技术领域
本发明属于天然中药分离纯化领域，具体涉及厚朴酚与和厚朴酚的提取方法以及其纯化 方法。
背景技术
厚朴酚与和厚朴酚具有抗氧化、抗菌作用、抗肿瘤、抗病毒、促进吸收、治疗腹泻、抗 抑郁、抗焦虑，促进神经轴突生长、有抗炎、抗凝血、抑制吗啡戒断反应等药理作用。因此 厚朴酚与和厚朴酚是高附加值精细化学品，近年来，在医药与保健食品行业有着广泛的应用， 市场前景发阔。
目前制备厚朴酚与和厚朴酚最常用的方法是用溶剂提取法从厚朴树皮中提取，但由于厚 朴酚与和厚朴酚高温易降解，溶剂提取法虽可将大部分厚朴酚与和厚朴酚分离出来，厚朴酚 提取率可达7.893mg/g，和厚朴酚提取率可达1.938mg/g，但在溶剂提取加热的过程，厚朴酚 与和厚朴酚易发生降解，导致厚朴酚与和厚朴酚的收率降低；此外该方法还存在溶剂残留的 问题。
从厚朴树皮中提取的厚朴酚与和厚朴酚是两种物质的混合物，需进行分离纯化以得到高 纯厚朴酚与和厚朴酚，目前文献中普遍采用的纯化方法是重结晶法和大孔树脂吸附法。虽然 重结晶法纯化厚朴酚与和厚朴酚的纯度高，纯度可达90％以上，但是重结晶法操作次数多， 收率低、耗时长、污染比较严重。大孔树脂吸附法纯化厚朴酚与和厚朴酚的纯度高，然而大 孔树脂吸附法分离效果差、有机残留物高强度差、使用寿命短、使用过程中破碎严重、预处 理难度大。
发明内容
本发明的目的：针对现有厚朴酚与和厚朴酚分离与纯化方法的不足，提供一种连续性制 备高纯厚朴酚与和厚朴酚的方法。采用本发明制备高纯厚朴酚与和厚朴酚具有操作温度温和、 无溶剂残留、产物纯度高、分离效果好、速度快、重复性高等优点。
为实现本发明的目的，采用的方案如下：
(1)厚朴树皮预处理
本步骤将厚朴树皮于50℃下干燥24h，干燥冷却，用粉碎机粉碎厚朴树皮，过80目与 200目分样筛，得到80～200目的厚朴树皮粉末，储存于干燥器中，备用。
(2)超临界CO2萃取法萃取厚朴酚与和厚朴酚
本步骤将第(1)得到的100g80～200目的厚朴树皮粉末装入装料桶，将装料桶放入萃取 釜中装好，控制萃取压力在18～28Mpa，萃取釜温度加热至35～55℃，调节CO2流量维持在 10～32L/h，分离釜温度加热至35～45℃，控制分离压力在5～7Mpa，调节夹带剂(乙醇)流量 维持在0～3L/h，控制萃取时间为5～210min，进行从厚朴树皮中萃取出厚朴酚与和厚朴酚，并 收集分离釜中的萃取液(乙醇-萃取物)。
(3)厚朴酚与和厚朴酚萃取后处理
将第(2)步中所收集的萃取液置于旋转蒸发器中，在50～60℃下进行旋转蒸发，分别收 集蒸发出的乙醇溶剂与蒸发余液，回收乙醇溶剂，将收集的蒸发余液在0～4℃下保存，备用。
(4)半制备型高效液相色谱法纯化厚朴酚与和厚朴酚
将第(3)步中得到的蒸发余液，用0.45μm滤膜过滤，以甲醇-水(75∶25或78∶22，V/V)， 于294nm波长下用半制备型高效液相色谱进行纯化，分别收集经半制备型高效液相色谱纯化 后的厚朴酚与和厚朴酚组分。
(5)厚朴酚与和厚朴酚纯化后处理
将第(4)步中所收集的厚朴酚与和厚朴酚组分分别置于旋转蒸发器中，在50～60℃下进 行旋转蒸发，分别收集蒸发出的甲醇溶剂与蒸发余液，回收甲醇溶剂，将收集的蒸发余液在 0～4℃下保存1天，有结晶析出，将已在0～4℃下保存1天的蒸发余液进行抽滤，将得到的固 体-18～-10℃下进行冷冻干燥，即得到产物厚朴酚晶体与和厚朴酚晶体。
本发明采用上述技术方案后，主要有以下效果：
1.产品纯度高。本发明所制得的厚朴酚与和厚朴酚的纯度高。经高效液相色谱分析知， 厚朴酚与和厚朴酚纯度均可达98％及以上。
2.萃取率高。本发明所制备的厚朴酚与和厚朴酚的萃取率高。经高效液相色谱分析知， 厚朴酚萃取率最高可达10.6630mg/g，和厚朴酚萃取率最高可达5.3736mg/g。
3.纯化方法简单。本发明方法使用甲醇-水为流动相纯化后厚朴酚与和厚朴酚，所用的 甲醇溶剂沸点低，易通过加压蒸馏除去，所得到的蒸发余液为水相，厚朴酚与和厚朴酚不溶 于水，故厚朴酚与和厚朴酚结晶析出，通过抽滤可得产品，纯化简单。
4.经济环保。本发明方法条件温和，能耗低，CO2便宜易得，并可循环再利用，从而降 低降低生产成本，有利于环境保护。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
一种连续性制备高纯厚朴酚与和厚朴酚的方法的具体步骤如下：
(1)厚朴树皮预处理
本步骤将厚朴树皮于50℃下干燥24h，干燥冷却，用粉碎机粉碎厚朴树皮，过80目与 200目分样筛，得到80～200目的厚朴树皮粉末，储存于干燥器中，备用。
(2)超临界CO2萃取法萃取厚朴酚与和厚朴酚
本步骤将第(1)步得到的100g80～200目的厚朴树皮粉末装入装料桶，将装料桶放入萃 取釜中装好，控制萃取压力在22Mpa，萃取釜温度加热至45℃，调节CO2流量维持在25L/h， 分离釜温度加热至38℃，控制分离压力在7Mpa，调节夹带剂(乙醇)流量维持在2.4L/h， 控制萃取时间为70min，进行从厚朴树皮中萃取出厚朴酚与和厚朴酚，并收集分离釜中的萃 取液(乙醇-萃取物)。
(3)厚朴酚与和厚朴酚萃取后处理
将第(2)步中所收集的萃取液置于旋转蒸发器中，在50～60℃下进行旋转蒸发，分别收 集蒸发出的乙醇溶剂与蒸发余液，回收乙醇溶剂，并将收集的蒸发余液在0～4℃下保存，备 用。
(4)半制备型高效液相色谱法纯化厚朴酚与和厚朴酚
将第(3)步中得到蒸发余液，用0.45μm滤膜过滤，以甲醇-水(75∶25，V/V)，于294nm 波长下用半制备型高效液相色谱进行纯化蒸发余液，分别收集经半制备型高效液相色谱纯化 后的厚朴酚与和厚朴酚组分。
(5)厚朴酚与和厚朴酚纯化后处理
将第(4)步中所收集的厚朴酚与和厚朴酚组分分别置于旋转蒸发器中，在50～60℃下进 行旋转蒸发，分别收集蒸发出的甲醇溶剂与蒸发余液，回收甲醇溶剂，将收集的蒸发余液在 0～4℃下保存1天，有结晶析出，将已在0～4℃下保存1天的蒸发余液进行抽滤，将固体于 -18～-10℃下进行冷冻干燥，得到产物厚朴酚晶体与和厚朴酚晶体。
最终，厚朴酚萃取率为10.2803mg/g，和厚朴酚萃取率5.2403mg/g，经半制备型高效液相 色谱后，厚朴酚纯度为98.21％，和厚朴酚纯度为98.03％。
实施例2
一种连续性制备高纯厚朴酚与和厚朴酚的方法的具体步骤，同实施例1，其中：
第(2)步中，控制萃取压力在22Mpa，萃取釜温度加热至35℃，调节CO2流量维持在 30L/h，分离釜温度加热至45℃，控制分离压力在7Mpa，调节夹带剂(乙醇)流量维持在2.4L/h， 控制萃取时间为60min，进行从厚朴树皮中分离厚朴酚与和厚朴酚，并收集分离釜中的萃取 液(乙醇-萃取物)。
最终，厚朴酚萃取率为7.5304mg/g，和厚朴酚萃取率3.4294mg/g，经半制备型高效液相 色谱后，厚朴酚纯度为98.22％，和厚朴酚纯度为98.01％。
实施例3
一种连续性制备高纯厚朴酚与和厚朴酚的方法的具体步骤，同实施例1，其中：
第(2)步中，控制萃取压力在18Mpa，萃取釜温度加热至45℃，调节CO2流量维持在 30L/h，分离釜温度加热至45℃，控制分离压力在7Mpa，调节夹带剂(乙醇)流量维持在2.4L/h， 控制萃取时间为60min，进行从厚朴树皮中分离厚朴酚与和厚朴酚，并收集分离釜中的萃取 液(乙醇-萃取物)。
最终，厚朴酚萃取率为7.2647mg/g，和厚朴酚萃取率3.4402mg/g，经半制备型高效液相 色谱后，厚朴酚纯度为98.29％，和厚朴酚纯度为98.05％。
实施例4
一种连续性制备高纯厚朴酚与和厚朴酚的方法的具体步骤，同实施例1，其中：
第(2)步中，控制萃取压力在22Mpa，萃取釜温度加热至48℃，调节CO2流量维持在 20L/h，分离釜温度加热至41℃，控制分离压力在7Mpa，调节夹带剂(乙醇)流量维持在2.4L/h， 控制萃取时间为70min，进行从厚朴树皮中分离厚朴酚与和厚朴酚，并收集分离釜中的萃取 液(乙醇-萃取物)。
最终，厚朴酚萃取率为10.2997mg/g，和厚朴酚萃取率5.1316mg/g，经半制备型高效液相 色谱后，厚朴酚纯度为98.37％，和厚朴酚纯度为98.43％。
实施例5
一种连续性制备高纯厚朴酚与和厚朴酚的方法的具体步骤，同实施例1，其中：
第(2)步中，控制萃取压力在26Mpa，萃取釜温度加热至48℃，调节CO2流量维持在 20L/h，分离釜温度加热至41℃，控制分离压力在7Mpa，调节夹带剂(乙醇)流量维持在2.4L/h， 控制萃取时间为70min，进行从厚朴树皮中分离厚朴酚与和厚朴酚，并收集分离釜中的萃取 液(乙醇-萃取物)。
最终，厚朴酚萃取率为10.6630mg/g，和厚朴酚萃取率5.3736mg/g，经半制备型高效液相 色谱后，厚朴酚纯度为98.67％，和厚朴酚纯度为98.33％。
实施例6
一种连续性制备高纯厚朴酚与和厚朴酚的方法的具体步骤，同实施例1，其中：
第(2)步中，控制萃取压力在22Mpa，萃取釜温度加热至45℃，调节CO2流量维持在 25L/h，分离釜温度加热至45℃，控制分离压力在7Mpa，调节夹带剂(乙醇)流量维持在0L/h， 控制萃取时间为70min，进行从厚朴树皮中分离厚朴酚与和厚朴酚，并收集分离釜中的萃取 液(乙醇-萃取物)。
最终，厚朴酚萃取率为6.8323mg/g，和厚朴酚萃取率2.6661mg/g，经半制备型高效液相 色谱后，厚朴酚纯度为99.23％，和厚朴酚纯度为98.97％。
实施例7
一种连续性制备高纯厚朴酚与和厚朴酚的方法的具体步骤，同实施例6，其中：
第(4)步中，将蒸发余液，用0.45μm滤膜过滤，以甲醇-水(78∶22，V/V)，于294nm 波长下用半制备型高效液相色谱进行纯化蒸发余液，分别收集经半制备型高效液相色谱纯化 后的厚朴酚与和厚朴酚组分。
最终，厚朴酚萃取率为6.8323mg/g，和厚朴酚萃取率2.6661mg/g，经半制备型高效液相 色谱后，厚朴酚纯度为99.53％，和厚朴酚纯度为99.33％。
实施例8
一种连续性制备高纯厚朴酚与和厚朴酚的方法的具体步骤，同实施例1，其中：
第(2)步中，控制萃取压力在22Mpa，萃取釜温度加热至45℃，调节CO2流量维持在 25L/h，分离釜温度加热至38℃，控制分离压力在5.5Mpa，调节夹带剂(乙醇)流量维持在 2.4L/h，控制萃取时间为70min，进行从厚朴树皮中分离厚朴酚与和厚朴酚，并收集分离釜中 的萃取液(乙醇-萃取物)。
最终，厚朴酚萃取率为8.8411mg/g，和厚朴酚萃取率3.8721mg/g，经半制备型高效液相 色谱后，厚朴酚纯度为98.45％，和厚朴酚纯度为98.17％。