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1、(10)申请公布号 CN 102051357 A (43)申请公布日 2011.05.11 CN 102051357 A *CN102051357A* (21)申请号 201010556146.6 (22)申请日 2010.11.24 C12N 15/10(2006.01) (71)申请人 同济大学 地址 200092 上海市杨浦区上海市四平路 1239 号 (72)发明人 孙军 (74)专利代理机构 上海正旦专利代理有限公司 31200 代理人 张磊 (54) 发明名称 超微型核酸电洗脱仪 (57) 摘要 本发明属于生命医学科学领域， 具体涉及一 种超微型核酸电洗脱仪。由电极、 微型电洗脱容。
2、 器、 含样品胶块、 电洗脱缓冲液和冷却容器组成， 其中 ： 电极插入微型电洗脱容器内， 含样品胶块 位于正、 负电极之间， 微型电洗脱容器位于冷却容 器内， 微型电洗脱容器内充满电洗脱缓冲液。 从凝 胶中分离纯化样品是分子生物学实验中常用的技 术手段和重要的操作步骤。目前在纯化核酸等分 子的实验中， 常用仪器存在纯化产物易降解、 操作 繁琐、 成本高等缺点。为了高质量、 低成本洗脱或 回收核酸 （DNA和RNA） ， 尤其是RNA， 发明人研发了 微型微量核酸电洗胶仪。在小于 1ml 的微型电泳 环境中， 在低电压下 （ 50U） 、 短时间内 （ 20 分 钟） ， 即可有效回收 PAGE。
3、 胶中微量核酸分子， 尤其 适用易降解 RNA 样品的洗脱回收。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 4 页 CN 102051363 A1/1 页 2 1. 一种超微型核酸电洗脱仪， 由电极 (1)、 微型电洗脱容器 (2)、 含样品胶块 (3)、 电洗 脱缓冲液 (4) 和冷却容器 (5) 组成， 其特征在于电极 (1) 插入微型电洗脱容器 (2) 内， 含样 品胶块 (3) 位于正、 负电极 (1) 之间， 微型电洗脱容器 (2) 位于冷却容器 (5) 内， 微型电洗 脱容器 (2) 内充满电洗脱缓。
4、冲液 (4)。 2. 根据权利要求 1 所述的超微型核酸电洗脱仪， 其特征在于所述电洗脱仪组合使用， 即若干个微型电洗脱容器 (2) 放置于同一个冷却容器 (5) 内。 权 利 要 求 书 CN 102051357 A CN 102051363 A1/3 页 3 超微型核酸电洗脱仪 技术领域 0001 本发明属于生命医学科学领域， 具体涉及一种超微型核酸电洗脱仪 (super-mini DNA/RNA electro-eluter)。 背景技术 0002 从凝胶中分离纯化样品是分子生物学实验中常用的技术手段和重要的操作步骤。 样品分离纯化的质量直接影响下游研究工作的进行。目前在纯化核酸等分子的。
5、实验中， 常 用的仪器有Bio-rad公司的Model 422 electro-Eluter等仪器， 该仪器精巧、 适用， 可满足 大多数实验室分离纯化生物大分子的需求。 但是， 分离纯化少量核酸样品， 特别是纯化易降 解的 RNA 样品时， 该仪器显得操作繁琐。一是， 设备即便已很精巧， 但对于所分离的少量样 品而言仍显体积大、 配件多、 操作环节多等缺点， 彻底灭活 RNA 酶不容易， 少量污染即可减 少样品RNA得率 ； 二是， 该设备某些部件， 如Membrane Cap等， 处理和安装不当或有气泡， 直 接影响电洗脱效率， 或者无法进行电洗脱过程 ； 三是， 电洗脱缓冲液用量较大 （。
6、700mL 左右） ； 四是， 全套设备成本较高。 发明内容 0003 本发明的目的在于提供一种超微型核酸电洗脱仪。 0004 本发明提出的超微型核酸电洗脱仪， 由电极 1、 微型电洗脱容器 2、 含样品胶块 3、 电洗脱缓冲液 4 和冷却容器 5 组成， 其中 ： 电极 1 插入微型电洗脱容器 2 内， 含样品胶块 3 位于正、 负电极 1 之间， 微型电洗脱容器 2 位于冷却容器 5 内， 微型电洗脱容器 2 内充满电 洗脱缓冲液 4。 0005 本发明中， 所述电洗脱仪可以组合使用， 即若干个微型电洗脱容器 2 放置于同一 个冷却容器 5 内。 0006 本发明在小于 1ml 的微型电泳。
7、环境中， 在低电压下 （ 50U） 、 短时间内 （ 20 分 钟） ， 即可有效回收 PAGE 胶中微量核酸分子， 尤其适用易降解 RNA 样品的洗脱回收。 0007 本发明特点在于 ：（1） 操作极简单 ；（2） 样品分离快速 ；（3） 运行成本低 ；（4） 适合 易降解 RNA 等样品的分离和纯化。 0008 本 发 明 与 同 类 产 品 相 比 有 明 显 优 势。 以 BIO-Rad 公 司 的 model 422 electro-eluter 电洗脱仪为例， 本发明有如下优点 ： 表1. model 422 electro-eluter电洗脱仪与超微型电洗脱仪设备成本及耗材比较 。
8、说 明 书 CN 102051357 A CN 102051363 A2/3 页 4 附图说明 0009 图 1 为本发明的结构图示。 0010 图 2 为本发明实施例 2 结构图示。 0011 图 3. 在 model 422 型和超微型电洗脱仪洗脱样品中 miR-1a 的不同扩增曲线， 其 中 ： E1a ： 利用超微型电洗脱仪洗脱后得到样品 （示样品得率高） ； M1a ： 与前者样品量一样， 利用 model 422 型洗脱仪洗脱后得到样品 （示样品得率低） 。 0012 图 4. 在 model 422 型和超微型电洗脱仪洗脱样品中 miRNA-1b 的不同扩增曲线， 其中 ： E1。
9、b ： 利用超微型电洗脱仪洗脱后得到样品 （示样品得率高） ； M1b ： 与前者样品量一样， 利用 model 422 型洗脱仪洗脱后得到样品 （示样品得率低） 。 0013 图 5. 在 model 422 型和超微型电洗脱仪洗脱样品中 miRNA-2b 的不同扩增曲线， 其中 ： E2b ： 利用超微型电洗脱仪洗脱后得到样品 （示样品得率高） ； M2b ： 与前者样品量一样， 利用 model 422 型洗脱仪洗脱后得到样品 （示样品得率低） 。 0014 图中标号 ： 1 为电极 ； 2 为微型电洗脱容器 ； 3 为含样品胶块 ； 4 为电洗脱缓冲液 ； 5 为冷却容器。 具体实施方。
10、式 0015 下面通过实施例进一步说明本发明。 0016 实施例 1 ： 说 明 书 CN 102051357 A CN 102051363 A3/3 页 5 如图1所示， 含样品胶块3放置于微型电洗脱容器2内， 容器内已装有电洗脱缓冲液4 ； 正、 负电极 1 插入电洗脱缓冲液 4， 分别置于含样品胶块 3 两侧 ； 整个微型电洗脱容器外置 冷却容器 5， 防止系统过热 ； 加电后， RNA 或 DNA 样品可从含样品胶块 3 中泳动而出， 进入电 洗脱缓冲液 4 中。收集电洗脱缓冲液 4， 即可获得高得率样品。 0017 实施例 2 ： 如图 2 所示， 显示同时分离 4 个样品， 本装置。
11、可根据需要增加样品数量。 含样品胶块 3 放置于微型电洗脱容器 2 内， 容器内已装有电洗脱缓冲液 4 ； 正、 负电极 1 插 入电洗脱缓冲液 4， 分别置于含样品胶块 3 两侧 ； 将 4 个微型电洗脱容器 2 置于同一个冷却 容器 5， 防止系统过热 ； 加电后， RNA 或 DNA 样品可从含样品胶块 3 中泳动而出， 进入电洗脱 缓冲液 4 中。分别收集 4 个电洗脱缓冲液 4， 即可获得高得率样品。 0018 以 BIO-Rad 公司的 model 422 electro-eluter 电洗脱仪和本发明对洗脱样品进 行质量比较 ： 分别用上述两型电洗脱装置洗脱PAGE胶中相同RNA。
12、样品， 电洗脱后， 用Real-time PCR 检测电洗脱样品中上述三种小 RNA， 即 miR-1a、 miR-1b 和 miR-2b 的含量， 见图 3、 图 4 和图 5， 比较两装置洗脱后样品得率。 0019 图 3 中， E1a ： 超微型电洗脱仪洗脱样品， M1a ： model 422 型洗脱样品， 超微型电洗 脱仪洗脱后所得样品 E1a 经 real-time PCR 扩增， 循环数小于 model 422 型电洗脱仪所得 样品 M1a， 提示前者样品浓度高于后者。 0020 图 3-5 表明， 在超微型电洗脱仪洗脱样品中， 小 RNA 含量均高于 Model 422 型电洗 脱仪， 提示， 超微型电洗脱仪可高效、 便捷、 高得率回收样本。 说 明 书 CN 102051357 A CN 102051363 A1/4 页 6 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 102051357 A CN 102051363 A2/4 页 7 图 3 说 明 书 附 图 CN 102051357 A CN 102051363 A3/4 页 8 图 4 说 明 书 附 图 CN 102051357 A CN 102051363 A4/4 页 9 图 5 说 明 书 附 图 CN 102051357 A 。