作为抗凝剂的芳基和杂环基取代的嘧啶衍生物 【发明领域】
本发明涉及芳基和杂环基取代的嘧啶衍生物及其药学上可接受的盐，其抑制酶——因子Xa，因此可用作抗凝剂。本发明还涉及含这些衍生物或其药学上可接受的盐的药物组合物、及其使用的方法。发明背景
因子Xa是胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶类中的一种酶。因子Xa和Va与钙离子和磷脂的一对一结合形成凝血酶原酶复合物，该复合物将凝血酶原转变为凝血酶。凝血酶又将血纤蛋白原转变为血纤蛋白，该蛋白聚合形成不溶的血纤蛋白。
在凝血级联中，凝血酶原酶复合物是内源性(表面激活)和外源性(血管损伤组织因子)途径的集合点(Biochemistry(1991)，第30卷，10363页；及Cell(1988)，第53卷，505-518页)。随着组织因子途径抑制剂(TFPI)的作用模式的发现，凝血级联模型已进一步明确(Seminars in Hematology(1992)，第29卷，159-161页)。TFPI是循环性多功能域丝氨酸蛋白酶抑制剂，其具有三个Kunitz型功能域，其与因子Va竞争游离的因子Xa。因子Xa和TFPI的二元复合物一旦形成，就变为因子VIIa和组织因子复合物的有效抑制剂。
因子Xa可以被两种不同的复合物激活，在凝血级联中，在“Xa爆发”途径中由组织因子-VIIa复合物，而在“持续Xa”途径中由因子IXa-VIIIa复合物(TENase)。血管损伤后，通过组织因子(TF)激活“Xa爆发”途径。通过“持续Xa”途径籍因子Xa产生的增加发生凝血级联的上调。随着因子Xa-TFPI复合物的形成发生凝血级联下调，该复合物不只除去因子Xa，还进一步抑制通过“Xa爆发”途径的因子的形成。因此，凝血级联由因子Xa自然地调节。
为了防止凝血，抑制因子Xa较抑制凝血酶地主要优点是因子Xa的焦点作用对凝血酶的多功能。凝血酶不仅催化血纤蛋白原转变为血纤蛋白、因子VIII转变为VIIIA、因子V转变为Va及因子XI转变为XIa，还激活血小板，其是一种单核细胞趋化因子，并是淋巴细胞和平滑肌细胞的促细胞分裂剂。当与凝血调节蛋白结合时，凝血酶激活蛋白C，该蛋白是因子Va和VIIIa的体内抗凝剂灭活剂。在循环中，在被肝素或其它与蛋白多糖有关的糖胺聚糖催化的反应中，凝血酶被抗凝血酶III(ATIII)和肝素辅因子II(HCII)快速灭活，而组织中的凝血酶被蛋白酶——连接蛋白灭活。凝血酶通过独特的“系链配体”凝血酶受体发挥其多种细胞激活功能(Cell(1991)，第64卷，1057页)，该受体需要在血纤蛋白激活和裂解中所用的相同阴离子结合位点和激活位点，并通过凝血调节蛋白结合和蛋白C活化来进行。因此，不同类型的体内分子靶竞争结合凝血酶，而随后的蛋白水解将具有差别很大的生理结果，这依赖于何种细胞类型、何种受体、调节剂、底物或抑制剂与凝血酶结合。
有关蛋白抗抑制素和壁虱抗凝肽(TAP)的公开数据表明，因子Xa抑制剂是有效的抗凝剂(Thrombosis and Haemostasis(1992)，第67卷，371-376页；及Science(1990)，第248卷，593-596页)。
因子Xa的活性位点可以通过机理性的或紧密结合的抑制剂阻断(紧密结合抑制剂与机理性抑制剂的不同是在于酶和抑制剂之间缺乏共价连接)。已知两种类型的机理性抑制剂，即可逆的和不可逆的，其区别是酶—抑制剂连接水解的难易(Thrombosis Res.(1992)，第67卷，221-231页；及Trends Pharmacol.Sci.(1987)，第8卷，303—307页)。一系列的胍基化合物是紧密结合抑制剂的实例(Thrombosis Res.(1980)，第19卷，339-349页)。也已显示芳基磺酰基-精氨酸-哌啶-羧酸衍生物(Biochem.(1984)，第23卷，85-90页)，以及一系列含芳基脒的化合物，包括3-脒基苯基芳基衍生物(Thrombosis Res.(1984)，第29卷，635-642页)及双(脒基)苄基环酮(Thrombosis Res.(1980)，第17卷，545-548页)是凝血酶的紧密结合抑制剂。但是，这些化合物对因子Xa的选择性差。相关公开
欧洲公开专利申请0540051(Nagahara等)公开了芳族脒衍生物。据称这些衍生物能通过可逆性抑制因子Xa显示强的抗凝作用。
α，α′-双(脒基亚苄基)环链烷酮和α，α′-双(脒基苄基)环链烷酮的合成描述于Pharmazie(1977)，第32卷，第3号，141-145页。这些化合物被公开为丝氨酸蛋白酶抑制剂。
美国专利5,451,700(Morrissey等人)描述了脒基化合物。这些化合物据称可用作选择性的LTB4受体拮抗剂。
美国专利5,612,363(Mohan等)描述了N，N-二(芳基)环脲衍生物。这些化合物据称是因子Xa抑制剂，因此可用作抗凝剂。
美国专利5,633,381(Dallas等)描述了取代的双(苯基亚甲基)环酮的(Z，Z)、(Z，E)和(E，Z)异构体。这些化合物公开为因子Xa抑制剂，因此可用作抗凝剂。
PCT公开专利申请WO 96/28427(Buckman等)描述了苄脒衍生物。这些化合物据称是因子Xa抑制剂，因此可作为抗凝剂。
PCT公开专利申请WO 97/21437(Arnaiz等)描述了萘基取代的苯并咪唑衍生物。这些化合物据称是因子Xa抑制剂，因此可作为抗凝剂。
PCT公开专利申请WO 97/29067(Kochanny等)描述了苄脒衍生物，它们被氨基酸和羟基酸衍生物取代。这些化合物据称是因子Xa抑制剂，因此可作为抗凝剂。
将上述参考文献、公开专利申请和美国专利整体引入作为参考。发明概述
本发明涉及抑制人因子Xa的化合物或其药学上可接受的盐，它们因此用作治疗以血栓形成为特征的疾病。
因此，本发明的一方面提供了单个立体异构体或其混合物形式的以下式的化合物或其药学上可接受的盐：其中：Z1是-O-、-N(R7)-、-CH2O-或-S(O)n-(其中n为0—2)；Z2是-O-、-N(R7)-、-OCH2-或-S(O)n-(其中n为0—2)；R1和R4分别独立地是氢、卤素、烷基、硝基、-OR7、-C(O)OR7、
-C(O)N(R7)R8、-N(R7)R8、-N(R7)C(O)R7、或-N(H)S(O)2R9；R2是-C(NH)NH2、-C(NH)N(H)OR7、-C(NH)N(H)C(O)OR9、
-C(NH)N(H)C(O)R7、-C(NH)N(H)S(O)2R9或
-C(NH)N(H)C(O)N(H)R7；R3是氢、卤素、烷基、卤代烷基、硝基、脲基、胍基、-OR7、
-C(NH)NH2、-C(NH)N(H)OR7、-C(O)N(R7)R8、
-R10-C(O)N(R7)R8、-CH(OH)C(O)N(R7)R8、-N(R7)R8、
-R10-N(R7)R8、-C(O)OR7、-R10-C(O)OR7、-N(R7)C(O)R7、(1，2)
-四氢嘧啶基(任选被烷基取代)、(1，2)-咪唑基(任选被烷
基取代)、或(1，2)-咪唑啉基(任选被烷基取代)；R5分别独立地是氢、卤素、烷基、卤代烷基、硝基、芳烷氧基、-OR9、
-R10-OR9、-N(R7)R8、-C(O)OR7、-R10-C(O)OR7、
-C(O)N(R7)R8、-R10-C(O)N(R7)R8、
-C(O)N(R7)CH2C(O)N(R7)R8、-N(R7)C(O)N(R7)R8、-N(R7)C(O)NR8、
-N(R7)S(O)2R9、或-N(R7)C(O)N(R7)-CH2C(O)N(R7)R8；R6分别是芳基(任选地被卤素、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧
基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、
烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取
代)、芳烷基(其中芳基任选地被卤素、烷基、芳基、芳烷基、
羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝
基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基
氨基羰基取代)、杂环基(任选地被卤素、烷基、芳基、芳烷基、
羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝
基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基
氨基羰基取代)、或杂环基烷基(其中杂环基任选地被卤素、烷
基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨
基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基
氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)；R7和R8分别独立地是氢、烷基、芳基(任选地被卤素、烷基、芳基、
芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基
氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、
或二烷基氨基羰基取代)、或芳烷基(其中芳基任选地被卤素、
烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基
氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷
基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)；R9分别是烷基、芳基(任选地被卤素、烷基、芳基、芳烷基、羟基、
烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧
基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰
基取代)、或芳烷基(其中芳基任选地被卤素、烷基、芳基、芳
烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨
基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或
二烷基氨基羰基取代)；以及R10分别独立地是亚烷基或亚烯基链。
本发明的另一个方面提供了用于治疗患有以血栓形成活性为特征的疾病的人的组合物，该组合物含有治疗有效量的本发明上述化合物、或其药学上可接受的盐，以及药用赋形剂。
本发明的另一方面提供了治疗患有以血栓形成活性为特征的疾病的人的方法，该方法包括给需要的病人使用治疗有效量的本发明的上述化合物。
本发明的另一方面提供了治疗患有通过抑制因子Xa可减轻的疾病的人的方法，该方法包括给需要的人给药治疗有效量的本发明的上述化合物。
本发明的另一个方面提供了通过给药本发明化合物体外抑制人因子Xa的方法。发明详述定义
除非另有说明，在本发明的说明书和权利要求书中所采用的下述术语具有如下意义：
“烷基”是指仅由碳和氢原子组成的、不包含不饱和键的、具有1-6个碳原子并通过单键连接在该分子的其余部分的直链或支链烃链基团，如甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、1，1-二甲基乙基(叔丁基)等。
“烷氧基”是指式-ORa的基团，其中Ra为如前定义的烷基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、1-甲基乙氧基(异丙氧基)、正丁氧基、正戊氧基、1，1-二甲基乙氧基(叔丁氧基)等。
“烷氧基羰基”是指式-C(O)ORa的基团，其中Ra为上述定义的烷基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、1-甲基乙氧基氧基(异丙氧基羰基)、正丁氧基羰基、正戊氧基羰基、1，1-二甲基乙氧基羰基(叔丁氧基羰基)等。
“链烷醇”是指式Ra-OH的化合物，其中Ra为上述定义的烷基，如甲醇、乙醇、正丙醇等。
“亚烷基”是指仅由碳和氢原子组成的、不包含不饱和键的、具有1—6个碳原子的、直链或支链的二价基团，如亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚正丁基等。
“亚烯基”是指仅由碳和氢原子组成的、具有2—6个碳原子的、直链或支链的不饱和二价基团，其中不饱和键只以双键的形式存在，且其中双键可以存在于该链的第一个碳原子和该分子的其它部分之间，例如亚乙烯基、亚丙烯基、亚正丁烯基等。
“芳基”是指苯基或萘基。
“芳烷基”是指式-RaRb的基团，其中Ra为如前定义的烷基，其被如前定义的芳基Rb取代，如苄基。
“芳烷氧基”是指式-ORc的基团，其中Rc为如上定义的芳烷基，如苄氧基等。
“脒基”是指基团-C(NH)NH2。
“氨基羰基”是指式-C(O)NH2的基团。
“二烷基氨基”是指式-N(Ra)Ra，其中Ra独立地为如前定义的烷基，如二甲基氨基、甲基乙基氨基、二乙基氨基、二丙基氨基、乙基丙基氨基等。
“二烷氨基羰基”是指式-C(O)N(Ra)Ra，其中Ra独立地为如前定义的烷基，如二甲基氨基羰基、甲基乙基氨基羰基、二乙基氨基羰基、二丙基氨基羰基、乙基丙基氨基羰基等等。
“卤素”是指溴、氯、碘或氟。
“卤代烷基”是指被-个或多个如前定义的卤素取代的如前定义的烷基，如三氟甲基、二氟甲基、三氯甲基、2，2，2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基、3-溴-2-氟丙基、1-溴甲基-2-溴乙基等。
“杂环”是指稳定的3—15元环基团，它由碳原子和1—5个选自氮、氧和硫原子的杂原子组成。为了本发明的目的，杂环基团不通过杂原子连接在式(I)、(II)和(III)化合物的嘧啶基部分上。另外，为了本发明的目的，杂环基团可以是单环、双环或三环系统，其可以包括稠合的或桥接的环系统，且杂环中的氮、磷、碳和硫原子可被选择性地氧化为多种氧化态。此外，杂环基中的氮原子可被选择性地季铵化；且杂环基团可以是部分或全部饱和的或芳香性的。这些杂环基团的实例包括但不限于：吖丁啶基、吖啶基、苯并-1，3-二氧杂环戊烯基、苯并二氧杂环戊烷基、苯并呋喃基、咔唑基、噌啉基、二氧杂环戊烷基、吲哚嗪基、萘啶基、全氢吖庚因基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、喹唑啉基、喹喔啉基、喹啉基、异喹啉基、四唑基、四氢异喹啉基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代吖庚因基、吖庚因基、吡咯基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑基、吡唑烷基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、二氢吡啶基、四氢吡啶基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噁唑基、噁唑啉基、噁唑烷基、三唑基、二氢化茚基、异噁唑基、异噁唑烷基、吗啉基、噻唑基、噻唑啉基、噻唑烷基、异噻唑基、硅宁环基、异噻唑烷基、吲哚基、异吲哚基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、喹啉基、异喹啉基、十氢异喹啉基、苯并咪唑基、噻二唑基、苯并吡喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、呋喃基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、噻吩基、苯并噻吩基、硫杂吗啉基、硫杂吗啉基亚砜(thiamorpholinylsulfoxide)、硫杂吗啉基砜、dioxaphospholany和噁二唑基。
“杂环基烷基”是指式-Ra-Rd的基团，其中Ra为如前定义的烷基，而Rd为如前定义的杂环基，例如(4-甲基哌嗪-1-基)甲基、(吗啉-4-基)甲基、2-(噁唑啉-2-基)乙基等。
“(1，2)-咪唑基”是指于1或2位连接的咪唑基。
“(1，2)-咪唑啉基”是指于1或2位连接的4，5-二氢咪唑基。
“单烷基氨基”是指式-NHRa的基团，其中Ra为如前定义的烷基，如甲氨基、乙氨基、丙氨基等。
“单烷基氨基羰基”是指式-C(O)NHRa的基团，其中Ra为如前定义的烷基，如甲氨基羰基、乙氨基羰基、丙氨基羰基等。
“(1，2)-四氢嘧啶基”是指于1或2位连接的四氢嘧啶基。
“选择性”或“选择性地”是指随后所述的的事件可能发生或不发生，该描述包括了所述事件发生或不发生的两种可能。例如，“选择性取代的芳基”是指芳基可被取代或未被取代，该定义包括取代的芳基和无取代基的芳基。
“药学上可接受的盐”包括酸加成盐和碱加成盐。
“药学上可接受的酸加成盐”是指保留游离碱生物功效和性能的那些盐，其不会在生物上或其它方面产生不希望的性能，所述盐可与无机酸形成，无机酸的实例为：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，并可与有机酸形成，有机酸的实例为：乙酸、三氟乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。
“药学上可接受的碱加成盐”是指保留游离酸生物功效和性能的那些盐，其不会在生物上或其它方面产生不希望的性能。这些盐可通过向此游离酸中加入无机碱或有机碱来制备。由无机碱得到的盐包括但不限于：钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝盐等。优选的无机盐为铵、钠、钾、钙和镁盐。由有机碱得到的盐包括但不限于下述碱的盐：伯胺、仲胺、叔胺、取代的胺包括天然取代的胺、环状胺和碱性离子交换树脂，如异丙基胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己基胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺青霉素G、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。特别优选的有机碱为异丙基胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己胺、胆碱和咖啡因。
“治疗有效量”是指本发明的化合物在对人体给药时的用量足以对以下所述的以血栓形成活性为特征的疾病进行有效的治疗。构成“治疗有效量”的本发明化合物的用量将根据化合物、疾病和其严重程度、患者的年龄等改变，但也可由本领域技术人员按照其一般知识及本发明的说明确定。
本文中“治疗”包含了对人体疾病的治疗，所述疾病以血栓形成活性为特征，所述“治疗”包括：
(i)预防人体疾病的发生，特别是当患者己感染上该疾病，但还未诊断出时；
(ii)控制该疾病，即阻止疾病的恶化；或
(iii)缓减该疾病，即使该疾病消退。
本文中所述反应的收率是以理论收率的百分比表示的。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐在其结构中可具有不对称的碳原子、氧化的硫原子或季铵化的氮原子。因此，本发明的化合物或其药学上可接受的盐可包含单一形式的立体异构体、外消旋物和对映体与非对映体的混合物。本发明范围旨在包含所有的这些单一立体异构体、外消旋物及其混合物、以及几何异构体。
本发明所采用的命名法是由I.U.P.A.C.体系改进的，其中本发明的化合物命名为苄脒的嘧啶基衍生物。例如，选自式(I)的本发明化合物：其中，Z1和Z2都是-O-，R1是羟基，R2是脒基，R3是二甲基氨基羰基，R4是氢，R5是氢，而R6是4-甲基苯基，在此命名为4-羟基-3-[[6-(3-(二甲基氨基羰基)苯氧基)-2-(4-甲基苯基)嘧啶-4-基]氧基]苄脒。
为了本说明书的目的，圆括号用来指示主要碳原子的取代基，例如，-C(NH)N(H)C(O)OR9指下式的基团：用途和给药A.用途
本发明的化合物是丝氨酸蛋白酶——因子Xa的抑制剂，因而，基于因子Xa在凝血级联(见上述发明背景部分)的作用，其可用于以血栓形成为特征的疾病。这些化合物的主要适应症是预防心肌梗塞后长期的危险。其它适应症是预防矫形外科术后深度静脉血栓形成(DVT)或预防短暂缺血性发作后的患者。本发明的化合物还可用于目前采用香豆素的适应症，如DVT或其它类型的外科术如冠状动脉旁路移植和经皮穿透冠状血管成形术。本发明的化合物还用于治疗与下述疾病相关的血栓形成并发症，包括急性前髓细胞白血病、糖尿病、多发性骨髓瘤、与脓毒性休克有关的弥散性血管内凝血、与感染有关的紫瘢暴发、成人呼吸窘迫综合症、不稳定心绞痛，以及与主动脉瓣或血管修复术相关的血栓形成并发症。本发明的化合物也可用于预防血栓形成疾病，特别是发生这种疾病危险性高的患者。
此外，本发明的化合物可用作选择性抑制因子Xa而不会抑制凝血级联中其它成分的体外和体内诊断试剂。B.试验
用于显示本发明化合物对因子Xa抑制作用的主要生物实验是简单的显色实验，其仅涉及丝氨酸蛋白酶、待测的本发明化合物、底物和缓冲液(参见：Thrombosis Res.(1979)，第16卷，245-254页)。例如，四种组织人丝氨酸蛋白酶可被用于主要生物实验中，即游离因子Xa、凝血酶原酶、凝血酶(IIa)和组织纤溶酶原激活物(tPA)。在表明抑制纤维蛋白溶解过程中不需要的副作用之前，对tPA的实验已成功进行(参见：J.Med.Chem.(1993)，第36卷，314-319页)。
另一个用于说明本发明化合物对抑制因子Xa用途的生物实验表明了化合物在加有柠檬酸盐的血浆中对游离因子Xa的作用效力。例如，本发明化合物的抗凝作用是用凝血酶原时间(PT)或激活的部分促凝血酶原激酶时间(aPTT)测定，而化合物的选择性则用凝血酶凝块时间(TCT)实验检测。在主要酶实验中的Ki值与在加有柠檬酸盐的血浆中游离因子Xa的Ki值间的关系将会筛选出与其它血浆成分作用或被其它血浆成分灭活的化合物。而Ki值与PT延长的关系是必要的体外证明，证明游离因子Xa抑制实验中的效力转化成临床凝血实验的效力。此外，在加有柠檬酸盐的血浆中PT的延长可用于测量在随后的药物动力学研究中的作用时间。
有关表明本发明化合物活性的实验的其它内容可参见：R.Lottenberg等，Methods in Enzymology(1981)，第80卷，341-361页，和HOhno等，Thrombosis Research(1980)，第19卷，579-588页。C.一般给药方式
本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以纯化合物形式或适宜的药物组合物进行给药，可采用任何可接受的给药方式或用于类似的用途的试剂进行。因此，采用的给药方式可选择通过口、鼻内、非肠道、局部、透皮或直肠方式，其形式为固体、半固体、冻干粉或液体药剂形式给药，例如，片剂、栓剂、丸剂、软和硬明胶胶囊剂、散剂、溶液剂、混悬剂或气雾剂等，优选采用适用于精确剂量的简单给药的单元剂量形式。组合物可包含常规药用载体或赋形剂和作为活性成分(一种或多种)的本发明的化合物，此外，还可包含其它药剂、载体、辅剂等。
通常，根据所需给药方式，药学上可接受的组合物将包含约1至约99wt％的本发明化合物(一种或多种)或其药学上可接受的盐，以及99至1wt％的适宜的药用赋形剂。优选组合物包含约5至75wt％的本发明化合物(一种或多种)或药学上可接受的盐，其余为适宜的药用赋形剂。
优选的给药途径是口服给药，采用常规日剂量方案，该方案可根据疾病的严重程度进行调整。对于这种口服给药，包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐的药学上可接受的组合物是通过加入通常采用的赋形剂形成的，所述赋形剂的实例例如为药用级甘露醇、乳糖、淀粉、预明胶化淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素醚衍生物、葡萄糖、明胶、蔗糖、柠檬酸盐、没食子酸丙酯等。这种组合物可采用溶液剂、混悬剂、片剂、丸剂、胶囊、散剂、缓释制剂等形式。
优选该组合物为胶囊、囊形片剂或片剂，因而其还可包含稀释剂如乳糖、蔗糖、磷酸二钙等；崩解剂如交联羧甲基纤维素钠或其衍生物；润滑剂如硬脂酸镁等；和粘结剂如淀粉、金合欢胶、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、纤维素醚衍生物等。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐也可配制成栓剂，例如使用约0.5至约50％的活性成分分散于可在体内缓慢溶解的载体中，如聚氧乙烯二醇和聚乙二醇(PEG)，如PEG 1000(96％)和PEG 4000(4％)。
可采用液体形式给药的药物组合物例如可通过溶解、分散等手段将本发明的化合物(一种或多种)(约0.5至约20％)或其药学上可接受的盐和选择性存在的药用辅剂溶解、分散于载体中，载体的实例为水、盐水、含水葡萄糖、甘油、乙醇等，从而形成溶液剂或混悬剂。
如果需要的话，本发明的药物组合物还可包含少量的辅助物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、抗氧化剂等，例如：柠檬酸、脱水山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、丁基化羟基甲苯等。
该类剂型的实际制备方法是本领域的技术人员公知的或者显而易见的，例如可参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，(MackPublishing Company，Easton，Pennsylvania，1990)。无论如何，按照本发明的技术，所使用的组合物将含有治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐，以用于治疗通过抑制Xa因子而缓减的疾病。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐以治疗有效量进行给药，所述的治疗有效量将会受多种因素的影响而改变，这些因素包括采用的特定化合物的活性，该化合物的代谢稳定性及其作用时间长度，患者的年龄、体重、健康状况、性别、饮食情况，给药方式和时间，排泄速度，联合用药，特定疾病的严重程度及接受治疗的对象。通常，治疗有效的日剂量为约0.14mg至约14.3mg本发明的化合物或其药学上可接受的盐/千克体重/天，优选约0.7mg至约10mg/千克体重/天，首选约1.4mg至约7.2mg/kg体重/天。例如，对体重70kg的人来说，其剂量范围为每天约10mg至约1.0g的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，优选约50至约700mg/天，首选约100至约500mg/天。优选实施方案
在发明简述部分中定义的本发明化合物中，优选的是以下组的化合物，其中：Z1是-O-、-CH2O-或-S(O)n-(其中n为0-2)；Z2是-O-、-OCH2-或-S(O)n-(其中n为0—2)；R1和R4分别独立地是氢、卤素、烷基、或-OR7；R2是-C(NH)NH2、-C(NH)N(H)S(O)2R9或-C(NH)N(H)C(O)N(H)R7；R3是脲基、胍基、-N(R7)R8、-N(R7)C(O)R7、(1，2)-四氢嘧啶基(任选被烷基取代)、(1，2)-咪唑基(任选被烷基取代)、或(1，2)-咪唑啉基(任选被烷基取代)；R5分别独立地是氢、卤素、烷基、或卤代烷基；R6分别是芳基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)、芳烷基(其中芳基任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)、杂环基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)、或杂环基烷基(其中杂环基任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)；R7和R8分别独立地是氢、烷基、芳基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)、或芳烷基(其中芳基任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)；R9分别是烷基、芳基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)、或芳烷基(其中芳基任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)。
在以上组的化合物中，优选的是以下亚组的化合物，其中：Z1是-O-；Z2是-O-；R1是氢或-OR7；R2是-C(NH)NH2；R3是(1，2)-四氢嘧啶基(任选被烷基取代)、(1，2)-咪唑基(任选被烷基取代)、或(1，2)-咪唑啉基(任选被烷基取代)；R4是氢；R5分别独立地是氢或卤素；R6分别是芳基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)、芳烷基(其中芳基任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)、杂环基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)、或杂环基烷基(其中杂环基任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)；而R7独立地是氢或烷基。
在该亚组化合物中，优选的一类化合物是其中：Z1是-O-；Z2是-O-；R1是-OR7；R2是-C(NH)NH2；R3是(1，2)-咪唑基(任选被甲基取代)或(1，2)-咪唑啉基(任选被甲基取代)；R4是氢；R5是氢；而R6是芳基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)；R7是氢或烷基。
在该类化合物中，优选的亚类化合物是选自于式(I)的化合物：
在该亚类化合物中，优选的是以下化合物，其中R1是羟基；R3是1-甲基咪唑啉-2-基；而R6是芳基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)。
在这些优选的化合物中，更优选的化合物是4-羟基-3-[[6-(3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基)-2-(苯基)嘧啶-4-基]氧基]苄脒。
在该类化合物中，优选的亚类化合物是选自于式(II)的化合物：
在该亚类化合物中，优选的是以下化合物，其中R1是羟基；R3是1-甲基咪唑啉-2-基；而R6是芳基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)。
在这些优选的化合物中，更优选的化合物是4-羟基-3-[[4-(3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基)-6-(苯基)嘧啶-2-基]氧基]苄脒。
在该类化合物中，优选的亚类化合物是选自于式(III)的化合物：
在该亚类化合物中，优选的是以下化合物，其中R1是羟基；R3是1-甲基咪唑啉-2-基；而R6是芳基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)。
在这些优选的化合物中，更优选的化合物是4-羟基-3-[[2-(3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基)-6-(苯基)嘧啶-4-基]氧基]苄脒。本发明化合物的制备
为方便起见，以下对于本发明化合物制备的描述仅针对其中Z1和Z2为-O-而R2为-C(NH)NH2的本发明化合物。但应理解的是，可用类似的合成方法来制备式(I)、(II)和(III)的其他化合物。还应理解的是，在以下的描述中，在所述化学式上取代基和/或变化例(如R7和R8)的组合，仅在能够产生稳定化合物时，才是允许的。式(C)化合物的制备
式(C)化合物是制备本发明化合物中的中间体，并可如以下反应路线1中所述来制备，其中R5和R6都如本发明简述部分中所述，而R11是烷基或芳烷基。
反应路线1
式(A)和式(B)的化合物可市售得到，或者可根据本领域技术人员已知的方法来制备。
通常情况下，式(C)的化合物是如下制备的：首先将链烷醇、优选乙醇与摩尔过量的碱金属、优选钠进行处理。在金属完全溶解后，于室温下以等摩尔量将式(A)的化合物及式(B)的化合物添加在上述溶液中。所得反应混合物加热回流4—6小时、优选约4小时。除去溶剂，并在反应混合物中添加强酸、优选盐酸，以形成沉淀，收集该沉淀，并干燥，得到式(C)的化合物。式(G)化合物的制备
式(G)化合物是制备本发明化合物中的中间体，并可如以下反应路线2中所述来制备，其中R5和R6都如本发明简述部分中所述，而R11是烷基或芳烷基。
反应路线2
式(D)和式(E)的化合物可市售得到，或者可根据本领域技术人员己知的方法来制备。
通常情况下，式(G)的化合物是如下制备的：首先将链烷醇、优选乙醇与摩尔过量的碱金属、优选钠进行处理。在金属完全溶解后，于室温下以等摩尔量将式(D)的化合物及式(E)的化合物添加在上述溶液中。所得反应混合物加热回流8—16小时、优选约16小时。除去溶剂，并将残留物溶解在水中。在该溶液中添加强酸、优选盐酸，收集所形成的沉淀，并干燥，得到式(G)的化合物。式(H)化合物的制备
式(H)化合物是制备本发明化合物中的中间体，并可如以下反应路线3中所述来制备，其中R5和R6都如本发明简述部分中所述。
反应路线3
式(C)的化合物可用在此描述的方法来制备。
通常情况下，式(H)的化合物如下制备：在碱如N，N-二乙基苯胺存在时，用略微过量的氯化试剂如磷酰氯处理式(C)的化合物。所得反应混合物回流2—4小时，优选约3小时，然后在该溶液中添加冰，形成沉淀，收集并干燥沉淀，得到式(H)的化合物。
按照类似的方法，可将式(G)的化合物氯化为二氯取代的化合物。式(Ia)化合物的制备
本发明的式(Ia)化合物是选自于式(I)的化合物，而且如以下反应路线4中所述来制备，其中R1、R3、R4、R5和R6都如本发明简述部分中所述。在第1步之前，其中R1、R3、R4、R5和R6取代基包含其他反应性羟基或氨基的式(H)、式(J)和式(L)化合物根据本领域技术人员已知的方法用合适的氧或氮保护基进行处理，例如参见Greene，T.W.，Protective Groups in Organic Synthesis(1981)，John Wiley&Sons，New York，New York。这些经保护的取代基将在第3步的反应条件下脱保护，形成所希望的R1、R3、R4、R5和R6取代基。或者，式(H)、式(J)和式(L)的化合物已经是氧或氮被保护的形式，而且可根据本领域技术人员已知的方法来脱保护，或者在步骤3的反应条件下脱保护，形成所希望的取代基。
反应路线4
式(H)的化合物可用在此公开的方法来合成。式(J)和式(L)的化合物可市售得到，或者根据本领域技术人员己知的方法制备。
通常情况下，式(Ia)的化合物如下制备：首先在碱如碳酸铯存在下，于20—120℃、优选室温下，在非质子性溶剂如乙腈中用等摩尔量的式(J)化合物处理式(H)化合物，其时间用薄层色谱(TLC)监测足以完成所希望的反应。然后用标准分离技术如萃取、真空除去溶剂、以及快速色谱法从反应混合物中分离式(K)化合物。
在非质子性溶剂如DMSO中，式(K)化合物在碱如碳酸铯存在时用等摩尔量的式(L)化合物处理，温度为20—120℃、优选50℃，时间应足以完成所希望的反应，例如约24小时。将反应混合物冷却至室温，然后后用标准分离技术如萃取、真空除去溶剂、以及快速色谱法从反应混合物中分离式(M)化合物。
将式(M)化合物溶解在无水醇、优选乙醇中，然后在溶液中添加无水无机酸、优选盐酸，其时间应足以使酸在溶液中饱和，并同时使反应温度保持在-78℃。完全饱和后，密封反应容器，使反应混合物温热至室温，并搅拌12—24小时、优选18小时。真空除去溶剂，并将所得的残留物溶解在新制的无水醇、优选乙醇中，然后用无水氨(气体)于室温-100℃的温度下处理1-48小时，优选于60℃下处理2小时。用标准分离技术例如真空除去溶剂以及用高效液相色谱(HPLC)纯制，从反应混合物中分离式(Ia)化合物。在最后一步期间，其中任一个R1、R3、R4、R5或R6取代基为氧或氮保护形式的式(G)化合物可脱保护，形成其中R1、R3、R4、R5和R6如本发明简述部分中所述的式(Ia)化合物。
或者，替代用无水氨(气体)处理所得的残留物，所得的残留物还可用式NH2OR7的化合物处理，形成其中R2为-C(NH)N(H)OR7的相应式(Ia)化合物。
其中R3是-C(NH)NH2或-C(NH)N(H)OR7的式(Ia)化合物按照与式(M)化合物类似的方法由相应的氰基化合物制得。
其中R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8或R9包含烷氧基羰基或-C(O)OR7而R7是芳基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)的式(Ia)化合物，可根据本领域技术人员已知的方法由相应的活化酸如酰卤制得。
其中R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8或R9包含氨基羰基、单烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、-C(O)N(R7)R8或-C(O)OR7(其中R7或R8独立地是烷基、芳基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)或芳烷基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代))的式(Ia)化合物，可在酸性条件下水解，制得其中R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8或R9包含羧基或-C(O)OH基团的相应的本发明化合物。
其中R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8或R9包含羧基、烷氧基羰基或-C(O)OR7而R7是氢、烷基、芳基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)或芳烷基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)的式(Ia)化合物，可在标准的酰胺化条件下进行酰胺化，制得相应的式(Ia)化合物，其中R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8或R9包含氨基羰基、单烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基或-C(O)N(R7)R8而R7和R8独立地是氢、烷基、芳基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)或芳烷基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)。
其中R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8或R9包含硝基的式(Ia)化合物可在标准条件下进行还原，形成其中R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8或R9包含氨基的式(Ia)化合物，其可用合适的烷基化剂或环化剂处理，得到其中R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8或R9包含单烷基氨基、二烷基氨基、-N(R7)R8或-N(R7)C(O)R7而R7和R8独立地是氢、烷基、芳烷基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)的式(Ia)化合物。
式(Ia)化合物也可进一步用合适的酸、优选盐酸或者用合适的酸酐或等价物处理，形成其中R2是-C(NH)N(H)C(O)R7而R7是氢、烷基、芳基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)或芳烷基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)的本发明化合物。
或者，式(Ia)化合物进一步用式Cl-C(O)-OR9的化合物或其官能等价物处理，产生其中R2是-C(NH)N(H)C(O)OR9而R9是烷基、芳基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)或芳烷基(任选地被卤素、卤代烷基、烷基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、或二烷基氨基羰基取代)的本发明化合物。
或者，式(Ia)化合物也可进一步在极性溶剂如二氯甲烷中于室温下用式R9-S(O)2-咪唑的化合物(其中R9如发明简述中所定义)处理，制得其中R2是-C(NH)N(H)S(O)2R9而R9如发明简述中所定义的本发明化合物。
或者，式(Ia)化合物可在极性溶剂、优选二氯甲烷中于室温下进一步用合适N—R7取代的苯基氨基甲酸酯处理6—24小时、优选12小时，制得其中R2是-C(NH)N(H)C(O)N(H)R7而R7如发明简述中所定义的本发明化合物。
包含未经氧化的硫原子的式(Ia)化合物可用合适的氧化剂氧化，制得包含己氧化硫的化合物(如-S(O)2-，其中n为1或2)。
按照与上述反应类似的方法，可制备式(II)和(III)的化合物。
如上制得的以游离酸或碱的形式存在的本发明化合物可通过用合适的无机或有机碱或酸处理而转化为药物学上可接受的盐。如上制得的化合物的盐可通过标准方法转化为游离碱或酸。
以下具体的制备例和实施例是用于更好地实施本发明，而绝不是对本发明范围的限制。
制备例1
式(C)的化合物
A、在乙醇(200ml)中添加钠(7.9g，34mmol)。溶解后，添加盐酸苄脒(20.0g，0.128mmol)和丙二酸二乙酯(20ml，132mmol)。反应物加热4小时，真空除去溶剂。添加盐酸，并形成沉淀。收集固体，并在真空炉中干燥，得到10.8g(45％)的2-苯基-4，6-二羟基嘧啶。
B、按照类似的方法制备以下的式(C)化合物：2-(4-甲基苯基)-4，6-二羟基嘧啶；2-(3-氯苯基)-4，6-二羟基嘧啶；2-(4-苯基苯基)-4，6-二羟基嘧啶；2-(4-(苄基氧基)苯基)-4，6-二羟基嘧啶；2-(4-甲氧基苯基)-4，6-二羟基嘧啶；2-(4-(苄氧基羰基氨基)苯基)-4，6-二羟基嘧啶；2-(3-((甲基)(苄氧基羰基)氨基)苯基)-4，6-二羟基嘧啶；2-(4-(二甲基氨基)苯基)-4，6-二羟基嘧啶；2-(4-(氨基羰基)苯基)-4，6-二羟基嘧啶；2-(1-(苄氧基羰基)哌啶-4-基)-4，6-二羟基嘧啶；2-(1-乙基哌啶-4-基)-4，6-二羟基嘧啶；2-(吡啶-2-基)-4，6-二羟基嘧啶；2-(咪唑啉-2-基)-4，6-二羟基嘧啶；以及2-(哌啶-1-基)甲基-4，6-二羟基嘧啶。
C、按照类似的方法可制备其他的式(C)化合物。
制备例2
式(G)的化合物
A、在乙醇(100ml)中添加钠(3.3g，14mmol)。溶解后，添加硫脲(10.7g，14mmol)和苯甲酰基乙酸乙酯(24ml，14mmol)。反应物加热16小时，然后真空除去溶剂。添加水以溶解残留物，然后加入盐酸，并形成沉淀。收集固体，并在真空炉中干燥，得到16g(56％)的2-巯基-4-羟基-6-苯基嘧啶。
B、2-巯基-4-羟基-6-苯基嘧啶(8.6g，42mmol)和氯乙酸(8.5g，90mmol)在水(100ml)中形成浆液。使混合物回流24小时后，添加盐酸，并通过过滤分离沉淀物。固体在真空炉中干燥，得到6.6g(83％)的2，4-二羟基-6-苯基嘧啶。
C、按照类似的方法制备以下的式(G)化合物：6-(4-甲基苯基)-2，4-二羟基嘧啶；6-(3-氯苯基)-2，4-二羟基嘧啶；6-(4-苯基苯基)-2，4-二羟基嘧啶；6-(4-(苄基氧基)苯基)-2，4-二羟基嘧啶；6-(4-甲氧基苯基)-2，4-二羟基嘧啶；6-(4-(苄氧基羰基氨基)苯基)-2，4-二羟基嘧啶；6-(3-((甲基)(苄氧基羰基)氨基)苯基)-2，4-二羟基嘧啶；6-(4-(二甲基氨基)苯基)-2，4-二羟基嘧啶；6-(4-(氨基羰基)苯基)-2，4-二羟基嘧啶；6-(1-(苄氧基羰基)哌啶-4-基)-2，4-二羟基嘧啶；6-(1-乙基哌啶-4-基)-2，4-二羟基嘧啶；6-(吡啶-2-基)-2，4-二羟基嘧啶；6-(咪唑啉-2-基)-2，4-二羟基嘧啶；以及6-(哌啶-1-基)甲基-2，4-二羟基嘧啶
D、按照与部分A和B类似的方法可制备其他的式(G)化合物。
制备例3
式(H)的化合物
A、在4，6-二羟基-2-苯基嘧啶(10.8g，57mmol)中添加磷酰氯(58ml，62mmol)和N，N-二乙基苯胺(16ml，10mmol)。回流3小时后，在溶液中添加冰，并形成沉淀。收集固体并在真空炉中干燥，得到11.4g(88％)的4，6-二氯-2-苯基嘧啶，m.p.：94—95℃。
B、按照类似的方法制备以下化合物：2，4-二氯-6-苯基嘧啶，m.p.：85-87℃。
C、按照类似的方法制备以下的式(H)化合物：2-(4-甲基苯基)-4，6-二氯嘧啶；2-(3-氯苯基)-4，6-二氯嘧啶；2-(4-苯基苯基)-4，6-二氯嘧啶；2-(4-(苄基氧基)苯基)-4，6-二氯嘧啶；2-(4-甲氧基苯基)-4，6-二氯嘧啶；2-(4-(苄氧基羰基氨基)苯基)-4，6-二氯嘧啶；2-(3-((甲基)(苄氧基羰基)氨基)苯基)-4，6-二氯嘧啶；2-(4-(二甲基氨基)苯基)-4，6-二氯嘧啶；2-(4-(氨基羰基)苯基)-4，6-二氯嘧啶；2-(1-(苄氧基羰基)哌啶-4-基)-4，6-二氯嘧啶；2-(1-乙基哌啶-4-基)-4，6-二氯嘧啶；2-(吡啶-2-基)-4，6-二氯嘧啶；2-(咪唑啉-2-基)-4，6-二氯嘧啶；以及2-(哌啶-1-基)甲基-4，6-二氯嘧啶。
D、按照与A部分中类似的方法，制备本发明化合物的以下中间体：6-(4-甲基苯基)-2，4-二氯嘧啶；6-(3-氯苯基)-2，4-二氯嘧啶；6-(4-苯基苯基)-2，4-二氯嘧啶；6-(4-(苄基氧基)苯基)-2，4-二氯嘧啶；6-(4-甲氧基苯基)-2，4-二氯嘧啶；6-(4-(苄氧基羰基氨基)苯基)-2，4-二氯嘧啶；6-(3-((甲基)(苄氧基羰基)氨基)苯基)-2，4-二氯嘧啶；6-(4-(二甲基氨基)苯基)-2，4-二氯嘧啶；6-(4-(氨基羰基)苯基)-2，4-二氯嘧啶；6-(1-(苄氧基羰基)哌啶-4-基)-2，4-二氯嘧啶；6-(1-乙基哌啶-4-基)-2，4-二氯嘧啶；6-(吡啶-2-基)-2，4-二氯嘧啶；6-(咪唑啉-2-基)-2，4-二氯嘧啶；以及6-(哌啶-1-基)甲基-2，4-二氯嘧啶。
E、按照类似的方法，可制备本发明化合物的其他中间体。
制备例4
式(K)的化合物
A、在4，6-二氯-2-苯基嘧啶(1.5g，6.7mmol)的乙腈(20ml)溶液中添加碳酸铯(2.4g，7.4mmol)和3-羟基-4-(苄氧基)苄腈(1.5g，6.5mmol)。搅拌24小时后，在反应混合物中添加水，抽滤所得的固体，得到2.6g的3-[(6-氯-2-苯基嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈。
B、按照类似的方法，制备本发明化合物的以下中间体：3-[(6-氯-4-苯基嘧啶-2-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-氯-6-苯基嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈。
C、按照类似的方法制备以下的式(K)化合物：3-[(2-(4-甲基苯基)-6-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(3-氯苯基)-6-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(4-苯基苯基)-6-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(4-(苄氧基)苯基)-6-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(4-甲氧基苯基)-6-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈； 3-[(2-(4-(苄氧羰基氨基)苯基)-6-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(3-((甲基)(苄氧羰基)氨基)苯基)-6-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈：3-[(2-(4-(二甲基氨基)苯基)-6-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(4-(氨基羰基)苯基)-6-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(1-(苄氧羰基)哌啶-4-基)-6-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(1-乙基哌啶-4-基)-6-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(吡啶-2-基)-6-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(咪唑啉-2-基)-6-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；以及3-[(2-(哌啶-1-基)甲基-6-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈。
D、按照与上述类似的方法，制备本发明化合物的以下中间体：3-[(6-(4-甲基苯基)-2-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(3-氯苯基)-2-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(4-苯基苯基)-2-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(4-(苄氧基)苯基)-2-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(4-甲氧基苯基)-2-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(4-(苄氧羰基氨基)苯基)-2-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(3-((甲基)(苄氧羰基)氨基)苯基)-2-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(4-(二甲基氨基)苯基)-2-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(4-(氨基羰基)苯基)-2-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(1-(苄氧羰基)哌啶-4-基)-2-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(1-乙基哌啶-4-基)-2-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(吡啶-2-基)-2-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(咪唑啉-2-基)-2-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；以及3-[(6-(哌啶-1-基)甲基-2-氯嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈。
E、按照与上述类似的方法，可制备本发明化合物的其他中间体。
制备例5
式(M)的化合物
A、在3-[(6-氯-2-苯基嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈(1.0g，2.4mmol)的DMSO(12ml)溶液中添加碳酸铯(0.8g，2.5mmol)和2-(3-羟基苯基)-1-甲基咪唑啉(0.44g，2.5mmol)。在50℃的油浴中搅拌24小时后，用水和乙酸乙酯分配反应物。分离各层，用水和盐水洗涤，干燥(硫酸钠)，然后真空除去溶剂。残留物在硅胶上用CH2Cl2/MeOH/NH4OH(120/5/1)进行色谱分离，得到0.5g的3-[(6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]-2-苯基嘧啶-4-基)氧基]—4-(苄氧基)苄腈。
B、按照类似的方法，制备本发明化合物的以下中间体：3-[(6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]-4-苯基嘧啶-2-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；和3-[(2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]-6-苯基嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈。
C、按照类似的方法制备以下的式(K)化合物：3-[(2-(4-甲基苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(3-氯苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(4-苯基苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(4-(苄氧基)苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(4-甲氧基苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(4-(苄氧羰基氨基)苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(3-((甲基)(苄氧羰基)氨基)苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(4-(二甲基氨基)苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(4-(氨基羰基)苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(1-(苄氧羰基)哌啶-4-基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(1-乙基哌啶-4-基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(吡啶-2-基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(2-(咪唑啉-2-基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；以及3-[(2-(哌啶-1-基)甲基-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈。
D、按照与上述类似的方法，制备本发明化合物的以下中间体：3-[(6-(4-甲基苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(3-氯苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(4-苯基苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(4-(苄氧基)苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(4-甲氧基苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(4-(苄氧羰基氨基)苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(3-((甲基)(苄氧羰基)氨基)苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(4-(二甲基氨基)苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(4-(氨基羰基)苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(1-(苄氧羰基)哌啶-4-基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(1-乙基哌啶-4-基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(吡啶-2-基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；3-[(6-(咪唑啉-2-基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈；以及3-[(6-(哌啶-1-基)甲基-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈。
E、按照与上述类似的方法，可制备本发明化合物的其他中间体。
实施例1
式(I)、(II)和(III)的化合物
A、将3-[(6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]-2-苯基嘧啶-4-基)氧基]-4-(苄氧基)苄腈(0.4g，0.7mmol)溶解在乙醇(15ml)中，并在干冰/异丙醇浴中冷却，向其中吹入HCl(g)。溶液饱和后，密封反应烧瓶，并使其温热至室温，然后搅拌18小时。真空除去溶剂，并用乙醚研磨残留物。倾倒出醚，并将残留物溶解在乙醇(6ml)中。溶液在干冰/异丙醇浴中冷却，然后在溶液中吹入氨(g)。密封反应烧瓶，然后在60℃的油浴中加热2小时。真空除去溶剂，然后在C18 Dynamax柱上用含有0.1三氟乙酸的10-40％乙腈水溶液对残留物进行梯度HPLC纯制，得到4-羟基-3-[(6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]-2-苯基嘧啶-4-基)氧基]苄醚三氟乙酸盐，其为纯的三氟乙酸盐；NMR(DMSO-d6)：11.2(s，1)，10.4(s，1)，9.1(s，2)，8.9(s，2)，7.8(m，7)，7.4(m，4)，7.2(d，1)，6.7(s，1)，4.1(m，2)，4.0(m，2)，3.1(s，3)ppm。
B、按照类似的方法，制备本发明化合物的以下中间体：4-羟基-3-[(4-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]-6-苯基嘧啶-2-基)氧基]苄脒；和4-羟基-3-[(2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]-6-苯基嘧啶-4-基)氧基]苄脒三氟乙酸盐；NMR(DMSO—d6)：10.4(s，1)，9.1(m，2)，8.8(m，2)，8.0(d，2)，7.4-7.8(m，11)，7.1(m，1)，4.0(m，4)，3.1(s，3)ppm。
C、按照类似的方法制备以下的本发明化合物：3-[(2-(4-甲基苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(2-(3-氯苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(2-(4-苯基苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒； 3-[(2-(4-羟基苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(2-(4-甲氧基苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(2-(4-氨基苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(2-(3-(甲基氨基)苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(2-(4-(二甲基氨基)苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(2-(4-(氨基羰基)苯基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(2-(哌啶-4-基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(2-(1-乙基哌啶-4-基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(2-(吡啶-2-基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(2-(咪唑啉-2-基)-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(2-(哌啶-1-基)甲基-6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(6-(4-甲基苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(6-(3-氯苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(6-(4-苯基苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(6-(4-羟基苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(6-(4-甲氧基苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(6-(4-氨基苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(6-(3-(甲基氨基)苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(6-(4-(二甲基氨基)苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(6-(4-(氨基羰基)苯基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(6-(哌啶-4-基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(6-(1-乙基哌啶-4-基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(6-(吡啶-2-基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；3-[(6-(咪唑啉-2-基)-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒；以及3-[(6-(哌啶-1-基)甲基-2-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]嘧啶-4-基)氧基]-4-羟基苄脒。
D、按照与上述A部分类似的方法，可制备本发明的其他化合物。
实施例2
本实施例说明代表性口服药物组合物的制备过程，所述组合物包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐，例如4-羟基-3-[(6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]-2-苯基嘧啶-4-基)氧基]苄脒：
A、
成分 ％wt./wt.
本发明的化合物 20.0％
乳糖 79.5％
硬脂酸镁 0.5％
将上述成分混合，并充入硬壳明胶胶囊中，每一粒胶囊包含100mg，每一粒胶囊大约是一天的总剂量。
B、
成分 ％wt./wt.
本发明的化合物 20.0％
硬脂酸镁 0.9％
淀粉 8.6％
乳糖 69.6％
PVP(聚乙烯吡咯烷酮) 0.9％
将除硬脂酸镁外的其它成分混合，用水作制粒液体进行制粒。然后将其干燥，再与硬脂酸镁混合，用适宜的压片机形成片剂。
C、
成分
本发明的化合物 0.1g
丙二醇 20.0g
聚乙二醇400 20.0g
Polysorbate 80 1.0g
水 至100mL
将本发明的化合物溶解于丙二醇、乙二醇400和Polysorbate 80中。然后在搅拌下加入足量的水，得到100mL的溶液，将其过滤，装瓶。
D、
成分 ％wt./wt.
本发明的化合物 20.0％
花生油 78.0％
司盘60 2.0％
将上述成分熔化，混合，然后装入软弹性胶囊中。
E、
成分 ％wt./wt.
本发明的化合物 1.0％
甲基纤维素或 2.0％
羧甲基纤维素
0.9％盐水 至100mL
将本发明的化合物溶解于纤维素/生理盐水溶液中，过滤，装瓶备用。
实施例3
本实施例说明代表性肠胃外给药的药物组合物的制备过程，所述组合物包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐，例如4-羟基-3-[(6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]-2-苯基嘧啶-4-基)氧基]苄脒：
成分
本发明的化合物 0.02g
丙二醇 20.0g
聚乙二醇400 20.0g
Polysorbate 80 1.0g
0.9％盐水溶液 至100mL
将本发明的化合物溶解于丙二醇、聚乙二醇400和Polysorbate 80中。然后在搅拌下加入足量的0.9％盐水溶液，得到100mL的静脉内溶液，将其通过0.2μ的膜过滤材料过滤，在无菌条件下包装。
实施例4
本实施例说明代表性栓剂形式的药物组合物的制备过程，所述组合物包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐，例如4-羟基-3-[(6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]-2-苯基嘧啶-4-基)氧基]苄脒：
成分 ％wt./wt.
本发明的化合物 1.0％
聚乙二醇1000 74.5％
聚乙二醇4000 24.5％
在蒸汽浴中，将各种成分熔化在一起并混合，然后倒入包含2.5g总重量的模子中。
实施例5
本实施例说明代表性吹入剂形式的药物组合物的制备过程，所述组合物包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐，例如4-羟基-3-[(6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]-2-苯基嘧啶-4-基)氧基]苄脒：
成分 ％wt./wt.
微粉化的本发明化合物 1.0％
微粉化的乳糖 99.0％
将两种成分磨碎，混合，包装在备有剂量泵的吹入器中。
实施例6
本实施例说明代表性喷雾剂形式的药物组合物的制备过程，所述组合物包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐，例如4-羟基-3-[(6-[3-(1-甲基咪唑啉-2-基)苯氧基]-2-苯基嘧啶-4-基)氧基]苄脒：
成分 ％wt./wt.
本发明的化合物 0.005％
水 89.995％
乙醇 10.000％
将本发明的化合物溶解于乙醇中，掺入水。然后将制剂包装在备有剂量泵的喷雾器中。
实施例7
本实施例说明代表性气雾剂形式的药物组合物的制备过程，所述组合物包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐，例如4-羟基-3-[[6-(3-(1-甲基咪唑啉-4-基)苯氧基)-2-苯基嘧啶-4-基]氧基]苄脒：
成分 ％wt./wt.
本发明的化合物 0.10％
抛射剂11/12 98.90％
油酸 1.00％
将本发明的化合物分散于油酸和抛射剂中。然后将形成的混合物倒入备有计量阀的气雾剂容器中。
实施例8
(对因子Xa和凝血酶的体外实验)
该实验说明了本发明的化合物对因子Xa、凝血酶和组织纤溶酶原激活物的活性。该活性是由酶使肽对硝基酰苯胺裂解的初始速度确定的。裂解产物对硝基苯胺在405nm处吸收，其摩尔消光系数为9920M-1cm-1。试剂和溶液：二甲亚砜(DMSO)(Baker分析级)。实验缓冲液：
50mM TrisHCl，150mM NaCl，2.5mM CaCl2，和0.1％聚乙二醇6000，
pH7.5。酶(Enzyme Research Lab.)：1、人因子Xa储液：0.281mg/mL在实验缓冲液中，在-80℃下贮藏(工作
液(2×)：106mg/mL或2nM在实验缓冲液中，使用前制备)。2、人凝血酶储液：由供应商限定浓度，在-80℃下贮藏(工作液(2×)：
1200ng/mL或32nM在实验缓冲液中，使用前制备)。3、人组织纤溶酶原激活物(tPA)(Two chains，Sigma或American
Diagnostica Inc.)储液：用供应商限定浓度，在-80℃下贮藏(工作液
(2×)：1361ng/mL或20nM在实验缓冲液中，使用前制备)。显色底物(Pharmacia HeparInc.)：1、S2222(FXa实验)储液：6mM在去离子水中，在4℃下贮藏(工作液(4×)：
656μM在实验缓冲液中)。2、S2302(凝血酶实验)储液：10mM在去离子水中，在4℃下贮藏(工作液
(4×)：1200μM在实验缓冲液中)。3、S2288(tPA实验)储液：10mM在去离子水中，在4℃下贮藏(工作液(4×)：
1484μM在实验缓冲液中(对于Sigma tPA)，或1120μM(对于
American DiagnosticatPA))。标准抑制剂化合物储液：
5mM在DMSO中，在-20℃下贮藏。被测化合物(本发明的化合物)储液：
10mM在DMSO中，在-20℃下贮藏。实验过程：
实验是在总体积为200μL的96孔微量滴定板中进行。实验组分的最后浓度为50mM TrisHCl、150mM NaCl、2.5mM CaCl2、0.1％聚乙二醇6000，pH7.5，不存在或者以下述浓度存在标准抑制剂或被测化合物及酶和底物：(1)1nM因子Xa(对于具有低皮摩尔浓度范围的KiXa的化合物，为0.1nM或0.2nM因子Xa)和164μM S2222；(2)16nM凝血酶和300μM S2302；及(3)10nM tPA和371μM或280μM S2228。在本实验中，在1-3稀释液中标准抑制剂化合物的浓度为5μM-0.021μM。在本实验中，在1-3稀释液中被测化合物的浓度通常为10μM-0.041μM。对于强效力被测化合物，在因子Xa实验中采用的浓度须进一步稀释100倍(100nM-0.41nM)或1000倍(10nM-0.041nM)。在本实验的实验条件下，采用的所有底物浓度等于其Km值。实验在室温下进行。
实验的第一步是用DMSO制备10mM被测化合物的储液(对于因子Xa实验，应将强效力化合物10mM的储液进一步稀释至0.1-0.01μM)，随后，在96深孔板中按照如下所述采用Biomek 1000对10mM的储液进行一系列的稀释，制备被测化合物工作液(4×)：
(a)分两步将10mM储液进行1至250稀释：1至100和1至2.5，
在实验缓冲液中制得40μM的工作液；
(b)制备另外五份40μM溶液的系列稀释液(1∶3)(各浓度下各
600μl)。总共六份稀释的被测化合物溶液用于本实验中。按照如上
所述对被测化合物相同的稀释步骤，制备标准抑制剂化合物(5mM
储液)或DMSO(对照)。
实验的第二步是用Biomek将50μl的被测化合物工作液(4×)(40μM-0.164μM)分配于微量滴定板上，同样的过程重复进行一次。用Biomek向该溶液中加入100μl的酶工作液(2×)。将形成的溶液在室温下培养10分钟。
用Biomek向该溶液中加入50μl的底物工作液(4×)。
在室温下，在THERMOmax板计数器中，以10秒为间隔测量在405nm处的酶动力学，共测量5分钟。当在因子Xa实验中需要较低浓度的因子Xa时，在室温下酶动力学检测15分钟(0.2nM因子Xa)或30分钟(0.1nM因子Xa)。计算被测化合物的Ki值：
以头两分钟的读数值为基础计算酶速率，单位为mOD/min。采用EXCEL的扩展页(spread-sheet)，通过拟合数据成对数-对数方程(线性)或Morrison方程(非线性)确定IC50值。然后，将IC50值除以2得到Ki值。并从Morrison方程常规计算3nM外的Ki值(因子Xa)。
本发明的化合物在该实验中进行测试的结果表明，其具有抑制人因子Xa和人凝血酶的选择能力。
实施例9
(人凝血酶原酶的体外实验)
该实验说明本发明化合物抑制凝血酶原酶的能力。凝血酶原酶(PTase)可催化激活凝血酶原产生片断1.2加上凝血酶，其中强凝血酶(meizothrombin)作为中间体。该实验是一个终点实验。由凝血酶(反应产物之一)的活性或由形成的凝血酶的数量/基于凝血酶标准曲线的时间(nM对mOD/min)测量凝血酶原酶的活性。为确定本发明化合物的IC50值(PTase)，PTase活性用凝血酶活性表示(mOD/min)。材料：酶1、人因子Va(Haematologic Technologies Inc.，Cat# HCVA-0110)工作液：
1.0mg/mL在50％甘油中，2mM CaCl2，在-20℃下贮藏。2、人因子Xa(Enzyme Res.Lab.，Cat#HFXa1011)工作液：0.281mg/mL在
实验缓冲液(无BSA)中，在-80℃下贮藏。3、人凝血酶原(FII)(Enzyme Res.Lab.，Cat#HP1002)工作液：在实验缓冲
液(无BSA)中稀释FII至4.85mg/mL，在-80℃下贮藏。磷脂(PCPS)泡囊：
PCPS泡囊(80％PC，20％PS)按照下述方法的改进方法制备：
Barenholz等，Biochemistry(1977)，第16卷，2806-2810页。磷脂酰丝氨酸(Avanti Polar Lipids，Inc.，Cat#840032)：
10mg/mL在氯仿中，从脑纯化得到，在氮气或氩气及-20℃下贮藏。磷脂酰胆碱(Avanti Polar Lipids，Inc.，Cat#850457)：
50mg/mL在氯仿中，合成16∶0-18∶1棕榈酰-油酰，在氮气或氩气及-
20℃下贮藏。Spectrozyme-TH(American Diagnostica Inc.，Cat#238L，50μmol，在室温下
贮藏)工作液：溶解50μmol于10mL dH2O中。BAS(Sigma Chem Co.，Cat#A-7888，Fraction V，RIA级)。实验缓冲液：
50mM TrisHCl，pH7.5，150mM NaCl，2.5mM CaCl2，0.1％聚乙二醇
6000(BDH)，0.05％BSA(Sigma，Fr.V，RIA级)。对于单板实验，制备下述工作液：1、凝血酶原酶复合物：
(a)100μM PCPS(27.5μl的储液(4.36mM)，用实验缓冲液稀释至最终
1200μl。
(b)25nM人因子Xa：5.08μl的Va储液(1mg/ml)用实验缓冲液稀释至
最终1200μl。
(c)5pM的人因子Xa：用实验缓冲液稀释因子Xa储液(0.281mg/mL)
1：1,220,000。制备至少1200μl。
按照PCPS、Va和Xa的顺序合并等体积(1100μl)的每一种组分。立即使用或贮藏在冰中(使用前升温至在室温)。2、6μM人凝血酶原(FII)：用实验缓冲液稀释124μL FII储液(4.85mg/mL)
至最终1400μL。3、20mM EDTA/实验缓冲液：0.8mL的0.5M EDTA(pH8.5)加上19.2mL
实验缓冲液。4、0.2mM Spectrozyme-TH/EDTA缓冲液：0.44mL的SPTH储液(5mM)
加上10.56mL的20mM EDTA/实验缓冲液。5、被测化合物(本发明的化合物)：
从10mM储液(DMSO)制备工作液(5×)，制备一系列1∶3的稀释液。
在6种浓度下重复对化合物进行实验。实验条件和过程：
凝血酶原酶反应在包含PTase(20μM PCPS，5nM hFVa和1pMhFXa)、1.2μM人因子II及各种浓度被测化合物(5μM-0.021μM或更低浓度范围)的最终50μl的混合物中进行。加入PTase开始反应，在室温下温育6分钟。加入EDTA/缓冲液至最终10mM使反应停止。然后，在室温下，在THEROmax微量滴定计数器中，在作为底物的0.1mMSpectrozyme-TH存在下，在405nm处测量凝血酶(产物)的活性，测量5分钟(以10秒为间隔)。反应是在96孔的微量滴定板中进行的。
在实验的第一步中，将10μl的稀释后的被测化合物(5×)或缓冲液加入板中，重复操作一次。然后，将10μl的凝血酶原(hFII)(5×)加入每一个孔中。以后，将30μl的PTase加至每一个孔中，混合约30秒。然后，将滴定板在室温下培养6分钟。
第二步，将50μl的20mM EDTA(在实验缓冲液中)加入每一个孔中以使反应停止。将形成的溶液混合约10秒。再向每一个孔中加入100μl的0.2 mM的Spectrozyme。然后，在Molecular Devices微量滴定板计数器中，以10秒为间隔，在405nm处测量凝血酶的反应速率，测量5分钟。计算：
凝血酶反应速率以mOD/min表示，使用来自5分钟反应的OD读数。采对数-对数曲线拟合程序计算IC50值。
本发明的化合物进行该实验时，表明其具有抑制凝血酶原酶的能力。
实施例10
(体内实验)
下述实验说明本发明化合物作为抗凝剂的能力。
将雄性大鼠(250-330g)用戊巴比妥钠麻醉(90mg/kg，i.p.)，准备进行手术。在大鼠的左颈动脉中插管以测量血压，并且取血样检测凝块变化(凝血酶原时间(PT)和激活部分促凝血酶原激酶时间(aPTT))。在其尾静脉中插管以给药被测化合物(即本发明的化合物和标准样)，并且进行促凝血酶原激酶输液。经正中切口开腹，将距肾静脉2-3cm距离的腹大动脉剥离。所有在该腹大动脉上2-3cm段的静脉分支进行结扎。完成手术后，在实验之前将大鼠稳定化。被测化合物以静脉内快速浓注法给药(t＝0)。3分钟以后(t＝3)，开始5分钟的促凝血酶原激酶输液。在两分钟输液后(t＝5)，将腹大动脉在近端和远端结扎。将血管放置60分钟，此后从大鼠上切除，将其切开，小心除去血块(如果存在的活)，称重。对结果的统计分析使用Wilcoxin配对排列检验法进行。
本发明的化合物当进行该实验时，显示出抑制血液凝集的能力。
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以上参考具体的实施方案对本发明进行了详细描述，但本领域的技术人员可以理解，在不背离本发明的精神实质和范围下可以进行各种变化，采用各种等同替换。此外，可以做出各种改进以适应目标特定的情形、材料、事物组成、过程、加工步骤。所有这些改进也均在本发明权利要求的保护范围之内。