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1、(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201310637548.2 (22)申请日 2013.11.29 C07D 493/08(2006.01) A01N 43/90(2006.01) A01P 3/00(2006.01) (73)专利权人 西北农林科技大学 地址 712100 陕西省西安市杨凌区邰诚路 3 号 (72)发明人 张雅林 王阳 孙文博 郑胜礼 (74)专利代理机构 西安通大专利代理有限责任 公司 61200 代理人 陆万寿 CN 1355168 A,2002.06.26, CN 101662939 A,2010.03.03, 全文 . Joanna Bajsa。
2、 等 .The antiplasmodial activity of norcantharidin analogs. Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters .2010,( 第 20 期 ), Tiothy A. Hill 等 .Norcantharidin analogues: synthesis, anticancer activity and protein phosphatase 1 and 2A inhibition.ChemMedChem .2008,( 第 3 期 ), (54) 发明名称 一种卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素及其制备 方法和应用 。
3、(57) 摘要 本发明公开了一种卤苯基芳香胺取代去甲 斑蝥素及其制备方法和应用， 3 - 卤苯基引入去 甲斑蝥素衍生物结构中， 形成 3 种去甲斑蝥酰胺 酸衍生物 ： N-(3 - 氯苯基 ) 去甲斑蝥酰胺酸、 N-(3 - 溴苯基 ) 去甲斑蝥酰胺酸和 N-(3 - 碘苯 基 ) 去甲斑蝥酰胺酸。此三种化合物具有广谱的 抑制植物病原真菌的活性， 可应用于斑蝥素类农 用药剂的制备。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 许敏 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书2页 说明书7页 附图8页 CN 103664978 B 2016.06.22 CN 103。
4、664978 B 1.卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素在制备农用药剂中的应用， 卤苯基芳香胺取代去甲斑 蝥素对以下植物病原真菌均有抑菌活性， 植物病原真菌为苹果褐腐菌、 烟草赤星菌、 小麦根 腐菌、 油菜菌核菌、 番茄早疫菌、 苹果腐烂菌、 梨腐烂菌、 苹果轮纹菌以及苹果炭疽菌； 卤苯 基芳香胺取代去甲斑蝥素为： N-(3 -氯苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 其结构式为： N-(3 -溴苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 其结构式为： N-(3 -碘苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 其结构式为： 2.卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素在制备抑制植物病原菌药物中的应用， 其特征在于： 是在制备抑制植物病原真菌药物中的应用， 卤苯基芳香胺取。
5、代去甲斑蝥素对以下植物病原 真菌均有抑菌活性， 植物病原真菌为苹果褐腐菌、 烟草赤星菌、 小麦根腐菌、 油菜菌核菌、 番 茄早疫菌、 苹果腐烂菌、 梨腐烂菌、 苹果轮纹菌以及苹果炭疽菌； 卤苯基芳香胺取代去甲斑 蝥素为： N-(3 -氯苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 其结构式为： N-(3 -溴苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 其结构式为： 权利要求书 1/2 页 2 CN 103664978 B 2 N-(3 -碘苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 其结构式为： 3.卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素抑制植物病原真菌的应用， 卤苯基芳香胺取代去甲斑 蝥素对以下植物病原真菌均有抑菌活性， 植物病原真菌为苹果褐腐菌、 烟草赤星菌、 。
6、小麦根 腐菌、 油菜菌核菌、 番茄早疫菌、 苹果腐烂菌、 梨腐烂菌、 苹果轮纹菌以及苹果炭疽菌； 卤苯 基芳香胺取代去甲斑蝥素为： N-(3 -氯苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 其结构式为： N-(3 -溴苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 其结构式为： N-(3 -碘苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 其结构式为： 权利要求书 2/2 页 3 CN 103664978 B 3 一种卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素及其制备方法和应用 技术领域 0001 本发明属于斑蝥素衍生物技术领域， 涉及一种卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素及其 制备方法和应用。 背景技术 0002 斑蝥素 （cantharidin） 是芫菁科昆虫体内的一种天然防御性。
7、半萜类物质， 具有明 显的抑制肿瘤、 杀虫、 杀菌的活性， 因此具有很高的研究价值， 但是由于斑蝥素的细胞毒性， 临床医学应用受到限制。 与斑蝥素相比， 其类似物去甲斑蝥素 （norcantharidin） 结构中少 了2,3位的两个甲基， 更易于合成。 临床医学已经证明其不仅保持了较强的抑制肿瘤的活 性， 而且毒副作用小， 对泌尿系统的刺激作用大大降低， 同时具有较斑蝥素更为显著的升高 白细胞作用， 完全可以作为斑蝥素的替代药物。 目前全世界以斑蝥素为起点， 合成了上千种 斑蝥素类似物， 其中临床医学效果最好的是去甲斑蝥素、 去甲斑蝥酰胺， 它们对肿瘤的活性 更强且比斑蝥素对细胞的毒副作用更。
8、低。 目前的研究热点是这些类似物对肿瘤细胞的生物 活性、 作用机制、 适应症以及和其他药物的互相促进作用， 通过对化合物的合成、 筛选和应 用， 并进行斑蝥素类似物结构和抗肿瘤活性之间相关性的研究， 以获得有希望的抗肿瘤先 导化合物。 0003 斑蝥素和去甲斑蝥素在农业方面的研究和应用也较多， 对小菜蛾等多种害虫有较 强的毒杀作用， 主要作用方式为触杀和胃毒。 对植物病原真菌的菌丝生长具有抑制作用， 造 成菌丝原生质体内液泡增多， 菌丝加粗、 中空和部分膨大。 其中去甲斑蝥素的活性类似于斑 蝥素， 虽然抑制作用略低， 但是其易合成、 成本低。 对1.0%的斑蝥素乳油和纯品进行系统的 环境安全性。
9、评价， 其对蜜蜂和家蚕为高毒， 对蝌蚪中等毒性， 对蚯蚓低毒， 对环境中非靶标 生物鹌鹑、 鲤鱼、 瓢虫、 土壤微生物均属于低毒到中等毒性， 使用时应注意其对生物的毒害 作用。 而去甲斑蝥素对生物的相对毒性要低很多， 所以去甲斑蝥素有望可以成为新型农用 药剂的先导化合物。 0004 斑蝥素资源短缺问题已成为当前困扰斑蝥素类农用药剂研发的主要瓶颈。 鉴于以 上因素的限制， 若以容易人工合成的去甲斑蝥素作为先导化合物合成一系列斑蝥素衍生 物， 筛选出与斑蝥素或去甲斑蝥素具有相似、 相同甚至更高活性的类似物， 且对环境低毒， 将会促进斑蝥素类农用药剂的产业化， 促进绿色农业的可持续发展。 发明内容 。
10、0005 本发明解决的问题在于提供一种卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素及其制备方法和 应用， 在去甲斑蝥素的基础上合成新的具有生物活性的化合物， 可应用于抑制植物病原真 菌。 0006 本发明是通过以下技术方案来实现： 0007 一种卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素， 包括： 0008 N-(3 -氯苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 其结构式为： 说明书 1/7 页 4 CN 103664978 B 4 0009 0010 N-(3 -溴苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 其结构式为： 0011 0012 N-(3 -碘苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 其结构式为： 0013 0014 一种卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素的制备方法， 包括以。
11、下操作： 0015 以去甲基斑蝥素为先导化合物， 保留其六元环与氧桥部分， 用卤苯基芳香胺通过 酰化反应取代其结构中的酸酐部分， 从而获得卤苯基芳香胺取代的开环去甲斑蝥素衍生 物。 0016 所述的卤苯基芳香胺为间氯苯胺、 间溴苯胺或间碘苯胺。 0017 所述的卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素的制备方法， 其特征在于， 具体包括以下操 作： 0018 以四氢呋喃作为溶剂， 将去甲斑蝥素与卤苯基芳香胺混合后， 室温搅拌反应12 24h， 然后分离出固体， 重结晶后得到卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素； 0019 所述的卤苯基芳香胺为间氯苯胺、 间溴苯胺或间碘苯胺。 0020 所述的去甲斑蝥素与卤苯基芳香胺的。
12、摩尔比为1： 1； 去甲斑蝥素溶解于四氢呋喃 后， 逐滴加入卤苯基芳香胺溶液， 然后室温反应1620h， 抽滤， 滤饼用丙酮洗涤后重结晶。 0021 所述的卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素是用乙酸乙酯-正己烷混合溶剂对其进行重 结晶， 其中乙酸乙酯： 正己烷的体积比为11： 2.5。 0022 所述的卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素在制备农用药剂中的应用。 0023 所述的卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素在制备抑制植物病原菌药物中的应用。 0024 所述的应用是在制备抑制植物病原真菌药物中的应用。 0025 所述的卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素抑制植物病原真菌的应用。 0026 与现有技术相比， 本发明具有以下有益。
13、的技术效果： 说明书 2/7 页 5 CN 103664978 B 5 0027 本发明提供的卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素， 是以去甲基斑蝥素为先导化合物， 保留其六元环与氧桥部分， 在室温下用芳香胺通过酰化反应取代其结构中的酸酐部分， 而 得到的具有较强抑菌活性的芳香胺取代去甲斑蝥素开环化合物， 分别为： N-(3 -氯苯基)去 甲斑蝥酰胺酸、 N-(3 -溴苯基)去甲斑蝥酰胺酸和N-(3 -碘苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 均为白 色固体。 0028 本发明提供的卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素的制备方法， 其采用一步反应完成， 简单易行。 0029 本发明提供的卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素具有广谱的抑制植。
14、物病原真菌的活 性， 可应用于斑蝥素类农用药剂的制备、 抑制植物病原真菌方面的应用。 附图说明 0030 图1为化合物N-(3 -氯苯基)去甲斑蝥酰胺酸1H-NMR谱测定结果； 0031 图2为化合物N-(3 -氯苯基)去甲斑蝥酰胺酸13C-NMR谱测定结果； 0032 图3为化合物N-(3 -溴苯基)去甲斑蝥酰胺酸1H-NMR谱测定结果； 0033 图4为化合物N-(3 -溴苯基)去甲斑蝥酰胺酸13C-NMR谱测定结果； 0034 图5为化合物N-(3 -碘苯基)去甲斑蝥酰胺酸1H-NMR谱测定结果； 0035 图6为化合物N-(3 -碘苯基)去甲斑蝥酰胺酸13C-NMR谱测定结果； 003。
15、6 图7为化合物N-(3 -氯苯基)去甲斑蝥酰胺酸对烟草赤星菌的抑菌活性； 0037 图8为化合物N-(3 -溴苯基)去甲斑蝥酰胺酸对油菜菌核菌的抑菌活性； 0038 图9为化合物N-(3 -碘苯基)去甲斑蝥酰胺酸对苹果褐腐菌的抑菌活性. 0039 其中， A:200 g/mL、 B:100 g/mL、 C:50 g/mL、 D:25 g/mL和E:10 g/mL； CK为阴性对 照。 具体实施方式 0040 下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明， 所述是对本发明的解释而 不是限定。 0041 本发明提供的卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素， 化合物名称及结构式如下所示： 0042 N-(3。
16、 -氯苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 其结构式为： 0043 0044 N-(3 -溴苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 其结构式为： 说明书 3/7 页 6 CN 103664978 B 6 0045 0046 N-(3 -碘苯基)去甲斑蝥酰胺酸， 其结构式为： 0047 0048 为了明显改善或增强去甲斑蝥素衍生物的生物活性， 本发明以去甲基斑蝥素为先 导化合物， 保留其六元环与氧桥部分， 在室温下用芳香胺通过酰化反应取代其结构中的酸 酐部分， 从而获得了上述三种卤苯基芳香胺取代的开环去甲斑蝥素衍生物； 并通过核磁共 振1H-NMR和13C-NMR进行结构分析， 并采用菌丝生长速率法测定斑蝥素衍生物对9种重要。
17、的 病原真菌的抑制作用， 结果表明其具有较强抑菌活性， 可应用于斑蝥素类农用药剂的开发。 0049 上述卤苯基芳香胺取代去甲斑蝥素的制备方法， 采用以下反应来完成： 0050 0051其中R为间氯苯基间溴苯基或间碘苯基 0052 具体的制备方法为： 0053 将去甲斑蝥素和卤苯基芳香胺 （间氯苯胺、 间溴苯胺或间碘苯胺） 溶解在500mL四 氢呋喃中， 并将该溶液逐滴加入含有等摩尔的卤苯基芳香胺试剂溶液， 滴加结束后室温搅 拌反应24h后， 抽滤， 滤饼用少量丙酮洗涤， 之后用112.5 （VV） 乙酸乙酯-正己烷混合溶 剂对其进行重结晶， 得到固体， 即为目标化合物。 0054 下面给出具体。
18、的制备实施例。 0055 实施例1 0056 化合物N-(3 -氯苯基)去甲斑蝥酰胺酸及其合成 说明书 4/7 页 7 CN 103664978 B 7 0057 0058 将100g （595mmol） 去甲斑蝥素搅拌溶解在500mL四氢呋喃中， 并将该溶液逐滴加入 含有76g的间氯苯胺溶液， 滴加结束后室温搅拌反应24h后， 抽滤， 滤饼用少量丙酮洗涤， 之 后用11 （VV） 乙酸乙酯-正己烷混合溶剂对其进行重结晶， 得到固体， 即为目标化合物。 产 物经1H-NMR谱和13C-NMR谱测定， 分析结果分别如图1、 图2所示。 0059 实施例2 0060 化合物N-(3 -溴苯基)去甲。
19、斑蝥酰胺酸及其合成 0061 0062 将100g （595mmol） 去甲斑蝥素搅拌溶解在500mL四氢呋喃中， 并将该溶液逐滴加入 含有102g的间溴苯胺溶液， 滴加结束后室温搅拌反应24h后， 抽滤， 滤饼用少量丙酮洗涤， 之 后用11.5 （VV） 乙酸乙酯-正己烷混合溶剂对其进行重结晶， 得到固体， 即为目标化合物。 产物经1H-NMR谱和13C-NMR谱测定， 分析结果分别如图3、 图4所示。 0063 实施例3 0064 化合物N-(3 -碘苯基)去甲斑蝥酰胺酸及其合成 0065 0066 将100g （595mmol） 去甲斑蝥素搅拌溶解在500mL四氢呋喃中， 并将该溶液逐滴。
20、加入 含有130g的间碘苯胺溶液， 滴加结束后室温搅拌反应16h后， 抽滤， 滤饼用少量丙酮洗涤， 之 后用11 （VV） 乙酸乙酯-正己烷混合溶剂对其进行重结晶， 得到固体， 即为目标化合物。 产 物经1H-NMR谱和13C-NMR谱测定， 分析结果分别如图5、 图6所示。 0067 所制备的去甲斑蝥素酰胺类衍生物的理化数据如表1所示。 0068 表1芳香胺取代的斑蝥素衍生物的理化数据 说明书 5/7 页 8 CN 103664978 B 8 0069 0070 下面给出其抑菌性的实施例。 0071 （1） 称取100mg药品， 溶于10mLDMSO， 配制成10mg/mL的母液； 0072。
21、 （2） 用移液枪分别吸取1000 L、 500 L、 250 L、 100 L、 50 L的母液加入50mL的PDA培 养基中， 制成终浓度为200 g/mL （A） 、 100 g/mL （B） 、 50 g/mL （C） 、 25 g/mL （D） 和10 g/mL （E） 的含药品培养基， 以DMSO为对照 （CK） 。 每个浓度和对照均设三个重复。 0073 （3） 用1ml的移液枪枪头分别在病原菌菌落边缘打菌饼， 用灭过菌的牙签挑起置于 配置好的培养基中央。 0074 （4） 培养皿倒置放于25恒温培养箱中， 120h后量菌落直径， 记录数据， 拍照。 0075 数据处理： 采用机。
22、率值分析法计算药剂对靶标菌菌丝生长的有效抑制中浓度 (EC50)。 0076 皿内抑菌试验表明， 这卤苯基芳香胺取代的开环去甲斑蝥素衍生物对多种植物病 原真菌均有很好的抑菌活性。 斑蝥素、 去甲斑蝥素为阳性对照， EC50为抑菌率50%的浓度 （ g/ mL） 。 因此， 本发明提供的三种卤苯基芳香胺取代的开环去甲斑蝥素衍生物， 可应用于斑蝥 素类农用药剂的制备， 尤其是抑制植物病原真菌方面的应用。 0077 N-(3 -氯苯基)去甲斑蝥酰胺酸对烟草赤星菌的抑菌活性、 N-(3 -溴苯基)去甲斑 蝥酰胺酸对油菜菌核菌的抑菌活性、 N-(3 -碘苯基)去甲斑蝥酰胺酸对苹果褐腐菌的抑菌 活性结果分。
23、别如图7、 图8、 图9所示， 可以看到三种衍生物均表现出抑菌性， 抑菌环明显可 见。 0078 以斑蝥素、 去甲斑蝥素为阳性对照， EC50为抑菌率50%的浓度 （ g/mL） 。 具体结果如 表2所示。 0079 表2卤苯基芳香胺取代的开环去甲斑蝥素的抑菌活性 （EC50 g/mL） 说明书 6/7 页 9 CN 103664978 B 9 0080 0081 *斑蝥素、 去甲斑蝥素为抑菌活性的阳性对照。 说明书 7/7 页 10 CN 103664978 B 10 图1 说明书附图 1/8 页 11 CN 103664978 B 11 图2 说明书附图 2/8 页 12 CN 103664978 B 12 图3 说明书附图 3/8 页 13 CN 103664978 B 13 图4 说明书附图 4/8 页 14 CN 103664978 B 14 图5 说明书附图 5/8 页 15 CN 103664978 B 15 图6 说明书附图 6/8 页 16 CN 103664978 B 16 图7 图8 说明书附图 7/8 页 17 CN 103664978 B 17 图9 说明书附图 8/8 页 18 CN 103664978 B 18 。