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1、(10)申请公布号 CN 101941908 A (43)申请公布日 2011.01.12 CN 101941908 A *CN101941908A* (21)申请号 201010278118.2 (22)申请日 2010.09.10 C07C 69/732(2006.01) C07C 67/08(2006.01) (71)申请人 武汉巨惠绿色产业发展有限公司 地址 430074 湖北省武汉市东湖高新技术开 发区珞瑜路 889 号光谷国际广场 A 座 2506 (72)发明人 杨俊 林秀忠 林承成 (54) 发明名称 一种从金银花露加工残液中制备及半合成绿 原酸的方法 (57) 摘要 一种从金。
2、银花露加工残液中制备及半合成绿 原酸的方法， 属于化学物质或药品的制造方法， 解 决现有提取及制备绿原酸技术， 耗费大量有机溶 剂， 引起环境污染 ； 或运用较为复杂的分离技术 难以放大生产 ； 或取效率不高， 原料利用率较低 等问题。 本发明包括沉淀步骤、 大孔吸附树脂分离 步骤、 酸水解步骤、 离子交换柱分离步骤、 半合成 步骤、 结晶步骤。 本发明以金银花露加工残液为原 料， 实现资源的综合利用， 并能充分利用提取过程 中的咖啡酰奎尼酸类物质， 将该类化合物水解成 咖啡酸及奎尼酸后， 再合成制备绿原酸， 最终经过 结晶步骤后得到纯度大于 99的绿原酸。本发明 提供的工艺简便并易于放大到工。
3、业化生产， 同时 能大大提高原料利用率。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 8 页 附图 1 页 CN 101941913 A1/2 页 2 1. 一种从金银花露加工残液中制备及半合成绿原酸的方法， 包括 ： (1) 沉淀步骤 ； 以金银花露残液为原料， 加入沉淀剂进行沉淀反应， 过滤后， 浓缩， 得到 沉淀液 ； (2) 大孔吸附树脂分离步骤 ； 将步骤 (1) 得到的沉淀液， 经大孔吸附树脂分离纯化， 得 到咖啡酰奎尼酸混合物 ； (3) 酸水解步骤 ； 将步骤 (2) 得到的咖啡酰奎尼酸混合物， 加入到一定量的。
4、水中溶解， 加入酸解液， 在一定温度下进行酸水解反应， 反应结束后， 蒸干得到水解产物 ； (4) 离子交换柱分离步骤 ； 将步骤 (3) 得到的水解产物， 采用离子交换柱精制， 同时得 到咖啡酸及奎尼酸 ； (5) 半合成步骤 ； 将步骤 (4) 中得到的咖啡酸和奎尼酸在催化剂的作用下进行酯化反 应， 得到绿原酸 (3- 咖啡酰奎尼酸 ) ； (6) 结晶步骤 ； 将步骤 (5) 中得到的绿原酸解于丙酮中， 加入乙酸乙酯后， 4冷冻结 晶， 过滤， 晶体乙酸乙酯洗涤后， 干燥， 得到纯度大于 99的绿原酸。 2. 如权利要求 1 所述的一种从金银花露加工残液中制备及半合成绿原酸的方法， 其特。
5、 征在于 ： 所述沉淀步骤中， 所述沉淀剂为 ： 沉淀剂由 A、 B 两部分组成， 沉淀剂 A 为 2 5的 三氯醋酸水溶液 (V/V) 或三氟三氯乙烷中的一种， 加入体积与金银花露加工残液体积比为 110120(V/V)， 沉淀剂B为十六烷基三甲胺溴化物(CTAB)、 氢氧化十六烷基三甲胺 溴化物 (CTA-OH)、 十六烷基吡啶 (CP-OH) 中的一种， 加入质量与金银花露加工残液体积的 比为 0.02 0.08g/ml( 质量体积比 ) ； 所述沉淀反应为 ： 将沉淀剂 A 及 B 加入到金银花露 加工残液中， 20 60下搅拌反应 20 60min 后， 4 25静置 8 24 小时。
6、 ； 所述沉淀液 为 ： 将过滤后得到的滤液， 浓缩至金银花露加工残液体积的 1/10 1/50， 得到沉淀液。 3. 如权利要求 1 所述的一种从金银花露加工残液中制备及半合成绿原酸的方法， 其特 征在于 ： 所述大孔吸附树脂分离步骤中， 所述大孔吸附树脂的型号为 ： AB-8， XDA-1， D101， NKA-9， X-5 中的一种 ； 所述经大孔吸附树脂分离纯化， 其过程为 ： 将得到的沉淀液， 上样到 大孔吸附树脂后， 用 5 20的乙醇水溶液 (V/V) 洗脱， 流速为 1 3 柱体积每小时， 弃去 洗脱液， 再用3060的乙醇水溶液(V/V)洗脱， 流速为0.52柱体积每小时， 。
7、收集洗脱 液后浓缩蒸干， 得到咖啡酰奎尼酸混合物。 4. 如权利要求 1 所述的一种从金银花露加工残液中制备及半合成绿原酸的方法， 其特 征在于 ： 所述酸水解步骤中， 所述加入到一定量的水中溶解为 ： 所用水的体积与咖啡酰奎 尼酸混合物的质量比为5201(体积质量比) ； 所述酸解液为 ： 36mol/L HCl， SOCl2， C2Cl2O2中的一种， 其体积与所用水的体积之比为 1 2 1 8( 体积比 ) ； 所述一定温度 下进行酸水解反应， 其过程为 ： 在 60 95下， 搅拌反应 2 8 小时。 5. 如权利要求 1 所述的一种从金银花露加工残液中制备及半合成绿原酸的方法， 其 。
8、特征在于 ： 所述离子交换柱分离步骤中， 所述离子交换柱为 ： 732 型、 D001 型、 D113 型中的 一种 ； 所述采用离子交换柱精制， 其过程为 ： 离子交换树脂依次用 2mol/LNaOH， 水， 3mol/ L HCl， 水冲洗后， 将酸水解步骤中得到的水解产物水溶解后上样， 用 0.05 0.2mol/L pH3.6-4.0的乙酸-乙酸钠缓冲溶液洗脱， 流速为0.52柱体积每小时， 分段收集， 收集液 浓缩蒸干后分别得到咖啡酸及奎尼酸。 6. 如权利要求 1 所述的一种从金银花露加工残液中制备及半合成绿原酸的方法， 其特 权 利 要 求 书 CN 101941908 A CN。
9、 101941913 A2/2 页 3 征在于 ： 所述半合成步骤中， 所述催化剂为 ： 732 型阳离子交换树脂 ； 所述酯化反应为 ： 将步 骤 (4) 中得到咖啡酸及奎尼酸， 充分溶解于乙醇后过滤， 加入乙醇的体积与咖啡酸及奎尼 酸总质量之比为 5 10 1( 体积质量比 )， 滤液加入催化剂， 催化剂与咖啡酸及奎尼酸总 质量比为 0.5 3 100( 质量比 )， 搅拌下升温到 60 80， 回流搅拌反应 2 8 小时， 反应结束后降温， 过滤去除催化剂， 滤液蒸干后得到绿原酸。 7. 如权利要求 1 所述的一种从金银花露加工残液中制备及半合成绿原酸的方法， 其特 征在于 ： 所述结晶。
10、步骤， 其过程为 ： 将步骤 (5) 中得到的绿原酸解于丙酮中， 所用丙酮的体 积与绿原酸质量之比为131(体积质量比)， 不断滴加乙酸乙酯， 直至不再产生沉淀为 止， 4冷冻结晶， 过滤， 晶体乙酸乙酯洗涤后， 干燥， 得到纯度大于 99的绿原酸。 权 利 要 求 书 CN 101941908 A CN 101941913 A1/8 页 4 一种从金银花露加工残液中制备及半合成绿原酸的方法 技术领域 0001 本发明属于化学物质或药品的制造方法， 具体涉及以金银花露加工残液为原料， 制备及半合成绿原酸的方法。 背景技术 0002 绿原酸 (Chlorogenic acid)， 化学名 ： 3。
11、- 咖啡酰奎尼酸， 是由咖啡酸 (Caffeic acid)与奎尼酸(Quinic acid， 1-羟基六氢没食子酸)生成的缩酚酸， 是植物体在有氧呼吸 过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。 0003 绿原酸具有抗菌、 消炎、 解毒、 利胆、 降压和升高白细胞及显著增加胃肠蠕动和促 进胃液分泌等药理作用， 对大肠杆菌、 金色葡萄球菌、 肺炎球菌和病毒有较强的抑制作用 ； 对急性咽喉炎症和皮肤病有明显疗效， 临床上用于治疗急性细菌性感染疾病及放化疗时所 致的白细胞减少症， 对月经过多， 子宫功能性出血有良好的止血效果绿原酸的主要药理作 用有 ： 降压作用 ； 抗肿瘤作用 ； 补肾、 增强。
12、机体免疫作用 ； 抗氧化、 抗衰老、 抗肌肉骨骼老化 ； 抗菌、 抗病毒 ； 其它作用 ： 利尿， 利胆， 降血脂， 保胎。 0004 自从五十年代 Hulmc 从苹果中提出绿原酸开始， 及以后开展的绿原酸生理活性的 研究后， 人们就对植物绿原酸给予了高度的关注。因此怎样开发新的植物资源以及新的技 术来提高绿原酸提取物的效率是植物绿原酸研究的主要内容之一。 0005 研究结果表明， 绿原酸具有显著的药理活性， 对消化系统、 血液系统和生殖系统均 有疗效。 研究证明， 绿原酸有显著增加肠胃蠕动和促胃液分泌及利胆、 清除自由基和抗脂质 过氧化等作用 ； 绿原酸的水解产物咖啡酸亦有利胆、 升高白细胞。
13、的作用 ； 它对各种急性细 菌感染疾病及由放疗、 化疗所致的白细胞减少症有显著疗效。 最近， 绿原酸及其衍生物被确 认为是鼠肝微粒体中 6- 磷酸葡萄糖移位酶的特效性抑制剂， 可能有助于降低非胰岛素依 赖性糖尿病患者所表现出的较高的肝糖排泄速度， 显示出绿原酸在治疗糖尿病的方面的良 好前景。由于绿原酸疗效确切， 现在， 绿原酸不但是生药的质量控制指标， 也是一些成药和 制剂的质量控制指标。许多中成药， 如银黄口服液、 双花注射液等， 都是用富含绿原酸的金 银花提取物作原料制备的。鉴于绿原酸的药用价值， 人们尝试了各种方法对植物材料中的 绿原酸进行提取、 分离。 目前常见的有以下几种 ： 石硫醇。
14、法、 异戊醇法、 铅沉法、 醇沉法、 异丙 醇 - 乙酸乙酯法等。这些传统方法都有明显的缺陷， 例如石硫醇法加入石灰乳造成绿原酸 类物质的严重破坏 ； 有机溶剂萃取的方法不仅效率不高， 并且大量的溶剂在回收过程中损 失， 耗能大 ； 传统的水提醇沉法现在仍然广泛应用， 但是其耗醇量大， 生产周期长， 大量的乙 醇需回收， 浪费能源， 得到的产品纯度也不高。 0006 目前， 对于绿原酸的制备方法有 ： 庞松涛等于 2004 年在公开号 CN 1616403、 名称 为 “从金银花中提取制备绿原酸的工艺” 中采用 ： 金银花加水 / 乙醇进行回流提取， ， 加乙醇 沉淀杂质， 过夜过滤， 滤液上。
15、大孔树脂柱， 用洗脱剂浓缩， 收集含有绿原酸的组分， 上聚酰胺 柱， 用洗脱剂洗脱， 收集含有绿原酸的组分， 浓缩， 精制得到含量大于 95的绿原酸 ； 该方 法采用的醇沉淀不仅耗时长且试剂及能耗耗费大 ； 说 明 书 CN 101941908 A CN 101941913 A2/8 页 5 0007 卢定强等于 2009 年在公开号 CN 101503356、 名称为 “一种制备高纯度绿原酸的新 方法” 中采用 ： 将绿原酸原液通过至少 4 级大孔树脂串联吸附柱、 洗杂、 洗脱后， 再将洗脱液 再生进行连续逆流萃取， 得到高纯度绿原酸 ； 该方法采用的柱分离步骤不易操作且较繁琐， 同时采用的。
16、连续逆流萃取耗费大量的有机试剂 ； 0008 孙波等于 1999 年在公开号 CN1273964、 名称为 “杜仲叶制备绿原酸工艺” 中采用 ： 由超声预处理和高温提取、 超滤、 乙酸乙酯萃取、 D140 树脂分离等步骤来完成， 其中超声处 理难以用于工业化放大生产， 超滤过程大大增加生产成本， 而乙酸乙酯萃取耗费大量的有 机试剂 ； 0009 张东升等于 2009 年在公开号 CN 101486651、 名称为 “一种杜仲叶中提取绿原酸的 方法及其应用” 中采用 ： 粉碎、 酶处理、 超声波处理、 过滤、 提取、 浓缩与纯化等步骤提取纯化 绿原酸， 其中采用了酶处理提高了提取效率， 但其中的。
17、超声处理难以放大， 且该技术运用活 性炭脱色造成主要成分的部分损失， 且经过大孔树脂分离后结晶， 产品纯度不高。 0010 目前， 还有许多关于提取、 纯化、 制备绿原酸的方法， 但这些方法基本上都耗大量 有机溶剂， 引起环境污染 ； 或运用较为复杂的分离技术难以放大生产 ； 或取效率不高， 原料 利用率较低。 0011 金银花露属其他剂型药品， 是暑湿类非医保非处方药品。 可以清热， 消暑， 解毒。 多 用于缓解暑温口渴， 小儿痱毒， 热毒疮疖等症状。 金银花露的生产采用水蒸汽蒸馏法收集馏 分而得到， 而蒸馏剩下的残液目前多被生产厂家丢弃， 不仅造成环境污染， 并且由于残液中 含量较为丰富的。
18、绿原酸等物质， 造成了资源浪费。 0012 同时， 绿原酸， 是由咖啡酸 (Caffeic acid) 与奎尼酸 (Quinic acid) 生成的缩酚 酸， 是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。根据咖啡酰在 奎尼酸上的结合部位和数目不同， 从理论上讲， 单咖啡酰奎尼酸和二咖啡酰奎尼酸所组成 的绿原酸异构体共有 10 种， 分别为 ： 1- 咖啡酰奎尼酸、 3- 咖啡酰奎尼酸、 4- 咖啡酰奎尼酸、 5- 咖啡酰奎尼酸、 1， 3- 二咖啡酰奎尼酸、 1， 4- 二咖啡酰奎尼酸、 1， 5- 二咖啡酰奎尼酸、 3， 4- 二咖啡酰奎尼酸、 3， 5- 二咖啡酰奎尼酸、。
19、 4， 5- 二咖啡酰奎尼酸。但到目前为止， 从植物 中发现的绿原酸异构体有如下 ： 绿原酸 (3- 咖啡酰奎尼酸 )、 隐绿原酸 (Band510)(4- 咖啡 酰奎尼酸 )、 新绿原酸 (5- 咖啡酰奎尼酸 )、 异绿原酸 A(4， 5- 二咖啡酰奎尼酸 )、 异绿原酸 B(3， 4-二咖啡酰奎尼酸)、 异绿原酸C(3， 5-二咖啡酰奎尼酸)、 莱蓟素(1， 3-二咖啡酰奎尼 酸 )。 0013 目前， 几乎所有的研究都集中在绿原酸上， 对于其结构类似物(咖啡酰奎尼酸)往 往在分离纯化过程中当做杂质而被去除， 并没有对该类化合物加以利用。 发明内容 0014 本发明提供一种从金银花露加工残。
20、液中制备及半合成绿原酸的方法， 其目的在于 解决现有提取及制备绿原酸技术， 耗费大量有机溶剂， 引起环境污染 ； 或运用较为复杂的分 离技术难以放大生产 ； 或取效率不高， 原料利用率较低等问题。 本发明以金银花露加工残液 为原料， 实现资源的综合利用， 并能充分利用提取过程中的咖啡酰奎尼酸类物质， 将该类化 合物水解成咖啡酸及奎尼酸后， 在合成制备绿原酸， 解决现有制备绿原酸收率低下的问题。 0015 本发明的一种从金银花露加工残液中制备及半合成绿原酸的方法， 包括 ： 说 明 书 CN 101941908 A CN 101941913 A3/8 页 6 0016 (1) 沉淀步骤 ； 以金。
21、银花露残液为原料， 加入沉淀剂进行沉淀反应， 过滤后， 浓缩， 得到沉淀液 ； 0017 (2) 大孔吸附树脂分离步骤 ； 将步骤 (1) 得到的沉淀液， 经大孔吸附树脂分离纯 化， 得到咖啡酰奎尼酸混合物 ； 0018 (3) 酸水解步骤 ； 将步骤 (2) 得到的咖啡酰奎尼酸混合物， 加入到一定量的水中溶 解， 加入酸解液， 在一定温度下进行酸水解反应， 反应结束后， 蒸干得到水解产物 ； 0019 (4) 离子交换柱分离步骤 ； 将步骤 (3) 得到的水解产物， 采用离子交换柱精制， 同 时得到咖啡酸及奎尼酸 ； 0020 (5) 半合成步骤 ； 将步骤 (4) 中得到的咖啡酸和奎尼酸在。
22、催化剂的作用下进行酯 化反应， 得到绿原酸 (3- 咖啡酰奎尼酸 ) ； 0021 (6) 结晶步骤 ； 将步骤 (5) 中得到的绿原酸解于丙酮中， 加入乙酸乙酯后， 4冷冻 结晶， 过滤， 晶体乙酸乙酯洗涤后， 干燥， 得到纯度大于 99的绿原酸。 0022 所述沉淀步骤中， 所述沉淀剂为 ： 沉淀剂由 A、 B 两部分组成， 沉淀剂 A 为 2 5 的三氯醋酸水溶液 (V/V) 或三氟三氯乙烷中的一种， 加入体积与金银花露加工残液体积比 为 1 10 1 20(V/V)， 沉淀剂 B 为十六烷基三甲胺溴化物 (CTAB)、 氢氧化十六烷基三 甲胺溴化物 (CTA-OH)、 十六烷基吡啶 (。
23、CP-OH) 中的一种， 加入质量与金银花露加工残液体 积的比为 0.02 0.08g/ml( 质量体积比 ) ； 所述沉淀反应为 ： 将沉淀剂 A 及 B 加入到金银 花露加工残液中， 20 60下搅拌反应 20 60min 后， 4 25静置 8 24 小时 ； 所述沉 淀液为 ： 将过滤后得到的滤液， 浓缩至金银花露加工残液体积的 1/10 1/50， 得到沉淀液。 0023 所述大孔吸附树脂分离步骤中， 所述大孔吸附树脂的型号为 ： AB-8， XDA-1， D101， NKA-9， X-5 中的一种 ； 所述经大孔吸附树脂分离纯化， 其过程为 ： 将得到的沉淀液， 上样到 大孔吸附树。
24、脂后， 用 5 20的乙醇水溶液 (V/V) 洗脱， 流速为 1 3 柱体积每小时， 弃去 洗脱液， 再用3060的乙醇水溶液(V/V)洗脱， 流速为0.52柱体积每小时， 收集洗脱 液后浓缩蒸干， 得到咖啡酰奎尼酸混合物。 0024 所述酸水解步骤中， 所述加入到一定量的水中溶解为 ： 所用水的体积与咖啡酰奎 尼酸混合物的质量比为 5 20 1( 体积质量比 ) ； 所述酸解液为 ： 3 6mol/LHCl， SOCl2， C2Cl2O2中的一种， 其体积与所用水的体积之比为 1 2 1 8( 体积比 ) ； 所述一定温度 下进行酸水解反应， 其过程为 ： 在 60 95下， 搅拌反应 2 。
25、8 小时。 0025 所述离子交换柱分离步骤中， 所述离子交换柱为 ： 732 型、 D001 型、 D113 型中的 一种 ； 所述采用离子交换柱精制， 其过程为 ： 离子交换树脂依次用 2mol/L NaOH， 水， 3mol/ L HCl， 水冲洗后， 将酸水解步骤中得到的水解产物水溶解后上样， 用 0.05 0.2mol/L pH3.6-4.0的乙酸-乙酸钠缓冲溶液洗脱， 流速为0.52柱体积每小时， 分段收集， 收集液 浓缩蒸干后分别得到咖啡酸及奎尼酸。 0026 所述半合成步骤中， 所述催化剂为 ： 732 型阳离子交换树脂 ； 所述酯化反应为 ： 将 步骤 (4) 中得到咖啡酸及。
26、奎尼酸， 充分溶解于乙醇后过滤， 加入乙醇的体积与咖啡酸及奎 尼酸总质量之比为 5 10 1( 体积质量比 )， 滤液加入催化剂， 催化剂与咖啡酸及奎尼酸 总质量比为0.53100(质量比)， 搅拌下升温到6080， 回流搅拌反应28小时， 反应结束后降温， 过滤去除催化剂， 滤液蒸干后得到绿原酸。 0027 所述结晶步骤， 其过程为 ： 将步骤 (5) 中得到的绿原酸解于丙酮中， 所用丙酮的体 说 明 书 CN 101941908 A CN 101941913 A4/8 页 7 积与绿原酸质量之比为131(体积质量比)， 不断滴加乙酸乙酯， 直至不再产生沉淀为 止， 4冷冻结晶， 过滤， 晶。
27、体乙酸乙酯洗涤后， 干燥， 得到纯度大于 99的绿原酸。 0028 本发明的优点在于， 构想合理， 方法简便， 容易推广， 能解决现有提取及制备绿原 酸大量使用有机溶剂， 造成环境污染， 纯度不高生产成本过高以及效率低下的实际问题， 并 实现了能综合利用提取过程中的副产物， 通过半合成绿原酸， 从而解决现有绿原酸提取收 率低下的问题。本发明包括沉淀步骤、 大孔吸附树脂分离步骤、 酸水解步骤、 离子交换柱分 离步骤、 半合成步骤、 结晶步骤， 保证了运用本发明制备的产成品的质量， 节省了生产成本， 提高了生产效率。 本发明以金银花露加工残液为原料， 实现资源的综合利用， 并能充分利用 提取过程中。
28、的咖啡酰奎尼酸类物质， 将该类化合物水解成咖啡酸及奎尼酸后， 再合成制备 绿原酸， 最终经过结晶步骤后得到纯度大于99的绿原酸。本发明提供的工艺简便并易于 放大到工业化生产， 同时能大大提高原料利用率。 附图说明 0029 图 1 为步骤 (3) (5) 示意图。 具体实施方式 0030 图 1 为步骤 (3) (5) 示意图 ； 将步骤 (2) 得到的咖啡酰奎尼酸混合物， 加入到一 定量的水中溶解， 加入酸解液， 在一定温度下进行酸水解反应， 反应结束后， 蒸干得到水解 产物 ； 将步骤 (3) 得到的水解产物， 采用离子交换柱精制， 同时得到咖啡酸及奎尼酸 ； 将步 骤 (4) 中得到的咖。
29、啡酸和奎尼酸在催化剂的作用下进行酯化反应， 得到绿原酸 (3- 咖啡酰 奎尼酸 )。 0031 实施例 1 0032 (1) 沉淀步骤 0033 取 100ml 金银花露加工残液， 加入 2的三氯醋酸水溶液 (V/V)10ml， 加入体积与 金银花露加工残液体积比为110(V/V)， 同时加入十六烷基三甲胺溴化物(CTAB)2.0g， 其 加入质量与金银花露加工残液体积的比为0.02g/ml(质量体积比)， 60下搅拌反应60min 后， 4静置 24 小时， 将过滤后得到的滤液， 浓缩至 10ml， 其体积为金银花露加工残液体积 的 1/10， 得到沉淀液 10ml。 0034 (2) 大孔。
30、吸附树脂分离步骤 0035 将得到的沉淀液， 上样到 AB-8 大孔吸附树脂后， 用 5的乙醇水溶液 (V/V) 洗脱， 流速为 3 柱体积每小时， 弃去洗脱液， 再用 60的乙醇水溶液 (V/V) 洗脱， 流速为 0.5 柱体 积每小时， 收集洗脱液后浓缩蒸干， 得到咖啡酰奎尼酸混合物 4.78g。 0036 (3) 酸水解步骤 0037 将得到的咖啡酰奎尼酸混合物 4.78g， 加入 18.9ml 水充分溶解， 所用水的体积与 咖啡酰奎尼酸混合物的质量比为 5 1( 体积质量比 )， 加入 9.45ml 6mol/LHCl 为酸解液， 其体积与所用水的体积之比为12(体积比)， 在60下，。
31、 搅拌反应8小时后， 蒸干反应液， 得到酸水解产物 4.82g。 0038 (4) 离子交换分离步骤 0039 选取 732 型离子交换树脂装柱， 离子交换树脂依次用 2mol/L NaOH， 水， 3mol/ 说 明 书 CN 101941908 A CN 101941913 A5/8 页 8 LHCl， 水冲洗后， 将酸水解步骤中得到的酸水解产物 4.82g 水溶解后上样， 用 0.05mol/ LpH4.0 的乙酸 - 乙酸钠缓冲溶液洗脱， 流速为 0.5 柱体积每小时， 分段收集， 收集液浓缩蒸 干后分别得到咖啡酸 2.33g 及奎尼酸 1.82g。 0040 (5) 半合成步骤 00。
32、41 将步骤 (4) 中得到咖啡酸 2.33g 及奎尼酸 1.82g， 充分溶解于 41.5ml 乙醇， 过滤， 加入乙醇的体积与咖啡酸及奎尼酸总质量之比为 10 1( 体积质量比 )， 滤液加入 0.125g 732 型阳离子交换树脂作为催化剂， 催化剂与咖啡酸及奎尼酸总质量比为 3 100( 质量 比 )， 搅拌下升温到 80， 回流搅拌反应 2 小时， 反应结束后降温， 过滤去除催化剂， 滤液蒸 干后得到绿原酸 3.85g。 0042 (6) 结晶步骤 0043 将步骤 (5) 中得到的绿原酸 3.85g 解于 11.55ml 丙酮中， 所用丙酮的体积与绿原 酸质量之比为31(体积质量比。
33、)， 不断滴加乙酸乙酯， 直至不再产生沉淀为止， 4冷冻结 晶， 过滤， 晶体乙酸乙酯洗涤后， 干燥， 得到纯度大于 99的绿原酸 2.15g。 0044 实施例 2 0045 (1) 沉淀步骤 0046 取 200ml 金银花露加工残液， 加入 5的三氯醋酸水溶液 (V/V)10ml， 加入体 积与金银花露加工残液体积比为 1 20(V/V)， 同时加入氢氧化十六烷基三甲胺溴化物 (CTA-OH)16.0g， 其加入质量与金银花露加工残液体积的比为 0.08g/ml( 质量体积比 )， 20下搅拌反应40min后， 25静置8小时， 将过滤后得到的滤液， 浓缩至10ml， 其体积为金 银花露。
34、加工残液体积的 1/20， 得到沉淀液 10ml。 0047 (2) 大孔吸附树脂分离步骤 0048 将得到的沉淀液， 上样到 XDA-1 大孔吸附树脂后， 用 20的乙醇水溶液 (V/V) 洗 脱， 流速为1柱体积每小时， 弃去洗脱液， 再用50的乙醇水溶液(V/V)洗脱， 流速为2柱体 积每小时， 收集洗脱液后浓缩蒸干， 得到咖啡酰奎尼酸混合物 9.66g。 0049 (3) 酸水解步骤 0050 将得到的咖啡酰奎尼酸混合物 9.66g， 加入 193.2ml 水充分溶解， 所用水的体积与 咖啡酰奎尼酸混合物的质量比为 20 1( 体积质量比 )， 加入 48.3ml 3mol/L HCl。
35、 为酸解 液， 其体积与所用水的体积之比为 1 4( 体积比 )， 在 95下， 搅拌反应 2 小时后， 蒸干反 应液， 得到酸水解产物 9.68g。 0051 (4) 离子交换分离步骤 0052 选取 D001 型离子交换树脂装柱， 离子交换树脂依次用 2mol/L NaOH， 水， 3mol/ LHCl， 水冲洗后， 将酸水解步骤中得到的酸水解产物 9.68g 水溶解后上样， 用 0.2mol/ LpH3.6 的乙酸 - 乙酸钠缓冲溶液洗脱， 流速为 2 柱体积每小时， 分段收集， 收集液浓缩蒸干 后分别得到咖啡酸 2.68g 及奎尼酸 3.70g。 0053 (5) 半合成步骤 0054。
36、 将步骤 (4) 中得到咖啡酸 2.68g 及奎尼酸 3.70g， 充分溶解于 31.9ml 乙醇， 过滤， 加入乙醇的体积与咖啡酸及奎尼酸总质量之比为 5 1( 体积质量比 )， 滤液加入 0.128g 732 型阳离子交换树脂作为催化剂， 催化剂与咖啡酸及奎尼酸总质量比为 2 100( 质量 比 )， 搅拌下升温到 60， 回流搅拌反应 8 小时， 反应结束后降温， 过滤去除催化剂， 滤液蒸 说 明 书 CN 101941908 A CN 101941913 A6/8 页 9 干后得到绿原酸 7.79g。 0055 (6) 结晶步骤 0056 将步骤 (5) 中得到的绿原酸 7.79g 解。
37、于 7.79ml 丙酮中， 所用丙酮的体积与绿原酸 质量之比为 1 1( 体积质量比 )， 不断滴加乙酸乙酯， 直至不再产生沉淀为止， 4冷冻结 晶， 过滤， 晶体乙酸乙酯洗涤后， 干燥， 得到纯度大于 99的绿原酸 4.41g。 0057 实施例 3 0058 (1) 沉淀步骤 0059 取 300ml 金银花露加工残液， 加入 3的三氯醋酸水溶液 (V/V)20ml， 加入体积与 金银花露加工残液体积比为 1 15(V/V)， 同时加入十六烷基吡啶 (CP-OH)18.0g， 其加入 质量与金银花露加工残液体积的比为 0.06g/ml( 质量体积比 )， 40下搅拌反应 20min 后， 。
38、10静置 18 小时， 将过滤后得到的滤液， 浓缩至 10ml， 其体积为金银花露加工残液体积的 1/30， 得到沉淀液 10ml。 0060 (2) 大孔吸附树脂分离步骤 0061 将得到的沉淀液， 上样到D101大孔吸附树脂后， 用10的乙醇水溶液(V/V)洗脱， 流速为 2 柱体积每小时， 弃去洗脱液， 再用 30的乙醇水溶液 (V/V) 洗脱， 流速为 1 柱体积 每小时， 收集洗脱液后浓缩蒸干， 得到咖啡酰奎尼酸混合物 13.35g。 0062 (3) 酸水解步骤 0063 将得到的咖啡酰奎尼酸混合物 13.35g， 加入 133.5ml 水充分溶解， 所用水的体积 与咖啡酰奎尼酸混。
39、合物的质量比为 10 1( 体积质量比 )， 加入 22.25ml 5mol/L HCl 为酸 解液， 其体积与所用水的体积之比为 1 6( 体积比 )， 在 80下， 搅拌反应 6 小时后， 蒸干 反应液， 得到酸水解产物 13.54g。 0064 (4) 离子交换分离步骤 0065 选取 D113 型离子交换树脂装柱， 离子交换树脂依次用 2mol/L NaOH， 水， 3mol/ LHCl， 水冲洗后， 将酸水解步骤中得到的酸水解产物 13.54g 水溶解后上样， 用 0.1mol/ LpH3.8 的乙酸 - 乙酸钠缓冲溶液洗脱， 流速为 1 柱体积每小时， 分段收集， 收集液浓缩蒸干 。
40、后分别得到咖啡酸 6.77g 及奎尼酸 5.20g。 0066 (5) 半合成步骤 0067 将步骤(4)中得到咖啡酸6.77g及奎尼酸5.20g， 充分溶解于71.82ml乙醇， 过滤， 加入乙醇的体积与咖啡酸及奎尼酸总质量之比为 6 1( 体积质量比 )， 滤液加入 0.359g 732 型阳离子交换树脂作为催化剂， 催化剂与咖啡酸及奎尼酸总质量比为 3 100( 质量 比 )， 搅拌下升温到 70， 回流搅拌反应 6 小时， 反应结束后降温， 过滤去除催化剂， 滤液蒸 干后得到绿原酸 10.84g。 0068 (6) 结晶步骤 0069 将步骤 (5) 中得到的绿原酸 10.84g 解于。
41、 21.68ml 丙酮中， 所用丙酮的体积与绿原 酸质量之比为21(体积质量比)， 不断滴加乙酸乙酯， 直至不再产生沉淀为止， 4冷冻结 晶， 过滤， 晶体乙酸乙酯洗涤后， 干燥， 得到纯度大于 99的绿原酸 5.98g。 0070 实施例 4 0071 (1) 沉淀步骤 0072 取 400ml 金银花露加工残液， 加入三氟三氯乙烷 40ml， 加入体积与金银花露加工 说 明 书 CN 101941908 A CN 101941913 A7/8 页 10 残液体积比为 1 10(V/V)， 同时加入十六烷基三甲胺溴化物 (CTAB)20.0g， 其加入质量与 金银花露加工残液体积的比为0.0。
42、5g/ml(质量体积比)， 40下搅拌反应60min后， 4静置 24 小时， 将过滤后得到的滤液， 浓缩至 20ml， 其体积为金银花露加工残液体积的 1/20， 得到 沉淀液 20ml。 0073 (2) 大孔吸附树脂分离步骤 0074 将得到的沉淀液， 上样到NKA-9大孔吸附树脂后， 用5的乙醇水溶液(V/V)洗脱， 流速为 2 柱体积每小时， 弃去洗脱液， 再用 60的乙醇水溶液 (V/V) 洗脱， 流速为 1 柱体积 每小时， 收集洗脱液后浓缩蒸干， 得到咖啡酰奎尼酸混合物 19.45g。 0075 (3) 酸水解步骤 0076 将得到的咖啡酰奎尼酸混合物 19.45g， 加入 1。
43、94.5ml 水充分溶解， 所用水的体积 与咖啡酰奎尼酸混合物的质量比为 10 1( 体积质量比 )， 加入 24.3ml SOCl2为酸解液， 其 体积与所用水的体积之比为 1 8( 体积比 )， 在 95下， 搅拌反应 8 小时后， 蒸干反应液， 得到酸水解产物 19.57g。 0077 (4) 离子交换分离步骤 0078 选取 732 型离子交换树脂装柱， 离子交换树脂依次用 2mol/L NaOH， 水， 3mol/ LHCl， 水冲洗后， 将酸水解步骤中得到的酸水解产物 19.57g 水溶解后上样， 用 0.1mol/ LpH3.8 的乙酸 - 乙酸钠缓冲溶液洗脱， 流速为 1.5 。
44、柱体积每小时， 分段收集， 收集液浓缩蒸 干后分别得到咖啡酸 5.47g 及奎尼酸 7.58g。 0079 (5) 半合成步骤 0080 将步骤(4)中得到咖啡酸5.47g及奎尼酸7.58g， 充分溶解于65.25ml乙醇， 过滤， 加入乙醇的体积与咖啡酸及奎尼酸总质量之比为 5 1( 体积质量比 )， 滤液加入 0.065g 732 型阳离子交换树脂作为催化剂， 催化剂与咖啡酸及奎尼酸总质量比为 0.5 100( 质量 比 )， 搅拌下升温到 80， 回流搅拌反应 7 小时， 反应结束后降温， 过滤去除催化剂， 滤液蒸 干后得到绿原酸 15.66g。 0081 (6) 结晶步骤 0082 将。
45、步骤 (5) 中得到的绿原酸 15.66g 解于 31.32ml 丙酮中， 所用丙酮的体积与绿原 酸质量之比为21(体积质量比)， 不断滴加乙酸乙酯， 直至不再产生沉淀为止， 4冷冻结 晶， 过滤， 晶体乙酸乙酯洗涤后， 干燥， 得到纯度大于 99的绿原酸 8.68g。 0083 实施例 6 0084 (1) 沉淀步骤 0085 取 600ml 金银花露加工残液， 加入 4的三氯醋酸水溶液 (V/V)30ml， 加入体积与 金银花露加工残液体积比为 1 20(V/V)， 同时加入十六烷基吡啶 (CP-OH)12.0g， 其加入 质量与金银花露加工残液体积的比为 0.02g/ml( 质量体积比 。
46、)， 60下搅拌反应 50min 后， 15静置 24 小时， 将过滤后得到的滤液， 浓缩至 12ml， 其体积为金银花露加工残液体积的 1/50， 得到沉淀液 12ml。 0086 (2) 大孔吸附树脂分离步骤 0087 将得到的沉淀液， 上样到 X-5 大孔吸附树脂后， 用 20的乙醇水溶液 (V/V) 洗脱， 流速为 1 柱体积每小时， 弃去洗脱液， 再用 50的乙醇水溶液 (V/V) 洗脱， 流速为 0.5 柱体 积每小时， 收集洗脱液后浓缩蒸干， 得到咖啡酰奎尼酸混合物 26.9g。 说 明 书 CN 101941908 A CN 101941913 A8/8 页 11 0088 (。
47、3) 酸水解步骤 0089 将得到的咖啡酰奎尼酸混合物 26.9g， 加入 134.5ml 水充分溶解， 所用水的体积与 咖啡酰奎尼酸混合物的质量比为 5 1( 体积质量比 )， 加入 44.83ml C2Cl2O2为酸解液， 其 体积与所用水的体积之比为 1 3( 体积比 )， 在 95下， 搅拌反应 2 小时后， 蒸干反应液， 得到酸水解产物 27.65g。 0090 (4) 离子交换分离步骤 0091 选取 D113 型离子交换树脂装柱， 离子交换树脂依次用 2mol/L NaOH， 水， 3mol/ LHCl， 水冲洗后， 将酸水解步骤中得到的酸水解产物 27.65g 水溶解后上样， 。
48、用 0.2mol/ LpH3.6 的乙酸 - 乙酸钠缓冲溶液洗脱， 流速为 0.5 柱体积每小时， 分段收集， 收集液浓缩蒸 干后分别得到咖啡酸 13.83g 及奎尼酸 10.98g。 0092 (5) 半合成步骤 0093 将步骤 (4) 中得到咖啡酸 13.83g 及奎尼酸 10.98g， 充分溶解于 124.05ml 乙 醇， 过滤， 加入乙醇的体积与咖啡酸及奎尼酸总质量之比为 5 1( 体积质量比 )， 滤液 加入 0.744g 732 型阳离子交换树脂作为催化剂， 催化剂与咖啡酸及奎尼酸总质量比为 3100(质量比)， 搅拌下升温到60， 回流搅拌反应4小时， 反应结束后降温， 过滤去除催 化剂， 滤液蒸干后得到绿原酸 21.83g。 0094 (6) 结晶步骤 0095 将步骤 (5) 中得到的绿原酸 21.83g 解于 21.83ml 丙酮中， 所用丙酮的体积与绿原 酸质量之比为11(体积质量比)， 不断滴加乙酸乙酯， 直至不再产生沉淀为止， 4冷冻结 晶， 过滤， 晶体乙酸乙酯洗涤后， 干燥， 得到纯度大于 99的绿原酸 12.27g。 说 明 书 CN 101941908 A CN 101941913 A1/1 页 12 图 1 说 明 书 附 图 CN 101941908 A 。