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1、(10)授权公告号 CN 102168006 B (45)授权公告日 2012.12.19 CN 102168006 B *CN102168006B* (21)申请号 201010611694.4 (22)申请日 2010.12.28 C12G 3/04(2006.01) (73)专利权人 海南黎药堂生物科技开发有限公 司 地址 571101 海南省海口市凤翔东路 168 号 河琴温泉别墅 B2-3/4 号房 (72)发明人 戴好富 梅文莉 王辉 谌琪 (74)专利代理机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 代理人 朱建新 逯长明 CN 101735929 A,2010.06.16,。
2、 DE 202006010389 U1,2006.09.28, CN 1131028 A,1996.09.18, CN 101724540 A,2010.06.09, 程爵棠 . 仙茅益智酒 . 中国药酒大全 （第二 版） .2003, 第 108 页 . 陈熠 . 益智酒 .中国药酒大全 （第二 版） .2003, 第 92 页 . (54) 发明名称 益智保健酒及其制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种益智保健酒的制备方法， 包括以下步骤 ： 按重量比称取下述原料 ： 益智 5 30、 黄芪 1 5、 巴戟天 1 5、 女贞子 1 4、 甘草15 ； 将各原料晾干， 粉碎， 全部加入酒。
3、中 提取， 过滤除渣 ； 步骤中滤液在 60 70 下保持 4 6 小时， 冷却至 8以下， 过滤， 滤液为 益智保健酒。 本发明益智保健酒具有滋补肌体、 增 强免疫力、 美容养颜功效， 且口感良好， 价格低廉， 适合普通消费者使用。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 齐悦如 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 5 页 1/1 页 2 1. 一种益智保健酒的制备方法， 包括以下步骤 ： 、 按重量比称取下述原料 ： 、 将各原料晾干， 粉碎， 全部加入酒中提取， 过滤除渣 ； 、 步骤中滤液在6。
4、070下保持46小时， 冷却至8以下， 过滤， 滤液为益智 保健酒。 2. 如权利要求 1 所述的制备方法， 其特征在于 ： 该制备方法还包括将步骤的滤液勾 兑酒， 得到益智保健酒 ； 所述酒用量为滤液体积的 0.5 2 倍。 3. 如权利要求 2 所述的制备方法， 其特征在于 ： 所述酒的度数为 40 60 度。 4. 如权利要求 1 或 2 所述的制备方法， 其特征在于 ： 步骤酒的用量为原料总重量的 4 10 倍。 5. 如权利要求 4 所述的制备方法， 其特征在于 ： 所述酒选自米酒、 白酒、 黄酒或果酒中 的一种或多种。 6. 如权利要求 4 所述的制备方法， 其特征在于 ： 所述酒。
5、的度数为 10 度 60 度。 7. 如权利要求 1 所述的制备方法， 其特征在于 ： 步骤的提取为浸渍提取， 浸渍时间为 5 天 7 天。 8. 如权利要求 1 所述的制备方法， 其特征在于 ： 步骤的提取为加热回流提取， 回流提 取时间为 60min 120min。 9. 如权利要求 8 所述的制备方法， 其特征在于 ： 所述加热回流提取的次数为 2 次。 10. 一种如权利要求 1 或 2 所述制备方法制得的益智保健酒。 权 利 要 求 书 CN 102168006 B 2 1/5 页 3 益智保健酒及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及保健酒技术领域， 尤其是一种益智保健酒及其制。
6、备方法。 背景技术 0002 益智， 为多生热带雨林半阴性草本药用植物， 是姜科 (Zingiberaceae) 山姜属植 物益智 (Alpinia oxyphylla Miq.) 的干燥成熟果实。益智是四大南药之一， 也是卫生部 1998 年公布的既是食品又是药品的一种天然植物， 无毒， 是开发新型保健食品的良好资源。 0003 益智作为中药， 在古今中外各类医药书籍中早有收载， 如缩泉丸， 健胃剂 ； 作为食 品可以增加食欲、 减轻疲劳、 滋补肌体、 延年益寿。目前专家学者已对益智主要化学成分和 药理功能进行了较深入的研究， 发现益智含有萜类、 二芳基庚烷、 黄酮、 精油、 矿物质等多种 。
7、生物活性成分。 0004 虽然目前保健酒随着人们消费意识和生活水平的提高而得到重视， 市场规模越来 越大， 也形成了保健酒的龙头企业， 如劲酒、 椰岛鹿龟、 郎酒、 御酒堂、 黄金酒等。 这些酒均有 一定的保健作用， 深受大众喜爱。但国内外尚未见有关益智保健酒出现。 发明内容 0005 本发明针对不足， 提出一种益智保健酒的制备方法， 得到的益智保健酒具有抗氧 化、 增强抵抗力的效果。 0006 为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技术方案 ： 一种益智保健酒的制备方法， 包括以下步骤 ： 0007 、 按重量比称取下述原料 ： 0008 益智 5 30 0009 黄芪 1 5 0010 巴。
8、戟天 1 5 0011 女贞子 1 4 0012 甘草 1 5 ； 0013 、 将各原料晾干， 粉碎， 全部加入酒中提取， 过滤除渣 ； 0014 、 步骤中滤液在6070下保持46小时， 冷却至8以下， 过滤， 滤液为 益智保健酒。 0015 优选的， 该制备方法还包括将步骤的滤液勾兑酒， 得到益智保健酒 ； 所述酒用量 为滤液体积的 0.5 2 倍。 0016 优选的， 所述酒的度数为 40 60 度。 0017 优选的， 步骤酒的用量为原料总重量的 4 10 倍。 0018 优选的， 所述酒选自米酒、 白酒、 黄酒、 葡萄酒或果酒中的一种或多种。 0019 优选的， 所述酒的度数为 1。
9、0 度 60 度。 0020 优选的， 步骤的提取为浸渍提取， 浸渍时间为 5 天 7 天。 说 明 书 CN 102168006 B 3 2/5 页 4 0021 优选的， 步骤的提取为加热回流提取， 回流提取时间为 60min 120min。 0022 优选的， 所述加热回流提取的次数为 2 次。 0023 与现有技术相比， 本发明将益智、 黄芪、 巴戟天、 女贞子和甘草按照一定的重量比 配制后加入母酒浸提或加热回流提取， 取其提取液制备得益智保健酒。 所用母酒为米酒、 白 酒、 黄酒、 葡萄酒、 果酒中的一种或几种混合物。 0024 本发明保健酒是在传统中药理论指导下， 结合现代药理研究。
10、组方而成的。益智温 脾暖肾， 固气涩精 ； 黄芪补气固表， 利尿生肌 ； 巴戟天补肾助阳， 强健筋骨， 祛风除湿 ； 女贞 子滋补肝肾， 乌须明目 ； 甘草和中缓急， 补脾益气， 润肺解毒， 调和诸药。 现代药理研究表明， 益智中多种成分具有抗癌、 抗氧化和抗衰老作用 ； 黄芪具有提高肾小球滤过率， 改善多种疾 病状态下的水钠潴留， 以及调节机体免疫淋巴细胞等作用 ； 巴戟天具有保护脑缺氧损伤、 调 节内分泌、 抗衰老、 抗疲劳等功效 ； 女贞子具有抗氧化、 抗衰老和调节免疫的作用 ； 甘草具 有解毒、 抗炎、 抗病毒、 调节免疫等作用。 方中各药综合作用， 可滋补肌体、 增强免疫力、 美容 。
11、养颜。 0025 本发明制备益智保健酒的方法， 操作简单， 适合于家庭和产业制作， 采用有机溶剂 和无机溶剂混合的溶剂酒作为提取剂， 能有效地将原料中的功能成分提取出来， 再经 过常规高温灭活和低温絮沉， 过滤除渣即得到益智保健酒 ； 也可将该滤液勾兑白酒使用。 制 得的益智保健酒具有滋补肌体、 增强免疫力、 美容养颜功效， 且口感良好， 价格低廉， 适合普 通消费者使用。 具体实施方式 0026 下面结合具体实施例对本发明进行详细描述， 本部分的描述仅是示范性和解释 性， 不应对本发明的保护范围有任何的限制作用。 0027 本发明的益智保健酒制作方法为 ： 0028 1、 按照如下重量份的配。
12、比称取各原料 ： 0029 益智 5 30 0030 黄芪 1 5 0031 巴戟天 1 5 0032 女贞子 1 4 0033 甘草 1 5 ； 0034 2、 将各原料清洗， 晒干， 粉碎至 20 目。按照 1 份原料总和加 4 10 倍量的母酒浸 渍 5 7 天或加热回流提取 2 次， 每次回流提取 60min 120min。过滤， 将滤液 60高温 处理 4 小时以灭菌。然后 8以下低温处理， 使不溶物絮凝沉淀。过滤， 直接灌装， 或加入白 酒勾兑后灌装， 气密保存， 即得益智保健酒。 0035 其中， 提取所用母酒为米酒、 白酒、 黄酒、 葡萄酒、 果酒中的一种或几种混合物， 度 数。
13、为 10 60 度。 0036 勾兑用白酒量为滤液体积的 0.5 2 倍， 所用白酒度数为 40 60 度。 0037 实施例 1 0038 按照重量比称取益智 20 份， 黄芪 3 份， 巴戟天 2 份， 女贞子 2 份， 甘草 2 份。将药 材清洗， 晒干， 粉碎至 20 目， 混匀。称取原料混合粉末 1000g， 于 8000mL 的黄酒中浸泡 5 天， 说 明 书 CN 102168006 B 4 3/5 页 5 滤去残渣。 将滤液60高温处理6小时， 6低温处理后， 过滤， 灌装， 气密保存， 即得到益智 保健酒。 0039 实施例 2 0040 按照重量比称取益智10份， 黄芪2份。
14、， 巴戟天2份， 女贞子2份， 甘草1份， 清洗， 晒 干， 粉碎至 20 目， 混匀。称取原料混合粉末 1000g， 于 3000mL 的米酒和 2000m1 果酒的混合 酒中浸泡 6 天， 滤去残渣。将滤液 70高温处理 4 小时， 7低温处理后， 过滤， 加入 3000mL 的 40 度白酒勾兑， 罐装， 气密保存， 即得到益智保健酒。 0041 实施例 3 0042 按照重量比称取益智 30 份， 黄芪 3 份， 巴戟天 2 份， 女贞子 2 份， 甘草 1 份， 清洗， 晒干， 粉碎至 20 目， 混匀。称取原料混合粉末 1000g， 于 4000mL 的 60 度白酒中回流提取两 。
15、次， 回流提取时间分别为 80min 和 120min， 滤去残渣。将滤液 65高温处理 5 小时， 5低 温处理后， 过滤， 加入 4000mL 的 40 度白酒勾兑， 罐装， 气密保存， 即得到益智保健酒。 0043 试验例 1 0044 本发明保健酒的药理和药效学试验 0045 1、 实验动物 ： 昆明种小鼠 160 只， 购自海南医学院实验动物中心。雌雄各半， 平均 体重为 20g。 0046 2、 实验分组 ： 将小鼠分为 4 组， 分别为本发明保健酒试验组 1( 实施例 1 所制备的 保健酒 )、 本发明保健酒试验组 2( 实施例 2 所制备的保健酒 )2、 本发明药物保健酒试验组。
16、 3( 实施例 3 所制备的保健酒 ) 和空白对照组， 每组雌雄各半。 0047 3、 本发明保健酒的抗氧化作用 0048 (1)DPPH 法 0049 取 2ml 0.1mm 的 DPPH 溶液， 加入 0.1ml DMSO， 在 517nm 处检测其光吸收， 得 A0； 0050 取 2ml 0.1mm 的 DPPH 溶液， 加入 0.1ml 梯度样品液 ( 溶于 DMSO)， 在 517nm 处检测 其光吸收， 得 Ai ； 0051 取 2ml 0.1mm 的 DMSO， 加入 0.1ml 梯度样品液 ( 溶于 DMSO)， 在 517nm 处检测其光 吸收， 得 Aj。 0052 清。
17、除率 ( ) 1-(Ai-Aj)/A0。分别测 6 个梯度样品液， 测其 EC50值。取 Vc 作阳 性对照。 0053 (2)ABTS 法 0054 取 5ml 7mm 的 ABTS， 加入 88l 140mm K2S2O8的溶液， 适当稀释， 避光， 静置过夜， 制备成 ABTS 自由基储备液。用 20mm 的 pH4.5 的磷酸缓冲液将 ABTS 自由基储备液适当稀 释， 制成 ABTS 自由基工作液。取 30l 样品液加入 3mlABTS 自由基储备液， 反应 10s。以磷 酸缓冲液作参比， 在 734nm 处测其光吸收。取 Vc 作阳性对照。结果如表 1 所示。 0055 表 1. 。
18、本发明保健酒的抗氧化作用 说 明 书 CN 102168006 B 5 4/5 页 6 0056 0057 由表 1 所示的结果可知， 本发明保健酒对 DPPH 和 ABTS 的清除率均接近或强于阳 性对照 Vc。因此说明本发明益智保健酒具有抗氧化能力。 0058 4、 本发明保健酒对肝癌 H22荷瘤小鼠免疫功能的影响 0059 (1) 本发明保健酒对肝癌 H22荷瘤小鼠脾淋巴细胞转化功能的影响 0060 取腹腔内传代 7 天的肝癌 H22荷瘤小鼠， 在无菌条件下抽取瘤细胞， 并用生理盐水 洗涤 3 次。调瘤细胞浓度为 1107/ml。接种于昆明种小鼠腹股沟下， 每只小鼠接种 0.2ml。 接。
19、种次日起给药， 连续给药 10 天， 末次给药 24h 后， 取出小鼠脾脏， 分组研磨， 用 IMDM 培养 液调脾脏细胞浓度为 1107个 /ml。取 96 孔板， 每只鼠设 ： 0061 A ： 对照孔， 3 复孔， 每只孔加 100l IMDM 培养液 0062 B ： ConA 刺激孔， 3 复孔， 每只孔加 100l ConA(10g/ml)。 0063 然后每孔加 100l 脾细胞悬液， 在 37， 5 CO2培养箱中培养 72h， 终止培养前 4h 加入 MTT 溶液 (5mg/ml)10l/ 孔。终止培养后， 小心吸取孔内上清液， 每孔加入 100l DMSO， 振荡10min。
20、， 使结晶物充分溶解， 在570nm处测定其光吸收(OD值)， 计算刺激指数SI。 0064 SI ConA 孔 OD 值 / 对照孔 OD 值 0065 (2) 本发明保健酒对肝癌 H22荷瘤小鼠 NK 细胞毒百分率的影响 0066 取上述脾细胞悬浮液， 制备常规 YAC-1 细胞悬浮液， 调浓度为 1106个 /ml. 取 96 孔板， 每只鼠设 ： 0067 A ： 效应细胞靶细胞 (10 1) 孔， 加 50l 脾细胞悬浮液， 100l YAC-1 细胞悬 浮液， 50l IMDM 培养液 ； 效应细胞对照孔， 加 50l 脾细胞悬浮液， 150l IMDM 培养液。 0068 B ：。
21、 效应细胞靶细胞 (20 1) 孔， 加 100l 脾细胞悬浮液， 100l YAC-1 细胞 悬浮液 ； 效应细胞对照孔， 加 100l 脾细胞悬浮液， 100l IMDM 培养液。 0069 C ： 靶细胞对照孔， 加入 100l YAC-1 细胞悬浮液， 100l IMDM 培养液。 0070 上述各组均设三复孔， 将培养板于 37， 5 CO2及 100湿度的培养箱中孵育 24h， 各孔加入 MTT 溶液 (5mg/ml)10l， 同样条件下继续孵育 4h 后终止培养。然后小心吸 弃孔内上清液， 每孔加入 100l DMSO， 振荡 10min， 用酶标仪在 490nm 波长处测定 O。
22、D 值， 计 算 NK 细胞毒百分率 0071 NK 细胞毒 1-( 效靶 OD 值 - 效对 OD 值 )/ 靶对 OD 值 100 0072 (3) 本发明保健酒对肝癌 H22荷瘤小鼠 IL-2 活性的影响 0073 A ： 小鼠脾细胞 IL-2 诱生制备脾细胞悬浮液， 方法同上， 冲洗一次后调细胞浓度为 说 明 书 CN 102168006 B 6 5/5 页 7 0.5107/ml。加入终浓度为 5-10g/ml 的 ConA， 3000rpm 离心 10min 收获细胞培养上清 ( 其中含 IL-2)。 0074 B ： IL-2 活性测定将 IL-2 标准品用培养液倍比稀释， 以 。
23、3 复孔加入 96 孔板， 每孔 100l。将待测样品 1 ； 2 稀释， 亦按 3 复孔加入到 96 孔板内。将生长状态良好的 CTLL2 细 胞离心洗涤两遍， 用含 10小牛血清的 IMDM 培养液配成 5105/ml 浓度的细胞悬浮液。向 每孔加入 100l 细胞悬浮液。置于 37， 5 CO2培养箱中孵育 22h 后， 各孔加入 MTT 溶 液 (5mg/ml)10l， 同样条件下继续孵育 4h 后终止培养， 小心吸弃孔内上清液， 每孔加入 100l 的 DMSO， 振荡 10min。用酶标仪在 570nm 波长处测其 OD 值。用 log2 稀释度 (X) 和 各稀释度对应的 OD 。
24、值 (Y) 作直线回归， 分析计算待测样品的 IL-2 浓度。结果如表 2 所示。 0075 表 2 本发明保健酒对肝癌 H22荷瘤小鼠免疫功能的影响 0076 0077 由表 2 所示结果， 本发明保健酒浓缩物 ( 试验组 2 和 3) 对小鼠灌胃 10 天后， ConA 诱导的小鼠淋巴细胞增殖反应明显增高， 小鼠 NK 细胞活性也明显增高， CTLL2 诱导的产生 的 IL-2 的量也明显增加。 0078 试验例 2 本发明保健酒的毒性研究试验 0079 (1) 急性毒性研究 0080 取昆明种小鼠， 按 10ml/kg 灌胃给予本发明保健酒 ( 实施例 1 所制备的保健酒 )， 1天连续。
25、灌胃4次， 每次间隔6h， 然后给予正常饮食， 对各个器官进行病理性检查， 未发现脏 器病变。 0081 (2) 长期毒性研究 0082 取昆明种小鼠， 按中、 大剂量组(4ml/kg， 8ml/kg)灌胃给予本发明保健酒(实施例 1 所制备的保健酒 )， 每天 1 次， 连续灌胃 14 天后， 测定小鼠体重、 心功能、 肝功能、 肾功能、 心电图等指标， 给药组分别与对照组比较， 未见明显异常。 病理学检查心、 肝、 肾、 脾、 肺、 胃、 十二指肠、 大肠、 小肠、 肾上腺和生殖器等脏器， 给药组分别与对照组比较， 均未见明显中毒 性改变。以上结果提示该保健酒安全无毒， 可长期饮用。 0083 以上仅是本发明的优选实施方式， 应当指出， 对于本技术领域的普通技术人员来 说， 在不脱离本发明原理的前提下， 还可以做出若干改进和润饰， 这些改进和润饰也应视为 本发明的保护范围。 说 明 书 CN 102168006 B 7 。