新颖的γ-分泌酶抑制剂 本专利申请要求了2001年8月3日递交的临时申请序列号60/310013，和2002年2月6日递交的临时申请序列号60/355510的优先权。
【发明背景】
2000年8月13日出版的WO 00/50391公开了具有对阿耳茨海默氏病，以及与淀粉状蛋白质沉积相关的其他疾病的治疗和预防有益的氨磺酰部分的化合物。
从本发明在治疗或预防诸如阿耳茨海默氏病的神经变性疾病的兴趣的观点看，本领域受欢迎的贡献是可用于这种治疗或预防的化合物。本发明作出了这种贡献。
发明概述
本发明提供了作为γ-分泌酶(Secretase)抑制剂(例如拮抗剂)并具有以下通式的化合物：
或其药物可接受的盐或溶剂化物，其中：
(A)R1选自：
(1)未取代的芳基；
(2)以一个或多个(例如1-3)R5基团取代的芳基；
(3)杂芳基；或
(4)以一个或多个(例如1-3)R5基团取代的杂芳基；
(B)R2选自：
(1)烷基；
(2)-X(CO)Y；
(3)-(CR32)1-4X(CO)Y；或
(4)对于R1地任何基团；
(C)每个R3独立地选自：
(1)H，或
(2)烷基；
(D)每个R3A独立地选自：
(1)H；或
(2)烷基；
(E)R4独立地选自：
(1)卤素；
(2)-CF3；
(3)-OH；
(4)-O烷基；
(5)-OCF3；
(6)-CN；
(7)-NH2；
(8)-CO2烷基；
(9)-CONR6R7；
(10)-亚烷基-NR6R7；
(11)-NR6CO烷基；
(12)-NR6CO芳基；
(13)-NR6CO杂芳基；或
(14)-NR6CONR6R7；
(F)R5独立地选自：
(1)卤素；
(2)-CF3；
(3)-OH；
(4)-O烷基；
(5)-OCF3；
(6)-CN；
(7)-NH2；
(8)-CO2烷基；
(9)-CONR6R7；
(10)-亚烷基-NR6R7；
(11)-NR6CO烷基；
(12)-NR6CO芳基；
(13)-NR6CO杂芳基；
(14)-NR6CONR6R7；
(G)X选自：
(1)-O-；
(2)-NH；
(3)-N-烷基；或
(H)Y选自：
(1)-NR6R7；或
(2)-N(R3)(CH2)2-6NR6R7；
(I)R6和R7独立地选自：
(1)H；
(2)烷基；
(3)环烷基；
(4)-芳烷基；
(5)-杂芳烷基；
或
(J)R6和R7与它们连接的氮原子一起形成选自以下的杂环烷基：
或
(K)每个R8独立地选自：
(1)烷基；或
(2)以1-4个羟基取代的烷基；
(L)每个R9独立地选自：
(1)H；
(2)烷基；
(3)以1-4个羟基取代的烷基；
(4)环烷基；
(5)以1-4个羟基取代的环烷基；
(6)-芳烷基；
(7)-杂芳烷基；
(8)-COO烷基；或
(9)对于R1的任何基团；
(M)每个R10独立地选自：
(1)H；或
(2)烷基；
(N)m为0-3，n为0-3；使得m+n为1、2、3或4；
(O)p为0-4；
(P)r为0-4；
(Q)s为0-3；和
(R)条件是通式(1.0)的化合物不包括：
和
本发明还提供包含有效量的至少一种式(1.0)化合物和至少一种药物可接受的载体的药物组合物。
本发明还提供抑制γ-分泌酶的方法，包括向需要治疗的病人服用有效量的式(1.0)化合物。
本发明还提供治疗神经变性疾病的方法，包括向需要治疗的病人服用有效量的式(1.0)化合物。
本发明还提供抑制神经组织(例如大脑)中、其上或其周边的淀粉状蛋白质(例如淀粉状β蛋白质)沉积的方法，包括向需要治疗的病人服用有效量的式(1.0)化合物。
本发明还提供治疗阿耳茨海默氏病的方法，包括向需要治疗的病人服用有效量的式(1.0)化合物。
发明描述
除非另外定义，本文所用以下术语具有以下含义：
病人包括人类和其他哺乳动物。“哺乳动物”指人类和其他动物。
烷氧基：代表-O烷基，其中烷基的定义如下：
烷基：代表直链和分支的碳链，并含有1-20个碳原子，优选的1-6个碳原子，所述烷基任选用一个或多个(例如1、2或3个)取代基取代，所述取代基独立地选自：(1)卤素；(2)-OH；(3)-O(烷基)，优选-O(C1-C6)烷基，最优选-OCH3；(4)-NH2；(5)-NH(烷基)，优选-NH((C1-C6)烷基)，最优选-NHCH3；(6)其中每个烷基独立选择的-N(烷基)2，优选其中每个烷基独立选择的-N((C1-C6)烷基)2，最优选-N(CH3)2；或(7)-S(烷基)，优选的-S((C1-C6)烷基)，最优选-SCH3；
亚烷基：代表-(CH2)q-，其中q为1-20，通常为1-6，更一般为1-4，任选所述亚烷基中的一个或多个(例如1-3个，或1-2个)氢可用相同或不同的烷基(优选-(C1-C6)烷基，更优选的-(C1-C3)烷基，最优选-(C1-C2)烷基)代替，使得整个亚烷基中的碳原子总数为2-20，而且所述亚烷基可任选被一个或多个(例如1-3个)取代基取代，所述取代基独立地选自：(1)卤素；(2)-OH；(3)-O(烷基)，优选-O((C1-C6)烷基)，且最优选-OCH3；(4)-NH2；(5)-NH(烷基)，优选-NH((C1-C6)烷基)，且最优选-NHCH3；(6)其中每个烷基独立选择的-N(烷基)2，优选其中每个烷基独立选择的-N((C1-C6)烷基)2，最优选-N(CH3)2；和(7)-S(烷基)，优选-S((C1-C6)烷基)，最优选-SCH3；
ar：代表以下定义的芳基；
aralky1(芳烷基)：代表连接到上述烷基的以下定义的芳基，其中所述烷基连接到一个分子上(例如本发明要求的化合物或本发明化合物的中间体)；
芳基：代表含有6-15个碳原子并具有至少一个芳环(例如苯基、萘基、菲基、四氢萘基或茚基)的碳环基，碳环基的所有可提供取代的碳原子尽可能作为连接点；所述碳环基任选被一个或多个(例如1-3个)取代基取代，所述取代基独立地选自：(1)卤素，(2)烷基(优选-(C1-C6)烷基)，(3)羟基，(4)烷氧基(优选-(C1-C6)烷氧基)，(5)-CN，(6)-CF3，(7)氨基(-NH2)，(8)烷基氨基，(9)二烷基氨基(其中每个烷基独立选择)，(10)芳基(例如苯基)(条件是如果该芳基任选被一个或多个芳基取代，则后者的这些芳基不再被芳基取代)，(11)aralkoxy(条件是如果所述aralkoxy(即芳烷氧基)的芳基部分任选被一个或多个芳基取代，则后者的这些芳基不再被芳基取代)，(12)芳氧基(例如苯氧基)(条件是如果所述芳氧基的芳基部分任选被一个或多个芳基取代，则后者的这些芳基不再被芳基取代)，(13)-S(O)0-2-芳基(条件是如果所述-S(O)0-2-芳基的芳基部分任选被一个或多个芳基取代，则后者的这些芳基不再被芳基取代)，(14)-COOR11或(15)-NO2；其中所述R11代表H、烷基、芳基(条件是如果所述芳基部分任选被一个或多个含芳基基团取代，则后者的这些含芳基基团不再被含芳基基团取代)，或芳烷基(例如苄基)(条件是如果所述芳烷基的所述芳基部分任选被一个或多个含芳基基团取代，则后者的这些含芳基基团不再被含芳基基团取代)；优选所述任选取代基独立地选自：卤素、-CF3、-(C1-C6)烷基、-(C1-C6)烷氧基、OCF3、-NH2或-CN；
环烷基：代表3-10个碳原子的，通常是3-8个碳原子的环烷基，所述环烷基任选被一个或多个(例如1、2或3个)取代基取代，所述取代基独立地选自：(1)卤素；(2)-OH；(3)-O(烷基)，优选-O(C1-C6)烷基，且最优选-OCH3；(4)-NH2；(5)-NH(烷基)，优选-NH((C1-C6)烷基)，且最优选-NHCH3；(6)其中每个烷基独立选择的-N(烷基)2，优选其中每个烷基独立选择的-N((C1-C6)烷基)2，且最优选-N(CH3)2；(7)-S(烷基)，优选-S((C1-C6)烷基)，且最优选-SCH3；或(8)烷基，优选-(C1-C6)烷基；
卤素(halo)：代表氟、氯、溴和碘；
杂芳基：代表带有至少一个(例如1、2或3个)独立地选自O、S或N的杂原子的单环、二环或三环基团，所述杂原子隔断了碳环的环结构，并带有足够数量的非定域π电子来提供芳族特征，芳族杂环基团优选含有2-14个碳原子，例如三唑基、咪唑基、噻吩基、呋喃基、喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻吩基、噻唑基、吲哚基、1，5-二氮杂萘基(naphthyridiny1)、吡啶基(例如2-、3-或4-吡啶基)或吡啶基N-氧化物(例如2-、3-或4-吡啶基N-氧化物)，其中吡啶基N-氧化物可表示为：
或
环状基团的所有可提供取代的碳原子和杂原子尽可能作为连接点，所述环状基团任选被一个或多个(例如1、2或3个)独立地选自以下的基团取代：(1)卤素，(2)烷基(优选-(C1-C6)烷基)，(3)芳基，(4)芳烷基，(5)羟基，(6)烷氧基(优选-(C1-C6)烷氧基)，(7)苯氧基，(8)-NO2，(9)-CF3，(10)-OCF3，(11)-CN，(12)氨基(-NH2)，(13)烷基氨基，(14)二烷基氨基(其中每个烷基独立选择)，(15)-COOR11(其中R11的定义如上)，或(16)杂芳基(条件是如果以上定义的该杂芳基任选被一个或多个杂芳基取代，则后者的这些杂芳基不再被杂芳基取代)；优选所述任选的取代基独立地选自：卤素、-CF3、-(C1-C6)烷基、-(C1-C6)烷氧基、-OCF3、-NH2或-CN；
heteroaralky1(杂芳烷基)：代表连接到上述烷基的上述杂芳基，其中所述烷基与分子连接(例如本发明要求的化合物或本发明化合物的中间体)；
杂环烷基：代表带有一个或多个(例如1、2或3)独立地选自O、S或-NR12-的杂原子的上述环烷基环，其中R12选自：H、烷基、芳基、杂芳基、芳(C1-C6)烷基，或杂芳(C1-C6)烷基；
TFA：代表三氟乙酸；和
THF：代表四氢呋喃。
对于化合物中各部分(例如取代基、基团或环)的数量，除非另外定义，短语“一个或多个”和“至少一个”指可以象化学上允许的那样有许多部分，且这种部分的最大数量的确定都在本领域普通技术人员的知识范围内。例如，“一个或多个”或“至少一个”可以指1-6个部分，通常是1-4个部分，一般是1-3个部分。
本发明的方法和药物组合物中所用的术语“有效量”指治疗上有效的用量，并用于描述治疗具有待治疗的疾病或症状的病人，从而产生要求的治疗效果的本发明化合物的用量。
本领域普通技术人员应该明白术语“神经变性疾病”有其公众接受的医学含义，并描述神经功能失常导致的疾病和症状，包括神经元的死亡和神经传递质或毒害神经的物质的不正常释放。在这种情况下，它还包括β淀粉状蛋白质的含量不正常导致的所有疾病。这种疾病的实例包括但不限于阿耳茨海默氏病、老年性痴呆、大脑或全身的淀粉样变性、具有淀粉样变性的遗传性大脑出血，以及Down综合征。
环系中画的线段指标明的键可连接到任何可取代的环碳原子上。
本发明的某些化合物可以以不同的异构体(例如对映体和非对映异构体)形式存在。本发明以纯物质形式和混合物，包括外消旋混合物的形式考虑所有这些异构体。也包括烯醇形式。
本发明的化合物可作为外消旋混合物或对映体的纯化合物服用。
某些化合物可以是酸性的，例如带有羧基或酚羟基的化合物。这些化合物可形成药物可接受的盐。这种盐的实例包括钠、钾、钙、铝、金和银盐。还考虑到用药物可接受的胺，例如氨、烷基胺、羟烷基胺、N-甲基葡糖胺等形成的盐。
某些碱性化合物也形成药物可接受的盐，例如酸加成盐。例如，吡啶并氮原子可与强酸形成盐，而带有诸如氨基的碱性取代基的化合物也与较弱的酸形成盐。用于形成盐的合适酸的实例是盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、甲磺酸，以及本领域普通技术人员公知的其他矿物酸和羧酸。这些盐通过将游离碱性形式与足够量的要求的酸接触，用常规方式制备盐来制备。游离碱性形式可通过用诸如稀释的NaOH、碳酸钾、氨和碳酸氢钠水溶液的合适的稀释碱性水溶液处理盐生成。游离碱性形式在某些物理性能，例如极性溶剂中的溶解度与其各自的盐形式有某些不同，但它们的酸和碱盐对于本发明目的而言另外相当于其各自的游离碱性形式。
所有这种酸和碱盐规定为本发明范围内的药物可接受的盐，且认为所有酸和碱盐对于本发明目的而言相当于对应化合物的游离形式。
优选：
R1是被一个或多个R5基团取代的芳基，更优选被一个或多个R5基团取代的苯基，且最优选被一个或多个卤素原子取代的苯基；
n为0或1且m为1或2，使得m+n为2(即(i)n为0且m为2，或(ii)n为1且m为1)，最优选n为0且m为2；
p为0或1，且当p为1时，R4为卤素；和
R2为-X(CO)Y或-(CR32)1-4X(CO)Y。
更优选：
R1是被一个或多个R5基团取代的芳基，更优选被一个或多个R5基团取代的苯基，甚至更优选被一个或多个卤素原子取代的苯基；
n为0或1且m为1或2，使得m+n为2(即(i)n为0且m为2，或(ii)n为1且m为1)，最优选n为0且m为2；
p为0或1，且当p为1时，R4为卤素；
R2为-X(CO)Y或-(CR32)1-4X(CO)Y；
X为-O-；和
Y为-NR6R7。
最优选：
R1是被一个或多个R5基团取代的芳基，更优选被一个或多个R5基团取代的苯基，甚至更优选被一个或多个卤素原子取代的苯基；
n为0或1且m为1或2，使得m+n为2(即(i)n为0且m为2，或(ii)n为1且m为1)，最优选n为0且m为2；
p为0或1，且当p为1时，R4为卤素；
R2为-X(CO)Y或-(CR32)1-4X(CO)Y；
X为-O-；
Y为-NR6R7；且
R6和R7独立地选自：H、甲基、乙基-(C3-C8)环烷基、-芳基(C1-C6)烷基、4-吡啶基甲基，
或或
R6和R7与它们连接的氮原子一起形成选自以下的杂环烷基：
或
优选的
是以下通式的基：
优选的
是以下通式的基：
本发明的代表性化合物包括但不限于实施例1到100的化合物。本发明优选的化合物是实施例35、39、41、43、56、58、59、61、70、70A、77、78、98、99和100的化合物。
式1.0化合物可通过本领域普通技术人员公知的各种方法制备。例如，其中R2为-X(CO)Y或-(CH2)1-4X(CO)Y(以下用-(CH2)0-4X(CO)Y表示)，且X和Y如上定义的式1.0化合物可如方案1所示制备。
方案1
前体胺或醇2.0用合适的保护基“Prt”保护，得到受保护的衍生物3.0。用于醇和胺的保护基是本领域普通技术人员公知的，包括三烷基甲硅烷基、烷基和芳基氨基甲酸酯、酰胺和酯。然后在诸如三乙胺或氢化钠的合适碱存在下，用磺酰基卤化物R1SO2Hal(其中Hal＝卤素)处理受保护的衍生物3.0，得到氨磺酰4.0。在本领域普通技术人员公知的，诸如甲醇的或含水的碱(例如氢氧化钠或碳酸钾)、含水的或甲醇的酸(例如盐酸)或四正丁基氟化铵的合适条件下除去保护基。然后用本领域普通技术人员公知的方法，将其转化成各种酯、酰胺、氨基甲酸酯和碳酸酯。这些方法包括与合适的羧酸氯化物反应；在诸如二环己基碳化二亚胺或羟基苯并三唑的活性剂存在下与羧酸反应；与烷基或芳基氯甲酸酯反应；与芳基氯甲酸酯反应，然后与胺或醇反应。化合物2.0可以商购，或通过以下实施例中描述的本领域公知的方法制备。
其中R2为被一个或多个R5基团取代的芳基的式1.0化合物可通过例如方案2中描述的方法制备。
方案2
R13代表烷基、芳基或-NR6R7。醛5.0通过本领域普通技术人员公知的方法转化为各种取代的化合物。例如，5.0可在诸如三乙酸基氢硼化物的还原剂的存在下，在诸如二氯乙烷的合适溶剂中，用伯或仲胺处理，得到氨基烷基衍生物1.2。醛5.0可用例如琼斯试剂氧化成相应的羧酸，然后转化成酰胺(1.3)。或者，该酸可用二苯基磷酰基氮化物(diphenylphosphorylazide)转化成胺，胺转化成酰胺或脲(1.4)。醛5.0可通过本领域公知的方法，和通过以下实施例中描述的方法制备。
本发明的化合物通过以下实施例列举，但并不构成对本发明范围的限制。在本发明范围内的作为选择的力学途径和类似结构对于本领域普通技术人员是很明显的。
在以下实施例中，“HRMS(MH+)”指化合物的测量高分辨率质量。“LCMS(MH+)；Rt(分钟)”指用LC质谱仪在Alltech Platinum C8柱(33mm×7mm ID，3微米粒径)上测定的质量和保留时间。对LC/MS的洗脱条件如下：溶剂：A、水w/0.05％TFA(v/v)；B、乙腈w/0.05％TFA(v/v)；流速：1mL/分钟
梯度法：
时间(分钟) ％B浓度
0 10
5 95
7 95
7.5 10
9 停止
实施例1：(3-咪唑-1-基-丙基)-氨基甲酸1-(4-氯-苯磺酰基)-1，2，3，4-四氢-喹啉-2-基甲基酯
步骤1：
将在甲醇(15mL)中的喹哪啶酸6.0(2.0g，11.6mmol)在常温和常压的氢气下，经氧化铂(60mg)氢化，直到消耗了理论量的氢。将混合物通过硅藻土过滤，并向滤液中滴加0℃的亚硫酰氯(1.3mL，18mmol)。常温下搅拌混合物过夜并减压浓缩。将剩余物溶解在水中，并用饱和的碳酸氢钠水溶液中和。用乙酸乙酯萃取混合物，用盐水冲洗有机层，并经硫酸镁干燥和浓缩。将粗残余物用15％的乙酸乙酯：己烷洗脱进行硅胶色谱法提纯，得到淡黄色油状标题化合物(1.1g，产率50％)：1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.02(dd，2H，J＝8.7Hz)、6.67(dt，2H，J＝7.5Hz)、4.40(br，1H)、4.06(dd，1H，J＝＝3.6、3.9Hz)、3.80(s，3H)、2.24-2.36(m，1H)、1.95-2.10(m，1H)。
步骤2：
在室温下，向LiAlH4(34mL，1M THF)溶液中滴加2-(甲氧基羰基)四氢喹啉7.0(3.19g，16.7mmol)的THF(30mL)溶液。将混合物回流3.5小时，多余的试剂通过加入含水THF分解。向混合物中依次加入1N的含水NaOH(14mL)、水(28mL)和乙醚(28mL)。分离有机层，用盐水冲洗，并经硫酸镁干燥和浓缩。将粗残余物用1∶1的乙酸乙酯/己烷进行硅胶色谱法提纯，得到淡黄色油状标题化合物(2.29g，产率85％)：LC-MS(ESI)m/e 164(M+1)+。
步骤3：
在0℃向2-(羟甲基)四氢喹啉8.0(1.57g，9.63mmol)在含有三乙胺(2.2mL，15.75mmol)的二氯乙烷(24mL)中的溶液中加入三甲基甲硅烷基氯化物(1.4mL，11.19mmol)。0℃下搅拌混合物30分钟，随后加入三乙胺(2.2mL)和对氯苯磺酰氯(2.2g，10.43mmol)。搅拌回流混合物16小时，并加入水。分离有机层，用水冲洗，并经硫酸镁干燥和浓缩。将残余物用3∶7的己烷/乙酸乙酯进行硅胶色谱法提纯，得到淡黄色油状标题化合物(1.81g，产率46％)：1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.52(d，1H，J＝4.7Hz)、7.37(dd，4H，J＝5.1、7.2Hz)、7.24(t，1H，J＝7.2Hz)、7.15(t，1H，J＝1.2Hz)、6.96(d，1H，J＝6.9Hz)、4.10-4.26(m，1H)、1.95-2.06(m，1H)、1.49-1.62(m，2H)、0.10(s，9H)。
步骤4：
向9.0(1.62g，3.96mmol)的无水甲醇(10mL)溶液中加入固体碳酸钾(4mg，0.03mmol)。0℃下搅拌混合物45分钟，然后用冰乙酸酸化。用乙酸乙酯萃取混合物，经硫酸镁干燥和浓缩。将残余物用1∶3的乙酸乙酯/己烷进行硅胶色谱法提纯，得到黄色稠油标题化合物(1.20g，产率90％)：LC-MS(ESI)m/e 338(M+1)+。
通过制备的HPLC分离10.0的两种对映体。将以下条件用于AS手形填充柱：己烷/异丙醇、90/10、45ml/分钟、254nm、117.41分钟(异构体A)、256.51分钟(异构体B)。从600mg 10.0、258mg异构体A和230mg异构体B获得。根据以下步骤5和6，将每种对映体独立地转化为对映的纯氨基甲酸酯12.0。
异构体A：[α]D＝-209.88°(c＝5.13mg/ml，CH3Cl)
异构体B：[α]D＝+186.31°(c＝5.01mg/ml，CH3Cl)。
步骤5：
向10.0(204mg，0.6mmol)的THF(6mL)和乙腈(6mL)的溶液中加入吡啶(51mg，0.65mmol)，然后加入4-硝基苯氯甲酸酯(133mg，0.66mmol)。在22℃下搅拌所得混合物16小时。减压除去溶剂，将产物溶解在乙醚中，用水、盐水冲洗。将醚层经硫酸镁干燥、过滤和浓缩。浓缩液经硅胶色谱法(乙酸乙酯∶己烷，20％)得到无色油状标题化合物(243mg，产率80％)：LC-MS(ESI)m/e 504(M+1)+，328。
步骤6：
向上述碳酸酯11.0(25mg，0.05mmol)的甲醇(0.5mL)的溶液中加入3-氨基丙基-(1H)-咪唑(14mg，0.11mmol)。在22℃下搅拌所得混合物16小时，然后减压浓缩。浓缩液经硅胶色谱法(CH2Cl2中甲醇，5％)得到淡黄色稠油标题化合物(10.9mg，产率45％)：LC-MS(ESI)m/e490(M+1)+，320。
用与实施例1中类似的方法制备表1中的氨基甲酸酯。在表1中，“Ex.”代表“实施例”。
表1
实施例81：合成吡啶-2-基甲基-氨基甲酸1-(4-氯苯磺酰基)-1，2，3，4-
四氢喹啉-3-基酯
步骤1：
将在水(100mL)中含有3-氨基喹啉13.0(10.0g，69.4mmol)和亚硫酸氢钠(40.0g，0.38mol)的混合物加热回流3天。将反应混合物冷却到室温，用30％的NaOH使其成pH8的碱性并回流1小时。冷却到室温后，过滤混合物得到棕色固体。将粗产物进行硅胶色谱法(乙酸乙酯∶己烷，50％)，得到标题化合物固体(6.7g，产率67％)：1HNMR(300MHz，CDCl3)δ10.3(br，s，1H)、8.54(m，1H)、7.84-7.88(m，1H)、7.74-7.77(m，1H)、7.45-7.48(m，3H)。
步骤2：
向3-羟基喹啉14.0(2.7g，18.6mmol)在乙醇(60mL)中的回流混合物中经1小时分批加入钠片。加完钠后继续回流30分钟。冷却反应混合物到室温后，减压除去乙醇，用水稀释残余物，并用醚萃取。醚相经硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发，得到标题化合物(1.5g，产率54％)：1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.77-6.82(m，2H)、6.35-6.39(m，2H)、5.53(s，1H)、4.82(br s，1H)、3.82-3.87(m，1H)、3.14-3.20(m，1H)、2.74-2.88(m，2H)、2.47-2.54(m，1H)。
步骤3：
在0℃向3-(羟基)四氢喹啉15.0(1.3g，8.72mmol)在含有三乙胺(2mL，14.35mmol)的二氯乙烷(20mL)的溶液中加入三甲基甲硅烷基氯化物(1.2mL，9.45mmol)。0℃下搅拌混合物30分钟，随后加入三乙胺(2.0mL)和对氯苯磺酰氯(1.96g，9.29mmol)。搅拌回流混合物16小时，并加入水。分离有机层，用水冲洗，经硫酸镁干燥和浓缩。将浓缩液进行硅胶色谱法(乙酸乙酯∶己烷，3％)得到淡黄色油状标题化合物(1.55g，产率45％)：1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.98-7.74(m，8H)、4.05-4.13(m，1H)、3.74-3.88(m，1H)、3.32-3.41(dd，1H，J＝7.5，7.5Hz)、2.72-2.81(dd，1H，J＝8.25，8.25Hz)、2.36-2.47(dd，1H，J＝7.5，7.5Hz)、1.46-1.60(m，1H)、0.11(s，9H)。
步骤4：
向16.0(1.5g，3.8mmol)的无水甲醇(12mL)溶液中加入固体碳酸钾(4mg，0.03mmol)。0℃下搅拌混合物45分钟，然后用冰乙酸酸化。用乙酸乙酯萃取混合物，经硫酸镁干燥和浓缩，得到黄色稠油标题化合物(1.2g，产率98％)，并用于下一个反应中：LC-MS(ESI)m/e324(M+1)+。
步骤5：
向17.0(1.20g，3.72mmol)的THF(17mL)和乙腈(3mL)溶液中加入吡啶(255mg，3.21mmol)，然后加入4-硝基苯氯甲酸酯(820mg，4.06mmol)。在22℃下搅拌所得混合物16小时。减压除去溶剂，将产物溶解在醚中。用水、盐水冲洗醚相，经硫酸镁干燥和浓缩。浓缩液经硅胶色谱法(乙酸乙酯∶己烷，15％)得到结晶固体状标题化合物(1.2g，产率66％)，熔点：106-110℃：1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.27-8.32(m，2H)、7.67-7.12(m，3H)、7.36-7.44(m，3H)、7.09-7.28(m，4H)、5.02-5.09(m，1H)、4.06-4.18(m，2H)、2.95-3.03(dd，1H，J＝6.0，5.7Hz)、2.78-2.85(dd，1H，J＝5.4，5.4Hz)。
步骤6：
向上述碳酸酯18.0(50mg，0.102mmol)的甲醇(0.5mL)溶液中加入2-氨基甲基吡啶(55mg，0.51mmol)。在22℃下搅拌所得混合物16小时，然后减压浓缩。浓缩液经硅胶色谱法(CH2Cl2中甲醇，5％)得到标题化合物(47mg，产率定量)：LC-MS(ESI)m/e 458(M+)，306。
用与实施例81中类似的方法制备表2中的化合物。在表2中，“Ex.”代表“实施例”。
表2
实施例93：1-(4-氯-苯磺酰基)-2-(4-硫代吗啉-4-基甲基-苯基)-1，2，3，4-四氢-喹啉的合成
步骤1：
向保持在-78℃下的4-溴苯甲醛二甲基乙缩醛(6.1g，26.3mmol)的THF(100mL)溶液中缓慢加入nBuLi(12.8mL，25.6mmol，THF中的2M)。将所得黄色溶液在-78℃下搅拌1小时，然后缓慢加入喹啉(3.39g，26.2mmol)的THF(20mL)溶液。将所得浅棕色溶液在-78℃下搅拌30分钟，再在0℃下搅拌30分钟。将混合物冷却到-78℃，缓慢加入对氯苯磺酰氟(5.0g，25.6mmol)的THF(30mL)溶液。在-78℃下搅拌混合物1小时，并在室温下搅拌16小时。用水淬灭，减压除去大部分THF，用乙酸乙酯萃取含水残余物。有机相经硫酸镁干燥，并浓缩到黄色油。用10％乙酸乙酯∶己烷研制得到白色晶体。过滤并用10％乙酸乙酯∶己烷冲洗，得到标题化合物(7.96g，产率66％)；熔点＝134-136℃；MSFAB m/e 455(碱)，424，280，248。
步骤2：
将在乙酸乙酯(100mL)中含有21.0(5.23g，11.5mmol)、5％碳载Rh(700mg)的溶液在常温常压下氢化2天。将反应混合物通过硅藻土床过滤。减压浓缩滤液，得到减少的原料乙缩醛与要求的产物的混合物。用乙酸乙酯进行硅胶色谱法，得到白色结晶固体状标题化合物(1.04g，产率21％)，熔点＝157-159℃。
步骤3：
向醛22.0(50mg，0.12mmol)的二氯乙烷(2mL)溶液中加入吗啉(13.1mg，0.149mmol)，随后加入三乙酸基硼氢化钠(32mg，0.15mmol)。室温搅拌反应混合物16小时。减压除去溶剂，并通过应用乙酸乙酯进行的制备性薄层色谱法，对粗产物提纯，得到白色固体状标题化合物(38.6mg，产率67％)：HRFABMS计算值对于C26H28ClN2O2S2(MH+)：483.1509。发现483.1516。
用与实施例93中类似的方法制备表3中的化合物。在表3中，“Ex.”代表“实施例”。
表3
实施例98：式98化合物的制备
步骤1：向2-甲基-7-氟喹啉(26.9g，0.17mol)的乙酸(180mL)溶液中加入乙酸钠(93g，0.68mol)，然后加入溴(26.3mL，0.51mol)。在90℃加热反应混合物1小时，然后浓缩。用水冲洗残余物，溶解在DCM中，经Na2SO4干燥并浓缩，得到59.0g(88％)橙色固体。
步骤2：将步骤1的产物(78.8g，0.2mol)的溶液和硫酸(600mL)在100℃加热3天，然后倒到冰上。用氢氧化铵稀释混合物至pH＞10，然后用85％的含水磷酸将pH值调节到4，并用DCM和EtOAc萃取溶液，经Na2SO4干燥并浓缩后得到30.0g(79％)酸。
步骤3：将亚硫酰氯(25mL，0.32mol)加入到步骤2的产物(30.0g，0.16mol)的无水MeOH(300mL)溶液中，反应回流搅拌2小时。浓缩后将残余物倒入1N含水NaOH中，并用DCM和EtOAc萃取。浓缩合并的有机层，然后通过硅胶色谱法(洗脱己烷/EtOAc 8∶2)提纯，得到11g(40％)油状酯。
步骤4：将步骤3的产物(11.0g，54mmol)与氧化铂(1.2g)在无水甲醇(100mL)中的溶液在常压下氢化30分钟，经硅藻土过滤和浓缩后得到11.7g(100％)油状氨基酯。
步骤5：在-78℃，向步骤4的产物(8.0g；38mmol)的无水THF(150mL)溶液中加入氢化锂铝的1N THF(115mL；115mmol)溶液，将反应加热到室温并搅拌2小时。用EtOAc淬灭混合物，用1N NaOH和DCM稀释，经硅藻土过滤，用DCM萃取，并经Na2SO4干燥。溶剂浓缩后得到6.8g氨基醇(100％)。
步骤6：将步骤5的产物(6.8g；37.7mmol)、三乙胺(6.3mL；45.2mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(6.3g；41.5mmol)在DEC(60mL)中的溶液在60℃下搅拌过夜。浓缩后将残余物通过硅胶色谱法(洗脱己烷/EtOAc 9∶1)提纯，得到10.6g(96％)油状胺。
步骤7：在-78℃，向步骤6的产物(10.6g；36.0mmol)的无水THF(100mL)溶液中加入正丁基锂的2.5N己烷(15.8mL；39.6mmol)溶液，然后缓慢加入4-氯苯磺酰氟(8.4g；43.2mmol)的无水THF(20mL)溶液。在-78℃搅拌反应30分钟，并升温到室温过夜。将浓缩溶剂后得到的残余物用DCM和水稀释，用DCM萃取，经Na2SO4干燥并浓缩。通过硅胶色谱法(洗脱己烷/EtOAc 95∶5到DCM/EtOAc 95∶5)提纯，得到17.1g(100％)邻位受护的氨磺酰。
步骤8：将步骤7的产物(17.1g；36mmol)和在THF(54.6mL；54.6mmol)中的1N四正丁基氟化铵在无水THF(100mL)中的溶液在室温下搅拌2小时。将浓缩溶剂后的残余物用DCM和饱和含水碳酸氢钠稀释，用DCM萃取，经Na2SO4干燥并浓缩。通过硅胶色谱法(洗脱己烷/EtOAc 8∶2-1∶1)提纯，得到9.6g(75％)油状氨磺酰醇。
步骤9：向步骤8的产物(0.5g；1.44mmol)的无水THF(7mL)溶液中加入对硝基苯基氯甲酸酯(0.32g；1.55mmol)，随后加入三乙胺(0.22mL；1.55mmol)，并在室温下搅拌反应过夜。将混合物浓缩，溶解在DCM中，用冰冷却的5％含水柠檬酸冲洗。溶剂浓缩后，将残余物通过硅胶色谱法(洗脱己烷/EtOAc 8∶2到EtOAc)提纯，得到700mg(95％)油状碳酸酯。
步骤10：用实施例1步骤6中描述的方法，在合成的最后阶段用4-哌啶子基哌啶，将步骤9的产物(40mg)转化成标题化合物(式98)。通过硅胶色谱法(洗脱DCM/EtOAc 7∶3)提纯，得到14.7mg产物：1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.48(dd，1h)、7.45(d，2h)、7.37(d，2h)、6.96(m，1h)、6.86(dd，1h)、4.59(br s，1h)、3.85-4.30(m，4h)、2.30-2.80(m，8h)、1.20-2.00(m，13h)；HRMS(MH+)550.1935。
实施例99：式99化合物的制备
式99化合物与上述式98化合物的制备方法相似，不同的是在最后步骤中用N，N’-二甲基-4-氨基哌啶代替4-哌啶子基哌啶。LC-MS(ESI)，m/e 510(M+)。
实施例100：式100化合物的制备
步骤1：向实施例98中步骤8的产物(0.5g；1.4mmol)的DCM(10mL)溶液中加入Dess-Martin periodinane(0.72g；1.7mmol)，随后加入碳酸氢钠(150mg)和两滴水。室温下搅拌混合物过夜，然后用Et2O(20mL)、饱和NaHCO3和硫代亚硫酸钠(2.0g)淬灭20分钟。用Et2O萃取反应混合物，经Na2SO4干燥并浓缩，得到411mg(83％)醛。
步骤2：在0℃，向步骤1的醛产物(411mg；1.15mmol)的无水THF(8mL)溶液中加入甲基溴化镁的3N Et2O(0.61mL；1.84mmol)溶液，用2小时将反应混合物加热到室温。将混合物倒入饱和氯化铵中，用DCM萃取，经Na2SO4干燥。溶剂浓缩后，将残余物通过硅胶色谱法(洗脱己烷/EtOAc 7∶3)提纯，得到286mg(68％)油状醇，它是非对映异构体的约2∶1混合物。
步骤3：向步骤2的醇产物(286mg；0.77mmol)的无水THF(3mL)溶液中加入对硝基苯基氯甲酸酯(342mg；1.7mmol)，随后加入三乙胺(0.4mL；1.7mmol)，并搅拌回流反应过夜。将混合物浓缩，溶解在DCM中，用冰冷却的5％含水柠檬酸冲洗。溶剂浓缩后，将残余物通过硅胶色谱法(洗脱DCM)提纯，得到430mg(100％)油状碳酸酯，它是非对映异构体的约2∶1混合物。
步骤4：根据实施例1步骤6的方法，在合成的最后阶段用4-哌啶子基哌啶，将步骤3的产物(87mg)转化成标题化合物。通过硅胶色谱法(洗脱己烷/异丙醇1∶1)提纯，得到13.1mg产物，是非对映异构体的约2∶1混合物：HRMS(MH+)564.2091。
试验：
γ-分泌酶活性用Zhang等(Biochemistry，40(16)，5049-5055，2001)描述的方法测定。活性可用抑制百分比表达，也可用产生酶活性的50％抑制的化合物的浓度表达。
试剂：抗体W02、G2-10和G2-11由Konrad Beyreuther博士(海德堡大学，海德堡，德国)得到。W02识别Aβ肽的残基5-8，而G2-10和G2-11分别识别Aβ40和Aβ42的特定的C-端结构。Biotin-4G8从Senetec(St.Louis，MO)购买。用于该项研究的所有组织培养试剂除另外说明外均来自Life Technologies，Inc.。Pepstatin A从Roche Molecular Biochemicals购买；DFK 167来自Enzyme SystemsProducts(Livermore，CA)。
cDNA构造、组织培养和细胞系构成：含有第一18残基和带有London突变的APP的C-端的99氨基酸的构造SPC99-Lon已得到描述(Zhang，L.，Song，L.和Parker，E.(1999)，J.Biol.Chem.，274，8966-8972)。通过插入膜，处理了17氨基酸信号肽，在Aβ的N-末端留下另外的亮氨酸。将SPC99-Ion克隆到pcDNA4/TO媒介物(离体厚)中，并转染到用在T-REx体系(离体厚)中提供的pcDNA6/TR稳定转染的293细胞中。转染的细胞在用10％胎牛血清、100单位/mL青霉素、100g/mL链霉素、250g/mL zeocin和5g/mL杀稻瘟菌素(离体厚)补充的Dulbecco’s改性Eagle’s媒介(DMEM)中选择。通过用0.1g/mL四环素诱发C99表达16-20小时，从克隆体中筛选出A产物，并用三明治免疫试验(见下文)分析条件培养基。标志为pTRE.15的一个克隆体用于这些研究。
膜制备：用0.1g/mL的四环素诱发细胞中的C99表达20小时。在收获前在37℃下用1M佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA)和1M布雷菲德菌素A(BFA)预处理细胞5-6小时。用冷的磷酸盐缓冲的盐水(PBS)冲洗细胞3次，在含有20mM Hepes(pH7.5)、250mM葡萄糖、50mM KCl、2mM EDTA、2mM EGTA和完全蛋白酶抑制剂片剂(RocheMolecular Biochemicals)的缓冲剂A中收获。将细胞片在液氮中急冻，并在使用前储存在-70℃下。
为了制备膜，将细胞重新悬浮在缓冲剂A中，并在600psi的氮气弹中溶解。将细胞溶胞产物在1500g下离心分离10分钟，除去核和大的细胞碎片。将上清液在100000g下离心分离1小时。将膜片再悬浮在缓冲剂A加0.5M NaCl中，并通过在200000g下离心分离1小时收集膜。将用盐洗过的膜片再用缓冲剂A洗，并100000g离心分离1小时。用特富龙-玻璃均化器将最终膜片再悬浮在小体积的缓冲剂A中。测定蛋白质浓度，将膜的等分试样在液氮中急冻，并储存在-70℃。
γ-分泌酶反应和Aβ分析。为了测定γ-分泌酶活性，在50L含有20mMHepes(pH7.0)和2mM EDTA的缓冲剂中，于37℃下培养膜1小时。培养结束时，用基于电致化学发光(ECL)的免疫试验测量Aβ40和Aβ42。Aβ40用抗体对TAG-G2-10和生物素-W02鉴别，而Aβ42用TAG-G2-11和生物素-4G8鉴别。ECL信号用ECL-M8仪器(IGENInternational，Inc.)根据制造商的说明书测量。得出的数据是每次试验中两次或三次测量的平均值。所描述γ-分泌酶活性的特征用5个以上独立地膜制剂来证实。
实施例1到100的化合物具有在约0.030-约24.450μM范围内的IC50。实施例35、39、41、43、56、58、59、61、70、70A、78、98、99和100的化合物具有在约0.030-约0.535μM范围内的IC50。
药物组合物可包含一种或多种通式1.0的化合物。为了从本发明描述的化合物制备药物组合物，惰性的、药物可接受的载体可以是固体，也可以是液体。固体形式的制剂包括粉剂、片剂、可分散颗粒剂、胶囊、扁囊剂和栓剂。粉剂和片剂可包含约5-约95％的活性化合物。合适的固体载体是本领域公知的，例如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖或乳糖。片剂、粉剂、扁囊剂和胶囊可作为适合口服的固体剂型。药物可按受载体和各种组合物的制造方法的实例可见A.Gennaro(ed.)，Remington’s Pharmaceutical Science，第18版(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania。
液体形式的制剂包括溶液、悬浮液和乳液。其实例有用于胃肠外注射的水或水-丙二醇溶液或和用于口服溶液、悬浮液和乳液的添加的甜味剂和遮光剂。液体形式的制剂还可包括用于鼻内给药的溶液。
适于吸入的气溶胶制剂可包括溶液和粉末形式的固体，可与诸如惰性压缩气体，例如氮气的药物可接受的载体结合。
还包括在使用前旨在转化成液体形式制剂，用于口服或胃肠外给药的固体形式制剂。这种液体形式包括溶液、悬浮液和乳液。
本发明的化合物也可经皮使用。经皮组合物可为膏、洗液、气溶胶和/或乳液形式，可包括在本领域中这种用途常用的基质或储库型的经皮贴中。
本发明的化合物也可皮下传输。
优选的药物制剂为单位剂型。在这种剂型中，将制剂分成合适尺寸的含有适当数量的活性化合物，例如达到所述目的的有效量的单位剂型。
制剂的单位剂量中活性化合物的数量可根据具体应用，从约0.01mg-约1000mg，优选约0.01mg-约750mg，更优选约0.01mg-约500mg，最优选的约0.01mg-约250mg变化或调节。
采用的实际剂量可根据病人的需要和所治疗症状的严重程度而变化。具体情况下合适剂量规范的确定在本领域普通技术人员的能力内。为了方便，总日剂量可在要求的天数内按部分分开和给药。
本发明的化合物和/或其药物可接受的盐的给药数量和频率将根据临床护理医师考虑诸如病人的年龄、健康状况和身高体重，以及待治疗症状的严重性作出的判断来调整。典型推荐口服给药的日剂量规范可在1到4个分剂型内，为约0.04mg/天-约4000mg/天。
尽管本发明结合以上提出的具体实施方案进行了描述，但本领域普通技术人员将清楚地知道其许多的选择、修正和变化。所有这些选择、修正和变化都会在本发明的精神和范围内。