一种从中药白屈菜中制备木兰花碱的方法 技术领域 ：
本发明属于中药领域， 涉及一种从中药白屈菜中制备木兰花碱的方法。 背景技术 ：
白屈菜为罄粟科白屈菜属植物白屈菜 Chelidonium majus L. 的全草。 味苦， 性凉。 有毒。具有清热解毒， 止痛， 止咳之功。白屈菜含多种化学成分， 可将其分为非生物碱及生 物碱两大类。木兰花碱， 又称木兰碱 (magnoflorine) 是其中的一个主要活性成分， 为阿朴 菲型生物碱， 具有抗炎、 抗微生物和细胞毒作用。
在现有的技术中， 对白屈菜的提取方法主要有索氏提取、 搅拌萃取、 超声波萃取、 超临界萃取、 微波辐射技术提取以及醇提取等， 采用这些方法主要是用来制备白屈菜的总 生物碱， 未见有从白屈菜中直接提取制备木兰花碱的报道。
在现有技术中， 有报道从裂叶星果草、 青藤及辛夷中提取制备木兰花碱的方法， 但 这些木兰花碱的制备方法主要是有机溶剂萃取、 反复硅胶柱层析。本发明提供了一种不同 于现有技术的木兰花碱的制备方法， 可以从白屈菜中直接制备得到木兰花碱， 而且该方法 该操作简便， 有机溶剂耗费小， 克服了现有技术中有机溶剂耗费量高， 硅胶柱层析工艺烦 琐、 收率低等弊端。 发明内容 ：
本发明的目的是提供一种从白屈菜中制备木兰花碱的方法。
本发明的目的是通过以下方式实现的 ：
一种从白屈菜中提取制备木兰花碱的方法， 该方法包括以下步骤 ：
(1) 提取 ： 取白屈菜， 切断， 加入 6 ～ 15 倍量 60 ～ 80％的乙醇回流提取 1 ～ 5 次， 合并提取液， 滤过， 滤液减压浓缩， 搅拌加入乙醇至含乙醇量为 70 ～ 90％， 静置， 滤过， 滤液 减压回收至无醇味， 加水稀释， 静置， 滤过， 弃去不溶物， 滤液调节 pH 为 1 ～ 3， 加水稀释， 得 备用液Ⅰ ；
(2) 第一次树脂纯化 ： 取备用液Ⅰ， 通过大孔树脂色谱柱， 用水洗脱后， 再以 10 ～ 40％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩， 滤过， 滤液调节 pH 为 8 ～ 10， 浓缩， 得备用液Ⅱ ；
(3) 第二次树脂纯化 ： 取备用液Ⅱ， 通过大孔树脂色谱柱， 水洗脱至色浅， 再以 30 ～ 50％乙醇洗脱， 收集洗脱液， 浓缩， 干燥， 得木兰花碱粗品， 备用 ；
(4) 精制 ： 取木兰花碱粗品， 适量水溶解， 通过 C-18 或 C-8 填料色谱柱， 先以水洗 脱， 水液弃去， 再以 2 ～ 20％乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 干燥， 得到木兰花碱。
所述的制备方法， 在提取步骤中， 加入乙醇回流提取的量优选依次为 12 倍量、 10 倍量、 8 倍量， 提取 3 次， 乙醇的浓度为 70％。
所述的制备方法， 在提取步骤中， 滤液减压浓缩后的药液浓度优选为每毫升含 1 克药材。
所述的制备方法， 在提取步骤中， 优选搅拌加入乙醇至含乙醇量为 80％。所述的制备方法， 在提取步骤中， 滤液减压回收至无醇味， 加水稀释， 稀释后的药 液浓度优选为每毫升含 2 克药材。
所述的制备方法， 在提取步骤中， 滤液调节 pH 为 1 ～ 3， 加水稀释， 稀释后的药液浓 度优选为每毫升含 1 克药材。
所述的制备方法， 在第一次树脂纯化步骤中， 大孔树脂选择 D101 大孔吸附树脂或 D101B 大孔吸附树脂或 XDA-1 大孔吸附树脂或 XDA-1B 大孔吸附树脂或 XDA-7 均孔脱色树脂 或 HPD-100 大孔吸附树脂或 HPD-450 大孔吸附树脂或 AB-8 大孔吸附树脂中的任意一种， 其 中优选为 D101 大孔吸附树脂。
所述的制备方法， 在第一次树脂纯化步骤中， 用水洗脱的用水量以不将木兰花碱 洗脱出为准， 即洗脱液 Molish 反应为阴性， 或纸斑反应或薄层色谱检测不得检出木兰花 碱。
所述的制备方法， 在第一次树脂纯化步骤中， 乙醇洗脱液的浓度优选为 10％。
所述的制备方法， 在第一次树脂纯化步骤中， 减压浓缩， 浓缩后的药液浓度优选为 每毫升含 2 克药材。
所述的制备方法， 在第一次树脂纯化步骤中， 滤液调节 pH 为 8 ～ 10， 浓缩， 浓缩后 的药液浓度优选为每毫升含 2 克药材。 所述的制备方法， 在第二次树脂纯化步骤中， 大孔树脂选择 D101 大孔吸附树脂或 D101B 大孔吸附树脂或 XDA-1 大孔吸附树脂或 XDA-1B 大孔吸附树脂或 XDA-7 均孔脱色树脂 或 HPD-100 大孔吸附树脂或 HPD-450 大孔吸附树脂或 AB-8 大孔吸附树脂中的任意一种， 其 中优选为 D101 大孔吸附树脂。
所述的制备方法， 在第二次树脂纯化步骤中， 优选 40％乙醇洗脱。
所述的制备方法， 在精制步骤中， 以水洗脱的用水量以除去 365nm 下蓝色荧光杂 质为准。
所述的制备方法， 在精制步骤中， 优选 5％乙醇洗脱。
所述的制备方法， 第一次树脂纯化与第二次树脂纯化的步骤可以交换， 即可以先 进行第二次树脂纯化， 再进行第一次树脂纯化。
对本发明提供的木兰花碱的制备方法的研究与说明 ：
发明人对本发明的提供的技术方案进行了实验研究， 用来证明本发明的技术效 果， 下述实验用于进一步说明本发明的技术效果， 但不限制本发明。
实验例 1 ：
1. 仪器与材料
白屈菜 ( 罂粟科白屈菜 Chelidonium majus L. 的全草 )、 木兰花碱 ( 天津中新药 业中药现化代技术工程中心， 供含量测定用 )D-101、 HPD-100、 HPD-450 大孔吸附树脂 ( 天津 农药总厂 ) ； AB-8 大孔树脂 ( 南开大学化工厂 ) ； R30030B 反相 C-18 填料 (40-63μm， 上海安 普科学仪器有限公司 ) ； 甲醇 ( 色谱纯， TEDIA， USA) ； 水 ( 重蒸馏， 自制 ) ； 盐酸、 氢氧化钠、 磷酸二氢钾、 药用 95％乙醇 ( 南京化学试剂有限公司 ) ； Agilent 1100 高效液相色谱仪， 配 自动进样器， 四元泵， VWD 检测器 ； 电子分析天平 (Mettler AE240)。
2. 色谱条件
色谱柱： Agilent ZORBAX Eclipse XDB-18(250mm×4.6mm， 5μm)， 流动相： 乙
腈 -0.2 ％磷酸二氢钾溶液比例为 15 ∶ 85， 流速 ： 1mL·min-1， 柱温 ： 30 ℃， VWD 检测器 ： 278nm。
3. 方法与结果
3.1 提取工艺
取白屈菜， 切断， 加入 12 倍、 10 倍、 8 倍 70％乙醇回流提取 3 次， 合并提取液， 滤过， 滤液减压浓缩至 1 ∶ 1( 药液浓度为 1 克药材 / 毫升， 下同 )。搅拌加入乙醇至含乙醇量为 80％， 静置， 滤过， 滤液减压回收至无醇味， 加水稀释药液浓度为 2 克药材 / 毫升， 静置， 滤 过， 弃去不溶物， 滤液调节 pH 为 1 ～ 3， 加水稀释至 1 ∶ 1， 备用。
3.2 纯化工艺
3.2.1 第一次树脂纯化 ： 取 3.1 项下备用液通过 D-101 大孔树脂色谱柱， 适量水洗 脱后， 再以 10％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩至 2 ∶ 1( 药液浓度为 2 克药材 / 毫升， 下同 )， 滤过， 滤液调节 pH 为 8 ～ 10， 备用。
3.2.2 第二次树脂纯化 ： 取 3.2.1 项下备用液， 通过 D-101 大孔树脂色谱柱， 水洗 脱至色浅， 40％乙醇洗脱， 收集 40％乙醇洗脱液， 减压浓缩， 真空干燥， 得木兰花碱粗品， 备 用。
3.3 精制
取 3.2.2 项下粗品， 水溶解， 通过 C-18 色谱玻璃小柱， 先以适量水洗脱， 水液弃去， 再以 5％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩， 真空干燥， 得到木兰花碱。结果木兰花碱保留 时间为 8.4min， 色谱图见附图 1、 附图 2、 附图 3、 附图 4、 附图 5。
4. 讨论
4.1 本实验以白屈菜为原料， 采用乙醇提取、 醇沉、 水沉、 大孔吸附树脂色谱制备木 兰花碱， 克服了现有方法耗费大量有机溶剂， 工艺烦琐， 收率低等弊端。
4.2 实验中考察大孔吸附树脂上样溶液 pH， 结果表明酸性条件下， 树脂吸附量小， 10％乙醇即可洗脱木兰花碱 ； 碱性条件下树脂吸附量大， 洗脱液中木兰花碱含量高， 以 pH 为 8 ～ 10 最佳。故采用两次大孔吸附树脂工艺纯化制备木兰花碱。对 D-101、 HPD-100、 HPD-450、 AB-8 大孔吸附树脂比较， 最终选用 D-101 大孔树脂作为应用树脂。
4.3 实验中对洗脱液进行了考察， 结果表明酸性条件下， 水洗脱用量要适当， 10％ 乙醇即可洗脱完全木兰碱 ； 碱性条件下不同浓度乙醇的洗脱效果， 详见表 1， 结果表明， 乙 醇浓度超过 70％， 洗脱液不能或很少能检出木兰碱， 40％乙醇洗脱效果较好。
表 1 乙醇浓度对木兰碱的解析率 (n ＝ 3)
4.4 粗木兰花碱通过反相 C-18 玻璃小柱纯化， 5％乙醇洗液浓缩， 收集淡蓝色荧光 部分 (365nm)， 即可获得含量超过 90％的木兰花碱。使用过的 C-18 用乙醇洗涤， 分离效果 不减弱， 可反复使用， 非常经济方便。
4.5 实 验 得 到 的 淡 黄 色 产 物， 经 电 喷 雾 质 谱 检 测， 结果为 ： 准分子离子峰 343(M+1)、 685(2M+1)， 确定为木兰花碱。
实验例 2 ： 现有技术与本发明技术的比较说明 ：
现有技术 1 ： 许汉林于 2000 年 8 月在 《中国中药杂志》 第 25 卷第 8 期 486 页 -488 页 上发表论文 《裂叶星果草生物碱的研究》 中提出对裂叶星果草中的木兰花碱进行提取制备， 其方法为 ： 原药材全草 10kg， 碾碎其根茎， 其余部分切碎， 于蒸汽提取罐中用 95％乙醇提取 4h， 回收乙醇得浸膏 650g， 1.0×104ml 热蒸馏水溶解， 趁热过滤调 pH5.0 左右， 放置 24h， 过 滤， 滤液通过强酸性 732 阳离子交换树脂交换， 蒸馏水反复冲洗至中性和水至无色， 倒出树 脂晾干， 浓氨水润湿过夜， 甲醇为溶剂， 于索氏提取器中提取总生物碱， 浓缩回收甲醇， 浓缩 液干法经硅胶柱色谱， 苯 - 乙酸乙酯 - 甲醇 - 异丙醇 - 氨水 (6 ∶ 3 ∶ 2 ∶ 2 ∶ 0.5) 洗脱， 分别得 A(37 ～ 41)， B(56 ～ 59)， C(61 ～ 69) 部分 ； 在紫外灯 (365nm) 下， 切割亮蓝色荧光 带部分， 于索氏提取器中， 甲醇提取得 D 部分。以上各部分再经柱色谱纯化和离心薄层制 备， 调 pH3.0 ～ 4.0， 甲醇或乙醇结晶， A， B， C 部分分别得到结晶Ⅰ， Ⅱ， Ⅲ， D 部分得结晶Ⅳ。 其中结晶Ⅳ为木兰花碱。
现有技术 2 ： 李海滨于 2006 年 8 月在 《贵阳医学院学报》 第 31 卷第 4 期 344 页 -345 页上发表论文 《青藤生物碱成分的研究》 中提出对青藤中的木兰花碱进行提取制备， 其方法 为： 青藤干品 10kg 粉碎用 95％乙醇室温渗漉提取 3 次， 合并滤液， 浓缩得棕色浸膏 1 150g。 加入水混悬后用盐酸调节 pH 值为 3。用乙酸乙酯萃取， 减压浓缩， 得乙酸乙酯部分 (121g)， 水层用氨水碱化至 pH10， 用氯仿萃取， 得到氯仿部分 (234g)， 水部分 (521g)。取氯仿部分 (200g)， 经硅胶柱层析， 以石油醚、 乙酸乙酯、 二乙胺为溶剂系统进行梯度洗脱， 得到 3 个生 物碱类化合物 ： 化合物 1(221mg)， 化合物 2(21mg) 和化合物 3(24mg)。其中化合物 3 为木兰 花碱。 现有技术 3 ： 陈雅研等人于 1994 年在 《药学学报》 第 29 卷第 7 期 506 页 -510 页 上发表论文 《辛夷水溶性成分研究》 中也提出了从辛夷中提取制备木兰花碱的方法， 该方法 为： 取辛夷粗粉， 依次用 95％ EtOH， 30％ EtOH 渗渡， 减压浓缩得浸膏。95％ EtOH 浸膏依次 经石油醚、 CHCl3 和 EtOAc 提取后的水提取液， 用雷氏按盐法沉淀分解处理， 再经硅胶柱层 析， CHCl3-MeOH-NH4OH 梯度洗脱， 分步收集， 配合 TLC 检查， 相同部分合并， 得晶Ⅰ。晶Ⅰ为 木兰花碱。
本发明技术 ： (1) 提取 ： 取白屈菜， 切断， 加入 6 ～ 15 倍量 60 ～ 80％的乙醇回流 提取 1 ～ 5 次， 合并提取液， 滤过， 滤液减压浓缩， 搅拌加入乙醇至含乙醇量为 70 ～ 90％， 静置， 滤过， 滤液减压回收至无醇味， 加水稀释， 静置， 滤过， 弃去不溶物， 滤液调节 pH 为 1 ～ 3， 加水稀释， 得备用液Ⅰ ；
(2) 第一次树脂纯化 ： 取备用液Ⅰ， 通过大孔树脂色谱柱， 用水洗脱后， 再以 10 ～ 40％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩， 滤过， 滤液调节 pH 为 8 ～ 10， 浓缩， 得备用液Ⅱ ；
(3) 第二次树脂纯化 ： 取备用液Ⅱ， 通过大孔树脂色谱柱， 水洗脱至色浅， 再以 30 ～ 50％乙醇洗脱， 收集洗脱液， 浓缩， 干燥， 得木兰花碱粗品， 备用 ；
(4) 精制 ： 取木兰花碱粗品， 适量水溶解， 通过 C-18 或 C-8 填料色谱柱， 先以水洗 脱， 水液弃去， 再以 2 ～ 20％乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 干燥， 得到木兰花碱。
比较说明 ：
现有技术 1、 2、 3 在提取制备木兰花碱的过程中， 均不同程度地利用的苯、 乙酸乙 酯、 氯仿、 石油醚等具有一定毒性的有机溶剂， 这些制备方法不仅要耗费有机溶剂， 而且在
现代制药工业中， 要尽量减少苯、 乙酸乙酯、 氯仿、 石油醚等有机溶剂的使用， 以防止在提取 物中存在有机溶剂的残留 ；
本发明提供的技术仅仅使用了乙醇， 没有使用苯、 乙酸乙酯、 氯仿、 石油醚等有机 溶剂， 不仅可以节省有机溶剂， 而且可以有效避免提取物中有机溶剂的残留， 其技术进步性 一目了然。
本发明的有益效果 ：
1. 本发明提供了一种全新的从白屈菜中直接提取得到木兰花碱的方法， 该方法可 以制备得到含量超过 90％的木兰花碱。
2. 本发明建立了二次大孔吸附树脂纯化、 C18 柱精制的木兰碱制备方法， 与现有 的木兰花碱的制备方法相比， 该方法简便可行， 收率高， 可以得到纯度超过 90％的木兰花 碱， 并且有效避免了有机溶剂的使用， 克服现有技术中耗费有机溶剂量大， 工艺烦琐， 收率 低、 有机溶剂残留等弊端。 附图说明 ：
图1： 第一次树脂纯化前样品的高效液相色谱图
图2： 第一次树脂纯化后样品的高效液相色谱图 图3： 第二次树脂纯化后样品的高效液相色谱图 图4： C-18 柱精制样品的高效液相色谱图 图5： 木兰花碱对照品的高效液相色谱图具体实施方式 ：
实施例 1 ：
(1) 提取 ： 取白屈菜， 切断， 加入 12 倍、 10 倍、 8 倍 70％乙醇回流提取 3 次， 合并提 取液， 滤过， 滤液减压浓缩至 1 ∶ 1( 药液浓度为 1 克药材 / 毫升， 下同 )， 搅拌加入乙醇至含 乙醇量为 80％， 静置， 滤过， 滤液减压回收至无醇味， 加水稀释药液浓度为含 2 克药材 / 毫 升， 静置， 滤过， 弃去不溶物， 滤液调节 pH 为 1 ～ 3， 加水稀释至 1 ∶ 1， 得备用液Ⅰ ；
(2) 第一次树脂纯化 ： 取备用液Ⅰ， 通过 D-101 大孔树脂色谱柱， 适量水 ( 用水量 以不将木兰花碱洗脱出为准， 即洗脱液 Molish 反应为阴性， 或纸斑反应或薄层色谱检测不 得检出木兰花碱， 如果洗脱时用水量过大， 可洗出部分木兰花碱 ) 洗脱后， 再以 10％乙醇洗 脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩至 2 ∶ 1( 药液浓度为 2 克药材 / 毫升， 下同 )， 滤过， 滤液调节 pH 为 8 ～ 10， 得备用液Ⅱ。
(3) 第二次树脂纯化 ： 取备用液Ⅱ， 通过 D-101 大孔树脂色谱柱， 水洗脱至色浅， 40％乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 真空干燥， 得木兰花碱粗品， 备用。
(4) 精制 ： 取木兰花碱粗品， 适量水溶解， 通过 C-18 填料色谱玻璃小柱， 先以适量 水洗脱 ( 除去 365nm 下蓝色荧光杂质即可 )， 水液弃去， 再以 5％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液 (365nm 下蓝色荧光部分 )， 减压浓缩， 真空干燥， 得到木兰花碱。
实施例 2 ：
(1) 提取 ： 取白屈菜， 切断， 加入 6 倍 60％乙醇回流提取， 提取液滤过， 滤液减压浓 缩至 1 ∶ 1( 药液浓度为 1 克药材 / 毫升 )， 搅拌加入乙醇至含乙醇量为 70％， 静置， 滤过，滤液减压回收至无醇味， 加水稀释药液浓度为含 2 克药材 / 毫升， 静置， 滤过， 弃去不溶物， 滤液调节 pH 为 1 ～ 3， 加水稀释至 1 ∶ 1， 得备用液Ⅰ ；
(2) 第一次树脂纯化 ： 取备用液Ⅰ， 通过 D-101B 大孔树脂色谱柱， 水 ( 用水量以不 将木兰花碱洗脱出为准， 即洗脱液 Molish 反应为阴性， 或纸斑反应或薄层色谱检测不得检 出木兰花碱， 如果洗脱时用水量过大， 可洗出部分木兰花碱 ) 洗脱后， 再以 5％乙醇洗脱， 收 集醇洗脱液， 减压浓缩至 2 ∶ 1， 滤过， 滤液调节 pH 为 8 ～ 10， 得备用液Ⅱ。
(3) 第二次树脂纯化 ： 取备用液Ⅱ， 通过 XDA-1 大孔树脂色谱柱， 水洗脱至色浅， 30％乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 真空干燥， 得木兰花碱粗品， 备用。
(4) 精制 ： 取木兰花碱粗品， 适量水溶解， 通过 C-18 填料色谱柱， 先以适量水洗脱 ( 除去 365nm 下蓝色荧光杂质即可 )， 水液弃去， 再以 2％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液 (365nm 下 蓝色荧光部分 )， 减压浓缩， 真空干燥， 得到木兰花碱。
实施例 3 ：
(1) 提取 ： 取白屈菜， 切断， 10 倍 70％乙醇回流提取 3 次， 合并提取液， 滤过， 滤液 减压浓缩至 1 ∶ 1( 药液浓度为 1 克药材 / 毫升， 下同 )， 搅拌加入乙醇至含乙醇量为 80％， 静置， 滤过， 滤液减压回收至无醇味， 加水稀释药液浓度为含 2 克药材 / 毫升， 静置， 滤过， 弃 去不溶物， 滤液调节 pH 为 1 ～ 3， 加水稀释至 1 ∶ 1， 得备用液Ⅰ ； (2) 第一次树脂纯化 ： 取备用液Ⅰ， 通过 XDA-1 大孔树脂色谱柱， 适量水 ( 用水量 以不将木兰花碱洗脱出为准， 即洗脱液 Molish 反应为阴性， 或纸斑反应或薄层色谱检测不 得检出木兰花碱， 如果洗脱时用水量过大， 可洗出部分木兰花碱 ) 洗脱后， 再以 10％乙醇洗 脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩至 2 ∶ 1( 药液浓度为 2 克药材 / 毫升， 下同 )， 滤过， 滤液调节 pH 为 8 ～ 10， 得备用液Ⅱ。
(3) 第二次树脂纯化 ： 取备用液Ⅱ， 通过 AB-8 大孔树脂色谱柱， 水洗脱至色浅， 40％乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 真空干燥， 得木兰花碱粗品， 备用。
(4) 精制 ： 取木兰花碱粗品， 适量水溶解， 通过 C-18 填料色谱玻璃小柱， 先以适量 水洗脱 ( 除去 365nm 下蓝色荧光杂质即可 )， 水液弃去， 再以 5％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液 (365nm 下蓝色荧光部分 )， 减压浓缩， 真空干燥， 得到木兰花碱。
实施例 4 ：
(1) 提取 ： 取白屈菜， 切断， 加入 15 倍 80％乙醇回流提取 5 次， 合并提取液， 滤过， 滤液减压浓缩至 1 ∶ 1( 药液浓度为 1 克药材 / 毫升， 下同 )， 搅拌加入乙醇至含乙醇量为 90％， 静置， 滤过， 滤液减压回收至无醇味， 加水稀释药液浓度为含 2 克药材 / 毫升， 静置， 滤 过， 弃去不溶物， 滤液调节 pH 为 1 ～ 3， 加水稀释至 1 ∶ 1， 得备用液Ⅰ ；
(2) 第一次树脂纯化 ： 取备用液Ⅰ， 通过 XDA-1B 大孔树脂色谱柱， 适量水 ( 用水量 以不将木兰花碱洗脱出为准， 即洗脱液 Molish 反应为阴性， 或纸斑反应或薄层色谱检测不 得检出木兰花碱， 如果洗脱时用水量过大， 可洗出部分木兰花碱 ) 洗脱后， 再以 40％乙醇洗 脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩至 2 ∶ 1( 药液浓度为 2 克药材 / 毫升， 下同 )， 滤过， 滤液调节 pH 为 8 ～ 10， 得备用液Ⅱ。
(3) 第二次树脂纯化 ： 取备用液Ⅱ， 通过 HPD-450 大孔树脂色谱柱， 水洗脱至色浅， 50％乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 真空干燥， 得木兰花碱粗品， 备用。
(4) 精制 ： 取木兰花碱粗品， 适量水溶解， 通过 C-8 填料色谱柱， 先以适量水洗脱
( 用水量以除去 365nm 下蓝色荧光杂质即可 )， 水液弃去， 再以 20％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液 (365nm 下蓝色荧光部分 )， 减压浓缩， 真空干燥， 得到木兰花碱。
实施例 5 ：
(1) 提取 ： 取白屈菜， 切断， 加入 10 倍、 12 倍 65％乙醇回流提取 2 次， 合并提取液， 滤过， 滤液减压浓缩至 1 ∶ 1( 药液浓度为 1 克药材 / 毫升， 下同 )， 搅拌加入乙醇至含乙醇 量为 75％， 静置， 滤过， 滤液减压回收至无醇味， 加水稀释药液浓度为含 2 克药材 / 毫升， 静 置， 滤过， 弃去不溶物， 滤液调节 pH 为 1 ～ 3， 加水稀释至 1 ∶ 1， 得备用液Ⅰ ；
(2) 第一次树脂纯化 ： 取备用液Ⅰ， 通过 XDA-7 大孔树脂色谱柱， 适量水 ( 用水量 以不将木兰花碱洗脱出为准， 即洗脱液 Molish 反应为阴性， 或纸斑反应或薄层色谱检测不 得检出木兰花碱， 如果洗脱时用水量过大， 可洗出部分木兰花碱 ) 洗脱后， 再以 15％乙醇洗 脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩至 2 ∶ 1( 药液浓度为 2 克药材 / 毫升， 下同 )， 滤过， 滤液调节 pH 为 8 ～ 10， 得备用液Ⅱ。
(3) 第二次树脂纯化 ： 取备用液Ⅱ， 通过 HPD-100 大孔树脂色谱柱， 水洗脱至色浅， 35％乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 真空干燥， 得木兰花碱粗品， 备用。
(4) 精制 ： 取木兰花碱粗品， 适量水溶解， 通过 C-18 填料色谱玻璃小柱， 先以适量 水洗脱 ( 用水量以除去 365nm 下蓝色荧光杂质即可 )， 水液弃去， 再以 10％乙醇洗脱， 收集 醇洗脱液 (365nm 下蓝色荧光部分 )， 减压浓缩， 真空干燥， 得到木兰花碱。
实施例 6 ：
(1) 提取 ： 取白屈菜， 切断， 加入 6 倍、 8 倍、 12 倍、 15 倍量 75％乙醇回流提取 4 次， 合并提取液， 滤过， 滤液减压浓缩至 1 ∶ 1( 药液浓度为 1 克药材 / 毫升， 下同 )， 搅拌加入乙 醇至含乙醇量为 85％， 静置， 滤过， 滤液减压回收至无醇味， 加水稀释药液浓度为含 2 克药 材 / 毫升， 静置， 滤过， 弃去不溶物， 滤液调节 pH 为 1 ～ 3， 加水稀释至 1 ∶ 1， 得备用液Ⅰ ；
(2) 第一次树脂纯化 ： 取备用液Ⅰ， 通过 HPD-100 大孔树脂色谱柱， 适量水 ( 用水 量以不将木兰花碱洗脱出为准， 即洗脱液 Molish 反应为阴性， 或纸斑反应或薄层色谱检测 不得检出木兰花碱， 如果洗脱时用水量过大， 可洗出部分木兰花碱 ) 洗脱后， 再以 20％乙醇 洗脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩至 2 ∶ 1( 药液浓度为 2 克药材 / 毫升， 下同 )， 滤过， 滤液调 节 pH 为 8 ～ 10， 得备用液Ⅱ。
(3) 第二次树脂纯化 ： 取备用液Ⅱ， 通过 XDA-7 大孔树脂色谱柱， 水洗脱至色浅， 40％乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 真空干燥， 得木兰花碱粗品， 备用。
(4) 精制 ： 取木兰花碱粗品， 适量水溶解， 通过 C-18 填料色谱柱， 先以适量水洗脱 ( 用水量以除去 365nm 下蓝色荧光杂质即可 )， 水液弃去， 再以 15％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液 (365nm 下蓝色荧光部分 )， 减压浓缩， 真空干燥， 得到木兰花碱。
实施例 7 ：
(1) 提取 ： 取白屈菜， 切断， 加入 6 倍、 8 倍、 12 倍、 15 倍量 75％乙醇回流提取 4 次， 合并提取液， 滤过， 滤液减压浓缩至 1 ∶ 1( 药液浓度为 1 克药材 / 毫升， 下同 )， 搅拌加入乙 醇至含乙醇量为 85％， 静置， 滤过， 滤液减压回收至无醇味， 加水稀释药液浓度为含 2 克药 材 / 毫升， 静置， 滤过， 弃去不溶物， 滤液调节 pH 为 1 ～ 3， 加水稀释至 1 ∶ 1， 得备用液Ⅰ ；
(2) 第一次树脂纯化 ： 取备用液Ⅰ， 通过 HPD-100 大孔树脂色谱柱， 适量水 ( 用水 量以不将木兰花碱洗脱出为准， 即洗脱液 Molish 反应为阴性， 或纸斑反应或薄层色谱检测不得检出木兰花碱， 如果洗脱时用水量过大， 可洗出部分木兰花碱 ) 洗脱后， 再以 20％乙醇 洗脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩至 2 ∶ 1( 药液浓度为 2 克药材 / 毫升， 下同 )， 滤过， 滤液调 节 pH 为 8 ～ 10， 得备用液Ⅱ。
(3) 第二次树脂纯化 ： 取备用液Ⅱ， 通过 XDA-7 大孔树脂色谱柱， 水洗脱至色浅， 40％乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 真空干燥， 得木兰花碱粗品， 备用。
(4) 精制 ： 取木兰花碱粗品， 适量水溶解， 通过 C-18 填料色谱玻璃小柱， 先以适量 水洗脱 ( 用水量以除去 365nm 下蓝色荧光杂质即可 )， 水液弃去， 再以 15％乙醇洗脱， 收集 醇洗脱液 (365nm 下蓝色荧光部分 )， 减压浓缩， 真空干燥， 得到木兰花碱。
实施例 8 ：
(1) 提取 ： 取白屈菜， 切断， 加入 6 倍、 8 倍、 10 倍、 12 倍、 15 倍量 80％乙醇回流提取 4 次， 合并提取液， 滤过， 滤液减压浓缩至 1 ∶ 1( 药液浓度为 1 克药材 / 毫升， 下同 )， 搅拌 加入乙醇至含乙醇量为 90％， 静置， 滤过， 滤液减压回收至无醇味， 加水稀释药液浓度为含 2 克药材 / 毫升， 静置， 滤过， 弃去不溶物， 滤液调节 pH 为 1 ～ 3， 加水稀释至 1 ∶ 1， 得备用 液Ⅰ ；
(2) 第一次树脂纯化 ： 取备用液Ⅰ， 通过 HPD-450 大孔树脂色谱柱， 适量水 ( 用水 量以不将木兰花碱洗脱出为准， 即洗脱液 Molish 反应为阴性， 或纸斑反应或薄层色谱检测 不得检出木兰花碱， 如果洗脱时用水量过大， 可洗出部分木兰花碱 ) 洗脱后， 再以 25％乙醇 洗脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩至 2 ∶ 1( 药液浓度为 2 克药材 / 毫升， 下同 )， 滤过， 滤液调 节 pH 为 8 ～ 10， 得备用液Ⅱ。 (3) 第二次树脂纯化 ： 取备用液Ⅱ， 通过 XDA-1B 大孔树脂色谱柱， 水洗脱至色浅， 45％乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 真空干燥， 得木兰花碱粗品， 备用。
(4) 精制 ： 取木兰花碱粗品， 适量水溶解， 通过 C-18 填料色谱柱， 先以适量水洗脱 ( 用水量以除去 365nm 下蓝色荧光杂质即可 )， 水液弃去， 再以 20％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液 (365nm 下蓝色荧光部分 )， 减压浓缩， 真空干燥， 得到木兰花碱。
实施例 9 ：
(1) 提取 ： 取白屈菜， 切断， 加入 12 倍、 10 倍、 8 倍 70％乙醇回流提取 3 次， 合并提 取液， 滤过， 滤液减压浓缩至 1 ∶ 1( 药液浓度为 1 克药材 / 毫升， 下同 )， 搅拌加入乙醇至含 乙醇量为 85％， 静置， 滤过， 滤液减压回收至无醇味， 加水稀释药液浓度为含 2 克药材 / 毫 升， 静置， 滤过， 弃去不溶物， 滤液调节 pH 为 1 ～ 3， 加水稀释至 1 ∶ 1， 得备用液Ⅰ ；
(2) 第一次树脂纯化 ： 取备用液Ⅰ， 通过 AB-8 大孔树脂色谱柱， 适量水 ( 用水量 以不将木兰花碱洗脱出为准， 即洗脱液 Molish 反应为阴性， 或纸斑反应或薄层色谱检测不 得检出木兰花碱， 如果洗脱时用水量过大， 可洗出部分木兰花碱 ) 洗脱后， 再以 30％乙醇洗 脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩至 2 ∶ 1( 药液浓度为 2 克药材 / 毫升， 下同 )， 滤过， 滤液调节 pH 为 8 ～ 10， 得备用液Ⅱ。
(3) 第二次树脂纯化 ： 取备用液Ⅱ， 通过 XDA-1 大孔树脂色谱柱， 水洗脱至色浅， 50％乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 真空干燥， 得木兰花碱粗品， 备用。
(4) 精制 ： 取木兰花碱粗品， 适量水溶解， 通过 C-8 填料色谱柱， 先以适量水洗脱 ( 除去 365nm 下蓝色荧光杂质即可 )， 水液弃去， 再以 15％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液 (365nm 下蓝色荧光部分 )， 减压浓缩， 真空干燥， 得到木兰花碱。