亲和取代的海鞘素和N-氧化海鞘素 发明背景
海鞘素(ecteinascidins)(Ets)是非常有效的抗肿瘤剂，最初从海洋被囊动物Ecteinascidia turbinata中分离出来，尤其是Et 743、Et729、Et746和Et722表现出对肿瘤细胞系的显著的体内效力，所述肿瘤细胞系包括P388鼠白血病、B16黑素瘤、Lewis肺癌和小鼠中的人肿瘤异种移植模型。
Rinehart等继续的研究在许多方面涉及提供充足量的这些化合物，以用于临床实验、其抗肿瘤作用机制的研究和确定结构活性关系。另外，其它Et化合物无论是较少的天然组分还是前体化合物，它们的发现将不仅提供其生物合成途径的证据，而且在确定结构活性关系方面，也应该是有用的。
发明概述
本发明涉及几种新发现的海鞘素(Et)化合物，所有这些化合物均分离自Ecteinascidia turbinata的提取物。对于先前发现的海鞘素化合物的详细讨论以及用于其分离和纯化的方法，参见Sakai等，J.Amer.Chem.Soc.，1996，118，9017，其公开内容通过引用结合到本文中。
本文报道的新的海鞘素化合物的结构如下：1：ET802，R1＝Ac，R2＝Me2：ET760，R1＝H，R2＝Me3：ET788，R1＝Ac，R2＝H4：ET858，R1＝Ac，R2＝Me5：ET815，R1＝Ac，R2＝Me6：ET717，R1＝H，R2＝Me7：ET776，R1＝Ac，R2＝H8：ET789，R1＝Ac，R2＝Me(碎片ET 757)9：ET832，R1＝Ac，R2＝Me(碎片ET 813)
附图简述
图1图示用来从Ecteinascidia turbinata的提取物中分离Et 717、Et 815、Et 813、Et 729和Et 731的层析方法。
图2图示用来从Ecteinascidia turbinata的提取物中分离Et 729、Et 743、Et 788、Et 757、Et 789、Et 775、Et 745、Et 760、Et802、Et 858和Et 745地层析方法。
图3图示用来从Ecteinascidia turbinata的提取物中分离Et 771、Et 759A、Et 743和Et 729的层析方法。
图4描述了Et 802的MS/MS裂解过程。
图5描述了Et 760的MS/MS裂解过程。
图6描述了Et 788的MS/MS裂解过程。
图7A描述了Et 858的MS/MS裂解过程，图7B描述了其碎片离子(m/z 800)的MS/MS裂解过程。
图8描述了Et 717的MS/MS裂解过程。
图9A描述了Et 789(8，R＝CH3)和Et 775(7，R＝H)的MS/MS裂解过程。图9B描述了用草酸处理的Et 789反应产物的MS/MS裂解过程。
发明详述
通过CCC、NP和RP柱层析和RP-C18 HPLC(如图1-3所述)从Ecteinascidia turbinata的提取物中，分离并纯化了5种新的、亲和取代的海鞘素化合物(本文命名为Et 802(1)、Et 788(2)、Et 760(3)、Et858(4)、Et 815(5))和3种新的N＝氧化海鞘素(本文命名为Et 717(6)、Et 775(7)和Et 789(8))。
根据质谱数据(HRFABMS，MS/MS裂解过程)和1D和2D-NMR波谱数据的详细分析，确定了所述新Et化合物的结构。图4-9分别描述了Et 802、Et 760、Et 788、Et 858、Et 717和Et 789的MS/MS裂解过程。
某些所述新海鞘素化合物的波谱数据包括：
Et 802(1)：HRFABMS：m/z 803.2962，M+H离子，C41H47N4O11S，Δ＝3.1mDa；1H NMR，δ4.15(d，1，H＝1)，3.45(br.d，H-3)，4.50(br，H-4)，4.19(dd，1，2，H11)，3.09(d，12，H13)，2.98(d，15，H14a)，2.81(dd，12，15，H14b)，6.46(s，H15)，5.08(dd，2，8，H21)，5.24(d，11，H22a)，4.01(dd，1，11，H22b)，3.18(ddd，H3’a)，2.78(ddd，H3’b)，2.58(ddd，H4’a)，2.30(ddd，H4’b)，6.46(s，H5’)，6.36(s，H8’)，2.24(d，12，H12’a)，1.93(d，12，H12’b)，6.09(s，＝OCH2O＝)，6.03(s，-OCH2O＝)，3.52(s，7’OMe)，3.66(s，17OMe)，2.25(s，AcMe)，2.07(s，NMe)，2.24(s，16Me)，1.96(s，6Me)，2.03(s，NHCOMe)。
Et 788(2)：HRFABMS：m/z 789.2806，M+H离子，C40H45N4O11S，Δ＝1.0mDa；1H NMR，δ4.21(d，1，H-1)，3.45(br.d，H-3)，4.50(br，H-4)，4.24(dd，1，2，H11)，3.09(d，12，H13)，6.48(S，H15)，5.11(dd，2，8，H21)，5.30(d，11，H22a)，4.01(dd，1，11，H22b)，6.48(s，H5’)，6.39(s，H8’)，6.13(s，-OCH2O-)，6.07(s，-OCH2O-)，3.56(s，7’OMe)，3.67(s，17OMe)，2.25(s，AcMe)，2.24(s，16Me)，1.96(s，6Me)，2.03(s，NHCOMe)。
Et 760(3)：HRFABMS：m/z 761.2856，M+H离子，C39H45N4O10S，Δ＝0.2mDa；1H NMR，δ4.15(d，1，H-1)，3.56(br.d，H-3)，4.50(br，H-4)，4.32(dd，1，2，H11)，3.09(d，12，H13)，3.00(d，15，H14a)，2.86(dd，12，15，H14b)，6.52(S，H15)，5.11(dd，2，8，H21)，5.20(d，11，H22a)，4.01(dd，1，11，H22b)，3.18(ddd，H3’a)，2.78(ddd，H3’b)，2.58(ddd，H4’a)，2.30(ddd，H4’b)，6.38(s，H5’)，6.34(s，H8’)，2.24(d，12，H12’a)，2.03(d，12，H12’b)，5.98(s，-OCH2O-)，5.85(s，-OCH2O-)，3.54(s，7’OMe)，3.74(s，17OMe)，2.13(s，NMe)，2.29(s，16Me)，2.06(s，6Me)，2.12(s，NHCOMe)。
Et 858(4)：HRFABMS：m/z 859.3192，M+H离子，C44H51N4O12S，Δ＝3.2mDa；碎片离子m/z 800：m/z 800.2825，M+H离子，C42H46N3O11S，Δ＝2.8mDa；Et 858，1H NMR，δ4.13(br.s，H-1)，3.41(br.d，H-3)，4.50(br，H-4)，4.36(d，3，H11)，2.79(d，13，H13)，3.01(d，12，H14a)，2.88(dd，12，13，H14b)，6.50(S，H15)，5.10(d，2，H21)，5.28(d，11，H22a)，4.09(dd，1.5，11，H22b)，3.18(ddd，H3’a)，2.62(ddd，H3’b)，2.53(ddd，H4’a)，2.45(ddd，H4’b)，6.43(s，H5’)，6.38(s，H8’)，2.25(d，12，H12’a)，2.14(d，12，H12’b)，6.08(s，-OCH2O-)，5.98(s，-OCH2O-)，3.57(s，7’OMe)，3.73(s，17OMe)，2.28(s，AcMe)，2.27(s，16Me)，2.01(s，6Me)，2.15(s，NHCOMe)，2.09(s，NHCOMe)，3.25(NHCOMe)，2.64(m，NHCOMe)。
Et 717(6)：HRFABMS：m/z 718.2435，M+H离子，C37H40N3O10S，Δ＝-0.1mDa；1H NMR，δ6.55(H15)，6.44(H8’)，6.38(H5’)，6.07，5.92(-OCH2O-)，5.78，4.09(H22a，b)，5.30(H1)，5.19(H21)，4.92(H4)，4.57(H11)，4.41(H3)，3.64(H13)，3.22，2.91(H14a，b)，3.00，2.85(H3’a，b)，2.61，2.38(H4’a，b)，3.74(17-OCH3)，3.54(7’-OCH3)，2.35(6-CH3)，2.27(16-CH3)，2.16(N-CH3)。
Et 775(7)：HRFABMS：m/z 776，C39H42N3O12S，Δ＝-0.0mDa。
Et 789(8)：HRFABMS：m/z 790，C40H44N3O12S，Δ＝-0.2mDa；在1H NMR中观察到12N-CH3，δ2.65(单峰)。
这些新的海鞘素化合物中的几种对L1210表现出非常有效的细胞毒性(参见表1)。
表1
Et化合物 对L1210的IC50ng/ml
Et 802(1) 7
Et 788(2) 0.5
Et 760(3) 32
Et 858(4) 0.4
Et 815(5) 0.4
如上所示，本发明涉及生物活性化合物。这些化合物已经以基本纯的形式制备，即其纯度足以允许进行其物理学和生物学鉴定。如上所述，已经发现这些化合物具有特定的抗肿瘤活性，因此它们可用作哺乳动物、特别是人类的药物。因此，本发明的另一方面涉及含有本文鉴定的活性化合物的药用组合物和使用这类药用组合物的治疗方法。
本发明的活性化合物表现出抗肿瘤活性。因此，本发明也提供对哺乳动物的治疗方法，所述哺乳动物为受对这些化合物敏感的恶性肿瘤影响的任何哺乳动物，该方法包括给予所述受影响个体治疗有效量的活性化合物或化合物的混合物、或其药用组合物。本发明也涉及药用制剂，所述药用制剂包含作为活性组分的一种或多种本发明的化合物，本发明也涉及制备所述药用制剂的方法。
药用组合物的实例包括具有合适组成的任何固体(片剂、丸剂、胶囊、颗粒剂等)或液体(溶液、悬浮液或乳液)即用于经口、局部或胃肠外给药的组合物，它们可以含有纯化合物，或与任何载体或其它药理学活性化合物结合使用。当胃肠外给予时，这些组合物可能需要是无菌的。
包含本发明化合物的药用组合物的正确的剂量，将根据具体制剂、应用方式以及特别是部位、宿主和待治疗的细菌或肿瘤而变化。还应该考虑其它因素，如年龄，体重、性别、饮食、给药时间、排泄速率、该宿主的身体状况、药物组合、反应敏感性和该疾病的严重性。可以在最大耐受的剂量范围内，进行连续或定期给药。
也分离了几种已知的海鞘素化合物，包括Et 743和Et 729，如以下表2所示。
表2
分离的Et化合物的量部分A(550mg) 部分B(261mg) 部分C(40mg)Et 729 39.4mg Et 729 31.6mg Et 743 10.2mgEt 731 11.1mg Et 743 0.9mg Et 771 5.8mgEt 745 45.4mg Et 745 6.0mg Et 759A 3.5mgEt 759B 46.4mg Et 802(1) 1.4mg*Et 597 3.4mg Et 788(2) 0.2mg*Et 717(6) 2.6mg* Et 760(3) 1.0mg*Et 815(5) 5.1mg* Et 858(4) 0.5mg*Et 814(9) 5.9mg* Et789(8) 1.5mg*
Et 775(7) 0.5mg**-新的海鞘素化合物
已经详细描述了本发明，包括其优选的实施方案。然而，本领域技术人员会认识到，考虑本说明书时，可以对本发明进行修改和/或改进，这仍在以下权利要求书中提出的本发明的范围和精神内。