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作为mGlu5拮抗剂的新型杂环化合物
    【技术领域】

    本发明涉及对促代谢受体mGlu5亚型具有选择性亲和力的新型杂环化合物以及包含该化合物的药物组合物。

    背景技术

    下泌尿道疾病包括一类影响正常排尿的症状。下泌尿道疾病可能通过泌尿生殖系统的病理学和/或年龄相关改变或其他病因学如神经学障碍的组合作用而发展。患有下泌尿道疾病的患者生活质量受损，包括困窘、自我感觉差以及情绪状况、社交功能和健康状况的普遍下降。而且，下泌尿道疾病可能与其他身体疾病有关，包括蜂窝织炎、压迫性溃疡、泌尿道感染，骨折性跌倒、睡眠剥夺、回避社交、抑郁和性功能障碍。患有下泌尿道疾病的老年患者可能需要来自家庭和专业机构的护理人员更多的关注，这种需求可能导致住院的决定。

    根据美国国家卫生研究院(NIH)，估计高达3500万美国人患有下泌尿道疾病。截止到80岁下泌尿道疾病在女性中比男性中更常发(2∶1)，80岁以后男女发病率相当。下泌尿道疾病的患病率随年龄增长。到65岁时有15％-30％的个体患有下泌尿道疾病，大约50％需要长期护理。

    已采用各种作用模式的药物来治疗下泌尿道疾病。包括直接作用于下泌尿道的药物，如抗毒蕈碱类和α1拮抗剂，经中枢神经系统起效的药物如5-羟色胺和/或去甲肾上腺素再摄取抑制剂。然而，根据NIH，虽然在下泌尿道疾病的诊断、控制和治疗方面取得了一些进展，该疾病仍然常常是难治。因此，仍然需要用于治疗下泌尿道疾病的改良的药物、制剂和疗法。

    谷氨酸是一种兴奋性氨基酸，在整个中枢神经系统的突触中存在，已知作用于至少两种类型的受体：亲离子和亲代谢性谷氨酸盐受体。

    亲离子谷氨酸盐受体的主要功能在于其活化形成了配体-门控离子通道，从而直接介导神经细胞的电信号转导，在突触后膜中快速产生相对大的导电性改变。亲代谢性谷氨酸盐受体(mGluR)通过影响细胞内经G蛋白的代谢过程来间接调控电信号转导。因此，通过mGluR介导的突触后细胞中的改变随时间变化较慢，并不伴随快速且大的神经元膜电导的改变。

    已鉴定了亲离子谷氨酸盐受体的三种亚型，即NMDA、AMPA和红藻氨酸盐亚型。

    已克隆了亲代谢性谷氨酸盐受体的八种亚型。基于序列相似性以及药理学和生物化学性质，这些亚型可分成三组(Spooren等，TrendsPharmacol.Sci.22：331-337，2001)：组I mGlu受体(mGlu1和mGlu5)，组IImGlu受体(mGlu2和mGlu3)和组III mGlu受体(mGlu4，mGlu6，mGlu7和mGlu8)。

    已知组I受体mGlu5(人或大鼠)包括至少两种亚型，“a”和“b”。亚型“b”比亚型“a”长，因为胞内结构域开始下游50个残基C-末端(胞内)结构域中32-氨基酸链的选择性剪接。人mGlu5b包括1212个氨基酸，而“a”亚型缺少877-908的氨基酸(第828个氨基酸是胞内结构域的第一个氨基酸)。大鼠mGlu5b包括1203个氨基酸，而“a”亚型缺少876-907的氨基酸(第827个氨基酸是胞内结构域的第一个氨基酸)。(Hermans和Challis，Biochem.J.359：465-484，2001)。

    mGlu受体属于GPCR第3家族，其特征是两个独特的拓扑结构域：含有负责激动剂结合的Venus捕蝇模块的大的胞外N末端结构域，以及参与受体激活和G-蛋白偶联的7-TM结构域加上胞内C-末端结构域。

    已证明mGlu I受体的7-TMD能够形成结合正和负变构调节剂的口袋；负变构调节剂经高通量筛选技术鉴定，用作非竞争性拮抗剂，对激动剂结合没有影响。除了高效能之外，这些分子最有趣的性质还在于在突出的亚型选择性。

    7-TM结合区位于TM-III、TM-V、TM-VI和TM-VII形成的口袋中；该位点对应于视紫红质中的视黄醛结合口袋。

    mGlu5的变构调节剂代表了调节特异性mGluR亚型活性的新型研究工具和治疗剂开发过程中具有潜力的令人兴奋的进展。

    本发明的化合物总是报道为mGlu5拮抗剂，但事实上它们是作用于7-TM结合区的负变构调节剂。

    WO 00/63166揭示了适用于治疗不同疾病，包括尿失禁的三环氨基甲酸衍生物。揭示该衍生物是组I mGlu受体的激动剂或拮抗剂，对mGlu1受体具有特异性。

    WO 01/32632揭示了适用于治疗不同疾病，包括尿失禁的嘧啶衍生物。揭示该衍生物是mGlu 1受体的选择性拮抗剂，对mGlu1受体选择性是mGlu5受体的至少10倍。

    WO 01/27070揭示了适用于治疗尿失禁等疾病的新型双芳基乙酰胺。揭示该分子mGlu 1受体的选择性激动剂或拮抗剂。

    US 6,369,222揭示了适用于治疗尿失禁等疾病的杂环氮基嘧啶衍生物。揭示该衍生物是mGlu 1受体的拮抗剂。

    因此，上述申请和专利揭示了可用于治疗尿失禁的mGlu1受体拮抗剂。然而，这些申请和专利无论是在下泌尿道疾病的人患者或是动物模型中均未提供治疗尿失禁的实验支持。

    我们在适用于检测下泌尿道活性的大鼠模型中测试了选择性mGlu1和选择性mGlu5拮抗剂的活性。意外地发现mGlu5受体选择性拮抗剂的优良活性，而两种市售mGlu1受体选择性拮抗剂不具有该效果。组II mGluR受体的选择性拮抗剂在大鼠模型中也不具有效果。基于这些结果，mGlu5选择性拮抗剂可能是治疗下泌尿道疾病的有效方式。

    因此，本发明人意外地发现，给予谷氨酸盐mGlu5受体的负变构调节剂(在该本发明中称为mGlu5拮抗剂)能提供对排尿反射的强效抑制作用。因此，这些调节剂可用于治疗下泌尿道疾病及其症状，国际专利申请WO04/067002(Recordati)。

    发明详述

    本发明提供了具有以下通式I的化合物：

    

    式中：

    R′代表氢原子或羟基或不存在；

    Z代表下式基团

    

    X′代表氧原子或亚甲基；

    R₁代表

    氢或卤素原子，

    羟基、氰基、苯基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基羰基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烷基羰氧基、C₁-C₆烷氧基羰氧基、C₁-C₆烷硫基、二-(C₁-C₆烷基)-氨基或C₃-C₁₄环烷基，或

    含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的C₁-C₉杂环基团；

    R_a代表氢原子或C₁-C₆烷基或不存在；

    R₂代表

    含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的单-或双环C₁-C₉杂环基团；

    任选取代的单-、双-或三环C₆-C₁₄芳基，

    任选取代的C₁-C₆烷基，

    任选取代的C₂-C₆烯基，或

    任选取代的C₃-C₆环烷基，

    或R₂代表基团-C(O)-R_2A，其中R_2A的定义与上述R₂相同；

    R₃代表

    氢原子，

    任选取代的C₁-C₆烷基，

    含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的单-、双-或三环C₁-C₁₄杂环基团；

    任选取代的单、双或三环C₆-C₁₄芳基，

    任选取代的C₃-C₆环烷基，或

    任选取代的C₃-C₆环烯基，

    Y代表式-C(O)-、-C(S)-、-NH-C(O)-、-N(C₁-C₆烷基)-C(O)-、-O-C(O)-、-NH-C(S)-、-N(C₁-C₆烷基)-C(S)-、-O-C(S)-或-SO₂-的基团或不存在。

    m是0、1或2；

    n是0、1或2；

    ----代表任选的双键；和

     代表连接所示含氮杂环的位点。

    化合物I的对映体、非对映体、N-氧化物和药学上可接受的盐也包括在本发明范围内。

    本发明优选的化合物是Z代表式(i-a)基团的那些化合物

    

    还优选的化合物是m为1、n为1且所示含氮杂环完全饱和的化合物。组合这些优选形式和优选的Z基团，得到以下最优选的化合物II。

    

    在化合物I中，各个任选的取代基中的取代基是：

    卤素原子或氧代、硝基、氰基、羟基、氨甲酰基、C₁-C₆烷基磺酰基、C₁-C₆烷硫基、C₁-C₆烷基羰基或C₁-C₆烷基羰基-(C₁-C₆)烷基或式-NR^*R^*的基团、其中R^*各自独立地代表氢原子或C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基羰基、苯基或苄基，或

    C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基或C₁-C₆烷氧基，各自任选地具有1-8个独立选自氧代、卤素、氰基、硝基、氨基、羟基或苯基的取代基。

    C₃-C₉单-或双环烷基，任选地具有1-3独立选自C₁-C₆烷基、氧代、卤素、氰基、硝基、氨基、羟基或苯基的取代基，或

    式-A、-O-A、-C(O)-A、-(CH₂)q-A、-NR^**-A、-C(O)NR^**-A、-NR^**C(O)-A或-OC(O)-A的基团，

    其中A代表含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的苯基或C₁-C₈杂环，每个基团A可任选地具有1-3个独立选自卤素、羟基、氰基、硝基或C₁-C₆烷基的取代基，

    R^**各自独立地代表氢原子或C₁-C₆烷基，和

    q为0或1-6的整数。

    本发明的化合物是适用于治疗哺乳动物下泌尿道神经肌肉功能障碍、偏头痛和胃食管返流疾病(GERD)的mGlu5拮抗剂。如果人体和动物的治疗方法能够申请专利，则本发明涉及治疗哺乳动物下泌尿道神经肌肉功能障碍、治疗偏头痛和治疗胃食管返流疾病(GERD)的方法。

    Y优选代表式-C(O)-、-NH-C(O)-、-N(C₁-C₆烷基)-C(O)-，-O-C(O)-、-NH-C(S)-或-SO₂-的基团或不存在。

    R₁优选代表氢或氟原子或甲基、苯基、羟基、甲氧基、甲氧基羰氧基、二甲基氨基或哌啶子基(piperidino)。如果Z代表式(i-a)的基团，R₁优选代表氢或氟原子或甲基或苯基。

    R₂优选代表

    含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的单-或双环C₁-C₉杂环基团；

    任选取代的苯基，

    任选取代的C₁-C₆烷基，

    任选取代的C₂-C₆烯基，

    任选取代的C₃-C₆环烷基，

    或基团-C(O)-R_2A，其中R_2A的定义与上述R₂相同。

    更优选地，R₂代表任选取代的吡咯烷基，噻唑基，吡啶基，喹啉基，喹喔啉基或苯基，各个取代基可任选地被以下基团取代：氟、氯或溴原子、或氧代、硝基、氰基、氰基甲基、乙酰基、甲基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、乙酰氨基、2，2-二甲基丙酰基氨基、3，3-二甲基-2-氧代-1-吖丁啶基、1-吡咯烷基甲基、1H-吡唑-1-基、3-甲基-1，2，4-噁二唑-5-基或吗啉代。该基团尤其优选的是R₂代表被氟原子和/或甲基取代的吡啶基或苯基的化合物，进一步的取代基是任选的。

    最优选地，R₂代表6-甲基-2-吡啶基、5-氰基-2-吡啶基、3-氟苯基、2，5-二氟苯基或3，5-二氟苯基。

    R₃优选代表

    被任选取代的基团A取代的C₁-C₆烷基，

    含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的单-或双环C₁-C₉杂环基团；

    任选取代的苯基，

    任选取代的C₃-C₆环烷基，或

    任选取代的C₃-C₆环烯基。

    最优选地，R₃代表含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子以及至少两个相邻碳原子的单-或双环C₁-C₉杂环基团，其中一个碳原子连接于所示含氮杂环的氮原子(Y不存在)，另一个碳原子具有氰基或硝基取代基，进一步的取代基是任选的。

    可选地，R₃可代表任选取代的吡咯烷基、吡唑基、咪唑基、1，2，4-三唑基、异噁唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、哌啶基、吡嗪基、嘧啶基、吗啉基、咪唑并[2，1-b]噻唑基、吲哚基、异吲哚基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、1，2，3-苯并三唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、吡啶并[2，3-b]吡嗪基、1，4-苯并噁嗪基或苯基，各个取代基可任选地被以下基团取代：氟、氯、溴或碘原子、或甲基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氰基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、乙酰基、乙酰氨基、苯基、苄氧基、苯基氨甲酰基、4-氟苯基、3-氟-4-甲基苯基、2-呋喃基、2-噻吩基、4-吡啶基、哌啶子基、2-嘧啶基、2-嘧啶氧基、1，3-噻唑-2-基、2-甲基-1，3-噻唑-4-基、2-氧代-吡咯烷-1-基、5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基、2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基。

    最优选地，R₃代表6-甲基-3-硝基-2-吡啶基、6-甲基-3-氰基-2-吡啶基、4-甲氧基-3-氰基-2-吡啶基、3-氰基-2-噻吩基、或3-氰基-2-吡嗪基。

    本发明最优选的化合物是下述实施例中制备的那些化合物。

    本发明化合物的选择性可通过下述方法进行测定：

    (a)分别测定测试化合物对mGlu5受体、mGlu1受体和组II mGlu受体的结合亲和力；

    (b)鉴定具有以下性质的测试化合物：

    (1)与mGlu5受体的结合亲和力至少为10-6M，和

    (2)与mGlu5受体的结合亲和力是mGlu1受体和组II mGlu受体的至少10倍。

    (c)分别测定步骤(b)中鉴定的各个化合物用作mGlu5受体的拮抗剂或反激动剂的能力。

    优选地，通过评价化合物在人体或动物模型系统中治疗下泌尿道疾病的活性来证实上述步骤(a)、(b)和(c)中鉴定的化合物的活性。更优选地，所鉴定的化合物在提高清醒大鼠膀胱容积容量方面具有活性。

    术语“盐”可包括酸加成盐或游离碱的加成盐。优选地，所述盐是药学上可接受的。可用于形成药学上可接受的酸加成盐的酸的例子包括但不限于：无毒性无机酸，例如硝酸、磷酸、硫酸或氢溴酸、氢碘酸、氢氟酸、亚磷酸，以及无毒性有机酸，例如脂族单-和二羧酸、苯基取代的烷酸、羟基烷酸、烷二酸、芳族酸、脂族和芳族磺酸、乙酸、马来酸、琥珀酸或柠檬酸。这些盐的非限制性例子包括：萘二磺酸盐、苯磺酸盐、硫酸盐、焦硫酸盐、重硫酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、异丁酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐等。也考虑氨基酸盐如精氨酸盐等和葡萄糖酸盐、半乳糖醛酸盐(参见例如，Berge，等《药用盐)》(“Pharmaceutical Salts”)，J.Pharm.Sci.1977；66∶1)。

    通常，可方便地采用所需的酸或碱来制备化合物I药学上可接受的盐。可由溶液沉淀盐并过滤收集，或者通过蒸发溶剂进行回收。例如，可将如盐酸等酸的水溶液加入化合物I的水性悬浮液中，所得混合物蒸发至干(冻干)而获得固态的酸加成盐。.或者，可将化合物I溶解在合适的溶剂中，例如醇如异丙醇，然后加入用相同溶剂或另一种合适的溶剂配制的酸。所得酸加成盐可直接沉淀，或者通过加入极性较低的溶剂如二异丙基醚或己烷，通过过滤进行分离。

    化合物I的酸加成盐可通过以下方式制备：使游离碱形式与足量的所需酸接触，以常规方式制备盐。游离碱形式可以通过使盐形式与碱接触并以常规方式分离游离碱进行再生。游离碱形式在某些物理性质如极性溶剂中的溶解度方面不同于其各自的盐形式，但在本发明目的的其它方面盐等同于其各自的游离碱。

    用金属或胺形成药学上可接受的碱加成盐，例如碱金属和碱土金属或有机胺。用作阳离子的金属的例子包括钠、钾、镁、钙等。合适的胺的例子包括：N，N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、二环己基胺、乙二胺、N-甲基葡萄糖胺和普鲁卡因。

    所述酸性化合物的碱加成盐可通过以下方式制备：使游离酸形式与足量的所需碱接触，以常规方式制备盐。游离酸形式可以通过使盐形式与酸接触并分离游离酸进行再生。

    本发明的化合物同时具有碱性和酸性中心，因而是两性形式。

    有机化学领域的技术人员将理解，许多有机化合物可与溶剂形成络合物，它们在这些溶剂中反应或者由这些溶剂沉淀或结晶出来。这些络合物称为“溶剂合物”。例如，与水形成的络合物称为“水合物”。本发明化合物的溶剂合物在本发明的范围内。化合物I的盐可形成溶剂合物(如水合物)，本发明也包括所有这些溶剂合物。术语“溶剂合物”的涵义是本领域技术人员所熟知的，即溶剂与溶质相互作用形成的化合物(即溶剂化作用)。用于制备溶剂合物的技术是本领域众所周知的(参见例如，Brittain.药物固体中的多态现象(Polymorphism in Pharmaceutical solids)，Marcel Decker，纽约，1999)。

    化合物I可以外消旋混合物或以任何其他组合形式存在。外消旋混合物经过对映体富集方法，产生富含特定对映体的组合物，或者拆分形成包含单一对映体的组合物。

    将非对映体的复杂混合物纯化成对映体通常需要两个步骤。第一步，将非对映体的混合物拆分形成对映体对。第二步，将对映体对进一步纯化形成富含一种或另一种对映体的组合物，或者更优选地拆分形成包含纯对映体的组合物。对映体的拆分通常需要与手性试剂，例如溶剂或柱基质发生反应或者分子相互作用。例如，拆分可通过以下方式实现：通过与第二试剂纯的对映体(即拆分剂)反应，使对映体的混合物如外消旋混合物转化为非对映体的混合物。然后分离得到的两种非对映体产物。然后通过反向进行初始的化学转化反应，使分离的非对映体重新转化为纯的对映体。

    对映体的拆分也可根据其与手性物质非共价结合的差异性来实现，例如在纯手性吸附剂上进行色谱分离。对映体和色谱吸附剂之间的非共价结合形成非对映体络合物，导致色谱体系中流动相和结合相中的差异性分配。因此，两种对映体以不同速率通过色谱体系(如色谱柱)，实现它们的分离。

    手性拆分柱是本领域公知的并且是商业可得的(例如，从加利福尼亚州莱克福里斯特MC技术有限公司(MetaChem Technologies Inc.)，ANSYS技术股份有限公司(ANSYS Technologies，Inc.)的分公司获得)。例如，可采用HPLC的手性固定相(CSP)来分析和纯化对映体。手性HPLC柱通常包含固定于硅胶填充材料表面的一种形式的对映体化合物。

    D-苯基甘氨酸和L-亮氨酸是I类CSP，利用π-π相互作用、氢键、偶极-偶极相互作用和空间相互作用的组合来实现手性识别。为在I类柱上进行拆分，分析物对映体必需包含与CSP互补的官能团，使得分析物与CSP发生必要的相互作用。样品优选应包含以下官能团之一：π-酸或π-碱，氢键供体和/或受体，或酰胺偶极。有时衍生化可用于在缺乏活性位点的化合物中增加相互作用位点。最常见的衍生物包括由胺和羧酸形成酰胺。

    MetaChiral ODM^TM是II类CSP的一个例子。形成溶质-CSP络合物的主要机制是利用吸引相互作用，但包合络合物也可能起重要作用。氢键、π-π相互作用和偶极叠合对于在MetaChiral^TM ODM上进行手性拆分是重要的。如果溶质分子不含溶质-柱相互作用所需的基团，衍生化可能是必需的。对于一些强极性分子如胺和羧酸，衍生化(通常是苄基酰胺)可能是必需的，否则这些分子将与固定相通过非特异性的空间相互作用而发生强效相互作用。

    式I的化合物可分离形成非对映体对，例如通过柱色谱或硅胶上的TLC进行分离。这些非对映体对在这里称为具有较高TLC Rf的非对映体；和具有较低TLC Rf的非对映体。非对映体可利用本领域公知的方法进一步富集成富含特定的对映体或拆分成单一的对映体，如本文所述。

    非对映体对的相对构型可利用理论模型或规则来演绎(如Cram规则，Felkin-Ahn模型)或根据计算化学程序采用更可靠的三维模型进行演绎。在许多情况下，这些方法能够预测哪种非对映体是化学转化的能量有益产物。或者，非对映体对的相对构型可通过发现非对映体对之一(或两者)的单一对映体的绝对构型间接进行确定。

    立体中心的绝对构型可通过本领域技术人员公知的方法进行测定(例如，X-射线衍射、圆二色谱)。绝对构型的确定也可用于验证理论模型的预测性，有助于将这些模型的应用扩展到根据类似机制的反应(例如，酮还原和氢化物导致的酮的还原胺化)制备的相似分子。

    当遇到双键且R₂是烷基和/或m不是1时，本发明还包括顺式-反式的立体异构体，以及它们的混合物。将肟的末端双键键合原子之一连接的最高Cahn-Ingold-Prelog优先性基团与肟的羟基进行比较。如果C＝N双键两侧的肟羟基与最高优先性基团位于参考平面的同侧，该立体异构体称为Z(德语zusammen＝一起)或顺式(Syn)；另一立体异构体称为E(德语entgegen＝对侧)或反式。

    本发明还包括化合物I的前药，即给予哺乳动物对象后在体内释放式I的活性母体药物的化合物。前药是一种药理学活性，或者更常见无活性的化合物，它可通过代谢转化转化为药理学活性试剂。化合物I的前药可通过修饰化合物I上存在的官能团来制备，修饰的方式使得能够在体内裂解而释放母体化合物。在体内，前药容易在生理学条件下发生化学变化[例如在天然产生的酶的作用下]，导致药理学活性剂的释放。前药包括其中的羟基、氨基或羧基连接任何可在体内裂解以分别再生游离羟基、氨基或羧基的基团的化合物I。前药的例子包括但不限于：化合物I的酯(例如，乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物)或接触生理学pH或者在酶作用下转化为活性母体药物的任何其他衍生物。本领域描述了选择和制备合适的前药衍生物的常规方法(参见例如，Bundgaard.《前药设计》(Design ofPro-drugs)，Elsevier，1985)。

    前药可以和它们转化形成的活性成分相同的方式给予，或者它们可以储库形式递送，例如经皮贴片或其他储库，适配成使得(通过提供酶或其他合适的试剂)前药能够随时间变化缓慢转化为活性成分并将活性成分递送至患者。

    本发明还包括代谢物。本文所述化合物的“代谢物”是当化合物代谢时形成的化合物的衍生物。术语“活性代谢物”表示当化合物代谢时形成的化合物的生物学活性衍生物。术语“代谢的”表示活体内特定物质发生变化的过程总和。简言之，所有体内存在的化合物都受到酶的控制以产生能量和/或从体内消除。特定的酶导致化合物产生特定的结构改变。例如，细胞色素P450催化各种氧化还原反应，而二磷酸尿苷葡萄糖醛酰基转移酶催化活化的葡糖醛酸分子转化为芳族醇、脂族醇、羧酸、胺和游离巯基。关于代谢的进一步信息可由《治疗剂的药理学基础》(The Pharmacological Basis of Therapeutics)，第9版，McGraw-Hill(1996)，第11-17页获得。

    本文所述化合物的代谢物可通过给予宿主化合物并分析来自宿主的组织样品进行鉴定，或者通过在体外将化合物与肝细胞一起孵育并分析所得化合物进行鉴定。两种方法都是本领域众所周知的。

    【附图说明】

    图1显示与运载体处理的对照相比，口服给予1和3毫克/千克实施例1的化合物对大鼠膀胱容积容量的影响随时间的变化。

    图2显示与运载体处理的对照相比，口服给予0.3和1毫克/千克实施例10的化合物对大鼠膀胱容积容量的影响随时间的变化。

    图3显示与运载体处理的对照相比，口服给予1和3毫克/千克参比化合物MTEP对大鼠膀胱容积容量的影响随时间的变化。

    本文所用下泌尿道症状和病理学的命名在Abrams等，Neurol.and Urodyn.21：167-178(2002)和Andersson等，Pharmacol.Rev.56：581-631(2004)中提出。

    排泄功能障碍可粗略地分类为储存或排空紊乱。在膀胱储存阶段过程中经历储存症状，包括白天频率增加、夜尿(晚上醒来一次或多次进行排泄)、尿急(难以延迟地突然而强迫性渴望排尿)和尿失禁(任何不经意地尿液渗漏)。尿失禁可根据症状进一步表征。压力性尿失禁是做功或用力时，或者打喷嚏或咳嗽时不经意的渗漏。欲望性尿失禁是伴有尿急或者刚好在尿急后的不经意的尿液渗漏。混合性尿失禁是与尿急有关的不经意的尿液渗漏，也与用力做功、打喷嚏或咳嗽等有关。充溢性尿失禁是超出膀胱容量(例如没能排空)后发生的不经意的尿液渗漏。遗尿也指任何不经意的尿液损失。夜间遗尿症是睡眠期间发生的尿液损失。

    排泄症状包括：尿液流的慢流、分裂或喷射，间歇流(间歇性，即排尿期间尿液流动停止并重新开始)，排尿踌躇(个体准备好排尿后难以启动排尿而导致排泄发生延迟)，应变和终末滴落(排尿的最后部分延长，此时尿液流表现为滴流/滴落)。

    下泌尿道疾病可根据症状群(即综合征)或病因学进一步分类。患有膀胱活动过度(OAB)综合征的个体通常患有尿急、尿失禁、白天频率增加或夜尿的症状。OAB是逼尿肌过度活动导致的结果，称为逼尿肌不稳定。逼尿肌不稳定可能是非神经性异常引起的，如膀胱结石、肌病、泌尿道感染或药物副作用或者可以是特发性的。

    神经源性活动过度膀胱(或神经源性膀胱)是一类已知的神经性疾病继发的逼尿肌过度活动导致的膀胱活动过度，称为逼尿肌反射亢进。神经性疾病患者，如中风、帕金森病、糖尿病、多发性硬化、周围神经病或脊髓损伤患者常常患有神经源性膀胱活动过度。

    膀胱炎(包括间质性膀胱炎)是病因未知的下泌尿道疾病，主要影响年轻和中年妇女，虽然男性和儿童也可能受感染。间质性膀胱炎的症状可包括：排泄症状、白天频率增加、尿急、夜尿、或排泄相关且排泄后缓解的耻骨弓上或骨盆疼痛。许多间质性膀胱炎患者还出现头疼以及胃肠道和皮肤问题。在一些情况下，间质性膀胱炎也可能与溃疡或膀胱瘢痕有关。

    前列腺炎和前列腺痛是影响约2-9％成年男性患者的其他下泌尿道疾病。前列腺炎是前列腺的炎症，包括细菌性前列腺炎(急性和慢性)和非细菌性前列腺炎。急性和慢性细菌性前列腺炎的特征是前列腺的炎症和前列腺腺体的细菌感染，通常伴有疼痛、白天频率增加和/或尿急的症状。慢性细菌性前列腺炎基于该疾病的复发性质而区别于急性细菌性前列腺炎。慢性非细菌性前列腺炎的特征是未知病因导致的前列腺的炎症，伴有前列腺分泌物中过量炎症细胞的存在而一般不与前列腺腺体的细菌感染有关，通常伴有疼痛、白天频率增加和/或尿急的症状。前列腺痛是缺乏前列腺炎症、前列腺细菌感染和前列腺分泌物中炎症细胞水平升高的类似前列腺炎症状的一类疾病。前列腺痛可能伴有疼痛、白天频率增加和/或尿急的症状。

    良性前列腺增生(BPH)是40岁以上男性中非常常见的前列腺非恶性增大。据信BPH是因为前列腺腺体和间质元件的过度细胞生长导致的。BPH的症状可包括频率增加、尿急、欲望性尿失禁、夜尿和排泄症状，包括尿液流的慢流、分裂或喷射，间歇性，踌躇，应变和终末滴落。

    有效量的化合物I可以在需要治疗的患者中用于治疗下泌尿道疾病。下泌尿道疾病的治疗包括治疗储存症状和排泄症状。下泌尿道疾病的治疗也包括治疗白天频率增加，夜尿，尿急，尿失禁(包括欲望性尿失禁、压力性尿失禁、混合性尿失禁和充溢性尿失禁)，遗尿(包括夜晚遗尿)、尿液流的慢流、分裂或喷射，间歇性，踌躇，应变和终末滴落。

    下泌尿道疾病的治疗还包括：OAB综合征的治疗，包括一种或多种尿急、尿失禁、白天尿频或夜尿症状的治疗。

    下泌尿道疾病的治疗还包括：当上述疾病、症状和/或综合征是膀胱炎(包括间质性膀胱炎)，前列腺炎，BPH，神经障碍，泌尿顺应性降低(即，膀胱储存容量降低)引起的或与其相关时，任何一种上述疾病、症状和/或综合征的治疗。

    化合物I可用于治疗不经意的尿液渗漏，即尿失禁，如欲望性尿失禁、压力性尿失禁、混合性尿失禁或充溢性尿失禁。这些尿失禁可能是OAB或BPH引起的和/或与其相关。

    药物组合物

    虽然化合物I可以直接给予，但优选作为药物制剂中的活性成分，例如所述试剂与根据给药途径和标准药学实践选择的药学上可接受的载体混合。

    因此，在一个方面，本发明也提供一种药物组合物，其包含化合物I，或其对映体、非对映体、N-氧化物或药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。

    化合物I可与其他疗法和/或活性剂联用。因此，在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含至少一种化合物I或其药学上可接受的衍生物，第二活性剂以及任选的药学上可接受的载体。

    当在同一制剂中组合时，应理解两种化合物必须稳定并且相互间以及与制剂中的其他组分相容。单独配制时，它们可以是任何合宜的制剂形式，根据本领域中这种化合物已知的方式方便地进行配制。

    术语“载体”表示与活性化合物一起给予的稀释剂、赋形剂和/或运载体。本发明药物组合物可包含多于一种载体的组合。这些药用载体可以是无菌液体，例如水、盐水溶液、右旋糖水溶液、甘油水溶液；和油，包括石油、动物、植物或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。优选采用水或水溶液、盐水溶液以及水性右旋糖和甘油溶液作为载体，特别适合于注射液。合适的药用载体在E.W.Martin的《雷明登药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)第18版中描述。

    本发明化合物可配制成适合用作人用药和兽用药并以任何方便的方式给予，因此本发明范围内包括包含适合用作人用药和兽用药的本发明化合物的药物组合物。这些组合物可以在一种或多种合适的载体的帮助下以常规方式使用。用于治疗目的的可接受的载体是药剂学领域众所周知的，参见例如《雷明顿药物科学》(麦克出版公司(Mack Publishing Co.)，A.R.Gennaro编，1985)。药用载体的选择可基于指定的给药途径和标准药学实践。除载体外，药物组合物还可包含任何合适的粘合剂、润滑剂、助悬剂、包衣试剂和/或增溶剂。

    药物组合物可包含防腐剂、稳定剂、染料、甚至是调味剂。防腐剂的例子包括苯甲酸钠、抗坏血酸和对羟基苯甲酸酯。也可使用抗氧化剂和助悬剂。

    可采用已知的研磨方法如湿磨法来研磨本发明的化合物，以得到适合压片和其他制剂类型的粒度。本发明化合物的细分(纳米颗粒)制剂可通过本领域已知的方法制备，例如参见WO 02/00196(SmithKline Beecham)。

    给药途径和单位剂型

    给药(递送)途径包括但不限于以下一种或多种：口服(例如，片剂、胶囊或可摄取的溶液剂)，外用，粘膜途径(例如，鼻腔喷雾剂或吸入气溶胶)，经鼻，胃肠外途径(例如，通过可注射的形式)，胃肠途径，脊柱内，腹膜内，肌肉内，静脉内，子宫内，眼内，皮内，颅内，气管内，阴道内，脑室内，大脑内，皮下，眼(包括玻璃体内或眼房内)，透皮，经直肠，含服，硬膜外和舌下。

    因此，本发明组合物包括特别配制成适合(例如)胃肠外，口服，含服，经直肠，外用，植入，眼用，鼻用或泌尿生殖应用的形式。在优选实施方式中，本发明药物组合物可配制成适合口服递送的形式。

    根据不同的递送系统，存在不同的组成/配制要求。应理解，并非所有的化合物都需要通过相同途径给予。类似地，如果组合物包含多于一种的活性组分，则这些组分可通过不同途径给予。例如，本发明药物组合物可配制成采用微型泵或通过粘膜途径递送，例如作为鼻腔喷雾剂或吸入气溶胶或可摄取溶液剂，或者经胃肠外递送，其中，将所述组合物配制成可注射形式，例如通过静脉内、肌肉内或皮下途径递送。或者，制剂可设计成经多种途径递送。

    如果试剂经胃肠道粘膜的粘膜途径递送，该试剂应在转运通过胃肠道过程中保持稳定，例如应耐受蛋白水解降解，在酸性pH下稳定并且耐受胆汁的清除作用。例如，可用肠溶包衣对化合物I进行包衣。可将肠溶包衣材料分散或溶解到水或合适的有机溶剂中。可单独使用或联用以下一种或多种肠溶包衣聚合物：例如甲基丙烯酸共聚物、乙酸邻苯二甲酸纤维素、乙酸丁酸纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素、聚乙烯基乙酸酯邻苯二甲酸酯、乙酸偏苯三酸纤维素、羧甲基乙基纤维素、虫胶或其他合适的肠溶包衣聚合物的溶液或分散体。出于环境原因，优选水性包衣方法。在这种水性方法中，最优选甲基丙烯酸共聚物。

    适当时，药物组合物吸入给予，以栓剂或阴道栓的形式给予，以洗剂、溶液剂、乳膏、软膏或撒粉的形式外用，使用皮肤贴片，以包含淀粉或乳糖等赋形剂的片剂形式口服给予，或单独或与赋形剂混合的胶囊或卵泡形式，以包含调味剂或着色剂的酏剂、溶液剂或混悬剂形式给予，或者可以胃肠外注射给予，例如静脉内、肌内或皮下。对于含服或舌下给药，组合物可以是采用常规方式配制的片剂或锭剂形式。

    本发明药物组合物可以经胃肠外途径给予，例如通过输注或注射。对于经胃肠外途径给予本发明的组合物，这种给药途径可包括以下一种或多种：静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内或皮下给予药物；和/或采用输注技术。适合注射或输注的药物组合物可以是包含活性成分的无菌水溶液、分散体或无菌粉末形式，所述无菌粉末可以在需要时经调节制成适合输注或注射的无菌溶液或分散体。制剂可任选地包封到脂质体中。在所有情况下，最终的制剂必须无菌、液体并且在制备和储存条件下保持稳定。为提高储存稳定性，这些制剂也可包含防腐剂以防止微生物的生长。防止微生物的作用可通过加入各种抗菌剂或抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯类、三氯叔丁醇或抗坏血酸来实现。在许多情况下，推荐等渗物质，例如糖、缓冲剂和氯化钠以确保渗透压与体液，尤其是血液相似。这些可注射混合物的延长吸收可通过引入吸收延迟剂，如单硬脂酸铝或明胶来实现。

    可以用液体载体或媒介物，例如甘油、液体聚乙二醇、三醋汀油和它们的混合物来制备分散体。液体载体或媒介物可以是溶剂或液体分散介质，包括例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇等)、植物油、无毒性甘油酯及其合适的混合物。通过形成脂质体，对于分散体是给予合适的粒度，或者通过加入表面活性剂来维持合适的流动性。

    对于胃肠外给药，化合物最好是无菌水溶液形式，可包含其他物质如足量的盐或葡萄糖以使溶液与血液等渗。需要时，水溶液应适当缓冲(优选pH

    3-9)。在无菌条件下制备合适的胃肠外制剂容易采用本领域技术人员熟知的标准药学技术来实现。

    将式I、II或III的化合物与适当的溶剂以及一种或多种上述载体混合，然后无菌过滤，制备无菌注射溶液。对于适用于制备无菌注射溶液的无菌粉末，优选的制备方法包括真空干燥和冻干，提供醛固酮受体拮抗剂和后续制备无菌溶液所需赋形剂的粉末状混合物。

    本发明化合物可配制用作注射给予的人用或兽用药物(例如，通过静脉内推注(intravenous bolus injection)或输注或经肌内，皮下或鞘内途径)，并且可以单位剂型、安瓿、其他单位剂量容器、或以多剂量容器形式呈现，需要时加入防腐剂。用于注射的组合物可以是在油性或水性运载体中的混悬剂、溶液剂或乳剂形式，可包含配制试剂如助悬剂、稳定剂、增溶剂和/或分散剂。或者，活性成分可以是无菌粉末形式，使用前用合适的运载体如无菌无热原的水进行重建。

    本发明化合物可以片剂、胶囊、卵泡、酏剂、溶液剂或混悬剂形式给予(例如口服或外用)，可包含调味剂或着色剂，用于立即、延迟、调节、持续、脉冲式或受控释放应用。

    本发明化合物也可以适用于口服或含服给药的形式用于人用或兽用，例如以溶液、凝胶、糖浆剂、漱口水或混悬剂的形式，或以在使用前用水或其他运载体进行构建的干燥粉末形式，任选地包含调味剂和着色剂。也可使用固体组合物如片剂、胶囊、锭剂、锭剂、丸剂、大丸剂、粉末剂、糊剂、颗粒剂、子弹型试剂或预混制剂。可根据本领域众所周知的方法制备口服使用的固体和液体组合物。这些组合物也可包含一种或多种固体或液体形式的药学上可接受的载体和赋形剂。

    片剂可包含：赋形剂，例如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、二碱式磷酸钙和甘氨酸；崩解剂，例如淀粉(优选玉米淀粉、马铃薯淀粉或木薯淀粉)、淀粉羟乙酸钠、交联羧甲基纤维素钠和某些络合硅酸盐；造粒粘合剂，例如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶和阿拉伯胶。

    此外，还可包含润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸、甘油二十二烷酸酯和滑石粉。

    可以速释片或控释片、微粒、微型片、胶囊、囊剂和口服溶液剂或混悬剂的形式、或用于制备所述制剂的粉末形式口服给予所述组合物。除了本发明新的固态形式的活性物质泮托拉唑之外，口服制剂还可任选地包含各种标准药用载体和赋形剂，如粘合剂，填充剂、缓冲液，润滑剂，助流剂，染料，崩解剂，除臭剂，甜味剂，表面活性剂，脱模剂，抗粘剂和包衣。一些赋形剂在组合物中可具有多重作用，例如同时用作粘合剂和崩解剂。

    用于本发明中使用的口服组合物的药学上可接受的崩解剂的例子包括但不限于：淀粉、预胶化淀粉、淀粉羟乙酸钠、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、藻酸盐、树脂、表面活性剂、泡腾组合物、水性硅酸铝和交联的聚乙烯吡咯烷酮。

    适合本文所述口服组合物的药学上可接受的粘合剂包括但不限于：阿拉伯胶；纤维素衍生物、如甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素或羟乙基纤维素；明胶、葡萄糖、右旋糖、木糖醇、聚甲基丙烯酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、山梨糖醇、淀粉、预胶化淀粉、黄芪胶、苍耳烷树脂(xanthane resin)、藻酸盐、硅酸镁铝、聚乙二醇或膨润土。

    适合口服组合物的药学上可接受的填充剂的例子包括但不限于：乳糖、无水乳糖、乳糖一水合物、蔗糖、右旋糖、甘露醇、山梨糖醇、淀粉、纤维素(尤其是微晶纤维素)、二氢-或无水-磷酸钙、碳酸钙和硫酸钙。

    适合本发明组合物的药学上可接受的润滑剂的例子包括但不限于：硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇、环氧乙烷聚合物、月桂醇硫酸钠、月桂醇硫酸镁、油酸钠、硬脂酰醇富马酸钠和胶体二氧化硅。

    适用于口服组合物的药学上可接受的除臭剂的例子包括但不限于：合成香料和天然芳香油如油、花、果实(例如香蕉、苹果、酸樱桃、桃)的提取物以及它们的组合和类似的香料。其应用取决于多种因素，最重要的因素是摄取该药物组合物的人群的器官感觉接受度。

    适用于口服组合物的药学上可接受的染料的例子包括但不限于：合成和天然染料，例如二氧化钛、β-胡萝卜素和葡萄柚皮的提取物。

    通常用于促进吞咽、调节释放性质、改善外观和/或掩蔽组合物的味道的用于口服组合物的药学上可接受的包衣的例子包括但不限于：羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素和丙烯酸酯-甲基丙烯酸酯共聚物。

    适用于口服组合物的药学上可接受的甜味剂的例子包括但不限于：阿斯巴特、糖精、糖精钠、环拉酸钠、木糖醇、甘露醇、山梨糖醇、乳糖和蔗糖。

    合适的药学上可接受的缓冲剂的例子包括但不限于：柠檬酸、柠檬酸钠、碳酸氢钠、二碱式磷酸钠、氧化镁、碳酸钙和氢氧化镁。

    合适的药学上可接受的表面活性剂的例子包括但不限于：月桂醇硫酸钠和聚山梨酯。

    明胶胶囊中也可使用相似类型的固态组合物作为填充剂。该方面优选的赋形剂包括：乳糖、淀粉、纤维素、乳糖或高分子量聚乙二醇。对于水性混悬剂和/或酏剂，试剂可与各种甜味剂或调味剂，着色剂或染料组合，与乳化剂和/或助悬剂组合，与稀释剂如水、乙醇、丙二醇和甘油组合，以及与它们的组合物组合。

    本发明化合物也可配制成适合人用或兽用的例如含有常规栓剂基质的栓剂，或者例如含有常规阴道栓基质的阴道栓。

    本发明化合物可配制成适合人用或兽用的软膏、乳膏、凝胶、水凝胶、洗剂、溶液、香波、粉末(包括喷雾或撒粉)、阴道栓、棉塞、喷雾剂、浸渍剂、气溶胶、滴剂(例如眼、耳或鼻用滴剂)或倾泻形式，用于外用。

    对于皮肤外用，本发明试剂可配制成包含悬浮或溶解在例如一种或多种以下物质的混合物中的合适的乳膏：矿物油、液状石蜡、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蜡、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚乙二醇、液状石蜡、聚山梨酯60、十六烷基酯蜡、十六十八醇(cetearyl alcohol)、2-辛基十二烷醇、苄基醇和水。这些组合物也可包含其他药学上可接受的赋形剂，如聚合物、油、液体载体、表面活性剂、缓冲液、防腐剂、稳定剂、抗氧化剂、润湿剂、软化剂、着色剂和除臭剂。

    适合这种外用组合物的药学上可接受的聚合物的例子包括但不限于：丙烯酸聚合物；纤维素衍生物，如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素或羟丙基纤维素；天然聚合物，如藻酸盐、黄芪胶、果胶、黄原胶和壳聚糖(cytosan)。

    有用的合适的药学上可接受的油的例子包括但不限于：矿物油、硅酮油、脂肪酸、醇和二醇。

    合适的药学上可接受的液体载体的例子包括但不限于：水、醇或二醇如乙醇、异丙醇、丙二醇、己二醇、甘油和聚乙二醇、或它们的混合物，其中假多晶型物溶解或分散在无机或有机缓冲液中，任选地加入无毒性阴离子、阳离子或非离子表面活性剂。

    合适的药学上可接受的防腐剂的例子包括但不限于：各种抗菌剂和抗真菌剂如溶剂，例如乙醇、丙二醇、苄基醇、三氯叔丁醇、季铵盐和对羟基苯甲酸酯类(如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯等)。

    合适的药学上可接受的稳定剂和抗氧化剂的例子包括但不限于：乙二胺四乙酸(EDTA)、硫脲、生育酚和丁基羟基茴香醚。

    合适的药学上可接受的润湿剂的例子包括但不限于：甘油、山梨糖醇、尿素和聚乙二醇。

    合适的药学上可接受的软化剂的例子包括但不限于：矿物油、肉豆蔻酸异丙酯和棕榈酸异丙酯。

    化合物也可经皮或透皮给药，例如通过采用皮肤贴片。

    对于眼科应用，可将化合物配制成在等渗、pH调节的无菌盐水中的微米化混悬剂，或者优选地在等渗、pH调节的无菌盐水中的溶液，任选地与防腐剂如氯化苄基烷醇盐(benzyl alkonium chloride)组合。

    如上所述，本发明化合物可鼻内或吸入给药，以干粉吸入剂或气溶胶喷雾制剂的形式从加压容器、泵、喷雾器或雾化器方便地递送，这些制剂采用合适的推进剂，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氢氟代烷如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134AT)或1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷(HFA 227EA)，二氧化碳或其他合适的气体。在加压气溶胶的情况下，可通过阀门递送计量用量，以确定剂量单位。加压容器、泵、喷雾器或雾化器可包含活性化合物的溶液或混悬液，例如采用乙醇和推进剂的混合物作为溶剂，可额外的包含润滑剂如山梨聚糖三油酸酯。

    吸入器或吹入器中使用的胶囊和药筒(例如由明胶制备)可配制成包含化合物和合适的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。

    对于通过吸入的外用给药，本发明化合物可通过喷雾器递送用作人用或兽用药物。

    本发明药物组合物可包含0.01-99％(w/v)的活性成分。对于外用给药，例如，组合物通常包含0.01-10％，更优选0.01-1％的活性成分。

    活性剂也可以脂质体递送系统的形式给予，例如小单室囊泡、大单室囊泡和多室囊泡。脂质体可由各种磷脂形成，例如胆固醇、硬脂酰胺或磷脂酰胆碱。

    可将包含有效量的本发明化合物的药物组合物或单位剂型给予需要治疗E.J.McGuire在《坎贝尔泌尿外科学》(“Campbell’s UROLOGY”)，第5版，616-638，1986，W.B.Saunders公司中描述的下泌尿道神经肌肉功能障碍的动物，优选人。

    在此所用术语“有效量”是指可使特定疾病的至少一种症状或参数得到可测定的改善的量。在优选实施方式中，化合物治疗泌尿道疾病，例如尿急、膀胱活动过度、尿频、泌尿顺应性降低(膀胱储存容量降低)、膀胱炎(包括间质性膀胱炎)、尿失禁、尿液渗漏、遗尿、排尿困难、排尿犹豫和膀胱排空困难。在另一优选实施方式中，化合物治疗偏头痛。在其他优选的实施方式中，化合物用于治疗GERD。

    可根据依上述指导原则通过常规的实验而确定的剂量和给药方案给予本发明的药物组合物或单位剂型，以对具体病人获得最佳活性的同时使毒副作用最小。然而，根据本文所述的指导原则，治疗方案的这种微调是常规的。

    本发明活性药物的剂量可根据诸多因素改变，例如，基础疾病状况、个体状况、体重、性别和年龄，以及给药方式。用此领域中一般技术人员已知的经验方法可以容易地确定治疗一种疾病的有效量，这些方法如建立给药剂量和频率的模型(matrix)，并将模型中每个点的一组实验单元或受试者进行比较。给予某患者的确切量可根据疾病的状态和严重性以及患者的身体状态而变。任何症状或参数的可测定的改善可由精通此领域的医生测得或由患者报告给医师。应该知道，任何临床上或统计学上显著的泌尿道疾病症状或参数的减轻或改善都在本发明的范围内。临床上显著的减轻或改善是指患者和/或医师可察觉到的。

    例如，一位患者可同时有多种排尿困难的症状，例如尿急和尿频或两者都有，这些症状都可用本发明的方法来减轻。如果是尿失禁，任何不希望的排尿频率或体积的降低都被认为是本发明治疗方法的有益效果。

    药剂的给药量约为0.01-25毫克/千克/天，优选约0.1-10毫克/千克/天，最优选0.2-5毫克/千克/天。应理解，本发明药物组合物不一定需要包含能够有效治疗疾病的药物的全部量，因为这种有效量可通过给予多剂量的所述药物制剂来实现。

    在本发明的优选实施方式中，将化合物I配制成胶囊或片剂，优选包含10-200毫克本发明的化合物，优选以总的日剂量10-300毫克，优选20-150毫克，最优选约50毫克给予患者，以减轻尿失禁或其他功能障碍。

    以药物组合物的总重量为100％计，用于胃肠外给药的药物组合物包含约0.01-100重量％的本发明活性剂。

    以剂型总重量为100％计，通常透皮剂型包含约0.01-100重量％的活性剂。

    对于下泌尿道疾病的治疗，化合物I可与至少一种其他类型的治疗剂联合给予。这种其他类型的治疗剂可以是抗毒蕈碱药，例如但不限于奥昔布宁、托特罗定、达非那新、索非那新(solifenacin)、曲司铵(trospium)、非特罗定(fesoterodine)和替米维林。

    与至少一种化合物I的组合疗法可还包括采用选择性或非选择性COX抑制剂的治疗。非选择性COX抑制剂的例子包括但不限于：布洛芬、萘普生、苯噁洛芬、氟比洛芬、非诺洛芬、芬布芬、酮洛芬、吲哚洛芬、吡洛芬、卡洛芬、硫噁洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸、氟洛芬、吲哚美辛、舒林酸、托美丁、佐美酸、双氯芬酸、芬氯酸、异丁芬酸、乙酰基水杨酸、吡罗昔康、替诺昔康、萘丁美酮、酮咯酸、阿扎丙宗、甲芬那酸、托芬那酸、二氟尼柳、阿西美辛、芬替酸、环氯茚酸、甲氯芬那酸、氟芬那酸、尼氟酸、氟苯柳、舒多昔康、依托度酸、水杨酸、贝诺酯、伊索昔康、2-氟-α-甲基[1，1’-联苯基]-4-乙酸4-(硝基氧基)丁酯(参见Wenk等，Europ.J.Pharmacol.453，319-324(2002))，美洛昔康、帕瑞考昔、尼美舒利。

    与至少一种化合物I的组合疗法可还包括采用α1-肾上腺素能拮抗剂的治疗。适合与mGlu5拮抗剂联用的优选的α1-肾上腺素能拮抗剂包括但不限于：哌唑嗪，多沙唑嗪，特拉唑嗪，阿夫唑嗪，西洛多新(silodosin)和坦洛新。适合与mGlu5拮抗剂联用的其他α1-肾上腺素能拮抗剂参见US5990114、US6306861、US6365591、US6387909和US6403594。

    与至少一种化合物I的组合疗法可还包括采用5-羟色胺和/或去甲肾上腺素再吸收抑制剂的治疗。5-羟色胺和/或去甲肾上腺素再吸收抑制剂的例子包括但不限于：度洛西汀，米那普仑，阿莫沙平，文拉法辛，去文拉法辛，西布曲明，特索芬新(tesofensine)和去甲基西布曲明。

    在某些实施方式中，适合与mGlu5拮抗剂联合给药的5-羟色胺和/或去甲肾上腺素再摄取抑制剂是选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(即，SSRI)。在某些实施方式中，适合与mGlu5拮抗剂联合给药的5-羟色胺和/或去甲肾上腺素再摄取抑制剂是选择性去甲肾上腺素再摄取抑制剂(即，NARI)。

    药物组合物或单位剂型可以单一日剂量给予，或者总的日剂量可以以分剂量的形式给予。此外，可同时或相继给予用于治疗所述疾病的另一化合物。为此，可将组合的活性主要成分配制成单一剂量单位。

    对于化合物是单独剂量制剂的组合治疗，可同时给予各化合物，或者以交错间隔形式给予各个化合物。例如，可在早晨给予本发明化合物，傍晚给予抗毒蕈碱化合物，或者相反。也可以特定间隔给予其他化合物。给药顺序取决于诸多因素，包括患者年龄、体重、性别和治疗条件；需治疗疾病的严重程度和病因、给药途径、患者的肾功能和肝功能、患者治疗历史和患者的反应。可以微调给药顺序，这样的微调根据在此给出的指导方针是常规的。

    本发明化合物的合成

    本领域技术人员应理解，在化合物I的制备过程中可能需要使用受保护的中间体衍生物。官能团的保护和脱保护可通过本领域已知的方法进行(例如参见Green和Wuts的《有机合成中保护基团》(Protective Groups in OrganicSynthesis)John Wiley&Sons，纽约，1999)。羟基或氨基可用任何羟基或氨基保护基团进行保护。氨基保护剂可通过常规技术去除。例如，酰基如烷酰基、烷氧基羰基和芳酰基可通过溶剂分解作用去除，例如通过在酸性或碱性条件下水解。芳基甲氧基羰基(例如，苄氧基羰基)可以在催化剂如钯碳存在下氢解。

    采用本领域技术人员所熟知的标准技术，去除次末中间体上存在的任何保护基团，从而完成目标化合物的合成。然后在需要时，采用标准技术，例如硅胶色谱、硅胶HPLC等，或通过重结晶，对脱保护的最终产物进行纯化。

    根据以下方案大致制备本发明的化合物，式中R₁是H：

    方案1

    

    在方案1中，Ak代表烷基，L代表离去基团，其余变量和通式I的定义相同。

    -10℃到25℃温度下将3-溴代-1-三甲基甲硅烷基-1-丙炔(1)加入预先形成的磷阴离子(phosphanion)的溶液中，所述磷阴离子溶液是在-50℃到0℃的温度下，在非质子溶剂，优选THF或DME中，用碱，优选双-三甲基甲硅烷基氨基钠或锂处理合适的二烷基亚磷酸酯(例如，二乙基亚磷酸酯)后原位形成的。该步骤提供化合物2(也可参见Gibson，A.W.；Humphrey，G.R.；Kennedy，D.J.；Wright，S.H.B.；Synthesis 199l(5)，414)。

    然后，在-78℃到0℃的温度下，在非质子溶剂，优选THF或DME中，化合物2与碱反应后转化为相应的稳定化叶立德，所述碱优选双-三甲基甲硅烷基氨基钠或锂(LiHMDS)。然后，在-60到0℃的温度下，在相同反应容器中所述叶立德与哌啶酮3反应形成化合物4(Gibson，A.W.；Humphrey，G.R.；Kennedy，D.J.；Wright，S.H.B.；Synthesis 1991(5)，414or Boehmer，J.；Schobert，R.；J Chem Res，Synop，1998，(7)，372-373)。

    或者，炔属化合物4可通过以下方式获得：使哌啶酮3与叶立德反应，所述叶立德是在THF中由溴化(3-三甲基甲硅烷基-2-丙炔基)-三苯基鏻和BuLi反应而获得(Hann，M.M.；Sammes，P.G.；Kennewell，P.D.；Taylor，J.B.；J Chem Soc，Perkin Trans 1，1982，307或Nicolaou，K.C.；Webber，S.E.；J Am Chem Soc 1984，106，5734)并使其以类似于上述步骤的方式反应。另一种合适的方法包括采用溴化(3-2-丙炔基)三苯基砷鎓盐(Shen，Yanchang；Liao，Quimu；J.Organomet.Chem.；346；1988；181-184)，与BuLi或其他合适的碱反应形成叶立德，并使该叶立德与哌啶酮3反应。

    然后，在环境温度到回流温度的范围内，在THF中用氟化四丁基铵处理，或者用碱((在甲醇中的K₂CO₃或KOH)水解或者用选自Greene-Wuts报道的方法(《有机合成中的格林保护基团》(Greene’s Protective Groups in OrganicSynthesis)，第3版，Peter G.M.Wuts，Theodora W.Greene 1999，WileyInterscience，第654-659页)和本领域技术人员所熟知的方法等其他合适的方法，去除4的甲硅烷基保护基团。然后，根据公知的索氏方法(Sonogashiraprocedure)(《合成科学》(Science of Synthesis)，H.Heaney和S.Christie，2003年10月，第3卷，第402页及以下)，在碱如TEA、DEA、DIPEA、TMA、丁基胺、哌啶的存在下，采用碘化亚铜和选自(Ph₃P)₂PdCl₂、(Ph₃P)₂Pd(OAc)₂、(Ph₃P)₄Pd(也可由三苯基膦和Pd(OAc)₂原位产生)以及文献中引用的和该类反应中使用的所有其他钯复合物的钯复合物，使所述炔属化合物5与R₂-L反应而转化为化合物I。溶剂选自：THF、DME、DMF、DMA、EtOAc、DMSO、甲苯和适用于该反应目的的其他溶剂；或者可使用过量的相同碱作为反应溶剂。如果在DMF或DME中进行反应，可以在偶联之前，将氟化四丁基铵或氯化四丁基铵直接加入含4的反应介质中，从而避免了化合物5的分离(Sorensen，U.S.，Pombo-Villar，E.Tetrahedron 2005，61，2697-2703)。采用芳基卤化物或杂芳基卤化物(优选顺序依次为碘、溴、氯)，芳基或杂芳基三氟甲磺酸酯，烷基卤化物或酰氯，芳酰氯，杂芳酰氯引入R₂取代基。三氟甲磺酸酯可采用本领域技术人员所熟知的方法合成，例如在氯化溶剂中采用三氟甲磺酸酐由苯酚或羟基芳基(杂芳基)合成，或者在有或没有碱(例如TEA)的存在下、在甲苯或氯化溶剂中用N-苯基三氟甲磺酰亚胺(triflimide)合成。如果在微波炉中进行反应，这两种方法在微波帮助下均加速。R₂-L中其他合适的离去基团L是全氟丁基磺酸酯(nonaflate)、甲苯磺酸酯和三氟硼酸钾。

    哌啶酮3市售可得，或者可容易地由哌啶酮制备，酮基团游离或保护为缩酮，然后根据本领域技术人员所熟知和文献中充分报道的技术在碱性氮原子上进行酰化、(硫代)氨甲酰化、还原胺化、烷基化、芳基化。

    方案2

    

    方案2代表了为获得R₁＝H的化合物I，方案1的可行且可能的替代方式。在方案2中，Ak代表烷基，PG代表保护基团，其余变量和通式I的定义相同。

    该合成途径利用N-保护的哌啶酮(市售可得或容易通过标准技术进行制备)，其中PG是适当选择的保护基团，例如叔丁氧基羰基(Boc)、芴基甲氧基羰基(Fmoc)、苄基(Bn)、苄氧基羰基(Z)、三苯甲基(Tr)、芳基磺酰基等。根据化合物3所述相同的方法使受保护的哌啶酮6反应获得化合物7，化合物7是设计具有正交保护的衍生物。这样，如上述方案1所述，化合物7相继转化为化合物8和9，根据选自Greene-Wuts报道的标准脱保护方法(《有机合成中的格林保护基团》，第3版，Peter G.M.Wuts，Theodora W.Greene 1999，Wiley Interscience，第654-659页)脱保护形成10。10是用于通过简单反应方法合成具有之前确定和固定的R₂取代基的化合物I的合成子。

    或者，化合物8可采用已知方法进一步N-脱保护形成化合物11，化合物11相继发生N衍生化和炔属CH衍生化，如方案1中化合物5所述。

    或者，化合物7的N-PG基团选择性脱保护形成化合物12，化合物12如上所述反应形成化合物4，化合物4根据方案1发生进一步衍生化形成化合物I。

    可根据以下方案3大致制备本发明的化合物I，其中R₁如通式I所述(包括H)。

    方案3

    

    在方案3，Q代表保护基团或基团R₃-Y-，Hal代表卤素原子，其余变量和通式I中的定义相同。

    采用标准烯化条件，例如Wittig、Horner-Hemmons、Petersen或基于砷的方法，由化合物13合成化合物14。这些方法和指导的一些大致综述包括在以下参考文献中：“Wittig反应及相关方法”(The Wittig reaction and relatedmethods)，N.J.Lawrence，《烯烃的制备》(Preparation of Alkenes)，J.M.J.Williams编，牛津大学出版社(Oxford University Press)，Oxford(1996)；第19-58页；磷叶立德(Phosphorus Ylides)，O.I.Kolodiazhnyi，Wiley，N.Y.(1999)；A.W.Johnson，磷叶立德和亚胺(Ylides and Imines ofPhosphorus)，Wiley，N.Y.(1993)；Ager，D.J.Org.React.1990，38，1-223。

    如果采用三苯基鏻盐进行反应，可以在THF或其他非质子溶剂(例如DME)中使用丁基锂或LDA(二异丙基氨基锂)或LHMDS(六甲基二甲硅烷基氨基锂)产生磷叶立德，并使叶立德与合适的哌啶酮反应形成所需产物。可采用基于次膦酸盐(phosphinate)、氧化膦或膦酸盐的试剂，在醇溶剂中用类似的碱或用甲醇钠或甲醇钾或乙醇钠或乙醇钾，或者在非质子溶剂用氢化钠。

    然后，化合物14容易地转化为化合物16，通常无需分离中间体二卤代衍生物15，首先进行烯键的二卤代反应(在合适的溶剂如AcOH或氯化溶剂中，用Br₂、NCS、NBS或其他试剂)，然后利用碱(K₂CO₃、DBU、DMAP等)使化合物15脱卤化氢。

    如果采用CHBr₃或CBr₄或CHFBr₂或CFBr₃和三苯基膦(或者结合或不结合于聚合物树脂的其他三芳基膦)，在有或没有ZnBr₂或二乙基锌等催化剂的存在下，如上所述对化合物13进行相同的烯化反应，可容易地获得化合物17。使用CBr₄可获得1，1-二溴代乙烯基衍生物17，该化合物又可与有机金属物质如溴化甲基镁反应形成衍生物16(R1＝烷基，苯基)或与有机强碱(例如，BuLi或NaHMDS等)反应形成碳负离子，碳负离子又与亲电子试剂(例如CH₃I)反应形成16(R1＝烷基，苯基)。

    采用上述Horner反应相同的方法，使用卤代甲基磷试剂(例如氯化氯甲基三苯基鏻或二苯基氯甲基苯基膦酸酯)，可由化合物13直接获得化合物16。

    实现13到17的转化的另一种方法包括：在TiCl₄和镁的存在下或者在钛络合物的存在下或者用CrCl₂，使用CH₂Br₂或CH₂I₂或CH₂Cl₂或CHI₃。

    然后，以索氏方式(Sonogashira fashion)(如上所述)，由化合物16(或化合物17，其中(Hal，Hal是氟加碘或氟加溴)反应获得化合物18，其中R₁＝F。

    化合物18(其中，Q等于PG(保护基团))必须经过进一步的脱保护步骤形成化合物19，如方案2所述。采用上述标准方法，化合物19适当地转化为化合物I。

    方案4

    

    在方案4中，L代表合适的离去基团(卤素、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯等)，PR代表含磷残基(例如，二烷氧基磷酰基或二苯氧基磷酰基或三苯基膦基或三苯基胂基(arsinyl))，Q代表保护基团或基团R₃-Y-，R₁代表烷基或苯基，其余变量和通式I中的定义相同。

    方案4描述了制备化合物14的可选方法，其中R₁＝烷基或苯基。在该方法中，根据Arbuzov方法或其他合适的方法，使化合物20(市售可得或者容易通过本领域技术人员所熟知的方法进行制备)反应形成鏻盐或膦酸酯或其他含磷中间体，该中间体通过Wittig-Horner方法与烷基醛或苯甲醛偶联形成化合物14(R₁＝烷基或苯基)。

    方案5

    

    在方案5，PG代表保护基团，Q代表保护基团或基团R₃-Y-，其余变量和通式I中的定义相同，方案5显示了化合物18(I)的另一种合成方式。根据公知方法，容易制备的Weinreb酰胺22(L.De Luca，G.Giacomelli，M.Taddei，J.Org.Chem.，2001，66，2535-2537)与格林尼亚试剂(Grignard’sreagent)或锂试剂反应形成酮24。如果R₁＝H，化合物24市售得到或者可容易地由市售原料进行制备。温和转化为烯醇三氟甲磺酸酯或烯醇磺酸酯25(R＝CF₃SO₂，p-MePhSO₂)，化合物25是优良原料，可根据上述索氏(Sonogashira)偶联反应转化为化合物18(I)。

    或者，在钯催化的偶联反应中，化合物23(Corley，E.G.等，J OrgChem，69，(15)，2004，5120-5123)可与酰氯反应形成化合物24。

    采用路易斯酸方法或采用碱的羟醛型反应，化合物24也可与炔属化合物R₂C≡CH缩合形成化合物26(I)，化合物26(I)进一步脱水形成化合物18(I)。

    化合物18和26(其中，Q等于PG(保护基团))必须经过进一步的脱保护步骤形成N-脱保护的化合物，如方案2所述。采用上述标准方法，得到的化合物可进行适当的N-衍生化以形成化合物I。

    方案6

    

    在方案6中，其中L代表合适的离去基团(卤素、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯等)，Q代表保护基团或基团R₃-Y-，其余变量和通式I中的定义相同，方案6描述了适用于制备化合物30的合成途径，其中单键连接Z[式(i)]和所示的含氮环。化合物27市售得到或者可容易地采用本领域技术人员所熟知的标准技术进行制备。使用强碱(例如丁基锂)使炔属CH脱保护后，化合物27可以在非质子溶剂中与炔属化合物发生反应。另一种方法包括使醛28转化为乙炔29，醛28市售可得或者可容易地通过本领域技术人员所熟知的标准方法进行制备(T.Gibtner等，Chem.Eur.J.，2002，68，408-432)。转化可采用例如Corey-Fuchs方法或文献中引用的其他类似的方法进行。

    如果R₂是烷基，预期常规方法包括使醛28与锂化二氯甲烷(lithiateddichloromethane)(例如LDA)反应，形成二氯甲基醇，然后二氯甲基醇原位甲苯磺酸酯化，BuLi消除后产生炔基锂物质，用亲电子试剂淬灭(《有机合成》，第81卷，第157页(2005))。

    化合物30和29(其中，Q等于PG(保护基团))必须经过进一步的脱保护步骤形成N-脱保护的化合物，如方案2所述。采用上述标准方法，得到的化合物可进行适当的N-衍生化以形成化合物I。

    在本发明的实验部分很好地记载了实施例中包括的本发明其他化合物的合成，这些化合物在本发明化合物合成方法的一般说明中没有进行描述。

    在本领域公知的标准条件下，式I的游离碱、其非对映体或对映体可转化为相应的药学上可接受的盐。例如，可将游离碱溶解在合适的有机溶剂(例如甲醇)中，用一当量的马来酸或草酸，一或两个当量的盐酸或甲磺酸进行处理，然后真空浓缩得到相应的药学上可接受的盐。然后，残留物用合适的有机溶剂或有机溶剂混合物，例如甲醇/乙醚重结晶进行纯化。

    式I化合物的N氧化物可通过本领域技术人员所熟知的简单氧化方法进行合成。

    本发明的实施例

    以下实施例说明本发明。

    实施例1

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    (3-三甲基甲硅烷基丙-2-炔基)膦酸二乙酯(化合物1a)

    -10℃、氮气气氛下，搅拌的同时在LiHMDS(1M，在THF中，63.8毫升，63.8毫摩尔)的无水THF(162毫升)溶液中逐滴加入亚磷酸二乙酯(7.4毫升，63.8毫摩尔)。所得溶液在相同温度下搅拌20分钟。然后，逐滴加入3-溴-1-三甲基甲硅烷基-1-丙炔(10毫升，63.8毫摩尔)并将反应混合物在-10℃搅拌2小时，然后用水淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干，得到14.86克标题产物。¹H-NMR(CDCl₃，δ)：与Feringa，Ben L.等，Org.Biomol.Chem.，第3卷(14)，2005，2524-2533一致。

    MS：[M+NH4]⁺＝266.15

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-(3-三甲基甲硅烷基-亚丙-2-炔基)-哌啶(化合物1b)

    -60℃、氮气流下，搅拌的同时在化合物1a(0.68克，2.74毫摩尔)的无水THF(15毫升)溶液中滴加LiHMDS(1M，在THF中，2.74毫升，2.74毫摩尔)的溶液并将混合物在-60℃搅拌15分钟。向所得溶液中逐滴加入1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-氧代-哌啶(0.55克，2.49毫摩尔)的无水THF(12毫升)溶液。将该反应混合物在-60℃搅拌15分钟后，2小时内升温至环境温度。然后，用水淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干，得到0.79克标题产物。粗产物的纯度足以在后续步骤中直接使用而不需要进一步的纯化。

    MS：[M+H]⁺＝316.16

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-(亚丙-2-炔基)-哌啶(化合物1c)

    将化合物1b(0.57g，1.81毫摩尔)和氟化四正丁基铵水合物(0.57g，2.03毫摩尔)在38毫升THF中的溶液在环境温度下搅拌2小时。将反应混合物倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干，得到残留物，残留物通过快速色谱进行纯化(EtOAc-石油醚1∶9)，得到标题产物(0.21克)。

    MS：[M+H]⁺＝244.13

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    密封容器中，将化合物1c(0.21克，0.86毫摩尔)，2-溴-6-甲基吡啶(0.11毫升，0.95毫摩尔)，四(三苯基膦)钯(0)(70毫克，0.06毫摩尔)，CuI(16毫克，0.09毫摩尔)在无水且脱气的三乙胺(10毫升)中的混合物在氮气气氛下80℃加热2小时。反应混合物冷却，倒入水中并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干，得到残留物，残留物通过快速色谱进行纯化(EtOAc-石油醚3.5∶6.5)，得到标题产物(0.20克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.48-2.55(m，2H)，2.61(s，3H)，2.80-2.85(m，2H)，3.50-3.58(m，4H)，5.66(s，1H)，6.75-6.80(m，1H)，7.09(d，1H，J＝7.46Hz)，7.24-7.29(m，1H)，7.55(t，1H，J＝7.46Hz)，8.14-8.19(m，1H)，8.35-8.38(m，1H)

    MS：[M+H]⁺＝335.12

    实施例2

     1-(叔丁氧基羰基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    1-(叔丁氧基羰基)-4-(3-三甲基甲硅烷基-亚丙-2-炔基)-哌啶(化合物2a)

    根据化合物1b所述方法获得标题化合物，只是采用1-(叔丁氧基羰基)-4-氧代-哌啶代替1-(3-硝基2-吡啶基)-4-氧代-哌啶。常规的后处理步骤(work-upprocedure)之后，蒸发合并的EtOAc提取物以获得粗产物，其纯度足以直接用于下一步骤而不需要进一步纯化。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：0.21(s，9H)，1.50(s，9H)，2.21-2.27(m，2H)，2.48-2.53(m，2H)，3.40-3.51(m，4H)，5.40(s，1H)

    MS：[M+H]⁺＝294.29

    1-(叔丁氧基羰基)-4-(亚丙-2-炔基)-哌啶(化合物2b)

    根据化合物1c所述方法获得标题化合物，只是采用化合物2a代替化合物1b。常规的后处理步骤之后，蒸发合并的EtOAc提取物以获得粗产物，其纯度足以直接用于下一步骤而不需要进一步纯化。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：1.50(s，9H)，2.20-2.27(m，2H)，2.48-2.53(m，2H)，3.02(s，1H)，3.40-3.51(m，4H)，5.48(s，1H)

    MS：[M+H]⁺＝222.23

     1-(叔丁氧基羰基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例1的化合物所述方法获得标题化合物，只是采用化合物2b代替化合物1c。常规的后处理步骤之后，蒸发合并的EtOAc提取物以获得粗产物，通过快速色谱法纯化(EtOAc-石油醚3.5∶6.5)得到标题化合物。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：1.50(s，9H)，2.29-2.35(m，2H)，2.58(s，3H)，2.59-2.65(m，2H)，3.45-3.55(m，4H)，5.60(s，1H)，7.09(d，1H，J＝7.51Hz)，7.26(d，1H，7.51Hz)，7.55(t，1H，J＝7.51Hz)

    MS：[M+H]⁺＝313.27

    实施例3

     4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    在实施例2的化合物(17克，54.4毫摩尔)的CHCl₃(840毫升)溶液中加入三氟乙酸(60毫升，779毫摩尔)，然后将该反应混合物在70℃搅拌15分钟直到LC-MS观察到试剂的完全转化。冷却至环境温度后，加水，再加入NaOH(2N)水溶液以使pH为碱性。分离有机层，用CH₂Cl₂萃取水层，用盐水洗涤，Na₂SO₄干燥后得到标题化合物(11.6克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.29-2.35(m，2H)，2.58(s，3H)，2.59-2.65(m，2H)，2.91-2.99(m，4H)，5.52(s，1H)，7.07(d，1H，J＝7.54Hz)，7.24(d，2H，7.54Hz)，7.53(t，1H，J＝7.54Hz)

    MS：[M+H]⁺＝213.25

    实施例4

     1-(2-硝基苯基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将实施例3的化合物(20毫克，0.09毫摩尔)和1-溴-2-硝基苯(22.8毫克，0.11毫摩尔)充分匀浆化的混合物在90℃搅拌0.5小时，然后在110℃搅拌1小时。反应粗产物通过快速色谱法纯化(EtOAc-石油醚梯度从3∶7到4∶6)，得到标题产物(8.3毫克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.50-2.55(m，2H)，2.61(s，3H)，2.82-2.87(m，2H)，3.11-3.16(m，2H)，3.16-3.21(m，2H)，5.62(s，1H)，7.03-7.16(m，2H)，7.19(d，1H，J＝7.51Hz)，7.26-7.30(m，1H)，7.48(t，1H，J＝7.51Hz)，7.52-7.64(m，1H)，7.81(d，1H)

    MS：[M+H]⁺＝334.30

    实施例5

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将实施例3的化合物(23毫克，0.11毫摩尔)和2-氯-6-甲基-3-硝基吡啶(26.2毫克，0.15毫摩尔)充分匀浆化的混合物在120℃搅拌0.5小时。反应粗产物通过快速色谱法纯化(EtOAc-石油醚梯度从3∶7到4∶6)，得到标题产物(21毫克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.48(s，3H)，2.49-2.53(m，2H)，2.67(s，3H)，2.81-2.86(m，2H)，3.49-3.55(m，2H)，3.56-3.60(m，2H)，5.66(s，1H)，6.61(d，1H，J＝8.2Hz)，7.13-7.18(m，1H)，7.29-7.35(m，1H)，7.60-7.70(m，1H)，8.09(d，1H，J＝8.2Hz)

    MS：[M+H]⁺＝349.41

    实施例6

     1-(6-甲氧基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将实施例3的化合物(23毫克，0.11毫摩尔)和2-氯-5-甲氧基-3-硝基吡啶(24.4毫克，0.13毫摩尔)充分匀浆化的混合物在120℃搅拌0.5小时。反应粗产物通过快速色谱法纯化(EtOAc-石油醚梯度从2∶8到3∶7)，得到标题产物(24毫克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.50-2.55(m，2H)，2.66(s，3H)，2.85-2.90(m，2H)，3.50-3.55(m，2H)，3.60-3.65(m，2H)，3.97(s，3H)，5.68(s，1H)，6.17(d，1H，J＝8.76Hz)，7.13-7.18(m，1H)，7.29-7.35(m，1H)，7.60-7.70(m，1H)，8.25(d，1H，J＝8.76Hz)

    MS：[M+H]⁺＝365.36

    实施例7

     1-(5-甲基-2-硝基苯基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将实施例3的化合物(19毫克，0.89毫摩尔)和3-氟-4-硝基甲苯(20.2毫克，0.13毫摩尔)充分匀浆化的混合物在120℃搅拌0.5小时。反应粗产物通过快速色谱法纯化(EtOAc-石油醚梯度从2∶8到3∶7)，得到标题产物(18毫克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.40(s，3H)，2.52-2.57(m，2H)，2.68(s，3H)，2.85-2.92(m，2H)，3.10-3.15(m，2H)，3.17-3.22(m，2H)，5.64(s，1H)，6.85(d，1H，J＝8.19Hz)，6.93(s，1H)，7.13-7.20(m，1H)，7.30-7.37(m，1H)，7.60-7.72(m，1H)，7.78(d，1H，J＝8.19Hz)

    MS：[M+H]⁺＝348.36

    实施例8

     1-(5-甲氧基-2-硝基苯基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将实施例3的化合物(20毫克，0.93毫摩尔)和2-氟-4-甲氧基硝基苯(21.3毫克，0.12毫摩尔)充分匀浆化的混合物在120℃搅拌0.5小时。反应粗产物通过快速色谱法纯化(EtOAc-石油醚1∶1)，得到标题产物(21毫克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.55-2.62(m，2H)，2.80(s，3H)，2.93-3.02(m，2H)，3.10-3.18(m，2H)，3.22-3.28(m，2H)，3.88(s，3H)，5.66(s，1H)，6.51-6.59(m，2H)，7.19-7.31(m，1H)，7.36-7.46(m，1H)，7.73-7.87(m，1H)，8.05(d，1H)

    MS：[M+H]⁺＝364.31

    实施例9

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例1的化合物所述获得标题化合物，使化合物1c与2-碘代吡啶而不是2-溴-6-甲基吡啶反应。粗产物通过快速色谱法纯化(EtOAc-石油醚1∶1)，得到标题化合物。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.50-2.55(m，2H)，2.80-2.85(m，2H)，3.50-3.60(m，4H)，5.68(s，1H)，6.78(dd，1H，J＝4.6和7.8Hz)，7.27-7.32(m，1H)，7.48(d，1H，J＝7.84Hz)，7.81(t，1H，J＝4.2Hz)，8.16(dd，1H，J＝7.8Hz和1.7Hz)，8.36(dd，1H，J＝1.7Hz和4.2Hz)，8.60-8.65(m，1H)

    MS：[M+H]⁺＝321.10

    实施例10

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-(3-苯基-亚丙-2-炔基)-哌啶

    根据实施例1的化合物所述获得标题化合物，使化合物1c与碘苯而非2-溴-6-甲基吡啶反应。用石油醚-EtOAc 65∶35快速色谱纯化得到标题产物。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.50-2.55(m，2H)，2.76-2.81(m，2H)，3.52-3.60(m，4H)，5.65(s，1H)，6.80(dd，1H，J＝4.6和7.8Hz)，7.30-7.36(m，3H)，7.43-7.47(m，2H)，8.19(d，1H，J＝7.8Hz)，8.38(d，1H，J＝4.2Hz)

    MS：[M+H]⁺＝320.24

    实施例11

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例1的化合物所述获得标题化合物，使化合物1c与3-碘代吡啶而不是2-溴-6-甲基吡啶反应。用石油醚-EtOAc 6∶4快速色谱纯化，得到实施例11的化合物。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.52-2.57(m，2H)，2.74-2.79(m，2H)，3.50-3.60(m，4H)，5.67(s，1H)，6.82(dd，1H，J＝4.4和7.8Hz)，7.66-7.74(m，1H)，8.13-8.21(m，2H)，8.38(dd，1H)，8.58-8.63(m，1H)，8.72-8.77(m，1H).

    MS：[M+H]⁺＝321.30

    实施例12

     1-苯基氨甲酰基-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    在实施例3的化合物(0.11克，0.52毫摩尔)的CH₂Cl₂(10毫升)溶液中加入苯基异氰酸酯(0.06毫升，0.54毫摩尔)并将该反应混合物在环境温度下搅拌过夜。粗产物经自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)蒸发和纯化，用梯度石油醚-EtOAc从87∶13到0∶100洗脱，得到标题产物(154毫克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.41-2.46(m，2H)，2.64(m，3H)，2.74-2.79(m，2H)，3.57-3.62(m，4H)，5.65(s，1H)，6.58(s，1H)，7.05(t，1H，J＝7.52Hz)，7.14(d，1H，J＝7.88Hz)，7.28-7.34(m，3H)，7.38-7.42(m，2H)，7.63(t，1H，J＝7.88Hz)

    MS：[M+H]⁺＝332.4

    实施例13-26(表I)

    根据实施例12所述合成这些化合物，用试剂B(见下表I)代替苯基异氰酸酯。经自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)纯化，用梯度石油醚-EtOAc从100∶0到20∶80洗脱。实施例17和18的化合物通过制备型RP LC-MS色谱进一步纯化，采用MS-C18XTerra柱30x50mm，用碳酸氢铵20mM pH 8缓冲液-乙腈梯度洗脱。

     表I

    

    

    

    

    实施例27

     1-苄基-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将实施例3的化合物(0.22克，1.04毫摩尔)、苯甲醛(0.13毫升，1.25毫摩尔)、三乙酸基硼氢化钠(0.33克，1.56毫摩尔)和15毫升CH₂Cl₂的混合物在环境温度下搅拌过夜。然后，用水稀释，分离有机层，用盐水洗涤(2 x 15毫升)，干燥(Na₂SO₄)，真空蒸发至干，得到粗产物，该粗产物通过自动化快速液体色谱(Horizon^TM-Biotage)纯化，用梯度石油醚-EtOAc从85∶15到0∶100洗脱，得到标题化合物，该化合物经制备型RP LC-MS色谱进一步纯化，采用MS-C18XTerra柱30x50mm，用碳酸氢铵20mM pH 8缓冲液-乙腈梯度洗脱(0.12克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.34-2.80(m，11H)，3.57-3.74(m，2H)，5.54(s，1H)，7.07(d，1H，J＝7.65Hz)，7.23(d，1H，J＝7.65Hz)，7.29-7.43(m，5H)，7.52(t，1H，J＝7.65Hz).

    MS：[M+H]⁺＝303.3

    实施例28

     1-丁基-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据关于实施例27的化合物所述方法制备标题化合物，只是使用丁醛代替苯甲醛。常规的后处理步骤之后，粗产物经自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)纯化，用梯度石油醚-(EtOAc+1.4N甲醇氨1∶0.1)从90∶10到30∶70洗脱，得到标题化合物。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：0.96(t，3H)，1.35(sextet，2H)，1.62(br，2H)，2.4-2.9(m，13H)，5.56(s，1H)，7.07(d，1H，J＝7.65Hz)，7.25(d，1H，J＝7.65Hz)，7.54(t，1H，J＝7.65Hz).

    MS：[M+H]⁺＝269.3

    实施例29

     1-(叔丁氧基羰基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-1-苯基-亚丙-2-炔基]-哌啶

    向根据US 2004/0063744制备的1-(叔丁氧基羰基)-4-(1-苯基-3-三甲基甲硅烷基亚丙-2-炔基)-哌啶(0.08克，0.216毫摩尔)的脱气DMF(2毫升)的溶液中滴加TBAF(0.056克，0.21毫摩尔)的DMF(1毫升)溶液。环境温度下搅拌15分钟后，加入TEA(0.06毫升，0.43毫摩尔)、CuI(0.002克，0.01毫摩尔)、四(三苯基膦)钯(0)(0.012克，0.01毫摩尔)和2-溴-6-甲基吡啶(0.026毫升，0.23毫摩尔)。将该反应混合物在80℃加热2小时，然后冷却，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物经快速色谱(EtOAc-石油醚2∶8)纯化，得到标题产物(0.03克)。¹H-NMR(CDCl₃δ)：1.50(s，9H)，2.36-2.43(m，2H)，2.56(s，3H)，2.81-2.89(m，2H)，3.37-3.46(m，2H)，3.58-3.63(m，2H)，7.07(d，1H，J＝7.65Hz)，7.23(d，1H，J＝7.65Hz)，7.29-7.43(m，5H)，7.52(t，1H，J＝7.65Hz).

    MS：[M+H]⁺＝389.45

    实施例30

    1-(叔丁氧基羰基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶

    1-叔-(丁氧基羰基)-4-(丙-2-炔基)-哌啶(化合物30a)

    方法A：根据美国专利6,265,434(Caldwell等，2001年7月24日)所述方法合成标题化合物。

    方法B：根据化合物1c所述方法合成标题化合物，只是使用1-(叔丁氧基羰基)-4-(3-三甲基甲硅烷基丙-2-炔基)-哌啶(Tatsunori S.等，Heterocycles54(2)，747-755，2001)代替化合物1b。传统后处理方法之后进行快速柱色谱(EtOAc-石油醚0.5∶9.5)，得到无色油状标题产物。

    方法C：向-78℃冷却的三甲基甲硅烷基重氮基甲烷(1.65毫升，3.3毫摩尔)的THF(5毫升)溶液中滴加BuLi(2.5N，在正己烷中，1.14毫升，2.86毫摩尔)。将该反应混合物在相同温度下保持30分钟，然后滴加溶解在THF(25毫升)中的1-Boc-4-氧代乙基哌啶(0.5克，2.2毫摩尔)，在相同温度下继续搅拌1小时。反应液自发达到环境温度之后，用饱和氯化铵水溶液淬灭，用EtOAc萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物经快速色谱(EtOAc-石油醚1.5∶8.5)纯化，得到标题产物(0.19克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：1.17-1.33(m，2H)，1.47(s，9H)，1,60-1.71(m，1H)，1.73-1.82(m，2H)，2.12-2.14(dd，1H)，2.18-2.21(dd，2H)，2.69-2.74(m，2H)，4.12-4.20(m 2H)

    MS：[M+H]⁺＝224.4

    1-(叔丁氧基羰基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例1的化合物所述获得标题化合物，只是在最后步骤中使用化合物30a代替化合物1c。用石油醚-EtOAc 7∶3进行快速色谱纯化，得到最终产物。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：1.45-1.88(m，11H)，1.94-2.04(m，3H)，2.44-2.50(m，2H)，2.63(s，3H)，3.07(m，2H)，3.88(m，2H)，7.14-7.19(m，1H)，7.25-7.32(m，1H)，7.61-7.67(m，1H)，

    MS：[M+H]⁺＝315.6

    实施例31

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶

    4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶(化合物31a)

    根据实施例3的化合物所述方法制备标题化合物，只是使用实施例30的化合物作为原料而不是实施例2的化合物。粗产物无需进一步纯化即可用于下一步骤中。

    MS：[M+H]⁺＝215.4

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶

    将化合物31a(24毫克，0.11毫摩尔)和2-氯-3-硝基吡啶(19.5毫克，0.12毫摩尔)充分匀浆化的混合物在120℃加热40分钟。反应粗产物通过快速色谱法纯化(EtOAc-石油醚3∶7)，得到标题产物(20毫克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.45-2.58(m，2H)，1.96-2.04(m，3H)，2.48-2.54(m，2H)，2.68(s，3H)，3.07(t，2H，J＝13.3Hz)，3.88(d，2H，J＝13.3Hz)，6.70-6.75(m，1H)，7.13-7.20(m，1H)，7.28-7.33(m，1H)，7.60-7.70(m，1H)，8.10-8.16(m，1H)，8.31-8.35(m，1H).

    MS：[M+H]⁺337.39.

    实施例32

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(4-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例1的化合物所述获得标题化合物，只是使化合物1c与4-碘代吡啶而不是2-溴-6-甲基吡啶反应。用石油醚-EtOAc 6.5∶3.5进行快速色谱纯化，得到实施例32的化合物。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.52-2.57(m，2H)，2.75-2.80(m，2H)，3.50-3.60(m，4H)，5.68(s，1H)，6.79-6.84(m，1H)，7.44-7.48(m，2H)，8.18(d，1H)，8.36-8.39(m，1H)，8.48-8.82(m，2H).

    MS：[M+H]⁺＝321.29

    实施例33

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3-喹啉基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    在密封容器中，将化合物1c(50毫克，0.21毫摩尔)、3-溴喹啉(0.039毫升，0.21毫摩尔)、二氯化双(三苯基膦)钯(5毫克，0.007毫摩尔)和氟化四丁基铵(215毫克，0.82毫摩尔)充分匀浆化的混合物在80℃搅拌1小时。反应混合物冷却，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物经快速色谱色谱纯化(EtOAc-石油醚梯度从2∶8到4∶6)，得到标题产物(0.51克).

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.52-2.58(m，2H)，2.79-2.80(m，2H)，3.52-3.62(m，4H)，5.71(s，1H)，6.78-6.84(m，1H)，7.68-7.74(m，1H)，7.82-7.92(m，2H)，8.16-8.21(m，1H)，8.36-8.49(m，3H)，8.98(s，1H).

    MS：[M+H]⁺＝371.38

    实施例34

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-吗啉代-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例33的化合物所述获得标题化合物，只是使化合物1c与5-碘代-2-吗啉代-吡啶而不是3-溴喹啉反应。用石油醚-EtOAc 6∶4进行快速色谱纯化，得到实施例34的化合物。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.48-2.52(m，2H)，2.71-2.76(m，2H)，3.50-3.58(m，4H)，3.66-3.78(m，4H)，3.81-3.92(m，4H)，5.62(s，1H)，6.68-6.70(m，1H)，6.77-6.81(m，1H)，7.60-7.66(m，1H)，8.14-8.18(m，1H)，8.32(s，1H)，8.31-8.38(m，1H).

    MS：[M+H]⁺＝406.28

    实施例35

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-氟-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例33的化合物所述获得标题化合物，只是在与化合物1c的偶联反应中使用5-溴-2-氟代吡啶代替3-溴喹啉。用石油醚-EtOAc 6∶4进行快速色谱纯化，得到实施例35的化合物。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.50-2.54(m，2H)，2.74-2.78(m，2H)，3.52-3.59(m，4H)，5.64(s，1H)，6.80-6.84(m，1H)，6.90-6.95(m，1H)，7.80-7.85(m，1H)，8.19(d，1H)，8.31(s，1H)，8.39-8.41(m，1H).

    MS：[M+H]⁺＝339.14

    实施例36

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-乙酰基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例33的化合物所述获得标题化合物，只是在与化合物1c的偶联反应中使用2-乙酰基-6-溴吡啶代替3-溴喹啉。用石油醚-EtOAc 6∶4进行快速色谱纯化，得到标题化合物。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.53-2.58(m，2H)，2.77(s，3H)，2.81-2.86(m，2H)，3.55-3.61(m，4H)，5.70(s，1H)，6.80-6.84(m，1H)，7.58-7.62(m，1H)，7.78-7.84(m，1H)，7.95-7.99(m，1H)，8.18-8.22(m，1H)，8.38-8.41(m，1H).

    MS：[M+H]⁺＝363.28

    实施例37

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-异丙氧基-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例33的化合物所述获得标题化合物，只是在与化合物1c的偶联反应中使用5-碘代-2-异丙氧基吡啶代替3-溴喹啉。用石油醚-EtOAc3.5∶6.5进行快速色谱纯化，得到标题化合物。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：1.40(s，6H)，2.48-2.52(m，2H)，2.72-2.77(m，2H)，3.51-3.58(m，4H)，5.32-5.42(m，1H)，5.63(s，1H)，6.73(d，1H)，6.78-6.82(m，1H)，7.65-7.70(m，1H)，8.16-8.19(m，1H)，8.29(m，1H)，8.37-8.41(m，1H).

    MS：[M+H]⁺＝379.30

    实施例38

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3-甲氧基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例33的化合物所述获得标题化合物，只是使用2-碘代-3-甲氧基吡啶代替3-溴喹啉。用石油醚-EtOAc 1∶1进行快速色谱纯化，得到实施例38的化合物。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.50-2.56(m，2H)，2.86-2.92(m，2H)，3.52-3.60(m，4H)，3.98(s，3H)，5.75(m，1H)，6.76-6.81(m，1H)，，7.35-7.38(m，2H)，8.16-8.19(m，1H)，8.23-8.31(m，1H)，8.35-8.41(m，1H).

    MS：[M+H]⁺＝351.24

    实施例39

     1-(叔丁氧基羰基)-4-[1-羟基-3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶

    将三氟甲磺酸锌(0.07克，0.19毫摩尔)和三乙胺(0.065毫升，0.47毫摩尔)在无水甲苯(5毫升)中的混合物在环境温度、氮气气氛下搅拌。1小时后，加入根据WO200544267所述制备的2-乙炔基-6-甲基-吡啶(0.13克，1.13毫摩尔)，15分钟后滴加1-Boc-4-哌啶羧醛(0.2克，0.938毫摩尔)的甲苯(1毫升)溶液。所得混合物在100℃加热6小时。然后，冷却至环境温度，用水稀释，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到粗产物，该粗产物经自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)纯化两次，用CHCl₃-MeOH 98-2洗脱，得到褐色油状标题产物(0.13克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：1.27-1.5(m，12H)，1.85-2.01(m，3H)，2.63(s，3H)，2.65-2.82(m，2H)4.15-4.31(m，2H)，4.44-4.49(m，1H)，7.15-7.18(m，1H)，7.27-7.30(m，1H)，7.61-7.65(m，1H).

    MS：[M+H]⁺＝331.6

    实施例40

     1-(叔丁氧基羰基)-4-[1-二甲基氨基-3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶

    将2-乙炔基-6-甲基-吡啶(0.08克，0.7毫摩尔)、1-Boc-4-哌啶羧醛(0.1克，0.47毫摩尔)、CuI(0.001克，0.11毫摩尔)和33％w/w二甲胺(0.077毫升，0.56毫摩尔)水(3毫升)溶液的混合物在实验室超声浴中超声处理2小时。然后，用EtOAc萃取，合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到粗产物，该粗产物经自动化快速液体色谱(Horizon^TM-Biotage)纯化，用EtOAc-石油醚1∶1洗脱，得到标题产物(0.11克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：1.25-1.48(m，2H)，1.51(s，9H)，1.65-1.73(m，1H)，2.05-2.11(m，2H)，2.23-2.40(br，6H)，2.66(s，3H)，2.69-2.77(m，2H)，3.21-3.39(m，1H)，4.09-4.21(m，2H)，7.09-7.11(m，1H)，7.27-7.30(m，1H)，7.53-7.56(m，1H).

    MS：[M+H]⁺＝358.6

    实施例41

     1-(叔丁氧基羰基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-1-哌啶子基-丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例40的化合物所述方法制备标题化合物，只是使用哌啶代替二甲胺。常规的后处理步骤之后，残留物经自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)纯化，用石油醚-EtOAc 70∶30洗脱，得到标题化合物。

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：1.05-2.11(m，20H)，2.35-2.86(m，9H)，3.15-3.35(br，1H)，4.05-4.21(m，2H)，7.08-7.14(m，1H)，7.25-7.30(m，1H)，7.52-7.57(m，1H).

    MS：[M+H]⁺＝398.7

    实施例42

     1-苯基-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    在密封容器中，将实施例3的化合物(0.22克，1.04毫摩尔)、溴代苯(0.17克，1.04毫摩尔)、碳酸铯(0.68克，2.1毫摩尔)、BINAP(0.031克，0.05毫摩尔)、乙酸钯(II)(0.01毫克，0.05毫摩尔)在无水且脱气甲苯(10毫升)中的混合物在110℃、氮气气氛下加热12小时。冷却反应混合物，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干，得到残留物，残留物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚2∶8)，得到标题产物(0.30克)。¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.40-2.65(m，5H)，2.86(brd，2H)，3.38(brd，4H)，5.63(s，1H)，6.8-7.20(m，6H)，7.32(d，1H，J＝7.65Hz)，7.58(t，1H，J＝7.65Hz).

    MS：[M+H]⁺＝289.3

    实施例43

     1-(2-氰基苯基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例42的化合物所述方法制备标题化合物，只是使用2-溴苄腈代替溴苯。快速色谱纯化(EtOAc-石油醚3∶7)得到标题产物。

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.55-2.65(m，5H)，2.91(brd，2H)，3.25-3.35(m，4H)，5.65(s，1H)，6.80-7.08(m，2H)，7.14(d，1H，J＝7.65Hz)，7.31(d，1H，J＝7.65Hz)，7.48(t，1H，J＝7.65Hz)，7.55-7.65(m，2H).

    MS：[M+H]⁺＝314.3

    实施例44

     1-(4-甲氧基-2-硝基苯基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例42所述方法制备标题化合物，只是使用4-溴-3-硝基茴香醚代替溴苯。快速色谱纯化(EtOAc-石油醚3∶7)得到标题产物。

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.45-2.55(m，2H)，2.61(s，3H)，2.75-2.85(m，2H)，3.00-3.15(m，4H)，3.84(s，3H)，5.60(s，1H)，7.05-7.20(m，3H)，7.24-7.35(m，2H)7.59(t，1H，J＝7.65Hz).

    MS：[M+H]⁺＝364.3

    实施例45

     1-(叔丁氧基羰基)-4-[3-(5-氰基-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    在密封容器中，将化合物2b(0.5克，2.26毫摩尔)、5-溴烟碱腈(nicotinonitrile)(0.511克，2.26毫摩尔)、二氯化双(三苯基膦)钯(II)(80毫克，0.05毫摩尔)、CuI(43.1毫克，0.1毫摩尔)在无水且脱气三乙胺(12.6毫升)中的混合物在80℃、氮气气氛下加热2小时。冷却反应混合物，用硅藻土(Celite)过滤，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚梯度从4∶96到30∶70)，得到标题产物(0.731克)。

    MS：[M+H]⁺＝324.2

    实施例46

     1-(叔丁氧基羰基)-4-[3-(6-氰基-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例45的化合物所述方法制备标题化合物，只是使用5-溴-2-氰基吡啶代替5-溴烟碱腈。快速色谱纯化(EtOAc-石油醚梯度从5∶95到40∶60)得到标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝324.2

    实施例47和48

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(5-氰基-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-氰基-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    4-[3-(5-氰基-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶(化合物47a)

    4-[3-(6-氰基-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶(化合物48a)

    根据实施例3的化合物所述方法制备标题化合物，只是分别采用实施例45和46的化合物代替实施例2的化合物作为原料。粗产物无需进一步纯化即可用于下一步骤。

    MS：[M+H]⁺＝224.3

    MS：[M+H]⁺＝224.3

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(5-氰基-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶(化合物47)

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-氰基-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶(化合物48)

    采用2-溴-3-硝基吡啶炔(pyridyne)代替1-溴-2-硝基苯，根据实施例4所述进行反应，只是在一摩尔当量的TEA存在下，在N，N-二甲基乙酰胺中环境温度搅拌过夜，可容易地合成标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝346.2

    MS：[M+H]⁺＝346.2

    实施例49

    1-(叔丁氧基碳基)-4-[3-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    1-(叔丁氧基羰基)-4-溴亚甲基-哌啶(化合物49a)

    -15℃、氮气气氛下，将二-三甲基甲硅烷基氨基锂(1M，在THF中7.38毫升，7.38毫摩尔)滴加到溴化溴甲基三苯基鏻(3.22克，7.38毫摩尔)的悬浮液中。在相同温度下搅拌15分钟后，加入溶解在THF(10毫升)中的N-Boc哌啶酮(1.4克，7.03毫摩尔)。环境温度下继续搅拌2小时后，用水淬灭反应混合物，用EtOAc萃取。合并的提取物进行洗涤，用Na₂SO₄干燥并蒸发至干。残留粗产物经快速色谱纯化(EtOAc-石油醚98∶2)，得到标题产物(1.27克)。

    MS：[M+H]⁺＝276.2

    1-(叔丁氧基羰基)-4-[3-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将氟化四丁基铵水合物(818毫克，2.93毫摩尔)的DMF(8毫升)溶液滴加到2-甲基-4-三甲基硅烷基乙炔基噻唑(Yasuyoshi等，J.Med.Chem.，49，3，2006，1080-1100，0.52克，2.66毫摩尔)的DMF(7毫升)溶液中。搅拌2小时后，加入二氯化双(三苯基膦)钯(II)(93毫克，0.13毫摩尔)、CuI(51毫克，0.27毫摩尔)和无水且脱气的三乙胺(1毫升)，在密封容器中于80℃、氮气气氛下加热2小时。冷却反应混合物，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚梯度从4∶96到30∶70)，得到标题产物(0.847克)。

    MS：[M+H]⁺＝319.2

    实施例50

     4-[3-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例3所述合成标题产物，只是使用实施例49的化合物代替实施例2的化合物作为原料。

    MS：[M+H]⁺＝219.2

    实施例51

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例47所述合成标题产物，只是使用实施例50的化合物代替化合物47a作为原料。常规的后处理步骤之后，粗产物经快速色谱纯化(EtOAc-石油醚梯度从8∶92到40∶60)，得到标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝341.1

    实施例52-58(表II)

    根据实施例42所述方法合成这些化合物，只是使用试剂B(表II)代替溴苯。采用自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc梯度从95∶5到30∶70洗脱。

     表II

    

    

    实施例59

     1-(2-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将实施例3的化合物(100毫克，0.47毫摩尔)、2-氟代吡啶(45.5微升，0.52毫摩尔)、TEA(102微升)的N-甲基吡咯烷酮溶液在微波炉中160℃加热20分钟。然后，冷却反应混合物，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚梯度从7∶93到40∶60)，得到标题产物(0.02克).

    MS：[M+H]⁺＝290.34

    实施例60-65(表III)

    根据实施例59所述方法合成这些化合物，用试剂B代替2-氟代吡啶。通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc梯度从95∶5到30∶70洗脱。

     表III

    

    

    实施例66

    1-(叔丁氧基羰基)-4-[1-氟-3-苯基-亚丙-2-炔基]-哌啶

    1-(叔丁氧基羰基)-4-[溴(氟)亚甲基]-哌啶(化合物66a)

    向1-(叔丁氧基羰基)-4-氧代-哌啶(500毫克，2.52毫摩尔)、三苯基膦(808毫克，3.02毫摩尔)和三溴氟甲烷(818毫克，3.02毫摩尔)的50毫升无水THF溶液中滴加二乙基锌(1M，在己烷中，3.02毫升，3.02毫摩尔)的溶液。环境温度下搅拌2.5小时后，反应混合物用MeOH(10毫升)淬灭，搅拌30分钟，真空蒸发至干。采用自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc梯度从95∶5∶0到90∶10洗脱，产生标题化合物(326毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝295.16

    1-(叔丁氧基羰基)-4-[1-氟-3-苯基-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例45的化合物所述方法制备标题产物，只是使用苯基乙炔代替化合物2b，用化合物66a代替5-溴烟碱腈。常规的后处理步骤后产生的残留物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚梯度从5∶95到10∶90)。

    MS：[M+H]⁺＝316.22

    实施例67

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[1-氟-3-苯基-亚丙-2-炔基]-哌啶

    4-(1-氟-3-苯基-亚丙-2-炔基)-哌啶(化合物67a)

    根据实施例3的化合物所述方法合成标题产物，只是使用实施例66的化合物代替实施例2的化合物作为原料。

    MS：[M+H]⁺＝216.22

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[1-氟-3-苯基-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例47的化合物所述方法制备标题化合物，只是使用化合物67a代替化合物47a。粗产物快速色谱进行纯化(EtOAc-石油醚1∶9)。

    MS：[M+H]⁺＝338.22

    实施例68

     1-(2-甲氧基乙氧基羰基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    环境温度、搅拌的同时，30分钟内向2-甲氧基乙醇(26.9微升，0.34毫摩尔)和碳酸二三氯甲基酯(37.2毫克，0.125毫摩尔)的CH₂Cl₂(1.5毫升)溶液中滴加DEA(139微升，0.814毫摩尔)的1.5毫升CH₂Cl₂溶液。40分钟后，加入实施例3的化合物(72毫克，0.339毫摩尔)和70微升DEA在0.8毫升CH₂Cl₂中的溶液。24小时后，将反应混合物真空蒸发至干，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc梯度从7∶3到3∶7洗脱，产生标题化合物(57毫克).

    MS：[M+H]⁺＝315.17

    实施例69-82(表IV)

    根据实施例68所述方法合成这些化合物，只是使用试剂B(参见下表IV；市售可得)代替2-甲氧基乙醇。采用自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc梯度从100∶0到20∶80或CH₂Cl₂-EtOAc梯度从100∶0到20∶80洗脱。实施例82的化合物通过制备型RP LC-MS色谱进一步纯化，采用MS-C18XTerra柱30x50mm，用碳酸氢铵20mM pH 8缓冲液-乙腈梯度洗脱。

     表IV

    

    

    

    实施例83

     1-(N-甲基-N-苯基氨甲酰基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    环境温度、搅拌的同时，30分钟内向碳酸二三氯甲基酯(43.6毫克，0.147毫摩尔)的CH₂Cl₂(1毫升)溶液中滴加N-甲基苯胺(48.2微升，0.445毫摩尔)和DEA(168微升，0.98毫摩尔)在1.5毫升CH₂Cl₂中的溶液。40分钟后，加入实施例3的化合物(94.4毫克，0.445毫摩尔)和168微升DEA在2毫升二CH₂Cl₂中的溶液。24小时后，将反应混合物真空蒸发至干，用水溶解，用EtOAc萃取。萃取所得残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc梯度从4∶6到2∶8洗脱，产生标题化合物(123毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝346.22

    实施例84-91(表V)

    根据实施例83所述方法合成这些化合物，只是使用试剂B(参见下表V；市售可得)代替N-甲基苯胺。采用自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc梯度从100∶0到20∶80或CH₂Cl₂-EtOAc梯度从100∶0到20∶80洗脱。

     表V

    

    

    实施例92

     1-(对甲苯基磺酰基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将实施例3的化合物(60毫克，0.283毫摩尔)、对甲苯磺酰氯(80.9毫克，0.425毫摩尔)和TEA(0.425毫摩尔)在5毫升CHCl₃中的溶液在环境温度下搅拌1小时。氯仿溶液用0.1N NaOH、水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干。快速色谱纯化(EtOAc-石油醚1∶1)，得到67毫克标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝367.13

    实施例93-115(表VI)

    根据实施例92所述方法合成这些化合物，只是使用试剂B(参见下表VI；市售可得)代替对甲苯磺酰基氯。采用快速色谱法进行纯化，用石油醚-EtOAc洗脱。

     表VI

    

    

    

    

    实施例116

     1-(2-硝基苯甲酰)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    0-5℃搅拌的同时，向2-硝基苯甲酸(42.6毫克，0.25毫摩尔)的CH₂Cl₂(2毫升)和DMF(0.5毫升)溶液中加入1-羟基苯并三唑(50毫克，0.322毫摩尔)，30分钟后，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺(62毫克，0.323毫摩尔)。然后，加入实施例3的化合物(53毫克，0.25毫摩尔)。将该反应混合物在环境温度下搅拌2小时并在相同温度下保持过夜。用水和1NNaOH稀释后，分离有机层并用水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干。快速色谱纯化(CHCl₃-1.4N MeOH/NH₃100∶0.1)产生标题化合物(82毫克)。

    实施例117-162(表VII)

    根据实施例116所述方法合成这些化合物，只是使用试剂B(参见下表VII；市售可得)代替2-硝基苯甲酸。采用自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc梯度从100∶0到20∶80或CH₂Cl₂-EtOAc梯度从100∶0到20∶80洗脱。

     表VII

    

    

    

    

    

    

    实施例163

     1-苯基乙酰基-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    环境温度，轻柔搅拌的同时向苯基乙酸(61.5毫克，0.452毫摩尔)在10毫升CH₂Cl₂的溶液中加入PS-碳二亚胺1,25毫摩尔/g(480毫克，0.6毫摩尔)。20分钟后，加入实施例3的化合物(64毫克，0.301毫摩尔)。维持非常缓慢的搅拌过夜。过滤，然后用CH₂Cl₂洗涤树脂，蒸发得到粗产物，该粗产物经快速色谱纯化(CHCl₃-1.4N MeOH/NH₃100∶0.2)产生标题产物(80毫克)。

    实施例164-189(表VIII)

    根据实施例163所述方法合成这些化合物，只是使用试剂B(参见下表VIII；市售可得)代替苯基乙酸。采用自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc梯度从100∶0到20∶80或CH₂Cl₂-EtOAc梯度从100∶0到20∶80洗脱。

     表VIII

    

    

    

    

    实施例190

     1-(3-氯-4-甲基-2-噻吩基羰基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    环境温度下、搅拌的同时向实施例3的化合物(64毫克，0.301毫摩尔)和TEA(70微升)的CH₂Cl₂(8毫升)溶液中加入3-氯-4-甲基噻吩基氯化物(66.6毫克，0.331毫摩尔)在2毫升CH₂Cl₂中的溶液。将该反应混合物在环境温度下搅拌6小时。用水和1N NaOH稀释后，分离有机层并用水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干。快速色谱纯化(CHCl₃)产生标题化合物(112毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝371.86

    采用适当的市售酰氯根据相同方法合成以下化合物。

    实施例191

     1-[3-(1，3-噻唑-2-基)-苯甲酰]-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    MS：[M+H]⁺＝400.70

    实施例192

     1-[3-(2-嘧啶基)-苯甲酰]-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    MS：[M+H]⁺＝395.51

    实施例193

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-(4-氧代-亚戊-2-炔基)-哌啶

    向化合物1c(52毫克；0.213毫摩尔)、乙酰氯(46微升，0.647毫摩尔)、二氯化双(三苯基)钯(II)(4.49毫克，0.0064毫摩尔)和碘化铜(I)(1.62毫克，0.085毫摩尔)的无水THF(5毫升)溶液中加入三乙胺(85微升，0.61毫摩尔)，并在密闭容器中将该反应混合物在60℃搅拌5小时，冷却至环境温度，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的提取物用NaOH 0.1N、水洗涤，用Na₂SO₄干燥并真空蒸发至干。快速色谱纯化(EtOAc-石油醚25∶75)得到17.5毫克的标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝286.10

    实施例194-198(表IX)

    根据实施例193所述方法合成这些化合物，只是使用试剂B(参见下表IX；市售可得)代替乙酰氯。采用自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc梯度从100∶0到20∶80或CH₂Cl₂-EtOAc梯度从100∶0到20∶80洗脱。

     表IX

    

    实施例199

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3，5-二氟-4-甲氧基苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    密闭容器中，将化合物1c(50毫克，0.206毫摩尔)、4-溴-2，6-二氟茴香醚(45.9毫升，0.206毫摩尔)、二氯化双(三苯基膦)钯(II)(7.23毫克，0.012毫摩尔)、CuI(3.92毫克，0.206毫摩尔)在无水且脱气的三乙胺(3毫升)中的混合物在氮气气氛下80℃加热2小时。冷却反应混合物，用硅藻土过滤，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚10∶90)，得到标题产物(22毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝386.52

    实施例200-215(表X)

    根据实施例199所述方法合成这些化合物，只是使用试剂B(参见下表X；市售可得)代替4-溴-2，6-二氟茴香醚。采用自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc梯度从100∶0到20∶80洗脱。

     表X

    

    

    

    实施例216

     1-(叔丁氧基羰基)-4-[3-苯基-丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例1的化合物所述获得标题化合物，只是在最终的步骤中使用化合物30a代替化合物1c，碘苯代替2-溴-6-甲基吡啶。粗产物通过自动化快速液体色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 6∶4洗脱得到微褐色的油状标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝300.32

    实施例217

     1-(叔丁氧基羰基)-4-(亚庚-2-炔基)-哌啶

    将四(三苯基膦)钯(21毫克，0.018毫摩尔)、丁基胺(2.5毫升)和化合物49a(200毫克，0.724毫摩尔)的混合物在环境温度下搅拌45分钟。然后加入碘化铜(10.3毫克，0.05毫摩尔)，再加入己-1-炔(41.6微升，0.362毫摩尔)。将该溶液在70℃加热3-5小时直到颜色变为深蓝色。用氯化铵淬灭反应，用乙醚萃取，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩至干，用制备型HPLC-MS纯化得到标题产物(78毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝278.4

    实施例218-226

    采用市售原料，根据以下方法(方法A或方法B，表XI)合成这些化合物。采用自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc梯度从100∶0到20∶80洗脱，或采用经典快速色谱(石油醚-EtOAc混合物)进行纯化。

    方法A：在密闭容器中，将化合物1c(36毫克；0.148毫摩尔)、试剂B(0.296毫摩尔)、二氯化双(三苯基膦)钯(II)(3.60毫克，0.0051毫摩尔)和氟化四丁基铵(155毫克，0.593毫摩尔)的混合物在80℃加热，熔化的混合物在80℃搅拌1.5小时，冷却至环境温度，用EtOAc淋洗。用水洗涤EtOAc溶液，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干。快速色谱纯化(EtOAc-ETP 15∶85)得到标题产物。

    方法B：在密闭容器中，将化合物1c(23毫克；0.946毫摩尔)、试剂B(0.253毫摩尔)、四(三苯基膦)钯(0)(8毫克，0.0069毫摩尔)和碘化亚铜(I)(2毫克，0.0105毫摩尔)在三乙胺(4毫升)中的溶液在90℃搅拌2小时，冷却至环境温度，然后倒入水中，用EtOAc萃取。用水洗涤EtOAc溶液，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干。快速色谱纯化(EtOAc-ETP 2∶8)得到标题产物。

     表XI

    

    

    实施例227

     1-(5-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例59的化合物所述方法制备标题化合物，只是用N，N-二甲基乙酰胺代替NMP，用2-溴-5-硝基吡啶代替2-氟代吡啶。采用自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用CHCl₃-1.4N MeOH NH₃100∶0.5洗脱。

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.42-2.54(m，2H)，2.67(s，3H)；2.75-2.90(m，2H)，3.83-3.95(m，4H)，5.70(s，1H)，6.60-6.70(m，1H)，7.12-7.20(m，1H)；7.28-7.38(m，1H)；7.60-7.70(m，1H)；8.20-8.30(m，1H)；9.08(d，J＝4Hz，1H).

    MS：[M+H]⁺＝335.17

    实施例228

    1-(6-甲氧基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3，5-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    1-(叔丁氧基羰基)-4-[3-(3，5-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶(化合物228a)

    将化合物49a(0.110克，0.40毫摩尔)、四(三苯基膦)钯(0.023克，0.02毫摩尔)、碘化亚铜(I)(0.0078克，0.04毫摩尔)和1-乙炔基-3，5-二氟苯(49微升，0.4毫摩尔)和TEA(2.5毫升)的混合物在80℃加热3小时。然后，冷却反应混合物，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物(0.062克)，该残留物无需进一步纯化即可用于下一步骤。

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：1.50(s，9H)，2.27-2.37(m，2H)，2.52-2.60(m，2H)，3.45-3.55(m，4H)，5.56(s，1H)，6.74-6.82(m，1H)，6.91-6.98(m，2H).

    MS：[M+H]⁺＝334.15

    4-[3-(3，5-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶(化合物228b)

    向化合物228a(0.090克，0.27毫摩尔)的CHCl₃(1毫升)溶液中加入三氟乙酸(0.42毫升，5.4毫摩尔)并将该反应混合物在70℃搅拌15分钟直到LC-MS观察到试剂的完全转化。冷却至环境温度后，加水，加入2N NaOH碱化溶液。用CH₂Cl₂萃取溶液，有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，得到标题化合物(0.051克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：1.85(s，1H，宽)，2.27-2.38(m，2H)，2.52-2.62(m，2H)，2.90-3.00(m，4H)，5.49(s，1H)，6.72-6.81(m，1H)，6.90-6.98(m，2H).

    MS：[M+H]⁺＝234.26

    1-(6-甲氧基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3，5-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将化合物228b(0.046毫克，0.197毫摩尔)、2-氯-6-甲氧基-3-硝基吡啶(34.6毫克，0.18毫摩尔)、碳酸钾(50.3毫克，0.36毫摩尔)在N，N-二甲基乙酰胺中的溶液在微波炉中于165℃加热3分钟。然后，冷却反应混合物，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚5∶95)，得到标题产物(0.058克)。

    MS：[M+H]⁺＝386.16

    实施例229

     1-(5-溴-2-嘧啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例59的化合物所述方法制备标题化合物，只是用N，N-二甲基乙酰胺代替NMP，用5-溴-2-碘代嘧啶代替2-氟代吡啶，使混合物在环境温度下反应。采用自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用CHCl₃-1.4N MeOH NH₃ 100∶0.5洗脱。白色固体。产率：64.1％。

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.35-2.45(m，2H)，2.59(s，3H)；2.63-2.75(m，2H)，3.83-3.95(m，4H)，5.65(s，1H)，7.04-7.14(m，1H)，7.22-7.30(m，1H)；7.50-7.60(m，1H)；8.32(s，2H).

    MS：[M+H]⁺＝370.10

    实施例230

     1-(3-甲基-5-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例59的化合物所述方法制备标题化合物，只是用N，N-二甲基乙酰胺代替NMP，用2-溴-3-甲基-5-硝基吡啶代替2-氟代吡啶。采用自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用CHCl₃-1.4N MeOH NH₃100∶0.25洗脱。黄色固体。产率：97.3％。

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.39(s，3H)，2.46-2.56(m，2H)，2.59(s，3H)；2.74-2.85(m，2H)，3.51-3.61(m，4H)，5.66(s，1H)，7.10(d，J＝8.0Hz，1H)，7.27(d，J＝8.0Hz，1H)；7.56(t，J＝8.0Hz，1H)；8.15(s，1H)，8.98(s，1H).

    MS：[M+H]⁺＝349.23

    实施例231

     1-(5-氰基-3-甲基-2-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例59的化合物所述方法制备标题化合物，只是用N，N-二甲基乙酰胺代替NMP，用5-氰基-2-氟-3-甲基吡啶代替2-氟代吡啶。采用自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用EtOAc-石油醚2∶8洗脱。黄色固体。产率：81.3％。

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.33(s，3H)，2.45-2.56(m，2H)，2.66(s，3H)；2.77-2.88(m，2H)，3.40-3.51(m，4H)，5.65(s，1H)，7.15(d，J＝8.0Hz，1H)，7.32(d，J＝8.0Hz，1H)；7.57(s，1H)；7.58-7.75(m，1H)，8.40(s，1H).

    MS：[M+H]⁺＝329.22

    实施例232

     1-(6-氰基-3-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    在密闭容器中，将实施例3的化合物(0.102克，0.48毫摩尔)、5-溴-2-氰基吡啶(0.073克，0.40毫摩尔)、碳酸铯(0.658克，2毫摩尔)、氯化1，3-双(2，6-二异丙基苯基)咪唑鎓(8.8毫克，0.05毫摩尔)、乙酸钯(II)(0.0046毫克，0.05毫摩尔)在无水且脱气的THF(3毫升)中的混合物在微波炉中110℃加热15分钟。冷却该反应混合物，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚1∶1)，得到标题产物(0.013克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.45-2.54(m，2H)，2.61(s，3H)，2.72-2.90(m，2H)，3.48-3.60(m，4H)，5.68(s，1H)，7.05-7.20(m，2H)，7.22-7.35(m，1H)；7.50-7.70(m，2H)；8.35(s，1H).

    MS：[M+H]⁺＝315.17

    实施例233

     1-(4-甲基-3-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    密闭容器中，将实施例3的化合物(0.102克，0.48毫摩尔)、3-溴-4-甲基吡啶(0.046克，0.40毫摩尔)、碳酸铯(0.658克，2毫摩尔)、2-(二环己基膦基)联苯(8.8毫克，0.024毫摩尔)、乙酸钯(II)(0.0027毫克，0.012毫摩尔)在无水且脱气的甲苯(3毫升)中混合物在微波炉中150℃加热15分钟。冷却该反应混合物，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化(CHCl₃-1.4NMeOH NH₃ 100∶0.25)，得到标题产物(0.008克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.38(s，3H)，2.47-2.54(m，2H)，2.58(s，3H)，2.77-2.87(m，2H)，3.04-3.12(m，4H)，5.63(s，1H)，7.05-7.12(m，1H)，7.13-7.20(m，1H)，7.25-7.30(m，1H)；7.50-7.60(m，1H)；8.20-8.30(m，2H).

    MS：[M+H]⁺＝304.19

    实施例234

     1-(4-异喹啉基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将实施例3的化合物(0.076克，0.36毫摩尔)、4-溴异喹啉(0.064克，0.30毫摩尔)、碳酸铯(0.494克，1.5毫摩尔)、2，2’-双(二苯基膦基)-1，1’联萘(0.011克，0.024毫摩尔)、乙酸钯(II)(0.0027毫克，0.012毫摩尔)在无水且脱气的甲苯(3毫升)中的混合物在氮气气氛下回流加热18小时。冷却该反应混合物，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化(CHCl₃-1.4N MeOH NH₃100∶0.25)，得到标题产物(0.061克)。

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.59(s，3H)，2.62-2.73(m，2H)，2.91-3.02(m，2H)，3.23-3.36(m，4H)，5.70(s，1H)，7.11(d，J＝8.0Hz，1H)，7.29(d，J＝8.0Hz，1H)，7.57(t，J＝8.0Hz，1H)；7.75(t，J＝8.0Hz，1H)；7.89(t，J＝8.0Hz，1H)；8.10(d，J＝8.0Hz，1H)；8.15(s，1H)；8.23(d，J＝8.0Hz，1H)；9.04(S，1H).

    MS：[M+H]⁺＝340.21

    实施例235

     1-(4-甲基-5-氧代-环戊烯基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将实施例3的化合物(500毫克，2.36毫摩尔)、3-甲基-1，2-环戊二酮(350毫克，3.11毫摩尔)、乙酸(0.18毫升，3.11毫摩尔)在乙醇(10毫升)中的混合物回流8小时。蒸发该反应混合物，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 85∶15洗脱，得到褐色固态的标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝307.61

    实施例236

     1-(叔丁氧基羰基)-4-[1-甲氧基羰氧基-3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶

    向冷却至0-5℃的实施例39的化合物(50毫克，0.15毫摩尔)、三乙胺(65微升，0.45毫摩尔)和4-二甲基氨基吡啶(10毫克，0.07毫摩尔)在3毫升CH₂Cl₂的溶液中，逐滴加入氯甲酸甲酯(23微升，0.30毫摩尔)。将该反应混合物在环境温度下搅拌过夜。然后，蒸发至干，用自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 8∶2洗脱，得到褐色油状标题产物(0.28克)。

    MS：[M+H]⁺＝389.51

    实施例237

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[1-羟基-3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶

    4-[1-羟基-3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶(化合物237a)

    根据实施例3的化合物所述方法制备标题化合物，采用实施例39的化合物代替实施例2的化合物。常规的后处理步骤之后，粗产物无需进一步纯化即可用于下一步骤。

    MS：[M+H]⁺＝231.23

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[1-羟基-3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶

    将化合物237a(200毫克，0.86毫摩尔)、2-溴-3-硝基吡啶(194毫克，0.95毫摩尔)和三乙胺(249微升，1.74毫摩尔)的N，N-二甲基乙酰胺(15毫升)充分匀浆化的混合物在环境温度下搅拌4小时。然后，将反应混合物倒入倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化，用石油醚-EtOAc 7∶3洗脱，得到黄色油状标题产物(225毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝353.40

    实施例238

     1-(3-硝基-2-噻吩基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例237的化合物所述的方法制备标题化合物，采用实施例3的化合物代替化合物237a，用2-氯-3-硝基噻吩代替2-溴-3-硝基吡啶。粗产物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 1∶1洗脱，得到黄色固态的标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝340.45

    实施例239

     1-(5-硝基-2-呋喃基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将实施例3的化合物(100毫克，0.47毫摩尔)、2-溴-5-硝基呋喃(98毫克，0.51毫摩尔)和碳酸钾(72毫克，0.52毫摩尔)在DMF(2毫升)中的悬浮液在环境温度下搅拌4小时。然后，将该反应混合物倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化，用石油醚-EtOAc 6∶4洗脱，得到黄色固态的标题产物(94毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝324.33

    实施例240

     1-(5-苯基氨甲酰基-2-呋喃基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将实施例3的化合物(100毫克，0.47毫摩尔)和N-苯基-5-溴呋喃-2-羧酰胺(125毫克，0.47毫摩尔)充分匀浆化的混合物在120℃搅拌8小时。将该反应混合物倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化，用石油醚-EtOAc7∶3洗脱，得到褐色固态的标题产物(36毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝398.51

    实施例241

     1-(2-甲基-4-硝基-1H-5-咪唑基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将实施例3的化合物(100毫克，0.47毫摩尔)、5-溴-2-甲基-4-硝基-1H-咪唑(97毫克，0.47毫摩尔)和碳酸氢钾充分匀浆化的混合物在120℃搅拌8小时。将该反应混合物倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 7∶3洗脱，得到褐色固态的标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝338.40

    实施例242

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[1-甲氧基-3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶

    向实施例237的混合物(70毫克，0.19毫摩尔)在无水THF的溶液中加入60％在矿物油中的氢化钠(12毫克，0.3毫摩尔)，所得悬浮液在环境温度下搅拌30分钟后，滴加碘代甲烷(25微升，0.4毫摩尔)，并将反应混合物在环境温度下搅拌过夜。然后，用饱和氯化铵水溶液淬灭，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 65∶35洗脱，得到黄色油状标题产物(48毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝367.51

    实施例243

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[1-甲氧基羰氧基-3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例236的化合物所述的方法制备标题化合物，只是使用实施例237的化合物代替实施例39的化合物。粗产物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 8∶2洗脱，得到油状标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝395.44

    实施例244

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-苯基-丙-2-炔基]哌啶

    4-(3-苯基-丙-2-炔基)-哌啶(化合物244a)

    根据实施例3的化合物所述的方法制备标题化合物，采用实施例216的化合物代替实施例2的化合物。常规的后处理步骤之后，粗产物无需进一步纯化即可用于下一步骤。

    MS：[M+H]⁺＝200.31

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-苯基-丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例237的化合物所述的方法制备标题化合物，使用化合物244a代替化合物237a。粗产物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚/EtOAc 9-1洗脱，得到黄色油状的标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝322.45

    实施例245

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-苯基-丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例244的化合物所述的方法得到标题化合物，只是使用2-氯-3-硝基-6-甲基吡啶代替2-溴-3-硝基吡啶。粗产物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 6∶4洗脱，得到微褐色的油状标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝300.32

    实施例246

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例31的化合物所述的方法制备标题化合物，采用2-氯-3-硝基-6-甲基吡啶代替2-溴-3-硝基吡啶。粗产物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚/EtOAc 7∶3洗脱，得到黄色油状的标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝351.51

    实施例247

     1-(叔丁氧基羰基)-4-[3-(3，5-二氟苯基)-丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例1的化合物所述得到标题化合物，只是在最终步骤中使用化合物30a代替化合物1c，用3，5-二氟-碘苯代替2-溴-6-甲基吡啶。粗产物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 85∶15洗脱，得到无色油状的标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝336.98

    实施例248

    1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3，5-二氟苯基)-丙-2-炔基]-哌啶

    4-[3-(3，5-二氟苯基-)丙-2-炔基-]哌啶(化合物248a)

    根据实施例3的化合物所述的方法制备标题化合物，使用实施例247的化合物代替实施例2的化合物。常规的后处理步骤之后，粗产物无需进一步纯化即可用于下一步骤。

    MS：[M+H]⁺＝236.32

    1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3，5-二氟苯基)-丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例237的化合物所述的方法制备标题化合物，只是使用化合物248a代替化合物237a，用2-氯-3-硝基-6-甲基吡啶代替2-溴-3-硝基吡啶。粗产物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 9∶1洗脱，得到黄色油状的标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝372.45

    实施例249

     1-(2-氰基苯基)-4-[3-(3，5-二氟苯基)-丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例42的化合物所述的方法制备标题化合物，只是使用化合物248a代替实施例3的化合物，用2-溴苄腈代替溴苯。粗产物通过制备型RPLC-MS色谱进行纯化，采用MS-C18XTerra柱30x50mm，用碳酸氢铵20mM pH 8缓冲液-乙腈梯度洗脱，得到褐色油状的标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝337.45

    实施例250

     1-(叔丁氧基羰基)-4-[1-氟-3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶

    向在-78℃冷却的实施例39的化合物(300毫克，0.91毫摩尔)在无水CH₂Cl₂(10毫升)的溶液中滴加三氟化二乙基氨基硫(144微升，1.01毫摩尔)。将该反应混合物在相同温度下保持2小时，然后升高至环境温度，用水淬灭，用CH₂Cl₂萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 7∶3洗脱，得到油状的标题产物(140毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝333.44

    实施例251

    1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[1-氟-3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶

    4-[1-氟-3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶(化合物251a)

    根据实施例3的化合物所述的方法制备标题化合物，采用化合物250代替实施例2的化合物。常规的后处理步骤之后，粗产物无需进一步纯化即可用于下一步骤。

    MS：[M+H]⁺＝233.24

    1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[1-氟-3-(6-甲基-2-吡啶基)-丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例237的化合物所述的方法制备标题化合物，使用化合物251a代替化合物237a，用2-氯-3-硝基-6-甲基吡啶代替2-溴-3-硝基吡啶。粗产物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc9∶1洗脱，得到黄色油状的标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝369.44

    实施例252

    1-(叔丁氧基羰基)-(3E)-3-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]吡咯烷

    1-(叔丁氧基羰基)-(3E)-3-(3-三甲基甲硅烷基-亚丙-2-炔基)-吡咯烷(化合物252a)

    根据化合物1b所述方法制备标题化合物，使用N-boc-3-吡咯烷酮代替1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-氧代-哌啶。粗产物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 85∶15洗脱，得到无色油状的标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝280.52

    1-(叔丁氧基羰基)-(3E)-3-(-亚丙-2-炔基)-吡咯烷(化合物252b)

    根据化合物1c所述方法制备标题化合物，使用化合物252a代替化合物1b。粗产物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 95∶5洗脱，得到无色油状的标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝208.74

    1-(叔丁氧基羰基)-(3E)-3-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-吡咯烷

    根据实施例1的化合物所述制备标题化合物，只是在最终步骤中使用化合物252b代替化合物1c。粗产物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 7∶3洗脱，得到微褐色的油状标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝299.40

    实施例253和254

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-(4-苯基-亚丁-3-炔-2-基)-哌啶

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-(4-苯基-丁-3-炔-1-烯-2-基)-哌啶

    1-(叔丁氧基羰基)-4-(2-羟基-4-苯基-丁-3-炔-2-基)-哌啶(化合物253a)

    向-10℃冷却的1-(叔丁氧基羰基)-4-乙酰基哌啶(0.67克，2.95毫摩尔)(根据WO 2004/041777所述制备)的THF(20毫升)溶液中滴加1M溴化苯基乙炔基镁的THF溶液(4.5毫升，4.5毫摩尔)。将该反应混合物在室温下搅拌过夜。然后，用饱和氯化铵水溶液淬灭，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 7∶3洗脱，得到淡黄色油状的标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝330.54

     1-(叔丁氧基羰基)-4-(4-苯基-亚丁-3-炔-2-基)-哌啶(化合物253b)

     1-(叔丁氧基羰基)-4-(4-苯基-丁-3-炔-1-烯-2-基)-哌啶(化合物253c)

    将化合物253a(0.3克，0.911毫摩尔)和伯吉斯(Burgess)试剂(N-(三乙基铵磺酰基)氨基甲酸甲酯)(0.35克，1.49毫摩尔)充分匀浆化的混合物在60℃加热2小时。然后，冷却反应混合物，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc 95∶5洗脱，得到油状混合物形式的标题产物。

    MS：[M+H]⁺＝312.54

     4-(4-苯基-亚丁-3-炔-2-基)-哌啶(化合物253d)

     4-(4-苯基-丁-3-炔-1-烯-2-基)-哌啶(化合物253e)

    根据实施例3的化合物所述方法制备标题化合物，只是使用化合物253b和253c的混合物代替实施例2的化合物。常规的后处理步骤之后，粗产物无需进一步纯化即可用于下一步骤。

    MS：[M+H]⁺＝212.32

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-(4-苯基-亚丁-3-炔-2-基)-哌啶

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-(4-苯基-丁-3-炔-1-烯-2-基)-哌啶

    根据实施例237的化合物所述的方法制备标题化合物，只是使用化合物253d和253e的混合物代替化合物237a，用2-氯-3-硝基吡啶代替2-溴-3-硝基吡啶。粗产物通过制备型RP LC-MS色谱进行纯化，采用MS-C18XTerra柱30x50mm，用碳酸氢铵20mM pH 8缓冲液-乙腈梯度洗脱得到两种标题产物。

    MS(实施例253和254)[M+H]⁺＝333.35

     ¹H-NMR(实施例253)(CDC₃δ)：1.97(s，3H)，2.57-2.60(m，2H)，2.83-2.86(m，2H)，3.50-3.56(m，4H)，6.73-6.76(m，1H)，7.28-7.35(m，3H)，7.44-7.46(m，2H)，8.13-8.17(m，1H)，8.36-8.37(m，1H)

     ¹H-NMR(实施例254)(CDCl₃δ)：1.80-1.98(m，4H)，2.37-48(m，1H)，3.08-3.15(m，2H)，3.93-3.97(m，2H)，5.39(s，1H)，5.49(s，1H)，6.73-6.75(m，1H)，7.28-7.33(m，3H)，7.44-7.46(m，2H)，8.13-8.17(m，1H)，8.36-8.37(m，1H)

    实施例255

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[(2E)-3-苯基-亚丙-2-烯基]-哌啶

    1-(叔丁氧基羰基)-4-[(2E)-3-苯基-亚丙-2-烯基]-哌啶(化合物255a)

    -60℃、氮气气氛下，将双(三甲基甲硅烷基)氨基锂(1M在THF中的溶液，2.63毫升，2.63毫摩尔)加入肉桂基膦酸二乙酯(0.629毫升，2.64毫摩尔)的溶液中。在相同温度下搅拌15分钟后，加入溶解在THF(5毫升)中的N-Boc-4-哌啶酮(500毫克，2.51毫摩尔)。保持搅拌和冷却30分钟，2小时后，用水淬灭反应混合物，用EtOAc萃取。洗涤合并的萃取物，用Na₂SO₄干燥，蒸发至干得到标题产物(752毫克)，该产物无需进一步纯化即可用于下一步骤。

    MS：[M+H]⁺＝300.25

    4-[(2E)-3-苯基-亚丙-2-烯基]-哌啶(化合物255b)

    向化合物255a(752毫克，2.51毫摩尔)的CHCl₃(15毫升)溶液中加入三氟乙酸(0.967毫升，12.6毫摩尔)，并将该反应混合物在25℃搅拌24小时，直到LC-MS观察到试剂的完全转化。加水，再加入NaOH水溶液(2N)，得到碱性pH。分离有机层，用CH₂Cl₂萃取水层，合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，得到标题化合物。粗产物采用快速色谱进行纯化(CHCl₃-1.6M甲醇氨100∶5)，得到标题产物(359毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝200.22

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[(2E)-3-苯基-亚丙-2-烯基]-哌啶

    将化合物255b(175毫克，0.878毫摩尔)、2-氯-3-硝基吡啶(153毫克，0.966毫摩尔)和三乙胺(0.139毫升，0.97毫摩尔)充分匀浆化的混合物在25℃搅拌24小时。反应粗产物通过快速色谱法纯化(EtOAc-石油醚8∶2)，得到标题产物(270毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝322.20

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.45-2.50(m，2H)，2.65-2.70(m，2H)，3.50-3.60(m，4H)，6.14(d，1H)，6.56(d，1H)，6.70-6.80(m，1H)，6.95-7.15(m，1H)7.20-7.45(m，5H)，8.16(d，1H)，8.37(d，1H).

    实施例256

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-羟基-4-(3-苯基-丙-2-炔基)-哌啶

    1-氧杂-6-(叔丁氧基羰基)-6-氮杂螺[2.5]辛烷(化合物256a)

    0℃、氮气气氛下，将三甲基碘化亚砜(trimethylsulphoxonium iodide)(580毫克，2.64毫摩尔)加入NaH(106毫克，2.64毫摩尔)的悬浮液中。在相同温度下搅拌15分钟后，加入溶解在DMF(5毫升)中的N-Boc-4-哌啶二酮(piperidinone)(500毫克，2.51毫摩尔)。在环境温度下继续搅拌2小时，用水和EtOAc淬灭反应混合物。洗涤合并的萃取物，用Na₂SO₄干燥，蒸发至干。粗产物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚9∶1)，得到标题产物(380毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝214.19

    1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基-4-(3-苯基-丙-2-炔基)-哌啶(化合物256b)

    -75℃、氮气气氛下，将三氟化硼二乙基醚合物(0.131毫升，1.03毫摩尔)、再是苯基乙炔化锂(1M在THF中，1.03毫升，1.03毫摩尔)滴加到化合物256a(200毫克，0.938毫摩尔)的THF(5毫升)溶液中。保持搅拌和冷却2小时，在环境温度下搅拌过夜。用水和EtOAc淬灭反应混合物。洗涤合并的萃取物，用Na₂SO₄干燥，蒸发至干。残留物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚85∶15)，得到标题产物(272毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝316.26

    4-羟基-4-(3-苯基-丙-2-炔基)-哌啶(化合物256c)

    向化合物256b(179毫克，0.57毫摩尔)的CHCl₃(3毫升)溶液中加入三氟乙酸(0.219毫升，2.84毫摩尔)，然后将该反应混合物在25℃搅拌24小时直到LC-MS观察到试剂的完全消耗。然后，向反应混合物中加入水，再加入2NNaOH水溶液，得到碱性pH。分离有机层，用CH₂Cl₂萃取水层，合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥后得到标题化合物(122毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝216.15

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-羟基-4-(3-苯基-丙-2-炔基)-哌啶

    将化合物256c(115毫克，0.53毫摩尔)、2-氯-3-硝基吡啶(93.1毫克，0.587毫摩尔)和三乙胺(0.092毫升，0.641毫摩尔)充分匀浆化的混合物在25℃搅拌24小时。反应粗产物通过快速色谱法纯化(EtOAc-石油醚8∶2)，得到标题产物(178毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝338.15

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：1.80-2.0(m，4H)，2.68(s，2H)，3.40-3.55(m，2H)，3.60-3.75(m，2H)，6.70-6.80(m，1H)，7.25-7.50(m，5H)8.10-8.15(m，1H)，8.30-8.40(m，1H).

     实施例257

     1-(3-硝基-咪唑并[1.2-a]吡啶-2-基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将实施例3的化合物(150毫克，0.71毫摩尔)、2-氯-3-硝基咪唑并[1，2-a]吡啶(154毫克，0.778毫摩尔)和三乙胺(0.152毫升，1.06毫摩尔)充分匀浆化的混合物在25℃搅拌24小时。反应粗产物通过快速色谱法纯化(EtOAc-石油醚1∶1)，得到标题产物(146毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝374.22

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.50-2.70(m，5H)，2.85-2.90(m，2H)，2.78-2.87(m，1H)，3.75-3.85(m，4H)，5.68(s，1H)，7.25-7.30(m，1H)，7.45-7.65(m，3H)，9.50(d，2H).

    实施例258

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-(1-氧代-3-苯基-丙-2-炔基)-哌啶

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-乙氧基羰基-哌啶(化合物258a)

    将2-氯-3-硝基吡啶(1克，6.31毫摩尔)，4-吡啶羧酸乙酯(1.19克，7.57毫摩尔)和碳酸钾(1.31克，9.47毫摩尔)的正丁醇(25毫升)混合物回流搅拌2小时，冷却至环境温度，倒入水中，用乙醚萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚2∶8)，得到标题产物(1.38克)。

    MS：[M+H]⁺＝280.09

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-羧基-哌啶(化合物258b)

    向KOH(0.46克，8.16毫摩尔)在甲醇(30毫升)和水(30毫升)的溶液中加入化合物258a(1.14克，4.08毫摩尔)。溶液在环境温度下搅拌1.5小时，倒入水中，用2M HCl酸化，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到标题产物(1.38克)。

    MS：[M+H]⁺＝252.12

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：1.82-2.00(m，2H)，2.02-2.12(m，2H)，2.61-2.73(m，1H)，3.10-3.22(m，2H)，3.75-3.90(m，2H)，6.75-6.82(m，1H)，8.15(dd，1H，J＝4Hz，J＝8Hz)，8.38(dd，1H，J＝1.5Hz，J＝4Hz)，

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-(1-氧代-3-苯基-丙-2-炔基)-哌啶

    向化合物258b的无水甲苯(10毫升)溶液中加入亚硫酰氯(0.29毫升，3.98毫摩尔，所得混合物回流搅拌1小时，冷却至室温，真空蒸发至干。残留物溶解于无水甲苯(5毫升)中；向该溶液中加入苯基乙炔(0.09毫升，0.80毫摩尔)、乙酸钯(II)(18毫克，0.08毫摩尔)、三乙胺(0.34毫升，2.4毫摩尔)。混合物在微波炉中110℃搅拌1小时，冷却至环境温度，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚25∶75)，得到标题产物(77毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝336.18

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：1.90-2.04(m，2H)，2.15-2.22(m，2H)，2.78-2.87(m，1H)，3.18-3.28(m，2H)，3.88-3.95(m，2H)，6.75-6.82(m，1H)，7.40-7.46(m，2H)，7.48-7.52(m，1H)，7.60-7.65(m，2H)，8.15(dd，1H，J＝4Hz，J＝8Hz)，8.38(dd，1H，J＝1.5Hz，J＝4Hz).

    实施例259

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3-三氟甲氧基苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    密闭容器中，将化合物1c(60毫克，0.25毫摩尔)、3-三氟甲氧基-碘苯(41,6微升，0.26毫摩尔)、二氯化双(三苯基膦)钯(II)(8.65毫克，0.01毫摩尔)、CuI(4.69毫克，0.1毫摩尔)在无水且脱气的三乙胺(3毫升)中的混合物在氮气气氛下80℃加热2小时。冷却反应混合物，用硅藻土过滤，倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚5∶95)，得到标题产物(57毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝404.35

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.50-2.53(m，2H)，2.75-2.78(m，2H)，3.53-3.58(m，4H)，5.64(s，1H)，6.78-6.81(m，1H)，7.17-7.19(m，1H)，7.28-7.30(m，1H)7.34-7.37(m，2H)，8.17-8.19(m，1H)，8.37-8.38(m，1H).

    实施例260

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-(1-氧代-3-苯基-丙-2-炔基)-1，2，5，6-四氢吡啶

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-羧基-1，2，5，6-四氢吡啶(化合物260a)

    将异四氢烟酸盐酸盐(497毫克，3.04毫摩尔)、2-氯-3-硝基-吡啶(482毫克，3.04毫摩尔)和碳酸钾(882毫克，6.38毫摩尔)充分匀浆化的混合物在60℃搅拌1.5小时。冷却反应混合物，倒入水和甲酸(pH＝3)的溶液中，用二氯甲烷萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚-乙酸20∶80∶0.05)，得到标题产物(332毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝250.2

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-(N-甲氧基-N-甲基-氨甲酰基)-1，2，5，6-四氢吡啶(化合物260b)

    环境温度搅拌的同时，向化合物260a(100毫克，0.40毫摩尔)的甲醇(10毫升)溶液中加入DMT-MM 4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物，142毫克，0.52毫摩尔)、N-甲基吗啉(88.4微升，0.81毫摩尔)和N，O-二甲基羟胺盐酸盐(60毫克，0.615毫摩尔)。将该反应混合物在环境温度下搅拌3小时。溶剂真空蒸发至干。残留物用1N NaOH水溶液和二氯甲烷稀释。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚60∶40)，得到标题产物(90毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝293.3

    1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-(1-氧代-3-苯基-丙-2-炔基)-1，2，5，6-四氢吡啶

    -78℃、氮气流下，搅拌的同时向苯基乙炔(69.3微升，0.631毫摩尔)的无水THF(15毫升)溶液中滴加丁基锂溶液(2.5M在THF中，253微升，0.63毫摩尔)，将该混合物在-78℃搅拌20分钟。所得溶液滴加到化合物260b(84毫克，0.29毫摩尔)的无水THF(5毫升)溶液中。将该反应混合物在-50℃搅拌1.5小时，然后升高至-10℃。然后，用氯化铵淬灭，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干得到残留物，残留物通过快速色谱纯化(EtOAc-石油醚20∶80)，得到标题产物(69毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝334.3

     ¹H-NMR(CDCl₃δ)：2.68(m，2H)，3.72-3.75(m，2H)，4.16-4.17(m，2H)，6.81-6.84(m，1H)，7.35-7.40(m，1H)，7.40-7.47(m，2H)，7.47-7.51(m，1H)，7.61-7.63(m，2H)，8.20-8.22(m，1H)，8.39-8.40(m，1H).

    实施例261

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-(3-溴-亚丙-2-炔基)-哌啶(化合物261a)

    将化合物1c(200毫克，0.82毫摩尔)、CBr₄(0.54毫克，1.65毫摩尔)、氢氧化钾(0.138毫克，2.46毫摩尔)、18-C-6冠醚(21.8毫克，0.823毫摩尔)和10毫升苯的混合物在65℃搅拌11小时。将反应混合物冷却至环境温度，用EtOAc稀释，用水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干。残留粗产物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从98∶2到80∶20洗脱，得到混合物形式的标题产物(111毫克)(77∶23化合物261a∶化合物1c)，它可作为原料直接用于下一反应步骤。

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    将化合物261a(111毫克，0.345毫摩尔)、硫酸铜(11毫克，0.69毫摩尔)、1，10-菲罗啉(phenantroline)(24.9毫克，0.138毫摩尔)、K₂CO₃(95.4毫克，0.69毫摩尔)、2-吡咯烷酮(39.7微升，0.518毫摩尔)和5毫升甲苯的混合物在80℃搅拌12小时。将反应混合物冷却至环境温度，用EtOAc稀释，用水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干。残留粗产物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从98∶2到0∶10洗脱，得到标题产物(2毫克)。

    MS：[M+H]⁺＝327.15

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.10-2.20(m，2H)，2.41-2.53(m，4H)，2.65-2.70(m，2H)，3.40-3.52(m，4H)，3.72-3.76(m，2H)，5.60(s，1H)，6.75-6.78(m，1H，)，8.14-8.17(m，1H)，8.35(s，1H)

    实施例262

     1-(5-三氟甲基-3-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    在小瓶中装入实施例3的化合物(84.9毫克，0.4毫摩尔)、3-溴-5-(三氟甲基)-吡啶(93毫克，0.4毫摩尔)、DIPEA(140微升，0.8毫摩尔)、1毫升无水N-甲基吡咯烷酮的混合物并密封。小瓶在微波炉中160℃(200W)加热2小时。然后将反应混合物冷却至环境温度，用EtOAc稀释，用水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干。残留黑色油状粗产物通过制备型RP LC-MS色谱进行纯化，采用MS-C18XTerra柱30x50mm，用碳酸氢铵20mM pH 8缓冲液-乙腈梯度洗脱，得到1.8毫克标题化合物。

    MS：[M+H]⁺＝358.4

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.42-2.53(m，2H)，2.59(s，3H)，2.79-2.82(m，2H)，3.43-3.47(m，4H)，5.67(s，1H)，7.10(d，1H，J＝8.0)，7.27(d，1H，J＝8.0Hz)，7.35(s，1H)，7.56(t，1H，J＝8.0Hz)，8.33(s，1H)，8.50(s，1H).

    实施例263

     1-(3-氰基-5-苯基-2-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例262的化合物所报道的方法，只是使用2-氯-5-苯基烟碱腈代替5-(三氟甲基)-吡啶，合成标题产物。反应后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从9∶1到4∶6洗脱，得到标题产物(10％)。

    MS：[M+H]⁺＝391.35

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.52-2.57(m，2H)，2.62(s，3H)，2.75-2.80(m，2H)，3.85-3.95(m，4H)，5.68(s，1H)，7.08-7.15(m，1H)，7.25-7.70(m，7H)，8.00(s，1H)，8.61(s，1H).

    MS：[M+H]⁺＝391.35

    实施例264

     1-(2-丙氧基-3-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    在充满氮气的火焰干燥的烧瓶(flamed flask)中，向CuI(19.4毫克.0.1毫摩尔))、K₃PO₄(425毫克，2毫摩尔)、乙二醇(112微升)，3-碘代-2-丙氧基吡啶(263毫克，1毫摩尔)在1毫升正丁醇的混合物中加入255毫克溶解在1毫升正丁醇中的实施例3的化合物。该悬浮液在100℃加热5小时。然后将反应混合物冷却至环境温度，用EtOAc稀释，用NaHCO₃水溶液和水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干。后处理之后，残留物通过自动化快速液相(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc 8∶2洗脱，得到标题产物(32毫克，10％)。

    MS：[M+H]⁺＝348.43

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：1.10(t，J＝8.0Hz，3H)；1.85-1.92(m，2H)；2.53-2.56(m，2H)；2.58(s，3H)；2.83-2.85(m，2H)；3.14-3.19(m，4H)；4.35(t，J＝8.0Hz，2H)；5.60(s，1H)；6.82-6.85(m，1H)；7.08-7.10(m，2H)；7.26-7.28(m，1H)；7.55(t，J＝8.0Hz，1H)；7.80(d，J＝8.0Hz，1H).

    实施例265

     1-(吡啶并[2，3-b]吡嗪-7-基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例234的化合物所报道的方法，使用7-溴吡啶并[2，3-b]吡嗪代替4-溴异喹啉，制备标题化合物。通过自动化快速液相色谱进行纯化(Horizon^TM-Biotage)，用CHCl₃-1.4N NH₃的MeOH溶液100∶0.25洗脱。产率：16％。

    MS：[M+H]⁺＝342.41

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.50-2.70(m，5H)；2.85-2.88(m，2H)；3.60-3.64(m，4H)；5.70(s，1H)；7.11(d，J＝8.0Hz，1H)；7.28(d，J＝8.0Hz，1H)；7.54-7.58(m，2H)；8.80(m，2H)；9.95(d，J＝4.0Hz，1H).

    实施例266

     1-(3-氰基-2-噻吩基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例234的化合物所报道的方法，使用2-溴-3-氰基噻吩代替4-溴异喹啉，制备标题化合物。通过RP LC-MS色谱进行纯化，采用MS-C18XTerra柱30x50mm，用碳酸氢铵20mM pH 8缓冲液-乙腈梯度洗脱，得到标题化合物。产率：22％。

    MS：[M+H]⁺＝320.36

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.53-2.58(m，5H)；2.83-2.85(m，2H)；3.58-3.60(m，4H)；5.66(s，1H)；6.51(d，J＝8.0Hz，1H)；6.90(d，J＝8.0Hz，1H)；7.10(d，J＝8.0Hz，1H)；7.27(d，J＝8.0Hz，1H)；7.56(t，J＝8.0Hz，1H).

    实施例267

     1-(6-乙氧基-3-吡啶基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例234的化合物所报道的方法，使用5-溴-2-乙氧基吡啶代替4-溴异喹啉，用tol-BINAP(2，2′-双(二-对甲苯基膦基)-1，1′-联萘)代替BINAP，制备标题化合物。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc 8∶2洗脱，得到黄色油状的标题产物.产率：10％。

    MS：[M+H]⁺＝334.19

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：1.40(t，J＝8.0Hz，3H)；2.45-2.56(m，2H)；2.59(s，3H)；2.75-2.87(m，2H)；3.10-3.30(m，4H)；4.32(q，J＝8.0Hz，2H)；5.61(s，1H)；6.69(d，J＝8.0Hz，1H)；7.10(d，J＝8.0Hz，1H)；7.27(d，J＝8.0Hz，1H)；7.30-7.40(m，1H)；7.56(t，J＝8.0Hz，1H)；7.83(s，1H).

    实施例268

     1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(2，6-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例237所述方法制备标题化合物，只是使用化合物248a代替化合物237a，用二异丙基乙胺(DIPEA)代替三乙胺，用2-氯-3-硝基吡啶代替2-溴-3-硝基吡啶。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从9∶1到7∶3洗脱，得到标题产物。黄色油。产率：55％。

    MS：[M+H]⁺＝356.34

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.5-2.6(m，2H)，2.8(m，2H)，3.5-3.6(m，4H)，5.7(m，1H)，6.75-6.85(m，1H)，6.9-7.0(m，2H)，7.2-7.3(m，1H)，8.15-8.20(m，1H)，8.35-8.40(m，1H)

     实施例269-272(表XII)

    根据实施例199所述方法制备这些化合物(参见表XII)，只是使用试剂B代替4-溴-2，6-二氟茴香醚。采用自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用石油醚-EtOAc梯度从100∶0到20∶80洗脱。

     表XII

       实施例  试剂B(注解)  化学名称  LC-  MS  M/Z  ¹H-NMR  (CDCl₃，δ)  269  1-(3-碘代苄基)-  1H-吡唑  1-(3-硝基-2-吡啶基)-  4-{3-[3-(1H-吡唑-1-  基甲基)-苯基]-亚丙-  2-炔基}-哌啶  400.45  2.45-2.55(m，2H)，2.7-2.8(m，  2H)，3.45-3.55(m，4H)，53(m，  2H)，5.6(m，1H)，6.25-6.35(m，  1H)，6.75-6.85(m，1H)，7.15-  7.25(m，1H)，  7.3(m，2H)，7.4(m，2H)，  7.6(m，1H)，8.15-8.20(m，1H)，  8.35-8.40(m，1H)  270  N-(3-碘代-2-吡  啶基)-特戊酰  胺；  THF作为共溶  剂；环境温度  1-(3-硝基-2-吡啶基)-  4-{3-[2-(2，2-二甲基-  丙酰氨基)-3-吡啶基]-  亚丙-2-炔基}-哌啶  420.48  1.4(s，9H)，2.45-2.55(m，2H)，  2.7-2.8(m，2H)，3.5-3.6(m，  4H)，5.7(m，1H)，6.8(m，1H)，  7.25(m，1H)，7.9-8.0(m，1H)，  8.2(m，1H)，8.4(m，1H)，  8.5(m，1H)，9.2(s，1H)  271  1-(3-碘代苄基)-  4-甲基-哌嗪  1-(3-硝基-2-吡啶基)-  4-{3-[3-(4-甲基-哌嗪-  1-基甲基)-苯基]-亚  丙-2-炔基}-哌啶  432.54  272  3-乙酰基-碘苯  1-(3-硝基-2-吡啶基)-  4-[3-(3-乙酰基苯基)-  亚丙-2-炔基]-哌啶  362.40  2.45-2.55(m，2H)，2.6(s，3H)，  2.7-2.8(m，2H)，3.45-3.55(m，  4H)，5.65(m，1H)，6.8(m，1H)，  7.4-7.5(m，1H)，7.6-7.7(d，1H)，  7.9(d，1H)，8.0(s，1H)，8.2(d，1H)，  8.4(m，1H)

     实施例273

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(4-氟-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

     1-(叔丁氧基羰基)-4-[3-(4-氟-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶(化合物273a)

    根据实施例199的化合物所述方法制备标题化合物，只是使用化合物2b代替化合物1c，用2-氯-4-氟代吡啶代替4-溴-2，6-二氟茴香醚。常规的后处理步骤之后，通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从95∶5到60∶40洗脱。产率：38.5％。

    MS：[M+H]⁺＝317.2

     4-[3-(4-氟-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶(化合物273b)

    根据化合物228b所述方法将化合物273a转化为标题化合物。化合物273b无需进一步纯化即可用于下一步骤。产率：76％

    MS：[M+H]⁺＝217.2

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(4-氟-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例237的化合物所述方法制备标题产物，用2-氯-6-甲基-3-硝基吡啶代替2-溴-3-硝基吡啶，用N-甲基吡咯烷酮代替N，N-二甲基乙酰胺。通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从95∶5到60∶40洗脱，得到黄色固态的标题化合物。产率：36％。

    MS：[M+H]⁺＝353.2

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.49(s，3H)，2.50-2.57(m，2H)，2.75-2.85(m，2H)，3.45-3.60(m，4H)，5.65(s，1H)，6.63(d，J＝8Hz，1H)，6.95-7.05(m，1H)，7,17(d，J＝8Hz，1H)，8.10(d，J＝8Hz，1H)，8.52-8.60(m，1H).

    实施例274

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3，5-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

     4-(3-三甲基甲硅烷基-亚丙-2-炔基)-哌啶(化合物274a)

    根据实施例3的化合物所述的方法合成标题化合物，使用化合物2a代替实施例2的化合物。

    可用于进行反应的另一种方法包括在环境温度(而不是70℃)下搅拌4小时并静置过夜。

    反应混合物用水和K₂CO₃水溶液洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，真空蒸发至干，无需进一步纯化即可用于下一步骤。

    MS：[M+H]⁺＝194.24

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-(3-三甲基甲硅烷基-亚丙-2-炔基)-哌啶(化合物274b)

    方法A：根据实施例273的化合物所述的方法合成标题化合物，只是分别用化合物274a和2-氯-6-甲基-3-硝基吡啶代替化合物273a和2-溴-3-硝基吡啶。标准后处理过程产生的残留粗产物无需进一步纯化即可用于下一步骤。

    方法B：使用1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-哌啶酮代替1-(3-硝基-2-吡啶基)-4-哌啶酮，根据化合物1b所述方法合成标题化合物。残留粗产物无需进一步纯化即可用作中间体。

    MS：[M+H]⁺＝330.27

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-(亚丙-2-炔基)-哌啶(化合物274c)

    根据化合物1c所述方法合成标题化合物，只是使用化合物274b代替化合物1b。通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-丙酮梯度从97∶3到9∶1洗脱，得到标题化合物。产率：29％。

    MS：[M+H]⁺＝258.08

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3，5-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    氮气吹扫下，向化合物274c(70毫克，0.27毫摩尔)、乙酸钠三水合物(74.2毫克，0.55毫摩尔)和1-溴-3，5-二氟苯(33.5微升，0.27毫摩尔)在2.05毫升DMF的悬浮液中加入四(三苯基膦)钯(0)(15.8毫克，0.014毫摩尔)，将反应混合物置于微波炉(Biotage)中，120℃加热10分钟。用EtOAc稀释，用H₂O洗涤，用Na₂SO₄干燥，然后蒸发，通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化(PE-CH₂Cl₂6∶4)，得到74毫克(73.7％)标题化合物。

    MS：[M+H]⁺＝370.27

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.49-2.53(s和m，5H)，2.72-2,78(m，2H)，3.51-3.59(m，4H)，5.61(s，1H)，6.64(d，1H，J＝8Hz)，6.75-6.82(m，1H)，6.94-6.98(m，2H)，8.11(d，1H，J＝8Hz)

    根据和实施例274的化合物相同的方法制备以下化合物，只是分别使用所示的卤代衍生物代替1-溴-3，5-二氟苯。

    实施例275

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3-氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由1-溴-3-氟代苯。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc梯度从97.5∶2.5到9∶1。橙色固体。产率：82％。

    MS：[M+H]⁺＝352.49

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.48-2.51(m，5H)，2.74-2,77(m，2H)，3.51-3.58(m，4H)，5.62(s，1H)，6.62(d，1H，J＝8Hz)，6.98-7.07(m，1H)，7.14(d，1H，J＝8Hz)，7.22(m，1H)，7.27-7.33(m，1H)，8.11(d，1H，J＝8Hz)

    实施例276

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由2-溴吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc梯度从9∶1到7∶3。黄色固体。产率：42％。

    MS：[M+H]⁺＝335.34

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.48-2.53(s和m，5H)，2.78-2,83(m，2H)，3.49-3.59(m，4H)，5.65(s，1H)，6.62(d，1H，J＝8Hz)，7.21-7.26(m，1H)，7.43-7.47(dd，1H)，7.66-7.71(m，1H)，8.10(d，1H，J＝8Hz)，8.59-8.63(dd，1H)

    实施例277

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-氟-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由2-溴-6-氟代吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc梯度从95∶5到9∶1。黄色油。产率：68％。

    MS：[M+H]⁺＝353.33

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.49-2.54(s和m，5H)，2.77-2,82(m，2H)，3.51-3.59(m，4H)，5.64(s，1H)，6.64(d，1H，J＝8Hz)，6.86-6.91(dd，1H)，7.27-7.34(dd，1H)，7.73-7.80(m，1H)，8.12(d，1H，J＝8Hz

    实施例278

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-氟-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由5-溴-2-氟代吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc梯度从95∶5到8∶2。黄色固体。产率：54％。

    MS：[M+H]⁺＝353.33

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.49-2.53(s和m，5H)，2.73-2,78(m，2H)，3.51-3.59(m，4H)，5.62(s，1H)，6.64(d，1H，J＝8Hz)，6.90-6.95(dd，1H)，7.79-7.85(dd，1H)，8.11(d，1H，J＝8Hz)，8.31(s，1H)

    实施例279

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(2-氟-4-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由4-碘代-2-氟代吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc梯度从9∶1到8∶2。黄色固体。产率：60％

    MS：[M+H]⁺＝353.33

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.51-2.55(s和m，5H)，2.74-2,79(m，2H)，3.52-3.60(m，4H)，5.64(s，1H)，6.65(d，1H，J＝8Hz)，6.94(s，1H)，7.16-7.19(dd，1H)，8.12(d，1H，J＝8Hz)，8.185(d，1H，J＝4Hz)

    实施例280

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(5-氟-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由3-溴-5-氟代吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc梯度从93∶7到7∶3。黄色固体。产率：56％。

    MS：[M+H]⁺＝353.33

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.49-2.54(s和m，5H)，2.73-2,78(m，2H)，3.51-3.60(m，4H)，5.64(s，1H)，6.64(d，1H，J＝8Hz)，6.45-6.49(m，1H)，8.11(d，1H，J＝8Hz)，8.41(s，1H)，8.50(s，1H)

    实施例281

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(5-氰基-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由5-溴烟碱腈。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc梯度从9∶1到7∶3。黄色固体。产率：73％

    MS：[M+H]⁺＝360.33

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.51-2.55(s和m，5H)，2.74-2,79(m，2H)，3.52-3.61(m，4H)，5.65(s，1H)，6.65(d，1H，J＝8Hz)，7.97(s，1H)，8.12(d，1H，J＝8Hz)，8.77(s，1H)，8.84(s，1H).

    实施例282

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(2，5-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由2，5-二氟-碘苯。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc 97.5∶2.5。黄色固体。产率：63％。

    MS：[M+H]⁺＝370.34

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.49-2.53(s和m，5H)，2.75-2,80(m，2H)，3.51-3.59(m，4H)，5.65(s，1H)，6.63(d，1H，J＝8Hz)，6.96-7.08(m，2H)，7.09-7.15(m，1H)，8.11(d，1H，J＝8Hz).

    实施例283

     1-(3-氰基-6-甲基-2-吡啶基)-4-[3-(3，5-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例59的化合物所述方法合成标题化合物，分别用化合物228b、2-氯-6-甲基烟碱腈和碳酸钾代替实施例3的化合物、2-氟代吡啶和TEA。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc 95∶5洗脱。黄色固体。产率：61％。

    MS：[M+H]⁺＝350.11

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.40-2.55(m，5H)；2.70-2.80(m，2H)；3.75-3.88(m，4H)；5.60(s，1H)；6.63(d，J＝8.0Hz，1H)；6.70-6.88(m，1H)；6.90-7.00(m，2H)；7.68(d，J＝8.0Hz，1H).

    实施例284

     1-(3-氰基-6-甲基-2-吡啶基)-4-[3-(3-氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

     1-(3-氰基-6-甲基-2-吡啶基)-4-(3-三甲基甲硅烷基-亚丙-2-炔基)-哌啶化合物284a)

    通过以下方法制备标题化合物：将DIPEA和化合物274a的MeCN溶液与2-氯-6-甲基烟碱腈回流20小时。常规后处理之后，残留粗产物通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc 98∶2洗脱。产率：51％。

    纯化的产物包含一定量相应的去甲硅烷基化的炔，但无需进一步纯化即可用作中间体。

     1-(3-氰基-6-甲基-2-吡啶基)-4-[3-(3-氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例274的化合物所述相同的方法制备标题化合物，只是使用1-氟-3-碘苯代替1-溴-3，5-二氟苯，用化合物284a代替化合物274c。后处理过程产生的残留物通过制备型RP LC-MS色谱进行纯化，采用MS-C18XTerra柱30x50mm，用碳酸氢铵20mM pH 8缓冲液-乙腈梯度洗脱，得到无色油状的标题化合物。产率：20.4％。

    MS：[M+H]⁺＝332.40

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.45-2.55(m，5H)；2.72-2.82(m，2H)；3.78-3.90(m，4H)；5.62(s，1H)；6.63(d，J＝8.0Hz，1H)；6.98-7.06(m，1H)；7.12-7.18(m，1H)；7.21-7.26(m，1H)；7.26-7.34(m，1H)；7.68(d，J＝8.0Hz，1H).

    根据和实施例284的化合物所述相同的方法制备以下化合物，只是分别用所示的卤代衍生物代替1-氟-3-碘苯。

    实施例285

     1-(3-氰基-6-甲基-2-吡啶基)-4-[3-(4-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由4-碘代吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc 7∶3。米色固体。产率：84.7％。

    MS：[M+H]⁺＝315.25

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.47(s，3H)；2.51-2.55(m，2H)；2.72-2.83(m，2H)；3.78-3.90(m，4H)；5.65(s，1H)；6.64(d，J＝8.0Hz，1H)；7.36(d，J＝8.0Hz，2H)；7.68(d，J＝8.0Hz，1H)；8.59(d，J＝8.0Hz，2H).

    实施例286

     1-(3-氰基-6-甲基-2-吡啶基)-4-[3-(6-氟-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由2-溴-6-氟代吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc 9∶1。淡黄色油。产率：81.7％。

    MS：[M+H]⁺＝333.38

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.47(s，3H)；2.48-2.55(m，2H)；2.75-2.85(m，2H)；3.77-3.90(m，4H)；5.63(s，1H)；6.63(d，J＝8.0Hz，1H)；6.85-6.93(m，1H)；7.30-7.35(m，1H)；7.67(d，J＝8.0Hz，1H)；7.70-7.80(m，1H).

    实施例287

     1-(3-氰基-6-甲基-2-吡啶基)-4-[3-(5-氰基-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由5-溴烟碱腈。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化PE-EtOAc 9∶1。白色固体。产率：65.1％。

    MS：[M+H]⁺＝340.38

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.50(s，3H)；2.50-2.60(m，2H)；2.72-2.83(m，2H)；3.79-3.92(m，4H)；5.64(s，1H)；6.66(d，J＝8.0Hz，1H)；7.70(d，J＝8.0Hz，1H)；7.98(s，1H)；8.78(s，1H)；8.84(s，1H).

    实施例288

     1-(3-氰基-6-甲基-2-吡啶基)-4-[3-(2-氟-4-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由2-氟-4-碘代吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc 95∶5。白色固体。产率：62.2％。

    MS：[M+H]⁺＝332.45

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.50(s，3H)；2.50-2.60(m，2H)；2.73-2.83(m，2H)；3.79-3.92(m，4H)；5.64(s，1H)；6.66(d，J＝8.0Hz，1H)；6.95(s，1H)；7.19(d，J＝4.0Hz，1H)；7.71(d，J＝8.0Hz，1H)；8.19(d，J＝4.0Hz，1H).

    实施例289

     1-(3-氰基-6-甲基-2-吡啶基)-4-[3-(2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由2-碘代吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc 72∶28。橙色油。产率：76.2％。

    MS：[M+H]⁺＝315.46

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.46(s，3H)；2.47-2.57(m，2H)；2.77-2.88(m，2H)；3.77-3.92(m，4H)；5.65(s，1H)；6.62(d，J＝8.0Hz，1H)；7.22-7.30(m，1H)；7.42-7.53(m，1H)；7.61-7.77(m，1H)；8.60-7.65(m，1H).

    实施例290

     1-(3-氰基-6-甲基-2-吡啶基)-4-[3-(2，5-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由2，5-二氟-碘苯。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化PE-Et₂O 85∶15。橙色固体。产率：96.2％。

    MS：[M+H]⁺＝350.46

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.50(s，3H)；2.51-2.57(m，2H)；2.74-2.85(m，2H)；3.79-3.92(m，4H)；5.65(s，1H)；6.64(d，J＝8.0Hz，1H)；6.95-7.08(m，2H)；7.09-7.16(m，1H)；7.70(d，J＝8.0Hz，1H).

    实施例291

     1-(3-氰基-6-甲基-2-吡啶基)-4-[3-(5-氰基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由2-氯-5-氰基吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-Et₂O 6∶4。黄色固体。产率：45.2％。

    MS：[M+H]⁺＝340.38

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.52(s，3H)；2.53-2.60(m，2H)；2.78-2.89(m，2H)；3.81-3.93(m，4H)；5.68(s，1H)；6.66(d，J＝8.0Hz，1H)；7.52(d，J＝8.0Hz，1H)；7.72(d，J＝8.0Hz，1H)；7.92(d，J＝8.0Hz，1H)；8.85(s，1H).

    实施例292

     1-(3-氰基-6-甲基-2-吡啶基)-4-[3-(6-氟-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由5-溴-2-氟代吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc 95∶5。微褐色的油。产率：54.8％

    MS：[M+H]⁺＝333.31

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.50(s，3H)；2.50-2.57(m，2H)；2.72-2.82(m，2H)；3.79-3.92(m，4H)；5.62(s，1H)；6.65(d，J＝8.0Hz，1H)；6.88-6.98(m，1H)；7.70(d，J＝8.0Hz，1H)；7.77-7.89(m，1H)；8.31(s，1H).

    实施例293

     1-(3-氰基-6-甲基-2-吡啶基)-4-[3-(5-氟-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由3-溴-5-氟代吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc 85∶15。微黄色固体。产率：42.8％。

    MS：[M+H]⁺＝333.38

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.48(s，3H)；2.49-2.58(m，2H)；2.72-2.83(m，2H)；3.79-3.92(m，4H)；5.63(s，1H)；6.64(d，J＝8.0Hz，1H)；7.42-7.50(m，1H)；7.69(d，J＝8.0Hz，1H)；8.41(s宽，1H)；8.50(s宽，1H).

    实施例294

     1-(3-氰基-4-甲氧基-2-吡啶基)-4-[3-(3-氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

     1-(3-氰基-4-甲氧基-2-吡啶基)-4-(3-三甲基甲硅烷基-亚丙-2-炔基)-哌啶(化合物294a)

    根据实施例262的化合物所示方法合成标题化合物，只是使用2-氯-4-甲氧基烟碱腈代替3-溴-5-(三氟甲基)-吡啶，用化合物274a代替实施例3的化合物，在135℃搅拌。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc 100∶30得到象牙黄固体。产率：35％。

    MS：[M+H]⁺＝326.31

     1-(3-氰基-4-甲氧基-2-吡啶基)-4-[3-(3-氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据和实施例274的化合物所述相同的方法制备标题化合物，只是用化合物294a代替化合物274c，用1-氟-3-碘苯代替1-溴-3，5-二氟苯，并在起始反应混合物中加入1摩尔当量的氟化四丁基铵一水合物。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc 100∶30，然后用CHCl₃，通过制备型RP LC-MS色谱进行最终纯化，采用MS-C18XTerra柱30x50mm，用碳酸氢铵20mM pH 8缓冲液-乙腈梯度洗脱，得到无色油。产率：20.4％。LCPREP。无色油。产率：20.4％。

    MS：[M+H]⁺＝348.43

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.51-2.54(m，2H)，2.77-2.79(m，2H)，3.81-3.87(m，4H)，3.99(s，3H)，5.62(s，1H)，6.39(d，1H，J 8Hz)，7.00-7.05(m，1H)，7.13-7.16(m，1H)，7.22-7.24(m，1H)，7.27-7.328M，1H)，8.23(d，1H，J 4Hz)

    根据和实施例294的化合物所述相同的方法制备以下化合物，只是分别使用所示的卤代衍生物代替1-氟-3-碘苯。

    实施例295

     1-(3-氰基-4-甲氧基-2-吡啶基)-4-[3-(3，5-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由3，5-二氟-溴苯。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化CHCl₃-MeOH/NH₃ 100∶0.1。赭黄色固体。产率：65％。

    MS：[M+H]⁺＝366.35

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.50-2.53(m，2H)，2.74-2.77(m，2H)，3.79-3.85(m，4H)，3.98(s，3H)，5.60(s，1H)，6.37(d，1H，J 4Hz)，6.76-6.81(m，1H)，6.95-6.97(m，2H)，8.22(d，1H，J 8Hz)

    实施例296

     1-(3-氰基-4-甲氧基-2-吡啶基)-4-[3-(2，5-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由2，5-二氟-碘苯。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化CHCl₃-MeOH/NH₃ 100∶0.07。象牙黄固体。产率：84％。

    MS：[M+H]⁺＝366.35

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.51-2.53(m，2H)，2.77-2.80(m，2H)，3.80-3.85(m，4H)，3.98(s，3H)，5.64(s，1H)，6.37(d，1H，J 4Hz)，6.97-7.07(m，2H)，7.10-7.15(m，1H)，8.22(d，1H，J 8Hz).

    实施例297

     1-(3-氰基-4-甲氧基-2-吡啶基)-4-[3-(2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由2-溴吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化CHCl₃-MeOH/NH₃ 100∶0.05。淡黄色油。产率：25％。

    MS：[M+H]⁺＝331.35

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.51-2.54(m，2H)，2.81-2.84(m，2H)，3.79-3.84(m，4H)，3.97(s，3H)，5.66(s，1H)，6.37(d，1H，J 4Hz)，7.24-7.27(m，1H)，7.46-7.48(m，1H)，7.69-7.73(m，1H)，8.22(d，1H，J 4Hz)，8.61-8.62(m，1H).

    实施例298

     1-(3-氰基-4-甲氧基-2-吡啶基)-4-[3-(6-氟-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由2-溴-6-氟代吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化CHCl₃-MeOH/NH₃ 100∶0.05。透明黄色固体。产率：47％。

    MS：[M+H]⁺＝349.41

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.51-2.53(m，2H)，2.78-2.81(m，2H)，3.79-3.84(m，4H)，3.98(s，3H)，5.63(s，1H)，6.37(d，1H，J 4Hz)，6.87-6.89(m，1H)，7.28-7.33(m，1H)，7.72-7.78(m，1H)，8.22(d，1H，J 4Hz).

    实施例299

     1-(3-氰基-4-甲氧基-2-吡啶基)-4-[3-(6-氟-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由5-溴-2-氟代吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化CHCl₃-MeOH/NH₃ 100∶0.05。象牙黄固体。产率：40％

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.51-2.53(m，2H)，2.75-2.78(m，2H)，3.80-3.85(m，4H)，3.98(s，3H)，5.62(s，1H)，6.38(d，1H，J 4Hz)，6.91-6.94(m，1H)，7.80-7.85(m，1H)，8.22(d，1H，J 4Hz)，8.31(s，1H)

    MS：[M+H]⁺＝349.41

    实施例300

     1-(3-氰基-4-甲氧基-2-吡啶基)-4-[3-(2-氟-4-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由2-氟-4-碘代吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，PE-EtOAc 10∶3。淡褐色固体。产率：97％

    MS：[M+H]⁺＝349.41

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.52-2.55(m，2H)，2.75-2.78(m，2H)，3.80-3.85(m，4H)，3.98(s，3H)，5.63(s，1H)，6.38(d，1H，J 4Hz)，6.95(s，1H)，7.17-7.19(m，1H)，8.18(d，1H，J 4Hz)，8.22(d，1H，J 4Hz)

    实施例301

     1-(3-氰基-4-甲氧基-2-吡啶基)-4-[3-(5-氟-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由3-溴-5-氟代吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化PE-EtOAc 10∶3。象牙黄固体。产率：76％

    MS：[M+H]⁺＝349.41

     ¹H-NMR(CDCl₃.δ)：2.51-2.54(m，2H)，2.75-2.78(m，2H)，3.80-3.85(m，4H)，3.98(s，3H)，5.63(s，1H)，6.38(d，1H，J 8Hz)，7.43-7.46(m，1H)，8.22(d，1H，J 4Hz)，8.41(s，1H)，8.50(s，1H).

    实施例302

     1-(3-氰基-4-甲氧基-2-吡啶基)-4-[3-(5-氰基-3-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由3-溴-5-氰基吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化PE-EtOAc 10∶3。透明玫瑰色固体。产率：71％。

    MS：[M+H]⁺＝356.41

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.52-2.55(m，2H)，2.76-2.78(m，2H)，3.81-3.85(m，4H)，3.99(s，3H)，5.64(s，1H)，6.39(d，1H，J 4Hz)，7.98(s，1H)，8.22(d，1H，J 4Hz)，8.77(s，1H)，8.84(s，1H)

    实施例303

     1-(3-氰基-4-甲氧基-2-吡啶基)-4-[3-(5-氰基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    由2-氯-5-氰基吡啶。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化PE-EtOAc 10∶3。透明黄色固体。产率：7％

    MS：[M+H]⁺＝356.48

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.52-2.55(m，2H)，2.80-2.82(m，2H)，3.81-3.85(m，4H)，3.98(s，3H)，5.67(s，1H)，6.39(d，1H，J 4Hz)，7.52(d，1H，J 4Hz)，7.92(d，1H，J 4Hz)，8.22(d，1H，J 4Hz)，8.85(s，1H).

    实施例304

     1-(3-氰基-6-甲基-2-吡啶基)-4-(4-苯基-亚丁-3-炔-2-基)-哌啶

    根据实施例262的化合物所述方法合成标题化合物，用2-氯-6-甲基烟碱腈代替3-溴-5-(三氟甲基)-吡啶，用化合物253d代替实施例3的化合物。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化PE-EtOAc 9∶1得到无色油。产率：35％。

    MS：[M+H]⁺＝328.51

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：1.98(s，3H)，2.48(s，3H)，2.57-2.60(m，2H)，2.84-2.87(m，2H)，3.83-3.88(m，4H)，4.18(s，3H)，6.59-6.61(m，1H)，7.34-7.36(m，3H)，7.45-7.47(m，2H)，7.68-7.70(m，1H).

    实施例305

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-溴-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    方法A：

    根据和实施例274的化合物所述相同的方法制备标题化合物，只是使用2，6-二溴吡啶代替1-溴-3，5-二氟苯。通过自动化快速色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化PE-EtOAc梯度从1∶0到8∶2。黄色固体。产率：30％。

    MS：[M+H]⁺：413.2

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.45-2.60(m，5H)，2.72-2.85(m，2H)，3.45-3.60(m，4H)，5.65(s，1H)，6.63(d，J＝8Hz，1H)7.25-7.58(m，3H)，8.11(d，J＝8Hz，1H).

    方法B：

     1-(叔丁氧基羰基)-4-[3-(6-溴-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶(化合物305a)

    根据实施例274的化合物所述方法由化合物2a(代替化合物274c)制备标题化合物，采用2，6-二溴吡啶代替1-溴-3，5-二氟苯并在起始反应混合物中加入1摩尔当量的氟化四丁基铵一水合物。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从10∶0到8∶2洗脱，得到标题产物。白色固体。产率：68％。

     4-[3-(6-溴-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶(化合物305b)

    根据实施例3的化合物所述方法制备标题产物，只是使用化合物305a代替实施例2的化合物作为原料以及在环境温度下搅拌3天。将反应混合物真空蒸发至干，用氯仿多次溶解残留物以去除过量三氟乙酸。

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(6-溴-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例237的化合物所述制备标题化合物，只是使用化合物305b代替化合物237a，用2-氯-6-甲基-3-硝基吡啶代替2-溴-3-硝基吡啶。使用额外当量的TEA。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从PE∶EtAc 95∶5到6∶4洗脱，得到标题产物。黄色油。产率：95％。

    实施例306

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3-乙氧基苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例274的化合物所述的方法由化合物274c制备标题化合物，只是使用3-乙氧基溴代苯代替1-溴-3，5-二氟苯并在起始反应混合物中加入1摩尔当量的氟化四丁基铵一水合物。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(SP1^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从PE∶EtAc 1∶0到8∶2洗脱，得到标题产物。黄色固体。产率：46％。

    MS：[M+H]⁺378.44

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：1.4-1.5(m，3H)，2.5-2.6(m，5H)，2.8(m，2H)，3.5-3.6(m，4H)，4.0-4.1(m，2H)，5.6(m，1H)，6.6(d，1H)，6.85-6.9(d，1H)，6.95-7.0(s，1H)，7.1(d，1H)，7.2-7.3(m，1H)，8.10-8.15(d，1H)

    实施例307

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3-乙酰基苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据和实施例199的化合物所述相同的方法制备标题化合物，只是用化合物274c代替化合物1c，用3-乙酰基-碘苯代替4-溴-2，6-二氟茴香醚。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(SP1^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从9∶1到8∶2洗脱得到标题产物。黄色油。产率：84.3％。

    MS：[M+H]⁺376.43

    实施例308

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3-乙酰胺基苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例274的化合物所述方法由化合物274c制备标题化合物，使用3-溴乙酰苯胺代替1-溴-3，5-二氟苯并在起始反应混合物中加入1摩尔当量的氟化四丁基铵一水合物。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(SP1^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从7∶3到4∶6洗脱，得到标题产物。橙色油。产率：54％。

    MS：[M+H]⁺391.44

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.2(s，3H)，2.5-2.6(m，2H)，2.8(m，2H)，3.5-3.6(m，4H)，5.6(m，1H)，6.6(d，1H)，7.05-7.15(s，1H)，7.18-7.22(d，1H)，7.25-7.35(m，1H)，7.45-7.55(d，1H)，7.6(s，1H)，8.10-8.15(d，1H).

    实施例309

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[3-(3-丙酮基苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例274的化合物所述方法由化合物274c制备标题化合物，使用3-溴苯基丙酮代替1-溴-3，5-二氟苯并在起始反应混合物中加入1摩尔当量的氟化四丁基铵一水合物。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(SP1^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从9∶1到7∶3洗脱，得到标题产物。橙色油。产率：41％。

    MS：[M+H]⁺390.45

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.2(s，3H)，2.5-2.6(s，5H)，2.8(m，2H)，3.5-3.6(m，4H)，3.7(s，2H)，5.6(m，1H)，6.6(d，1H)，7.1-7.2(m，1H)，7.25(m，1H)，7.35(m，1H)，7.5(d，1H)，8.10-8.15(d，1H).

    实施例310和311

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-3-(3Z)-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-3-(3E)-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

     1-(叔丁氧基羰基)-3-(3Z)-[3-(3-三甲基甲硅烷基-亚丙-2-炔基)-哌啶(化合物310a)

     1-(叔丁氧基羰基)-3-(3E)-[3-(3-三甲基甲硅烷基-亚丙-2-炔基)-哌啶(化合物311a)

    根据化合物1b所述方法合成标题化合物，只是使用1-(叔丁氧基羰基)-哌啶-3-酮代替1-(3-硝基2-吡啶基)-哌啶-4-酮。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(SP1^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从PE-EtOAc95∶5到8∶2洗脱，得到标题产物。收集的极性较低的馏分对应于化合物310a(9.5％)。最后洗脱收集的馏分为化合物311a(10.3％)。

     化合物310a MS：[M+H]⁺294.24

     化合物311a MS：[M+H]⁺294.26

     1-(叔丁氧基羰基)-3-(3Z)-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶化合物310b)

     1-(叔丁氧基羰基)-3-(3E)-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶化合物311b)

    分别从化合物310a和311a开始，根据实施例274的化合物所述的方法制备标题化合物，只是用2-溴-6-甲基吡啶代替1-溴-3，5-二氟苯。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(SP1^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从PE-EtOAc 85∶15到5∶5洗脱，得到标题产物。化合物310b：61％。化合物311b：47％

     化合物310b MS：[M+H]⁺313.35

     化合物311b MS：[M+H]⁺313.33

     3-(3Z)-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶(化合物310c)

     3-(3E)-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶(化合物311c)

    根据实施例3的化合物所述方法得到标题化合物，分别用化合物310b或311b代替实施例2的化合物，在下一步骤中无需进一步纯化即可使用。

     化合物310c MS：[M+H]⁺213.33

     化合物311c MS：[M+H]⁺213.41

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-3-(3Z)-(3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基)-哌啶

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-3-(3E)-(3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基)-哌啶

    根据实施例237的化合物所述制备标题化合物，只是使用化合物310c或311c代替化合物237a作为原料并使用2-氯-6-甲基-3-硝基吡啶代替2-溴-3-硝基吡啶。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(SP1^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从PE-EtOAc 7∶3到6∶4洗脱，得到标题产物。实施例310：18％。实施例310：11％。

    化合物310 MS：[M+H]⁺349.41

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：1.87(s，2H)，2.46-2.53(m，5H)，2.60(s，3H)，3.61(s，2H)，4.35(s，2H)，5.62(s，1H)，6.57-6.59(d，1H，)，7.11-7.13(m，1H)，7.35-7.37(s，1H)，7.61(bs，1H)，8.06-8.08(d，1H)

    化合物311MS：[M+H]⁺349.34

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：1.86-1.92(m，2H)，2.46(s，3H)，2.62(s，3H)2.75-2.78(m，2H)，3.46-3.49(m，2H)，4.30(s，2H)，5.69(s，1H)，6.59-6.61(d，1H)，7.11-7.13(m，2H)，7.56-7.69(s，1H)，8.08-8.10(d，1H)

    实施例312

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[2-羟基-4-(6-甲基-2-吡啶基)-丁-3-炔-2-基]-哌啶

     1-(叔丁氧基羰基)-4-(2-羟基-丁-3-炔-2-基)-哌啶(化合物312a)

    采用溴化乙炔基镁代替溴化苯基乙炔基镁，根据实施例253a的化合物所述方法制备标题化合物。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc 7∶3洗脱。白色固体。产率：73％。

    MS：[M+H]⁺＝254.63

     4-(2-羟基-丁-3-炔-2-基)-哌啶(化合物312b)

    根据实施例3的化合物所述方法制备标题化合物，用化合物312a代替实施例2的化合物，回流6小时。粗产物无需进一步纯化即可用于下一步骤。

    MS：[M+H]⁺＝154.35

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-(2-羟基-丁-3-炔-2-基)-哌啶(化合物312c)

    根据实施例237的化合物所述方法制备标题化合物，只是使用化合物312b代替化合物237a作为原料，用2-氯-6-甲基-3-硝基吡啶代替2-溴-3-硝基吡啶。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc从PE∶EtOAc 9∶1洗脱，得到黄色油状标题产物。产率：93％。

    MS：[M+H]⁺＝290.35

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-[2-羟基-4-(6-甲基-2-吡啶基)-丁-3-炔-2-基]-哌啶

    根据实施例218-226所述方法B，以化合物312c作为原料，用2-溴-6-甲基吡啶制备标题化合物。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc 1∶1洗脱得到黄色油状的标题产物。产率：41％。

    MS：[M+H]⁺＝381.46

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：1.71(s，3H)，1.85-1.94(m，3H)，2.46(s，3H)，2.67，(s，3H)，3.00-306(m，2H)，3.91-4.02(m，2H)，6.54-6.56(m，1H)，7.20-7.22(m，1H)，7.32-7.34(m，2H)，7.67-7.71(m，1H)，8.05-8.07(m，1H).

    实施例313

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-(4-苯基-亚丁-3-炔-2-基)-哌啶

    根据实施例237的化合物所述制备标题化合物，只是使用化合物253d代替化合物237a作为原料，用2-氯-6-甲基-3-硝基吡啶代替2-溴-3-硝基吡啶。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc 9∶1洗脱得到黄色油状的标题产物。产率：87％。

    MS：[M+H]⁺＝348.52

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：1.97(s，3H)，2.51(s，3H)，2.56-2.59(m，2H)，2.83-2.86(m，2H)，3.52-3.56(m，4H)，6.59-6.61(m，1H)，7.31-7.35(m，3H)，7.44-7.46(m，2H)，8.09-8.11(m，1H).

    实施例314

     1-(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)-4-(4-苯基-亚丁-3-炔-2-基)-哌啶

    根据实施例237的化合物所述制备标题化合物，只是使用化合物253d代替化合物237a作为原料，用5-氯-1-甲基-4-硝基咪唑代替2-溴-3-硝基吡啶。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用CH₂Cl₂-MeOH 98∶2洗脱，得到淡黄色油状的标题产物。产率：36.6％。

    MS：[M+H]⁺337.41

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.00(s，3H)，2.55-2.57(m，2H)，2.83-2.84(m，2H)，3.20-3.26(m，4H)，3.63(s，3H)，6.59-6.61(m，1H)，7.28-7.36(m，4H)，7.45-7.47(m，2H).

    实施例315

     1-(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)-4-[3-(3，5-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

     1-(1-甲基-4-硝基1H-咪唑-5-基)-4-(3-三甲基甲硅烷基-亚丙-2-炔基)-哌啶(化合物315a)

    将化合物274a(600毫克，3.01毫摩尔)、5-氯-1-甲基-4-硝基咪唑(752毫克，4.68毫摩尔)和DIPEA(1.1毫升，6.2毫摩尔)在20毫升DMF中的混合物在135℃搅拌5小时。常规的后处理步骤之后，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用EtOAc-MeOH梯度从98∶2到90∶10洗脱；得到250毫克标题化合物，该物质为含有相应的去甲硅烷基化产物的混合物形式。

    MS：[M+H]⁺319.38

     1-(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)-4-[3-(3，5-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例274的化合物所述的最终两个步骤制备标题化合物，只是使用化合物315a代替化合物274b。常规的后处理步骤之后，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用EtOAc-MeOH梯度从1∶0到92∶8洗脱；得到标题化合物。产率：53％。

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.51-2.54(m，2H)；2.75-2.77(m，2H)；3.24-3.29(m，4H)；3.63(s，3H)；5.63(s，1H)；6.67-6，81(m，1H)；6.95-6.97(m，2H)；7.28(s，1H)

    MS：[M+H]⁺359.35

    实施例316

     1-(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例274的化合物所述的最终两个步骤制备标题化合物，只是使用化合物315a代替化合物274b，用2-溴-6-甲基吡啶代替1-溴-3，5-二氟苯。常规的后处理步骤之后，残留物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用EtOAc-MeOH梯度从1∶0到92∶8洗脱；得到标题化合物。产率：50％。

    MS：[M+H]⁺338.42

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.51-2.54(m，2H)；2.62(s，3H)2.84(bs，2H)；3.24-3.29(m，4H)；3.63(s，3H)；5.68(s，1H)；7.12-7.14(m，1H)；7.28(s，1H)；7.32(s，1H)；7.60(bs，1H).

    实施例317

     1-(4-硝基-1H-咪唑-5-基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    向1，4-二硝基咪唑(207毫克，1.31毫摩尔)和碳酸氢钠(242毫克，2.88毫摩尔)在4毫升水和0.16毫升丙酮的溶液中滴加实施例3的化合物(278毫克，1.31毫摩尔)的丙酮溶液。将该反应混合物回流2小时，倒入水中，用EtOAc萃取。残留粗产物通过自动化快速液相色谱(Horizon^TM-Biotage)进行纯化，用EtOAc-MeOH梯度从1∶0到92∶8洗脱；得到标题化合物，纯度不够。所以，通过制备型RP LC-MS色谱进一步纯化，采用MS-C 18XTerra柱30x50mm，用碳酸氢铵20mM pH 8缓冲液-乙腈梯度洗脱，得到4毫克标题化合物。

    MS：[M+H]⁺324.42

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.52(bs，2H)；2.60(s，3H)；2.75(bs，2H)；3.73(bs，4H)；5.63(s，1H)；7.12-7.14(d，1H)；7.43-7.47(s；1H)；7.55(s，1H)；7.58-7.62(s，1H)；7.0-7.50(bs，1H).

    实施例318

     1-(3-氰基-2-噻吩基)-4-[3-(2，5-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

     1-(3-氰基-2-噻吩基)-4-(3-三甲基甲硅烷基-亚丙-2-炔基)-哌啶(化合物318a)

    根据实施例42的化合物所述方法制备标题化合物，用2-溴噻吩-3-腈代替2-溴苯，用三(二亚苄基丙酮)二钯(0)代替乙酸钯(II)，用化合物274a代替实施例3的化合物。运行之后，残留物通过自动化快速液相色谱(SP1^TM-Biotage)进行纯化，用PE-二乙醚95∶5洗脱，得到标题产物。微黄色油。产率：89％。

    MS：[M+H]⁺＝301.37

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：0.23(s，9H)；2.43-2.51(m，2H)；2.69-2.78(m，2H)；3.49-3.62(m，4H)；5.45(s，1H)；6.47-6.53(m，1H)；6.86-6.92(m，1H).

     1-(3-氰基-2-噻吩基)-4-[3-(2，5-二氟苯基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例274的化合物所述的方法由化合物318a制备标题化合物，使用2，5-二氟-碘苯代替1-溴-3，5-二氟苯并在起始反应混合物中加入1摩尔当量的氟化四丁基铵一水合物。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(SP1^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc 98∶2洗脱，得到标题产物。黄色固体。产率：66％。

    MS：[M+H]⁺＝341.43

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.51-2.62(m，2H)；2.77-2.88(m，2H)；3.55-3.78(m，4H)；5.67(s，1H)；6.47-6.57(m，1H)；6.92-6.95(m，1H)；6.96-7.18(m，3H).

    实施例319

     1-(6-甲基-3-硝基-2-吡啶基)-4-{3-[3-(3-甲基-1，2，4-噁二唑-5-基)-苯基]-亚丙-2-炔基-哌啶

    根据实施例274的化合物所述方法由化合物274c制备标题化合物，使用5-(3-溴苯基)-3-甲基-1，2，4-噁二唑代替1-溴-3，5-二氟苯并在起始反应混合物中加入1摩尔当量的氟化四丁基铵一水合物。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(SP1^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从9∶1到7∶3洗脱，得到标题产物。黄色油。产率：61％。

    MS：[M+H]⁺＝416.45

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.45-2.55(m，8H)；2.75-2.85(m，2H)；3.45-3.55(m，2H)；3.55-3.65(m，2H)；5.63(s，1H)；6.6(d，1H)；7.45-7.55(m；1H)；7.65(d，1H)；8.00-8.05(d，1H)；8.10(d，1H)；8.2(s，1H).

     实施例320

     1-(2-氰基-3-吡嗪基)-4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-亚丙-2-炔基]-哌啶

    根据实施例237的化合物所述制备标题化合物，只是使用实施例3的化合物代替化合物237a作为原料，用2-氯-3-氰基吡嗪代替2-溴-3-硝基吡啶。后处理之后，残留物通过自动化快速液相色谱(SP1^TM-Biotage)进行纯化，用PE-EtOAc梯度从7∶3洗脱，得到标题产物。微黄色固体。产率：81％。

    MS：[M+H]⁺＝316.51

     ¹H-NMR(CDCl₃，δ)：2.52-2.55(m，2H)；2.60(s，3H)；2.81-2.84(m，2H)；3.87-3.93(m，4H)；5.69(s，1H)；7.11(d，1H，J 8Hz)；7.27-7.29(bs，1H)；7.56-7.59(m，1H)；8.04(s，1H)；8.28(s，1H).

    实施例321

    选定拮抗剂对mGlu5受体亚型的亲和力

    大鼠脑中对亲代谢性谷氨酸盐受体5的放射性配体结合试验

    方法

    a)膜的制备：颈脱位法处死雄性SD(Sprague Dawley)大鼠(200-300克，意大利查尔斯河(Charles River，Italy))，前脑(皮层、纹状体和海马)采用Politron匀浆器(Kinematica)，在50体积的冷50mM Tris缓冲液pH 7.4中进行匀浆化(2×20秒)。匀浆在48000xg离心15分钟后，重悬在50体积的相同缓冲液中，37℃孵育15分钟，重复两次离心和重悬步骤。最终的团粒在-80℃冻存备用。

    b)结合试验：将大鼠前脑的团粒重悬在100体积的20mM HEPES，2mM MgCl₂，2mM CaCl₂，pH 7.4中。在有或没有竞争性药物的存在下，最终体积1毫升，将膜与4nM[³H]MPEP在25℃孵育60分钟。在10μMMPEP的存在下测定非特异性结合(Spooren W.等，Trends Pharmacol Sci.22，331-337，2001)。加入冷的Tris缓冲液pH 7.4终止孵育，快速过滤通过0.5％聚乙烯亚胺预处理的Filtermat 1204-401(Wallac)滤器。然后用冷的缓冲液洗涤滤器，由液闪光谱法对滤器上保留的放射性进行计数。

    c)数据分析：通过测定测试化合物对放射性配体特异性结合的抑制作用，采用非线性曲线拟合软件Prism 4.0(Graphpad，加州圣地亚哥)来评价50％抑制浓度(IC₅₀)值。根据Cheng和Prusoff的方程(Cheng，Y.C.&Prusoff，W.H.Biochem.Pharmacol.22，3099-3108，1973)，将IC₅₀值转化为亲和常数(Ki)。

    结果

    本发明化合物对mGlu5受体的亲和力(Ki)为0.1-1000nM。例如，实施例1的化合物的Ki为0.37nM。

    实施例322

    选定拮抗剂对mGlu1受体亚型的亲和力

    大鼠脑中对亲代谢性谷氨酸盐受体1的放射性配体结合试验

    方法

    a)膜的制备：颈脱位法处死雄性SD大鼠(200-300克，意大利查尔斯河)，小脑采用Politron匀浆器(Kinematica)，在50体积的冷50mM Tris缓冲液pH 7.4中进行匀浆化(2×20秒)。匀浆在48000xg离心15分钟后，重悬在50体积的相同缓冲液中，37℃孵育15分钟，重复两次离心和重悬步骤。最终的团粒在-80℃冻存备用。

    b)结合试验：将大鼠小脑的团粒重悬在50mM Tris，1.2mM MgCl₂，2mM CaCl₂，pH 7.4；在有或没有竞争性药物的存在下，最终体积1毫升，将膜与1.5nM[³H]R214127在0℃孵育30分钟。在1μM R214127存在下测定非特异结合(Lavreysen H等，Mol.Pharmacol.63：1082-1093，2003)。加入冷的Tris缓冲液pH 7.4终止孵育，快速过滤通过0.5％聚乙烯亚胺预处理的Filtermat 1204-401(Wallac)滤器。然后用冷的缓冲液洗涤滤器，由液闪光谱法对滤器上保留的放射性进行计数。

    c)数据分析：通过测定测试化合物对放射性配体特异性结合的抑制作用，采用非线性曲线拟合软件Prism 4.0(Graphpad，加州圣地亚哥)来评价50％抑制浓度(IC₅₀)值。根据Cheng和Prusoff的方程(Cheng，Y.C.&Prusoff，W.H.Biochem.Pharmacol.22，3099-3108，1973)，将IC₅₀值转化为亲和常数(Ki)。

    结果

    本发明化合物对mGu1受体的亲和力比对mGlu5受体的亲和力低至少10倍。

    实施例323

    选定拮抗剂对组II(mGlu2+mGlu3)受体亚型的亲和力

    大鼠脑中对组II亲代谢性谷氨酸盐受体的放射性配体结合试验

    方法

    a)膜的制备：颈脱位法处死雄性SD(Sprague Dawley)大鼠(200-300克，意大利查尔斯河(Charles River，Italy))，前脑(皮层、纹状体和海马)采用Politron匀浆器(Kinematica)，在50体积的冷50mM Tris缓冲液pH 7.4中进行匀浆化(2×20秒)。匀浆在48000xg离心15分钟后，重悬在50体积的相同缓冲液中，37℃孵育15分钟，重复两次离心和重悬步骤。最终的沉淀在-80℃冻存备用。

    b)结合试验：将大鼠前脑团粒用冰冷的试验缓冲液(10mM磷酸钾+100nM溴化钾，pH 7,6)洗涤三次。最终团粒重悬在200体积的试验缓冲液中，在有或没有竞争性药物的存在下，以最终体积1毫升，将膜与1nM[³H]LY341495在0℃孵育30分钟。在1mM l-谷氨酸盐的存在下测定非特异结合(Wright R.A.等，J.Pharmacol.Exp.Ther.298：453-460，2001；Mutel V等，J.Neurochem.75，2590-2601，2000)。加入冷的Tris缓冲液pH 7.4终止孵育，快速过滤通过0.5％聚乙烯亚胺预处理的Filtermat 1204-401(Wallac)滤器。然后用冷的缓冲液洗涤滤器，由液闪光谱法对滤器上保留的放射性进行计数。

    c)数据分析：通过测定测试化合物对放射性配体特异性结合的抑制作用，采用非线性曲线拟合软件Prism 4.0(Graphpad，加州圣地亚哥)来评价50％抑制浓度(IC₅₀)值。根据Cheng和Prusoff的方程(Cheng，Y.C.&Prusoff，W.H.Biochem.Pharmacol.22，3099-3108，1973)，将IC₅₀值转化为亲和常数(Ki)。

    结果

    最高达1000nM时，本发明化合物不影响[³H]LY341495与组II(mGlu2+mGlu3)亲代谢性谷氨酸盐受体的结合。

    实施例324

    随磷酸肌醇的累积的mGlu5受体功能活性的测定

    为测定测试化合物对mGlu5受体的作用模式(激动剂、拮抗剂或反激动剂)，在有或没有各种浓度的测试化合物的存在下，在表达mGlu5受体的细胞中，比较激动剂(谷氨酸盐或使君子氨酸)导致的磷酸肌醇产生刺激的浓度依赖性。

    将细胞与谷氨酸盐降解酶(1U/ml谷氨酸盐丙酮酸转氨酶)和2mM丙酮酸盐预孵育以避免细胞释放谷氨酸盐可能导致的作用。然后，在含有10mMLiCl和各种浓度激动剂(谷氨酸盐或使君子氨酸)或用于激动活性的测试化合物的介质中进行刺激。

    当研究拮抗剂活性时，将测试化合物加入细胞培养物中，20分钟后加入激动剂，在激动剂的存在下继续孵育。

    加入冰冷的高氯酸终止孵育，然后中和样品，离心，上清液用于测定磷酸肌醇(IP)累积，采用安玛西亚生物科技公司(Amersham Biosciences)的Biotrak D-肌-肌醇1，4，5-三膦酸测试系统。以每试管0.19-25pmol(0.08-10.5ng)的范围测定D-肌-肌醇1，4，5-三磷酸(IP₃)。在该试验中，未标记的IP₃与固定量的[³H]-标记IP₃竞争结合有限量的牛肾上腺IP₃结合蛋白。然后离心分离结合的IP₃和游离的IP₃，结合蛋白位于试管底部。然后通过简单的倾析弃去上清液中的游离IP₃，结合馏分附着在试管中。

    测定试管的放射性活性，根据标准曲线内插法确定待测样品中未标记IP₃的量。

    采用软件Prism 4.0(Graphpad，加州圣地亚哥)，通过非线性回归分析确定EC₅₀/IC₅₀。

    结果

    本发明化合物具有拮抗活性。

    实施例325

    清醒大鼠中对膀胱压的影响

    方法：

    采用雄性SD大鼠[对照：(SD)IGS BR]，体重300-400克，由意大利查尔斯河提供。除实验期间外，动物自由进食饮水，在22-24℃，以12-小时白天/12-小时夜晚的强迫循环进行饲养。为了对清醒大鼠的尿动力学参数进行定量，根据过去报道的方法(Guarneri等，Pharmacol.Res.24：175，1991)进行膀胱内压测量研究。

    简言之，通过腹膜内给予3毫升/千克的Equithensin溶液(戊巴比妥30毫克/千克和水合氯醛125毫克/千克)麻醉大鼠并将其置于仰卧位。在经刮毛、清洁的腹壁上制备约10毫米长的中线切口。从粘连组织轻轻分离膀胱，排空后采用聚乙烯插管(内径0.58mm，外径0.96mm)，经膀胱本体上的切口插管，用丝线永久性缝合。插管经肩胛后区中的皮下通道外置，连接于塑料适配器以避免被动物去除的风险。植入后一天用大鼠进行药物测试。

    实验当天，将大鼠置于改良的Bollman笼中，即足够大以使大鼠实现正常蹲踞姿势，但又足够小以防止其转圈的限制笼。大约20分钟的稳定期之后，膀胱插管的游离尖端经T形导管连接于压力传感器(Statham P23XL)并连接于蠕动泵(Gilson Minipuls 2)，蠕动泵能够将温热(37℃)盐水溶液以0.1毫升/分钟的恒定速率连续输注到膀胱中。在多道记录仪(麦格尼生物医学公司(Biomedica Mangoni)的带有BM614/2放大器的Rectigraph-8K San-ei)上连续记录盐水输注到膀胱内过程中的管腔内压力信号(膀胱内压测量图)或者通过数据捕获系统(PowerLab，Chart 4软件，AD装置公司(AD Instruments))储存在PC上。由膀胱内压测量图评价膀胱容积容量(BVC)。将BVC(毫升)定义为诱导逼尿肌收缩然后排尿所需的输注到膀胱内的盐水体积。测定BVC基线值，记为开始30-60分钟内记录的膀胱内压测量图中观察到的值的平均值。在该试验点，中断输注，由胃管口服给予测试化合物。重新启动膀胱输注，根据治疗1、2和3小时过程中观察到的膀胱内压测量图中获得平均值，测定BVC的变化。化合物给予体积为2毫升/千克。对照动物组接受相同量的运载体，对应于0.5％甲基纤维素的水溶液。

    在给定试验条件下，BVC的测量相当于排尿间隔时间的测量。

    统计学分析

    每个实验组包括4-11只动物。所有数据表示为均值±标准差。也评价对于每只大鼠/每个时间，BVC相对于基线值的变化百分率以及ΔBVC(毫升差值)(时间“x ”的BVC减去基线值)。在图中，数据表示为相对于基线值的变化％。

    采用S.A.S./STAT软件，版本6.12对BVC值以及ΔBVC进行统计学分析。运载体和积极治疗效果之间的差异以ΔBVC表示，而相对于基线值的不同时间时的值之间的差异在原始BVC数据上评价。

    结果

    图1显示了口服给予实施例1的剂量的效果随时间的变化。证明口服给予1和3毫克/千克的化合物能有效提高膀胱容积容量(图1)。

    图2显示了口服给予实施例10的剂量的效果随时间的变化。给予0.3毫克/千克能稍许提高膀胱容积容量(不具有统计学显著性)；证明1毫克/千克的剂量能有效提高膀胱容积容量(治疗2和3小时后具有统计学显著性)。

    实施例5和6获得相同结果。

    图3显示了口服给予1和3毫克/千克参比化合物MTEP的效果随时间的变化。剂量1毫克/千克仅能稍许提高膀胱容积容量，而剂量3毫克/千克诱导该参数的持续提高，导致治疗3小时后相对于运载体组的统计学显著性。

    表XIII中给出了本发明化合物和参比标准品的活性，以MED表示(即诱导膀胱容积容量统计学显著性提高的最小有效剂量)。

     表XIII

       实施例  “体内”膀胱压测量  MED(mg/kg口服(os))  实施例1  3  实施例5  0.1  实施例6  1  实施例9  1  实施例10  1  实施例35  3  实施例43  3  实施例55  0.3  实施例56  1  实施例67  1 实施例202  3 实施例208  0.3 MTEP  3

    实施例326

    电刺激三叉神经节诱导的大鼠硬膜中的血浆外渗

    电刺激三叉神经节可诱导硬膜炎症，导致血浆外渗。该动物模型广泛用于测定偏头痛药物。

    腹膜内注射50毫克/千克戊巴比妥麻醉重175-190克的雄性Wistar大鼠，颈静脉插管用于注射药物。将动物置于立体定位架上。离前囟点两侧3.0毫米和后侧3.2毫米处对称钻孔，插入电极至硬膜下9.5毫米。静脉内给予测试化合物或对照运载体溶液，10分钟后给予右侧三叉神经节电刺激(5分钟；2.0mA，5Hz，5毫秒持续时间)，给予电刺激5分钟后，给予伊文思蓝(30毫克/千克，静脉内给予)作为血浆蛋白外渗的标志。刺激过程结束后15分钟，动物经左心室灌注50毫升盐水以去除血管内的伊文思蓝。切除硬膜，吸干并称重。用0.3毫升甲酰胺在50℃萃取组织伊文思蓝24小时。用分光光度计在620nm波长处测定染料浓度，内插到标准曲线上，以纳克伊文思蓝/毫克组织重量表示。

    外渗表示为刺激侧的伊文思蓝含量除以未刺激侧的伊文思蓝含量的商。

    实施例327

    狗GERD模型

    对Beagle狗配置慢性食管造口术，允许压力测定导管和pH探针沿食道和胃通过。

    记录食道下端括约肌和胃的基线压力之后，静脉内途径给予待评价的化合物和对照运载体。

    根据Stakeberg J.和Lehmann A.(Neurogastroenterol.Mot.(1999)11：125-132)，注入酸化膳食后使用蠕动泵以40毫升/分钟的速率注入空气以扩张胃，诱导暂时性食管下端括约肌松驰(TLESR)和反酸。活性化合物能够剂量依赖性地降低TLESR和与反酸有关的TLESR的频率。通过测定相对于运载体对照的两种参数的抑制百分率来确定活性。