite 垫过滤， 以 CH2Cl2(500mL) 清洗及浓缩。残余物进行硅 胶柱的快速层析法 (flash chromatography)( 使用 EtOAc， 之后 2.5 ∶ 97.5(2M NH3 在 MeOH 1 中 ) ∶ CH2Cl2)， 获得黄色固体 (7.73g， 76％ )。 H-NMR(DMSO-d6)δ8.29(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 7.80(dd， J ＝ 2.7， 9.3Hz， 1H)， 7.71(d， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 4.36(t， J ＝ 4.2Hz， 2H)， 3.93(t， J ＝ 4.8Hz， 2H)， 3.71(s， 2H)， 2.62(q， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 1.05(t， J ＝ 7.2Hz， 3H).ESI-MS(m/ + z，％ ) ： 266.1(MH ， 100)。
乙基 (2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 )-2- 氧代乙基 ) 氨基甲酸 叔丁酯 ： 在正氩气压下， 2-( 乙氨基 )-1-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 酮 (ethanone)(7.73g， 29.1mmol)、 二碳酸二叔丁酯 (6.68g， 30.6mmol)、 及三乙胺 (8.19mL， 58.3mmol) 在无水 1， 4- 二噁烷 (100mL) 中的溶液， 室温下搅拌半小时。此混合物以水 (200mL) 稀 释， 产 物 经 CH2Cl2(2×200mL) 萃 取。 该 合 并 的 有 机 层 以 盐 水 (100mL) 清 洗、 干燥 (Na2SO4)、 及浓缩。残余物施加于短硅胶柱， 使用 CH2Cl2， 之后 2.5 ∶ 97.5(2M NH3 1 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2， 获 得 固 体 (8.83g， 83 ％ )。 H-NMR(DMSO-d6)δ8.30-8.22(m， 1H)， 7.82-7.78(m， 1H)， 7.71-7.70(m， 1H)， 4.36-4.28(m， 4H)， 3.94-3.92(m， 2H)， 3.24(t， J ＝ + 2.7Hz， 2H)， 1.40， 1.30(2×s， 9H)， 1.07-1.04(m， 3H).ESI-MS(m/z， ％ ) ： 388(MNa ， 50)， + 366(MH ， 35)， 266(100)。
乙基 (2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ： 乙 基 (2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 )-2- 氧代乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (8.7g， 23.8mmol) 在无水 THF(50mL) 中的黄色溶液， 在正氩气压下， 以硼烷 -THF 复合物 (1M 在 THF 中， 47.6mL， 47.6mmol) 处理， 获得橘色溶液。此混合物回流 20 分钟。然后在冰浴中冷却， 用 MeOH(100mL) 逐滴处理。室温下搅拌此溶液半小时， 然后浓缩此反应物。残余物进行硅胶 快速层析法 (flash chromatography)， 使用 1 ∶ 9 的 EtOAc ∶己烷， 获得橘色固体 (7.5g， 1 91％ )。 H-NMR(DMSO-d6)δ7.72(dd， J ＝ 2.7， 9.0Hz， 1H)， 7.49-7.47(m， 1H)， 6.85-6.83(m， 1H)， 4.18(t， J ＝ 4.2Hz， 2H)， 3.59-3.53(m， 2H)， 3.37-3.36(m， 2H)， 3.20-3.18(m， 2H)， + 1.47(s， 2H)， 1.30(br s， 9H)， 1.02(t， J ＝ 6.9Hz， 3H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 374(MNa ， 86)， + 352(MH ， 7.8)， 296(100)， 252(87)。
乙 基 (2-(7-( 噻 吩 -2- 甲 脒 基 (carboximidamido))-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ) 氨 基 甲 酸 叔 丁 酯 ： 乙 基 (2-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (7g， 19.92mmol) 及 Pd-C(2.11g， 1.992mmol， 10 ％ wt) 在无水 EtOH(100mL) 中的悬浮液， 用氢气吹洗。此反应在氢气氛围 ( 气囊压力 ) 室温下 搅拌 16 小时。该反应混合物经 Celite 垫过滤， EtOH(50mL) 清洗。含 2-(7- 氨基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ( 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯的滤过物， 以噻吩 -2- 亚胺亚 甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (11.36g， 39.8mmol) 处理， 室温下搅拌过夜。浓缩此反应， 然后在饱和 NaHCO3 溶液 (150mL) 及 CH2Cl2(75mL) 之间分层 (partition)。该混合物移到分液漏斗中， 该产物经 CH2Cl2(2×100mL) 萃取。干燥该合并的 有机层 (Na2SO4) 及浓缩。残余物进行硅胶柱的快速层析法 (flash chromatography)， 依序使用洗脱液 (CH2Cl2 ； 1 ∶ 99(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2 ； 1.75 ∶ 98.25(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2 ； 及 2.5 ∶ 97.5(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)， 获得棕色固体 (4g， 46.7％ )。 1 H-NMR(CDCl3)δ7.43-7.41(m， 2H)， 7.11-7.05(m， 1H)， 6.72-6.69(m， 1H)， 6.54-6.51(m， 2H) ， 4.23-4.20(m ， 2H) ， 3.39-3.25(m ， 8H) ， 1.47(s ， 9H) ， 1.11-1.10(m ， 3H) ； ESI-MS(m/ + z，％ ) ： 431(MH ， 100)。
N-(4-(2-( 乙氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲 脒： 在正氩气压下， 乙基 (2-(7-( 噻吩 -2- 甲脒基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (4g， 9.29mmol) 在 MeOH(30mL) 及 1N HCl(30mL) 中的橘色悬浮液， 回流 1 小时。此混合物然后冷却至室温， 移到冰浴， 然后加入 1N NaOH(75mL)。此溶液变为 带有黑色悬浮物的乳绿色。之后以 CH2Cl2(50mL) 处理此混合物， 搅拌半小时。之后， 此混 合物移到分液漏斗中， 产物经 CH2Cl2(2×50mL) 萃取。干燥合并的有机层 (Na2SO4) 及浓缩。 残余物进行硅胶快速层析法 (flash chromatography)， 依序使用洗脱液 ： EtOAc ； 1 ∶ 99(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2 ； 2.5 ∶ 97.5(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2 ； 及 5 ∶ 95(2M NH3 1 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2。 获 得 棕 色 固 体 (2g， 65.1 ％ )。 H-NMR(CDCl3)δ7.40-7.37(m， 2H)， 7.07-7.04(m， 1H)， 6.75-6.72(m， 1H)， 6.52-6.50(m， 2H)， 4.82(brs， 2H)， 4.24(t， J ＝ 4.5Hz， 2H)， 3.39-3.31(m， 4H)， 2.86(t， J ＝ 6.3Hz， 2H)， 2.71(q， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 1.13(t， J + ＝ 7.2Hz， 3H) ； ESI-MS(m/z， ％)： 331(MH ， 100)， 260(95) ； HPLC 纯度 ： 94.1％ ( 以面积计 )。
N-(4-(2-( 乙氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲 脒二盐酸盐 (7) ： N-(4-(2-( 乙氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (0.1g， 0.303mmol) 在 MeOH(3mL) 中的悬浮液， 在正氩气压下以 1M HCl 乙醚 溶液 (1.51mL， 1.51mmol) 处理。此反应在室温下搅拌 1 小时， 然后浓缩此混合物， 形成黄棕 1 色 固 体 (93mg， 76 ％ )。 H-NMR(DMSO-d6)δ11.20(brs， 1H)， 9.67(brs， 1H)， 9.23(brs， 2H)， 8.67(brs， 1H)， 8.16-8.08(m， 2H)， 7.37-7.36(m， 1H)， 7.04(d， J ＝ 8.4， 1H)， 6.87-6.81(m， 2H)， 4.30-4.25(m， 2H)， 3.66(t， J ＝ 6.3Hz， 2H)， 3.12-2.95(m， 4H)， 2.58-2.45(m， 2H)， + 1.24(t， J ＝ 7.2Hz， 3H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 331(MH ， 游离碱， 100)， 260(95) ； ESI-HRMS 计 + 算 C19H25N4OS(MH ， 游离碱 ) ： 331.1587， 观察值 ： 331.1597 ； HPLC 纯度 ： 95.4％ ( 以面积计 ).
实施例 8 ： N-(4-(2-( 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 (thiazin)-7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboimidamide)(8) 的合成
2- 氨 基 -5- 硝 基 苯 硫 酚 (benzenethiol) ： 对 搅 拌 的 6- 硝 基 苯 并 [d] 噻 唑 (1.64g， 9.10mmol) 在乙醇 (16mL) 中的悬浮液， 加入水合肼 (hydrazinehydrate)(2.66mL， 54.6mmol)。 得到的暗色溶液在室温下搅拌过夜。 此混合物然后以水稀释， 以 3M HCl 缓慢酸 化， 获得黄色悬浮液。此混合物然后以二氯甲烷萃取。干燥合并的有机物、 过滤、 浓缩， 获得 1 黄色固体， 直接用于下述反应。 H NMR(DMSO-d6)δ8.09(brs， 1H)， 7.87(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)，6.74(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 6.27(brs， 2H) ； MS-EI ： (m/z， ％ )170(M+， 100)， 140(28)， 124(35)。
7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -3(4H)- 酮 ： 对搅拌的 2- 氨基 -5- 硝基苯硫酚 (1.72g， 10.11mmol) 在四氢呋喃 (10mL) 中的溶液， 加入碳酸氢钠 (2.80g， 33.4mmol) 的水 (40.0mL) 溶液。此暗红色溶液中加入 2- 氯乙酰氯 (0.885mL， 11.12mmol)。所得混合物变 为淡红色， 然后在室温下搅拌过夜。此混合物然后以水稀释， 经二氯甲烷萃取 3 次。干燥合 并的有机物、 过滤、 浓缩， 然后以 10％乙酸乙酯在二氯甲烷中层析， 获得所需产物 (1.02g， 1 48.0 ％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ11.17(s， 1H)， 8.24(d， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 8.07(dd， J ＝ 9.0， 2.7Hz， 1H)， 7.13(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 3.60(s， 2H) ； MS-EI ： (m/z， ％ )210(M+， 100)， 181(40)， 131(46)。
4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -3(4H)- 酮 ： 对压 力烧瓶中搅拌的 7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -3(4H)- 酮 (1.02g， 4.85mmol) 及碳酸 钾 (4.69g， 34.0mmol) 在 DMF(30mL) 中的悬浮液， 在氩气下加入 2- 氯 -N， N- 二甲基乙胺 (ethanamine) 盐酸盐 (3.49g， 24.26mmol)。此烧瓶立即密封， 搅拌加热至 90℃过夜。此混 合物然后冷却至室温， 以水稀释及萃取 (2× 乙酸乙酯 )。合并的有机物然后依序以 1 ∶ 1 的盐水与水 (3×) 的混合物及盐水 (1×) 清洗。干燥该有机相、 过滤、 浓缩， 然后在 5 ％ 1 (2M NH3 在 MeOH 中 ) 在二氯甲烷中层析， 获得所需产物 (755mg， 55.3％ )。 H NMR(DMSO-d6) δ8.30(d， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 8.13(dd， J ＝ 9.3， 2.7Hz， 1H)， 7.59(d， J ＝ 9.3Hz， 1H)， 4.11(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 3.62(s， 2H)， 2.41(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.17(s， 6H) ； MS-EI ： (m/z， ％ )281(M+， 55)， 251(65)， 58(100)。
N， N- 二 甲 基 -2-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -3(4H)- 基 ) 乙 胺 (ethanamine) ： 对 4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -3(4H)- 酮(730mg， 2.59mmol) 在四氢呋喃 (3mL) 中的搅拌溶液， 在氩气下加入硼烷 (1M 在 THF 中 ； 7.784mL， 7.78mmol)。所得混合物室温下搅拌过夜， 产生黄色沉淀物。简单加热该混合物至 60℃， 使该固体粉碎。然后冷却该反应至 0℃， 以甲醇淬灭 (quenched)( 缓慢， 直到泡沫停 止 )。该混合物之后浓缩， 再溶于 MeOH(15mL) 及 1M HCl(5mL) 中， 60℃加热 30 分钟。此淬 灭的混合物之后以水及碳酸钠稀释， 然后经二氯甲烷 (3×) 萃取。合并的有机物经干燥、 过 滤、 浓缩， 之后以乙酸乙酯层析， 获得黄色固体， 所需复合物为硼烷复合物， 可直接于下述反 应使用。
对 N， N- 二 甲 基 -2-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 胺 (ethanamine)- 硼烷复合物 (350mg， 1.245mmol) 在甲醇 (5mL) 及 THF(10mL) 中的搅拌溶液， 在氩气下加入 10％ Pd-C(132mg， 0.124mmol)。此混合物室温下搅拌过夜。然后经 Celite 垫过滤此悬浮液、 浓缩， 在 5 ％ (2M NH3 在 MeOH 中 ) 在二氯甲烷中层析， 获得所需产物 1 (106.6mg， 32.0％ )。H NMR(DMSO-d6)δ7.85-7.81(m， 2H)， 6.81(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 3.81(t， J ＝ 5.1Hz， 2H)， 3.56(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 3.06(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 2.47(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.2l(s， 6H) ； MS-EI ： (m/z，％ )267(M+， 13)， 179(29)， 58(100)。
甲基 (2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸苯酯 ： 对 N， N- 二甲基 -2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 )- 乙胺 (ethanamine) (100mg， 0.374mmol) 在二氯甲烷 (5mL) 中的搅拌溶液， 在氩气下加入氯甲酸苯酯 (phenyl carbonochloridate)(0.094mL， 0.748mmol)。此反应混合物在室温下搅拌。观察到沉淀 物， 加入三乙胺 (3 滴 ) 帮助溶解 ( 反应物变得澄清 )。此混合物之后搅拌一个周末。澄 清的黄色混合物然后以水及碳酸钠稀释， 然后经二氯甲烷 (3×) 萃取。合并的有机物干 燥、 过滤、 浓缩， 然后在乙酸乙酯中层析， 获得所需产物 (139mg， 100％ )。1H NMR(DMSO-d6) δ 7.84-7.74(m ， 2H) ， 7.39-7.31(m ， 2H) ， 7.23-7.16(m ， 1H) ， 7.03-6.93(m ， 3H) ， 3.85-3.78(m， 3H)， 3.73-3.65(m， 2H)， 3.55-3.50(m， 1H)， 3.09， 2.97(2s， 3H)， 3.09-3.05(m， 2H) ； MS-EI ： (m/z，％ )373(M+， 4)， 209(31)， 179(100)， 151(28)。
2-(7- 氨 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ( 甲 基 ) 氨 基 甲 酸 苯 酯： 对 甲 基 (2-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ) 氨 基 甲 酸 苯 酯 (100mg， 0.268mmol) 在四氢呋喃 (4mL) 及乙醇 (4.00mL) 中的搅拌溶液， 在氩气下加入 10％ Pd-C(28.5mg， 0.027mmol)。所得混合物在氢气氛围 ( 气囊压力 ) 室温下搅拌过夜。该混 合物之后经 Celite 垫过滤及浓缩， 获得深色油状的所需产物 (81mg， 88 ％ )。MS-EI ： (m/ z，％ )343(M+， 64)， 179(100)， 151(45)。
甲 基 (2-(7-( 噻 吩 -2- 甲 脒 基 (carboximidamido))-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸苯酯 ： 对 2-(7- 氨基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ( 甲基 ) 氨基甲酸苯酯 (80mg， 0.233mmol) 在乙醇 (5mL) 中的搅拌溶液， 在氩气下加 入噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (133mg， 0.466mmol)。混合物然后室温下搅拌过夜。此混合物之后以水及碳酸钠稀释， 之后经二氯 甲烷 (2×) 萃取。干燥合并的有机物、 过滤、 浓缩， 然后在乙酸乙酯中层析， 产生所需产物 1 (72mg， 68％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.74-7.69(m， 1H)， 7.58-7.56(m， 1H)， 7.42-7.34(m， 2H)， 7.25-7.17(m， 1H)， 7.14-7.05(m， 3H)， 6.83-6.80(m， 1H)， 6.53-6.44(m， 2H)， 6.36(brs， 2H)， 3.63-3.55(m， 4H)， 3.49-3.45(m， 2H)， 3.11， 2.98(2s， 3H)， 3.06-3.01(m， 2H) ； MS-EI ： (m/z，％ )452(M+， 97)， 288(100)。
N-(4-(2-( 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒 (8) ： 对甲基 (2-(7-( 噻吩 -2- 甲脒基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ) 氨 基 甲 酸 苯 酯 (65mg， 0.144mmol) 在 乙 醇 (4mL) 中 的 搅 拌 溶 液， 加入氢氧化钠 (57.4mg， 1.436mmol) 水 (2mL) 溶液。加热获得的混合物至 78℃搅拌过夜。此混合物之后 冷却至室温， 以水及氢氧化钠稀释， 经二氯甲烷 (5×) 萃取。干燥合并的有机层、 过滤、 浓 缩， 之后在 10％ (2M NH3 在 MeOH 中 ) 在二氯甲烷中层析， 获得所需产物 (22mg， 46％ )。1H NMR(DMSO-d6)δ7.69(d， J ＝ 3.3Hz， 1H)， 7.56(d， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 7.07(t， J ＝ 4.4Hz， 1H)， 6.72(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 6.53-6.44(m， 2H)， 6.29(brs， 2H)， 3.54-3.51(m， 2H)， 3.3(m， 2H)， 3.04-3.00(m， 2H)， 2.66(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 2.32(s， 3H) ； MS-EI ： (m/z， ％ )332(M+， 75)， 288(97)， 260(100) ； EI-HRMS 计 算 C16H20N4S2(M+)， 计算值： 332.1129， 观察值： 332.1145. HPLC ： 95％ ( 以面积计 )。
实施例 9 ： N-(4-(2-( 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(9) 的合成
N， N- 二 甲 基 -2-(6- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 胺 (ethanamine) ： 将 6- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 (1.0g， 5.55mmol) 在无水 DMF(25mL) 中的溶液， 在氩气下冷却， 在 5-10℃分次加入氢化钠 (0.677g， 16.93mmol) 处理。 在 5-10 ℃分次加入 2- 氯 -N， N- 二甲基乙胺 (ethanamine) 盐酸盐 (1.599g， 11.10mmol)， 所得的异质红棕色混合物温热至室温。室温下 3 小时后， 加热此混合物至 90℃， 搅拌 30 分 钟。将此混合物冷却至室温， 加水 (25mL) 淬灭， 以 EtOAc 稀释。加入少量的 1N NaOH 使 该混合物碱化至 pH ～ 9-10。分离该有机层， 水层进一步以 EtOAc 萃取。合并的有机层以 盐水 (×2) 清洗、 干燥 (Na2SO4)、 过滤、 及浓缩， 产生暗红色油。将此材料在硅胶上纯化， 以
1 5％ MeOH/CH2Cl2 洗脱， 形成暗橘红色油状的标题化合物 (458mg， 32.8％ )。 H NMR(DMSO-d6) δ7.49-7.39(m， 2H)， 6.87-6.84(m， 1H)， 4.27-4.25(m， 2H)， 3.50-3.37(m， 4H)， 2.43(t， 2H， J + ＝ 6.7Hz)， 2.19(s， 6H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 252(MH ， 100)。
4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -6- 胺 ： 向烤箱干 燥、 氩气吹洗的固定有磁性搅拌棒的 100mL 圆底烧瓶， 加入 N， N- 二甲基 -2-(6- 硝基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 ) 乙胺 (ethanamine)(0.10g， 0.398mmol) 及 EtOH(10mL)。此 时开始搅拌此反应。加入 10％ Pd-C(0.042g， 0.040mmol)， 对烧瓶抽真空， 将该混合物在标 准条件下氢化 ( 使用气囊的大气 H2 压力 )。3 小时后， 将此混合物经 Celite 垫过滤， 以乙醇清洗。形成淡桃色溶液， 在暴露于空气时变暗， 使其浓缩至约 10mL， 形成标题化合物。此 + 化合物可立即使用于下述步骤。ESI-MS(m/z，％ ) ： 222(MH ， 100)。
N-(4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -6- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒 ： 对 4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -6- 胺 (0.088g， 0.398mmol) 的搅拌乙醇溶液， 在氩气氛围下加入噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (0.227g， 0.795mmol)。得到的淡雾黄 色 (faintly cloudy yellow) 混合物室温下搅拌过夜。20 小时后， 该混合物上氩气起泡， 之后浓缩产生残余物。此残余物然后在 EtOAc(100mL) 及饱和 NaHCO3( ～ 10mL) 溶液之 间分层 (partition)。该水层 (pH ～ 9) 进一步以 EtOAc 萃取， 合并的有机层以盐水清洗、 干燥 (Na2SO4)、 过滤、 及浓缩， 产生黄色残余物。在硅胶上纯化 ( 干层析法， 5-7.5 ％ (2M 1 NH3MeOH)/CH2Cl2 洗脱 )， 生成黄色残余物的标题化合物 9(70mg， 53.3％ )。 H NMR(DMSO-d6) δ7.70(d， 1H， J ＝ 2.7Hz)， 7.57(d， 1H， J ＝ 5.0Hz)， 7.07(dd， 1H， J ＝ 5.0， 3.7Hz)， 6.59(d， 1H， J ＝ 8.2Hz)， 6.30(brs， 2H)， 6.14(s， 1H)， 6.00(d， 1H， J ＝ 8.1Hz)， 4.18-4.02(m， 2H)， 3.41-3.25(m， 4H+H2O)， 2.41(t， 2H， J ＝ 6.7Hz)， 2.17(s， 6H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 331(MH+， 100)。
N-(4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -6- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒二盐酸盐 ： N-(4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁 嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (0.065g， 0.197mmol) 溶于无水 MeOH(5mL)， 室温下以氯化氢 (1M 在二乙醚中 ； 0.433mL， 0.433mmol) 处理 5 分钟。此反应之后浓缩， 产生黄色固体的标题化 1 合 物 (58.5mg， 73.7 ％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ11.36(brs， 1H)， 11.02(brs， 1H)， 9.70(brs， 1H)， 8.69(brs， 1H)， 8.15(app d， 2H， J ＝ 4.5Hz)， 7.37(app t， 1H， J ＝ 4.3Hz)， 7.07(s， 1H)， 6.84(d， 1H， J ＝ 8.3Hz)， 6.62(d， 1H， J ＝ 8.4Hz)， 4.31-4.18(m， 2H)， 3.76-3.65(m， 2H)， 3.44-3.34(m， 2H)， 3.35-3.22(m， 2H)， 2.78， 2.77(2×s， 6H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 331(MH+， 游 + 离碱， 100) ； ESI-HRMS 计算 C17H23N4OS(MH ， 游离碱 ) ： 331.1587 ； 观察值 ： 331.1579。
实 施 例 10 ： N-(4-(2-( 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide) 二盐酸盐 (10) 的合成
甲基 (2-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ： 向烤箱中干燥、 氩气吹洗的固定有磁性搅拌棒的烧瓶， 加入甲基 (2- 氧代乙基 ) 氨基甲酸叔 丁酯 (0.135g， 0.777mmol) 及 DCE(10mL)。此时开始搅拌， 加入 6- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯
并 [b][1， 4] 噁嗪 (0.10g， 0.555mmol)， 之后加入乙酸 (0.064mL， 1.110mmol) 及三乙酰氧基 硼氢化钠 (triacetoxyborohydride)(0.294g， 1.388mmol)。所得混合物室温下搅拌过夜。 18 小时后， 加入饱和 NaHCO3(10mL) 淬灭该反应， 以 CH2Cl2 萃取。水层进一步萃取， 合并的有 机物以盐水清洗、 干燥 (Na2SO4)、 及浓缩。粗产物与第二反应 ( 如上述步骤制备， 但缺少乙 酸 ) 的产物合并。该合并的产物经硅胶柱纯化， 以 50-70％ EtOAc/ 己烷洗脱， 产生黄色残 1 余物的标题化合物 (130mg， 34.7％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.58-7.37(m， 2H)， 6.92-6.80(m， 1H)， 4.25(t， 2H， J ＝ 4.2Hz)， 3.58-3.36(m， 6H)， 2.87-2.74(m， 3H)， 1.27， 1.18(2×s， 9H) ； + ESI-MS(m/z，％ ) ： 360(MNa ， 100)。
2-(6- 氨基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ( 甲基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ： 向烤箱中干燥的、 氩气吹洗的固定有磁性搅拌棒的圆底烧瓶， 加入甲基 (2-(6- 硝基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (0.13g， 0.385mmol) 及 EtOH(10mL)。 此时开始搅拌。加入 10％ Pd-C(0.041g， 0.039mmol)， 对该烧瓶抽真空， 将材料在前述的标 准条件下氢化。经 2.5 小时后， 该混合物经 Celite 垫过滤， 乙醇清洗。该淡桃色溶液经暴 露于空气后缓慢变暗， 经浓缩至～ 10mL 体积， 产生标题化合物， 其可直接用于接下来的步 1 骤。少部分浓缩干而进行分析。 H NMR(DMSO-d6)δ6.34(d， 1H， J ＝ 8.3Hz)， 6.03-5.95(m， 1H)， 5.75(dd， 1H， J ＝ 8.3， 2.3Hz)， 4.35(m， 2H)， 3.98(t， 2H， J ＝ 4.1Hz)， 3.30-3.15(m， 6H)， + 2.81(s， 3H)， 1.38， 1.30(2×s， 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 308(MH ， 90)， 252(100)。
甲 基 (2-(6- 噻 吩 -2- 甲 脒 基 (carboximidamido))-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ： 对 2-(6- 氨基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ( 甲基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (0.118g， 0.384mmol) 的搅拌乙醇溶液， 在氩气氛围下加入 噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (0.219g， 0.768mmol)， 所得的黄色溶液在室温下搅拌。经 44 小时后， 该混合物上的氩气起泡， 之后 浓缩形成残余物， 在 EtOAc(100mL) 及饱和 NaHCO3 溶液 (10mL) 之间分层 (partition)。水 层 (pH ～ 9) 进一步以 EtOAc 萃取， 合并的有机层以盐水清洗、 干燥 (Na2SO4)、 过滤、 及浓 缩， 产生橘色残余物。该残余物在硅胶上纯化 2 次， 第一次纯化使用 100％ EtOAc 作为洗脱 液， 第二次纯化使用 5％ (2M NH3 在 MeOH 中 )/CH2Cl2， 产生黄色固体的标题化合物 (80mg， 1 50.0％ )。HNMR(DMSO-d6)δ7.68(d， 1H， J ＝ 2.9Hz)， 7.57(d， 1H， J ＝ 5.0Hz)， 7.10-7.03(m， 1H)， 6.60(d， 1H， J ＝ 8.1Hz)， 6.30(m， 3H)， 6.00(dd， 1H， J ＝ 8.1， 1.6Hz)， 4.18-4.02(m， 2H)， 3.40-3.21(m， 6H， 并入 H 2O 峰 )， 2.81(s， 3H)， 1.34， 1.29(2×s， 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： + 417(MH ， 100)。
N-(4-(2-( 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -6- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒二盐酸盐 ： 对甲基 (2-(6- 噻吩 -2- 甲脒基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (0.07g， 0.168mmol) 在 HPLC 等级 MeOH(10mL) 中的溶液， 加入 3M 盐酸 (0.56mL， 1.681mmol)。形成的黄色溶液在氩气氛围下加热至回流。经 60 分钟后， 此 反应冷却至室温及浓缩。残余物以 H2O(20mL) 稀释， 依序经 CH2Cl2(20mL) 及 EtOAc(20mL) 冲洗。水层经浓缩干燥， 形成黄色固体的标题化合物 10(37mg， 56.5％ )。1H NMR(DMSO-d6) δ 11.37(brs ， 1H) ， 9.72(brs ， 1H) ， 9.23(brs ， 2H) ， 8.66(brs ， 1H) ， 8.21-8.08(m ， 2H) ， 7.37(app t， 1H， J ＝ 4.4Hz)， 7.03(s， 1H)， 6.84(d， 1H， J ＝ 8.3Hz)， 6.60(d， 1H， J ＝ 7.3Hz)， 4.31-4.20(m， 2H)， 3.70-3.45(m， 2H，并 入 H2O 峰 )， 3.40-3.34(m， 2H)， 3.18-3.02(m， 2H)，2.60-2.50(m， 3H) ； ESI-MS(m/z， ％)： 317(MH+， 游离碱， 100) ； ESI-HRMS 计算 C16H21N4OS(MH+， 游离碱 ) ： 317.1430 ； 观察值 ： 317.1422。
实施例 11 ： N-(4-(2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(11) 的合成
2- 氨基 -5- 硝基苯硫酚 (benzenethiol) ： 对 6- 硝基苯并 [d] 噻唑 (5g， 27.7mmol) 在乙醇 (45mL) 中的悬浮液， 加入水合肼 (hydrazine hydrate)(8.10mL， 166mmol)。得到的 ( 暗红色 ) 混合物在室温下搅拌过夜。 此混合物缓慢小心加入 3M HCl 水溶液 (50mL)， 使其酸 化。 此混合物进一步以水 (50mL) 稀释， 所得的黄 / 橘色沉淀物以二氯甲烷 (3×) 萃取。 干燥 1 合并的有机物、 过滤、 浓缩， 获得橘色固体 (4.62g， 98％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ8.12-8.09(m， 1H)， 7.88-7.85(m， 1H)， 6.75-6.71(m， 1H)， 6.28(brs， 2H) ； ESI-MS(m/z， ％)： 170(MH+， 100)。
2-(2- 氯乙基硫基 )-4- 硝基苯胺 ： 对 2- 氨基 -5- 硝基苯硫酚 (benzenethiol) (4.11g， 24.15mmol) 在乙醇 (50mL) 及水 (10mL) 中的搅拌悬浮液， 加入氢氧化钠 (0.966g， 24.15mmol)。所得溶液中再加入 1- 溴 -2- 氯乙烷 (8.04mL， 97mmol)， 室温下搅拌获得的混 合物 3 小时。然后该混合物经乙酸乙酯稀释， 饱和碳酸钠 (3×) 清洗。该有机相干燥、 过 1 滤、 及浓缩， 形成暗黄色固体 (5.13g， 91％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ8.16(d， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 7.97(dd， J ＝ 9.0， 2.7Hz， 1H)， 6.94(brs， 2H)， 6.79(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 3.68(t， J ＝ 7.2Hz， + 2H)， 3.11(t， J ＝ 7.2Hz， 2H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 233(MH ， 100)， 216(79)。
7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 ： 对 2-(2- 氯乙基硫基 )-4- 硝基苯胺 (5.13g， 22.05mmol) 在 DMF(70mL) 中的搅拌溶液， 加入碳酸钾 (9.14g， 66.1mmol)， 之后加入 碘化钠 (0.330g， 2.205mmol)。所得悬浮液室温下搅拌过夜。该混合物之后以水稀释， 真空 1 过滤收集形成的晶体， 获得所需产物 (4.06g， 94％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.81-7.73(m， 3H)， 6.58(t， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 3.65-3.60(m， 2H)， 3.01-2.97(m， 2H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 197(MH+， 100)， 180(99)。
7- 硝 基 -4-(2-( 吡 咯 烷 -1- 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 ： 7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (1g， 5.10mmol)、 1-(2- 氯乙基 ) 吡咯烷盐酸 盐 (1.734g， 10.19mmol)、 及 nBu4NBr(0.082g， 0.255mmol) 在 CH2Cl2(10mL) 中、 及 50％ NaOH
溶液 (10mL) 中的混合物， 室温下搅拌 16 小时。此混合物以 CH2Cl2(25mL) 及水 (50mL) 稀 释。将此混合物移到分液漏斗中分层。水层经 CH2Cl2(2×25mL) 萃取。合并的有机层干燥 (Na2SO4)、 过滤、 及浓缩。 红色粗产物进行硅胶快速层析法 (flash chromatography)(CH2Cl2， 之后 1.75-5 ％ (2M NH3 在 MeOH 中 )/CH2Cl2)， 形成棕色粘稠油状的 7- 硝基 -4-(2-( 吡咯 烷 -1- 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 (0.63g， 42 ％ )。1HNMR(DMSO-d6) δ7.86-7.82(m， 2H)， 6.82(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 3.81(t， J ＝ 4.8Hz， 2H)， 3.58(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 3.33(s， 4H)， 3.05(t， J ＝ 5.1Hz， 2H)， 2.63(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.50(s， 4H)， 1.67(s， + 4H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 296， 294(MH ， 100)， 98(13)。
4-(2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 胺 ： 对 7- 硝 基 -4-(2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (0.637g， 2.172mmol) 在 MeOH(30mL) 中的溶液， 加入雷尼镍 (Raney-Nickel)( 水中浆液 )( ～ 30mg， 2.172mmol)， 之后加入水合肼 (hydrazine hydrate)(1.056mL， 21.72mmol)， 该混合物浸入预热的油浴， 回流 1 小时。冷却此溶液至室温， 经 Celite 垫过滤以 100mL 的 MeOH 清洗粗产物经硅栓 (silica plug)(3.5-10％ 2M NH3 在 MeOH 中 /CH2Cl2) 过滤。蒸发溶剂， 获得暗棕色油状的 1 标题产物 (0.61g， 定量 )。 H NMR(DMSO-d6)δ6.49(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 6.26-6.23(m， 2H)， 4.42(brs， 2H)， 3.38-3.35(m， 2H)， 3.21(t， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 2.97-2.94(m， 2H)， 2.55(t， J＝ + 7.2Hz， 2H)， 2.45(brs， 4H)， 1.66(brs， 4H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 266， 264(MH ， 100)， 98(34)。
N-(4-(2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒 ： 对 4-(2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 胺 (0.572g， 2.172mmol) 在 EtOH(20mL) 中的混合物， 加入噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (1.239g， 4.34mmol)。此反应室温下搅拌过夜。 此反应以饱和碳酸氢钠溶液 (30mL) 淬灭。此混合物之后以 CH2Cl2(50mL) 萃取， 水相以 CH2Cl2(50mL) 清洗。合并的有机部份以盐水 (50mL) 清洗、 干燥 (Na2SO4)。粗产物经硅胶快 速层析法 (flash chromatography)(CH2Cl2， 之后 5％ (2M NH3 MeOH)/CH2Cl2)。收集的部分 为淡棕色粘稠液体的化合物 11(0.71g， 88％ )。1H NMR(DMSO-d6)δ7.69(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 7.56(d， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 7.08-7.06(m， 1H)， 6.67(t， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 6.50(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 6.46(s， 1H)， 6.32(brs， 2H)， 3.57-3.53(m， 2H)， 3.39-3.34(m， 2H)， 3.03-3.00(m， 2H)， 2.60(t， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 2.50(brs， 4H)， 1.68(brs， 4H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 375， 373(MH+， 47)， 278， 276(100)， 98(21)。
N-(4-(2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒二盐酸盐 ： 对 N-(4-(2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (0.3524g， 0.946mmol) 在 MeOH(2mL) 中的搅拌溶液， 室温 下加入乙醚 (4.73mL， 4.73mmol) 中的 1M HCl。在氩气氛下搅拌此混合物 5 分钟， 然后浓 1 缩形成黄色泡沫 (0.646g， 定量 )。 H NMR(DMSO-d6)δ11.51(s， 1H)， 11.23(s， 1H)， 9.68(s， 1H)， 8.69(s， 1H)， 8.15-8.11(m， 2H)， 7.37-7.34(m， 1H)， 7.08(d， J ＝ 9.3Hz， 1H)， 7.00(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 3.81-3.76(m.2H)， 3.66-3.64(m， 2H)， 3.56-3.46(m， 2H)， 3.33-3.30(m， 2H)， 3.13-3.10(m， 2H)， 3.06-3.00(m， 2H)， 2.00-1.86(m， 4H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 375， 373(MH+， 游离碱， 66)， 278， 276(100)， 98(21) ； HRMS(C19H25N4S2， MH+， 游离碱 ) ： 计算值 ： 373.1515， 观察 值： 373.1518.HPLC ： 98％ ( 以面积计 )。实 施 例 12 ： N-(4-(2-( 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide) 二盐酸盐 (12) 的合成
N， N- 二 甲 基 -2-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 胺 (ethanamine) ： 如实施例 8 中描述的步骤制备。
4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 胺 ： 对 N， N- 二甲基 -2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙胺 (ethanamine)(1.0g， 3.74mmol) 在 甲醇 (10mL) 中的 暗色 混合物， 在氩 气 氛下以 雷尼 镍 (Raney Nickel)( ～ 0.22g， 3.74mmol) 及水合肼 (hydrazine hydrate)(1.82mL， 37.4mmol) 处理。此反应移到 预热至 65 ℃的油浴中。经 50 分钟后， 此混合物冷却至室温， 之后倒在 Celite 垫上。该 Celite 垫经甲醇 (20mL) 冲洗。浓缩滤过物， 粗产物施加于硅胶短柱 (1 ∶ 9(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)。 所 得 棕 色 残 余 物 用 于 下 一 步 骤。1H-NMR(DMSO-d6)δ6.49(d， J＝ 9.0Hz， 1H)， 6.27-6.23(m， 2H)， 4.42(brs， 2H)， 3.40-3.30(m， 2H)， 3.18(t， J ＝ 7.2Hz， 2H)， + 2.98-2.94(m， 2H)， 2.36(t， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 2.16(s， 6H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 238(MH ， 100)， 193(56)， 147(58)。
N-(4-(2-( 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲 脒 ： 对 4-(2-( 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 胺 (0.888g， 3.74mmol) 及 噻 吩 -2- 亚 胺 亚 甲 基 硫 甲 酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘 酸 盐 (2.134g， 7.48mmol) 在 干 乙 醇 (15mL) 中 的 悬浮液， 室温下搅拌过夜 (16 小时 )。蒸发溶剂， 残余物在饱和 NaHCO3 溶液 (50mL) 及 CH2Cl2(25mL) 之间分层 (partition)。搅拌 20 分钟后， 将此混合物移到分液漏斗中， 去除有 机层。水层经 CH2Cl2(2×25mL) 萃取。合并的有机层经干燥 (Na2SO4)、 过滤、 及浓缩。残余物 进行硅胶柱层析 (CH2Cl2， 之后 5 ∶ 95(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)， 获得固体的标题化合 1 物 12(0.44g， 33.9％ )。H-NMR(DMSO-d6)δ7.69(d， J ＝ 3.3Hz， 1H)， 7.56(d， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 7.07(dd， J ＝ 4.8， 3.9Hz， 1H)， 6.66(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 6.52-6.46(m， 2H)， 6.32(brs， 2H)， 3.56-3.52(m， 2H)， 3.36-3.32(m， 2H)， 3.03-3.00(m， 2H)， 2.41(t， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 2.19(s， + 6H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 347(MH ， 100)， 276(84％ )。
N-(4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒二盐酸盐 ： 对 N-(4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (0.44g， 1.270mmol) 在干乙醇 (10mL) 中的溶液， 以盐酸 (1M 在 乙醚中 ； 6.35mL， 6.35mmol) 处理， 室温下搅拌 1 小时。分离沉淀物， 以乙醚清洗该沉淀物， 1 获得黄绿色粉末。减压下干燥该粉末 (0.46g， 86％ )。 H-NMR(DMSO-d6)δ11.25(brs， 2H)， 9.69(brs， 1H)， 8.69(brs， 1H)， 8.15-8.13(m， 2H)， 7.37-7.37(m， 1H)， 7.07-7.01(m， 3H)， 3.82-3.77(m， 2H)， 3.70-3.60(m， 2H)， 3.25-3.21(m， 2H)， 3.15-3.10(m， 2H)， 2.80(d， J ＝ + + 3.6Hz， 6H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 347(MH ， 游 离 碱， 100) ； ESI-HRMS 计 算 C17H23N4S2(MH ， 游离 碱)： 347.1358， 观察值 ： 347.1343 ； HPLC 纯度 ： 97％ ( 以面积计 )。
实施例 13 ： N-(4-(2-(1- 甲基吡咯烷 -2- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(13) 的合成
7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 ： 如实施例 11 中描述的步骤制备。
4-(2-(1- 甲基吡咯烷 -2- 基 ) 乙基 )-7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻 嗪： 对 7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (1g， 5.10mmol)、 2-(2- 氯乙基 )-1- 甲 基吡咯烷盐酸盐 (1.876g， 10.19mmol)、 及溴化四丁基铵 (0.082g， 0.255mmol) 在二氯甲烷 (10mL) 中及 50％ NaOH 溶液 (10mL) 的混合物， 室温下搅拌 16 小时 ( 过夜 )。此反应之后 以二氯甲烷 (5mL) 及水 (20mL) 稀释， 此混合物移到分液漏斗。去除有机层， 水层经二氯甲 烷 (2×10mL) 萃取。合并的有机层经干燥 (Na2SO4)、 过滤、 及浓缩。红色粗产物进入硅胶 柱层析， 使用 Biotage 纯化系统 (80g 硅循环 (silicycle) 柱 ； 梯度 ： 二氯甲烷 3CV， 之后过 渡 (ramp) 为 6 ∶ 94(2M NH3 在甲醇中 ) ∶二氯甲烷， 超过 15CV ； 254nm ； 流速 ： 45mL/min)， 1 获得黄橘色固体的标题化合物 (0.827g， 52.8％ )。 H-NMR(DMSO-d6)δ7.87(dd， J ＝ 3.0， 9.0Hz， 1H)， 7.83(d， J ＝ 3.0Hz， 1H)， 6.79(d， J ＝ 9.3Hz， 1H)， 3.79-3.76(m， 2H)， 3.46(t， J ＝ 8.1Hz， 2H)， 3.08-3.05(m， 2H)， 2.99-2.92(m， 1H)， 2.23(s， 3H)， 2.10-2.06(m， 2H)， + 1.92-1.78(m， 2H)， 1.66-1.61(m， 2H)， 1.54-1.47(m， 2H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 308(MH ， 100)。
4-(2-(1- 甲基吡咯烷 -2- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 胺 ： 对 4-(2-(1- 甲 基 吡 咯 烷 -2- 基 ) 乙 基 )-7- 硝 基 -3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 (0.82g， 2.67mmol) 在甲醇 (10mL) 中的溶液， 在氩气氛下以水合肼 (hydrazine hydrate) (1.29mL， 26.7mmol) 及少量雷尼镍 (Raney-Nickel)( ～ 0.15g， 2.67mmol) 处理。将此反应
移到预热至 65℃的油浴中。经 3 小时后， 将此反应物倒在 Celite 垫上， 以甲醇 (20mL) 冲 洗。 浓缩该滤过物， 残余物到在硅胶垫上。 该硅胶垫以 1 ∶ 9(2M NH3 在甲醇中 ) ∶二氯甲烷 1 (200mL) 冲洗。 浓缩该滤过物， 减压下干燥， 待下一步骤使用。 H-NMR(DMSO-d6)δ6.48(brd， J ＝ 9.3Hz， 1H)， 6.27-6.24(m， 2H)， 4.42(brs， 2H)， 3.33-3.29(m， 2H)， 3.13-3.06(m， 2H)， 2.99-2.96(m， 2H)， 2.96-2.90(m， 1H)， 2.19(s， 3H)， 2.06-1.97(m， 2H)， 1.96-1.78(m， 2H)， + 1.63-1.60(m， 2H)， 1.56-1.40(m， 2H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 278(MH ， 100)。
N-(4-(2-(1- 甲 基 吡 咯 烷 -2- 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲 脒 ： 对 4-(2-(1- 甲 基 吡 咯 烷 -2- 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 胺 (0.7g， 2.52mmol) 及 噻 吩 -2- 亚 胺 亚 甲 基 硫 甲 酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘 酸 盐 (1.439g， 5.05mmol) 在 干 乙 醇 (15mL) 中 的 悬 浮液， 在氩气氛下室温下搅拌过夜 (16 小时 )。此时蒸发溶剂， 残余物在饱和 NaHCO3 溶液 (50mL) 及二氯甲烷 (25mL) 之间分层 ( 分配， partition)。将此混合物移到分液漏斗中， 去 除有机层。 水层经二氯甲烷 (2×25mL) 萃取。 合并的有机层经干燥 (Na2SO4)、 过滤、 及浓缩。 残余物进行硅胶柱层析 ( 洗脱液顺序 ： 2 ∶ 98 的甲醇∶二氯甲烷， 5 ∶ 95 的甲醇∶二氯甲 烷， 及 5 ∶ 95 的 (2M 氨在甲醇中 ) ∶二氯甲烷 )， 获得黄色浆状的标题化合物 13(0.48g， 1 49％ )。 H-NMR(DMSO-d6)δ7.69(brd， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 7.57(brd， J ＝ 4.5Hz， 1H)， 7.07(dd， J ＝ 3.9， 4.8Hz， 1H)， 6.52(dd， J ＝ 1.8， 8.1Hz， 2H)， 6.47(brd， J ＝ 1.8Hz， 1H)， 6.38(brs， 2H)， 3.51-3.47(m， 2H)， 3.28-3.22(m， 2H)， 3.05-3.02(m， 2H)， 2.99-2.93(m， 1H)， 2.24(s， 3H)， 2.12-2.06(m， 2H)， 1.94-1.87(m， 2H)， 1.68-1.63(m， 2H)， 1.51-1.42(m， 2H) ； ESI-MS(m/ + z，％ ) ： 387(MH ， 90)， 276(100)， 194(50)。
N-(4-(2-(1- 甲 基 吡 咯 烷 -2- 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒二盐酸盐 ： 对 N-(4-(2-(1- 甲基吡咯烷 -2- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (0.48g， 1.242mmol) 在干乙醇 (10mL) 中 的溶液， 以盐酸 (1M 在乙醚中 ； 6.21mL， 6.21mmol) 处理， 搅拌半小时。 收集沉淀物， 经乙醚冲 1 洗。 将该沉淀物溶于甲醇中及浓缩， 获得黄橘色结晶固体 (0.57g， 100％ )。H-NMR(DMSO-d6) δ 11.22(brs ， 1H) ， 11.17(brs ， 1H) ， 9.68(brs ， 1H) ， 8.72(brs ， 1H) ， 8.15-8.13(m ， 2H) ， 7.37-7.34(m ， 1H) ， 7.05-6.99(m ， 2H) ， 6.91(brd ， J ＝ 8.7Hz ， 1H) ， 3.66-3.64(m ， 2H) ， 3.55-3.41(m， 3H)， 3.38-3.22(m， 1H)， 3.12-3.09(m， 2H)， 3.00-2.97(m， 1H)， 2.76(d， J ＝ 4.8Hz， 3H)， 2.32-2.18(m， 2H)， 1.99-1.86(m， 3H)， 1.77-1.71(m， 1H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： + + 387(MH ， 游离碱， 100)， 194(19) ； ESI-HRMS 计算 C20H27N4S2(MH ， 游离碱 ) ： 387.1671， 观察值 ： 387.1654 ； HPLC 纯度 ： 97％ ( 以面积计 )。
实施例 14 ： N-(4-(2-( 哌啶 (piperidin)-1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b] [1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(14) 的合成
7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 ： 如实施例 11 中描述的步骤制备。
7- 硝 基 -4-(2-( 哌 啶 -1- 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 ： 7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (1g， 5.10mmol)、 1-(2- 氯乙基 ) 哌啶盐酸盐 (1.876g， 10.19mmol)、 及溴化四丁基铵 (0.082g， 0.255mmol) 在二氯甲烷 (10mL) 中及 50％ NaOH 溶液 (10mL) 中的混合物， 室温下搅拌过夜 (16 小时 )。此混合物以二氯甲烷 (5mL) 及 水 (20mL) 稀释。 将此混合物随后移到分液漏斗中。 去除有机层， 水层经二氯甲烷 (2×10mL) 萃取。合并的有机层干燥 (Na2SO4)、 过滤、 及浓缩。红色粗产物进行硅胶柱层析法， 使用 Biotage 纯化系统 (80g 硅循环柱 ； 溶剂梯度 ： 二氯甲烷 3CV， 过渡为 6 ∶ 94(2M NH3 在甲 醇中 ) ∶ CH2Cl2， 超过 15CV ； 254nm 监测波长 ； 流速＝ 45mL/min)， 获得橘色固体 (0.937g， 1 59.8 ％ )。 H-NMR(DMSO-d6)δ7.85-7.81(m， 2H)， 6.82(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 3.82-3.79(m， 2H)， 3.58(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 3.08-3.04(m， 2H)， 2.50-2.45(m， 2H)， 2.44-2.34(m， 4H)， + 1.49-1.46(m， 4H)， 1.40-1.37(m， 2H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 308(MH ， 100)。
4-(2-( 哌啶 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 胺 ： 对 7- 硝 基 -4-(2-( 哌 啶 -1- 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 (0.9g， 2.93mmol) 在 甲 醇 (10mL) 中 的 混 合 物， 在 氩 气 氛 下 先 以 水 合 肼 (hydrazine hydrate)(1.424mL， 29.3mmol)， 再以雷尼镍 (Raney-Nickel)( ～ 0.172g， 2.93mmol) 处理。将此反应物移到 预热至 65 ℃的油浴中。经 1 小时后， 将此反应混合物倒在 Celite 垫上。该 Celite 垫 之后以甲醇 (25mL) 冲洗。浓缩该紫色滤过物， 并加入硅胶短柱 (1 ∶ 9(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)。 浓 缩 该 流 分 (fractions)， 残 余 物 待 下 一 步 骤 使 用。1H-NMR(DMSO-d6) δ6.49(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 6.26-6.23(m， 2H)， 4.41(s， 2H)， 3.38-3.35(m， 2H)， 3.20(t， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 2.98-2.94(m， 2H)， 2.40-2.34(m， 6H)， 1.50-1.46(m， 4H)， 1.38-1.36(m， 2H) ； + ESI-MS(m/z，％ ) ： 278(MH ， 100)。
N-(4-(2-( 哌 啶 -1- 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲 脒 ： 对 4-(2-( 哌 啶 -1- 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 胺 (0.90g， 3.24mmol) 及 噻 吩 -2- 亚 胺 亚 甲 基 硫 甲 酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (1.85g， 6.49mmol) 的悬浮液， 在氩气氛室温下搅 拌过夜 (16 小时 )。浓缩此反应， 残余物经饱和碳酸氢钠溶液 (50mL) 及二氯甲烷 (25mL) 分 层 (partition)。 经搅拌 1 小时后， 将此混合物倒到分液漏斗中。 去除有机层， 水层经二氯甲 烷 (2×20mL) 萃取。合并的有机层经干燥 (Na2SO4)、 过滤、 及浓缩。残余物进行硅胶柱层析 (2 ∶ 98 至 5 ∶ 95 的 MeOH ∶ CH2Cl2， 之后 5 ∶ 95(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)， 获得黄色
固体的化合物 14(0.288g， 23％ )。1H-NMR(DMSO-d6)δ7.69(d， J ＝ 3.3Hz， 1H)， 7.57(d， J＝ 4.5Hz， 1H)， 7.09-7.06(m， 1H)， 6.67(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 6.52-6.47(m， 2H)， 6.39(brs， 2H)， 3.56-3.53(m， 2H)， 3.39-3.33(m， 2H)， 3.03-3.01(m， 2H)， 2.45-2.39(m， 6H)， 1.49-1.48(m， + 4H)， 1.39-1.38(m， 2H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 387(MH ， 77)， 276(46)， 194(100)。
N-(4-(2-( 哌啶 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲 脒 二 盐 酸 盐 ： 对 N-(4-(2-( 哌 啶 -1- 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (0.288g， 0.745mmol) 在无水甲醇 (8mL) 中的溶液， 以盐酸 (1M 在乙醚中 ； 3.72mL， 3.72mmol) 处理。此反应室温下搅拌 0.5 小时之后浓缩， 获得橘色 1 固 体 (0.34g， 99 ％ )。 H-NMR(DMSO-d6)δ11.21(brs， 1H)， 11.16(brs， 1H)， 9.67(brs， 1H)， 8.69(brs， 1H)， 8.15(brd， J ＝ 4.8Hz， 1H)， 8.11(brd， J ＝ 3.0Hz， 1H)， 7.38-7.35(m， 1H)， 7.11-6.98(m， 3H)， 3.89-3.84(m， 2H)， 3.68-3.64(m， 2H)， 3.45-3.42(m， 2H)， 3.22-3.15(m， 2H)， 3.12-3.09(m， 2H)， 2.89-2.88(m， 2H)， 1.87-1.71(m， 5H)， 1.42-1.38(m， 1H) ； ESI-MS(m/ + + z， ％) ： 387(MH s， 游离碱， 100)， 194(23) ； ESI-HRMS 计算 C20H27N4S2(MH ， 游离碱 ) ： 387.1671， 观察值 ： 337.1657 ； HPLC 纯度 ： 99％ ( 以面积计 )。
实 施 例 15 ： N-(4-(2-( 二 乙 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(15) 的合成
7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 ： 如实施例 11 描述的步骤制备法。
N， N- 二 乙 基 -2-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 胺 (ethanamine) ： 对 7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (1g， 5.10mmol)、 2- 氯 -N， N- 二乙基乙胺 (ethanamine) 盐酸盐 (1.754g， 10.19mmol)、 及 nBu4NBr(0.082g， 0.255mmol)
在 CH2Cl2(10mL) 及水 (10mL) 中的混合物， 室温下搅拌 16 小时。 此混合物以 CH2Cl2(5mL) 及水 (20mL) 稀释。 将此混合物移到分液漏斗中分层。 水层经 CH2Cl2(2×10mL) 萃取。 合并的有机 层干燥 (Na2SO4)、 过滤、 及浓缩。 红色粗产物进行硅胶快速层析法 (flash chromatography) (CH2Cl2， 之 后 1.75-3.5 ％ (2M NH3 在 MeOH 中 )/CH2Cl2)， 产 生 棕 色 油 (1.15g， 77 ％ ).1H NMR(DMSO-d6)δ7.86-7.81(m， 2H)， 6.81(d， J ＝ 9Hz， 1H)， 3.85-3.82(m， 2H)， 3.53(t， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 3.07-3.04(m， 2H)， 2.58(t， J ＝ 6.3Hz， 2H)， 2.52-2.45(m， 4H)， 0.92(t， J ＝ + 100)。 7.2Hz， 6H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 298， 296(MH ，
4-(2-( 二乙基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 胺 ： 对 N，N- 二乙基 -2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙胺 (ethanamine)(1.109g， 3.76mmol) 在 MeOH(30mL) 中 的 搅 拌 溶 液， 加 入 雷 尼 镍 (Raney-Nickel)( 水 中 浆 液 )( ～ 0.1g， 3.76mmol)， 之后加入水合肼 (hydrazine hydrate)(1.828mL， 37.6mmol)。 该混合物浸 入预热的油浴， 回流 30 分钟。冷却此溶液至室温， 经 Celite 过滤， 以 MeOH 清洗。粗产物经 硅栓 (silica plug)(3.5％ (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2) 过滤。蒸发溶剂， 获得暗棕色油 1 状的产物 (1.07g， 定量 )。H NMR(CDCl3)δ6.58(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 6.45(d， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 6.40(dd， J ＝ 2.7， 8.7Hz， 1H)， 3.53-3.50(m， 2H)， 3.30(m， 4H)， 3.03-2.99(m， 2H)， 1.03(t， J + ＝ 7.2Hz， 6H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 268， 266(MH ， 100)， 100(52)。
N-(4-(2-( 二乙基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒 ： 对 4-(2-( 二乙基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 胺 (1.054g， 3.97mmol) 在 EtOH(20mL) 中的混合物， 加入噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (2.266g， 7.94mmol)。此反应室温下搅拌 2 天。 此反应以饱和碳酸氢钠溶液 (30mL) 淬灭， 以 CH2Cl2(50mL) 萃取。水层以 CH2Cl2(50mL) 清 洗。合并的有机成分以盐水 (50mL) 清洗、 干燥 (Na2SO4)。粗产物经硅胶快速层析法 (flash chromatography)(CH2Cl2， 之后 3.5％ (2M NH3 在 MeOH 中 ) ： CH2Cl2)。浓缩收集的流分， 此样 本再进行硅胶快速层析法 (flash chromatography)(2.5％ MeOH ∶ CH2Cl2)。浓缩收集的流 1 分， 获得棕色固体的化合物 15(1.23g， 83％ )。 H NMR(CDCl3)δ7.40-7.36(m， 2H)， 7.05(dd， J ＝ 3.9， 4.8Hz， 1H)， 6.73(m， 3H)， 3.65-3.61(m， 1H)， 3.39(t， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 3.05-3.02(m， 2H)， 2.67-2.54(m， 6H)， 1.04(t， J ＝ 7.2Hz， 6H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 377， 375(MH+， 35)， 278， 276(100)。
N-(4-(2-( 二乙基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒二盐酸盐 ： 对 N-(4-(2-( 二乙基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (1.149g， 3.07mmol) 在 MeOH(5mL) 中的搅拌溶液， 室温下加入 乙醚中 (15.35mL， 15.35mmol) 的 1M HCl。在氩气氛下搅拌此混合物 5 分钟， 然后浓缩形 1 成 黄 色 固 体 (1.37g， 定 量 )。 H NMR(DMSO-d6)δ11.24(s， 2H)， 9.68(s， 1H)， 8.69(s， 1H)， 8.15-8.13(m， 2H)， 7.37-7.34(m， 1H)， 7.12-7.00(m， 3H)， 3.88-3.83(m， 2H)， 3.69-3.66(m， 2H)， 3.17-3.10(m， 8H)， 1.25(t， J ＝ 7.2Hz， 6H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 377， 375(MH+， 游离碱， + 58)， 278， 276(100) ； ESI-HRMS 计 算 C19H25N4S2(MH ， 游 离 碱 )， 计算值 ： 375.1671， 观察值 ： 375.1667 ； HPLC ： 95％ ( 以面积计 )。
实施例 16 ： N-(4-(2-(2- 羟乙基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide) 二盐酸盐 (16) 的合成
7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 ： 如实施例 11 中描述的步骤制备。
2- 氯 -1-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone) ： 对含 7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (5g， 25.5mmol) 在甲苯 (30mL) 中的溶液， 逐滴 加入 2- 氯乙酰氯 (4.08mL， 50.9mmol)。 此混合物在 110℃回流 20 分钟。 此混合物以饱和碳 酸氢钠溶液 (100mL) 淬灭。此混合物移到分液漏斗中， 经 EtOAc(4×100mL) 萃取。粗产物 J 经硅胶垫过滤， 以 EtOAc 清洗。浓缩滤过物获得黄棕色固体。1H-NMR(DMSO-d6)δ8.12(d， ＝ 2.7Hz， 1H)， 7.94(dd， J ＝ 2.7， 9.0Hz， 1H)， 7.72(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 4.63(s， 2H)， 3.96(t， J ＝ 5.1Hz， 2H)， 3.32(t， J ＝ 5.4Hz， 2H， 与溶剂峰重叠 ) ； ESI-MS(m/z， ％)： 273(MH+， 100)， 295(40)。
2-(2- 羟 基 乙 氨 基 )-1-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 酮 (ethanone) ： 对 2- 氯 -1-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone) (1.0g， 3.67mmol) 在 THF(20mL) 中的溶液， 以 4M HCl 在 1， 4- 二噁烷 (4.58mL， 18.33mmol) 中处理， 之后缓慢加入 2- 氨基乙醇 (2.207mL， 36.7mmol) 在水 (4mL) 中的溶液。此暗色溶 液室温下搅拌 24 小时。此混合物以 EtOAc(50mL) 及饱和碳酸氢钠 (100mL) 稀释， 之后搅拌 20 分钟。将此内容物倒入分液漏斗中， 分离有机层、 干燥 (Na2SO4)、 过滤、 及浓缩， 获得暗黄 色残余物。将此残余物进行硅胶快速层析法， 使用 5 ∶ 95 的 MeOH ∶ CH2Cl2， 之后 5 ∶ 95 的 1 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2， 获得黄色残余物 (320mg， 29.4％ )。 H-NMR(CDCl3)δ8.14(d， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 7.95(dd， J ＝ 2.7， 9.0Hz， 1H)， 7.37(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 4.02(t， J ＝ 5.1Hz， 2H)， 3.61(t， J ＝ 5.1Hz， 2H)， 3.57(s， 2H)， 3.28(t， J ＝ 5.4Hz， 2H)， 2.77(t， J ＝ 4.8Hz， 2H) ； + ESI-MS(m/z，％ ) ： 298(MH ， 100％ )。
2- 羟乙基 (2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 )-2- 氧代乙基 ) 氨基 甲酸叔丁酯 ： 对 2-(2- 羟基乙氨基 )-1-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 酮 (ethanone)(300mg， 1.009mmol) 在 THF(15mL) 中的溶液， 以 Boc 酐 (231mg， 1.059mmol)、 之后三乙胺 (0.422mL， 3.03mmol) 处理。此黄色溶液室温下搅拌 18 小时 ( 过夜 )。将此溶 液以 EtOAc(20mL) 稀释， 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 处理。将此混合物移到分液漏斗及萃 取。萃取后， 分离有机层、 干燥 (Na2SO4)， 经硅胶栓 (plug) 过滤。该垫以 EtOAc(10mL) 冲洗， 浓缩此滤过物， 获得黄色残余物。此残余物进行硅胶层析法， 使用 Biotage 纯化系统 ( 柱 ： 硅循环 (Silicycle)40g ； 30％ EtOAc/70％己烷梯度至 90％ EtOAc/10％己烷， 超过 10 柱体
积； 流速＝ 35mL/min ； 收集波长 ： 254nm)。减压干燥后获得黄色残余物 (270mg， 67.3 ％ )。 1 H-NMR(CDCl3)( 旋转异构体 (rotamer) 混合物 )δ8.15(dd， J ＝ 2.7， 8.1Hz， 1H)， 7.94(dd， J ＝ 2.4， 8.7Hz， 1H)， 7.58 和 7.31(2×d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 4.41(brs， 1H)， 4.12-3.88(m， 4H)， 3.82-3.66(m， 2H)， 3.48 和 3.11(2×t， J ＝ 4.5Hz， 2H)， 3.29(t， J ＝ 4.5Hz， 2H)， 1.46 和 + 1.40(2×s， 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 420(M+Na， 70)， 398(MH ， 40)， 298(100)。
2- 羟乙基 (2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁 酯： 对 2- 羟乙基 (2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 )-2- 氧代乙基 ) 氨基甲酸 叔丁酯 (250mg， 0.629mmol) 在 THF(10mL) 中的溶液， 冷却至 0℃， 然后以硼烷在 THF 中 (1M) (6.29mL， 6.29mmol) 处理。所得的亮黄色溶液温热至室温， 然后在此温度下搅拌 2.5 天。冷 却此混合物至 0℃， 此反应之后小心以 MeOH 淬灭 ( 开始逐滴加入， 总体积 20mL)。 移除冷浴， 此黄色溶液搅拌 20 分钟之后浓缩。此橘色残余物溶于 MeOH(50mL)， 浓缩至干。将此残余物 溶于 EtOAc(20mL)， 经硅胶垫过滤。该硅垫以 EtOAc(100mL) 洗脱。浓缩该滤过物获得橘色 残余物， 减压下干燥 4 小时 (230mg， 95％ )。1H-NMR(CDCl3)δ7.97(brs， 1H)， 7.87(brd， J＝ 8.7Hz， 1H)， 6.85-6.71(m， 1H)， 3.81(brs， 5H)， 3.61(brs， 2H)， 4.54-3.31(m， 4H)， 3.02( 重叠 + t， 2H)， 1.47(brs， 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 406(M+Na， 60)， 384(MH ， 10)， 328(60)， 284(100)。
2- 羟 乙 基 (2-(7- 噻 吩 -2- 甲 脒 基 (carboximidamido))-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ： 将含有 2- 羟乙基 (2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (220mg， 0.574mmol) 的圆底烧瓶在氩气下以载钯 活性碳 (palladium on activated carbon)(10％ wt ； 61.0mg， 0.057mmol) 处理。 此混合物以 氩气吹洗， 再加入 EtOH(20mL)。 所得悬浮液用泵抽真空， 经气囊将氢气充入系统中。 将此混 合物在填充氢气的气囊下搅拌 3 小时。 去除该氢气气囊， 向反应中加入噻吩 -2- 亚胺亚甲基 硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (327mg， 1.147mmol)。此悬浮液 在室温下搅拌 17 小时 ( 过夜 )。此时， 将此混合物通过 Celite 垫过滤， 再以 MeOH(10mL) 冲 洗。 浓缩该滤过物， 残余物经饱和碳酸氢钠溶液 (50mL) 及 CH2Cl2(100mL) 分层 (partition)。 将该混合物移到分液漏斗并萃取。萃取后， 分离有机层， 干燥 (Na2SO4)、 过滤及浓缩， 获得 暗色残余物。此残余物进行硅胶快速层析， 使用 2 ∶ 98MeOH/CH2Cl2， 之后 3.5 ∶ 96.5 的 1 (2MNH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2， 获得黄色固体 (140mg， 52.7％ )。H-NMR(DMSO-d6)δ7.69(brd， J ＝ 3.0Hz， 1H)， 7.57(d， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 7.07(dd， J ＝ 3.9， 4.8Hz， 1H)， 6.82-6.75(m， 1H)， 6.53-6.42(m， 2H)， 6.32(brs， 2H)， 4.73(t， J ＝ 5.4Hz， 1H)， 3.54(brs， 2H)， 3.50-3.42(m， 2H)， 3.38(brs， 4H， 与 溶 剂 峰 重 叠 )， 3.27-3.19(m， 2H)， 3.08-2.96(m， 2H)， 1.41(brs， 9H) ； + ESI-MS(m/z，％ ) ： 463(MH ， 100)， 398(60) ； HPLC 纯度 ： 96.4％ a/a。
N-(4-(2-(2- 羟乙基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲 脒 二 盐 酸 盐 ： 对 2- 羟 乙 基 (2-(7- 噻 吩 -2- 甲 脒 基 )-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (130mg， 0.281mmol) 在 MeOH(10mL) 中的溶液， 加入 3N HCl(2.81mL， 8.43mmol)。 此黄色溶液在 75℃加热 30 分钟。 此时， 将此反应过滤及浓缩至 一半体积。 此黄色溶液之后以 2×50mL CH2Cl2 萃取， 浓缩该水层至干， 获得黄色残余物。 减压 1 ( 高真空 ) 下干燥此残余物， 获得黄色粉末的化合物 16。H-NMR(CD3OD)δ7.98-7.94(m， 2H)， 7.29( 假 t， J ＝ 4.2Hz， 1H)， 7.04-6.94(m， 3H)， 3.79(brt， J ＝ 4.8Hz， 2H)， 3.72-3.65(m， 4H)， 3.28(brs， 2H)， 3.16(brt， J ＝ 5.1Hz， 2H)， 3.09-3.06(m， 2H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ：363(MH+， 游离碱， 100)， 276(90) ； ESI-HRMS 计算 C17H23N4O1S2(MH+， 游离碱 ) ： 363.1307， 观察 值： 363.1316 ； HPLC 纯度 ： 96.2％ a/a。
实施例 17 ： 2-( 甲基 (2-(7- 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamido) 基 )-2H- 苯并 [b] [1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基 ) 乙酸二盐酸盐 (17) 的合成
N， N- 二 甲 基 -2-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 胺 (ethanamine) ： 如实施例 8 中描述的步骤制备。
N- 甲基 -2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙胺 (ethanamine) ： 对 N， N- 二 甲 基 -2-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 胺 (ethanamine) (1.65g， 6.17mmol) 在 ClCH2CH2Cl(20mL) 中的溶液冷却至 0 ℃ ( 冰 / 水浴 )， 之后以 α- 氯 甲酸氯乙酯 (1.009mL， 9.26mmol) 逐滴处理。所得悬浮液在 88℃加热 1.5 小时， 然后浓缩 至干。残余物溶于 MeOH(50mL)， 加热回流 2 小时。浓缩此暗色混合物， 经饱和碳酸氢钠溶 液 (50mL) 及 Ch2Cl2(200mL) 分层 (partition)。将此混合物移到分液漏斗并萃取。萃取后 去除有机层， 干燥 (Na2SO4)、 过滤、 及浓缩， 获得棕色残余物。此残余物进行硅胶快速层析 (flash chromatography)， 使用 5 ∶ 95(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2 作为洗脱液， 获得黄色 1 残余物 (980mg， 62.7％ )。H-NMR(CDCl3)δ7.97(d， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 7.87(d， J ＝ 2.7， 9.3Hz， 1H)， 6.68(d， J ＝ 9.3Hz， 1H)， 3.86-3.82(m， 2H)， 3.55(t， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 3.04-3.01(m， 2H)， 2.87(t， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 2.49(s， 3H)， 1.32(brs， 1H)。
2-( 甲基 (2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基 ) 乙酸 叔丁酯 ： 对 N- 甲基 -2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙胺 (ethanamine) (0.95g， 3.75mmol)、 二 异 丙 基 乙 基 胺 (1.960mL， 11.25mmol)、 及 溴 化 乙 酸 叔 丁 酯 在 DMF 中 (20mL) 的 溶 液， 在 55 ℃ 加 热 17 小 时 ( 过 夜 )。 此 黄 色 溶 液 经 盐 水 (40mL) 稀 释， 经 EtOAc(100mL) 萃取。去除有机层萃取物， 以盐水 (20mL) 冲洗。有机层经干燥 (Na2SO4)、 过 滤、 及浓缩， 获得黄色残余物。此残余物进行硅胶快速层析 (flash chromatography)， 使 用 2.5 ∶ 97.5 的 MeOH ∶ CH2Cl2， 获得黄棕色残余物。收集两流分， 后者含有非极性黄色
斑 (950mg， 68.9 ％ )。1H-NMR(CDCl3)δ7.96(d， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 7.88(d， J ＝ 2.7， 9.3Hz， 1H)， 6.65(d， J ＝ 9.3Hz， 1H)， 3.88-3.83(m， 2H)， 3.55(t， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 3.20(s， 2H)， 3.02-2.99(m， 2H)， 2.76(t， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 2.44(s， 3H)， 1.46(s， 9H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： + 368(MH ， 20)， 312(100)。
2-((2-(7- 氨基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 )( 甲基 ) 氨基 ) 乙 酸叔丁酯 ： 含 有 2-( 甲 基 (2-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ) 氨 基 ) 乙酸叔丁酯 (925mg， 2.52mmol) 的圆底烧瓶用氩气吹洗， 之后装载钯碳 (palladium on carbon)(10％ wt ； 268mg， 0.252mmol) 处理。 此混合物加入 EtOH(40mL)。 用泵对所得悬浮液 抽真空， 经气囊向该系统中通入氢气。 将此混合物在填充氢气的气囊下搅拌 3 小时。 去除该 气囊， 该通入悬浮液的氩气起泡 10 分钟。将此混合物通过 Celite 垫过滤， 该 Celite 垫经 甲醇 (20mL) 冲洗。浓缩该滤过物， 减压下干燥该残余物， 获得标题化合物 (850mg， 定量 )。 1 H-NMR(CDCl3)δ6.59(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 6.45(d， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 6.40(dd， J ＝ 2.7， 8.4Hz， 1H)， 3.54-3.45(m， 2H)， 3.33(t， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 3.27(brs， 2H)， 3.20(s， 2H)， 3.04-2.98(m， 2H)， 2.71(t， J ＝ 7.5Hz， 2H)， 2.42(s， 3H)， 1.46(s， 9H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 338(MH+， 95)， 282(100)。
2-( 甲基 (2-(7- 噻吩 -2- 甲脒基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基 ) 乙酸叔丁酯 ： 对 2-((2-(7- 氨基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 )( 甲 基 ) 氨基 ) 乙酸叔丁酯 (850mg， 2.52mmol) 在 EtOH(25mL) 中的溶液， 加入噻吩 -2- 亚胺亚 甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (1.43g， 5.04mmol)。所得 悬浮液在室温下搅拌 17 小时 ( 过夜 )。此时， 该悬浮液以 20mL CH2Cl2 稀释， 获得暗黄色溶 液。之后此溶液上的氩气起泡 30 分钟。将此溶液移到含有饱和碳酸氢钠溶液 (50mL) 及 CH2Cl2(100mL) 的分液漏斗中， 随后萃取。萃取后， 去除有机层， 干燥 (Na2SO4)、 过滤及浓缩， 获得暗色残余物。 此残余物进行硅胶快速层析， 使用 2 ∶ 98 的 MeOH/CH2Cl2， 之后 2.5 ∶ 97.5 的 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2， 获得黄绿色残余物 (420mg， 37.3％ )。收集一些不纯的流 1 分 ( ～ 340mg)。 H-NMR(CDCl3)δ7.43-7.35(m， 2H)， 7.06( 假 (pseudo)t， J ＝ 4.8Hz， 1H)， 7.71(brd， J ＝ 8.1Hz， 2H)， 6.65(dd， J ＝ 1.8， 8.4Hz， 1H)， 4.91(brs， 2H)， 3.66-3.58(m， 2H)， 3.43(t， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 3.21(s， 2H)， 3.07-2.99(m， 2H)， 2.74(t， J ＝ 7.5Hz， 2H)， 2.45(s， + 3H)， 1.47(s， 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 447(MH ， 100)， 391(50) ； HPLC 纯度 ： 99.7％ a/a。
2-( 甲基 (2-(7- 噻吩 -2- 甲脒基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基 ) 乙酸二盐酸盐 ： 烤箱中干燥的圆底烧瓶， 装配有磁性搅拌棒 (magnetic stirbar)， 在 氩气下加入 2-( 甲基 (2-(7- 噻吩 -2- 甲脒基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ) 氨基 ) 乙酸叔丁酯 (200mg， 0.448mmol)( 在 CH2Cl2(3mL) 中 )， 将此溶液冷却至 0℃ ( 冰 / 水浴 )。此溶液加入苯甲醚 (anisole)(0.098mL， 0.896mmol)， 之后逐滴加入三氟乙酸 (2.92mL， 26.9mmol)。0℃搅拌此反应 20 分钟。然后移除冰浴， 该混合物再搅拌 3 小时。此 时， 浓缩混合物， 以 4.0M HCl( 在 1， 4- 二噁烷 (4mL)) 中处理。所得悬浮液经 Et2O(20mL) 稀释， 然后搅拌 20 分钟。过滤此混合物， 该固体以 Et2O(20mL) 清洗。减压下干燥该固体， 获得淡黄色粉末的化合物 17(200mg， 96 ％ )。HPLC 分析指出该样本含有～ 3.4 ％的原材 1 料。 H-NMR(CD3OD)δ7.99(d， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 7.97(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 7.31( 假 t， J ＝ 4.5Hz， 1H)， 7.11-6.99(m， 2H)， 6.95(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 4.16(s， 2H)， 3.81(brt， J ＝ 6.9Hz，2H)， 3.68(brt， J ＝ 4.8Hz， 2H)， 3.52-3.39(m， 2H)， 3.10(brt， J ＝ 4.8Hz， 2H)， 3.03(s， 3H) ； + ESI-MS( 阳离子模式 ) ： 391(MH ， 游离碱， 100) ； ESI-MS( 阴离子模式 ) ： 389(M-1， 游离碱， + 100) ； ESI-HRMS 计 算 C18H23N4O2S2(MH ， 游离碱 ) ： 391.1256， 观察值 ： 391.1255 ； HPLC 纯 度 ： 96.64％ a/a。
实施例 18 ： (S)-1-(2-(7- 噻吩 -2- 甲脒基 (carboximidamido))-2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 吡咯烷 -2- 羧酸二盐酸盐 (18) 的合成
2- 氯 -1-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone) ： 如实 施例 16 中描述的步骤制备。
(S)-1-(2-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 )-2- 氧 代 乙 基 ) 吡 咯 烷 -2- 羧 酸 叔 丁 酯 ： 对 2- 氯 -1-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 酮 (ethanone)(1.0g， 3.67mmol) 在 THF(20mL) 中的溶液， 以 (S)- 吡咯烷 -2- 羧酸叔丁酯 (0.942g， 5.50mmol) 处理， 之后以饱和碳酸氢钠 (4mL) 处理。此混合物在 55℃加热 3 小时， 然后在室温下搅拌过夜 (17 小时 )。此混合物经 EtOAc(50mL) 及饱和碳酸氢钠 (10mL) 稀 释， 之后搅拌 20 分钟。将此内容物倒入分液漏斗， 分离有机层， 经干燥 (Na2SO4)、 过滤、 及 浓缩， 获得暗黄色残余物。将此残余物进行硅胶层析， 使用 Biotage 纯化系统 ( 柱 ： 硅循环 (Silicycle)40g ； 20 ∶ 80 的 EtOAc ∶己烷， 梯度至 60 ∶ 40 的 EtOAc ∶己烷， 超过 8 柱体 1 积； 流速 ： 35mL/min ； 收集波长 ： 254nm)。获得黄色残余物 (1.47g， 98 ％ )。 H-NMR(CDCl3) δ8.09(d， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 7.91(dd， J ＝ 2.4， 8.7Hz， 1H)， 7.75(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 4.10(brs， 2H)， 3.74(brd， J ＝ 13.2Hz， 1H)， 3.40(brd， J ＝ 13.5Hz， 1H)， 3.37-3.21(m， 3H)， 3.12-3.04(m， 1H)， 2.61(brdd， J ＝ 8.1， 16.2Hz， 1H)， 2.21-2.07(m， 1H)， 1.95-1.77(m， 3H)， + 1.43(s， 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 408(MH ， 50)， 352(100)。
(S)-1-(2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 吡咯烷 -2- 羧 酸叔丁酯 ： 将 1M 在 THF(17.18mL， 17.18mmol) 中的硼烷， 加入 (S)-1-(2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 )-2- 氧代乙基 ) 吡咯烷 -2- 羧酸叔丁酯 (1.4g， 3.44mmol) 中， 获 得的黄色溶液在室温下搅拌过夜 (17 小时 )。该黄色溶液冷却至 0℃， 小心以 MeOH(10mL) 淬灭。 浓缩此溶液， 溶于 MeOH(50mL)， 经再浓缩获得暗黄色残余物。 将此残余物进行硅胶层 析， 使用 Biotage 纯化系统 ( 柱 ： 硅循环 (Silicycle)80g ； 20 ∶ 80 的 EtOAc ∶己烷， 梯度至 60 ∶ 40 的 EtOAc ∶己烷， 超过 10 柱体积 ； 流速＝ 45mL/min ； 收集波长 ： 254nm)。 获得黄色残 1 余物 (550mg， 40.7％ )。 H-NMR(CDCl3)δ7.96(d， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 7.87(dd， J ＝ 2.7， 9.3Hz，
1H)， 6.68(d， J ＝ 9.3Hz， 1H)， 3.86-3.82(m， 2H)， 3.57(t， J ＝ 7.5Hz， 2H)， 3.24-3.10(m， 2H)， 3.05-2.96(m， 3H)， 2.75-2.63(m， 1H)， 2.52-2.41(m， 1H)， 2.15-2.04(m， 1H)， 1.97-1.78(m， + 3H)， 1.44(s， 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 394(MH ， 25)， 338(100)。
(S)-1-(2-(7- 噻 吩 -2- 甲 脒 基 )-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ) 吡咯烷 -2- 羧酸叔丁酯 ： 含有 (S)-1-(2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 吡咯烷 -2- 羧酸叔丁酯 (525mg， 1.334mmol) 的圆底烧瓶以氩气吹洗。此烧瓶装 载 活 性 钯 碳 ( 活 性 炭 载 钯 )(10 ％ wt ； 142mg， 0.133mmol)， 之 后 装 载 EtOH(25mL)。 用 泵 对所得悬浮液抽真空， 经气囊向系统通入氢气。将此混合物在填充氢气的气囊下搅拌 2 小时。此时， 去除该氢气气囊， 向混合物中加入噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (761mg， 2.67mmol)。此悬浮液在室温下搅拌 17 小时 ( 过夜 )。同时， 将此混合物通过 Celite 垫过滤， 以 MeOH(20mL) 冲洗。浓缩该滤过 物， 残余物经饱和碳酸氢钠溶液 (50mL) 及 CH2Cl2(100mL) 分层 (partition)。将该混合物 移到分液漏斗并萃取。萃取后， 分离有机层， 干燥 (Na2SO4)、 过滤及浓缩， 获得暗色残余物。 此残余物进行硅胶快速层析， 使用 2 ∶ 98 的 MeOH/CH2Cl2， 之后 3.5 ∶ 96.5 的 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2， 获得黄绿色残余物 (398mg， 63.1 ％ )。1H-NMR(CDCl3)δ7.39(dd， J＝ 1.2， 5.1Hz， 1H)， 7.37(dd， J ＝ 1.2， 3.9Hz， 1H)， 7.05(dd， J ＝ 3.6， 4.8Hz， 1H)， 6.73(brd， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 6.71(brs， 1H)， 6.65(dd， J ＝ 2.1， 8.7Hz， 1H)， 4.86(brs， 2H)， 3.63-3.60(m， 2H) ， 3.44(t ， J ＝ 7.5Hz ， 2H) ， 3.25-3.19(m ， 1H) ， 3.11(brdd ， J ＝ 5.4 ， 8.4Hz ， 1H) ， 3.04-2.94(m， 3H)， 2.71-2.59(m， 1H)， 2.45(brdd， J ＝ 7.8， 16.2Hz， 1H)， 2.13-1.99(m， 1H)， + 1.97-1.74(m， 3H)， 1.45(s， 9H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 473(MH ， 90)， 417(85)， 276(100) ； HPLC 纯度 ： 99.6％ a/a。
(S)-1-(2-(7- 噻 吩 -2- 甲 脒 基 )-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ) 吡 咯 烷 -2- 羧 酸 二 盐 酸 盐 ： 对 (S)-1-(2-(7- 噻 吩 -2- 甲 脒 基 )-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ) 吡 咯 烷 -2- 羧 酸 叔 丁 酯 (200mg， 0.423mmol) 在 CH2Cl2(5mL) 中 的 溶液， 以苯甲醚 (anisole)(0.092mL， 0.846mmol) 处理。将此反应冷却至 0 ℃， 然后加入 三氟乙酸 (2.76mL， 25.4mmol)。此混合物在 0 ℃搅拌 2 小时， 然后浓缩至干。此残余物中 加入在二噁烷中 (3.17mL， 12.69mmol) 的 4M HCl， 所得悬浮液搅拌 20 分钟。此混合物以 Et2O(10mL) 稀释， 搅拌 1 小时。过滤该固体， 以 Et2O(10mL) 清洗， 之后减压下干燥。该固 体溶于 3N HCl(4.0mL， 12.00mmol)， 在 50 ℃加热 1 小时。浓缩该黄色溶液， 减压下干燥， 1 获 得 黄 色 固 体 的 化 合 物 18(200mg， 97 ％ )。 H-NMR(CD3OD)δ7.98-7.94(m， 2H)， 7.28(dd， J ＝ 4.2， 4.8Hz， 1H)， 7.05-7.01(m， 2H)， 6.92(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 4.42(dd， J ＝ 7.8， 9.0Hz， 1H)， 3.85-3.56(m， 6H)， 3.48-3.29(m， 2H)， 3.13-3.03(m， 2H)， 2.62-2.47(m， 1H)， + 2.26-2.10(m， 2H)， 2.08-1.92(m， 1H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 417(MH ， 游离碱， 100) ； ESI-HRMS + 计算 C20H25N4O2S2(MH ， 游离碱 ) ： 417.1419， 观察值 ： 417.1399 ； HPLC 纯度 ： 99.5％ a/a ； 旋光 25 度 ：[α]589 ＝ -27.0°， c ＝ 0.52( 在 MeOH 中 )。
实 施 例 19 ： N-(4-(2-( 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 呋喃 -2- 甲脒 (carboximidamide)(19) 的合成
N， N- 二 甲 基 -2-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 胺 (ethanamine) ： 如实施例 8 中描述的步骤制备。
4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 胺 ： 对 N， N- 二甲基 -2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙胺 (ethanamine)(0.9695g， 3.63mmol) 在 MeOH(20mL) 中的溶液， 加入雷尼镍 (Raney-Nickel)( 水中浆液 ；～ 0.1g， 3.63mmol)， 之后加入水合肼 (hydrazine hydrate)(1.82mL， 37.4mmol)。 此混合物浸入预热 的油浴， 回流 20 分钟。此溶液冷却至室温， 经 Celite 垫过滤。该过滤垫经 MeOH 清洗， 浓缩 该粗产物。 该粗产物经硅胶栓 (plug) 过滤 (2.5 ∶ 97.5 的 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)。
收集的流分中提供棕色粘稠状油 (0.84g， 99 ％ )。1H NMR(CDCl3)δ6.58(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 6.45(d， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 6.40(dd， J ＝ 2.7， 8.7Hz， 1H)， 3.51-3.48(m， 2H)， 3.30(t， J＝ 7.2Hz， 2H)， 3.03-3.00(m， 2H)， 2.48(t， J ＝ 7.5Hz， 2H)， 2.27(s， 6H) ； ESI-MS(m/z， ％) ： 240， + 238(MH ， 100)。
N-(4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 呋 喃 -2- 甲脒 ： 将呋喃 -2- 亚胺亚甲基硫苯甲酯 (benzyl furan-2-carbimidothioate) 溴酸 盐 (1.139g， 3.82mmol) 加入 4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 胺 (0.829g， 3.49mmol) 在 EtOH(20mL) 中的混合物中。该混合物在氩气氛下搅拌 2 小时。此溶液经饱和碳酸氢钠 (50mL) 淬灭。将此溶液移到分液漏斗中， 经水 (50mL) 稀释， 以 CH2Cl2(50mL) 萃取。其中的水相经 CH2Cl2(50mL) 清洗。合并的有机成分以盐水 (50mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)。该粗产物进行硅胶快速层析 (flash chromatography)(2.5-5％的 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)。收集的流分提供棕色油状的化合物 19(1.03g， 90 ％ )。 H NMR(CDCl3)δ7.46(s， 1H)， 7.03(brs， 1H)， 6.73-6.68(m， 3H)， 6.50(brs， 1H)， 5.03(brs， 2H)， 3.62-3.59(m， 2H)， 3.40(t， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 3.05-3.02(m， 2H)， 2.52(t， J ＝ 7.5Hz， 2H)， + 2.29(s， 6H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 333， 331(MH ， 91)， 260， 262(100)。
N-(4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 呋 喃 -2- 甲脒二盐酸盐 ： 将 N-(4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 呋喃 -2- 甲脒 (0.166g， 0.504mmol) 溶于 MeOH(2mL)。该溶液室温下加入在乙 醚中 (2.52mL， 2.52mmol) 的 1M HCl， 此反应在氩气氛搅拌 5 分钟。浓缩此混合物， 获得淡 1 黄 色 固 体 (0.18g， 93 ％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ11.36(s， 1H)， 11.25(brs， 1H)， 9.68(s， 1H)， 8.69(s， 1H)， 8.23(s， 1H)， 7.91(d， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 7.07-6.96(m， 3H)， 6.90(d， J ＝ 1.8Hz，921H)， 3.82-3.77(m， 2H)， 3.67-3.63(m， 2H)， 3.25-3.22(m， 2H)， 3.12-3.09(m， 2H)， 2.80(s， + 3H)， 2.78(s， 3H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 333， 331(MH ， 游 离 碱， 100)， 260， 262(57) ； HRMS 计 算 + C17H23N4OS(MH ， 游离碱 ) ： 计算值 ： 331.1587， 观察值 ： 331.1589 ； HPLC 纯度 ： 98 ％ ( 以面积 计 )。
实 施 例 20 ： N-(4-(2-( 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 呋喃 -2- 甲脒 (carboximidamide)(20) 的合成
N， N- 二 甲 基 -2-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 胺 (ethanamine) ： 如实施例 8 中描述的步骤制备。
N- 甲基 -2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙胺 (ethanamine) ： 在 0 ℃氩气氛下， 将氯甲酸 1- 氯乙酯 (0.612mL， 5.61mmol) 加入 N， N- 二甲基 -2-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 胺 (ethanamine)(1.0g， 3.74mmol) 在 1， 2- 二氯乙烷 (20mL) 中的溶液中。此溶液回温至室温， 强力搅拌下回流 3 小时。浓缩此 溶液， 之后在 MeOH(20mL) 中回流。浓缩此溶液， 获得暗棕色粘稠油 (1.05g， 定量 )。1H NMR(CDCl3)δ7.96(d， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 7.86(dd， J ＝ 2.7， 9.3Hz， 1H)， 6.67(d， J ＝ 9.3Hz， 1H)， 3.85-3.82(m， 2H)， 3.55(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 3.03-3.00(m， 2H)， 2.86(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， + 2.48(s， 3H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 256， 254(MH ， 100)。
甲基 (2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ： 对 N- 甲基 -2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙胺 (ethanamine)(1.022g， 4.04mmol) 及三乙胺 (1.135mL， 8.08mmol) 在二噁烷 (20mL) 中的搅拌溶液， 氩气氛下加入 二碳酸二叔丁酯 (0.984mL， 4.24mmol)。所得溶液室温下搅拌过夜。然后以水 (50mL) 稀释 此溶液， 并经 CH2Cl2(50mL) 萃取。该有机相以盐水 (50mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)。粗产物进 行硅胶快速层析 (flash chromatography)(20-50 ％的 EtOAc ∶己烷 )。收集的流分经浓 缩， 获得黄棕色油 (0.95g， 67％ )。1H NMR(CDCl3)δ7.97(s， 1H)， 7.87(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 6.76-6.66(m， 1H)， 3.80(brs， 2H)， 3.60-3.54(m， 2H)， 3.47-3.45(m， 2H)， 3.03-2.99(m， 2H)， + 2.92-2.88(m， 3H)， 1.42(s， 9H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 278， 276(M+Na， 72)， 356， 354(MH ， 19)， 298， 300(100)， 256， 254(74)。
2-(7- 氨基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ( 甲基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ： 对甲基 (2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (0.8811g， 2.493mmol) 在 MeOH(20mL) 中的溶液， 加入雷尼镍 (Raney-Nickel)( 水中浆液 ；～ 0.5g， 2.493mmol)， 之后加入水合肼 (hydrazine hydrate)(1.213mL， 24.93mmol)。此混合物随后 浸入预热的油浴， 回流 5 分钟。此溶液冷却至室温， 经 Celite 垫过滤。该过滤垫经 MeOH 清 洗， 浓缩该粗产物。 该粗产物之后经硅栓 (plug) 过滤 (70％的 EtOAc/ 己烷 )。 浓缩收集的流 1 分， 获得棕色油 (0.78g， 98％ )。H NMR(CDCl3)δ6.64-6.58(m， 1H)， 6.45(d， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 6.39(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 3.53-3.50(m， 2H)， 3.39-3.28(m， 4H)， 3.01-2.98(m， 2H)， 2.90(s， + 3H)， 1.45(s， 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 326， 324(MH ， 95)， 268(100)。
2-(7-( 呋 喃 -2- 甲 脒 基 (carboximidamido))-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ( 甲基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ： 将呋喃 -2- 亚胺亚甲基硫苯甲酯 (benzyl furaN-2-carbimidothioate) 溴酸盐 (1.199g， 4.02mmol) 加入 2-(7- 氨基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ( 甲基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (0.763g， 2.361mmol) 在 EtOH(20mL) 中的混合物中。该混合物室温下搅拌过夜。此混合物经饱和碳酸氢钠溶液 (50mL) 淬灭， 经水 (50mL) 稀释， 以 CH2Cl2(2×50mL) 萃取。其中的有机相以盐水 (50mL) 清洗及干燥 该粗产物进行硅胶快速层析 (flash chromatography)(2.5-5％的 (2M NH3 在 MeOH (Na2SO4)。 中 ) ∶ CH2Cl2)。浓缩收集的流分， 获得白色泡沫 (0.88g， 90％ )。1H NMR(CDCl3)δ7.85(s， 1H)， 7.44(s， 1H)， 6.74-6.69(m， 1H)， 6.62(d， J ＝ 7.5Hz， 1H)， 4.72(brs， 2H)， 3.64-3.60(m， 2H)， 3.41(s， 4H)， 3.04-3.01(m， 2H)， 2.92(s， 3H)， 1.45(s， 9H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 419， + 417(MH ， 100)。
N-(4-(2-( 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 呋 喃 -2- 甲 脒 ： 将 2-(7-( 呋 喃 -2- 甲 脒 基 )-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ( 甲基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (0.823g， 1.978mmol) 在 CH2Cl2(20mL) 中的溶液冷却至 0 ℃， 经 三氟乙酸 (5mL) 处理。此混合物在 0 ℃氩气氛下搅拌 2 小时。此混合物经 1N NaOH 溶液 (70mL) 淬灭， 移到分液漏斗中。此溶液以水 (50mL) 稀释及 CH2Cl2(2×50mL) 萃取。其中 的有机相以盐水 (50mL) 清洗、 干燥 (Na2SO4)。粗产物经浓缩， 进行硅胶快速层析 (flash chromatography)(5-15％的 (2M NH3 MeOH) ∶ CH2Cl2)。 浓缩收集的流分， 获得黄色粘稠油状 1 的化合物 20(0.47g， 76％ )。 H NMR(CDCl3)δ7.85(s， 1H)， 7.44-7.43(m， 1H)， 6.77-6.74(m， 2H)， 6.70(d， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 6.62(dd， J ＝ 2.4， 8.7Hz， 1H)， 3.59-3.56(m， 2H)， 3.47(s， 1H)， 3.40(t， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 3.05-3.01(m， 2H)， 2.81(t， J ＝ 6.3， 2H)， 2.48(s， 3H) ； ESI-MS(m/ + z，％ ) ： 319， 317(MH ， 96)， 260(100)。
N-(4-(2-( 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 呋 喃 -2- 甲脒二盐酸盐 ： 将 N-(4-(2-( 甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 呋喃 -2- 甲脒 (0.4353g， 1.376mmol) 溶于 MeOH(3mL)。室温下此溶液中加入在 乙醚中 (6.88mL， 6.88mmol) 的 1M HCl， 此反应在氩气氛下搅拌 5 分钟。此混合物经浓缩， 1 获 得 黄 色 固 体 (0.59g， 定 量 )。 H NMR(DMSO-d6)δ11.31(s， 1H)， 9.58(s， 1H)， 9.30(brs， 2H)， 8.82(s， 1H)， 8.57(s， 1H)， 7.98(s， 1H)， 7.30(d， J ＝ 1.2Hz， 1H)， 7.06-7.03(m， 2H)， 6.97(dd， J ＝ 2.4， 8.7Hz， 1H)， 3.74-3.63(m， 4H)， 3.13-3.05(m， 4H)， 2.58-2.55(m， 3H) ； + + ESI-MS(m/z， ％)： 319， 317(MH ， 游离碱， 100)， 260(98) ； HRMS 计算 C16H20N4OS(MH ， 游离碱 )，计算值 ： 317.1430， 观察值 ： 317.1417 ； HPLC 纯度 ： 99％ ( 以面积计 )。
实施例 21 ： N-(4-(3-( 吡咯烷 -1- 基 ) 丙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(21) 的合成
7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 ： 如实施例 11 中描述的步骤制备。
4-(3- 氯丙基 )-7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 ： 对 7- 硝基 -3， 4- 二 氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (1.0g， 5.10mmol) 及 1- 氯 -3- 碘丙烷 (1.075mL， 10.19mmol) 在 室温下以 50％ NaOH 溶液 (10mL) 处理， 再以溴化四丁基铵 (0.082g， CH2Cl2(10mL) 中的溶液， 0.255mmol) 处理。 所得混合物室温下搅拌过夜 (16 小时 )， 然后回流 4 小时。 此反应移至室 温， 以水 (50mL) 稀释， 产物经 CH2Cl2(3×25mL) 萃取。 合并的 CH2Cl2 层以盐水 (20mL) 清洗及 干燥 (Na2SO4)。蒸发溶剂， 粗产物经柱层析法纯化 (1 ∶ 4 至 2 ∶ 3 的 EtOAc ∶己烷 )， 获得 1 固体标题化合物 (0.65g， 47％ )。H NMR(CDCl3)δ7.96(d， 1H， J ＝ 2.7Hz)， 7.88(dd， 1H， J＝ 2.7， 9.3Hz)， 6.64(d， 1H， J ＝ 9.3Hz)， 3.84-3.80(m， 2H)， 3.65-3.60(m， 4H)， 3.05-3.02(m， + 2H)， 2.16-2.08(m， 2H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 273(MH ， 100)。
7- 硝基 -4-(3- 吡咯烷 -1- 基 ) 丙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 ： 对 4-(3- 氯丙基 )-7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (0.54g， 1.980mmol) 在干乙腈 (20mL) 中的溶液， 以吡咯烷 (1.637mL， 19.80mmol)、 碳酸钾 (2.74g， 19.80mmol)、 及碘化钾 (0.657g， 3.96mmol) 室温下处理。 所得混合物在 60℃搅拌过夜 (18 小时 )。 此反应移到室温， 以水 (50mL) 稀释， 此产物经乙酸乙酯 (2×25mL) 萃取。 合并的乙酸乙酯层以盐水 (20mL) 清 洗， 之后干燥 (Na2SO4)。 蒸发溶剂， 该粗产物经快速柱层析 (flash column chromatography) (5 ∶ 95 的 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ： CH2Cl2) 纯化获得浆状的标题化合物 (0.57g， 94 ％ )。1H
NMR(DMSO-d6)δ7.84-7.80(m， 2H)， 6.87(d， 1H， J ＝ 9.6Hz)， 3.79-3.75(m， 2H)， 3.49(t， 2H， J ＝ 6.9Hz)， 3.08-3.05(m， 2H)， 2.44-2.40(m， 6H)， 1.76-1.69(m， 6H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： + 308(MH ， 100)。
4-(3-( 吡咯烷 -1- 基 ) 丙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 胺 ： 对 7- 硝 基 -4-(3- 吡咯烷 -1- 基 ) 丙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (0.55g， 1.789mmol) 在干甲醇 (10mL) 中的溶液， 室温下以水合肼 (hydrazine hydrate)(0.652mL， 17.89mmol) 处理， 再以雷尼镍 (Raney-Nickel)(0.1g， 1.789mmol) 处理。所得混合物利用预热的油浴搅 拌回流 5 分钟。 此反应随后移至室温， 经 Celite 垫过滤， 以甲醇 (3×10mL) 清洗。 合并的甲 醇层经蒸发， 粗产物以快速柱层析 (flash column chromatography)(5 ∶ 95 的 (2M NH3 在1 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2) 纯化， 获得浆状的标题产物 (0.45g， 91％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ6.51(d， 1H， J ＝ 9.3Hz)， 6.26-6.23(m， 2H)， 4.41(s， 2H)， 3.37-3.30(m， 2H， 并入水峰 )， 3.11(t， 2H， J ＝ 6.9Hz)， 2.98-2.95(m， 2H)， 2.42-2.37(m， 6H)， 1.67-1.60(m， 6H)。
N-(4-(3-( 吡咯烷 -1- 基 ) 丙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒 ： 对 4-(3-( 吡咯烷 -1- 基 ) 丙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 胺 (0.43g， 1.550mmol) 在干乙醇 (15mL) 中的溶液， 以噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (0.884g， 3.10mmol) 室温下处理， 所得的混合物 搅拌过夜 (18 小时 )。此反应经饱和 NaHCO3 溶液 (30mL) 稀释， 该产物以 CH2Cl2(3×20mL) 萃取。合并的 CH2Cl2 层以盐水 (20mL) 清洗， 然后干燥 (Na2SO4)。蒸发溶剂， 粗产物以柱 层 析 (5 ∶ 95 的 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2) 纯 化， 获 得 固 体 的 标 题 产 物 21(0.51g， 1 85％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.68(d， 1H， J ＝ 4.5Hz)， 7.55(d， 1H， J ＝ 5.1Hz)， 7.06(dd， 1H， J ＝ 3.6， 4.9Hz)， 6.70(d， 1H， J ＝ 8.7Hz)， 6.52-6.44(m， 2H)， 6.32(brs， 2H)， 3.51-3.48(m， 2H)， 3.27(t， 2H， J ＝ 7.2Hz)， 3.04-3.00(m， 2H)， 2.48-2.40(m， 6H)， 1.80-1.60(m， 6H) ； + ESI-MS(m/z，％ ) ： 387(MH ， 68)， 276(100)， 194(75) ； HPLC 纯度 ： 98.32％ ( 以面积计 )。
N-(4-(3-( 吡咯烷 -1- 基 ) 丙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒二盐酸盐 ： 对 N-(4-(3-( 吡咯烷 -1- 基 ) 丙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b] [1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (0.48g， 1.242mmol) 在干甲醇 (10mL) 中的溶液， 室温 下以盐酸 (1M 溶液在乙醚中 ； 3.72mL， 3.72mmol) 处理， 所得混合物搅拌 15 分钟。然后蒸 发溶剂， 将该产物在真空下干燥， 获得固体的二盐酸盐 (0.55g， 96 ％ )。1H NMR(DMSO-d6) δ11.34(brs， 1H)， 11.28(s， 1H)， 9.68(s， 1H)， 8.69(s， 1H)， 8.16-8.12(m， 2H)， 7.35(t， 1H， J ＝ 4.2Hz)， 3.66-3.60(m， 2H)， 3.50-3.40(m， 4H)， 3.16-3.05(m， 4H)， 3.02-2.92(m， 2H)， + 2.06-1.84(m， 2H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 387(MH ， 游离碱， 92)， 276(87)， 194(100) ； ESI-HRMS + 计算 C20H27N4S2(MH ， 游离碱 )， 计算值 ： 387.1671， 观察值 ： 387.1659 ； HPLC 纯度 ： 98.58％ ( 以 面积计 )。
实 施 例 22 ： N-(4-(3-( 二 甲 基 氨 基 ) 丙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(22) 的合成
4-(3- 氯丙基 )-7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 ： 如实施例 21 中描 述的步骤制备。N， N- 二甲基 -3-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 丙烷 -1- 胺 ： 对 4-(3- 氯丙基 )-7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (0.7g， 2.57mmol)、 二甲基胺 (2M 溶液在 THF 中 )(2.57mL， 5.13mmol)、 碘化钾 (0.426g， 2.57mmol)、 及碳酸钾 (1.773g， 12.83mmol) 在干乙腈 (20mL) 中的溶液， 在密封管中 80 ℃下搅拌 6 小时。然后此反应移 到室温， 经水 (60mL) 稀释， 此产物经乙酸乙酯 (3×20mL) 萃取。合并的乙酸乙酯层以盐 水 (20mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)。蒸发溶剂， 粗产物以硅胶柱层析法纯化 (1 ∶ 9(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)， 获得稠浆状标题产物 (0.3g， 42％ )。1H NMR(DMSO-d6)δ7.85-7.80(m， 2H)， 6.85(d， 1H， J ＝ 8.7Hz)， 3.77(t， 2H， J ＝ 5.1Hz)， 3.47(t， 2H， J ＝ 7.2Hz)， 3.06(t， 2H， J ＝ 5.1Hz)， 2.24(t， 2H， J ＝ 6.6Hz)， 2.14(s， 6H)， 1.75-1.65(m， 2H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： + 282(MH ， 100)。
4-(3-( 二甲基氨基 ) 丙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 胺 ： N N- 二 甲基 -3-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 丙烷 -1- 胺 (0.27g， 0.960mmol) 在干甲醇 (10mL) 中的溶液， 室温下以水合肼 (hydrazine hydrate)(0.349mL， 9.60mmol) 处 理， 再以雷尼镍 (Raney-Nickel)(0.1g， 0.096mmol) 处理。所得混合物在预热的油浴中回 流 5 分钟。此反应移至室温， 经 Celite 垫过滤， 以甲醇 (3×10mL) 清洗。合并的甲醇层经 蒸发， 粗产物以快速柱层析 (flash column chromatography)(5 ∶ 95 的 (2M NH3 在 MeOH 1 中 ) ∶ CH2Cl2) 纯化， 获得浆状的标题产物 (0.24g， 99％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ6.50(dd， 1H， J ＝ 2.4， 7.0Hz)， 6.26-6.23(m， 2H)， 4.41(s， 2H)， 3.32-3.30(m， 2H)， 3.09(t， 2H， J ＝ 7.2Hz)， 2.98-2.95(m， 2H)， 2.21(t， 2H， J ＝ 6.9Hz)， 2.11(s， 6H)， 1.63-1.54(m， 2H) ； ESI-MS(m/ + z，％ ) ： 252(MH ， 100)。
N-(4-(3-( 二甲基氨基 ) 丙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒 ： 对 4-(3-( 二甲基氨基 ) 丙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 胺 (0.22g， 0.875mmol) 在干乙醇 (10mL) 中的溶液， 以噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (0.499g， 1.750mmol) 室温下处理， 所得的混合物 搅拌过夜 (18 小时 )。此反应经饱和 NaHCO3 溶液 (25mL) 稀释， 该产物以 CH2Cl2(3×20mL) 萃取。合并的 CH2Cl2 层以盐水 (15mL) 清洗， 然后干燥 (Na2SO4)。蒸发溶剂， 粗产物以硅胶 柱层析 (5 ∶ 95 的 (2MNH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2) 纯化， 获得固体的标题产物 22(0.27g， 1 86％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.68(d， 1H， J ＝ 3.0Hz)， 7.56(d， 1H， J ＝ 5.1Hz)， 7.06(dd， 1H， J ＝ 3.9， 4.8Hz)， 6.69(d， 1H， J ＝ 8.7Hz)， 6.52-6.45(m， 2H)， 6.33(brs， 2H)， 3.51-3.48(m， 2H)， 3.25(t， 2H， J ＝ 7.2Hz)， 3.04-3.01(m， 2H)， 2.25(t， 2H， J ＝ 6.9Hz)， 2.14(s， 6H)， + 1.70-1.61(m， 2H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 361(MH ， 93)， 276(100) ； HPLC 纯度 ： 98.23 ％ ( 以面 积计 )。
N-(4-(3-( 二甲基氨基 ) 丙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒二盐酸盐 ： 对 N-(4-(3-( 二甲基氨基 ) 丙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (0.16g， 0.444mmol) 在干甲醇 (5mL) 中的溶液， 室温下以盐 酸 (1M 溶液在乙醚中 ； 1.331mL， 1.331mmol) 处理。混合物搅拌 15 分钟， 蒸发溶剂， 将残 1 余物在高真空下干燥， 获得固体的标题产物 (0.19g， 99％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ11.22(s， 1H)， 10.91(brs， 1H)， 9.67(s， 1H)， 8.69(s， 1H)， 8.15-8.11(m， 2H)， 7.36(t， 1H， J ＝ 4.5Hz)， 7.04-6.88(m， 3H)， 3.64-3.61(m， 2H)， 3.41(t， 2H， J ＝ 6.9Hz)， 3.14-3.02(m， 4H)， 2.72(d，6H， J ＝ 4.8Hz)， 2.06-1.98(m， 2H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 361(MH+， 游 离 碱， 91)， 276(100) ； + ESI-HRMS 计算 C18 H25N4S2(MH ， 游离碱 )， 计算值 ： 361.1515， 观察值 ： 361.1515 ； HPLC 纯度 ： 98.15％ ( 以面积计 )。
实 施 例 23 ： N-(4-(3-( 甲 基 氨 基 ) 丙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(23) 的合成
4-(3- 氯丙基 )-7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 ： 如实施例 21 中描 述的步骤制备。
N- 甲 基 -3-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 丙 烷 -1- 胺 ： 对 4-(3- 氯丙基 )-7- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (1.1g， 4.03mmol)、 甲胺盐酸 盐 (0.545g， 8.07mmol)、 碘化钾 (0.669g， 4.03mmol)、 及碳酸钾 (2.79g， 20.16mmol) 在干乙 腈 (25mL) 中的溶液， 在密封管中 80 ℃下搅拌 6 小时。此反应移到室温， 以水 (100mL) 稀 释， 此产物经乙酸乙酯 (3×25mL) 萃取。合并的乙酸乙酯层以盐水 (20mL) 清洗， 及干燥 (Na2SO4)。蒸发溶剂， 该粗产物经硅胶柱的快速柱层析 (flash column chromatography)
(1 ∶ 9 的 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2) 纯化， 获得稠浆状的标题化合物 (0.8g， 74％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.84-7.81(m， 2H)， 6.86(d， 1H， J ＝ 9.9Hz)， 3.78-3.75(m， 2H)， 3.50(t， 2H， J ＝ 7.5Hz)， 3.08-3.04(m， 2H)， 2.48(t， 2H， J ＝ 6.9Hz)， 2.27(s， 3H)， 1.74-1.64(m， 2H) ； + ESI-MS(m/z，％ ) ： 268(MH ， 100)。
甲基 3-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 丙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ： 对 N- 甲基 -3-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 丙烷 -1- 胺 (0.77g， 2.88mmol) 在干 1， 4- 二噁烷 (20mL) 中的溶液， 室温下加入三乙胺 (1.214mL， 8.64mmol)， 之后加入二 碳酸二叔丁酯 (0.736mL， 3.17mmol) 处理。此反应搅拌 4 小时。然后蒸发溶剂， 粗产物进行1硅胶柱快速层析 (flash chromatography)(1 ∶ 1 的 EtOAc ∶己烷 ) 纯化， 获得黄色固体的 1 标题产物 (1.02g， 96％ )。 H NMR(CDCl3)δ7.97(d， 1H， J ＝ 2.4Hz)， 7.88(dd， 1H， J ＝ 2.7， 9.3Hz)， 6.56(d， 1H， J ＝ 9.3Hz)， 3.79-3.76(m， 2H)， 3.41(t， 2H， J ＝ 7.8Hz)， 3.31(t， 2H， J＝ 6.9Hz)， 3.04-3.00(m， 2H)， 2.88(s， 3H)， 1.92-1.82(m， 2H)， 1.46(s， 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： + 390(M+Na， 56)， 368(MH ， 10)， 312(60)， 268(100)。
3-(7- 氨 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 丙 基 ( 甲 基 ) 氨 基 甲 酸 叔 丁酯 ： 对 甲 基 3-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 丙 基 ) 氨 基 甲 酸 叔 丁 酯 (0.6g， 1.633mmol) 在 干 甲 醇 (10mL) 中 的 悬 浮 液， 室 温 下 以 雷 尼 镍 (Raney-Nickel) (0.1g， 1.633mmol)， 之 后 加 入 水 合 肼 (hydrazine hydrate)(0.595mL， 16.33mmol) 处 理。 所得混合物浸入预热的油浴， 回流 10 分钟。此反应然后移到室温， 经 Celite 垫过滤， 并经甲醇 (3×10mL) 清洗。蒸发合并的甲醇层， 该粗产物经硅胶快速柱层析法 (flash chromatography) 纯化 (5 ∶ 95 的 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)， 获得棕色浆状的标题产 1 物 (0.55g， 定量 )。 H NMR(DMSO-d6)δ6.46(d， 1H， J ＝ 9.6Hz)， 6.25-6.21(m， 2H)， 4.44(s， 2H)， 3.32-3.28(m， 2H)， 3.19(t， 2H， J ＝ 6.9Hz)， 3.04(t， 2H， J ＝ 7.2Hz)， 3.00-2.97(m， 2H)， + 2.77(s， 3H)， 1.74-1.62(m， 2H)， 1.38(s， 9H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 338(MH ， 100)， 337(96)， 282(54)。
甲 基 (3-(7-( 噻 吩 -2- 甲 脒 基 (carboximidamido))-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 丙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ： 对 3-(7- 氨基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 丙基 ( 甲基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (0.52g， 1.541mmol) 在干乙醇 (20mL) 中的溶液， 室温下以 噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 盐酸盐 (0.879g， 3.08mmol) 处理并搅拌过夜 (18 小时 )。此反应以饱和 NaHCO3 溶液 (50mL) 碱化， 此产物以 CH2Cl2(2×25mL) 萃取。合并的 CH2Cl2 层以盐水 (20mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)。蒸发溶剂， 该 粗产物进行硅胶柱层析 (2 ∶ 98 的 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2) 纯化， 获得固体的标题 + 产物 (0.60g， 87％ )。ESI-MS(m/z，％ ) ： 447(MH ， 100)。
N-(4-(3-( 甲 基 氨 基 ) 丙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒 ： 对甲基 (3-(7-( 噻吩 -2- 甲脒基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 丙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (0.55g， 1.231mmol) 在 3M 盐酸 (25mL) 中的悬浮液， 回流 1 小时。 此反应移 到室温过滤， 以水 (2×10mL) 清洗。 蒸发合并的水层。 粗产物以 3M NaOH 溶液 (50mL) 碱化， 产物经 CH2Cl2(3×20mL) 萃取。合并的 CH2Cl2 层以盐水 (15mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)。蒸发 有机溶剂， 该粗产物进行硅胶柱层析 (5 ∶ 95 至 1 ∶ 9 的 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2) 纯 1 化， 获得固体的标题产物 23(0.4g， 94％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.68(dd， 1H， J ＝ 1.2， 3.7Hz)， 7.56(dd， 1H， J ＝ 0.9， 5.1Hz)， 7.06(dd， 1H， J ＝ 3.6， 4.9Hz)， 6.70(d， 1H， J ＝ 8.7Hz)， 6.51-6.44(m， 2H)， 6.31(s， 2H)， 3.50-3.47(m， 2H)， 3.32-3.25(m， 4H)， 3.04-3.01(m， 2H)， + 2.27(s， 3H)， 1.70-1.61(m， 2H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 347(MH ， 80)， 276(100) ； HPLC 纯 度 ： 96.05％ ( 以面积计 )。
N-(4-(3-( 甲 基 氨 基 ) 丙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒二盐酸盐 ： 对 N-(4-(3-( 甲基氨基 ) 丙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (0.37g， 1.068mmol) 在干甲醇 (10mL) 中的溶液， 以盐酸 (1M 在乙 醚中 )(3.20mL， 3.20mmol) 处理， 搅拌 15 分钟。 蒸发溶剂， 粗产物在高真空下干燥， 获得固体的二盐酸盐 (0.44g， 98％ )。1H NMR(DMSO-d6)δ11.22(s， 1H)， 9.66(s， 1H)， 9.19(brs， 2H)， 8.69(s， 1H)， 8.15-8.12(m， 2H)， 7.35(t， 1H， J ＝ 4.2Hz)， 7.04-6.89(m， 3H)， 3.64-3.61(m， 2H)， 3.44(t， 2H， J ＝ 6.9Hz)， 3.10-3.07(m， 2H)， 2.96-2.86(m， 2H)， 2.53(t， 3H， J ＝ 5.7Hz)， + 1.98-1.86(m， 2H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 347(MH ，游 离 碱， 65)， 276(100) ； ESI-HRMS 计 算 + C17H23N4S2(MH ， 游离碱 )， 计算值 ： 347.1358， 观察值 ： 347.1345 ； HPLC 纯度 ： 96.11％ ( 以面积 计 )。
实 施 例 24 ： N-(4-(2-( 乙 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(24) 的合成
2-(2- 氨 基 -4- 硝 苯 基 硫 基 ) 乙 醇 ： 在 2- 氯 -5- 硝 基 苯 胺 (1.0g， 5.79mmol) 在 DMF(10mL) 中 的 搅 拌 溶 液， 加 入 碳 酸 钾 (1.60g， 11.59mmol)， 之 后 加 入 2- 巯 基 乙 醇 (2-mercaptoethanol)(0.813mL， 11.59mmol)。所得混合物之后在 60 ℃加热 2 小时， 然后 在室温下过夜。该混合物之后以乙酸乙酯稀释， 经水 (3×)、 1N NaOH、 盐水清洗。干燥有 机 相、 过 滤 及 浓 缩， 获 得 红 / 橘 色 固 体 (1.19g， 96 ％ )。1H NMR(DMSO-d6)δ7.52(s， 1H)， 7.42-7.33(m， 2H)， 5.79(s， 2H)， 4.99(t， J ＝ 5.4Hz， 1H)， 3.55(q， J ＝ 6.2Hz， 2H)， 3.02(t， J ＝ 6.6Hz， 2H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 215(MH+， 23)， 169(100)， 111(63)。
2-(2- 碘 乙 基 硫 基 )-5- 硝 基 苯 胺 ： 对 三 苯 基 膦 (1.81g， 6.93mmol) 及 咪 唑 (1.887mL， 13.86mmol) 在 THF(15mL) 中的搅拌溶液， 在 0℃加入碘 (1.759g， 6.93mmol)。搅 拌 5 分钟后， 加入 2-(2- 氨基 -4- 硝苯基硫基 ) 乙醇 (990mg， 4.62mmol) 在 THF(5mL) 中的溶 液。 所得混合物在 0℃搅拌 1 小时， 然后以乙酸乙酯稀释， 以水 (3×) 及盐水清洗。 干燥有机 层， 过滤及浓缩， 然后在 4 ∶ 1 的己烷∶乙酸乙酯层析， 获得橘色固体的所需化合物 (1.18g， 79％ )。1H NMR(DMSO-d6)δ7.55(d， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 7.45(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 7.34(dd， J＝ + 8.4， 2.4Hz， 1H)， 5.89(brs， 2H)， 3.38-3.26(m， 4H) ； EI-MS(m/z，％ ) ： 324(M ， 46)， 196(81)， 154(100)， 126(95)。
6- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 ： 对 2-(2- 碘乙基硫基 )-5- 硝基苯胺 (1.18g， 3.64mmol) 在 DMF(10mL) 中的搅拌溶液， 加入碳酸钾 (1.006g， 7.28mmol)。 所得混合 物然后在 90℃搅拌 1 小时。此混合物之后冷却至室温， 以水 (40mL) 稀释。所得红色沉淀物
1 经真空过滤收集， 获得标题化合物 (625mg， 87％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.38(s， 1H)， 7.28(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 7.12(d， J ＝ 8.7Hz， 6.78(brs， 1H)， 3.56-3.49(m， 2H)， 3.08-3.03(m， 2H) ； + EI-MS(m/z，％ ) ： 196(M ， 100)， 181(45)， 122(73)。
2- 氯 -1-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone) ： 对 6- 硝 基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (620mg， 3.16mmol) 在 THF(10mL) 中的搅拌溶液， 加 入 2- 氯乙酰氯 (0.277mL， 3.48mmol)。所得混合物之后在 60℃搅拌 10 分钟。混合物之后 以乙酸乙酯稀释， 经水 (3×)、 1 ∶ 1 的水∶饱和碳酸钠、 及盐水清洗。干燥有机相， 过滤及 1 浓缩， 获得标题产物 (860mg， 100％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ8.36(d， J ＝ 2.1Hz， 1H)， 7.96(dd， J ＝ 8.7， 2.1Hz， 1H)， 7.52(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 4.63(s， 2H)， 3.99-3.92(m， 2H)， 3.39-3.33(m， + 2H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 295(M+Na， 68)， 273(MH ， 100)， 197(43)。
2-( 乙氨基 )-1-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone) ： 对 2- 氯 -1-(6- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 酮 (ethanone)(855mg， 3.14mmol) 在二噁烷 (15mL) 及三乙基胺 (0.881mL， 6.27mmol) 中的搅拌溶液， 加入乙胺 (ethanamine) 盐酸盐 (1.278g， 15.68mmol) 在水 (7.50mL) 中的溶液。所得混合物室温下 强力搅拌一个周末。然后以水稀释该混合物， 以二氯甲烷萃取 (2×)。干燥合并的有机层， 过滤、 浓缩， 然后以 1 ∶ 9 的 (2M NH3 在甲醇中 ) ∶乙酸乙酯层析， 获得所需产物 (775mg， 1 88％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ8.37(d， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 7.93(dd， J ＝ 8.7， 2.4Hz， 1H)， 7.50(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 3.97-3.90(m， 2H)， 3.52(s， 2H)， 3.37-3.33(m， 2H)， 2.58-2.50(m， 2H)， + 2.07(brs， 1H)， 1.00(t， J ＝ 7.0Hz， 3H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 282(MH ， 100)。
乙基 (2-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 )-2- 氧代乙基 ) 氨基甲酸 叔丁酯 ： 对 2-( 乙氨基 )-1-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone) (770mg， 2.74mmol) 在二噁烷 (10mL) 及三乙胺 (0.769mL， 5.47mmol) 中的搅拌溶液， 加入 二碳酸二叔丁酯 (627mg， 2.87mmol)。所得混合物在室温下搅拌 30 分钟。该混合物然后 以乙酸乙酯稀释， 依序以水及 1 ∶ 1 的水与盐水混合物清洗。干燥有机相， 过滤及浓缩， 获 1 得 淡 黄 色 固 体 (1.02g， 98 ％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ8.33(s， 1H)， 7.94(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 7.51(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 4.18(s， 2H)， 3.96-3.89(m， 2H)， 3.32-3.19(m， 4H)， 1.38， 1.30(2s， + 9H)， 1.09-1.00(m， 3H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 404(M+Na， 51)， 382(MH ， 36)， 282(100)。
乙基 (2-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁 酯： 对乙基 (2-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 )-2- 氧代乙基 ) 氨基甲酸叔 丁酯 (1.01g， 2.65mmol) 在四氢呋喃 (5mL) 中的搅拌溶液， 加入硼烷 - 四氢呋喃复合物 (1M 在四氢呋喃中 ； 7.94mL， 7.94mmol)。所得混合物在室温下搅拌 2 小时。该混合物经缓慢逐 滴加入 MeOH(5mL)( 防止过度起泡 ) 而淬灭。该淬灭的反应物之后以乙酸乙酯稀释， 以水 (2×) 及饱和碳酸钠 (2×) 清洗。 干燥有机相， 过滤及浓缩， 获得红 - 橘色油 (925mg， 95％ )。 1 H NMR(DMSO-d6)δ7.59-7.41(m， 1H)， 7.39-7.32(m， 1H)， 7.24-7.13(m， 1H)， 3.69-3.62(m， 2H) ， 3.58-3.48(m ， 2H) ， 3.45-3.35(m ， 2H) ， 3.28-3.16(m ， 2H) ， 3.15-3.08(m ， 2H) ， 1.32 ， + 1.24(2s， 9H)， 1.04(t， J ＝ 6.9Hz， 3H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 390(M+Na， 70)， 368(MH ， 12)， 312(47)， 268(100)。
2-(6- 氨基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ( 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ： 对乙基 (2-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (925mg，2.52mmol) 在乙醇 (10mL) 中的搅拌溶液， 加入雷尼镍 ( ～ 148mg， 2.52mmol)， 之后加入水合 肼 (hydrazine hydrate)(1.225mL， 25.2mmol)。所得混合物在 50℃强力搅拌 10 分钟。混 合物然后冷却至室温， 以乙酸乙酯稀释， 然后依序以 1 ∶ 1 的水与饱和碳酸钠混合物 (3×) 及饱和碳酸钠清洗。干燥该有机相， 过滤及浓缩， 获得红色油 (810mg， 95 ％ ) ； ESI-MS(m/ + z，％ ) ： 338(MH ， 100)， 282(53)， 238(36)。
乙基 (2-(6- 噻吩 -2- 甲脒基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨 基甲酸叔丁酯 ： 对 2-(6- 氨基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ( 乙基 ) 氨基 甲酸叔丁酯 (800mg， 2.371mmol) 在乙醇 (8mL) 中的搅拌溶液， 加入噻吩 -2- 亚胺亚甲基 硫 甲 酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘 酸 盐 (1.014g， 3.56mmol)。 所 得 混 合物室温下搅拌 3 小时。该混合物之后以乙酸乙酯稀释， 经饱和碳酸钠 (3×) 清洗。干 燥有机相， 过滤及浓缩， 之后以 1 ∶ 1 的己烷∶乙酸乙酯层析， 获得所需产物 (415mg， 1 39.2％ )。H NMR(DMSO-d6)δ7.70(d， J ＝ 3.0Hz， 1H)， 7.58(d， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 7.49-7.44(m， 1H)， 7.07(t， J ＝ 4.4Hz， 1H)， 6.84(d， J ＝ 7.8Hz， 1H)， 6.35-6.26(m， 2H)， 6.08(d， J ＝ 7.5Hz， 1H)， 3.64-3.49(m， 2H)， 3.45-3.25(m， 4H)， 3.24-3.12(m， 2H)， 3.01-2.85(m， 2H)， + 1.39-1.29(m， 9H)， 1.02(t， J ＝ 6.9Hz， 3H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 447(MH ， 100)。
N-(4-(2-( 乙 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻 吩 -2- 甲 脒 ： 对 乙 基 2-(6- 噻 吩 -2- 甲 脒 基 )-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (410mg， 0.918mmol) 在甲醇 (6mL) 中的搅拌悬浮液， 加入 3NHCl 溶液 (3.06mL， 9.18mmol)。所得混合物在 90℃搅拌 30 分钟。该混合物然后通过 0.45μM 注射 器过滤器， 滤过物在真空下浓缩至干泡沫。残余物之后在 1 ∶ 1 的水∶饱和碳酸钠与二氯 甲烷之间分层。分离有机层， 水相再次以二氯甲烷萃取。干燥有机相， 过滤及浓缩， 然后在 1 ∶ 4 ∶ 5 的 (2M NH3 在甲醇中 ) ∶乙酸乙酯∶二氯甲烷中层析， 获得所需产物 24(135mg， 1 42.4 ％ ). H NMR(DMSO-d6)δ7.71(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 7.58(d， 5.1Hz， 1H)， 7.08(t， J ＝ 4.4Hz， 1H)， 6.82(d， J ＝ 7.8Hz， 1H)， 6.33(brs， 2H)， 6.21(s， 1H)， 6.07(dd， J ＝ 8.1， 1.5Hz， 1H)， 3.63-3.57(m， 2H)， 3.33-3.28(m， 2H)， 3.01-2.96(m， 2H)， 2.71-2.65(m， 2H)， 2.53(q， J + ＝ 7.0Hz， 2H)， 1.66(brs， 1H)， 1.17(t， J ＝ 7.0Hz， 3H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 347(MH ， 83)， + 276(100) ； HRMS 计算 C17H23N4S2(MH )， 计算值 ： 347.1358， 观察值 ： 347.1346 ； HPLC 纯度 ： 97％ ( 以面积计 )。
N-(4-(2-( 乙 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒二盐酸盐 ： 对 N-(4-(2-( 乙基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (131mg， 0.378mmol) 在甲醇 (2mL) 中的溶液， 加入盐酸 (1M 在二乙 醚中 ； 1.134mL， 1.134mmol)。所得混合物在真空下浓缩， 获得橘色固体 (159mg， 100％ )。1H NMR(DMSO-d6)δ11.43(s， 1H)， 9.72(s， 1H)， 9.22(brs， 2H)， 8.73(s， 1H)， 8.18-8.12(m， 2H)， 7.38-7.34(m， 1H)， 7.14-7.05(m， 2H)， 6.64-6.60(m， 1H)， 3.70-3.61(m， 4H)， 3.16-3.02(m， + 4H)， 2.99-2.88(m， 2H)， 1.21(t， J ＝ 7.2Hz， 3H) ； HRMS(C17H23N4S2， MH ， 游离碱 ) ： 计算值 ： 347.1358， 观察值 ： 347.1346.HPLC 纯度 ： 97％ ( 以面积计 )。
实施例 25 ： N-(4-(2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(25) 的合成
2- 氯 -1-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone) ： 如实 施例 24 中描述的步骤制备。
1-(6- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 )-2-( 吡 咯 烷 -1- 基 ) 乙 酮 (ethanone) ： 对 2- 氯 -1-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone) (685mg， 2.51mmol) 在二噁烷 (10mL) 中的搅拌溶液， 冷却至 0 ℃， 加入 1M 在二乙醚中的 HCl(2.51mL， 2.51mmol)， 之后滴入吡咯烷 (0.21mL， 2.51mmol)。所得混合物在 0 ℃搅拌 5 分钟， 之后温热至室温， 搅拌过夜。此时加入额外的吡咯烷 (0.21mL， 2.51mmol)， 之后加水 (1mL) 帮助溶解。 室温下搅拌 1 小时后， 该混合物以乙酸乙酯稀释， 饱和碳酸钠、 水 (3×)、 及 1 获得黄色 / 橘色油 (756mg， 98％ ). H NMR(DMSO-d6) 盐水清洗。 干燥该有机相、 过滤、 及浓缩， δ8.52(brs， 1H)， 7.93(dd， J ＝ 9.0， 1.6Hz， 1H)， 7.49(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 4.01-3.91(m， 4H)， 3.56(s， 2H)， 3.45-3.35(m， 2H)， 2.55-2.50(m， 2H)， 2.22-2.14(m， 4H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： + 308(MH ， 100)。
6- 硝基 -4-(2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 ： 对 1-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 )-2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙酮 (ethanone) (750mg， 2.440mmol) 在四氢呋喃 (5mL) 中的搅拌溶液， 加入硼烷 - 四氢呋喃复合物 (1M 在 四氢呋喃中 ； 7.32mL， 7.32mmol)。所得混合物在 55 ℃搅拌过夜。之后将该反应混合物冷 却至室温， 缓慢滴加甲醇 (5mL) 小心淬灭该混合物。该淬灭的混合物之后在 55 ℃搅拌过 夜。此时将此反应释出于大气下。之后在硅胶柱浓缩及层析该混合物， 以 1 ∶ 4 ∶ 5 的 (2M NH3 在甲醇中 ) ∶乙酸乙酯∶二氯甲烷洗脱， 获得红色油状的所需产物 (654mg， 91％ )。1H NMR(DMSO-d6)δ7.46(d， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 7.36(dd， J ＝ 8.4， 2.1Hz， 1H)， 7.19(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 3.69-3.65(m， 2H)， 3.50(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 3.14-3.10(m， 2H)， 2.63(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， + 2.56-2.51(m， 2H)， 1.71-1.66(m， 4H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 294(MH ， 100)。
N-(4-(2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 ： 对 6- 硝基 -4-(2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (649mg， 2.212mmol) 在乙醇 (5mL) 中的搅拌溶液， 加入活性碳上 10wt. ％钯 (235mg， 0.221mmol)， 形成乙醇 (5mL) 中的悬浮液。将所得悬浮液在氢气氛 ( 气囊压力 ) 下搅拌 3 小时 ( 黄色消失 )。移除该气囊， 该混合物中加入噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (1.262g， 4.42mmol)。所得混合物在室温下氩 气中搅拌过夜。之后以二氯甲烷稀释混合物， 经 Celite 过滤。该滤过物之后以饱和碳酸 钠稀释， 及二氯甲烷 (2×) 萃取。合并的有机物经干燥、 过滤、 浓缩， 之后在 1 ∶ 19 的 (2M NH3 在甲醇中 ) ∶乙酸乙酯中层析， 获得所需产物 25(438mg， 53.1 ％ )。1H NMR(DMSO-d6) δ7.71(d， J ＝ 3.3Hz， 1H)， 7.58(d， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 7.10-7.06(m， 1H)， 6.83(d， J ＝ 8.1Hz，
1H) ， 6.38(brs ， 2H) ， 6.19(s ， 1H) ， 6.08(d ， J ＝ 1H) ， 3.63-3.58(m ， 2H) ， 3.40-3.33(m ， 2H)， 3.01-2.97(m， 2H)， 2.61(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 2.49-2.42(m， 4H)， 1.70-1.61(m， 4H) ； + + ESI-MS(m/z， ％)： 373(MH ， 62)， 276(100) ； HRMS 计算 C19H25N4S2(MH )， 计算值 ： 373.1515， 观 察值 ： 373.1512 ； HPLC 纯度 ： 97％ ( 以面积计 )。
N-(4-(2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒二盐酸盐 ： 对 N-(4-(2-( 吡咯烷 -1- 基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b] [1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻 吩 -2- 甲 脒 (424mg， 1.138mmol) 在 甲 醇 (4mL) 中 的 溶 液， 加入盐 酸 (1M 在二乙醚中 ； 3.41mL， 3.41mmol)。该混合物真空中浓缩， 获得橘色固体 (507mg， 1 100 ％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ11.60-11.40(m， 2H)， 9.75(s， 1H)， 8.78(s， 1H)， 8.22-8.10(m， 2H)， 7.36(t， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 7.15-7.05(m， 2H)， 6.64(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 3.80-3.71(m， 2H)， 3.70-3.61(m， 2H)， 3.58-3.45(m， 2H)， 3.43-3.30(m， 2H)， 3.16-3.07(m， 2H)， 3.06-2.95(m， + 2H)， 2.05-1.92(m， 2H)， 1.90-1.79(m， 2H) ； HRMS(C19H25N4S2， MH ， 游 离 碱 ) ：计 算 值 ： 373.1515， 观察值 ： 373.1512。HPLC 纯度 ： 97％ ( 以面积计 )。
实施例 26 ： N-(4-(2-(2- 羟基乙氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(26) 的合成
6- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 ： 如实施例 24 中描述的步骤制备。
2-(2- 羟 基 乙 氨 基 )-1-(6- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 酮 (ethanone) ： 对 6- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (500mg， 2.55mmol) 在四氢呋喃 (10mL) 中的搅拌溶液， 加入 2- 氯乙酰氯 (302mg， 2.68mmol)。所得混合物在 60℃搅拌 5 分 钟。此反应会先变成混浊再变澄清。此时， 此反应冷却至 0℃， 同时向反应中逐滴加入盐酸 (4M 在二噁烷中 ； 5.10mL， 20.38mmol) 及 2- 氨基乙醇 (1.868g， 30.6mmol)。 所得混合物温热 至室温， 加入水 (5mL) 帮助溶解。然后在 60℃搅拌混合物 3 小时。之后以水及饱和碳酸钠 稀释混合物， 以二氯甲烷 (5×) 萃取。合并的有机层经干燥、 过滤、 浓缩， 然后在 1 ∶ 4 ∶ 5 的 (2M NH3 在甲醇中 ) ∶乙酸乙酯∶二氯甲烷中层析， 获得淡黄色固体的所需产物 (473mg， 1 62.4％ )。H NMR(DMSO-d6)δ8.36(d， J ＝ 2.1Hz， 1H)， 7.93(dd， J ＝ 8.7， 2.1Hz， 1H)， 7.50(d，
J ＝ 9.0Hz， 1H)， 4.50(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 3.96-3.90(m， 2H)， 3.56(s， 2H)， 3.48-3.40(m， 2H)， 3.32-3.26(m， 2H)， 2.58(t， J ＝ 5.0Hz， 2H)， 2.18-2.08(brs， 1H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： + 298(MH ， 100)。
2- 羟基乙基 (2-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 )-2- 氧代乙基 ) 氨 基甲酸叔丁酯 ： 对 2-(2- 羟基乙氨基 )-1-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone)(470mg， 1.581mmol) 在二噁烷 (10mL) 及三乙胺 (0.444mL， 3.16mmol) 中的 搅拌溶液， 加入二碳酸二叔丁酯 (362mg， 1.660mmol)。所得混合物在室温下搅拌 30 分钟。 此混合物然后以乙酸乙酯稀释， 经 1 ∶ 1 的水及饱和碳酸钠混合物清洗 3 次。该有机相经 1 干燥、 过滤、 及浓缩， 获得淡黄色泡沫 (625mg， 99％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ8.35-8.30(m， 1H)， 7.99-7.91(m， 1H)， 7.56-7.48(m， 1H)， 4.67-4.59(m， 1H)， 4.26-4.21(m， 2H)， 3.96-3.88(m， 2H) ， 3.51-3.43(m ， 2H) ， 3.31-3.21(m ， 4H) ， 1.38 ， 1.31(2s ， 9H) ； ESI-MS(m/z ， ％ ) ： + 420(M+Na， 47)， 398(MH ， 34)， 320(35)， 298(100)。
2- 羟基乙基 (2-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲 酸叔丁酯 ： 对 2- 羟基乙基 (2-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 )-2- 氧代乙 基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (620mg， 1.560mmol) 在四氢呋喃 (5mL) 中的搅拌溶液， 滴加硼烷 - 四 氢呋喃复合物 (1M 在四氢呋喃中 ； 4.68mL， 4.68mmol)， 避免过度起泡。此混合物之后在室 温下搅拌 2 小时。然后缓慢滴加 MeOH 使该混合物淬灭。此淬灭的反应之后以乙酸乙酯稀 释， 经饱和碳酸钠清洗 (3×)。该有机相经干燥、 过滤、 及浓缩， 获得红色油 (595mg， 99％ )。 1 H NMR(DMSO-d6)δ7.59-7.44(m， 1H)， 7.38-7.32(m， 1H)， 7.22-7.13(m， 1H)， 4.74(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 3.69-3.62(m， 2H)， 3.61-3.39(m， 6H)， 3.29-3.17(m， 2H)， 3.15-3.04(m， 2H)， 1.31， 1.24(2s， 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 406(M+Na， 55)， 328(40)， 284(100)。
2- 羟 基 乙 基 (2-(6-( 噻 吩 -2- 甲 脒 基 (carboximidamido))-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ) 氨 基 甲 酸 叔 丁 酯 ： 对 2- 羟 基 乙 基 (2-(6- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ) 氨 基 甲 酸 叔 丁 酯 (590mg， 1.539mmol) 及 10wt. ％ 活 性碳载钯 (164mg， 0.154mmol) 在乙醇 (10mL) 中的搅拌溶液， 在室温下氢气氛围 (1atm) 中 搅 拌 2 小 时 ( 黄 色 消 失 )。 此 混 合 物 再 加 入 噻 吩 -2- 亚 胺 亚 甲 基 硫 甲 酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (878mg， 3.08mmol)， 所得混合物在室温下搅拌过 夜。之后将此混合物以二氯甲烷稀释， 然后经 Celite 过滤。此滤过物之后以水稀释， 以二 氯甲烷 (4×) 萃取。合并的有机物经干燥、 过滤、 浓缩， 之后以乙酸乙酯层析， 获得黄色泡 1 沫的所需产物 (339mg， 47.6％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.69(s， 1H)， 7.58(d， J ＝ 4.8Hz， 1H)， 7.07(t， J ＝ 4.2Hz， 1H)， 6.41-6.25(m， 3H)， 6.08(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 4.71-4.65(m， 1H)， 3.63-3.54(m， 2H)， 3.49-3.33(m， 6H)， 3.27-3.15(m， 2H)， 3.02-2.94(m， 2H)， 1.39-1.29(m， + 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 463(MH ， 100)。
N-(4-(2-(2- 羟基乙氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -6- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒 ： 对 2- 羟基乙基 (2-(6-( 噻吩 -2- 甲脒基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (334mg， 0.722mmol) 在甲醇 (5mL) 中的搅拌溶液， 加入 3M 在水中的 HCl(2.407mL， 7.22mmol)。所得溶液在 90℃搅拌 1 小时。之后将此混合物冷却至室温， 以饱 和碳酸钠稀释， 以二氯甲烷 (6×) 萃取。合并的有机层经干燥、 过滤、 浓缩， 之后在 1 ∶ 9 的 1 (2MNH3 在甲醇中 ) ∶乙酸乙酯中层析， 获得所需产物 26(175mg， 66.9％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.71(d， J ＝ 3.3Hz， 1H)， 7.58(d， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 7.10-7.06(m， 1H)， 6.83(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 6.34(brs， 2H)， 6.22(s， 1H)， 6.07(d， J ＝ 7.5Hz， 1H)， 4.49-4.43(m， 1H)， 3.63-3.55(m， 2H)， 3.46-3.38(m， 2H)， 3.37-3.28(m， 2H)， 3.01-2.95(m， 2H)， 2.71(t， J ＝ 6.4Hz， 2H)， + 2.59(t， J ＝ 5.7Hz， 2H)， 1.91-1.75(m， 1H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 363(MH ， 100)， 276(99)， + 268(62) ； HRMS 计算 C17H23N4OS2(MH )， 计算值 ： 363.1307， 观察值 ： 363.1290 ； HPLC 纯度 ： 97％ ( 以面积计 )。
N-(4-(2-(2- 羟基乙氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒二盐酸盐 ： 对 N-(4-(2-(2- 羟基乙氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (165mg， 0.455mmol) 在甲醇 (2mL) 中的溶液， 加入 HCl(1M 在二乙醚中 ； 1.365mL， 1.365mmol)。所得溶液经浓缩， 形成黄色固体 (197mg， 99 ％ )。1H NMR(DMSO-d6)δ11.46(s， 1H)， 9.75(s， 1H)， 9.21-9.09(m， 2H)， 8.74(s， 1H)， 8.21-8.11(m， 2H)， 7.40-7.32(m， 1H)， 7.12(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 7.03(s， 1H)， 6.62(d， J ＝ 7.8Hz， 1H)， + 3.73-3.60(m， 6H)， 3.18-3.07(m， 4H)， 3.06-2.98(m， 2H) ； HRMS(C17H23N4OS2， MH ， 游离碱 ) ： 计 算值 ： 363.1307， 观察值 ： 363.1290。HPLC 纯度 ： 97％ ( 以面积计 )。
实 施 例 27 ： N-(4-(2- 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(27) 的合成
6- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 ： 如实施例 24 中描述的步骤制备。
N， N- 二 甲 基 -2-(6- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 胺 (ethanamine) ： 对 6- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (500mg， 2.55mmol)、 2- 氯 -N N- 二 甲 基 乙 胺 (ethanamine) 盐 酸 盐 (734mg， 5.10mmol)、 及 溴 化 四 丁 基 铵 (41.1mg， 0.127mmol) 在二氯甲烷 (5mL) 中的搅拌悬浮液， 加入 50％含水 NaOH(5mL)。然后将该反应 容器密封， 室温下剧烈搅拌此混合物过夜。之后将此混合物以水稀释， 以二氯甲烷 (3×) 萃 取。合并的有机物经干燥、 过滤、 浓缩， 之后在 1 ∶ 4 ∶ 5 的 (2M NH3 在甲醇中 ) ∶乙酸乙
酯∶二氯甲烷中层析， 获得所需产物 (80mg， 11.74％ ) 及大量的起始材料。1HNMR(DMSO-d6) δ7.44(d， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 7.36(dd， J ＝ 8.4， 2.4Hz， 1H)， 7.19(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 3.69-3.64(m， 2H)， 3.48(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 3.14-3.09(m， 2H)， 2.45(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， + 2.22(s， 6H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 268(MH ， 100)。
N-(4-(2- 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻 吩 -2- 甲 脒 ： 对 N， N- 二 甲 基 -2-(6- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙胺 (ethanamine)(75mg， 0.281mmol) 及 10wt. ％ 活 性 碳 载 钯 (29.9mg， 0.028mmol) 在 乙 醇 (5mL) 中 的 悬 浮 液， 在 室 温 下 氢 气 氛 ( 气 囊 压 力 ) 中 搅 拌 90 分 钟。 在 此 期 间， 此 反 应 的 黄 色 消 失。 在 此 混 合 物 中， 再 加 入 噻 吩 -2- 亚 胺 亚 甲 基 硫 甲 酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (160mg， 0.561mmol)， 将所得悬浮液在室温下搅 拌过夜。此混合物之后以二氯甲烷稀释， 过滤移除钯。其中的有机滤过物再进一步以水及 饱和碳酸钠 (1 ∶ 1) 稀释。分离其中的有机层， 水层再以二氯甲烷萃取。合并的有机物经 干燥、 过滤、 浓缩， 之后在 1 ∶ 19 的 (2M NH3 在甲醇中 ) ∶乙酸乙酯中层析， 获得所需产物 1 27(61mg， 62.8 ％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.71(d， J ＝ 3.3Hz， 1H)， 7.58(d， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 7.10-7.06(m， 1H)， 6.83(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 6.37(brs， 2H)， 6.17(s， 1H)， 6.08(d， J ＝ 7.8Hz， 1H)， 3.63-3.58(m， 2H)， 3.39-3.32(m， 2H)， 3.01-2.96(m， 2H)， 2.42(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， + + 2.10(s， 6H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 347(MH ， 100)， 276(74) ； ESI-HRMS 计算 C17H23N4S2(MH )， 计 算值 ： 347.1358， 观察值 ： 347.1349 ； HPLC 纯度 ： 95％ ( 以面积计 )。
N-(4-(2- 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻 吩 -2- 甲 脒 二 盐 酸 盐 ： 对 N-(4-(2- 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b] [1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻 吩 -2- 甲 脒 (57mg， 0.164mmol) 在 甲 醇 (2mL) 中 的 溶 液， 加入 盐 酸 (1M 在 二 乙 醚 中 ； 0.493mL， 0.493mmol)。 所 得 混 合 物 在 真 空 中 浓 缩， 获得黄 - 橘 1 色 固 体 (68mg， 99 ％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ11.49(s， 1H)， 11.09(brs， 1H)， 9.74(s， 1H)， 8.78(s， 1H)， 8.19-8.12(m， 2H)， 7.39-7.33(m， 1H)， 7.15-7.05(m， 2H)， 6.66-6.60(m， 1H)， 3.79-3.70(m， 2H)， 3.70-3.60(m， 2H)， 3.32-3.21(m， 2H)， 3.16-3.08(m， 2H)， 2.81-2.74(m， + 6H) ； HRMS(C17H23N4S2， MH ， 游离碱 ) ： 计算值 ： 347.1358， 观察值 ： 347.1349。HPLC 纯度 ： 95％ ( 以面积计 )。
实 施 例 28 ： N-(4-(2-( 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(28) 的合成
6- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 ： 如实施例 24 中描述的步骤制备。
2-( 甲 基 氨 基 )-1-(6- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 酮 (ethanone) ： 对 6- 硝基 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 (500mg， 2.55mmol) 在四氢呋 喃 (4mL) 中的搅拌溶液， 加入 2- 氯乙酰氯 (0.223mL， 2.80mmol)。所得混合物在 60℃搅拌 10 分钟， 此时将此反应冷却至 0℃。此混合物中再加入甲基胺 (2M 在四氢呋喃中 ； 12.7mL， 25.4mmol)。所得混合物在室温下搅拌 30 分钟。之后将此混合物以水及饱和碳酸钠稀释， 再经二氯甲烷 (3×) 萃取。合并的有机物经干燥、 过滤、 浓缩， 之后在 1 ∶ 4 ∶ 5 的 (2MNH3 在甲醇中 ) ∶乙酸乙酯∶二氯甲烷中层析， 获得黄色固体的所需产物 (511mg， 75 ％ )。1H
NMR(DMSO-d6)δ8.36(d， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 7.93(dd， J ＝ 8.7， 2.4Hz， 1H)， 7.50(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 3.93(t， J ＝ 5.1Hz， 2H)， 3.48(s， 2H)， 3.34-3.28(m， 2H)， 2.28(s， 3H)， 2.00(brs， 1H) ； + ESI-MS(m/z，％ ) ： 268(MH ， 100)。
甲基 (2-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 )-2- 氧代乙基 ) 氨基甲酸叔 丁酯 ： 对 2-( 甲基氨基 )-1-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone) (506.5mg， 1.895mmol) 在二噁烷 (10mL) 及三乙胺 (0.533mL， 3.79mmol) 中的搅拌溶液， 加入 二碳酸二叔丁酯 (434mg， 1.990mmol)， 所得混合物之后在室温下搅拌 30 分钟。此混合物之 后以乙酸乙酯稀释， 经水 (3×) 及盐水清洗。其中的有机相经干燥、 过滤、 及浓缩， 获得淡色 1 泡沫的所需产物 (695mg， 100％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ8.36-8.28(m， 1H)， 7.98-7.92(m， 1H)， 7.56-7.48(m， 1H)， 4.23-4.16(m， 2H)， 3.96-3.88(m， 2H)， 3.33-3.28(m， 2H)， 2.84(m， 3H)， + 1.39.1.30(2s， 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 390(M+Na， 100)， 368(MH ， 16)， 312(35)， 268(100)。
甲基 (2-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ： 对甲基 (2-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 )-2- 氧代乙基 ) 氨基甲酸叔丁 酯 (691mg， 1.881mmol) 在四氢呋喃 (5mL) 中的搅拌溶液， 加入硼烷 - 四氢呋喃复合物 (1M 在四氢呋喃中 ； 5.64mL， 5.64mmol)。之后将所得混合物在室温下搅拌 2 小时， 缓慢滴加甲 醇 (5mL)， 小心淬灭该混合物。此淬灭的混合物之后以乙酸乙酯稀释， 之后依序以 1 ∶ 1 的水∶饱和碳酸钠 (2×) 的混合物及之后的盐水清洗。其中的有机相经干燥、 过滤、 及浓 1 缩， 获得红色油 (659mg， 99 ％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.56-7.39(m， 1H)， 7.39-7.31(m， 1H)， 7.24-7.14(m， 1H)， 3.68-3.61(m， 2H)， 3.60-3.49(m， 2H)， 3.48-3.36(m， 2H)， 3.13-3.05(m， 2H)， 2.83(s， 3H)， 1.30， 1.17(2s， 9H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 376(M+Na， 85)， 354(MH+， 24)， 298(100)。
甲 基 (2-(6-( 噻 吩 -2- 甲 脒 基 (carboximidamido))-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ) 氨 基 甲 酸 叔 丁 酯 ： 对 甲 基 (2-(6- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (650mg， 1.839mmol) 及 10wt.％活性碳载钯 (196mg， 0.184mmol) 在乙醇 (10mL) 中的搅拌悬浮液， 在氢气氛 ( 气囊压力 ) 及室温下搅拌 2 小时。 此 混合物之后加入噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘 酸盐 (787mg， 2.76mmol)， 所得悬浮液在室温下搅拌过夜。 此混合物经过滤移除钯， 以水及饱 和碳酸钠稀释， 之后经二氯甲烷 (3×) 萃取。 合并的有机物经干燥、 过滤、 浓缩， 之后在 2 ∶ 3 1 乙酸乙酯∶己烷中层析， 获得所需产物 (420mg， 52.8％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.72-7.68(m， 1H)， 7.58(d， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 7.09-7.05(m， 1H)， 6.84(d， J ＝ 7.8Hz， 1H)， 6.38-6.21(m， 3H)， 6.08(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 3.64-3.56(m， 2H)， 3.42-3.33(m， 4H)， 3.03-2.94(m， 2H)， 2.81(s， + 3H)， 1.36-1.22(m， 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 433(MH ， 100)。
N-(4-(2- 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻 吩 -2- 甲 脒 ： 对 甲 基 (2-(6-( 噻 吩 -2- 甲 脒 基 )-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (415mg， 0.959mmol) 在甲醇 (4mL) 中的搅拌溶液， 加入 3NHCl 溶 液 (3.198mL， 9.59mmol)。所得混合物之后在 90 ℃搅拌 1 小时。此混合物之后冷却至室 温， 以水稀释， 以 3N 氢氧化钠碱化至 pH 12， 以二氯甲烷 (3×) 萃取。合并的有机物经 干燥、 过滤、 及浓缩， 在 1 ∶ 9 的 (2M NH3 在甲醇中 ) ∶乙酸乙酯中层析， 获得所需产物 1 28(165mg， 51.7％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.71(d， J ＝ 3.0Hz， 1H)， 7.58(d， J ＝ 5.1Hz， 1H)，7.10-7.06(m， 1H)， 6.82(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 6.34(brs， 2H)， 6.22(s， 1H)， 6.07(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 3.62-3.57(m， 2H)， 3.32(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 3.01-2.97(m， 2H)， 2.64(t， J ＝ 6.8Hz， 1H)， + + 2.29(s， 3H).ESI-MS(m/z， ％ ) ： 333(MH ， 100)， 276(71) ； ESI-HRMS 计 算 C16H21N4S2(MH )， 计 算值 ： 333.1202， 观察值 ： 333.1207 ； HPLC 纯度 ： 97％ ( 以面积计 )。
N-(4-(2- 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒二盐酸盐 ： 对 N-(4-(2- 甲基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (158mg， 0.475mmol) 在甲醇 (3mL) 中的溶液， 加入盐酸 (1M 在二乙醚中 ； 1.426mL， 1.426mmol)。所得混合物在真空下浓缩， 获得黄色固体 (192mg， 1 100 ％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ11.47(s， 1H)， 9.76(s， 1H)， 9.31-9.19(m， 2H)， 8.74(s， 1H)， 8.20-8.11(m， 2H)， 7.39-7.33(m， 1H)， 7.11(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 7.04(s， 1H)， 6.62(d， J ＝ 7.8Hz， 1H)， 3.71-3.61(m， 4H)， 3.18-3.04(m， 4H)， 2.58-2.52(m， 3H) ； HRMS(C16H21N4S2， MH+， 游 离碱 ) ： 计算值 ： 333.1202， 观察值 ： 333.1207。HPLC 纯度 ： 97％ ( 以面积计 )。
实施例 29 ： N-(4-( 哌啶 -4- 基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -6- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(29) 的合成
4-(2- 氯 -5- 硝基苯基氨基 ) 哌啶 -1- 羧酸叔丁酯 ： 对 2- 氯 -5- 硝基苯胺 (1g， 5.79mmol) 及 4- 氧代哌啶 -1- 羧酸叔丁酯 (2.309g， 11.59mmol) 在二氯乙烷 (15mL) 及乙酸 (0.995mL， 17.38mmol) 中的溶液， 在室温下搅拌 30 分钟。 此时， 此反应以三乙酰氧基硼氢化 钠 (3.07g， 14.49mmol) 处理， 所得混合物搅拌一个周末。再加入 4- 氧代哌啶 -1- 羧酸叔丁 酯 (2.309g， 11.59mmol)、 三乙酰氧基硼氢化钠 (3.07g， 14.49mmol)、 二氯乙烷 (15mL)。持 续搅拌 2 天。之后将此混合物以水及 1N 氢氧化钠 ( 碱化至 pH 10) 稀释， 之后以二氯甲烷 (3×) 萃取。 合并的有机物经干燥、 过滤、 浓缩， 然后在 1 ∶ 19 的乙酸乙酯∶己烷中层析， 获 1 得黄色 / 橘色泡沫 (1.26g， 61.1％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.54(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 7.51(d，
J ＝ 2.4Hz， 1H)， 7.39(dd， J ＝ 8.7， 2.4Hz， 1H)， 5.76-5.63(m， 1H)， 3.99-3.90(m， 2H)， 3.74-3.62(m， 1H)， 3.05-2.80(m， 2H)， 1.89-1.80(m， 2H)， 1.49-1.32(m， 11H) ； ESI-MS(m/ + 40)， 300(62)。 z，％ ) ： 378(M+Na， 100)， 356(MH ，4-(2-(2- 羟 基 乙 基 硫 基 )-5- 硝 基 苯 基 氨 基 ) 哌 啶 -1- 羧 酸 叔 丁 酯 ： 对 4-(2- 氯 -5- 硝 基 苯 基 氨 基 ) 哌 啶 -1- 羧 酸 叔 丁 酯 (1.25g， 3.51mmol) 在 DMF(10mL) 中 的搅拌溶液， 依序加入碳酸钾 (0.971g， 7.03mmol) 及 2- 巯基乙醇 (2-mercaptoethanol) (0.493mL， 7.03mmol)。 所得混合物在 60℃搅拌 1 小时， 之后经 TLC 分析 (2 ∶ 3 的乙酸乙酯∶ 己烷 ) 显示此反应已完成。 此混合物之后以乙酸乙酯稀释， 依序以水及饱和碳酸钠 (3×) 清 洗。其中的有机相经干燥、 过滤、 浓缩， 之后在 2 ∶ 3 的乙酸乙酯∶己烷中层析， 获得橘色泡 1 沫的所需产物 (1.202g， 86％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.51(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 7.43-7.37(m， 2H)， 5.40(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 5.06(t， J ＝ 5.4Hz， 1H)， 3.95-3.86(m， 2H)， 3.75-3.60(m， 1H)， 3.59-3.50(m， 2H)， 3.01-2.85(m， 4H)， 1.94-1.83(m， 2H)， 1.49-1.29(m， 11H) ； ESI-MS(m/ z，％ ) ： 420(M+Na， 22)， 342(100)。
4-(2-(2- 碘 乙 基 硫 基 )-5- 硝 基 苯 基 氨 基 ) 哌 啶 -1- 羧 酸 叔 丁 酯 ： 对三苯基 膦 (1.178g， 4.49mmol) 及 咪 唑 (0.611g， 8.98mmol) 在 四 氢 呋 喃 (10mL) 中 的 搅 拌 溶 液， 在 0 ℃ 加 入 碘 (1.292g， 5.09mmol)。 所 得 的 深 色 混 合 物 在 0 ℃ 搅 拌。5 分 钟 后， 加入 4-(2-(2- 羟基乙基硫基 )-5- 硝基苯基氨基 ) 哌啶 -1- 羧酸叔丁酯 (1.19g， 2.99mmol) 在 四氢呋喃 (5mL) 中的溶液。此混合物之后温热至室温下， 搅拌 1 小时。此混合物之后以 乙酸乙酯稀释， 以饱和碳酸钠、 饱和硫代硫酸钠、 水及盐水清洗。其中的有机相经干燥、 过滤、 浓缩， 之后在 1 ∶ 2 的乙酸乙酯∶己烷中层析， 获得橘色泡沫的标题产物 (1.50g， 1 99 ％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.59-7.54(m， 1H)， 7.45-7.38(m， 2H)， 5.45-5.37(m， 1H)， 3.98-3.85(m， 2H)， 3.73-3.61(m， 1H)， 3.35-3.27(m， 5H)， 3.19-3.03(m， 1H)， 3.02-2.82(m， 2H)， 1.92-1.84(m， 2H)， 1.45-1.34(m， 11H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 530(M+Na， 6)， 452(25)， 279(100)。
4-(6- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 哌 啶 -1- 羧 酸 叔 丁 酯 ： 对 4-(2-(2- 碘乙基硫基 )-5- 硝基苯基氨基 ) 哌啶 -1- 羧酸叔丁酯 (1.49g， 2.94mmol) 在 DMF(10mL) 中的搅拌溶液， 加入碳酸钾 (0.812g， 5.87mmol)。所得混合物在 90 ℃搅拌 3 小时。反应混合物之后以乙酸乙酯稀释， 再依序以水及饱和碳酸钠 (2×) 清洗。其中的 有机相经干燥、 过滤、 浓缩， 之后在 1 ∶ 4 的乙酸乙酯∶己烷中层析， 获得橘色泡沫的所 1 需 产 物 (473mg， 42.4 ％ )。 HNMR(DMSO-d6)δ7.57(d， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 7.41(dd， J ＝ 8.7， 2.4Hz， 1H)， 7.22(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 4.09-3.88(m， 3H)， 3.47-3.42(m， 2H)， 3.12-3.08(m， 2H)， 3.01-2.85(m， 2H)， 1.72-1.51(m， 4H)， 1.41(s， 9H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 402(M+Na， 95)， + 380(MH ， 28)， 324(100)， 280(55)。
4-(6- 噻吩 -2- 甲脒基 (carboximidamido))-2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 哌啶 -1- 羧酸叔丁酯 ： 对 4-(6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 哌啶 -1- 羧 酸叔丁酯 (468mg， 1.233mmol) 及 10wt. ％活性碳载钯 (131mg， 0.123mmol) 在乙醇 (10mL) 及 四 氢 呋 喃 (1mL) 中 的 悬 浮 液， 在 氢 气 氛 ( 气 囊 压 力 ) 下 搅 拌 2 小 时。 在 此 期 间， 此 反应混合物转为无色。在此混合物中， 之后加入噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (528mg， 1.850mmol)， 所得悬浮液在室温下搅拌 过夜。此混合物之后以乙酸乙酯稀释， 经 Celite 垫过滤。滤过液以饱和碳酸钠 (3×) 清 洗。其中的有机相经干燥、 过滤、 浓缩， 之后在 1 ∶ 5 的乙酸乙酯∶二氯甲烷中层析， 获得所 1 需产物 (403mg， 71.2％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.72(d， J ＝ 3.0Hz， 1H)， 7.59(d， J ＝ 5.1Hz，1H)， 7.10-7.06(m， 1H)， 6.86(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 6.42-6.28(m， 3H)， 6.13(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 4.06-3.95(m， 2H)， 3.85-3.76(m， 1H)， 3.40-3.33(m， 2H)， 2.99-2.93(m， 2H)， 2.92-2.75(m， + 2H)， 1.69-1.48(m， 4H)， 1.39(s， 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 459(MH ， 100)。
N-(4-( 哌啶 -4- 基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 ： 对 4-(6- 噻吩 -2- 甲脒基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 哌啶 -1- 羧酸叔丁酯 (398mg， 0.868mmol) 在 MeOH(6mL) 中的搅拌溶液， 加入 3M 含水盐酸 (2.893mL， 8.68mmol)。 所得溶液 在 90℃搅拌 45 分钟。此混合物之后冷却至室温， 以饱和碳酸钠碱化 (pH 12)， 之后以二氯 甲烷 (3×) 萃取。合并的有机物经干燥、 过滤、 浓缩， 随后在 1 ∶ 6(2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶乙 1 酸乙酯中层析， 获得淡黄色泡沫所需产物 29(216mg， 69.4％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.71(d， J ＝ 2.7Hz， 1H)， 7.59(d， J ＝ 4.8Hz， 1H)， 7.08(dd， J ＝ 5.1， 3.6Hz， 1H)， 6.86(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 6.37(brs， 2H)， 6.26(s， 1H)， 6.13-6.08(m， 1H)， 3.68-3.52(m， 1H)， 3.43-3.38(m， 2H)， + 3.01-2.93(m， 4H)， 2.61-2.51(m， 2H)， 1.64-1.52(m， 4H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 359(MH ， 100) ； + ESI-HRMS 计算 C18H23N4S2(MH )， 计算值 ： 359.1358， 观察值 ： 359.1351 ； HPLC 纯度 ： 97 ％ ( 以 面积计 )。
N-(4-( 哌 啶 -4- 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻 吩 -2- 甲 脒二盐酸盐 ： 对 N-(4-( 哌 啶 -4- 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -6- 基 ) 噻 吩 -2- 甲 脒 (210mg， 0.586mmol) 在 甲 醇 (4mL) 中 的 溶 液， 加 入 盐 酸 (1M 在 二 乙 醚 中 ； 1.757mL， 1.757mmol)。 所 得 溶 液 真 空 下 浓 缩， 获 得 淡 黄 色 固 体 (252mg， 100 ％ )。1H NMR(DMSO-d 6) δ 11.45(s ， 1H) ， 9.76(s ， 1H) ， 9.22(s ， 2H) ， 8.75(s ， 1H) ， 7.40-7.34(m ， 1H)， 7.13(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 7.02(s， 1H)， 6.64(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 4.02-3.92(m， 1H)， 3.46-3.39(m， 2H)， 3.37-3.26(m， 2H)， 3.12-2.91(m， 4H)， 2.15-1.98(m， 2H)， 1.86-1.78(m， + 2H) ； HRMS(C18H23N4S2， MH ， 游离碱 ) ： 计算值 ： 359.1358， 观察值 ： 359.1351。HPLC 纯度 ： 97％ ( 以面积计 )。
实施例 30 ： N-(4-( 吡咯烷 -3- 基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(30) 的合成
2-(2- 氯乙基硫基 ) 苯胺 ： 对 2- 氨基苯硫酚 (0.513mL， 4.79mmol) 在乙醇 (5mL) 中的搅拌溶液， 加入氢氧化钠 (192mg， 4.79mmol) 水溶液 (5.00mL)。所得混合物中加入 1- 溴 -2- 氯乙烷 (1.197mL， 14.38mmol)， 剧烈搅拌所得混合物 20 分钟。之后以乙酸乙酯稀 释此混合物， 以饱和碳酸钠 (3×) 清洗。其中的有机相经干燥、 过滤、 及浓缩， 获得黄色液体 1 的 2-(2- 氯乙基硫基 ) 苯胺 (875mg， 97％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.27(d， J ＝ 7.5Hz， 1H)，7.10-7.04(m， 1H)， 6.73(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 6.56-6.49(m， 1H)， 5.41(brs， 2H)， 3.62(t， J＝ + 7.4Hz， 2H)， 3.02(t， J ＝ 7.4Hz， 2H)。ESI-MS(m/z，％ ) ： 188(MH ， 100)。
3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 ： 对 2-(2- 氯 乙 基 硫 基 ) 苯 胺 (850mg， 4.53mmol) 在 DMF(10mL) 中的搅拌溶液， 加入碳酸钾 (1878mg， 13.59mmol)， 之后加入碘化钠 (67.9mg， 0.453mmol)。 所得混合物加热至 90℃， 搅拌过夜。 所得混合物之后冷却至室温， 以 乙酸乙酯稀释， 以水 (3×) 及盐水清洗。其中的有机相经干燥、 过滤、 浓缩， 之后在 9 ∶ 1 的 1 己烷∶乙酸乙酯中层析， 获得橘色油 (675mg， 99％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ6.85-6.75(m， 2H)， 6.51-6.39(m， 2H)， 6.00(brs， 1H)， 3.49-3.44(m， 2H)， 2.98-2.93(m， 2H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： + 152(MH ， 100)， 124(44)。
3-(2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 吡 咯 烷 -1- 羧 酸 叔 丁 酯 ： 对 3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 (1.00g， 6.61mmol)、 N-boc-3- 吡 咯 烷 酮 (pyrrolidinone) (1.34g， 7.27mmol)、 及乙酸 (0.94mL， 16.52mmol) 在 1， 2- 二氯乙烷 (20mL) 中的混合物， 冷 却至 0℃， 之后以固体的三乙酰氧基硼氢化钠 (2.10g， 9.92mmol) 处理。 将此反应移至室温， 搅拌 11 小时。再向反应混合物中加入额外当量的三乙酰氧基硼氢化钠 (1.40g， 6.61mmol) 及 N-boc-3- 吡咯烷酮 (pyrrolidinone)(1.22g， 6.61mmol) 中的每一种。此反应搅拌多于 2 天， 之后以 3N 的 NaOH(50mL) 淬灭。此混合物移到分液漏斗中， 以 EtOAc(2×50mL) 萃取。 其中的有机相以盐水 (50mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)。粗产物进行硅胶的快速层析法 (flash chromatography)(10％的 EtOAc/ 己烷， 之后 20％的 EtOAc/ 己烷 )。 取样本再进行硅胶的快 速层析法 (flash chromatography)(7.5-15％的 EtOAc/ 己烷 )， 获得粘稠油 (0.41g， 19％ )。 1 H NMR(CDCl3)δ7.08(dd， J ＝ 0.9， 7.5Hz， 1H)， 7.04-6.99(m， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)，6.67-6.72(m， 1H)， 4.39-4.36(m， 1H)， 3.73-3.72(m， 6H)， 3.10-3.06(m， 2H)， 2.20-2.00(m， + 2H)， 1.47(s， 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 345， 343(M+Na， 4)， 322， 320(MH ， 3)， 267， 265(100)。
3-(7- 溴 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 吡 咯 烷 -1- 羧 酸 叔 丁 酯 ： 对 3-(2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 吡 咯 烷 -1- 羧 酸 叔 丁 酯 (0.41g， 1.302mmol) 在 DMF(5mL) 中 的 溶 液， 冷 却 至 0 ℃， 滴 加 在 DMF(5mL) 中 的 N- 溴 化 琥 珀 酰 亚 胺 (bromosuccinimide)(0.17g， 0.977mmol)15 分钟。此反应维持在 0 ℃， 此温度下搅拌 1 小 时。此时， 此反应中滴加在 DMF(1mL) 中的 N- 溴化琥珀酰亚胺 (0.023g， 0.130mmol)， 之后 在 0℃搅拌 1 小时。此溶液再以在 DMF(1mL) 中的 N- 溴化琥珀酰亚胺 (0.023g， 0.130mmol) 处理， 在 0 ℃搅拌 1 小时。此溶液以水 (100mL) 稀释， 以 EtOAc(2×100mL) 萃取。其中的 水相以 EtOAc(50mL) 清洗一次。合并有机溶液， 以水 (100mL) 及盐水 (50mL) 清洗、 干燥 (Na2SO4)。粗产物经硅胶垫过滤 (20％ EtOAc/ 己烷 )， 浓缩形成澄清油 (0.47g， 90％ )。1H NMR(CDCl3)δ7.18(d， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 7.07(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 6.62(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 4.34-4.28(m， 1H)， 3.71-3.23(m， 6H)， 3.03-3.04(m， 2H)， 2.19-1.95(m， 2H)， 1.47(s， 9H) ； + ESI-MS(m/z，％ ) ： 423， 421(M+Na， 8)， 401， 399(MH ， 2)， 343， 345(100)。
3-(7- 氨 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 吡 咯 烷 -1- 羧 酸 叔 丁 酯 ： 三 ( 二 苯 亚 甲 基 丙 酮 ) 二 钯 (tris(dibenzylideneacetone)dipalladium)(0)(0.056g， 0.062mmol) 在 THF(3mL) 中以 10％ wt 在己烷中 (0.748mL， 0.247mmol) 的三叔丁基膦处理， 在氩气氛下剧烈搅拌 10 分钟。此混合物中加入在 THF(9mL) 中的 3-(7- 溴 -2H- 苯并 [b] [1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 吡咯烷 -1- 羧酸叔丁酯 (0.49g， 1.233mmol) 及在 THF 中 (3.70mL， 3.70mmol) 的 1M LiHMDS。密封此反应， 放到预热的油浴， 在 100 ℃下回流。将此溶液冷 却至室温， 以在 THF 中 (8mL) 的 1M TBAF 处理， 搅拌 40 分钟。将此混合物浓缩， 以 1N 的 NaOH(50mL) 处理。将此混合物移到分液漏斗， 经水 (50mL) 稀释， 以 EtOAc(2×50mL) 萃 取。其中的有机相以盐水 (50mL) 清洗、 干燥 (Na2SO4)。粗产物进行硅胶快速层析法 (flash chromatography)(25-70％的 EtOAc/ 己烷 )。 收集到的流分 (fractions) 经浓缩， 获得澄清 1 的棕色油 (0.34g， 83％ )。 HNMR(CDCl3)δ6.64(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 6.48(s， 1H)， 6.39(brs， 1H)， 4.08-4.02(m， 1H)， 3.70-3.07(m， 6H)， 3.09-3.07(m， 2H)， 2.08-1.92(m， 2H)， 1.46(s， + 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 338， 336(MH ， 40)， 282， 280(100)。
3-(7-( 噻 吩 -2- 甲 脒 基 (carboximidamido))-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 吡咯烷 -1- 羧酸叔丁酯 ： 对 3-(7- 氨基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 吡咯烷 -1- 羧酸叔丁酯 (0.31g， 0.937mmol) 在 EtOH(20mL) 中的混合物， 加入噻吩 -2- 亚胺 亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (0.53g， 1.874mmol)。此 混合物在室温下搅拌过夜。此混合物以饱和碳酸氢钠溶液 (50mL) 淬灭。将此溶液移到分 液漏斗， 以水 (50mL) 稀释， 以 CH2Cl2(2×50mL) 萃取。粗产物进行硅胶快速层析法 (flash chromatography)(50-90 ％的 EtOAc/ 己烷 )。收集到的流分 (fractions) 经浓缩， 获得黄 1 色油 (0.29g， 69％ )。 H NMR(CDCl3)δ7.41(dd， J ＝ 0.9， 5.1Hz， 1H)， 7.38(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 7.06(dd， J ＝ 3.9， 4.9Hz， 1H)， 6.79-6.76(m， 2H)， 6.68-6.66(m， 1H)， 4.84(brs， 2H)， 4.35-4.23(m， 1H)， 3.74-3.22(m， 6H)， 3.12-3.07(m， 2H)， 2.19-1.99(m， 2H)， 1.47(s， 9H) ； + ESI-MS(m/z，％ ) ： 447， 445(MH ， 100)。
N-(4-( 吡咯烷 -3- 基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒： 对 3-(7-( 噻吩 -2- 甲脒基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 吡咯烷 -1- 羧酸叔丁 酯 (0.24g， 0.554mmol) 在 MeOH(5mL) 中的溶液， 室温下以 1N 的 HCl 溶液 (9.98mL， 9.98mmol) 处理。所得混合物回流 30 分钟后， 移到室温下。过滤此混合物， 并以 1N 的 NaOH(10mL) 淬 灭。此混合物以水 (50mL) 稀释， 以 CH2Cl2(2×50mL) 萃取。其中的有机相以盐水 (50mL) 清洗及干燥 (Na2SO4)。粗产物进行硅胶快速层析法 (flash chromatography)(5-20 ％的 2MNH3MeOH/CH2Cl2)。收集到的流分 (fractions) 获得黄色泡沫的化合物 30(0.15g， 79％ )。 1 H NMR(DMSO-d6)δ7.69(d， J ＝ 3.0Hz， 1H)， 7.56(dd， J ＝ 0.9， 4.9Hz， 1H)， 7.07(dd， J ＝ 3.9， 4.9Hz， 1H)， 6.79(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 6.52-6.49(m， 2H)， 6.31(brs， 2H)， 4.26-4.17(m， 1H)， 3.42-3.22(m， 2H)， 3.10-2.90(m， 4H)， 2.83-2.69(m， 2H)， 2.07-1.96(m， 1H)， 1.68-1.57(m， + 1H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 347， 345(MH ， 72)， 278， 276(100)。
N-(4-( 吡咯烷 -3- 基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲 脒二盐酸盐 ： 对在 MeOH(3mL) 中的 N-(4-( 吡咯烷 -3- 基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (0.1264g， 0.367mmol)， 以在乙醚中 (1.835mL， 1.835mmol) 的 1M HCl 处理。此混合物在室温下搅拌 5 分钟， 经浓缩形成淡黄色固体 (0.16g， 定量 ).1H NMR(DMSO-d6)δ11.30(s， 1H)， 9.83(brs， 1H)， 9.70(s， 1H)， 9.57(brs， 1H)， 8.70(s， 1H)， 8.15-8.13(m， 2H)， 7.37-7.34(m， 1H)， 7.10-7.00(m， 3H)， 4.74-4.63(m， 1H)， 3.60-3.40(m， 5H)， 3.16-3.05(m， 3H)， 2.26-2.15(m， 1H)， 2.05-1.92(m， 1H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 347， + + 345(MH ， 游离碱， 61)， 278， 276(100) ； HRMS(C17H21N4S2， MH ， 游离碱 ) ： 计算值 ： 345.1202， 观 察值 ： 345.1195。HPLC 纯度 ： 99％ ( 以面积计 )。
实施例 31 ： N-(7- 氟 -4-( 哌啶 -4- 基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(31) 的合成
2-(2- 氨基 -5- 氟 -4- 硝基苯基硫基 ) 乙醇 ： 对 2， 4- 二氟 -5- 硝基苯胺 (100mg， 0.574mmol) 及碳酸钾 (159mg， 1.149mmol) 在 DMF(1mL) 中的搅拌悬浮液， 加入 2- 巯基乙醇 (2-mercaptoethanol)(0.081mL， 1.149mmol)。将所得混合物在室温下搅拌 2 小时。之后以 乙酸乙酯稀释此混合物， 以饱和碳酸钠 (3×) 清洗。其中的有机相经干燥、 过滤、 浓缩， 之后层析， 获得主要产物。之后使用乙酸乙酯作为洗脱液， 获得少量产物。该主要产物确认为所 1 需产物 (112mg， 84％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.32(d， J ＝ 3.5Hz， 1H)， 7.27(d， J ＝ 10.7Hz， 1H)， 4.39(s， 2H)， 3.85-3.76(m， 2H)， 3.16-3.08(m， 2H)， 2.13-2.05(m， 1H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： + 233(MH ， 100)， 215(14)， 187(100)， 129(65)。
4-(4- 氟 -2-(2- 羟基乙基硫基 )-5- 硝基苯基氨基 ) 哌啶 -1- 羧酸叔丁酯 ： 对 2-(2- 氨基 -5- 氟 -4- 硝基苯基硫基 ) 乙醇 (434mg， 1.869mmol) 及 4- 氧代哌啶 -1- 羧酸 叔丁酯 (372mg， 1.869mmol) 在二氯乙烷 (10mL) 及乙酸 (0.321mL， 5.61mmol) 中的搅拌溶 液， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 (594mg， 2.80mmol)。所得混合物在室温下搅拌。1 小时后， 再 一次加入 4- 氧代哌啶 -1- 羧酸叔丁酯 (372mg， 1.869mmol)， 之后再加入三乙酰氧基硼氢化 钠 (594mg， 2.80mmol)。再经过 3 小时后， 再一次加入 4- 氧代哌啶 -1- 羧酸叔丁酯 (372mg， 1.869mmol)， 之后再加入三乙酰氧基硼氢化钠 (594mg， 2.80mmol)。此反应混合物搅拌过 夜。此混合物之后以 1N 的 NaOH(10mL)、 水 (20mL)、 及饱和碳酸钠 (20mL) 淬灭。此有机产 物之后以二氯甲烷 (3×20mL) 萃取。合并的有机物经干燥、 过滤、 浓缩， 及使用 1 ∶ 3 的乙 1 酸乙酯∶己烷在硅胶上层析， 获得所需产物 (710mg， 91％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.45(d， J ＝ 12.0Hz， 1H)， 7.23(d， J ＝ 6.6Hz， 1H)， 5.08(t， J ＝ 5.4Hz， 1H)， 5.02(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 3.96-3.84(m， 2H)， 3.69-3.55(m， 5H)， 2.99-2.83(m， 2H)， 1.92-1.83(m， 2H)， 1.45-1.18(m， 11H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 360(100)， 128(30)。
4-(4- 氟 -2-(2- 碘乙基硫基 )-5- 硝基苯基氨基 ) 哌啶 -1- 羧酸叔丁酯 ： 对三苯 基膦 (668mg， 2.55mmol) 及咪唑 (0.693mL， 5.09mmol) 在四氢呋喃 (10mL) 中的搅拌溶液， 冷却至 0 ℃， 加入碘 (732mg， 2.88mmol)。所得混合物在 0 ℃搅拌 5 分钟。此混合物之后 加入 4-(4- 氟 -2-(2- 羟基乙基硫基 )-5- 硝基苯基氨基 ) 哌啶 -1- 羧酸叔丁酯 (705mg， 1.697mmol) 在四氢呋喃 (5mL) 中的溶液， 所得混合物在室温下搅拌 20 分钟。然后将此混 合物以乙酸乙酯稀释， 经饱和碳酸钠、 水、 饱和硫代硫酸钠、 及盐水清洗。 其中的有机相经干 1 燥、 过滤、 浓缩， 之后在 1 ∶ 9 的乙酸乙酯∶己烷中层析， 获得所需产物 (398mg， 44.6％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.53(d， J ＝ 11.7Hz， 1H)， 7.27(d， J ＝ 6.6Hz， 1H)， 5.10(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 3.96-3.85(m， 2H)， 3.64-3.52(m， 1H)， 3.50-3.41(m， 2H)， 3.39-3.32(m， 2H)， 2.99-2.81(m， 2H)， 1.91-1.81(m， 2H)， 1.48-1.32(m， 11H) ； ESI-MS(m.z，％ ) ： 470(100)， 426(81)。
4-(7- 氟 -6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 哌啶 -1- 羧酸叔丁酯 ： 对 4-(4- 氟 -2-(2- 碘乙基硫基 )-5- 硝基苯基氨基 ) 哌啶 -1- 羧酸叔丁酯 (394mg， 0.750mmol) 在 DMF(5mL) 中的搅拌溶液， 加入碳酸钾 (207mg， 1.500mmol)， 将所得混合物在 60℃搅拌 2 小时， 之后在 90℃过夜。此混合物之后冷却至室温， 以乙酸乙酯稀释， 饱和碳酸钠 (3×)、 水、 及盐水清洗。其中的有机相经干燥、 过滤、 浓缩， 之后使用 1 ∶ 9 的乙酸乙酯∶己烷层 1 析， 获得红色泡沫的所需产物 (193mg， 64.7 ％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ7.42(d， J ＝ 6.6Hz， 1H)， 7.30(d， J ＝ 11.7Hz， 1H)， 4.10-3.95(m， 2H)， 3.91-3.79(m， 1H)， 3.41-3.36(m， 2H)， 3.13-3.09(m， 2H)， 2.99-2.78(m， 2H)， 1.73-1.63(m， 2H)， 1.63-1.51(m， 2H)， 1.41(s， 9H) ； + + ESI-MS(m/z，％ ) ： 420(MNa ， 52)， 398(MH ， 35)， 342(100)， 298(64)。
4-(6- 氨基 -7- 氟 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 哌啶 -1- 羧酸叔丁酯 ： 对 4-(7- 氟 -6- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 哌啶 -1- 羧酸叔丁酯 (190mg， 0.478mmol) 在四氢呋喃 (3.00mL) 中的搅拌溶液， 加入雷尼镍 (Raney-Nickel)(28.1mg，0.478mmol) 在甲醇 (3mL) 中的悬浮液。此混合物之后加入水合肼 (hydrazine hydrate) (0.233mL， 4.78mmol)， 所得混合物在 60 ℃下搅拌 8 分钟。此时， 此反应混合物转为淡红 色。此混合物之后以乙酸乙酯稀释， 以饱和碳酸钠 (2×)、 水 (2×)、 及盐水稀释。其中的 1 有机相经干燥、 过滤、 及浓缩， 获得红色油 (172mg， 98％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ6.61(d， J＝ 11.1Hz， 1H)， 6.34(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 4.76(s， 2H)， 4.11-4.01(m， 2H)， 3.62-3.51(m， 1H)， 3.29-3.25(m， 2H)， 2.93-2.88(m， 2H)， 2.87-2.69(m， 2H)， 1.71-1.61(m， 2H)， 1.59-1.48(m， + 2H)， 1.40(m， 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 368(MH ， 25)， 312(100)。
4-(7- 氟 -6-( 噻 吩 -2- 甲 脒 基 (carboximidamido))-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 哌 啶 -1- 羧 酸 叔 丁 酯 ： 对 4-(6- 氨 基 -7- 氟 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 哌 啶 -1- 羧 酸 叔 丁 酯 (168mg， 0.457mmol) 在 乙 醇 (5mL) 及 三 乙 胺 (0.643mL， 4.57mmol) 中 的 搅 拌 溶 液， 加 入 噻 吩 -2- 亚 胺 亚 甲 基 硫 甲 酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (325mg， 1.829mmol)。所得混合物在 65℃搅拌过 周末。此混合物之后冷却至室温， 以乙酸乙酯稀释， 经饱和碳酸钠 (3×) 清洗。其中的有 机相经干燥、 过滤、 及浓缩， 在 1 ∶ 9 的乙酸乙酯∶己烷层析， 获得黄色油 (18mg， 8.26％ )。 1 H NMR(MeOD-d4)δ7.65-7.61(m， 1H)， 7.59-7.54(m， 1H)， 7.14-7.08(m， 1H)， 6.79(d， J ＝ 10.5Hz， 1H)， 6.49(d， J ＝ 7.5Hz， 1H)， 4.22-4.12(m， 2H)， 3.80-3.67(m， 1H)， 3.43-3.38(m， 2H)， 3.05-3.01(m， 2H)， 2.96-2.79(m， 2H)， 1.83-1.73(m， 2H)， 1.72-1.57(m， 2H)， 1.46(s， + 9H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 477(MH ， 100)。
N-(7- 氟 -4-( 哌啶 -4- 基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -6- 基 ) 噻吩 -2- 甲 脒二盐酸盐 ： 对 4-(7- 氟 -6-( 噻 吩 -2- 甲 脒 基 )-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 哌 啶 -1- 羧 酸 叔 丁 酯 (16mg， 0.034mmol) 在 甲 醇 (1mL) 中 的 搅 拌 溶 液， 加入 1 滴浓缩 盐酸。所得混合物在 70 ℃加热 1 小时。此混合物之后冷却至室温， 以二乙醚 (4mL) 稀 释。此所得淡沉淀物经真空过滤收集。获得所需的二盐酸盐产物 31(8mg， 53.0 ％ )。1H NMR(DMSO-d6)δ11.35(s， 1H)， 9.92(s， 1H)， 8.96(s， 1H)， 8.57-8.51(m， 2H)， 8.25-8.10(m， 2H)， 7.40(s， 1H)， 7.24-7.15(m， 1H)， 7.05-6.99(m， 1H)， 3.96-3.83(m， 1H)， 3.45-3.20(m， 1 2H) ， 3.18-3.09(m ， 2H) ， 3.09-2.91(m ， 2H) ， 2.02-1.87(m ， 2H) ， 1.87-1.75(m ， 2H) ； H NMR(DMSO-d6+D2O)δ8.16-8.09(m， 1H)， 8.08-8.01(m， 1H)， 7.39-7.33(m， 1H)， 7.14(d， J ＝ 10.5Hz， 1H)， 6.95-6.88(m， 1H)， 3.91-3.80(m， 1H)， 3.39-3.29(m， 4H)， 3.11-3.05(m， 2H)， + 3.05-2.91(m， 2H)， 1.90-1.78(m， 4H) ； ESI-MS(m/z， ％ ) ： 377(MH ， 游 离 碱， 50)， 294(100) ； + ESI-HRMS(C18H22N4FS2， MH ， 游离碱 )， 计算值 ： 377.1264， 观察值 ： 377.1263。
实 施 例 32 ： N-(4-(2-( 乙 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(32) 的合成
2- 氯 -1-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone) ： 如实 施例 18 中描述的步骤制备。
2-( 乙 基 氨 基 )-1-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 酮 (ethanone) ： 对 2- 氯 -1-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone) (1.5g， 5.50mmol) 在 二 噁 烷 (15mL) 及 三 乙 胺 (1.533mL， 11.00mmol) 中 的 溶 液， 以乙胺 (ethanamine) 盐酸盐 (2.243g， 27.5mmol) 在水 (7.5mL) 中的溶液处理。此反应之后在室 温下搅拌过夜 (16 小时 )。此时， 此反应混合物以水 (50mL) 稀释， 以二氯甲烷 (3×30mL) 萃取。合并的有机层经干燥 (Na2SO4)、 过滤、 及浓缩。残余物进行硅胶柱层析法 (1 ∶ 1 的 乙酸乙酯∶己烷， 之后 5 ∶ 95 的 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)， 获得棕色固体 (0.56g， 1 36.2％ )。H-NMR(DMSO-d6)δ8.10(d， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 7.92(dd， J ＝ 2.4， 9.0Hz， 1H)， 7.70(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 3.94(t， J ＝ 5.1Hz， 2H)， 3.52(s， 2H)， 3.33-3.28(m， 2H)， 2.55-2.52(m， 2H)， + 0.98(t， J ＝ 6.9Hz， 3H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 282(MH ， 100％ )。
乙基 (2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 )-2- 氧代乙基 ) 氨基甲酸叔 丁酯 ： 对 2-( 乙基氨基 )-1-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙酮 (ethanone) (0.56g， 1.991mmol) 在无水二噁烷 (10mL) 及三乙胺 (0.555mL， 3.98mmol) 中的溶液， 以二碳 酸二叔丁酯 (0.478g， 2.190mmol) 处理， 室温下搅拌半小时。 此反应之后以乙酸乙酯 (50mL)
稀释， 以水 (50mL) 及盐水 (3×15mL) 清洗。其中的有机层经干燥 (Na2SO4)、 过滤、 及浓缩， 1 获 得 棕 色 浆 (0.803g， 100 ％ )。 H-NMR(DMSO-d6)δ8.13-8.11(m， 1H)， 7.97-7.91(m， 1H)， 7.71(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 4.18-4.16(m， 2H)， 3.95-3.92(m， 2H)， 3.28-3.19(m， 4H)， 1.38， + 1.29(2x s， 9H)， 1.05-1.02(m， 3H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 404(M+Na， 42 ％ )， 382(MH ， 17 ％ )， 282(100％ )。
乙基 (2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁 酯： 对乙基 (2-(7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 )-2- 氧代乙基 ) 氨基甲酸 叔丁酯 (0.8g， 2.097mmol) 在无水四氢呋喃 (5mL) 中的溶液， 以硼烷 -THF 复合物 (1M 在THF 中 ； 6.29mL， 6.29mmol) 处 理， 在 室 温 下 搅 拌 3 小 时。 此 反 应 以 滴 加 甲 醇 (10mL) 淬 灭， 之后浓缩。粗残余物以甲醇 (25mL) 稀释， 回流 10 分钟。此混合物之后经浓缩， 残 余 物 进 行 硅 胶 柱 层 析 法 (1 ∶ 9-3 ∶ 7EtOAc ∶ CH2Cl2)， 获 得 黄 色 浆 (0.493g， 64 ％ )。 1 H-NMR(DMSO-d6)δ7.85-7.78(m， 2H)， 6.94-6.85(m， 1H)， 3.76-3.79(m， 2H)， 3.62-3.57(m， 2H)， 3.37-3.33(m， 2H)， 3.22-3.19(m， 2H)， 3.08-3.04(m， 2H)， 1.35and 1.30(2×brs， 9H)， + 1.03(t， J ＝ 6.9Hz， 3H).ESI-MS(m/z，％ ) ： 390(M+Na， 67％ )， 368(MH ， 17％ )， 312(83％ )， 268(100％ )。
乙 基 (2-(7-( 噻 吩 -2- 甲 脒 基 (carboximidamido))-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ) 氨 基 甲 酸 叔 丁 酯 ： 对 钯 碳 (10 ％ wt ； 0.142g， 0.133mmol) 及 乙 基 (2-(7- 硝 基 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ) 氨 基 甲 酸 叔 丁 酯 (0.49g， 1.333mmol) 在干乙醇 (15mL) 中的悬浮液， 在氢气 ( 气囊压力 ) 下搅拌 3 小时。此反应之后 放到氩气下， 加入噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (0.761g， 2.67mmol)， 在室温下搅拌混合物过夜 (16 小时 )。 将此混合物倒在 Celite 上， 该 Celite 以甲醇冲洗。 此滤过物经浓缩， 进行硅胶柱层析 (1 ∶ 1 的 EtOAc ∶己烷， 之后 1 为 5 ∶ 95 的 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)， 获得固体 (0.4g， 67.2％ )。 H-NMR(DMSO-d6) δ7.69(brd， J ＝ 3.3Hz， 1H)， 7.57(dd， J ＝ 1.2， 5.2Hz， 1H)， 7.07(dd， J ＝ 3.6， 4.8Hz， 1H)， 6.81-6.74(m， 1H)， 6.49-6.46(m， 2H)， 6.31(brs， 2H)， 3.59-3.54(m， 2H)， 3.36-3.31( 与 溶 剂的峰重叠 m， 4H)， 3.23-3.20(m， 2H)， 3.03-3.00(m， 2H)， 1.41(s， 9H)， 1.04(t， J ＝ 6.9Hz， + 3H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 447(MH ， 100％ )。
N-(4-(2-( 乙 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒 ： 对乙基 (2-(7-( 噻吩 -2- 甲脒基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 基 ) 乙 基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (0.4g， 0.896mmol) 在甲醇 (10mL) 中的溶液， 以 3N 的 HCl(3.88mL， 11.64mmol) 处理， 回流搅拌 1.5 小时。 此混合物冷却至室温， 以水稀释 (20mL)， 1N 的 NaOH 碱 化。 此产物以二氯甲烷 (2×25mL) 萃取。 合并的有机层经干燥 (Na2SO4) 及浓缩。 粗产物进行 硅胶柱层析法 (5 ∶ 95 的 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)， 获得黄色固体 (0.142g， 45.8％ )。 1 H-NMR(DMSO-d6)δ7.69(dd， J ＝ 0.9， 3.6Hz， 1H)， 7.56(d， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 7.07(dd， J＝ 3.6， 4.8Hz， 1H)， 6.72(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 6.49(dd， J ＝ 2.1， 8.4Hz， 1H)， 6.45(d， J ＝ 2.1Hz， 1H)， 6.31(brs， 2H)， 3.55-3.51(m， 2H)， 3.30-3.24(m， 2H)， 3.04-3.00(m， 2H)， 2.62(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.56(q， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 1.01(t， J ＝ 7.2Hz， 3H) ； ESI-MS(m/z，％ ) ： 347(MH+， 75％ )， 276(100％ ) ； HPLC 纯度 ： 99.5％ ( 以面积计 )。
N-(4-(2-( 乙 基 氨 基 ) 乙 基 )-3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻 吩 -2- 甲脒二盐酸盐 ： 对 N-(4-(2-( 乙基氨基 ) 乙基 )-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (0.142g， 0.410mmol) 在干甲醇 (5mL) 中的溶液， 以盐酸 (1M 在 乙醚中 ； 2.049mL， 2.049mmol) 处理， 室温下搅拌 1 小时。此反应之后经浓缩， 形成黄色 1 固 体。 H-NMR(DMSO-d6)δ11.22(brs， 1H)9.68(brs， 1H)， 9.32(brs， 2H)， 8.69(brs， 1H)， 8.15-8.11(m， 2H)， 7.36(pseudo t， J ＝ 7.2Hz， 1H)， 7.06-6.99(m， 3H)， 3.70-3.60( 与溶剂 峰重叠， m， 4H)， 3.12-3.02(m， 4H)， 3.02-2.93(m， 2H)， 1.23(t， J ＝ 7.2Hz， 3H)。
实施例 33 ： N-(4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-3- 氧代 -3， 4- 二氢 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 (carboximidamide)(33) 的合成4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻嗪 -4(3H)- 酮 ： 如实 施例 8 中描述的步骤制备。
N-(4-(2-( 二 甲 基 氨 基 ) 乙 基 )-3- 氧 代 -3， 4- 二 氢 -2H- 苯 并 [b][1， 4] 噻 嗪 -7- 基 ) 噻吩 -2- 甲脒 ： 对 4-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-7- 硝基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噻 嗪 -3(4H)- 酮 (0.3g， 1.066mmol) 及钯碳 (10％ wt， 0.113g， 0.107mmol) 在干乙醇 (10mL) 中 的悬浮液， 在氢气氛 ( 气囊压力 ) 下搅拌 2 小时。 此混合物通过 Celite 垫， 该 Celite 以乙醇 冲洗。此滤过物以噻吩 -2- 亚胺亚甲基硫甲酯 (methyl thiophene-2-carbimidothioate) 碘酸盐 (0.608g， 2.133mmol) 处理， 此反应混合物在室温下搅拌 3 天。蒸发溶剂， 残余物 在二氯甲烷 (50mL) 及饱和碳酸氢钠溶液 (25mL) 间分层 (partition)， 搅拌半小时。此 混合物之后移到分液漏斗， 移除水层。有机层经干燥 (Na2SO4) 及浓缩。残余物进行硅胶
柱层析法 (2.5 ∶ 97.5 的 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2， 之后 5 ∶ 95 的 (2MNH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2， 之后 7.5 ∶ 92.5 的 (2M NH3 在 MeOH 中 ) ∶ CH2Cl2)， 获得黄色固体 (0.117g， 1 30.4 ％ )。 H-NMR(DMSO-d6)δ7.75(brd， J ＝ 3.0Hz， 1H)， 7.61(dd， J ＝ 0.9， 5.1Hz， 1H)， 7.28(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 7.09(dd， J ＝ 3.6， 4.8Hz， 1H)， 6.85(brd， J ＝ 1.8Hz， 1H)， 6.79(dd， J ＝ 1.5， 8.4Hz， 1H)， 6.58(brs， 2H)， 4.00(t， 6.9Hz， 2H)， 3.44(s， 2H)， 2.41(t， J ＝ 9.0Hz， 2H)， 2.19(s， 6H)。
实施例 34 ： nNOS( 人 )， eNOS( 人 ) 及 iNOS( 人 ) 酶分析
人的 iNOS 分析根据以下两种方法的任一种进行 ：
方法 1 ：
由 杆 状 病 毒 (Baculovirus) 感 染 的 Sf9 细 胞 (ALEXIS) 制 备 重 组 人 诱 导 型 NOS(recombinant human inducible NOS)(iNOS)。在放射性计量 (radiometric) 方法中， NO 合成酶的活性经由测量 [3H]L- 精氨酸 (arginine) 转变为 [3H]L- 瓜氨酸 (citrulline) 来确定。为了测量 iNOS， 可将 10μL 的酶加入 100μL 的 100mM HEPES， pH ＝ 7.4， 其含有 1mM 的 CaCl2、 1mM 的 EDTA、 1mM 的二硫苏糖醇 (dithiothreitol)、 1μM 的 FMN、 1μM 的 FAD、 10μM 的四氢生物蝶呤 (tetrahydrobiopterin)、 120μM 的 NADPH、 及 100nM 的 CaM。
为测量酶抑制作用， 可将测试物质 15μL 溶液加入上述酶分析溶液中， 之后在室 3 温下预培养 15 分钟。 此反应开始于添加含有 0.25μCi 的 [ H] 精氨酸 /mL 及 24μM 的 L- 精 氨酸的 20μL 的 L- 精氨酸。此反应混合物的总体积为每孔 150μL。此反应在 37℃进行 45 分钟。通过加入含有 100mM 的 HEPES、 3mM 的 EGTA 及 3mM 的 EDTA， pH ＝ 5.5 的 20μL 的 3 冰冷缓冲液而终止此反应。[ H]L- 瓜氨酸 (citrulline) 由 DOWEX( 离子交换树脂 DOWEX 50W×8-400， SIGMA) 分离， 再经由在离心机中 12,000g 旋转 10 分钟移除 DOWEX。上清液的 等份 (aliquot)(70μL) 加入 100μL 的闪烁 (scintillation) 流体， 此样本在液相闪烁计 数器 (liquid scintillation counter)(1450Microbeta Jet， Wallac) 中计数。 特异性 NOS活性以来自测试溶液的活性与在含有 240mM 的抑制剂 L-NMMA 的对照样本中观察的活性间 的差异来报导。所有分析至少进行两次。标准差在 10％以下。此结果显示， 本发明的化合 物对 nNOS 有选择性的抑制作用。本发明的例示化合物的结果， 也示于表 3。
方法 2 ：
试剂与材料
酶 一氧化氮合成酶 ( 可诱导的， 人重组的 )iNOS II(Cat.
No.ALX-201-060， Axxora LLC， CA 92121， USA) G
L-NMMA N - 单甲基 -L- 精氨酸 (arginine) 二盐酸盐 (Cat #
M7033， Sigma Aldrich)
反应缓冲液 50mM 的 Tris-HCl(pH 7.4)(Cat.No.93313，
Sigma-AldrichCo.， St.Louis， MO)
6μM 四氢生物蝶呤 (tetrahydrobiopterin) 二盐酸盐
(BH4)(Cat.No.T4425， Sigma)
2μM 黄素腺嘌呤二核苷酸 (flavin adenine
dinucleotide)(FAD)(Cat.No.F6625， Sigma)
2μM 黄素腺嘌呤单核苷酸 (flavin adenine
mononucleotide)(FMN)(Cat.No.F8399， Sigma)
终止缓冲液 50mM N-2- 羟基乙基哌嗪
(hydroxyethylpiperazine)-N’ -2- 乙烷磺酸 (HEPES)
(pH 5.5)(H7523， Sigma) 及 5mM 的乙二胺四乙酸
(EDTA)(Cat.No.EDS， Sigma)
NADPH 12mM 制备在 10mM 的 Tris-HCl(pH7.4) 中 (Cat.
No.N7505， Sigma)
钙调蛋白 1μM(Cat.No.P2277， Sigma)
(Calmodulin)
[3H]-L- 精氨酸 1μCi/ 反应， 40-70Ci/mmol(Cat.No.
TRK-698， Amersham Biosciences)
L- 精氨酸 2.5μM( 最终分析浓度 )(Cat.No.A5131，
Sigma)
平衡树脂 AG-50W X8 树脂在 HEPES 缓冲液中 (pH 5.5)
(Equilibrated Resin) (Cat.No.1421441， Bio-Rad Laboratories Ltd.)
旋转杯 (Spin (Cat.No.C8163， Fisher Scientific)
Cups)
放射线盘式检测仪 (Wallac Microbeta Trilux， Perkin Elmer)
(Microbeta)
液相闪烁液体 (Optiphase Supermix， Cat.No.1200-439，
(Liquid Scintillation Perkin Elmer)
Fluid)
培养箱 (Lab-Line Enviro Shaker)微离心机 (Mikro 20)
步骤 ：
每一测试化合物的基本储液在研究当日制备于蒸馏水中， 终浓度为 6mM。11 种测 试化合物的浓度为 3 倍连续稀释， 进行 IC50 值的确认。在 iNOS 分析中， 测试化合物的浓度 为 1000μM 至 0.0169μM。测试化合物或抑制剂的载体、 蒸馏水用作空白对照。以 100μM 的 L-NMMA 作为对照平行进行， 作为非特异性的活性。
所有培养进行两次。
此反应混合物在冰上制备， 在 1.0mL 的 96- 孔的聚丙烯盘上的适当孔中， 添加下列 成分 ：
10μL 的测试化合物、 参考抑制剂、 或对照 ( 载体或 L-NMMA) 溶液 ；
25μL 的反应缓冲液 (50mM 的 Tris-HCl， 6μM 的 BH4， 2μM 的 FMN， 2μM 的 FAD) ；
5μL 的 10mM NADPH 溶液 ；
5μL 的蒸馏水 ；
5μL 的 1μM 钙调蛋白 (Calmodulin) ； 及
5μL 的 0.0024μg/μL iNOS。
反应混合物在室温下预先培养 15 分钟。预先培养后， 此反应由添加 5μL 的基质 3 L- 精氨酸 (1μCi 的 [ H]-L- 精氨酸 +30μM 的未标记的 L- 精氨酸 ) 开始。总反应体积为 60μL。密封含有此反应混合物的分析盘， 在 37℃下培养 30 分钟。培养期结束时， 每孔加 入 400μL 的冰冷终止缓冲液 (EDTA 在终止缓冲液中捕捉 ( 螯合， chelates) 所有可获得的 钙离子 )， 以终止反应。每一分析孔中加入 100μL 的平衡树脂 pH 5.5。使此反应样本涡 旋， 移到旋转杯 (spin cups)， 之后 13,000rpm 离心 30 秒。将旋转杯 (spin cups) 由机台 (holder) 移除， 将 20μL 的洗脱液 ( 含有未结合的 L- 瓜氨酸 ) 加入 96 孔的液相闪烁盘上 的适当孔中。每一孔中也加入 175μL 的闪烁液体。密封该盘， 使用 Microbeta 液相闪烁计 数器定量放射活性。
使用 Sigmoidal 剂量反应 ( 可变化斜率 ) 曲线分析数据， 确认测试化合物的 IC50 值。
Y ＝底值 (Bottom)+( 顶值 (Top)- 底值 )/(1+10^((LogIC50-X)*Hill 斜率 ))
X 为测试化合物或抑制剂浓度的对数 (logarithm)
Y 为 L- 瓜氨酸形成的量 (pmol)
底值 (Bottom) 为 Y 的最小值而顶值 (Top) 为 Y 的最大值
这相当于 “四参数对数方程式” (four parameter logistic equation)。
斜率因素 ( 也称为” Hill 斜率” ) 描述曲线的倾斜度。标准的竞争结合曲线 (standard competitive binding curve) 根据质量作用定律形成一斜率为 -1.0。如果此 斜率较平坦， 则斜率因素为负因素 ( 例如 -0.85 或 -0.60)。
人 nNOS 及 eNOS 方法 ：
试剂及材料
酶： 一氧化氮合成酶 ( 神经元的， 人重组的 )nNOS I
(Cat.No.ALX-201-068， Axxora LLC， CA 92121，
USA)一氧化氮合成酶 ( 内皮的， 人重组的 )eNOS III (Cat.No.ALX-201-070， Axxora LLC) G L-NMMA ： N - 单甲基 -L- 精氨酸 (1/04/05， Cat # A17933， Novabiochem) L-NAME ： NG- 硝基 -L- 精氨酸甲酯 (Cat#N5751， Aldrich) 2X 反应缓冲液 ： 50mM 的 Tris-HCl(pH 7.4)(Cat.No.93313， Sigma-Aldrich Co.， St.Louis， MO) 6μM 四氢生物蝶呤 (tetrahydrobiopterin)(BH4) (Cat.No.T4425， Sigma) 2μM 黄素腺嘌呤二核苷酸 (flavin adenine dinucleotide)(FAD)(Cat.No.F6625， Sigma) 2μM 黄素腺嘌呤单核苷酸 (flavin adenine mononucleotide)(FMN)(Cat.No.F8399， Sigma) 终止缓冲液 ： 50mM 的 N-2- 羟基乙基哌嗪 (hydroxyethylpiperazine)-N’ -2- 乙烷磺酸 (HEPES) (pH 5.5)(H7523， Sigma) 及 5mM 乙二胺四乙酸 (EDTA)(Cat.No.EDS， Sigma) NADPH ： 10mM 分析当日新鲜制备 (Cat.No.N7505， Sigma) 氯化钙 ： 6mM(Cat.No.21107， Sigma) 钙调蛋白 1mM(Cat.No.P2277， Sigma) (Calmodulin) ： [3H]-L- 精氨酸 ： 1μCi/ 反应， 40-70Ci/mmol(Cat.No.TRK-698， Amersham Biosciences) L- 精氨酸 ： 2.5μM( 最终分析浓度 )(Cat.No.A5131， Sigma) 平衡树脂 ； AG-50W X8 树脂在 HEPES 缓冲液中 (pH 5.5) (Cat.No.1421441， Bio-Rad Laboratories Ltd.) 旋转杯与机台 (Cat.No.C8163， Fisher Scientific) (Spin Cups & Holder) ： 液相闪烁计数器 ： (Tri-Carb 2000CA/LL， Canberra Packard Canada) 液相闪烁液体 ： (Cat.No.6012239， Ultima Gold， Perkin-Elmer Life and Analytical Sciences， MA) CO2 培养箱 ： (Lab-Line Enviro Shaker) 微离心机 ： (Mikro 20) 漩涡混合器 (Vortex (Mini Vortex mixer， IKA) Mixer) ： 人 nNOS 及 eNOS 的步骤 测试化合物的基本储液由 2-5mg 粉末制成 6mM 的浓度。每一测试化合物的基本储液在研究当日新鲜制备于蒸馏水中， 终浓度为 6mM。12 种测试化合物的浓度为 3 倍连续稀 释， 进行 IC50 值的确认。 nNOS 的测试化合物的浓度范围为 0.001 至 300μM， eNOS 的测试化合 物的浓度范围为 0.003 至 1000μM。测试化合物或抑制剂的载体作为空白对照。以 100μM 的 L-NMMA 用于非特异性的活性。使用 L-NAME 的 IC50 浓度作为对照平行进行。
所有培养进行两次。
通过以微吸管 (micropipette) 将下列成份加到聚丙烯微离心管中， 从而在冰上 制备此反应混合物 ：
10μL 的测试化合物、 抑制剂或对照 ( 载体或 L-NMMA) 溶液 ；
25μL 的反应缓冲液 {25mM Tris-HCl， 0.6μM BH4， 0.2μM FMN， 0.2μM FAD} ；
5μL 的 10mM NADPH 溶液 {1mM}( 在 10mM Tris-HCl(pH 7.4) 中新鲜制备 ) ；
5μL 的 6mM CaCl2{600μM} ；
5μL 的 1mM 钙调蛋白 (Calmodulin){100μM} ； 及
5μL 的 0.02μg/μL 的 nNOS 或 0.12μg/μL 的 eNOS。
上述反应混合物在室温下预先培养 15 分钟。
此反应由添加基质 (5μL， 含有 1μCi 的 [3H]-L- 精氨酸 +2.5μM 的未标记的 L- 精 氨酸 ) 至反应混合物中开始。总反应体积为 60μL。
此反应使用漩涡混合器 (vortex mixer) 混合， 将上述混合物培养于 37℃的培养 箱中 30 分钟。
在培养时间结束时， 加入 400μL 的冰冷终止缓冲液， 以终止反应。
之后此反应以漩涡混合器 (vortex mixer) 混合， 将反应的样本移到旋转杯 (spin cups)， 使用微离心机室温下 13,000rpm 离心 30 秒。
自机台移除该旋转杯 (spin cups)， 将 450μL 的洗脱液 ( 含有未结合的 L- 瓜氨 酸 ) 移到闪烁小瓶中。加入 3mL 的闪烁液体， 在液相闪烁计数器中定量放射活性。
使用 Sigmoidal 剂量反应 ( 可变化的斜率 ) 曲线分析数据， 确认测试化合物的 IC50 值。
Y ＝底值 +( 顶值 - 底值 )/(1+10^((LogIC50-X)*Hill 斜率 ))
X 为测试化合物或抑制剂浓度的对数 (logarithm)
Y 为 L- 瓜氨酸形成的量 (pmol)
底值为 Y 的最小值而顶值为 Y 的最大值
这相当于” 四参数对数方程式” (four parameter logistic equation)。
斜 率 因 素 ( 也 称 为 Hill 斜 率 ) 描 述 曲 线 的 倾 斜 度。 标 准 的 竞 争 结 合 曲 线 (standard competitive binding curve) 根据质量作用定律形成一斜率为 -1.0。如果此 斜率较平坦， 则斜率因素为负因素 ( 例如 -0.85 或 -0.60)。本发明的例示化合物的结果如 表 3 所示。
表 3 化合物 (1)-(33) 对人 NOS 的选择性抑制
实施例 35 ： 在神经性疼痛状态的预测模式中的功效
已描述数种神经性疼痛的动物模型涉及神经损伤， 包括慢性压缩损伤， 包括 ： CCI 或 Bennett 模 式 ( 参 见 例 如 Bennett and Xie， Pain， 33 ： 87-107， 1988 ； Vissers
et al.Pharmacol.Biochem.Behav.84 ： 479-486， 2006)、脊 椎 神 经 结 扎 (spared nerve ligation)(SNL 或 Chung 模 式 ； 例 如 Kim et al.Neurosci.Lett.199 ： 158-60， 1995)、 及 Seltzer 模式 (Seltzer et al.Pain 43 ： 205-18， 1990)。 这些模式显示具有人体内经证明的 活性的药物及这些模式中的药物活性间的良好关联 (Kontinen and Meert， In ： Dostrovsky th J.， Carr D.B.， Kotzenburg M.， editors.10 World Congress on Pain， 2003， 24.San Diego， California ： IASP Press， 489-98)。一般而言， 这些动物模型显示行为反应的改变， 例如降低的机械性阈值、 机械性异常性疼痛、 化学性高度活性、 热痛觉过敏、 及冷觉异常性 疼痛 (Dowdell et al.Pharmacol.Biochem.Behavior 80 ： 93-108， 2005)。
本发明的化合物用于神经性疼痛的功效， 使用可预测抗痛觉过敏及抗异常性疼痛 活性的标准动物模型而评估。
(a) 损伤诱导的类神经性疼痛的 Chung 模式
对神经性疼痛的 Chung 脊椎神经结扎 SNL 模式分析的实验设计， 如图 1 及图 2 所 示。神经结扎损伤根据 Kim 及 Chung(Kim and Chung， Pain 50 ： 355-363， 1992) 的方法进 行。该技术产生神经病变感觉迟钝 (dysesthesias) 症状， 包括触觉异常性疼痛、 热痛觉过 敏， 及保护受伤的爪掌。大鼠以氟烷 (halothane) 麻醉后， 剖开椎骨的 L4-S2 区域。暴露出 L5 及 L6 的脊椎神经， 小心分离， 以 DRG 远端的 4-0 丝缝线紧密结扎。在确定稳态稳定之后， 缝合伤口， 使该动物在单独笼中复原。准备相同状态的伪 (Sham)- 操作大鼠， 不同之处在于 L5/L6 脊椎神经未结扎。任何展现运动缺失表征的大鼠进行安乐死。在上述手术干预后经 过一段时间恢复， 大鼠对疼痛及正常非疼痛刺激显示提高的敏感度。
根据已公开的步骤 i.p. 注射标准剂量 ( 如 3mg/kg) 后， 化合物 (8) 在热痛觉过敏 的逆转上具有明显效果 ( 如图 3 及图 4)。
(b) 硬膜炎作为偏头痛的大鼠模式
已确认发炎效应浓汤 (inflammatory soup(IS)) 或化学刺激应用于大鼠硬膜顶 部， 会使中枢敏化发展， 在脸部区域及动物后掌出现机械性异常性疼痛。这些特征与通常 见于头痛时的偏头痛特征相似， 特别是当治疗延缓、 及中枢敏化发展发生时 (Burstein et al.， Ann.Neurol.47 ： 614-624， 2000 ； Burstein et al.， Brain， 123 ： 1703-1709， 2000)。根 据前述步骤 (WO2007/120830 或如 US-2008-0031822-A1 所述 ) 在偏头痛的硬膜炎模式中 测试化合物 (8)。掌缩回阈值的基线纪录为 IS 给予前约 30 分钟， 以校准的 von Frey 丝 (von-Frey filaments) 施加于后掌以测量触觉异常性疼痛。IS 给予前约 15 分钟， 水中的 测试化合物经口服给予 (1mL/kg)， 剂量为每次口服 3mg/kg(p.o.)。触觉异常性疼痛的测量 在 IS 给予后每 1 小时纪录， 直到 6 小时。化合物 8(3mg/kg 口服 ) 的抗异常性疼痛效果如 图 5 所示。
(c) 角叉胶 (carrageenan) 诱导的发炎作为原发性及续发性疼痛模式
注射 0.1mL 的 3 ％角叉胶 (carrageenan) 悬浮液 s.c 给予轻微麻醉大鼠的后掌 的后脚跟部分 (supplanter aspect)， 诱导发炎。一般而言， 强化的发炎及肿胀明显出 现在注射的 3 小时内。角叉胶 (carrageenan) 模式为炎性痛模式， 具有二部分 ： 第一是 在注射后立即发生， 提供对疼痛刺激的急性疼痛反应的信息 ( 这种状况为化学性角叉胶 (carrageenan)) ； 第二是神经部分， 发展在数小时之后， 反映因为神经性疼痛中的痛觉过 敏及异常性疼痛形成的神经元活性的种类。相当证据显示 NO 及其酶与脊髓水平的炎性痛觉过敏的中枢机制有关， 及显示周围发炎可向上调节脊髓中的 nNOS 表达及诱导 iNOS 表 达 (Guhring et al.， J.Neurosci.20 ： 6714-6720， 2000 ； Wu et al.， Exp.Brain Res.118 ： 457-465， 1998 ； and Wu et al.， Pain 94 ： 47-58， 2001)。而且， 动物体的 iNOS 敲除研究显 示， nNOS 在角叉胶炎性痛的第二部分中的发展及维持是必要的， 但是 iNOS 在热痛觉过敏后 期是充足的， 但非必要 (Tao et al.， Neuroscience 120 ： 847-854， 2003)。图 6 显示在角叉 胶注射及化合物 (8) 给予后的大鼠同侧掌的机械性异常性疼痛的复原。 图 7 显示在 i.p. 给 予化合物 (8) 的大鼠同侧掌中热触觉敏感 ( 后期 ) 的复原， 其通过对热刺激的掌缩回时间 进行测量。
因此， 具有 nNOS 及 iNOS 活性的式 (I) 化合物， 可有效治疗偏头痛、 发炎及神经病 变类型的疼痛及其它疼痛状态， 其中存在中枢神经元敏感的部份。
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