裂-乳胱氨酸-β-内酯及其类似物的合成 【发明背景】
【发明领域】
本发明一般涉及乳胱氨酸和相关化合物的制备方法，及乳胱氨酸和裂-乳胱氨酸(clasto-lactacystin)-β-内酯的新类似物，以及它们作为蛋白体抑制剂的用途。
相关技术的描述
链霉菌属代谢物乳胱氨酸(1)抑制细胞周期过程并在培养的成神经细胞瘤细胞中诱发轴突长出(Omura等人，《抗生素杂志》(J.Antibiotics)，44：117(1991)；Omura等人，《抗生素杂志》(J.Antibiotics)，44：113(1991)；Fenteany等人，《美国国家科学院院报》(Proc.Natl.Acad.Sci.(USA))，91：3358(1994))。介导这些作用的细胞靶是20S蛋白体，即26S蛋白体的蛋白水解核心，它是细胞内蛋白质降解的遍在蛋白-蛋白体途径的主要组分。对其机理进行研究已经发现，通过活性种类裂-乳胱氨酸-β-内酯(2)的媒介作用乳胱氨酸可以抑制蛋白体，该内酯(2)特异性地酰化蛋白体X/MB1亚基的N末端苏氨酸残基(Fenteany等人，《科学》(Science)，268：726(1995)；Dick等人，《生物化学杂志》(J.Biol.Chem.)，271：7273(1996))。Fenteany等人还公开了乳胱氨酸类似物(WO96/32105)。
在多种重要的生理过程中都涉及遍在蛋白-蛋白体途径(Goldberg等人，《化学与生物学》(Chemistry & Biology)，2：503(1995)；Ciechanover，《细胞》(Cell)，79：13(1994)；Deshaies，《细胞生物学的趋势》(Trends Cell Biol.)，5：431(1995))。事实上，细胞蛋白的大多数都通过此途径被水解。首先通过共价缀合到小蛋白遍在蛋白地多个分子上标记蛋白质底物以便进行降解。然后，所得多遍在蛋白化蛋白质被26S蛋白体识别和降解。经过对其在损坏的或突变的细胞内蛋白的降解过程中的作用的长期认识，人们现在也已知道，该途径负责多种调节蛋白质的选择性降解。例如，有序的细胞周期过程要求细胞周期蛋白的程序性遍在蛋白化和降解。遍在蛋白-蛋白体途径还介导众多其它细胞周期调节蛋白和肿瘤抑制蛋白的降解(例如，p21，p27，p53)。转录因子NF-κB的激活依赖于抑制性蛋白IκB-α的遍在蛋白化和降解，该转录因子在与免疫和炎症反应有关的基因调节作用方面起着重要的作用(Palombella等人，WO95/25533)。另外，细胞内蛋白通过遍在蛋白-蛋白体途径实现连续性周转是加工抗原肽以便于MHC I类分子上呈递所必需的(Goldberg和Rock，WO 94/17816)。
乳胱氨酸和裂-乳胱氨酸-β-内酯令人感兴趣的生物活性和天然原料的不足，以及这些分子的引起争论的化学结构，已经激励人们努力合成乳胱氨酸和相关类似物。Corey和Reichard(《美国化学会志》(J.Am.Chem.Soc.)，114：10677(1992)；《四面体通讯》(Tetrahedron Lett.)，34：6977(1993))实现了乳胱氨酸的首次全合成，该合成反应有15步，总产率为10％。该合成反应的关键特征是从N-苄基丝氨酸衍生的顺-噁唑啉醛通过立体有择羟醛反应构造C(6)-C(7)键。在Uno等人(《美国化学会志》，116：2139(1994))报道的合成方法中从D-焦谷氨酸衍生的双环噁唑啉甲硅烷基烯醇醚中间体的立体有择Mukaiyama-羟醛反应被用于构造C(5)-C(9)键。该合成反应有19步，总产率为5％。在类似的双环噁唑啉中间体的碱性条件下进行的羟醛反应构成Dikshit等人(《四面体通讯》，36：6131(1995))报道的模型研究基础。
噁唑啉衍生的烯醇化物的羟醛反应的显著特征在于由Smith及其合作者报道的乳胱氨酸的合成(Suazuka等人，《美国化学会志》，115：5302(1993)；Nagamitsu等人，《美国化学会志》，118：3584(1996))及Corey和Choi报道的(6R)-乳胱氨酸的合成(Corey和Choi，《四面体通讯》，34：6969(1993)；Choi博士的论文，哈佛大学，44(1995))。在前一种合成方法(有20步，总产率为9％)中，烯醇化物与甲醛缩合引入一个单碳原子，然后必须将其在许多附加步骤中加工。在Corey和Choi合成方法中，羟醛反应选择性提供不希望的立体化学产物，导致最终制成没有生物活性的乳胱氨酸的C(6)差向异构体。
人们已经用22步以2％总产率从D-葡萄糖制备出乳胱氨酸(Chida等人，《化学学会杂志，化学通讯》(J.Chem.Soc.，Chem.Commun.)，793(1995))。天然产物生产中所涉及的生物合成途径已经通过涉及富集13C化合物的进料实验进行了研究(Nakagawa等人，《四面体通讯》，35：5009(1994))。
上述报道的乳胱氨酸合成方法时间长，产率低，而且没有一种合成方法适用于类似物的合成。因此需要制备乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-内酯及其类似物的改进方法。
发明概述
本发明的第一方面涉及式VI乳胱氨酸或其类似物或式VII裂-乳胱氨酸-β-内酯或其类似物的制备方法，其中
R1是烷基，链烯基，炔基，环烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所说的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个的环部分可以选择性地被取代；
R2是烷基，环烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，烷氧基，羟基，烷氧基烷基或酰氨基，其中所说的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个的环部分可以选择性地被取代；及
R7是烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所说的烷基，芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个可以选择性地被取代。
本发明的第二方面涉及式XIV甲酰基甲酰胺的制备方法，其中
R2是烷基，环烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，烷氧基，羟基，烷氧基烷基或酰氨基，其中所说的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个的环部分可以选择性地被取代；及
R5和R6分别是烷基和烷芳基之一；或R5和R6与其相连的氮原子一起形成一个5-7员杂环，该杂环可以选择性地被取代，而且可以选择性地含有另一个氧原子或氮原子。
本发明的第三方面涉及式Ia或Ib三取代噁唑啉的制备方法，其中
R1是烷基，链烯基，炔基，环烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所说的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个的环部分可以选择性地被取代；及R4是芳基或杂芳基，二者都可以选择性地被取代。式Ia或Ib三取代噁唑啉可以用作通过本文所述方法制备乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-内酯及其类似物的起始原料。
本发明的第四方面涉及式VI和VII的乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-内酯或类似物，它们具有意想不到的生物活性。乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-内酯及其类似物具有作为蛋白体抑制剂的生物活性。它们可用于治疗由蛋白体功能直接介导的疾病，如肌肉萎缩，或通过蛋白质间接介导的疾病，所说蛋白质是由蛋白体如转录因子NF-κB加工而成的。
本发明的第五方面涉及药物组合物，它含有式VI或式VII化合物以及可药用载体或稀释剂。
本发明的第六方面涉及抑制蛋白体功能或治疗由蛋白体功能直接或间接介导的疾病的方法，包括给药在抑制蛋白体方面具有意想不到的高活性的式VI或式VII化合物。优选实施方案涉及到用式VI或VII化合物在血管闭塞之后防止梗塞或减小梗塞尺寸，例如，治疗中风之后的神经元损失。另一个优选实施方案涉及所说化合物用于治疗哮喘。
本发明的第七方面涉及式XIV甲酰基甲酰胺的对映体富集的组合物。
本发明的第八方面涉及新的各个中间体，如式II羟醛和式III氨基二醇，和乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-内酯或其各种类似物的多步制备方法中的各个步骤。
本发明的第九方面涉及各个中间体，如式XVII，XVIII和XIX化合物，其中X是卤素，优选Cl，Br或I，以及式I取代的噁唑啉的多步制备方法中的各个步骤。
本发明的其它特征或优点将从下面详细的论述和所附权利要求书明显看出。
附图简述
图1为静脉内注射化合物3b对大鼠(n＝6-8)梗塞体积的效应的直方图。
图2为静脉内注射化合物3b对大鼠(n＝6-8)神经病学评分的效应的直方图。
优选实施方案的详述
本发明涉及乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-内酯及其类似物的改进的多步合成方法，它比现有技术中的合成方法步骤少，总产率高。一些单个的处理步骤和化学中间体使本发明的合成途径区别于现有技术中的合成途径。例如，该合成途径依赖于噁唑啉中间体的新的立体有择合成和甲酰基甲酰胺到噁唑啉的唯一的立体有择加成。
本发明还涉及具有意想不到生物活性的新式VI和VII类似物。乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-内酯及其类似物具有作为蛋白体抑制剂的生物活性。它们可用于治疗由蛋白体功能直接介导的疾病，如肌肉萎缩，或通过蛋白质间接介导的疾病，所说蛋白质是由蛋白体如转录因子NF-κB加工而成。本发明还涉及抑制蛋白体功能或治疗由蛋白体功能直接或间接介导的疾病的方法，包括给药在抑制蛋白体方面具有意想不到的高活性的式VI或VII化合物。在本发明的优选方面，给药含有式VI或式VII化合物的药物组合物以用于治疗局部缺血或再灌注损伤。例如，在优选实施方案中所说化合物被用于治疗、预防或改善中风后的神经元损失。合成方法
本发明第一方面涉及式VI乳胱氨酸及其类似物和式VII裂-乳胱氨酸-β-内酯及其类似物的制备方法：其中
R1是烷基，链烯基，炔基，环烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所说的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个的环部分可以选择性地被取代；
R2是烷基，环烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，烷氧基，羟基，烷氧基烷基或酰氨基，其中所说的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个的环部分可以选择性地被取代；及
R7是烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所说的烷基，芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个可以选择性地被取代。
这些化合物的制备方法依赖于式V普通羧酸中间体的形成：其中R1和R2的定义同上面在式VI和VII中的定义，该方法的步骤包括：
(a)通过用强碱处理式I取代的芳基-或杂芳基噁唑啉，其中R1定义如上，
R3是烷基，链烯基，炔基，环烷基，芳基，烷芳基，其中任何一个可以选择性地被取代；及
R4是芳基或杂芳基，二者都可以选择性地被取代；将所说取代的芳基-或杂芳基噁唑啉脱质子化，形成烯醇化物；
(b)用下列金属之一将所说烯醇化物进行金属转移：钛，铝，锡，锌，镁和硼，然后用式XIV甲酰基甲酰胺处理，其中R2的定义同上面在式VI和VII中的定义；及
R5和R6各是烷基或烷芳基之一；或R5和R6与其相连的氮原子一起形成一个可以选择性地被取代的5-7员杂环，该杂环可以选择性地含有另一个氧原子或氮原子，形成式II加合物，其中R1-R6定义如上；
(c)催化氢化所说式II加合物，形成式IVγ-内酰胺，其中R1，R2和R3定义如上；
(d)皂化所说式IVγ-内酰胺，形成式V内酰胺羧酸，其中R1和R2定义如上。
式V羧酸中间体可以通过用环化剂处理而环化，形成式VII裂-乳胱氨酸-β-内酯或其类似物，并可以任选进一步与硫醇(R7CH)如N-乙酰基半胱氨酸反应，形成式VI乳胱氨酸或其类似物。
或者，直接将式V羧酸中间体与硫醇(R7CH)如N-乙酰基半胱氨酸偶合，形成式VI乳胱氨酸或其类似物。
本发明第二方面涉及式XIV对映体富集的甲酰基甲酰胺的制备方法，其中R2，R5和R6定义如上，所说方法包括：
(a)将式VIII化合物脱质子化，其中R8是异丙基或苄基，随后，用R2CH2COCl将所得阴离子酰化，形成式IX酰基噁唑烷酮，其中R2和R8定义如上；
(b)将式IX酰基噁唑烷酮与苄氧基甲基氯进行立体有择反应，形成式X保护的醇，其中R2和R8定义如上；
(c)水解式X保护的醇，形成式XI羧酸，其中R2定义如上；
(d)将所说式XI酸与酰胺R5R6NH2偶合，得到式XII酰胺，其中R2，R5和R6定义如上；
(e)催化氢化式XII酰胺，形成式XIII醇，其中R2，R5和R6定义如上；
(f)氧化所得的式XIII醇，得到式XIV甲酰基甲酰胺。
本发明第三方面涉及式Ia三取代顺-噁唑啉化合物的制备方法，其中
R1是烷基，链烯基，炔基，环烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所说的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个的环部分可以选择性地被取代；
R3是烷基，环烷基，芳基，烷芳基，其中任何一个可以选择性地被取代；及
R4是芳基或杂芳基，二者都可以选择性地被取代；所说方法包括：
(a)不对称二羟基化式XV烯烃中间体，形成式XVIa光学活性的二醇，
(b)将所说式XVIa光学活性的二醇与芳族羧酸衍生的原酸酯在酸(Lewis或Bronsted酸)催化作用下反应，得到混合原酸酯，然后，在碱存在下将所得混合原酸酯中间体与下列试剂反应：低级烷酰基卤化物，氢卤酸(HX，其中X是卤素)，酰氯和含卤素Lewis酸(例如，BBr3，SnCl4，Ti(OR)2Cl2，Ti(OR)3Cl，Me3SiX等，其中X是卤素，等等)，形成式XVIIa衍生物，其中X是卤素，优选Cl，Br或I；
(c)将所说式XVIIa衍生物与碱金属叠氮化物反应，形成式XVIIIa叠氮化物，(d)催化氢化所说叠氮化物，形成式XIXa化合物，
(e)将式XIXa化合物置于闭环条件下，形成所说的式I取代的芳基-或杂芳基噁唑啉，在氧取代的碳上构型发生逆转，生成式Ia顺-噁唑啉；其中对于每个式XV，XVIa，XVIIa，XVIIIa和XIXa，R1，R3和R4同上面式I中定义。
或者，本发明第三方面涉及式Ib三取代反-噁唑啉化合物的制备方法，包括：
(a)不对称二羟基化式XV烯烃中间体，形成式XVIb光学活性的二醇，
(b)将所说式XVIb光学活性的二醇与芳族羧酸衍生的原酸酯在酸(Lewis或Bronsted酸)催化作用下反应，得到混合原酸酯，然后，在碱存在下将所得混合原酸酯中间体与下列试剂反应：低级烷酰基卤化物，氢卤酸(HX，其中X是卤素)，酰氯和含卤素Lewis酸(例如，BBr3，SnCl4，Ti(OR)2Cl2，Ti(OR)3Cl，Me3SiX等，其中X是卤素，等等)，形成式XVIIb衍生物，其中X是卤素，优选Cl，Br或I；
(c)将所说式XVIIb衍生物与碱金属叠氮化物反应，形成式XVIIIb叠氮化物，(d)催化氢化所说叠氮化物，形成式XIXb化合物，及
(e)将式XIXb化合物置于闭环条件下，形成所说的式Ib取代的芳基-或杂芳基噁唑啉，其中闭环反应随着在氧取代的碳上构型的保持进行，生成式Ib反噁唑啉；其中对于每个式XV，XVI，XVII，XVIII和XIX，R1，R3和R4同上面式I中定义。
关于上述方法，下列优选涵义是适用的：
R1的优选涵义是C1-12烷基，特别是C1-8烷基，C3-8环烷基，特别是C3-6环烷基，C2-8链烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，特别是C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中所说的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个的环部分可以选择性地被取代。可以选择性地出现在R1部分的芳基环上的取代基包括一个或多个，优选一个或两个，羟基，硝基，三氟甲基，卤素，C1-6烷基，C6-10芳基，C1-6烷氧基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，氨基，C2-6烷氧羰基，羧基，C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，C1-6烷基磺酰基，C6-10芳基磺酰基，C1-6烷基亚磺酰基，C1-6烷基磺酰氨基，C6-10芳基磺酰氨基，C6-10芳基(C1-6)烷基磺酰氨基，C1-6烷基，C1-6羟基烷基，C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C1-6烷基羰基，C2-6羧基烷基，氰基和三氟甲氧基。
R1更优选地是C1-3烷基，如乙基，丙基或异丙基；环烷基，如环己基；或C6-10芳基，如苯基。最优选的是异丙基。
R2的优选涵义是C1-8烷基，C3-8环烷基，特别是C3-6环烷基，C1-8烷氧基，C2-8链烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，特别是C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中所说的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个的环部分可以选择性地被上面R1中所述的任何取代基取代。
R2更优选地是C1-4烷基，如甲基，乙基，丙基或丁基；或C1-4烷氧基，如甲氧基或乙氧基。最优选的是甲基，乙基，丙基和丁基。
至于R3，在这个位置上可以使用各种酯官能团。优选的涵义是C1-8烷基，C3-8环烷基，特别是C4-7环烷基，C2-8链烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，特别是C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中任何一个可以选择性地被取代。可以选择性地出现在R3上的取代基包括一个或多个，优选一个或两个在上面R1中所述的取代基。
R3更优选地是C1-4烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基。最优选的是甲基，乙基，叔丁基和苄基。
R4优选是C6-10芳基，优选苯基，或杂芳基，包括噻吩基，苯并[b]噻吩基，呋喃基，吡喃基，异苯并呋喃基，苯并噁唑基，2H-吡咯基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，哒嗪基，中氮茚基，异吲哚基，3H-吲哚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，4H-喹嗪基，异喹啉基，喹啉基或三唑基。这些苯基或杂芳基可以被一个或两个上面R1中所述的取代基选择性地取代。最优选的是苯基和被卤素，C1-6烷基，C1-6烷氧基，羧基，氨基，C1-6烷基氨基和/或二(C1-6)烷基氨基取代的苯基。
R5和R6分别是烷基，芳烷基或烷芳基之一；或R5和R6与其相连的氮原子一起形成5-7员杂环，该杂环可以选择性地被取代，而且可以选择性地含有另一个氧原子或氮原子。任选的取代基列于上面关于R1的定义中。
R5和R6优选是C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，或与其相连的氮原子一起形成5-7员杂环，该杂环可以选择性地被取代，并且可以选择性地含有另一个氧原子或氮原子。NR5R6最优选的涵义是二甲氨基，二乙氨基，吡咯烷基，哌啶子基，吗啉代，噁唑烷酮和被卤素，C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C1-6烷氧基，羧基和/或氨基取代的噁唑烷酮。
R7优选是C1-8烷基，C3-8环烷基，C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C1-6烷基(C6-10)芳基，其中任何一个可以选择性地被取代。可以选择性地出现在R7的一个或两个环上或链上的取代基包括一个或多个，优选一个或两个在上面R1中所述的取代基。R7优选与其相连的硫原子构成半胱氨酸或半胱氨酸衍生物，如N-乙酰基半胱氨酸，谷胱甘肽等。
流程1是从取代的噁唑啉起始原料制备乳胱氨酸和裂-乳胱氨酸-β-内酯类似物的一般流程。
流程1
起始原料噁唑啉I，既可以是顺构型(Ia)也可以是反构型(Ib)，用强碱进行脱质子化，形成烯醇化物。适用于此反应的碱为例如有机碱，包括受阻酰胺碱，如二异丙基氨基化锂(LDA)，四甲基哌啶化锂(LiTMP)，六甲基二硅氮化锂、钠或钾(LiHMDS，NaHMDS，KHMDS)等；或受阻烷基锂试剂，如仲丁基锂，叔丁基锂等。该反应优选在低温下在醚类溶剂如乙醚，四氢呋喃(THF)或二甲氧基乙烷(DME)中进行。反应温度优选在约-100-约-30℃范围进行，更优选-85℃至-50℃，最优选-85℃至-75℃。反应温度在确定随后向醛的加成反应的立体化学结果时很重要，因为较低温度就可以得到较好的选择性。
在脱质子反应步骤之后用下列金属对所说烯醇化物进行金属转移：钛，铝，锡，锌，镁和硼。适于这步反应的优选试剂包括钛或铝Lewis酸，例如Me2AlCl或(i-PrO)3TiCl，或二者的混合物。优选使用1-3摩尔当量的Lewis酸，更优选使用2-3摩尔当量的，最优选使用约2.2-2.3当量的。然后用甲酰基酰胺(XIV)处理烯醇化物，得到加合物II。用硫酸氢钠溶液洗掉过量的醛，粗产物无需进一步纯化即可用于下步反应。使用2.2-2.3当量Me2AlCl可以选择性地生成(6S)产物(以乳胱氨酸计)，比例一般好于约10∶1，而使用1当量Me2AlCl，则选择性形成(6R)产物，比例约为5∶1。
作为(6S)-和(6R)-差向异构体的混合物的加合物II经过催化氢化反应生成所要的γ-内酰胺(IV)，有时作为与氨基二醇III的混合物：适用于该反应的催化剂包括钯黑，钯-活性炭，氢氧化钯/炭等。适用于该反应的有机溶剂包括低级链烷醇如甲醇，乙醇或异丙醇，低级链烷酸酯如乙酸乙酯，低级链烷酸如乙酸，或它们的混合物。该反应在氢气中进行，氢气压力约为15-100psi，更优选约30-50psi。或者，可以采用转移氢化法(R.A.W.Johnstone等人，《化学评论》(Chem.Rev.)，85：129(1985))，即在大气压下用催化剂和氢供体处理加合物II。
粗产物混合物经过加热后，使氨基二醇III转变成γ-内酰胺IV，然后可以约60-75％的总产率从II分离。加热步骤通过先滤除氢化步骤中所用的催化剂，然后将滤液加热回流而方便地进行。如果粗产物混合物中没有氨基二醇III，可以省略加热步骤。经过酯皂化反应及随后的环化反应，可以40-90％产率，一般大于60％产率，得到β-内酯VII。可以用现有技术中已知的偶合剂完成环化反应，其中所说偶合剂包括芳基磺酰氯，六氟磷酸苯并三唑-1-基氧三(二甲氨基)鏻(BOP试剂)，四氟硼酸O-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓(TBTU)，烷基，芳基或链烯基氯甲酸酯等。氯甲酸异丙烯酯是该步反应的优选试剂，因为所有副产物都是挥发性的，而且不需要对产物进行色谱纯化。
根据文献记载的方法(Corey等人，《四面体通讯》，34：6977(1993))，用N-乙酰基半胱氨酸处理β-内酯可将裂-乳胱氨酸-β-内酯转化成乳胱氨酸。β-内酯VII与其它硫醇的反应类似地进行。或者，将羧酸中间体V与硫醇偶合形成相应的硫醇酯VI，制成乳胱氨酸类似物。因此，本发明方法被用于乳胱氨酸和裂-乳胱氨酸-β-内酯及其类似物的合成。
用在醛醇缩合反应中的对映体富集的甲酰基酰胺XIV是新化合物。它们可以按照如流程2中所述的代表性反应顺序制备。至于本发明中的术语“对映体富集的”，是指一种对映体相对于另一种对映体是过量的，即在混合物中一种对映体的含量超过50％。术语“立体有择反应”用来指合成或反应步骤使一种对映体或非对映体的产量超过另一种对映体或其它非对映体。
流程2
(S)-(-)-4-苄基-2-噁唑烷酮(VIIIa)或(S)-(-)-4-异丙基-2-噁唑烷酮(VIIIb)(其中R8是苄基或异丙基)的阴离子经过酰化反应以超过80％产率生成酰基噁唑烷酮IX。随后经过立体有择苄氧基甲基化反应(Evans等人，《美国化学会志》，112：8215(1990))以超过80％产率得到保护的醇X，条件是苄基氯甲基醚是新制备的(Conner等人，《有机合成》(Organic Syntheses)，52：16(1974))。经过过氧化物介导的水解得到酸XI，将其与胺偶合得到酰胺XII，总产率一般超过50％。苄基经过氢解反应，然后将得到的醇(XIII)进行氧化反应，可以80-85％产率得到甲酰基酰胺XIV。氢解反应步骤中优选使用Pearlmans催化剂(Pd(OH)2)。最后的氧化步骤最好用Dess-Martin所述的全碘烷(periodinane)(《有机化学杂志》(J.Org.Chem.)，48：4156(1983))或用2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基(TEMPO)游离基和在溴离子存在下的缓冲的次氯酸盐(《有机化学杂志》，50：4888(1985)；《有机合成文集》(Org.Synth.Coll.)，8：367(1993))完成。其它温和的氧化剂如过钌酸四丙基铵(TPAP)也可以使用。通过用硼氢化钠还原醛并用R-(+)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基乙酰氯(Dale等人，《有机化学杂志》，34：2543(1969))将所得的醇转化成相应的Mosher酯可以使甲酰基酰胺XIV表现为对映体纯的。在300MHz的1H NMR分析显示了单一非对映体。根据流程2制备的醛构型是稳定的，当贮存在0℃时，一周后没有对映体劣化迹象出现。该醛在醛醇反应条件下构型也是稳定的，并且形成加合物II，而无需在C(7)位进行取代基R2的差向异构化。
本合成方法将有对强碱和任何一个R1的取代基参与。异丙基是使终产物具有良好蛋白体抑制活性的优选取代基。
流程3
本发明还涉及制备噁唑啉起始原料I的新途径。整个合成过程包括5步(见流程3)，最后得到顺-取代的噁唑啉Ia，此后，它被用于上述方法。流程3的第一步是烯烃XV的Sharpless不对称二羟基化反应(Sharpless等人，《有机化学杂志》，57：2768(1992)；Kolb等人，《化学评论》，94：2483(1994)；Shao和Goodman，《有机化学杂志》，61：2582(1996))。如果无法买到，可以利用醛和乙氧羰基亚甲基三苯基膦之间的Wittig缩合反应制备烯烃XV(Hale等人，《四面体》，50：9181(1994))。其它烯化反应过程也是现有技术中已知的。二羟基化反应优选用AD-混合-β(Aldrich化学公司)在甲磺酰胺存在下进行，立体有择地得到二醇XVIa，正如Sharpless的面选择规则所预测的那样。对于大规模生产，二羟基化反应优选用N-甲基吗啉-N-氧化物(NMO)作为再氧化剂代替存在于AD-混合-β中的K3Fe(CN)6进行。虽然该方法的对映体选择性稍低，但它允许用更浓的反应混合物，而且可以大大简化加工步骤。可以采用重结晶方法提高产物的对映体纯度。
下一步，在Lewis或Bronsted酸催化作用下用原酸酯处理二醇XVIa，得到混合原酸酯，用酰卤处理(Haddad等人，《四面体通讯》，37：4525(1996))可当场将其转化成卤代酯XVIIa。虽然此反应优选采用酰卤，特别是乙酰卤，但其它酰卤如HCl，HBr，HI，Me3SiCl，Me3SiI，Me3SiBr等也可以使用。式MLnX含卤素Lewis酸，如BBr3，SnCl4，Ti(OR)2Cl2，Ti(OR)3Cl等也可以使用。上式中，M选自下列金属：B，Ti，Sn，Al，Zn和Mg；L是适合上述金属的任何配体，优选醇盐或卤素基团；n是能获得稳定复合物的整数；及X是卤素。优选用乙酰溴制备卤代酯XVIIa。用于本反应的原酸酯优选从芳族或杂芳族羧酸衍生。更优选原酸酯从苯甲酸衍生，如原苯甲酸三甲酯。在制备混合原酸酯时优选用三氟化硼醚合物作Lewis酸催化剂，但其它酸如HBr，SnCl4，TiCl4，BBr3等也可以使用。
加工之后，在极性非质子传递有机溶剂如二甲亚砜(DMSO)或N，N-二甲基甲酰基甲酰胺(DMF)中用碱金属叠氮化物处理，将粗卤化物XVIIa转变成叠氮化物XVIIIa。在乙酸乙酯中用钯催化剂叠氮化物XVIIIa的催化氢化反应随着芳酰基的迁移进行(Wang等人，《有机化学杂志》，59：5014(1994))，得到羟基酰胺XIXa。
在二氯甲烷中用亚硫酰氯处理XIXa实现闭环及羟基取代的碳原子构型的逆转，生成顺-取代的噁唑啉起始原料Ia。适用于本反应的其它试剂包括磺酰氯，三氯化磷，磷酰氯和(甲氧羰基氨磺酰基)-氢氧化三乙基铵内盐(Burgess试剂)。在Mitsunobu条件(Mitsunobu，《合成》，1(1981))下处理XIXa也能实现闭环。噁唑啉环上的氧原子预定变成终产物VI和VII中的C(9)-羟基。在平衡条件下(甲醇钠，甲醇)，通过酯取代基构型的逆转使顺-噁唑啉(Ia)转变成反-噁唑啉(Ib)，同时R1取代基的构型保持固定。顺-和反-噁唑啉都可以用于流程1所示的方法，会产生等价的结果。
在制备噁唑啉起始原料I的另一个方法中，对甲苯磺酸(p-TsOH)被用来实现闭环(流程4)。在这种情况下，闭环使羟基取代的碳原子构型得以保持，得到反-噁唑啉(Ib)。为了在终产物的C(9)上得到适合的立体化学构型，必须选择在二羟基化反应中使用的手性配体以便提供与流程3中所述的相反的面选择性。例如，用AD-混合-α代替AD-混合-β。所有接下来的其它步骤类似于在顺-噁唑啉Ia的合成中所述的那些步骤。
流程4化合物
上述许多化合物是新化合物；这些新化合物都是要求权利保护的。
本发明第四、五和六方面涉及可以通过本文所述合成途径制备的乳胱氨酸类似物；涉及含有这类化合物的药物组合物；以及涉及治疗患有由蛋白体加工而成的蛋白质介导的疾病的患者的方法，该方法包括给患者服用有效量的本文公开的药物组合物。这些方法可治疗阿尔茨海默病，噁病质，癌症，炎症，如与下列疾病有关的炎症反应：变态反应，骨髓或实体器官移植，或疾病状态，包括(但不限于)关节炎，多发性硬化，肠炎和寄生虫病如疟疾)，牛皮癣，再狭窄，中风和心肌梗塞。
本文公开的式VI和VII化合物对蛋白体具有高选择性，但却不抑制其它蛋白酶如胰蛋白酶，α-胰凝乳蛋白酶，(需)钙蛋白酶I，(需)钙蛋白酶II，木瓜蛋白酶和组织蛋白酶B。
正如Fenteany等人所公开的那样(WO 96/32105，该文全部在此引作参考)，乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-内酯及其类似物具有抑制蛋白体的生物活性。它们可用于治疗由蛋白体功能直接介导的疾病，如肌肉萎缩，或通过蛋白质间接介导的疾病，所说蛋白质是由蛋白体如转录因子NF-κB加工而成的。用本发明方法制备的化合物还可以用来确定细胞、发育或生理过程或输出是否由蛋白体的蛋白酶解活性调节。
具有意想不到的蛋白体功能抑制活性的化合物是式VI和VII化合物或它们的盐，其中
R1是C1-12烷基，C3-8环烷基，C2-8链烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基；
R2是C2-6烷基；及
R7是C1-8烷基，C3-8环烷基，C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C1-6烷基(C6-10)芳基，其中任何一个可以选择性地被取代。可以选择性地出现在R7的一个或两个环上或链上的取代基包括一个或多个，优选一个或两个在上面R1中所述的取代基。
优选的化合物是其中R1是C1-4烷基，更优选为异丙基的化合物。R2优选是乙基，正丙基，正丁基或异丁基。R7优选与其相连的硫原子一起形成半胱氨酸或半胱氨酸衍生物如N-乙酰基半胱氨酸，谷胱甘肽等。
本发明第七方面涉及式XIV对映体富集的甲酰基甲酰胺或其盐，其中
R2是C1-8烷基，C3-8环烷基，C2-8链烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基；及
R5和R6分别是C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，或与其相连的氮原子一起形成5-7员杂环，该杂环可以选择性地被取代，而且可以选择性地含有另一个氧原子或氮原子。
优选R2是C2-6烷基的化合物。
本发明第八方面涉及式II和III化合物或其盐，其中
R1是烷基，链烯基，炔基，环烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所说的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个的环部分可以选择性地被取代；
R2是烷基，环烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，烷氧基，羟基，烷氧基烷基或酰氨基，其中所说的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个的环部分可以选择性地被取代；
R3是烷基，链烯基，炔基，环烷基，芳基，烷芳基，其中任何一个可以选择性地被取代；
R4是选择性地被取代的芳基或选择性地被取代的杂芳基；及
R5和R6分别是烷基或烷芳基之一；或R5和R6与其相连的氮原子一起形成5-7员杂环，该杂环可以选择性地被取代，而且可以选择性地含有另一个氧原子或氮原子。最优选的NR5R6是二甲氨基，二乙氨基，吡咯烷基，哌啶子基，吗啉代，噁唑烷酮和被卤素，C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C1-6烷氧基，羧基和/或氨基取代的噁唑烷酮。
优选的式II和III化合物是其中取代基涵义如下的化合物：
R1是C1-12烷基，C3-8环烷基，C2-8链烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中所说芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个的环部分可以选择性地被取代；
R2是C1-8烷基，C3-8环烷基，C2-8链烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基，或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中所说芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个的环部分可以选择性地被取代；
R3是C1-8烷基，C3-8环烷基，C2-8链烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中任何一个可以选择性地被取代；
R4是选择性地被取代的C6-10芳基，或下列选择性地被取代的杂芳基：噻吩基，苯并[b]噻吩基，呋喃基，吡喃基，异苯并呋喃基，苯并噁唑啉，2H-吡咯基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，哒嗪基，中氮茚基，异吲哚基，3H-吲哚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，4H-喹嗪基，异喹啉基，喹啉基或三唑基；及
R5和R6分别是C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，或与其相连的氮原子一起形成5-7员杂环，该杂环可以选择性地被取代，并且可以选择性地含有另一个氧原子或氮原子。最优选的NR5R6是二甲氨基，二乙氨基，吡咯烷基，哌啶子基，吗啉代，噁唑烷酮和被卤素，C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C1-6烷氧基，羧基和/或氨基取代的噁唑烷酮。
本发明第九方面涉及式XVIIa，XVIIb，XVIIIa，XVIIIb，XIXa或XIXb化合物或其盐，其中
R1是烷基，链烯基，炔基，环烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所说的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个的环部分可以选择性地被取代；
R3是烷基，链烯基，炔基，环烷基，芳基，烷芳基，其中任何一个可以选择性地被取代；及
R4是选择性地被取代的芳基或选择性地被取代的杂芳基。
优选的式XVII，XVIII或XIX化合物是其中
R1是C1-12烷基，C3-8环烷基，C2-8链烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中所说芳基，芳烷基或烷芳基中任何一个的环部分可以选择性地被取代；
R3是C1-8烷基，C3-8环烷基，C2-8链烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中任何一个可以选择性地被取代；及
R4是选择性地被取代的C6-10芳基，或下列选择性地被取代的杂芳基：噻吩基，苯并[b]噻吩基，呋喃基，吡喃基，异苯并呋喃基，苯并噁唑基，2H-吡咯基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，哒嗪基，中氮茚基，异吲哚基，3H-吲哚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，4H-喹嗪基，异喹啉基，喹啉基或三唑基，的化合物。定义
本文所用术语“烷基”指有至多12个碳原子，优选1-8个碳原子的直链和支链残基，如甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，叔丁基，异丁基，戊基，己基，异己基，1-乙基丙基，庚基，4，4-二甲基戊基，辛基，2，2，4-三甲基戊基，壬基，癸基，十一基和十二基。
本文所用术语“取代的烷基”指含有一、二或三个下列取代基的上面定义的烷基：卤，羟基，硝基，三氟甲基，卤素，C1-6烷基，C6-10芳基，C1-6烷氧基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，氨基，C2-6烷氧羰基，羧基，C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，C1-6烷基磺酰基，C6-10芳基磺酰基，C1-6烷基亚磺酰基，C1-6烷基磺酰氨基，C6-10芳基磺酰氨基，C6-10芳基(C1-6)烷基磺酰氨基，C1-6烷基，C1-6羟基烷基，C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C1-6烷基羰基，C2-6羧基烷基，氰基及三氟甲氧基和/或羧基取代基。
本文所用术语“环烷基”指含有3-12个碳原子，优选3-8个碳原子的饱和环烃基，包括环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基，环辛基，环癸基和环十一基，其中任何基团都可以被下列取代基取代：卤素，C1-6烷基，C1-6烷氧基和/或羟基。
本文所用术语“杂芳基”指含有5-14个环原子，优选5，6，9或10个环原子；在环阵列上共有的6，10或14个π电子；并含有碳原子和1，2或3个氧、氮或硫杂原子的基团，杂芳基的实例包括噻吩基，苯并[b]噻吩基，萘并[2，3-b]噻吩基，噻蒽基，呋喃基，吡喃基，异苯并呋喃基，苯并噁唑基，苯并吡喃基，呫吨基，苯氧硫杂环己烯基(phenoxathiinyl)，2H-吡咯基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，哒嗪基，中氮茚基，异吲哚基，3H-吲哚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，4H-喹嗪基，异喹啉基，喹啉基，2，3-二氮杂萘基，1，5-二氮杂萘基，四唑基，喹唑啉基，噌啉基，蝶啶基，4αH-咔唑基，咔唑基，β-咔啉基，菲啶基，吖啶基，啶基，菲咯啉基，吩嗪基，异噻唑基，吩噻嗪基，异噁唑基，呋咱基和吩噁嗪基。
本文所用术语“芳基”，不论其本身还是作为另一基团的一部分，均指在环上含有6-12个碳原子的单环或双环芳香基，如苯基，萘基或四氢萘基。
本文所用术语“芳烷基”或“芳基烷基”，不论其本身还是作为另一基团的一部分，均指上述C1-6烷基上带有芳基取代基，如苄基，苯乙基或2-萘甲基。
本文所用术语“烷芳基”或“烷基芳基”，不论其本身还是作为另一基团的一部分，均指上述芳基上带有C1-6烷基取代基，如甲苯基，乙基苯基或甲基萘基。
术语“选择性地取代的”如果与芳基，芳烷基，烷芳基或5-，6-，9-或10-员杂环基联用，则指所说基团的环部分可以选择性地被一或两个分别选自下列基团的取代基取代：C1-6烷基，C3-8环烷基，C1-6烷基(C3-8)环烷基，C2-8链烯基，C2-8炔基，氰基，氨基，C1-6烷基氨基，二(C1-6)烷基氨基，苄基氨基，二苄基氨基，硝基，羧基，(C1-6)烷氧羰基，三氟甲基，卤素，C1-6烷氧基，C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C6-10芳基(C1-6)烷氧基，羟基，C1-6烷硫基，C1-6烷基亚磺酰基，C1-6烷基磺酰基，C6-10芳硫基，C6-10芳基亚磺酰基，C6-10芳基磺酰基，C6-10芳基，C1-6烷基(C6-10)芳基或卤代(C6-10)芳基。
术语“烷氧基”指连接氧原子的上述烷基。
本文所用术语“卤素”或“卤”，不论其自身还是作为另一基团的一部分，均指氯，溴，氟或碘。
本文所用术语“酰氨基”指甲酰氨基，烷基羰基氨基或芳基羰基氨基。用途
表1提供了用本发明方法制备的裂-乳胱氨酸-β-内酯的药理学数据。由于酰化X/MBI亚基的N末端苏氨酸残基，这些化合物都是20S蛋白体的不可逆灭活剂。Kobs/[I]值是酶灭活速率的测量值。几种化合物表现出改善的活性，即相比于裂-乳胱氨酸-β-内酯(2)这些化合物灭活速度更快。在酶测定中最具效力的化合物是7-甲氧基衍生物(3f)。但是，如果测定在细胞培养物中进行，则3f比2效力差。
内酯环不仅受到蛋白体X/MB1亚基的苏氨酸残基，而且受到水进行亲核攻击。水解导致羟基酸V的形成，它不具备作为蛋白体抑制剂的活性。在细胞培养物中的相对效力是由多种因素决定的，包括酶的效力，细胞渗透能力和水解速率。尽管3f对酶比2更有效力，但其水解也更迅速，结果，3f在细胞培养物中活性要弱得多。相反，不仅在酶测定中，而且在细胞培养物中，类似物3a-3d都表现出意想不到的改善的效力。
本发明公开的化合物被用于治疗由蛋白体的蛋白酶解功能直接介导的疾病，如肌肉萎缩，或通过蛋白质间接介导的疾病，所说蛋白质是由蛋白体如NF-κB加工而成的。蛋白体参与细胞调节(例如，细胞周期，基因转录和代谢途径)，细胞通讯及免疫反应(例如，抗原呈递)中所涉及的蛋白质的迅速排除和转译后加工。具体实例包括β-淀粉样蛋白和调节蛋白，如细胞周期蛋白和转录因子NF-κB。这里所说的治疗包括以改善或稳定患者病情的方式逆转、缓解或阻止症状，临床征兆和病症的基本病状。
本发明其它实施方案涉及噁病质和肌肉萎缩的疾病。在使网织红细胞成熟和使成纤维细胞生长中蛋白体降解多种蛋白。在失去胰岛素的细胞或血清中蛋白酶解速率提高将近一倍。
抑制蛋白体可以减少蛋白酶解，进而减少肌肉蛋白损失和肾或肝上氮负荷。蛋白体抑制剂被用来治疗癌症，慢性传染病，发烧，肌肉废用(萎缩)和去神经，神经损伤，禁食，与酸中毒有关的肾衰竭和肝衰竭等病症。参见Goldberg的美国专利5,340,736(1994)。
因此，本发明实施方案包括降低细胞内肌肉蛋白的降解速率和降低细胞内蛋白的降解速率的方法。每种方法都包括使细胞(体内或体外，例如，患者的肌肉)与有效量的本发明公开结构式的化合物(例如，药物组合物)接触的步骤。
蛋白体抑制剂阻断遍在化的NF-κB在体外和体内的加工。蛋白体抑制剂还阻断IκB-α的降解和NF-κB的活化(Palombella等人；及Traenckner等人，EMBO J.，13：5433-5441(1994))。本发明的一个实施方案是抑制IκB-α降解的方法，包括使细胞与本文所述结构式的化合物接触。本发明的另一个实施方案是降低NF-κB在细胞、肌肉、器官或受试对象中的细胞含量的方法，包括使细胞、肌肉、器官或受试对象与本文所述结构式的化合物接触。另一些实施方案包括通过本文所述结构式的化合物给药治疗与变态反应，骨髓或实体器官移植，或疾病状态有关的炎症反应的方法，所说炎症包括(但不限于)关节炎，肠炎，哮喘和多发性硬化。本发明一个优选实施方案涉及通过式VI或式VII化合物，最优选化合物3b给药，治疗哮喘。
蛋白体抑制剂还可用于治疗局部缺血或再灌注损伤，特别是在血管闭塞之后，如中风或心脏病发作期间发生的血管闭塞之后，防止梗塞或减小梗塞尺寸，正如在下列文献中所述的那样：Brand，美国专利申请号＿＿＿＿(ProScript Docket No.102.603.173)，申请日1998年2月17日；美国专利申请号08/988,339，申请日1997年12月3日；及美国专利申请号08/801,936，申请日1998年2月15日。蛋白体抑制剂还阻断protazoan寄生虫的依赖蛋白体的转化(Gonzalez等人，《实验医学杂志》(J.Exp.Med.)，184：1909(1996))。因此，本发明其它的实施方案包括通过这里公开的化合物给药治疗梗塞或protazoan寄生虫病的方法。本发明优选方面是在血管闭塞之后式VI或式VII化合物给药可防止梗塞或减小梗塞尺寸。为了治疗或减少局部缺血发作之后的神经元损失，可在发生中风之后约0-10小时进行所说化合物的给药。化合物3b是本发明这一方面最优选的化合物。
蛋白体抑制剂还阻断细胞周期调节蛋白，如细胞周期蛋白和依赖细胞周期蛋白的激酶抑制剂，及肿瘤抑制蛋白如p53的降解。因此，本发明另一些实施方案包括用本文所述结构式的化合物阻断细胞周期和治疗细胞增生疾病如癌症，牛皮癣和再狭窄的方法。
术语“抑制剂”用来描述阻断或降低酶(例如，蛋白体，或20S蛋白体的X/MB1亚基)活性的化合物。抑制剂可以发挥竞争性、无竞争性或非竞争性抑制作用。抑制剂可以可逆或不可逆地结合。因此，该术语包括是酶的自杀底物的化合物。抑制剂可以修饰酶活性部位上或附近的一或多个位点，或者引起酶的其他部分的构象变化。
临床领域的普通技术人员可以很容易地确定本发明蛋白体抑制剂和组合物的给药量和给药方案。一般，本发明组合物的剂量要根据以下因素进行变化：所用组合物的类型；年龄；健康状况；所要治疗的病情；如果有的话，同时进行的治疗的种类，治疗频率和所要达到效果的本质；组织破坏的程度；性别；症状持续的时间；如果有的话，相反的疗法，及将由各个医生调节的其它变量。所需要的剂量可以一次或分几次给药以获得所需要的效果。含有本发明蛋白体抑制剂的药物组合物可以为单位剂量形式。
属于本发明范围的组合物包括含有能够达到其预期目的的有效量的本发明化合物的所有组合物。尽管个别因素需要改变，但每种成分的有效用量的最佳范围可以由本领域技术人员确定。通常，给哺乳动物如人施用的化合物，每日口服剂量为0.0025-50mg/kg(体重)或等同量的其可药用盐，这是给需要进行蛋白体介导的疾病如中风或哮喘治疗的哺乳动物的用药量。对于肌肉内注射，剂量通常大约为口服剂量的一半。
在防止梗塞或减小梗塞尺寸的方法中本化合物可以通过静脉内注射给药，给药剂量约为0.01-10mg/kg，优选约0.025-1mg/kg。
口服单剂可以含有约0.01-50mg，优选约0.1-10mg化合物。单剂可以每日给药一次或多次，每次服用一片或多片含有约0.1-10mg，通常为约0.25-50mg化合物或其溶剂化物的片剂。对于中风治疗，优选单剂给药，在事件发生后约0-10小时，优选约0-6小时进行给药。
下列实施例将说明而非限制本发明的方法和组合物。对一般所遇到的和对于本领域技术人员来说是显而易见的条件和参数多样化的其它适当的改变和适应的均属于本发明的精神和范围。
流程2中所述的制备甲酰基甲酰胺XIV的合成方法由实施例1-6加以说明。实施例1 酰基噁唑烷酮(IX)a.酰基噁唑烷酮IXb(R2＝n-Pr；R8＝CH2Ph)
用2.5M n-BuLi的己烷(9.1ml，22.6mmol)溶液处理冷(-78℃)(S)-(-)-4-苄基-2-噁唑烷酮(4.0g，22.6mmol)的75ml无水THF溶液15分钟。5分钟后，将纯净的戊酰氯(2.95ml，24.9mmol)滴加到混合物中并将混合物在-78℃搅拌45分钟。让混合物升至室温，再搅拌90分钟，然后用50ml饱和NH4Cl溶液处理。加入二氯甲烷(50ml)，用盐水洗涤有机相(2×30ml)，MgSO4干燥，真空浓缩，得到5.94g(100％)所要的酰基噁唑烷酮IXb为清澈的无色油。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.36-7.20(m，5H)，4.71-4.64(m，1H)，4.23-4.14(m，1H)，3.40(dd，J＝13.3，3.2Hz，1H)，3.04-2.84(m，2H)，2.77(dd，J＝13.3，9.6Hz，1H)，1.74-1.63(m，2H)，1.46-1.38(m，2H)，0.96(t，J＝7.3Hz，3H).b.酰基噁唑烷酮IXa(R2＝Et；R8＝CH2Ph)
用类似于制备酰基噁唑烷酮IXb的方法，用丁酰氯处理(S)-(-)-4-苄基-2-噁唑烷酮的锂阴离子，以94％产率得到酰基噁唑烷酮IXa。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.37-7.20(m，5H)，4.68(ddd，J＝13.1，7.0，3.4Hz，1H)，4.23-4.13(m，2H)，3.30(dd，J＝13.3，9.6Hz，1H)，3.02-2.82(m，2H)，2.77(dd，J＝13.3，9.6Hz，1H)，1.73(q，J＝7.3Hz，2H)，1.01(t，J＝7.3Hz，3H).c.酰基噁唑烷酮IXc(R2＝n-Bu；R8＝CH2Ph)
用类似于制备酰基噁唑烷酮IXb的方法，用己酰氯处理(S)-(-)-4-苄基-2-噁唑烷酮的锂阴离子，以96％产率得到酰基噁唑烷酮IXc。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ
7.36-7.20(m，5H)，4.68(m，1H)，4.23-4.14(m，2H)，3.30(dd，J＝13.3，3.3Hz，
1H)，3.02-2.83(m，2H)，2.76(dd，J＝13.3，9.6Hz，1H)，1.70(m，2H)，1.43-1.34
(m，4H)，0.92(t，J＝3.3Hz，3H).d.酰基噁唑烷酮IXd(R2＝i-Bu；R8＝CH2Ph)
i.4-甲基戊酰氯
按下列步骤用商品4-甲基戊酸制备4-甲基戊酰氯：用1.95μl草酰氯(22.5mmol)处理含10ml DMF的冷(0℃)4-甲基戊酸(1.85ml，15.0mmol)的50ml无水CH2Cl2溶液。将混合物在室温下搅拌3小时，然后真空浓缩，过滤，得到1.65g(100％)所要的酰氯为无色液体。
ii.酰基噁唑烷酮IXd(R2＝i-Bu；R8＝CH2Ph)
用类似于制备酰基噁唑烷酮IXb的方法，用4-甲基戊酰氯处理(S)-(-)-4-苄基-2-噁唑烷酮的锂阴离子，以85％产率得到酰基噁唑烷酮IXd。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.37-7.20(m，5H)，4.70-4.63(m，1H)，4.23-4.15(m，2H)，3.30(dd，J＝13.2，3.2Hz，1H)，2.98-2.90(m，2H)，2.76(dd，J＝13.3，9.6Hz，1H)，1.68-1.54(m，3H)，0.94(d，J＝6.2Hz，3H).e.酰基噁唑烷酮IXe(R2＝CH2Ph；R8＝CH2Ph)
用类似于制备酰基噁唑烷酮IXb的方法，用氢化肉桂酰氯处理(S)-(-)-4-苄基-2-噁唑烷酮的锂阴离子，以82％产率得到酰基噁唑烷酮IXe。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.35-7.16(m，10H)，4.70-4.63(m，1H)，4.21-4.14(m，2H)，3.38-3.19(m，3H)，3.08-2.98(m，2H)，2.75(dd，J＝13.4，9.5Hz，1H).实施例2 酰基噁唑烷酮(X)a.酰基噁唑烷酮Xb(R2＝n-Pr；R8＝CH2Ph)
用2.52ml TiCl4(23.1mmol)处理冷(0℃)酰基噁唑烷酮IXb(5.74g，22.0mmol)的110ml无水CH2Cl2溶液，形成丰富的沉淀。5分钟后，慢慢加入二异丙基乙胺(4.22ml，24.2mmol)，然后将所得深棕色溶液在室温下搅拌35分钟。迅速加入苄基氯甲基醚(6.0ml，44.0mmol)，然后将混合物在室温下搅拌5小时。加入50ml CH2Cl2溶液和75ml 10％NH4Cl水溶液，形成黄色胶状物质。剧烈搅拌该悬浮液10分钟后，将上清液转移到一个分液漏斗中，然后将胶状剩余物溶解在100ml 1∶1 10％NH4Cl水溶液/CH2Cl2中。合并有机相，依次用1N HCl水溶液，饱和NaHCO3和盐水洗涤，MgSO4干燥，真空浓缩。将粗固体产物从EtOAc/己烷重结晶，得到6.80g(81％)所要的酰基噁唑烷酮Xb为白色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.34-7.18(m，10H)，4.77-4.69(m，1H)，4.55(s，2H)，4.32-4.23(m，1H)，4.21-4.10(m，2H)，3.80(t，J＝9.0Hz，1H)，3.65(dd，J＝9.0，5.0Hz，1H)，3.23(dd，J＝13.5，3.3Hz，1H)，2.69(dd，J＝13.5，9.3Hz，1H)，1.74-1.64(m，1H)，1.54-1.44(m，1H)，1.40-1.28(m，2H)，0.91(t，J＝7.3Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 382(M+H+)b.酰基噁唑烷酮Xa(R2＝Et；R8＝CH2Ph)
用类似于制备酰基噁唑烷酮Xb的方法，以80％产率得到酰基噁唑烷酮Xa。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.36-7.18(m，10H)，4.55(s，2H)，4.21-4.11(m，3H)，3.81(t，J＝9.0Hz，1H)，3.66(dd，J＝9.0，5.0Hz，1H)，3.23(dd，J＝13.5，3.2Hz，1H)，2.70(dd，J＝13.5，9.3Hz，1H)，1.78-1.57(m，2H)，0.94(t，J＝7.5Hz，3H).c.酰基噁唑烷酮Xc(R2＝n-Bu；R8＝CH2Ph)
用类似于制备酰基噁唑烷酮Xb的方法，以91％产率得到酰基噁唑烷酮Xc。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ
7.38-7.17(m，10H)，4.72(m，1H)，4.54(s，2H)，4.27-4.10(m，2H)，3.79(t，J＝8.7Hz，1H)，3.65(dd，J＝9.1，5.0Hz，1H)，3.23(dd，J＝13.5，3.3Hz，1H)，2.68(dd，J＝13.5，9.3Hz，1H)，1.75-1.68(m，1H)，1.31-1.26(m，4H)，0.87(t，J＝6.8Hz，3H).d.酰基噁唑烷酮Xd(R2＝i-Bu；R8＝CH2Ph)
用类似于制备酰基噁唑烷酮Xb的方法，以98％产率得到酰基噁唑烷酮Xd。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.38-7.17(m，10H)，4.75-4.67(m，1H)，4.57(d，J＝12.0Hz，1H)，4.51(d，J＝12.0Hz，1H)，4.41-4.36(m，1H)，4.20-4.09(m，2H)，3.74(t，J＝9.0Hz，1H)，3.65(dd，J＝9.0，5.1Hz，1H)，3.23(dd，J＝13.5，3.2Hz，1H)，2.63(dd，J＝13.5，9.5Hz，1H)，1.74-1.52(m，2H)，1.35(dd，J＝13.1，6.1Hz，1H)，0.92(d，J＝2.9Hz，3H)，0.90(d，J＝2.9Hz，3H).e.酰基噁唑烷酮Xe(R2＝CH2Ph；R8＝CH2Ph)
用类似于制备酰基噁唑烷酮Xb的方法，以84％产率得到酰基噁唑烷酮Xe。1H NMR(300MHz，CDC13)δ7.38-7.15(m，15H)，4.62-4.50(m，4H)，4.03(dd，J＝9.0，2.7Hz，1H)，3.93-3.82(m，2H)，3.66(dd，J＝9.2，4.8Hz，1H)，3.19(dd，J＝13.5，3.2 Hz，1H)，2.98(dd，J＝13.4，8.2Hz，1H)，2.88(dd，J＝13.4，7.3Hz，1H)，2.68(dd，J＝13.5，9.3Hz，1H).实施例3 羧酸(XI)a.羧酸XIb(R2＝n-Pr)
依次用6.95ml 35％H2O2水溶液和氢氧化锂一水合物(1.46g，34.6mmol)的20ml H2O溶液处理冷(0℃)酰基噁唑烷酮Xb(6.60g，17.3mmol)的320ml THF/H2O溶液。将混合物在0℃搅拌16小时，先用Na2SO3(10.5g)的55ml H2O溶液，再用NaHCO3(4.35g)的100ml H2O溶液细心处理。将混合物在室温下搅拌30分钟，然后真空浓缩除去THF。用CH2Cl2(4×75ml)洗涤所得水性混合物，冷却到0℃，用6N HCl水溶液酸化，再用CH2Cl2萃取(1×200ml和3×100ml)。合并有机相，MgSO4干燥，真空浓缩，得到3.47g(90％)所要的酸XIb为清澈的无色油。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.38-7.26(m，5H)，4.55(s，2H)，3.67(m，1H)，3.57(dd，J＝9.2，5.2Hz，1H)，2.75(m，1H)，1.72-1.31(m，4H)，0.93(t，J＝7.2Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 223(M+H+)b.羧酸XIa(R2＝Et)
用类似于制备酰基噁唑烷酮XIb的方法，以48％产率得到酰基噁唑烷酮XIa。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.36-7.27(m，5H)，4.55(s，2H)，3.68(dd，J＝9.2，7.9Hz，1H)，3.59(dd，J＝9.2，5.4Hz，1H)，2.68-2.65(m，1H)，1.71-1.62(m，2H)，0.97(t，J＝7.5Hz，3H).c.羧酸XIc(R2＝n-Bu)
用类似于制备酰基噁唑烷酮XIb的方法，以96％产率得到酰基噁唑烷酮XIc。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.37-7.28(m，5H)，4.55(s，2H)，3.67(dd，J＝9.1，8.1Hz，1H)，3.57(dd，J＝9.2，5.3Hz，1H)，2.72(m，1H)，1.67-1.51(m，2H)，1.36-1.27(m，4H)，0.89(t，J＝6.9Hz，3H).d.羧酸XId(R2＝i-Bu)
用类似于制备酰基噁唑烷酮XIb的方法，以80％产率得到酰基噁唑烷酮XId。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.37-7.28(m，5H)，4.55(s，2H)，3.64(t，J＝9.1Hz，1H)，3.54(dd，J＝9.1，5.1Hz，1H)，2.81(m，1H)，1.68-1.54(m，2H)，1.36-1.27(m，1H)，0.92(d，J＝4.9Hz，3H)，0.90(d，J＝4.9Hz，3H).e.羧酸XIe(R2＝CH2Ph)
用类似于制备酰基噁唑烷酮XIb的方法，以92％产率得到酰基噁唑烷酮XIe。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.38-7.16(m，10H)，4.53(d，J＝12.1Hz，1H)，4.50(d，J＝12.1Hz，1H)，3.68-3.57(m，2H)，3.09-2.85(m，3H).实施例4 二乙基酰胺(XII)a.二乙基酰胺XIIb(R2＝n-Pr；R5＝R6＝Et)
在1.5小时内用二异丙基乙胺(6.7ml，38.2mmol)处理(注射泵)含有二乙胺(2.36ml，23.0mmol)和四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓(TBTU，5.89g，18.4mmol)的羧酸XIb(3.40g，15.3mmol)的1∶1 MeCN/CH2Cl2(150ml)冷(0℃)溶液。将混合物真空浓缩，然后在乙醚(200ml)和H2O(100ml)之间分配。水相用乙醚萃取(2×100ml)，合并的有机相依次用1N HCl水溶液(3×50ml)，饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，MgSO4干燥并真空浓缩。色谱纯化(230-400目SiO2，用1∶3AcOEt/己烷洗脱)，得到4.24g(97％)所要的二乙基酰胺XIIb为清澈的无色油。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.35-7.23(m，5H)，4.52(d，J＝12.0Hz，1H)，4.44(d，J＝12.0Hz，1H)，3.67(t，J＝8.6Hz，1H)，3.51(dd，J＝8.7，5.5Hz，1H)，3.46-3.27(m，4H)，2.96(m，1H)，1.67-1.57(m，1H)，1.48-1.22(m，4H)，1.20-1.10(m，6H)，0.90(t，J＝7.2Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 278(M+H+)b.二乙基酰胺XIIa(R2＝Et；R5＝R6＝Et)
用类似于制备二乙基酰胺XIIb的方法，以73％产率得到二乙基酰胺XIIa。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.33-7.26(m，5H)，4.52(d，J＝12.0Hz，1H)，4.44(d，J＝12.0Hz，1H)，3.68(t，J＝8.6Hz，1H)，3.53-3.33(m，5H)，2.90(m，1H)，1.75-1.50(m，2H)，1.18(t，J＝7.1Hz，3H)，1.13(t，J＝7.1Hz，3H)，0.89(t，J＝7.4Hz，3H).c.二乙基酰胺XIIc(R2＝n-Bu；R5＝R6＝Et)
用类似于制备二乙基酰胺XIIb的方法，以94％产率得到二乙基酰胺XIIc。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.35-7.25(m，5H)，4.51(d，J＝12.0Hz，1H)，4.44(d，J＝12.0Hz，1H)，3.67(t，J＝8.6Hz，1H)，3.51(dd，J＝8.8，5.5Hz，1H)，3.46-3.29(m，1H)，2.94(m，1H)，1.66-1.62(m，2H)，1.33-1.10(m，9H)，0.85(t，J＝7.0Hz，3H).d.二乙基酰胺XIId(R2＝i-Bu；R5＝R6＝Et)
用类似于制备二乙基酰胺XIIb的方法，以95％产率得到二乙基酰胺XIId。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.35-7.23(m，5H)，4.51(d，J＝12.0Hz，1H)，4.44(d，J＝12.0Hz，1H)，3.65(t，J＝8.7Hz，1H)，3.54-3.28(m，5H)，3.03(m，1H)，1.63-1.49(m，2H)，1.33-1.24(m，1H)，1.18(t，J＝7.1Hz，3H)，1.12(t，J＝7.1Hz，3H)，0.90(t，J＝6.4Hz，3H).e.二乙基酰胺XIIe(R2＝CH2Ph；R5＝R6＝Et)
用类似于制备二乙基酰胺XIIb的方法，以89％产率得到二乙基酰胺XIIe。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.35-7.16(m，10H)，4.53(d，J＝12.1Hz，1H)，4.47(d，J＝12.1Hz，1H)，3.77(t，J＝8.5 Hz，1H)，3.59(dd，J＝8.8，5.7Hz，1H)，3.40(m，1H)，3.22-2.89(m，5H)，2.79(dd，J＝13.0，5.1Hz，3H)，1.01(t，J＝7.1Hz，3H)，0.85(t，J＝7.2Hz，3H).实施例5 醇(XIII)a.醇XIIIb(R2＝n-Pr；R5＝R6＝Et)
向二乙基酰胺XIIb(4.08g，14.7mmol)的140ml MeOH溶液中加入20％Pd(OH)2/C(400mg)，然后将悬浮液在大气压和室温下氢化15小时。滤掉催化剂，真空浓缩滤液，得到2.84g(100％)所要的伯醇XIIIb。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ3.74(br.d，J＝4.2Hz，1H)，3.61-3.15(m，5H)，2.71(m，1H)，1.69-1.24(m，4H)，1.20(t，J＝7.1Hz，3H)，1.12(t，J＝7.1Hz，3H)，0.92(t，J＝7.2Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 188(M+H+).b.醇XIIIa(R2＝Et；R5＝R6＝Et)
用类似于制备醇XIIIb的方法，以100％产率得到醇XIIIa。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.76(m，2H)，3.58-3.19(m，4H)，2.64(m，1H)，1.71-1.65(m，2H)，1.21(t，J＝7.1Hz，3H)，1.13(t，J＝7.1Hz，3H)，0.96(t，J＝7.4Hz，3H).c.醇XIIIc(R2＝n-Bu；R5＝R6＝Et)
用类似于制备醇XIIIb的方法，以100％产率得到醇XIIIc。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.76(d，J＝4.5Hz，2H)，3.58-3.19(m，4H)，2.72-2.65(m，2H)，1.68-1.55(m，2H)，1.40-1.24(m，4H)，1.20(t，J＝7.1Hz，3H)，1.12(t，J＝7.1Hz，3H)，0.90(t，J＝6.9Hz，3H).d.醇XIIId(R2＝i-Bu；R5＝R6＝Et)
用类似于制备醇XIIIb的方法，以100％产率得到醇XIIId。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.78-3.68(m，2H)，3.57-3.15(m，4H)，2.81-2.73(m，1H)，1.70-1.60(m，2H)，1.40-1.28(m，1H)，1.21(t，J＝7.1Hz，3H)，1.12(t，J＝7.1Hz，3H)，0.92(m，6H).e.醇XIIIe(R2＝CH2Ph；R5＝R6＝Et)
用类似于制备醇XIIIb的方法，以100％产率得到醇XIIIe。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.29-7.16(m，5H)，3.81-3.71(m，2H)，3.61-3.50(m，1H)，3.15-2.87(m，6H)，1.05(t，J＝7.1Hz，3H)，0.98(t，J＝7.1Hz，3H).实施例6 醛(XIV)a.醛XIVb(R2＝n-Pr；R5＝R6＝Et)
向醇XIIIb(2.34g，12.7mmol)的湿CH2Cl2(125ml，将CH2Cl2与水一起搅拌，然后分离有机相制成)溶液中加入Dess-Martin全碘烷(8.06g，19.0mmol)。将混合物在室温下搅拌40分钟，然后倒入含有5.2g NaHCO3的5％Na2S2O3水溶液(250ml)和乙醚(200ml)的混合物中。将两相混合物剧烈搅拌5分钟，水相用15％CH2Cl2/Et2O萃取(2×100ml)。合并的有机相先后用H2O(3×75ml)和盐水洗涤，MgSO4干燥，过滤然后真空浓缩，得到2.06g(88％)所要的醛XIVb为清澈的无色油。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.60(d，J＝3.5Hz，1H)，3.49-3.30(m，5H)，1.96-1.85(m，2H)，1.39-1.31(m，2H)，1.19(t，J＝7.1Hz，3H)，1.13(t，J＝7.1Hz，3H)，0.95(t，J＝7.3Hz，3H).b.醛XIVb(R2＝n-Pr；R5＝R6＝Et)
向粗醇XIIIb(1.25g，6.68mmol)的甲苯(20ml)，乙酸乙酯(20ml)和水(3ml)的混合物溶液中加入2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基(TEMPO)，自由基(9mg)。将混合物冷却到0℃，然后用30分钟时间分批加入通过在含有1.6g NaHCO3的20ml水溶液中加入4.3ml次氯酸钠水溶液(10-13％可利用的氯)制成的次氯酸钠溶液。加入溴化钠(660mg)，溶液变成淡橙色。几分钟之内反应混合物的颜色变回到米色。再分几批加入次氯酸钠(4.7ml)促使反应完成。分离出水相，用甲苯(20ml)和乙酸乙酯(2×20ml)萃取。合并的有机萃取液用KI(70mg)的10％KHSO4水溶液洗涤。然后，有机相用5％的Na2S2O3和pH7的磷酸盐缓冲液洗涤，Na2SO4干燥，浓缩得到XIVb为淡黄色油(1.1g)。该化合物的波谱数据与上面实施例6a产物的波谱数据相符。c.醛XIVa(R2＝Et；R5＝R6＝Et)
用类似于制备醇XIVb的方法，以80％产率得到醛XIVa。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.61(d，J＝3.6Hz，1H)，3.48-3.29(m，5H)，2.02-1.90(m，2H)，1.19(t，J＝7.1Hz，3H)，1.14(t，J＝7.1Hz，3H)，0.96(t，J＝7.4Hz，3H).d.醛XIVc(R2＝n-Bu；R5＝R6＝Et)
用类似于制备醇XIVb的方法，以98％产率得到醛XIVc。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ9.59(d，J＝3.6Hz，1H)，3.48-3.29(m，5H)，1.97-1.87(m，2H)，1.39-1.22(m，4H)，1.18(t，J＝7.2Hz，3H)，1.13(t，J＝7.2Hz，3H)，0.90(t，J＝7.0Hz，3H).e.醛XIVd(R2＝i-Bu；R5＝R6＝Et)
用类似于制备醇XIVb的方法，以96％产率得到醛XIVd。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.57(d，J＝3.7Hz，1H)，3.51-3.27(m，5H)，1.83(t，J＝7.1Hz，3H)，1.66-1.55(m，1H)，1.20(t，J＝7.1Hz，3H)，1.13(t，J＝7.1Hz，3H)，0.93(d，J＝6.6Hz，6H).f.醛XIVe(R2＝CH2Ph；R5＝R6＝Et)
用类似于制备醇XIVb的方法，以97％产率得到醛XIVe。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ9.69(d，J＝2.9Hz，1H)，7.29-7.16(m，5H)，3.65(m，1H)，3.53-3.42(m，1H)，3.30(dd，J＝13.5，9.3Hz，1H)，3.23-3.13(m，2H)，3.06-2.91(m，2H)，1.04(t，J＝7.1Hz，3H)，0.93(t，J＝7.1Hz，3H).
流程1概括的制备裂-乳胱氨酸-β-内酯及其类似物的合成方法由实施例7-9加以说明。实施例7 醛醇加合物(II)a.醛醇加合物IIb(R2＝n-Pr；R1＝i-Pr；R3＝Me；R4＝Ph；R5＝R6＝Et)
向反-噁唑啉Ia(R1＝i-Pr；R4＝Ph)的乙醚(35ml)冷(-78℃)溶液中加入双(三甲基甲硅烷基)氨基化锂(2.17ml的1M己烷溶液，2.17mmol)。30分钟后，滴加氯化二甲基铝(4.55ml，4.55mmol)的1M己烷溶液处理所得橙色溶液，在冷却到-85℃(将液氮加到干冰/丙酮浴中)之前将混合物再搅拌60分钟。然后用10分钟把醛XIVb(420mg，2.27mmol)的乙醚(4ml)溶液沿着烧瓶壁加到混合物中。允许用2.5小时时间将混合物升温至-40℃，然后通过加入35ml饱和NH4Cl水溶液和25ml AcOEt淬灭反应。加入足够的2N HCl(约加入15ml)直到得到两个清楚的相。水相用AcOEt萃取(2×20ml)，合并的有机相依次用0.5N HCl水溶液(20ml)，H2O(20ml)，0.5M NaHSO3水溶液(2×15ml)，饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，Na2SO4干燥，然后真空浓缩，得到879mg(＞100％)粗醛醇产物IIb，其纯度足以直接用于下步反应。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.02-7.97 and 7.53-7.39(m，5H)，6.58(d，J＝9.9Hz，1H)，4.82(d，J＝2.4Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.69-3.61(m，2H)，3.49-3.39(m，2H)，3.24-3.16(m，1H)，3.05(m，1H)，2.89(m，1H)，2.28-2.23(m，1H)，1.98-1.91(m，1H)，1.37-1.20(m，6H)，1.19-1.06(m，6H)，0.87(t，J＝7.1Hz，3H)，0.70(d，J＝6.7Hz，3H).
还可以用与上述方法类似的方法，但用顺-噁唑啉Ib(见下文)代替反噁唑啉Ia，以100％产率得到醛醇产物IIb。b.醛醇加合物IIb(R2＝n-Pr；R1＝i-Pr；R3＝Me；R4＝Ph；R5＝R6＝Et)
向反噁唑啉Ia(R1＝i-Pr；R4＝Ph)(20.74g)的THF(280ml)冷(-78℃)溶液中加入双(三甲基甲硅烷基)氨基化锂(92.4ml的1M己烷溶液)。30分钟后，滴加氯化二甲基铝的1M己烷(202ml)溶液处理所得橙色溶液，在冷却到-85℃(将液氮加到干冰/丙酮浴中)之前将混合物再搅拌40分钟。用45分钟加入醛XIVb(19.43g)的THF(50ml)溶液。允许用40分钟时间将混合物升温至-50℃，再用25分钟升温至-20℃。再次将黄色反应混合物冷却到-78℃，然后小心加入40ml饱和NH4Cl水溶液淬灭反应。将反应混合物慢慢倒入460ml饱和NH4Cl水溶液。加入500ml AcOEt并在充分搅拌下，用6N HCl酸化反应混合物，得到两个清楚的相。水相用AcOEt萃取(2×200ml)，合并的有机相依次用H2O(2×200ml)，饱和NaHCO3水溶液(2×200ml)和盐水(2×300ml)洗涤。有机萃取液用Na2SO4和MgSO4干燥，然后真空浓缩，得到41.55g粗醛醇产物IIb，其纯度足以直接用于下步反应。该化合物的波谱数据与上面实施例7a产物的波谱数据相符。c.醛醇加合物IIa(R2＝Et；R1＝i-Pr；R3＝Me；R4＝Ph；R5＝R6＝Et)
用类似于制备醛醇加合物IIb的方法，依次用氯化二甲基铝和醛XIVa处理反噁唑啉Ia(R1＝i-Pr；R4＝Ph)的锂阴离子，以95％产率得到醛醇加合物IIa。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.00-7.97和7.51-7.39(m，5H)，6.50(d，J＝9.9Hz，1H)，4.80(d，J＝2.4Hz，1H)，3.81-3.64(m，2H)，3.74(s，3H)，3.45(m，2H)，3.19(m，2H)，2.93-2.84(m，2H)，2.24(m，1H)，1.89(m，1H)，1.73-1.64(m，4H)，1.29(t，J＝7.2Hz，3H)，1.12(d，J＝6.9Hz，3H)，1.07(d，J＝7.2Hz，3H)，0.70(d，J＝6.7Hz，3H).d.醛醇加合物IIc(R2＝n-Bu；R1＝i-Pr；R3＝Me；R4＝Ph；R5＝R6＝Et)
用类似于制备醛醇加合物IIb的方法，依次用氯化二甲基铝和醛XIVc处理反-噁唑啉Ia(R1＝i-Pr；R4＝Ph)的锂阴离子，以100％产率得到醛醇加合物IIc。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.02-7.98和7.53-7.33(m，5H)，6.57(d，J＝10.0Hz，1H)，4.81(d，J＝2.3Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.68-3.60(m，2H)，3.49-3.17(m，2H)，3.00(m，1H)，2.90(m，1H)，1.98-1.87(m，2H)，1.38-0.83(m，16H)，0.70(d，J＝6.7Hz，3H).e.醛醇加合物IId(R2＝i-Bu；R1＝i-Pr；R3＝Me；R4＝Ph；R5＝R6＝Et)
用类似于制备醛醇加合物IIb的方法，依次用氯化二甲基铝和醛XIVd处理反噁唑啉Ia(R1＝i-Pr；R4＝Ph)的锂阴离子，以100％产率得到醛醇加合物IId。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.01-7.80和7.55-7.20(m，5H)，4.87(d，J＝2.3Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.69-3.58(m，2H)，3.51-3.32(m，2H)，2.98-2.87(m，1H)，2.33-2.24(m，1H)，2.12-2.02(m，1H)，1.83(t，J＝7.1Hz，1H)，1.35(t，J＝7.1Hz，3H)，1.25-1.05(m，5H)，0.93(d，J＝6.6Hz，3H)，0.89(d，J＝6.5Hz，3H)，0.80(d，J＝6.5Hz，3H)，0.69(d，J＝6.7Hz，3H).f.醛醇加合物IIe(R2＝CH2Ph；R1＝i-Pr；R3＝Me；R4＝Ph；R5＝R6＝Et)
用类似于制备醛醇加合物IIb的方法，依次用氯化二甲基铝和醛XIVe处理反-噁唑啉Ia(R1＝i-Pr；R4＝Ph)的锂阴离子，以100％产率得到醛醇加合物IIe。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.01-7.93和7.54-7.10(m，10H)，4.71(d，J＝2.5Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.68-3.58(m，2H)，3.48-2.79(m，6H)，2.17(m，1H)，1.12-0.91(m，9H)，0.68(d，J＝6.7Hz，3H).实施例8 γ-内酰胺(IV)a.γ-内酰胺IVb(R2＝n-Pr；R1＝i-Pr；R3＝Me)
在醛醇加合物IIb(4.72g，10.9mmol)的100ml 1∶9 AcOH/MeOH溶液中加入4.8g 20％Pd(OH)2/C，然后在55psi的H2中剧烈摇动60小时。过滤前将混合物降到常温，然后真空浓缩。将所得固体用快速色谱纯化(SiO2，用1％AcOH的1∶1 AcOEt/己烷洗脱)，得到2.23g(75％)所要γ-内酰胺IVb为白色固体。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.89(br.s，1H)，4.77(br.d，J＝11.5Hz，1H)，4.47(dd，J＝11.5，5.6Hz，1H)，4.08(dd，J＝9.4，5.0Hz，1H)，3.83(s，3H)，2.93(m，1H)，1.78-1.39(m，6H)，1.02-0.88(m，9H).b.γ-内酰胺IVa(R2＝Et；R1＝i-Pr；R3＝Me)
用类似于制备γ-内酰胺IVb的方法，在55psi下氢化醛醇加合物IIa 48小时，以72％产率得到γ-内酰胺IVa。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.79(br.s，1H)，4.62(br.d，J＝11.2Hz，1H)，4.51(dd，J＝11.2，5.4Hz，1H)，3.83(s，3H)，2.85(m，1H)，1.77-1.64(m，3H)，1.01(t，J＝7.4Hz，3H)，0.98(d，J＝6.9Hz，3H)，0.95(d，J＝6.9Hz，3H).c.γ-内酰胺IVc(R2＝n-Bu；R1＝i-Pr；R3＝Me)
在醛醇加合物IIc(361mg，0.80mmol)的6ml 1∶9 AcOH/MeOH溶液中加入250mg 20％Pd(OH)2/C，然后在50psi的H2中剧烈摇动24小时。再加入100mg催化剂，并将混合物在50psi的H2中再摇动24小时。在此之后将混合物降到常温，然后过滤。将滤液加热回流30分钟，冷却到室温，然后真空浓缩。将所得固体与甲苯共蒸发一次，用快速色谱纯化(SiO2，用4％MeOH/CHCl3洗脱)，得到140mg(61％)所要的γ-内酰胺IVc为白色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.02(br.s，1H)，4.93(br.d，J＝11.3Hz，1H)，4.46(dd，J＝11.3，5.5Hz，1H)，4.15-4.08(m，1H)，3.83(s，3H)，2.94-2.87(m，1H)，1.80-1.34(m，6H)，0.94(d，J＝6.9Hz，3H)，0.89(t，J＝7.2Hz，3H).d.γ-内酰胺IVd(R2＝i-Bu；R1＝i-Pr；R3＝Me)
用类似于制备γ-内酰胺IVc的方法，在50psi下氢化醛醇加合物IId 40小时并加热回流30分钟，以61％产率得到γ-内酰胺IVd。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.92(br.s，1H)，4.81(br.d，J＝11.5Hz，1H)，4.46(m，1H)，4.09(m，1H)，3.83(s，3H)，3.04-2.98(m，1H)，1.78-1.73(m，2H)，1.66-1.47(m，3H)，1.00-0.90(m，12H).e.γ-内酰胺IVe(R2＝CH2Ph；R1＝i-Pr；R3＝Me)
用类似于制备γ-内酰胺IVc的方法，在50psi下氢化醛醇加合物IIe 24小时并加热回流30分钟，以71％产率得到γ-内酰胺IVe。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.01(br.s，1H)，7.35-7.15(m，5H)，5.02(br.d，J＝11.7Hz，1H)，4.40-4.34(m，1H)，4.06-4.01(m，1H)，3.84(s，3H)，3.34-3.27(m，1H)，3.10-3.04(m，2H)，1.84-1.72(m，1H)，0.98(d，J＝6.7Hz，3H)，0.93(d，J＝6.9Hz，3H).实施例9 β-内酯(VII)a.β-内酯VIIb(R2＝n-Pr；R1＝i-Pr)
在γ-内酰胺IVb(2.20g，8.06mmol)的100ml EtOH冷(0℃)溶液中加入0.1N NaOH水溶液(100ml，10.0mmol)。将混合物在室温下搅拌15小时，然后加入H2O(50ml)和AcOEt(100ml)。水相用AcOEt(2×50ml)洗涤，6N HCl水溶液酸化，真空浓缩至约60ml体积。冷冻该溶液并冻干。将所得固体悬浮于THF，滤掉氯化钠，然后真空浓缩，得到2.05g(98％)所要的二羟酸为白色固体。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.42(d，J＝5.8Hz，1H)，3.90(d，J＝6.5Hz，1H)，2.84(m，1H)，1.70-1.24(m，6H)，0.95-0.84(m，9H).
在二羟基酸(1.90g，7.33mmol)的无水THF(36ml)溶液中加入四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓(TBTU，2.59g，8.06mmol)的无水MeCN(36ml)溶液，然后加入三乙胺(0.72ml，22.0mmol)。室温下搅拌70分钟后，加入一些甲苯，将混合物真空浓缩，再与甲苯共蒸发两次。快速色谱纯化(SiO2，用2∶3 AcOEt/己烷洗脱)，得到1.44g(81％)所要的β-内酯VIIb为白色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.07(br.s，1H)，5.26(d，J＝6.1Hz，1H)，3.97(dd，J＝6.4，4.4Hz，1H)，2.70-2.63(m，1H)，2.03(d，J＝6.4Hz，3H)，1.93-1.44(m，5H)，1.07(d，J＝7.0Hz，3H)，0.99(d，J＝7.3Hz，3H)，0.91(d，J＝6.7Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 242(M+H+).b.β-内酯VIIa(R2＝Et；R1＝i-Pr)
用类似上面处理IVb的方法水解IVa，以100％产率得到相应的二羟基酸。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.45(d，J＝5.8Hz，1H).3.90(d，J＝6.4Hz，1H)，2.74(m，1H)，1.71-1.53(m，3H)，0.94(t，J＝7.4Hz，3H)，0.92(d，J＝6.8Hz，3H)，0.88(d，J＝6.8Hz，3H).
用类似于制备β-内酯VIIb的方法，以79％产率得到β-内酯VIIa。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.17(br.s，1H)，5.30(d，J＝6.0Hz，1H)，3.98(dd，J＝6.4，4.4Hz，1H)，2.60(m，1H)，2.08(d，J＝6.4Hz，3H)，1.97(m，2H)，1.75(m，1H)，1.12(t，J＝7.5Hz，3H)，1.07(d，J＝6.8Hz，3H)，0.92(d，J＝6.8Hz，3H).c.β-内酯VIIc(R2＝n-Bu；R1＝i-Pr)
用类似上面处理IVb的方法水解IVc，以100％产率得到相应的二羟酸。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ4.42(d，J＝5.8Hz，1H)，3.90(d，J＝6.4Hz，1H)，2.86-2.79(m，1H)，1.70-1.24(m，8H)，0.97-0.86(m，9H).
用类似于制备β-内酯VIIb的方法，以40％产率得到β-内酯VIIc。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.14(br.s，1H)，5.27(d，J＝6.1Hz，1H)，3.97(d，J＝4.4Hz，1H)，2.68-2.61(m，1H)，1.94-1.86(m，2H)，1.72-1.36(m，7H)，1.07(d，J＝7.0Hz，3H)，0.93(t，J＝7.1Hz，3H)，0.91(d，J＝6.8Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 256(M+H+)d.β-内酯VIId(R2＝i-Bu；R1＝i-Pr)
用类似上面处理IVb的方法水解IVd，以100％产率得到相应的二羟酸。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ4.50(d，J＝5.8Hz，1H)，4.00(d，J＝6.5Hz，1H)，3.09-3.02(m，1H)，1.90-1.61(m，3H)，1.49-1.40(m，2H)，1.02(d，J＝6.7Hz，3H)，0.98(d，J＝6.5Hz，3H)，0.97(d，J＝6.7Hz，3H).
用类似于制备β-内酯VIIb的方法，以62％产率得到β-内酯VIId。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.16(br.s，1H)，5.25(d，J＝6.1Hz，1H)，3.97(d，J＝4.4Hz，1H)，2.71(dd，J＝15.1，6.2Hz，1H)，1.95-1.66(m，5H)，1.08(d，J＝6.9Hz，3H)，0.99(d，J＝6.3Hz，3H)，0.98(d，J＝6.3Hz，3H)，0.92(d，J＝6.7Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 256(M+H+).e.β-内酯VIIe(R2＝CH2Ph；R1＝i-Pr)
用类似上面处理IVb的方法水解IVe，以88％产率得到相应的二羟酸。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.25-7.04(m，5H)，4.29(d，J＝5.7Hz，1H)，3.83(d，J＝6.4Hz，1H)，3.01-2.82(m，3H)，1.65(m，1H)，0.90(d，J＝6.6Hz，3H)，0.86(d，J＝6.8Hz，3H).
用类似于制备β-内酯VIIb的方法，以77％产率得到β-内酯VIIe。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.36-7.20(m，5H)，6.57(br.s，1H)，5.08(d，J＝5.4Hz，1H)，3.94(d，J＝4.5Hz，1H)，3.25(d，J＝10.1Hz，1H)，3.01-2.89(m，2H)，1.92-1.81(m，1H)，1.05(d，J＝6.9Hz，3H)，0.86(d，J＝6.7Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 290(M+H+).
流程3和4概括的制备顺-噁唑啉和反-噁唑啉的合成方法由实施例10和11加以说明。实施例10 顺-噁唑啉(Ia)a.3-(异丙基)丙烯酸乙酯(XV；R1＝i-Pr；R3＝Me)
在0℃向搅拌的甲氧羰基亚甲基三苯基膦(56.04g，167.6mmol)的无水CH2Cl2(168ml)溶液中滴加异丁醛(17.4ml，191.6mmol)。5分钟后，将反应混合物升至室温，并搅拌24小时。真空除去溶剂，在白色油状固体中加入戊烷，产生氧化三苯基膦沉淀。滤除固体，真空浓缩滤液。再重复此过程一次，得到粗烯烃(20.00g，93％)为黄色油，其纯度足以直接用于下步反应。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.95(dd，J＝15.7，6.6Hz，1H)，5.77(dd，J＝15.7，1.5Hz)，3.72(s，3H)，2.44(m，1H)，1.06(d，J＝6.7Hz，6H).b.(2S，3R)-2，3-二羟基-3-(异丙基)丙酸甲酯(XVIa；R1＝i-Pr；R3＝Me)
将AD-混合-β(100.00g)，甲磺酰胺(6.78g，71.3mmol)和叔丁醇-水(1∶1，720ml)在室温下剧烈搅拌5分钟，然后将反应混合物冷却到0℃。用Pasteur吸移管加入α，β-不饱和酯XV(R1＝i-Pr；R3＝Me)(9.14g，71.3mmol)。在0℃搅拌96小时后，加入Na2SO3(3.0g)，然后在室温搅拌1小时。用乙酸乙酯(200ml)稀释混合物，然后将其转移到分液漏斗中。除去有机相，水相用乙酸乙酯萃取(2×100ml)。合并的有机相经干燥(Na2SO3)、过滤和真空浓缩后得到黄色油。使其通过硅胶垫板，用1∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，得到二醇XVIa(R1＝i-Pr；R3＝Me)(11.48g，94％)为黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.28(dd，J＝5.6，1.8Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.48(m，1H)，3.28(m，1H)，2.33(d，J＝9.3Hz，1H)，1.87(m，1H)，1.02(d，J＝6.7Hz，3H)，0.95(d，J＝6.7Hz，3H).c.(2R，3R)-2-溴-3-二羟基-3-(异丙基)丙酸甲酯(XVIIa；R1＝i-Pr；R3＝Me)
将(2S，3R)-2，3-二羟基-3-(异丙基)丙酸甲酯XVIa(R1＝i-Pr；R3＝Me)(1.0g，6.17mmol)和原苯甲酸三甲酯(1.02ml，80.1mmol)溶解于CH2Cl2(20ml)，并用BF3·OEt2(40.0μl，0.32mmol)处理。搅拌75分钟后，将混合物在高真空(0.05mmHg)下浓缩35分钟。将混合物重新溶解于CH2Cl2(20.0ml)，冷却到0℃，依次用Et3N(43.0μl，0.31mmol)和乙酰溴(0.48ml，6.49mmol)处理。在0℃搅拌4小时后，反应混合物用饱和NaHCO3溶液(12ml)处理，并允许升至室温。分离各相，水相用CH2Cl2(2×20ml)萃取。合并的有机相经干燥(Na2SO3)、过滤和真空浓缩后得到粗α-溴-β-苯甲酸酯XVIIa(R1＝i-Pr；R3＝Me)(1.36g，85％)为清澈无色油。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.05-8.00(m，2H)，7.47-7.40(m，3H)，5.57(dd，J＝8.8，3.9Hz，1H)，4.47(d，J＝8.8Hz，1H)，3.67(s，3H)，2.45(m，1H)，1.01(d，J＝6.8Hz，6H).d.(2S，3R)-2-偶氮-3-二羟基-3-(异丙基)丙酸甲酯(XVIIIa；R1＝i-Pr；R3＝Me)
将(2R，3R)-2-溴-3-二羟基-3-(异丙基)丙酸甲酯XVIIa(R1＝i-Pr；R3＝Me)(2.00g，6.07mmol)的15ml DMSO溶液用叠氮化钠(790.0mg，12.2mmol)处理。在室温搅拌12小时后，将混合物在H2O和乙酸乙酯(各50ml)之间分配。水相用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用MgSO4干燥，并真空浓缩，得到所要的α-偶氮-β-苯甲酸酯(1.55g，87％)为黄色油。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.07-8.02(m，2H)，7.55-7.43(m，3H)，5.40(dd，J＝8.8，2.8Hz，1H)，3.73(s，3H)，2.24(m，1H)，1.04(d，J＝5.8Hz，3H)，0.98(d，J＝5.8Hz，3H).
重复上述过程，只是用DMF作为溶剂代替DMSO，以85％产率得到所要的α-偶氮-β-苯甲酸酯。e.苯甲酰基甲酰胺XIXa(R1＝i-Pr；R3＝Me)
将(2S，3R)-2-偶氮-3-二羟基-3-(异丙基)丙酸甲酯XVIIIa(R1＝i-Pr；R3＝Me)(1.50g，5.15mmo1)的25ml乙酸乙酯溶液用200mg 20％Pd(OH)2/C处理，并将悬浮液在H2中及膨胀压力下剧烈搅拌。12小时后，过滤混合物，回流4小时以完成苯甲酰基的迁移。将混合物冷却到室温，真空浓缩，得到所要的苯甲酰基甲酰胺(1.25g，92％)为黄色油。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.85-7.83(m，2H)，7.46-7.40(m，3H)，6.99(br.d，J＝9.1Hz，1H)，5.05(dd，J＝9.1，1.9Hz，1H)，3.77(s，3H)，1.79(m，1H)，1.03(d，J＝6.7Hz，3H).0.99(d，J＝6.7Hz，3H).f.顺-噁唑啉Ia(R1＝i-Pr；R3＝Me)
将苯甲酰基甲酰胺XIXa(R1＝i-Pr；R3＝Me)(500mg，18.8mmol)的CH2Cl2(20ml)溶液用4.50ml亚硫酰氯(61.7mmol)处理。在室温搅拌24小时后，将混合物用CH2Cl2稀释，饱和NaHCO3溶液洗涤，Na2SO4干燥，然后真空浓缩。经色谱纯化(硅胶，1∶1己烷/乙酸乙酯)，得到所要的顺-噁唑啉(248mg，53％)为淡黄色油。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.01-7.97(m，2H)，7.52-7.38(m，3H)，4.94(d，J＝9.8Hz，1H)，4.53(dd，J＝9.8，7.8Hz，1H)，3.76(s，3H)，2.09(m，1H)，1.05(d，J＝6.5Hz，3H)，1.01(d，J＝6.7Hz，3H).实施例11 反-噁唑啉(Ib)a.3-(异丙基)丙烯酸乙酯(XV；R1＝i-Pr；R3＝Me)
在0℃向搅拌的甲氧羰基亚甲基三苯基膦(56.04g，167.6mmol)的无水CH2Cl2(168ml)溶液中滴加异丁醛(17.4ml，191.6mmol)。5分钟后，将反应混合物升至室温，并搅拌24小时。真空除去溶剂，在白色油状固体中加入戊烷，产生氧化三苯基膦沉淀。滤除固体，真空浓缩滤液。再重复此过程一次，得到粗烯烃(20.00g，93％)为黄色油，其纯度足以直接用于下步反应。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.95(dd，J＝15.7，6.6Hz，1H)，5.77(dd，J＝15.7，1.5Hz)，3.72(s，3H)，2.44(m，1H)，1.06(d，J＝6.7Hz，6H).b.(2R，3S)-2，3-二羟基-3-(异丙基)丙酸甲酯(XVIb；R1＝i-Pr；R3＝Me)
在25℃用注射泵(注射器连接一个管子，在整个反应期间注射器头始终浸在溶液中)经过48小时将纯净的烯烃XV(R1＝i-Pr；R3＝Me)(9.0g，70.2mmol)加到含有K2OsO2(OH)4(246.1mg，0.67mmol，0.95mol％)，氢化奎宁1，4-二氮杂萘二基二醚(555.1mg，0.71mmol，1.01mol％)，N-甲基吗啉N-氧化物(水中50wt％，25.0ml，0.106mol，1.51当量)，t-BuOH(84ml)和H2O(58ml)的清澈黄色溶液中。将所得清澈的橙色溶液再搅拌60分钟，之后加入乙酸乙酯(200ml)和Na2SO3(15.0g)的H2O(150ml)溶液，并将所得混合物搅拌4小时。分离各相，水相用乙酸乙酯萃取(2次)。合并有机相，用0.3M H2SO4的饱和Na2SO4溶液萃取(2×100ml)。再次分离各相，水相用乙酸乙酯萃取(1次)。合并有机相，Na2SO4干燥，过滤和真空浓缩，得到11.4g(约100％)的白色油状固体。用1H NMR在1∶1摩尔的二醇和三[3-(七氟丙基羟基亚甲基)-(-)-樟脑酸]铕溶液的C6D6中进行测定，结果显示该固体为70％e.e。从35-60℃石油醚中重结晶，得到6.8g(60％)(2S，3R)-2，3-二羟基-3-(异丙基)丙酸甲酯(XVIb；R1＝i-Pr；R3＝Me)，约为100％e.e，为白色晶体。mp＝32-34℃；＝-110.6°(c1.04，CHCl3)].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.28(dd，J＝5.6，1.8Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.48(m，1H)，3.28(m，1H)，2.33(d，J＝9.3Hz，1H)，1.87(m，1H)，1.02(d，J＝6.7Hz，3H)，0.95(d，J＝6.7Hz，3H).c.(2S，3S)-2-溴-3-二羟基-3-(异丙基)丙酸甲酯(XVIIb；R1＝i-Pr；R3＝Me)
将(2R，3S)-2，3-二羟基-3-(异丙基)丙酸甲酯XVIb(R1＝i-Pr；R3＝Me)(30.0g，185.2mmol)和原苯甲酸三甲酯(41.3ml，240.7mmol)溶解于CH2Cl2(400ml)，并用BF3-OEt2(1.16ml，9.25mmol)处理。2小时后，加入三乙胺(1.8ml，13mmol)，真空浓缩混合物并将其置于高真空(0.05mmHg)下70分钟。将剩余物重新溶解于CH2Cl2(400ml)，冷却到0℃，滴加乙酰溴(14.3ml，194.5mmol)处理。2小时后，再加入乙酰溴(0.68ml，9.25mmol)。30分钟后，加入饱和NaHCO3溶液(500ml)，并将混合物剧烈搅拌5-10分钟。分离各相，水相用CH2Cl2(2×20ml)萃取。合并的有机相经干燥(Na2SO3)、过滤和真空浓缩后得到粗α-溴-β-苯甲酸酯XVIIb(R1＝i-Pr；R3＝Me)(66.23g)为清澈无色油，含有约9.3wt％苯甲酸甲酯。对于产物：1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.05-8.00(m，2H)，7.47-7.40(m，3H)，5.57(dd，J＝8.8，3.9Hz，1H)，4.47(d，J＝8.8Hz，1H)，3.67(s，3H)，2.45(m，1H)，1.01(d，J＝6.8Hz，6H).d.(2R，3S)-2-偶氮-3-二羟基-3-(异丙基)丙酸甲酯(XVIIIb；R1＝i-Pr；R3＝Me)
将叠氮化钠(24g，370mmol)加到230ml DMSO中，并将混合物在室温下搅拌过夜。在所得溶液中加入(2S，3S)-2-溴-3-二羟基-3-(异丙基)丙酸甲酯(XVIIb；R1＝i-Pr；R3＝Me)(61g，185mmol)的20ml DMSO溶液。在室温搅拌11小时后，将混合物倒入H2O(1.5L)和乙醚(200ml)中，剧烈搅拌10-15分钟。加入乙醚(100ml)，分离各相。水相用乙醚萃取(2×100ml)，合并的有机相用水(2×100ml)和盐水(100ml)洗涤，MgSO4干燥，并真空浓缩，得到粗产物(57.5g)，含有约3％起始原料和8％要除去的副产物。对于产物：
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.07-8.02(m，2H)，7.55-7.43(m，3H)，5.40(dd，J＝8.8，2.8Hz，1H)，3.73(s，3H)，2.24(m，1H)，1.04(d，J＝5.8Hz，3H)，0.98(d，J＝5.8Hz，3H).e.苯甲酰基甲酰胺XIXb(R1＝i-Pr；R3＝Me)
在(2R，3S)-2-偶氮-3-二羟基-3-(异丙基)丙酸甲酯XVIIIb(R1＝i-Pr；R3＝Me)(55g)的甲醇(300ml)冷(0-5℃)溶液中加入94ml 4M HCl/二噁烷和2.75g Pd(OH)2/C。用氢气吹洗混合物，并在室温下搅拌。每30分钟用氢气吹洗混合物一次以除去释放的氮气。4小时后，用氮气吹洗反应混合物，并再加入1.3g Pd(OH)2/C。再用氢气每4小时吹洗反应混合物一次。过滤混合物并真空浓缩。将剩余物溶解于水，用EtOAc萃取。水相用NaHCO3碱化，然后再用EtOAc萃取。合并的有机萃取液用盐水洗涤，Na2SO4干燥，然后浓缩，得到N-和O-苯甲酰化产物的混合物，它被直接用于下步反应。f.反噁唑啉Ib(R1＝i-Pr；R3＝Me)
将上面实施例10e得到的粗产物IXb(37.3g，141mmol)溶解于甲苯(350ml)。加入对甲苯磺酸(2.68g，14.1mmol)，将混合物加热回流。用Dean Stark阱除去水。3小时后，收集到约2.5ml水。冷却反应混合物，用EtOAc(100ml)稀释，依次用饱和NaHCO3(2×100ml)和盐水(100ml)洗涤，MgSO4干燥，然后浓缩。剩余物在硅胶垫板(约400g)上纯化，用25-30％EtOAc/己烷洗脱，得到反噁唑啉Ib(R1＝i-Pr；R3＝Me)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.01-7.97(m，2H)，7.52-7.38(m，3H)，4.68(表观t，J＝7Hz，1H)，4.57(d，J＝7Hz，1H)，3.81(s，3H)，2.00-1.93(m，1H)，1.04(d，J＝6.7Hz，3H)，1.00(d，J＝6.8Hz，3H).实施例12 蛋白体活性的钝化
20S蛋白体和蛋白体活化剂PA28的纯化过程可以按照前面所述的方法(Dick等人，《生物化学杂志》，271：7273(1996))进行。
将2ml测定缓冲液(20mM HEPES，0.5mM EDTA，pH8.0)和Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC的二甲亚砜加到3ml荧光比色杯中，然后将小杯放在Hitachi F-2000荧光分光光度计的套盒座上。用循环水浴保持温度在37℃。加入0.34mg PA28，通过监视伴随游离AMC产生而发生的在440nm(λex＝380nm)处荧光的增加来监视反应进程。该进展曲线表现出一个持续1-2分钟的滞后期，这是由20S-PA28复合物慢慢形成造成的。底物水解达到稳定态后，加入乳胱氨酸使最终浓度达到1mM，并监视反应1小时。在微型计算机上用LAB CALC(Galactic)软件收集荧光(F)与时间(t)关系的数据，通过下列的一次方程对数据进行非线性最小二乘方法近似，估算出Kinact值：
F＝A(1-e-kt)+C其中，C＝Ft＝0及A＝Ft＝∞-Ft＝0。实施例13 抑制C2C12细胞中细胞内蛋白的降解
用35S-蛋氨酸标记C2C12细胞(鼠成肌细胞系)48小时。洗涤这些细胞，在补充有2mM未标记的蛋氨酸的相同培养基中预温育2小时。倒掉该培养基，换上含有50％血清和一定浓度的待测化合物的一份新制备的预温育培养基。倒掉该培养基，配制成10％的TCA，然后离心。对TCA可溶性放射性进行计数。用TCA可溶性放射性减小的百分比计算蛋白酶解的抑制作用。从这个数据计算出每个化合物的IC50。实施例14 内酯水解
β-内酯类似物水解成相应的二羟酸的半衰期(t1/2)的测量是在37℃下以200mM的浓度在20mM HEPES，0.5mM EDTA，pH7.8中进行的。在230nm处的吸收至少要测量5个半衰期(约1小时)，在此波长下内酯和二羟基的消光系数之差最大。用Guggenheim分析(Gutfreund，《酶：物理原理》(Enzymes：Physical Principle)；Wiley & Sons：New York，1975，pp118-119)计算半衰期。实施例12-14的结果示于表1。
表1
抑制20S蛋白体和抑制细胞内蛋白降解的动力学化合物 R2 Kobs/[I](M-1s-1)a IC50(μM)b t1/2minc 2 Me 20,000 0.7-1.1 13 3a Et 39,000 0.32 15.3 3b n-Pr 46,500 0.29 15.3 3c n-Bu 38,000 0.33 17 3d i-Bu 17,000 0.51 16.8 3e CH2Ph 6,400 - 6.8 3f OMe 82,200 86 3.7aPA28活化的20S蛋白体的胰凝乳蛋白酶样活性的钝化。b抑制C2C12细胞中细胞内蛋白的降解c水解半衰期。实施例15 梗塞尺寸和神经元损失的减少方法
用卤代乙烷将雄性Sprague Dawly大鼠(250-400g)麻醉，并用尼龙丝结扎大脑中动脉(MCA)2小时。除去尼龙丝，在大鼠被处死前将梗塞组织再灌注24小时。
除掉尼龙丝之后立即用神经病学评分系统给大鼠打分。神经病学评分用0至10十个尺度表示，0表示没有神经病学缺陷，而10表示有严重的神经病学缺陷。24小时后和处死前，用同样的神经病学评分系统第二次给动物打分。
用氯化三苯基四唑鎓(TTC)给整个大脑的冠状切面(2.0mm×7-8)染色的情况在盲试条件下利用图象分析进行评价以确定梗塞尺寸。给药方案
结扎MCA后2小时用注射器给大鼠静脉内注射(1.0ml/kg)载体(50％丙二醇/盐水；n＝8)或7-正丙基-裂-乳胱氨酸-β-内酯(3b)(0.3mg/kg；n＝7)。另外两组大鼠在结扎MCA后0分钟，2小时和6小时静脉内注射3b(1.0mg/kg)。一组(0.1mg/kg×3；n＝6)在每一个时间点接受一次0.1mg/kg的注射，而另一组(0.3mg/kg×3；n＝7)在三个时间点的每一个接受一次0.3mg/kg的注射。结果
在用单剂7-正丙基-裂-乳胱氨酸-β-内酯(3b)治疗的动物中，梗塞体积减小50％(图1，0.3×1)。而在0.1mg/kg×3剂量组或0.3mg/kg×3剂量组中，梗塞体积没有明显减小(图1)。
在2小时局部缺血期后所有动物的即刻神经病学评分为10±0。在24小时后，用载体处理的大鼠的平均分为8.7±0.6，而用7-正丙基-裂-乳胱氨酸-β-内酯(3b)0.3mg/kg单剂处理的鼠的平均分为4±1(图2)。这些数据表明药物治疗后的动物得到60％神经病学改善。而在0.1mg/kg×3剂量组或0.3mg/kg×3剂量组中没有观察到神经病学评分的明显改善(图2)。结论
7-正丙基-裂-乳胱氨酸-β-内酯，一旦在局部缺血后给药，将在神经病学缺陷和梗塞大脑损伤两方面提供显著保护。从这些初步数据来看，单剂方案显然比多剂方案更优选。
通过以上对本发明的充分描述，本领域普通技术人员都应该理解，在不影响本发明范围或其任何实施方案情况下，可以在某些条件、配方和其它参数的宽广且等价的范围内实施本发明。本文所引用的所有专利和出版物在此全部引作参考。