用于镰状细胞疾病的三芳基甲烷化合物 1.相关申请案之对照
本申请案为于1996年3月20日提出申请的待批申请案No.08/618,592及于1996年3月20日提出申请的待批申请案No.08/618,760的部份继续申请案，其每一个申请案为于1994年9月16日提出申请且目前放弃的申请案No.08/307,874的部份继续申请案。本申请案亦为于1996年3月20日提出申请的待批申请案No.08/618,762及于1996年3月20日提出申请的待批申请案No.08/618,759的部份继续申请案，其每一个申请案为于1994年9月16日提出申请且目前放弃的申请案No.08/307,887的部份继续申请案。这些申请案完全并于此处作为参考。
2.发明领域
本发明涉及芳香族有机化合物，为红细胞及/或哺乳动物细胞增殖的Ca2+活化钾通道(Gardos通道)的有效且安全的特异性抑制剂。该化合物可被用作对镰状细胞疾病的治疗或预防的原位治疗方法以降低镰状细胞脱水及/或延迟红细胞镰状化的产生或变形。该化合物亦可被用作对以异常细胞增殖为特征的疾病的治疗或预防的原位治疗方法以抑制哺乳动物细胞增殖。
3.发明背景
在西非的范围内，数世纪以来镰状细胞疾病已被公认。镰状细胞性贫血及镰状血红素(HbS)的存在是首先在分子水平被认识的遗传疾病。目前已了解这是在β球蛋白链第6位的甘氨酸对缬氨酸取代的形态学和临床结果(Ingram，1956，Nature 178：792-794)。氨基酸改变地疾病状态之起源为单一核苷酸取代的结果(Marotta等人，1977，J.Biol.Chem.252：5040-5053)。
患有镰状细胞疾病之患者的罹病率及死亡的主要原因为由镰状细胞导致的血管闭合，导致急性或慢性疼痛的反复发作且随着时间的流逝而导致进行性器官损坏。关于完全除氧作用的镰状红细胞的变形及歪扭系由镰状血红素，血红素S(Hb S)的聚合作用及细胞内凝胶化所致，这已被长期了解与接受。该现象已被Eaton及Hofrichter，1987，Blood 70：1245全面回顾及讨论。在红细胞通过血管分布的行程期间，Hb S的细胞内凝胶化及聚合作用可发生在任何时期。因此，在具有镰状细胞疾病的患者中的含非聚合血红素S的红细胞可能通过微循环且回到肺而无镰状化，可能在静脉内镰状化或可在毛细血管中镰状化。
每一种结果的可能性系由细胞内凝胶化之延迟时间相对于适当的毛细管输送时间而被测定(Eaton等人，1976，Blood 47：621)。或者，该延迟时间视血红素的氧合状态而定，具有除氧作用可缩短延迟时间。因此，若其热力学不可能发生细胞内凝胶化，或若在静脉之氧压的延迟时间长于约15秒，细胞镰状化将不会发生。二者取一，若延迟时间在约1及15秒间，红细胞将有可能在静脉内镰状化。然而，若延迟时间少于约1秒，红细胞将在毛细管内镰状化。
对于镰状细胞在毛细血管中而言，一些可能的必然事件存在，范围从在过度时间无影响，至毛细血管之短暂闭合，至较多永久的阻断，后者可决定性地造成周围细胞之局部缺血或梗塞形成，及红细胞的破坏。
长久以来已了解正常红细胞的胞浆包括约70％水。水以毫秒计穿过正常红细胞膜；然而，细胞水分的损失导致在胞浆黏度指数增加，平均细胞血红素浓度(MCHC)上升至约32克/分升。既然胞浆黏度为红细胞变形及镰状细胞化的主要决定因素，红细胞之脱水具有实质的流体力学及病理学影响。因此，保持正常红细胞含水量的生理机制及在血液循环中水份自红细胞中损失的病理状况其重要性是具有决定性的。已了解红细胞脱水的调节是对镰状细胞疾病的重要治疗方法。既然细胞水份依赖于细胞内离子浓度的渗透变化，红细胞内钾离子浓度的维持尤为重要(Stuart及Ellory，1988，BritJ.Haematol.69：1-4)。
许多对于脱水镰状细胞治疗的尝试及方法(及通过降低血浆渗透摩尔浓度而减少血红素B的聚合作用)已被尝试但很少成功，包括下列方法：静脉输注蒸馏水(Gye等人，1973，Am.J.Med，Sci.266：267-277)；给予抗利尿激素增压素和高流体摄取及限制盐类(Rosa等人，1980，M.Eng.J.Med.303：1138-1143)；Charache及Walker，1981，Blood 58：892-896)；使用莫能菌素以增加镰状细胞的阳离子含量(Clark等人，1982，J.Clin.Invest.70：1074-1080；Fahim及Pressman，1981，LifeSciences 29：1959-1966)；西替地尔柠檬酸盐的静脉给药(Benjamin等人，1986，Blood 67：1442-1447；Berkowitz及Orringer，1984，Am.J.Heamtol.17：217-223；Stuart等人，1987，J.Clin.Pathol.40：1182-1186)；及使用己酮可可硷(Stuart等人，1987，J.Clin.Pathol.40：1182-1186)。
另外对于治疗上的治疗脱水镰状细胞的方法包括给予咪唑、硝基咪唑及三唑抗霉菌剂，例如，氯三苯甲咪唑(美国专利号5,273,992，Brugnara等人)。氯三苯甲咪唑为包含咪唑的抗霉菌剂，已证明是在体外和体内均特别有效的正常及镰状细胞Gardos通道抑制剂，且防止镰状细胞之Ca2+依赖性脱水(Brugnara等人，1993，J.Clin.Invest.92：520-526；De Franceschi等人，1994，J.Clin.Invest.93：1670-1676)。当与稳定Hb S氧化型化合物结合时，氯三苯甲咪唑还降低微孔过滤器的阻塞速度且可减少不可逆镰状细胞的形成(Stuart等人，1994，J.Haematol.86：820-823)。据信可通过抑制Gardos通道而有效降低镰状细胞脱水的其他包含杂芳基咪唑类似部分的化合物包括双氯苯咪唑，氯苯甲氧咪唑，必托康那唑(butoconazole)，欧细康那唑(oxiconazole)及氯苄硫咪唑。这些化合物每一个皆为已知的抗霉菌剂。其他包含咪唑的化合物已被发现不能抑制Gardos通道及阻止钾的丢失。
从上述讨论中可知，藉由阻断Gardos通道而降低镰状细胞脱水为治疗及/或预防镰状细胞疾病的非常有效的治疗方法。能抑制Gardos通道及降低镰状细胞脱水的化合物为高度需求的，从而是本发明的一个目的。
细胞增殖为哺乳动物生存的正常部分，为其生命所必须。然而，细胞增殖并不总是所希望的，最近已显示它是许多威胁生命的疾病，如癌症、特应性皮肤病、炎症、纤维变性及动脉硬化状态之根源。
细胞增殖严格地依赖于对离子通过不同细胞间隔的有控制的移动，且与DNA合成有关。特异性多肽生长因子对与生长休止细胞中的特异性受体的结合引发早期离子信号的排列，这种离子信号排列在产生有丝分裂的连锁反应、最后导致DNA合成中是关键性的(Rozengurt，1986，Science 234：161-164)。它们包括(1)细胞(cystolic)Ca2+之快速增加，主要地由于Ca2+自细胞内贮存中快速释放；(2)随着胞浆膜中配体结合及超极化-敏感性Ca2+通道的开放而产生的获能性(capacitative)Ca2+流入，其进一步有利于细胞内Ca2+浓度的增加(Tsien及Tsien，1990，Annu.Rev.Cell Biol.6：715-760)；Peppelenbosch等人，1991，J.Biol.Chem.266：19938-19944)；及(3)在胞浆膜内Ca2+依赖性K+通道的激活伴有K+电导增加及膜的超极化(Magni等人，1991，J.Biol.Chem，261：9321-9327)。这些诱导有丝分裂的早期离子变化，在信号传导路径中被认为是关键性的，在正常及恶性细胞中对细胞增殖的抑制为最有效的治疗目标。
通过改变与早期有丝分裂信号有关的离子流动来治疗以不合要求的或异常的细胞增殖为特征的疾病的方法，包括给予氯三苯甲咪唑。如前所述，氯三苯甲咪唑已显示出可抑制红细胞的Ca2+活化钾通道。此外，氯三苯甲咪唑抑制在有核细胞中电压及配体激活的Ca2+流入机制(Villalobos等人，1992，FASEB J.6：2742-2747；Montero等人，1991，Biochem.J.277：73-79)及抑制在体外及体内试验中的细胞增殖(Benzaquen等人，1995，Nature Medicine 1：534-540)。最近，氯三苯甲咪唑及其他能抑制Ca2+活化钾通道的包含咪唑的抗霉菌素已显示出对动脉硬化(美国专利号No.5,358,959，Halperin等人)，及其他以不合要求的或异常的细胞增殖为特征的病症的治疗有效。
从前述讨论中可了解，通过改变与早期有丝分裂信号有关的离子流动抑制哺乳动物细胞增殖是治疗和/或预防以不合要求的或异常的细胞增殖为特征的疾病的最有效的治疗方法。能抑制哺乳动物细胞增殖的化合物为高度需求，因此亦为本发明的一个目的。
4.发明概述
本发明提供这些及其他的目的，其中一方面为提供一类有机化合物，它是红细胞，特别是镰状细胞，和/或哺乳动物细胞增殖的Ca2+活化钾通道(Gardos通道)的有效且安全的特异性抑制剂。该化合物一般为经取代的三芳基甲烷化合物或其类似物，其中一或多个芳基部份被杂芳基、环烷基或杂环烷基部份所取代及/或其中季碳被另外的原子如硅、锗、氮或磷所取代。
在一个列举的具体实施例中，本发明的能抑制Gardos通道及/或哺乳动物细胞增殖的化合物为具有结构式(I)的化合物或其医药上可接受的盐类或水合物：
其中
n为0，1，2，3或4；
X为无，(C1-C3)烷基，(C1-C3)烯基，或(C1-C3)炔基；
Y为碳，氮，磷，硅或锗；
R1为无，卤素，-R，-OR，-SR，-NR2，-ONR2，-NO2，-CN，-C(O)R，-C(S)R，-C(O)OR，-C(S)OR，-C(O)SR，-C(S)SR，-C(O)NR2，-C(S)NR2，-C(O)NR(OR)，-C(S)NR(OR)，-C(O)NR(SR)，-C(S)NR(SR)，-CH(CN)2，-CH[C(O)R]2，-CH[C(S)R]2，-CH[C(O)OR]2，-CH[C(S)OR]2，-CH[C(O)SR]2，-CH[C(S)SR]2或芳基；
Ar1为芳基，经取代的芳基，除了咪唑、硝基咪唑及三唑外的杂芳基，除了咪唑鎓，硝基咪唑鎓及三唑鎓外的杂芳基鎓，(C5-C8)环烷基或(C5-C8)杂环烷基；
Ar2为芳基或经取代的芳基；
Ar3为芳基，经取代的芳基、二芳基或除了咪唑、硝基咪唑及三唑外的杂芳基；
每一个R各自独立地选自氢、(C1-C6)烷基，经取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、经取代的(C1-C6)烯基、(C1-C6)炔基、经取代之(C1-C6)炔基及(C1-C6)烷氧基所组成的组；
该芳基取代基各自独立地选自卤素、三卤甲基、-R、-R′、-OR′、-SR′、NR′2、-NO2、-CN、-C(O)(O)R′、-C(S)R′、-C(O)OR′、-C(S)OR′、-C(O)SR′及-C(S)SR′所组成的组；
该烷基、烯基及炔基取代基各自独立地选自卤素、-R′、-OR′、-SR′、NR′2、-NO2、-CN、-C(O)R′、-C(S)R′、-C(O)OR′、-C(S)OR′、-C(O)SR′、-C(S)SR′、芳基、γ-丁内酯基、吡咯烷基及琥珀酐基所组成之族群中；及
每一个R′各自独立为选择自氢、(C1-C6)烷基，(C1-C6)烯基及(C1-C6)炔基。
另一方面，本发明提供包括一种或数种本发明的化合物与医药上可接受的载体，赋形剂或稀释剂混合的医药组合物。这种制剂可用本发明的方法给药。
另一方面，本发明提供一种原位降低镰状细胞脱水及/或延迟红细胞镰状细胞化或变形的方法。该方法包括以降低镰状细胞脱水及/或延迟红细胞镰状细胞化或变形的有效量将至少一种本发明的化合物或其医药组合物原位接触镰状细胞。在一较佳具体实施例中，分布于患者微循环血管的镰状细胞中的镰状细胞脱水降低且红细胞变形延迟，从而防止或降低通常由镰状细胞所导致的血管闭合及必然的不良作用。
另一方面，本发明提供一种治疗及/或预防患者如人类中的镰状细胞疾病的方法。该方法包括将预防或治疗有效量的至少一种本发明的化合物或其医药组合物施与患有镰状细胞疾病的患者，该患者可能患有急性镰状危象或慢性镰状细胞病发作。
另一方面，本发明提供一种原位抑制哺乳动物细胞增殖的方法。该方法包括以抑制细胞增殖有效量的至少一种本发明的化合物或其医药组合物原位接触哺乳动物细胞。该化合物或组合物可抑制细胞或产生细胞毒作用或结合这两种机制以抑制细胞增殖。此方法中的哺乳动物细胞包括血管平滑肌细胞、成纤维组织细胞、内皮细胞、不同形式的初期癌细胞及不同形式的癌细胞。
另一方面，本发明提供一种治疗及/或预防患者如人类中不合要求或异常的细胞增殖的方法。在该方法中，至少一种本发明的化合物或其医药组合物，以抑制不合要求或异常的细胞增殖的有效量施与需要此种治疗的患者。该化合物及/或组合物可局部应用于增生细胞，或可给患者全身使用。较佳地，该化合物及/或组合物被施与患有不合要求或异常的细胞增殖为特征的病症的患者。此种病症包括(但不局限于)癌症、上皮癌前病灶，非癌性血管源性病症或动脉硬化。
最后一个方面，本发明提供一种治疗及/或预防以不合要求及/或异常的哺乳动物细胞增殖为特征的疾病的方法。该方法包括将预防或治疗有效量的至少一种本发明之化合物或其医药组合物，施与需要此种治疗的患者。可借助本发明的方法治疗或预防的以异常哺乳动物细胞增殖为特征的疾病包括(但不局限于)癌症、血管增生疾病、纤维变性疾病及动脉硬化状态。
4.1定义
本文所使用的下列名词具有如下意义：
＂烷基＂指饱和的支链、直链或环状烃基。典型地，烷基基团包括甲基，乙基，丙基，异丙基，环丙基，丁基，异丁基，叔丁基，环丁基，戊基，异戊基，环戊基，己基，环己基及其类似物。
＂杂环烷基”指饱和环状烃基，其中一或多个碳原子被另一原子，例如，硅、锗、氮、氧、硫或磷所取代。典型地杂环烷基基团包括(但不局限于)吗啉代基，thiolino，氮杂环己基，吡咯烷基，哌嗪基，吡唑烷基，咪唑烷基及其类似物。
＂烯基＂指具有至少一个碳-碳双键的不饱和的支链、直链或环状烃基。该基在双键上可为顺式或反式构型。典型地，烯基基团包括乙烯基，丙烯基，异丙烯基，环丙烯基，丁烯基，异丁烯基，环丁烯基，叔丁烯基，戊烯基，己烯基及其类似物。
＂炔基＂指具有至少一个碳-碳三键的不饱和的支链，直链或环状烃基。典型地，炔基基团包括乙炔基，炔丙基，丁炔基，异丁炔基，戊炔基，己炔基及其类似物。
＂烷氧基＂指-OR基，其中R为烷基、烯基或炔基，定义如前。
＂芳基＂指具有共轭π电子系统的不饱和环状烃基。典型地，芳基基团包括(但不局限于)戊-2，4-二烯基，苯基，萘基，蒽基，奥基，二环戊二烯并苯基，及其类似物。
＂杂芳基＂指环上一个或多个碳原子被其他原子如氮，氧或硫所取的芳基基团。典型地，杂芳基基团包括(但不局限于)呋喃基，噻吩基，吲哚基，吡咯基，哌喃基，吡啶基，嘧啶基，吡唑基(pyraxyl)，哒嗪基(pyridazyl)，及其类似物。
＂杂芳基鎓＂系指杂芳基基团其中一个或多个氢被加至中间母环之任一位置。典型地，杂芳基鎓基团包括(但不局限于)吡啶鎓，吡唑鎓(pyrazinium)，嘧啶鎓(pyrimidinium)，哒嗪鎓(pyridazinium)，1，3，5-三唑鎓(1，3，5-triazinium)，及其类似物。
＂原位＂指且包括术语“活体内”，“活体外”及“玻管内”，这些名词为一般熟于此技艺人士所了解。此外，本文中的“原位”在其最广的内涵和外延意义上被用来鉴别一种实体，细胞或组织，当其被发现或在适当位置时(无论其来源或起源如何)其情况或状态或其在该位置上的时间或生命的长度。
5.发明详述
如同在发明背景部分所讨论，通过抑制Gardos通道来阻断镰状细胞脱水对镰状细胞疾病的治疗及/或预防来说是最有效的治疗手段。体外试验研究已显示出氯三苯甲咪唑，一种包含咪唑之抗霉菌剂，阻断镰状细胞中之Ca2+激活的K+转运及细胞脱水(Brugnara等人，1993，J.Clin.Invest.92：520-526)。在对镰状细胞疾病之转基因小鼠模型中之研究(SAD mouse，Trudel等人，1991，EMBO J.11：3157-3165)显示氯三苯甲咪唑之施与导致红细胞Gardos通道之抑制，增加红细胞K+含量，减少平均细胞血红素浓度(MCHC)及减少细胞密度(De Franceschi等人，1994，J.Clin.Invest.93：1670-1676)。而且，以口服氯三苯甲咪唑治疗法包括于患有镰状细胞疾病之患者中Gardos通道之抑制及减少红细胞脱水(Brugnara等人，1996，J.Clin.Invest.97：1227-1234)。其他在玻管内抑制Gardos通道之抗霉菌剂包括双氯苯咪唑，氯苯甲氧咪唑，必托康那唑(butoconazole)，欧细康那唑(oxiconazole)及氯苄硫咪唑(美国专利案号5,273,992 Brugnara等人)。这些所有化合物包含类似咪唑环，即，包含两个或多个氮之杂芳环。
亦如在发明背景中所讨论，早期离子产生有丝分裂信号之调节及细胞增殖之抑制为对治疗及/或防止其特徴为异常细胞增殖之疾病之最有效的治疗方法。其已显示出氯三苯甲咪唑，除了抑制红细胞之Gardos通道外，亦可在玻管内及活体内调节离子产生有丝分裂信号及抑制细胞增殖。
例如，氯三苯甲咪唑抑制正常及癌症细胞系之细胞增殖的速率在玻管内系以可逆的及剂量依赖的方式(Benzaquen等人，1995，Nature Medicine 1：534-540)。氯三苯甲咪唑亦耗尽细胞内Ca2+储存及防止在细胞Ca2+提升其正常地接着产生有丝分裂刺激。而且，在具有严重混合型免疫缺乏及接种MM-RU人类黑色瘤细胞之鼠中，每天施与氯三苯甲咪唑造成在观察的肺转移数目明显降低(Benzaquen等人，在前)。
相当惊讶地，其目前已发现氯三苯甲咪唑之类似咪唑环部分及其他上述抗霉菌剂，以它们的抗霉菌及其他生物活性为基础之必要功能被完全了解，并非以影响Gardos通道之抑制或产生有丝分裂诱导哺乳动物细胞增殖之抑制的功能为基础。因而，部分基于此惊讶的发现，在本发明之一个观点中提供一新种类之有机化合物其能抑制红细胞，特别是镰状细胞之Ca2+活化钾道(Gardos通道)及/或抑制哺乳动物细胞增殖，特别是产生有丝分裂诱导细胞增殖。
在另一观点中，本发明提供一种原位降低镰状细胞脱水及/或延迟红细胞镰状细胞素质之产生之方法以作为对镰状细胞疾病治疗之治疗方法。在其广泛的意义中，该方法仅包括单一步骤-以有效降低脱水及/或延迟镰状细胞素质之产生或变形的量原位施与至少一种本发明之医药活性化合物，或其组合物，至镰状细胞。
并没有意欲被任何其他特别理论约束，其相信原位施与适当量之此处所描述的活性化合物至镰状细胞可导致镰状细胞之Gardos通道之几乎完全抑制，藉以降低镰状细胞脱水及/或延迟红细胞镰状细胞素质之产生或变形。在一较佳具体实施例中，镰状细胞脱水之降低及/或在镰状细胞中之镰状细胞素质之产生延迟为在患者之微循环血管分布间，藉以降低或排除一般系由镰状细胞所导致之血管闭合。
部分基于Gardos通道于作为在镰状细胞疾病之治疗中治疗标的之推测的重要性，本发明亦关于治疗或防止镰状细胞疾病之方法。在该方法中，一有效量之根据本发明之一种或多种化合物，或其医药组合物，被施与至患有镰状细胞疾病之患者中。该方法可被使用来治疗镰状细胞疾病，预防地减少细胞内Hb S浓度及/或增生，且因此减少在血液循环中之红细胞镰状细胞素质及血管闭合之时间及期间。该方法亦可被使用来治疗具有急性镰状细胞危象之患者，及患有慢性镰状细胞发作之患者以控制危象之频率及期间。
本发明之化合物亦为有效，特别的哺乳动物细胞增殖之抑制剂。因此，在另一观点中，本发明提供抑制哺乳动物细胞增殖之方法以作为对治疗或防止其特徵为不欲或异常细胞增殖之疾病之治疗方法。在其广泛的意义中，该方法仅包括单一步骤-原位施与有效量之至少一种本发明之医药活性化合物至哺乳动物细胞。该化合物可抑制细胞地，细胞毒素地，或经由结合两种机制的作用以抑制细胞增殖。可以此种方法治疗之哺乳动物细胞包括血管平滑肌细胞，纤维组织母细胞，内皮细胞，不同形式的初期癌细胞及不同形式的癌细胞。在一较佳具体实施例中，于患有其特徵为不欲或异常细胞增殖之病症之患者中之细胞增殖被抑制。此种疾病将被较完整地描述如下。
部分基于在特定疾病中之哺乳动物细胞增殖之推测角色，本发明亦关于治疗或防止其特徵为异常细胞增殖之疾病。在该方法中，一有效量之根据本发明之至少一种化合物，或其医药组合物，被施与至患有其特徵为异常细胞增殖病症之患者中。并没有意欲被任何其他特别理论约束，其相信对患者施与适当量之根据本发明的化合物经由改变与早期产生有丝分裂信号有关之离子通量而抑制细胞增殖。此种离子通量之交替被认为是由于本发明化合物抑制细胞之钾通道，特别是Ca2+钾通道之能力。该方法可被预防地使用以防止不欲或异常细胞增殖，或可被治疗地使用以降低或停止异常增生细胞之增生。该化合物，或其医药配方，可被局部使用于增生细胞以在所欲时间停止或抑制增生，或可被系统性地施与至患者以停止或抑制细胞增殖。
可藉由本发明治疗或防止之其特徵为异常细胞增殖之疾病包括血管增生疾病，纤维变性疾病，动脉硬化疾病及不同的癌症。
血管增生病症系指一般造成血管异常增生之血管原的及血管形成的病症。该血管之形成及散布，或脉管发生及血管发生，个别地，在不同的生理过程，例如，胚胎的发展，黄体形成，伤口愈合及器官再生中扮演重要的角色。它们在癌症发展中亦扮演重要的角色。其他血管增生病症的实施例包括关节炎，其中新的微血管侵袭关节及破坏软骨及眼疾，例如，糖尿病性视网膜病，其中新的微血管侵袭玻璃体，出血及导致失明及新生血管青光眼。
异常新血管增生之另外的实施例为与固体肿瘤有关。其目前已建立肿瘤之未限制生长为视血管发生而定及经由血管增生因子之释放诱导血管发生可为癌之发生的一个重要步骤。例如，基本纤维组织母细胞生长因子(bFGF)被数种癌细胞释放及在癌症血管发生中扮演决定性的因子。当血管发生被抑制时，特定动物肿瘤消退之证明已提供对于在肿瘤生长中之角色之最强制性的证据。其他与新血管增生有关之癌症包括血管内皮瘤，血管瘤及卡波西氏肉瘤。
内皮及血管平滑肌细胞之增生为新血管增生之主要特徵。本发明为有效于此增生之抑制，且因此抑制或停止其视整个或部分此新血管增生而定之血管增生状况的进展。本发明为当有不必与新血管增生有关之内皮或血管平滑肌细胞增殖之额外要素状况时，特别有效。例如，牛皮癣可另外地包括内皮细胞增殖，其与有关于新血管增生之内皮细胞增殖无关。同样地，需要新血管增生以持续成长之固体肿瘤亦可能是内皮或血管平滑肌细胞之肿瘤。在此例子中，肿瘤细胞其本身之生长，及新血管增生，可经由此处所描述之化合物抑制。
本发明亦为有效于治疗纤维变性疾病例如，纤维变性及其他造成整个或部分来自纤维组织母细胞增殖的纤维变性之医学并发症。包含纤维变性之医学状态(除了以下讨论之动脉粥瘤硬化外)包括来自外科或损伤之不欲组织粘连。
其他可经由本发明治疗之细胞增殖病症包括动脉硬化状态。动脉硬化为一种使用来描述动脉壁之增厚及增硬之名词。此处所使用之动脉硬化状态意思为传统的动脉粥瘤硬化，加速的动脉粥瘤硬化，动脉粥瘤硬化病灶及任何其他其特徵为不欲内皮及/或血管平滑肌细胞增殖之动脉硬化状态，包括糖尿病之血管并发症。
血管平滑肌细胞之增生为在传统的动脉粥瘤硬化中之主要的病理特徵。其相信自内皮细胞释放之生长因子刺激血管内膜下的平滑肌之增生，其交互地，减少管径及最后阻隔动脉。本发明为有效于抑制此种增生，且因此延迟此种增生及相关的动脉粥瘤硬化状态之开始，抑制此种增生及相关的动脉粥瘤硬化状态之进行，或甚至停止此种增生及相关的动脉粥瘤硬化状态之进行。
血管平滑肌细胞之增生产生加速的动脉粥瘤硬化，其为未被排斥之心脏移植物失败的主要原因。此增生亦被相信为经由生长因子所调和，且能决定性地造成冠状动脉之阻塞。本发明为有效于抑制此种阻塞且降低，或甚至防止，此种失败之风险。
血管损伤亦造成内皮及血管平滑肌细胞增殖。该损伤可经由几个外伤事件或介入，包括血管手术及气球血管成形术所导致。再狭窄为成功的冠状动脉气球血管成形术之并发症。其相信系经由对冠状动脉衬里之内皮细胞的机械损伤之结果而释放生长因子所导致。因此，经由抑制不欲内皮及平滑肌细胞增殖，此处所描述之化合物可被使用来延迟，或甚至避免，再狭窄之开始。
其他可经由本发明治疗或防止的动脉粥瘤硬化状态包括其包含内皮及/或血管平滑肌细胞增殖之动脉壁疾病，例如，糖尿病之并发症，糖尿病性肾丝球肾炎及糖尿病性视网膜病。
此处所描述之化合物亦有效于治疗或防止不同形式的癌症。其可经由本发明治疗的癌症包括，但不局限于此，胆道癌；脑癌，包括神经胶母细胞瘤及神经管胚细胞瘤；乳癌；子宫颈癌；绒毛膜癌；大肠癌；子宫内膜癌；食道癌；胃癌；血液新生物，包括急性及慢性淋巴球及骨髓性白血病，多发性骨髓瘤，AIDS相关白血病及成年型T细胞白血病淋巴瘤；上皮内新生物，包括波恩氏病及潘吉德氏病；肝癌；肺癌；淋巴瘤，包括霍吉金氏病及淋巴球淋巴瘤；神经母细胞瘤；口腔癌，包括鳞状细胞癌；卵巢癌，包括那些产生自上皮细胞，基质细胞，胚细胞生殖细胞及间叶细胞；胰腺癌，前列腺癌；直肠癌；肉瘤，包括平滑肌肉瘤，横纹肌肉瘤，脂肉瘤，纤维肉瘤及骨肉瘤；皮肤癌，包括黑色瘤，卡波西氏肉瘤，嗜硷细胞性癌及鳞状细胞癌；睾丸癌，包括胚肿瘤(精细胞瘤，非精细胞瘤(畸胎瘤，绒毛膜癌))，基质肿瘤及胚细胞生殖细胞肿瘤；甲状腺癌，包括甲状腺癌及骨髓癌；及肾癌包括腺癌及威尔斯氏肿瘤。
本发明之化合物为有效于激素依赖癌症及非激素依赖癌症。它们亦有效于前列腺癌及非前列腺癌和乳癌及非乳癌。它们另外为有效于抗多药性型癌症。
除了前述列举之特别的病症外，本发明亦为有效于治疗或防止皮肤疾病包括瘢瘤，肥厚性瘢痕，皮脂漏皮肤病，乳头状瘤病毒感染(例如，产生寻常疣，足底疣，扁平疣，湿疣等等)，湿疹及上皮癌前病灶，例如，光化性角化病；其他炎性疾病包括增生性肾丝球肾炎；红斑性狼疮；硬皮病；颞关节炎；血栓塞性血管炎；黏膜与皮肤淋巴结症候群；及其他经由生长因子调和之病理包括子宫平滑肌瘤。本发明之化合物及方法提供无数超越一般使用来治疗镰状细胞疾病及/或细胞增殖病症之药剂及方法之优点。本发明之化合物及方法亦提供无数超越以氯三苯甲咪唑或其他抗霉菌剂治疗镰状细胞疾病及/或细胞增殖病症之优点。例如，本发明之许多化合物在玻管内试验中比氯三苯甲咪唑更有效，且因此可提供在临床背景中重要的治疗优点。
更明显地，本发明的化合物与其他药剂相比已降低毒性。对氯三苯甲咪唑而言，其为熟知该咪唑部份为负责抑制广泛范围的细胞色素P-450同功嵖催化反应，其构成其主要的毒物学作用(Pappas及Franklin，1993，Tasicology 80：27-35；Matsuura等人，1991，Biochemical Pharmacology 41：1949-1956)。氯三苯甲咪唑之类似物及代谢物病不会诱导细胞色素P-450(Matsuura等人，1991，BiochemicalPharmacology 41：1949-1956)，且因此不会参与氯三苯甲咪唑之毒性。
5.1化合物
本发明的能抑制Gardos通道及/或哺乳动物细胞增殖的化合物一般为三芳基甲烷化合物或其类似物，其中一或多个芳基部份被杂芳基、环烷基或杂环烷基部分取代及/或其中季碳被另外的原子如硅，锗，氮或磷所取代。在一个列举的具体实施例中，本发明的化合物为具有式(I)之化合物：其中
n为0，1，2，3或4；
X为无，(C1-C3)烷基，(C1-C3)烯基，或(C1-C3)炔基；
Y为碳，氮，磷，硅或锗；
R1为无，卤素，-R，-OR，-SR，-NR2，-ONR2，-NO2，-CN，-C(O)R，-C(S)R，-C(O)OR，-C(S)OR，-C(O)SR，-C(S)SR，-C(O)NR2，-C(S)NR2，-C(O)NR(OR)，-C(S)NR(OR)，-C(O)NR(SR)，-C(S)NR(SR)，-CH(CN)2，-CH[C(O)R]2，-CH[C(S)R]2，-CH[C(O)OR]2，-CH[C(S)OR]2，-CH[C(O)SR]2，-CH[C(S)SR]2或芳基；
Ar1为芳基，经取代的芳基，除了咪唑、硝基咪唑及三唑外的杂芳基，除了咪唑鎓，硝基咪唑鎓及三唑鎓外的杂芳基鎓，(C5-C8)环烷基或(C5-C8)杂环烷基；
Ar2为芳基或经取代的芳基；
Ar3为芳基，经取代的芳基、二芳基或除了咪唑、硝基咪唑及三唑外的杂芳基；
每一个R各自独立地选自氢、(C1-C6)烷基，经取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、经取代的(C1-C6)烯基、(C1-C6)炔基、经取代之(C1-C6)炔基及(C1-C6)烷氧基所组成的组；
该芳基取代基各自独立地选自卤素、三卤甲基、-R、-R′、-OR′、-SR′、NR′2、-NO2、-CN、-C(O)R′、-C(S)R′、-C(O)OR′、-C(S)OR′、-C(O)SR′及-C(S)SR′所组成的组；
该烷基、烯基及炔基取代基各自独立地选自卤素、-R′、-OR′、-SR′、NR′2、-NO2、-CN、-C(O)R′、-C(S)R′、-C(O)OR′、-C(S)OR′、-C(O)SR′、-C(S)SR′、芳基、γ-丁内酯基、吡咯烷基及琥珀酐基所组成之族群中；及
每一个R′各自独立为选择自氢、(C1-C6)烷基，(C1-C6)烯基及(C1-C6)炔基。
在另一个列举的具体实施例中，本发明的化合物是除了1-(2-氯苯基)-1，1-二苯基甲醇，1-(2-氯苯基)-1，1-二苯基甲烷或1-(2-氯苯基)-1-(4-羟基苯基)-1-苯基甲烷之外的那些式(I)化合物。
在又一个列举的具体实施例中，本发明的化合物为除了下式所包含的任何化合物以外的那些式(I)化合物：
其中：
R1为氢，羟基，烷基或烷氧基；
R2为氢或羟基；
R3为氢，羟基或卤素；且
R4为氢，羟基或卤素。
在还有一个列举的具体实施例中，本发明的化合物为除了下式所包含的任何化合物以外的那些式(I)化合物：
其中：
R1为氢，羟基或卤素；
R2为无，氢，苯基或羟基取代的苯基；
R3为氢，羟基，低级烷基或低级烷氧基；
R4为-S-CH2-R5，-O-CH2-R5，＝N-O-CH2-R5，经CH2-CH(CH3)-S-取代之苯基，O-苯基-CH＝CH2，苯基或取代的苯基，该苯基取代基为羟基或卤素；
R5为乙烯基，苯基，卤素单取代的苯基，卤素二取代的苯基，苯基-硫-苯基，-CH2-O-苯基，-CH2-O-(卤素取代)苯基或下式之取代基：其中Z为硫，氧或氮；且
R6为氢或卤素。
在一较佳具体实施例中，式(I)化合物的取代基如下：
n为0，1，2，3或4；
X为无或-C＝C-；
Y为碳，氮，磷，硅或锗；
R1为无，氟，氯，溴，-R，-OR，-SR，-NR2，-ONR2，-NO2，-CN，-C(O)R，-C(O)OR，-C(O)NR2，-C(O)NR(OR)，-CH[C(O)R]2或环戊-2，4-二烯-1-基二烯；
Ar1为苯基，取代的苯基，除了咪唑，硝基咪唑及三唑外的杂芳基，环己基，氮杂环己基或吡啶鎓；
Ar2为苯基或取代的苯基；
Ar3为苯基，取代的苯基，双苯基，萘基或吡啶基；
R为氢，(C1-C3)烷基，取代的(C1-C3)烷基，(C1-C3)烯基，取代(C1-C3)烯基，(C1-C3)炔基，取代(C1-C3)炔基及(C1-C3)烷氧基；
该苯基取代基各自独立地选自氟，氯，溴，CF2，-R，-R′，-OR′，-SR′，NR′2，-NO2，-CN，-C(O)R′及，-C(O)OR′所组成的组；
该烷基，烯基及炔基取代基各自独立地选自氟，氯，溴，-R′，-OR′，-SR′，NR′2，-NO2，-CN，-C(O)R′，-C(O)OR′，萘基，γ-丁内酯基及吡咯烷基所组成的组；及
每一个R′各自独立地选自氢，(C1-C3)烷基，(C1-C3)烯基及(C1-C3)炔基所组成的组。
代表性的较佳式(I)化合物包括列于下列表A的化合物。
本文中，将按列于前述表A的化合物编号述及各化合物。
在另一个较佳具体实施例中，本发明的化合物为具有如下结构式(II)的化合物：其中
n为0，1，2，3或4；
R1为氢，-OR，-SR，-CN，-C(O)R，-C(O)OR，-C(O)NR2，-CH[C(O)R]2或-CH[C(O)OR]2；
R2为氟，氯，溴，碘，-OR，-SR，-C(O)R或-C(O)NR2；
R2′为氢或-NO2；
R3为氢，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烯基，(C1-C6)炔基，-OR或-SR；
R4为氢或-NR2；
R4′为氢，氟，氯，溴或碘；且
每一个R各自独立地选自氢，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烯基，(C1-C6)炔基或(C1-C6)烷氧基所组成的组。
根据式(II)所列举较佳的化合物包括下列：6，14，15，17，20，27，32，33，36，42，45，49，55，70，75，79，80，81，82，83，84，85及86。
在另一较佳具体实施例中，本发明的化合物为具有结构式(III)的化合物：其中
X为无或-C＝C-；
Y为碳，磷，硅或锗；
n为0，1，2，3或4；
Ar1为苯基，经取代的苯基，环烷基或除了咪唑鎓，硝基咪唑鎓及三唑鎓之外的杂芳基鎓；
Ar3为苯基，萘基，六氢吡啶基或环己基；
R1为-R，-OR，-SR，-CN，--NR2，-ONR2，-NO2，C(O)R，-C(O)OR，-C(O)NR2，-CH[C(O)R]2，-CH[C(O)OR]2，(C1-C6)烷基，(C1-C3)烯基，(C1-C3)炔基，环戊-2，4-二烯-1-基二烯或苯基；
每一个R2，R3及R4各自独立地选自氢，氟，氯，溴，碘，-OR，-SR，-NR2，-NO2，-C(O)R，-C(O)OR，-C(O)NR2，三卤甲基，(C1-C6)烷基，(C1-C3)烯基，(C1-C3)炔基及苯基所组成的组；
每一个R各自独立地选自氢，卤素，(C1-C6)烷基，取代的(C1-C6)烷基，(C1-C6)烯基，取代的(C1-C6)烯基，(C1-C6)炔基，取代的(C1-C6)炔基及(C1-C6)烷氧基；
该烷基，烯基及炔基取代基各自独立地选自芳基，-C(O)OR，吡咯烷基，丁内酯基，氟，氯，溴，碘及-CN所组成的组；且
该苯基取代基各自独立地为-R。
根据式(III)所列举较佳的化合物包括下列：7，10，12，13，16，18，19，21，22，23，24，26，28，29，30，31，34，35，37，38，40，41，43，44，45，47，48，50，51，52，53，54，56，58，59，60，61，62，64，65，67，68，69，71，72，73，78，87，88，89及90。
此处所述及的化学式可显示互变异构或构象异构现象。本说明书中的结构式图示仅能表示一种可能的互变异构或构象异构形式，应了解本发明包含显示如此处所描述的生物或医药活性的互任何变异构或构象异构形式。
本发明之化合物可为游离酸，游离硷或其医药上有效的盐类之形式。将化合物以合适的酸进行处理可容易地制备这种盐类。合适的酸包括(仅作为实施例但并不局限于此)无机酸如氢卤酸(氢氯酸，氢溴酸等)，硫酸，硝酸，磷酸，2-羟基醋酸，2-羟基丙酸，2-酮基丙酸，丙二酸，丁二酸等等。相反地，该盐类可以碱处理而转换成游离碱形式。
除了上述化合物及其医药上可接受盐类外，本发明可使用，其中合适的，化合物之溶合的及未溶合的形式(例如，水合物形式)。
此处所描述之化合物可经由任何已知适用于化学化合物之制备的方法而被制备。合适之方法为此技艺中所熟知。较佳之方法经由代表性实施例列举说明。必须之起始物质可自商业上或经由有机化学之标准方法获得。而且，许多化合物为商业上可获得。
作为影响镰状细胞脱水或变形及/或哺乳动物细胞增殖之药剂的个别化合物之相关活性及功效可使用标准技术测定。较佳地，化合物接受一系列的筛选以测定其医药活性。
在大部份的例子中，本发明之活性化合物显示两种医药活性：抑制红细胞之Gardos通道及抑制哺乳动物细胞增殖。然而，在一些例子中，本发明之化合物可能仅显示这些医药活性中之一种。任何显示至少一种这些医药活性之式(I)所包含之化合物皆被认为在本发明之范畴内。
一般而言，本发明之活性化合物为那些包括至少约25％红细胞之Gardos通道抑制(在约10μM测量)及/或约25％哺乳动物细胞增殖抑制(在约10μM测量)之化合物，其系使用一般此技艺已知之活体外试验测量(参考，例如，Brugnara等人，1993，J.Biol，Chem.268(12)：8760-8768；Benzaguen等人，1995，NatureMedicine1：534-540)。选择地，或此外，本发明之活性化合物一般将具有对小于约10μM之Gardos通道抑制之IC50(产生50％抑制之化合物浓度)及/或对小于约10μM之哺乳动物细胞增殖抑制之IC50，其系使用一般此技艺已知之活体外试验测量(参考，例如，Brugnara等人，1993，J.Biol，Chem.268(12)：8760-8768；Benzaguen等人，1995，NatureMedicine 1：534-540)。
根据本发明之代表性活性化合物为那些列于之前表A之化合物。
在本发明之特定具体实施例中，仅显示一种医药活性，或一种较高程度活性之化合物为较佳。因此，当化合物被使用于原位治疗或防止镰状细胞疾病之方法或降低镰状细胞脱水及/或延迟红细胞镰状细胞素质之产生或变形之方法时，其较佳为该化合物显示至少约75％之Gardos通道抑制(在约10μM测量)及/或具有IC50之小于约1μM的Gardos通道抑制，具有至少约90％之抑制及/或小于约0.1μM之IC50为特佳。
使用于关于Gardos通道抑制及镰状细胞疾病之方法所列举较佳的化合物包括化合物编号6，7，10，12，13，14，15，16，17，18，20，21，22，23，24，27，29，30，31，32，33，34，35，37，38，42，43，44，45，46，47，49，50，51，52，53，55，56，58，59，60，62，64，65，67，68，69，70，73，75，78，79，80，81，82，83，85，86，87，88及90。
使用于关于Gardos通道抑制及镰状细胞疾病之方法所列举之特佳的化合物包括化合物编号6，14，15，16，32，37，43，46，55，62，64，69，75，79，82，87及90。
当化合物被使用于原位治疗或防止其特徵为异常细胞增殖之病症之方法或抑制细胞增殖之方法时，其较佳为该化合物显示至少约75％之有丝分裂因子诱导之细胞增殖抑制(在约10μM测量)及/或具有IC50之小于约3μM的细胞增殖，具有至少约90％之抑制及/或小于约1μM之IC50为特佳。
使用于抑制哺乳动物细胞增殖或治疗或防止其特徵为异常细胞增殖之病症之方法所列举之较佳的化合物包括化合物编号13，14，15，16，17，18，19，21，26，27，28，30，31，36，38，40，41，42，43，45，46，47，48，49，50，52，54，59，61，65，67，68，70，71，72，73，79，82，83，84，85，86，89及90。
使用于抑制哺乳动物细胞增殖或治疗或防止其特徵为异常细胞增殖之病症之方法所列举之特佳的化合物包括化合物编号16，28，30，36，43，45，47，48，49，50，54及84。
式(I)之特定化合物可为商业上获得。例如，化合物编号1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，19，20，21，23，24，25，26，28，34，37，38，39，42，43，44，45，46，47，48，49，50，51，52，54，57，59，60，61，62，66，67，69，71，72，73，76，77及87为商业上可获得。然而，并没有这些化合物之生物活性的报导(参考，例如，Hanessian等人，1976，Methods Carbohydr.Chem.7：63；Paike，1992，Mater.Sci.18：53-57，Liu & Paike，1987，Tetrahedron Lett.28(3)：3763-3766；Tomioka等人，1981，Chem.Lett.11：1621-1624；Glidewell等人，1994，Acta Crystallogr.，SectC：Cryst.Struct.Commun.C50：1362-1366；Ponnuswamy等人，1984，ActaCrystallogr.，Sect C：Cryst.Struct.Commun.C40(1)：142-144；Lewis等人，1980，J.Am.Chem.Soc.102(14)：4659-4664及CA 083：018922；Illes等人，1988，ActaPhytopathologica et Entomologia Hungarica 23：243-255；及Matsuura等人，1991，Biochem，Pharmacol.41：1949-1956)。
除了本发明此处所揭示的及声明的以外，另外的式(I)之活性化合物在先前已被报导无生物活性的包括化合物13(美国专利案号4,005,023)；化合物25(WO96/36631)；化合物26(Fan等人，1983，Yivao gongye 9：2-4)；化合物60(Ethridge等人，1990，J.Production Agriculture 3(2)：246-252)；化合物76(CAS No.18740-94-8)；化合物77(Ferguson等人，1992，Acta Crystallogr.，Sect.C：Cryst.Struct.Commun.C48(7)：1228-1231)；及化合物90(1957，Comptes.Rendus.245(1)：73-75)。
除了本发明此处所揭示的及声明的以外，其他的式(I)化合物已被报导无生物活性的包括1，1-二苯基-1-(2-羟基萘基)-甲醇(Lewis等人，1980，J.Am.Chem.Soc.102(14)：4659-4664；CA 083：018922)；1，1-二苯基-1-(吡啶-2-基)-甲醇，1-(4-氯苯基)-1-苯基-1-(吡啶-2-基)-甲醇，1-(4-甲氧基苯基)-1-苯基-1-(吡啶-3-基)-甲醇及1，1-二-(4-甲氧基苯基)-1-(吡啶-3-基)-甲醇(Illes等人，1988，ActaPhytopgthologica etEntomologia Hungarica 23：243-255)；1，1，1-三苯基-1-胺基甲烷及1，1-二苯基-1-(N-吡啶基)-甲烷(Matsuura等人，1991，Biochem.Pharmacol.41：1949-1956)；4，4′-二甲氧基三苯甲基氯化物，pixyl chloride，二-邻-对甲氧苯基-1-萘基-甲基氯化物及对-对甲氧苯基-1-萘基-甲基氯化物(Gait，1984，Oligonucleotide Synthesis：A Practical Approach，IRL Press，Oxford)。
此外，化合物6，17及85为已知之氯三苯甲咪唑之代谢产物(Duhm等人，1974，Postgraduate Medical Journal July Suppl.：13-16)。然而，跟氯三苯甲咪唑不同，并没有这些化合物之生物或医药活性被报导。例如，跟氯三苯甲咪唑不同，化合物6并不会诱导鼠内肝微粒细胞色素P450(Matsuura等人，1991，Biochem.Pharmacol.41：1949-1956)。
本发明之医药组合物包含所有式(I)化合物。除了任何医药赋形剂，载剂或稀释剂外之本发明所包括之特定之式(I)化合物为以下列之式(A)，(B)及(C)表示。
在一较佳之具体实施例中，本发明之化合物为具有下式(A)之化合物或其医药上可接受盐类或水合物：其中
n为0，1，2，3或4；
R1为氢，-OR，-SR，-CN，-C(O)R，-C(S)R，-C(O)OR，-C(S)OR，-C(O)SR，-C(S)SR，-C(O)NR2，-C(S)NR2，-CH[C(O)R]2，-CH[C(S)R]2，-CH[C(O)OR]2，-CH[C(S)OR]2，-CH[C(O)SR]2，-CH[C(S)SR]2；
R2为氟，氯，溴或碘；
R3为-R，-OR或-SR；
R4为氢或NR2；
R4′为氢，氟，氯，溴或碘；且
每一个R各自独立为选择自氢，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烯基，(C1-C6)炔基及(C1-C6)烷氧基所组成之族群中。
在另一较佳具体实施例中，本发明之化合物为那些式(A)之化合物，其条件为(i)当n为0且R1为氢或羟基时，R3为不是氢；及(ii)当n为0且R1为氢时，R3为不是羟基。
在另外之较佳具体实施例中，本发明之化合物为那些式(A)之化合物，其条件为当n为0且R1为-C(O)NH2时，R2为不是氟。
根据式(A)之代表性化合物包括化合物14，15，32，33，36，55，70，75，79，80，81，82，83，84及86。
在另一较佳具体实施例中，本发明之化合物为具有下式(B)之化合物或其医药上可接受盐类或水合物：其中
n为0，1，2，3或4；
R1为-NR2，-C(O)R，-C(S)R，-C(O)NR′2或-C(S)NR′2；
R2为氟，氯，溴或碘；
R3为氟，氯，溴或碘；
R4为氟，氯，溴或碘；
R4′为氢，氟，氯，溴或碘；
每一个R各自独立为选择自氢，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烯基，(C1-C6)炔基及(C1-C6)烷氧基所组成之族群中；且
每一个R′各自独立为选择自氢，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烯基，(C1-C6)炔基及(C1-C6)烷氧基所组成之族群中。
根据式(B)之代表性较佳化合物包括化合物30，40，41及65。
在另一较佳具体实施例中，本发明之化合物为具有下式(C)之化合物或其医药上可接受盐类或水合物：其中
n为0，1，2，3或4；
Ar1为苯基或环己基；
R1为-NR2，-CH[C(O)OR]2，-CH[C(S)OR]2，-CH[C(O)SR]2，-CH[C(S)SR]2，-C(O)NR2或-C(S)NR2；且
每一个R各自独立为选择自氢，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烯基，(C1-C6)炔基及(C1-C6)烷氧基所组成之族群中。
在另一较佳具体实施例中，本发明之化合物为那些式(C)化合物，其条件为当R1为-NH2或-C(O)NH2时，n为1，2或3。
根据式(C)之代表性较佳化合物包括化合物18，29，31，56及78。
5.2配方及施药途径
此处所描述之化合物，或其医药上可接受加成盐类或水合物，可使用广泛不同的施药途径或方式传送至患者。合适的施药途径包括，但不因此局限于此，吸入，经皮的，口服，直肠的，经黏膜的，肠的及非经肠道的施药，包括肌内的，皮下的及静脉内的注射。
此处所描述之化合物，或其医药上可接受加成盐类或水合物，可被单独地，与本发明之其他化合物组合，及/或以混合剂的方式与其他治疗药剂组合而施药。当然，该可与本发明之化合物共同施药的治疗药剂的选择将，有一部份，视所欲治疗的状况而定。
例如，当施药于患有镰状细胞疾病之患者时，本发明之化合物可用其包含使用来治疗一般与镰状细胞疾病有关之疼痛，感染及其他症状及副作用之药剂的混合剂的方式施与。此种药剂包括，例如，止痛药，抗生素等等。化合物亦可用其包含一般使用来治疗镰状细胞疾病之其他药剂的混合剂的方式施与，该其他药剂包括丁酸盐及丁酸盐衍生物(Perrine等人，1993，N.Engl.J.Med.328(2)：81-86)；羟基尿素(Charache等人，1995，N.Engl.J.Med.323(20)：1317-1322)；红细胞生成素(Goldberg等人，1990，N.Engl.J.Med.323(6)：366-372)；及饮食盐如镁(DeFranceschi等人，1996，Blood 88(648a)：2580)。
当施与至遭受癌症治疗之患者时，该化合物可以包含其他抗癌药剂及/或补充增效药剂的混合剂的方式施与。该化合物亦可以包含治疗放射性疗法之副作用的药剂，例如，止吐剂，放射线保护剂等等之混合剂的方式施与。
可与本发明之化合物共同施与之抗癌药物包括，例如，胺麸精；天门冬酰胺酶；博莱霉素；白消安；碳铂；卡氮芥(BCNU)；苯丁酸氮芥；顺铂(顺式-DDP)；环磷酰胺；阿糖胞苷HCl；达卡巴嗪；柔红霉素HCl；阿霉素HCl；雌二醇氮芥磷酸钠；鬼臼乙叉甙(VP-16)；氟尿嘧啶脱氧核苷；氟尿嘧啶(5-FU)；氟塔乙酰胺；羟基脲(Hydroxyurea)(羟基脲(hydroxycarbamide))；艾弗司酰胺(Ifosfamide)；干扰素α-2a，α-2b，Lueprolide acetate(LHRH-释放因子类似物)；罗氮芥(CCNU)；二氯甲基二乙胺HCl(氮芥)；苯丙氨酸氮芥；巯基嘌呤；巯乙磺酸钠；氨基甲基叶酸(MTX)；丝裂霉素；双氯苯二氯乙烷(o.p′-DDD)；MitoxantroneHCl；Octreotide；Plicamycin；盐酸甲基苄肼HCl；链脲菌素；三苯氧胺柠檬酸盐；硫鸟嘌呤；噻替哌；长春花硷硫酸盐；长春新硷硫酸盐；Amsacrine(m-AMSA)；Azacitidine；六羟甲基三聚氰铵(HMM)；白细胞介素2；Mitoguazone(甲基-GAC；甲基乙二醛双-鸟苷酰腙苯肼；MGBG)；戊咪二氮；赛氮芥(甲基-CCNU)；鬼臼噻吩甙(VM-26)；Paclitaxel及其他Taxanes；及长春硷酰胺硫酸盐。
可与本发明之化合物共同施与之补充增效药剂包括，例如，三环抗抑郁药物(例如，丙咪嗪，去甲丙咪嗪，盐酸阿米替林，氯丙咪嗪。三甲丙咪嗪，多虑平，去甲替林，Protriptyline，Amoxapine及麦普替林)；非三环及抗抑郁药物(例如，sertraline，氯哌三唑酮及citalopram)；Ca2+对抗剂(例如，维拉帕米，硝苯吡啶，硝吡乙甲酯及caroverine)；二性霉素(例如，Tween 80及马来酸环己哌啶)；三苯乙醇类似物(例如，三苯氧胺)；心律不整防治药剂(例如，奎尼丁)；抗高血压药剂(例如，利血平)；硫醇耗尽剂(例如，buthionine及sulfoximine)；及甲酰四氢叶酸钙。
活性化合物可以其本身施与或以医药组合物之形式施与，其中该活性化合物与一或多种医药可接受载剂，赋形剂或稀释剂一起混合。使用于本发明之医药组合物可用传统的方法，使用一或多种包括可促进加工活性化合物成为医药上可使用之制剂赋形剂及助剂之生理上可接受载剂而被制成配方。合适的配方视所选择施药的途径而定。
对注射而言，本发明之药剂可被制成水性溶液，特别是生理上相容缓冲液，例如，汉克氏溶液(Hank′s sulution)，，林格式溶液(Ringer′s solution)，或生理食盐缓冲液。对经粘膜施与而言，适当之渗透障壁之穿透剂被使用于本配方中。此种穿透剂为一般此技艺中已知。
对于口服施与而言，化合物可经由合并活性化合物与此技艺中所熟知之医药上可接受载剂而被容易地制成配方。此种载剂可使本发明之化合物制成锭剂，药丸，糖衣丸，胶囊，液体，胶体，糖浆，淤浆，悬浮液及其类似物，而经由欲被治疗患者口服摄食。口服使用之医药制剂可获得固体赋形剂，可选择地磨碎产生之混合物，且加工该颗粒混合物，在添加合适的助剂后，若需要，以获得锭剂或糖衣丸心。合适的赋形剂为，特别是，填充剂，例如，糖类，包括乳糖，蔗糖，甘露醇，山梨糖醇；纤维素制剂如，例如，玉蜀黍淀粉，小麦淀粉，米淀粉，马铃薯淀粉，明胶，西黄蓍胶，甲基纤维素，羟基丙基甲基纤维素，羧基甲基纤维素钠，及/或聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)。若需要，可加入分解剂，例如，交联聚乙烯基吡咯烷酮，琼脂，或藻酸或其盐类，例如，藻酸钠。
糖衣丸心可与合适的包膜提供。为此目的，可使用浓缩糖溶液，其可选择地包含阿拉伯胶，滑石，聚乙烯基吡咯烷酮，carbopol gel，聚乙二醇，及/或二氧化钛，漆溶液，及合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料或色素可被加入至锭剂或糖衣丸包膜中以监别或显示活性化合物剂量之不同组合。
可被口服使用之医药制剂包括以明胶制成之进入配合(push-fit)胶囊，及软胶囊，以明胶及可塑剂例如，甘油或山梨糖醇制造之封口胶囊。该进入配合(push-fit)胶囊可包含活性化合物其与填充剂如乳糖，粘合剂如淀粉，及/或润滑剂如滑石或硬脂酸镁且，可选择地，稳定剂混合。在软胶囊中，该活性化合物可被溶解或悬浮于合适的液体，例如，脂肪油，液体石腊，或液体聚乙二醇中。次外，可加入稳定剂。所有口服施与之配方应为适合此种施与之剂量。
对于颊的施与而言，该组合物可以传统方法制成锭剂或锭片的形式。
对于吸入施与而言，根据本发明所使用之化合物为方便地以气溶胶喷雾呈递之方式自加压单元或喷雾器，且使用合适的推进剂，例如，二氯二氟甲烷，三氯氟甲烷，二氯四氟甲烷，二氧化碳或其他合适的气体传递。在加压气溶胶之例子中，该剂量单位可经由提供传递计量的量之活门而被决定。例如，使用于吸入器或吹药器中之明胶之胶囊及药筒可被制成混合包含化合物及合适粉末基质，例如，乳糖或淀粉之之粉末。
化合物可被制成系由注射，例如，经由大量注射或连续注射之非经肠道施与。注射用配方可以单位剂量形式存在，例如，与添加之防腐剂，于安瓿或多剂量容器中。该组合物可为悬浮液，溶液或于油性或水性赋形剂中之乳剂的形式，且可包含形成配方药剂，例如，悬浮剂，稳定剂及/或分散剂。
非经肠道施与之医药配方包括以水溶液形式之活性化合物水性溶液。此外，活性化合物之悬浮液可被制备成适当的油性注射悬浮液。合适的嗜脂性溶剂或赋形剂包括脂肪油类，例如，麻油，或合成脂肪酸酯类，例如，油酸乙酯或三甘油脂，或脂粒。水性注射悬浮液可包含增加悬浮液粘度之物质，例如，羧基甲基纤维素钠，山梨糖醇，或糊精。可选择地，该悬浮液亦可包含合适的稳定剂或增加化合物溶解度之药剂以使得制备高度浓缩溶液。
选择地，在使用前，该活性成分可为与合适的赋形剂，例如，无菌无热源水结构之粉末形式。
该化合物亦可被制成直肠组合物，例如，栓剂或保留灌肠，例如，包含传统栓剂基质，如可可脂或其他甘油脂。
除了先前所描述之配方外，该化合物亦可被制成贮存制剂。此种长作用配方可经由移植或经由皮的传递(例如，皮下地或肌内地)，肌内注射或经皮胶布而被施与。因此，例如，该化合物可与合适的聚合或亲脂性物质(例如，作为于可接受油中之乳剂)或离子交换树脂被制成配方，或作为节约地可溶性衍生物，例如，作为节约地可溶性盐类。
该医药组合物亦可包括合适的固相或胶相载剂或赋形剂。此种载剂或赋形剂之实施例包括，但不局限于此，碳酸钙，磷酸钙，不同的糖类，淀粉类，纤维素衍生物类，明胶，及聚合物，例如，聚乙二醇。
5.3有效剂量
适合使用于本发明之医药组合物包括其中该活性成分含治疗有效量，即，有效达到其所欲目的之量之组合物。当然，该实际有效作为特殊应用之量将视，尤其，被治疗的情况而定。例如，当于原位降低镰状细胞脱水及/或延迟红细胞镰状细胞素质产生之方法中施与时，此组合物将包含有效达到此结果之活性成分量。当于抑制细胞增殖之方法中施与时，此组合物将包含有效达到此结果之活性成分量。当施与至患有镰状细胞疾病或其特徵为异常细胞增殖之病症之患者时，此组合物将包含有效，尤其，防止或缓和被治疗患者之存在症候发展，或延长被治疗患者生存之活性成分量。为使用于癌症之治疗，治疗有效量进一步包括停止或退化肿瘤生长之化合物量。有效量之测定为尤其是关于此处所详述，那些习于此技艺人士之能力范围内。
为了任何此处所描述之化合物，该治疗有效量可自细胞培养分析而被初步测定。目标血浆浓度将为那些在细胞培养分析中能诱导至少约25％Gardos通道之抑制及/或至少约25％细胞增殖之抑制之化合物的浓度，其视，当然，特别所欲应用而定。在细胞培养分析中能诱导至少约50％，75％，或甚至90％或更高Gardos通道之抑制及/或细胞增殖之抑制之活性化合物之目标血浆浓度为较佳。在患者中Gardos通道之抑制及/或细胞增殖之抑制百分率可评估所达到之血浆药物浓度之适当度而被监测，且该剂量可被向上或向下调整到达成所欲之抑制百分率。
使用于人类之治疗有效量亦可自动物模式中而被决定。例如，人类剂量可被制成达到在动物中已被发现有效之循环浓度之配方。对镰状细胞疾病特别有效之动物模式为SAD老鼠模式(Trudel等人，1991，EMBO J.11：3157-3165)。对于其特徵为异常细胞增殖之疾病之有效动物模式为此技艺中所熟知。特别是，下列参考文献提供合适的癌症异种移植物之动物模式(Corbett等人，1996，Contrib.Oncol.Ther.Oncol.1：95-108；Dykes等人，1992，Contrib.Oncol.Basel.Karger42：1-22)，再狭窄(Carter等人，1994，J.Am.Coll.Cardiol.24(5)：1398-1405)，动脉粥瘤硬化(Zhu等人，1994，Cardiology 85(6)：370-377)及新血管增生(Epstein等人，1987，Cornea 6(4)：250-257)。于人类中之剂量可经由监测Gardos通道抑制及/或细胞增殖之抑制及向上或向下调节剂量而被调节，如前所述。
治疗有效剂量亦可自其已知可显示例如，氯三苯甲咪唑及其他抗霉菌剂之类似药理活性之化合物的人类数据而被决定(参考，例如，Brugnara等人，1995，JPET 273：266-272；Benzaquen等人，1995，Nature Medicine 1：534-540；Brugnara等人，1996，J.Clin.Invest.97(5)：1227-1234)。该应用剂量可基于施与化合物与氯三苯甲咪唑相比之相对生物可获得性及潜势而被调整。
基于前述方法及其他此技艺已熟知之方法调整剂量以达到在人类中之最大功效为完全在一般习于此技艺人士之能力范围内。
当然，在局部施与之例子中，施与化合物之系统循环浓度将不会特别重要。在此例子中，该化合物被施与达到在局部区域可有效达到所欲结果之浓度。
为了使用于镰状细胞疾病之预防及/或治疗，包括慢性镰状细胞发作及急性镰状细胞危象二者，约0.001μM至20μM被施与化合物之循环浓度被认为是有效的，以约0.1μM至5μM为较佳。
此处所描述之化合物之患者口服施与剂量，其为预防及治疗慢性镰状细胞发作施与之较佳模式，典型地范围自约80毫克/日至16,000毫克/日，更典型地为自约800毫克/日至8000毫克/日，且最典型地为自约800毫克/日至4000毫克/日。以患者体重换算来描述，典型的剂量范围自约1至200毫克/公斤/日，更典型地自约10至100毫克/公斤/日，且最典型地自约10至50毫克/公斤/日。以患者体表面积换算来描述，典型的剂量范围自约40至8000毫克/平方公尺/日，更典型地自约400至4000毫克/平方公尺/日，且最典型地自约400至2000毫克/平方公尺/日。
为了使用于其特徵为异常细胞增殖之病症包括癌症，动脉粥瘤硬化及生成血管状态，例如，再狭窄之治疗，约0.001μM至20μM被施与化合物之循环浓度被认为是有效的，以约0.1μM至5μM为较佳。
此处所描述作为细胞增殖病症之治疗或防止之化合物之患者口服施与剂量，典型地范围自约80毫克/日至16,000毫克/日，更典型地为自约800毫克/日至8000毫克/日，且最典型地为自约800毫克/日至4000毫克/日。以患者体重换算来描述，典型的剂量范围自约1至200毫克/公斤/日，更典型地自约10至100毫克/公斤/日，且最典型地自约10至50毫克/公斤/日。以患者体表面积换算来描述，典型的剂量范围自约40至8000毫克/平方公尺/日，更典型地自约400至4000毫克/平方公尺/日，且最典型地自约400至2000毫克/平方公尺/日。
为了其他施与型式，剂量及间隔可被个别地调整以提供被施与化合物有效于被治疗之特别临床指徵之血浆等级。例如，若急性镰状危象为最显着之临床表现，根据本发明之化合物可被施与每日多次相对高浓度。选择地，若患者仅显示稀少的或周期的或不规则基础之周期的镰状细胞危象，其可能较需要施与最小有效浓度本发明之化合物及使用施与之较不频繁摄生法。此将提供与镰状细胞疾病状态之剧烈同量之治疗摄生法。
为了使用于生瘤癌症之治疗，该化合物可在肿瘤之手术去除之前，期间或之后施与。例如，该化合物可在手术前以单一或数个剂量藉由注射至肿瘤块而施与至肿瘤。该肿瘤，或最有可能的肿瘤，可然后经由手术而被去除。在肿瘤位置之药物进一步剂量可在去除后使用。选择地，最有可能的肿瘤之手术去除可在肿瘤位置施与化合物之前。
与此处所提供之教示的结合，经由选择不同的活性化合物及权衡因子，例如，潜势，相对生物可获得性，患者体重，不良副作用之剧烈及施与之较佳模式中，一有效预防或治疗处理摄生法可被设计成不会导致实质毒性及完全有效于治疗经由特别患者证明之临床症侯。当然，许多因子在测定适合特别指徵或患者之治疗摄生法是重要的。剧烈的指徵，例如，癌症与较不剧烈之指徵，例如，镰状细胞疾病相比，可证明较高剂量之施与为合理。
5.4毒性
一特别化合物于毒性和治疗效果间之比例为其治疗指数且可被表示为LD50(50％族群致死之化合物量)及ED50(50％族群有效之化合物量)间之比例。显示高治疗指数之化合物为较佳。获得自细胞培养分析及/或动物研究之治疗指数数据可被使用于制成使用于人类之剂量范围配方。此化合物之剂量较佳为落于包括具有少数或无毒性之ED50的血浆浓度之范围内。该剂量在此范围内可不同，其视使用的剂量形式及使用之施药途径而定。该实际的配方，施药途径及剂量可经由个别内科医生视患者之状况而选择。(参考，例如，Fingl等人，1975，ThePharmacological Basis of Therapeutics，第一章，第一页)。
本发明已被描述，下列实施例为意欲列举说明本发明，但并不因而限制本发明。
6.实施例：化合物合成
此实施例证明一般合成许多本发明之较佳化合物之方法，及同样地合成本发明之特定列举化合物之较佳方法。
6.1三苯基甲醇类之合成
三苯基甲醇衍生物类之合成之一般方法如下：经取代之苯甲酰氯(1当量)，经取代之苯(1当量)，及氯化铝(1.1当量)之混合物，于二氯甲烷中在室温下搅拌1小时。该反应混合物于冰浴中冷却且加入水。分离该层且该水层以二氯甲烷萃取。该组合之二氯甲烷萃取物以水及饱和碳酸氢钠水溶液洗涤且然后以硫酸钠干燥。溶剂之蒸发产生80-95％产量之经取代的二苯甲酮。该经取代之二苯甲酮(1当量)及经取代的苯基溴化镁(1当量)于四氢呋喃中回流5小时，于冰浴中冷却且加入水。该反应混合物以二氯甲烷萃取且该组合之萃取物以硫酸钠干燥。溶剂之蒸发接着经由管柱层析产生45-90％产量之经取代的三苯基甲醇。
6.2三苯基丙酸类之合成
6.2.1方法A
一种三苯基丙酸衍生物类之合成方法如下：经取代之三苯基甲醇(1当量)及丙二酸(2-3当量)之混合物在无溶剂170℃下搅拌3小时。在冷却后，水性1.0M氢氧化钠加入该反应混合物中。此混合物在90℃搅拌4小时且然后热过滤。该冷却之滤液以1.0M氢氯酸进行酸化造成20-40％产量之白色产物沉淀，其系经由抽气过滤收集。
6.2.2方法B
一种三苯基丙酸衍生物类之第二合成方法如下：镁(1.1当量)及丙二酸二乙酯(1.1当量)之混合物在无水乙醇中回流加热直到所有的镁消耗掉(约2小时)。溶剂之蒸发产生澄清油，将经取代之三苯基甲烷(经由Ando及Ikeno之方法，1979，Tetrahedron.Lett.51：4941，还原经取代之三苯基甲醇而获得)(1当量)及苯加入。该反应混合物回流5分钟且然后在周围温度搅拌3小时。加入氢氯酸(0.1M)且该混合物在室温下搅拌过夜。该有机层被分离，以水洗涤及以硫酸钠干燥。蒸发产生50-90％产量之中间物二乙基-经取代-二苯基-苄基丙二酸酯。在最后步骤中，此中间物(1当量)及氢氧化钾(6当量)在乙醇中回流9小时。在真空下去除溶剂，加入水，且该溶液在65℃下搅拌1小时。该冷却之溶液以1.0M氢氯酸进行酸化造成白色固体沉淀。该固体以抽气过滤收集可产生60-90％产量之所欲经取代的三苯基丙酸。
6.3 2-氯苯基-二苯基甲醇之合成
一种较佳之2-氯苯基-二苯基甲醇(化合物6)之合成方法如下：于100毫升1.0M氢氯酸中之25克(0.073摩尔)氯三苯甲咪唑之混合物回流2.5小时。在冷却至室温后，该混合物以醋酸乙酯萃取且该结合的有机相以硫酸钠干燥。在真空下去除溶剂且该残留物从己烷中结晶以产生19.5克(91％产量)之具有熔点92-93.5℃之黄色结晶产物。
该产物具有下列之分析数据：NMR(CDCl3)：δ4.48ppm(1H，s，OH)；δ6.70ppm(1H，d，J＝7Hz，芳基)；δ7.13ppm(1H，t，J＝8Hz，芳基)；δ7.28ppm(5H，m，芳基)；δ7.34ppm(6H，m，芳基)；δ7.52ppm(1H，d，J＝9Hz，芳基)。
分析.C19H15ClO(CH计算：77.42，5.13；发现：77.33，5.17)。
6.4(2-氯苯基)-二苯基乙腈之合成
一种较佳之(2-氯苯基)-二苯基乙腈(化合物14)之合成方法如下：1克(0.003摩尔)氯-(2-氯苯基)-二苯基甲烷及0.3克(0.004摩尔)氰化铜之混合物在无溶剂150℃下加热2小时。该混合物被温和地冷却，加入10毫升甲苯，过滤该混合物，且在真空下去除溶剂。产生之褐色固体从2-丙醇中结晶以产生0.64克(66％产量)之具有熔点145-147℃之淡褐色结晶产物。
该产物具有下列之分析数据：NMR(CDCl3)：δ6.58ppm(1H，d，J＝8Hz，芳基)；δ7.16ppm(1H，t，J＝10Hz，芳基)；δ7.24ppm(4H，m，芳基)；δ7.32ppm(1H，d，J＝7Hz，芳基)；δ7.37ppm(6H，m，芳基)；δ7.48ppm(1H，d，J＝8Hz，芳基)。
分析.C20H14ClN(CHNCl计算：79.07，4.65，4.61，11.67；发现：79.08，4.72，4.58，11.58)。
6.52-氯苯基-二苯基乙醛之合成
一种较佳之2-氯苯基-二苯基乙醛(化合物15)之合成方法如下：7.5克(0.025摩尔)2-氯苯基-二苯基乙腈及56毫升(0.056摩尔)于100毫升甲苯中之DIBAL-H之混合物在-78℃搅拌1小时。加入醋酸乙酯(7毫升)，硅胶(65克)及水(5毫升)且该混合物在-78℃搅拌2小时。该混合物然后被温暖至室温及在室温下搅拌4小时。加入醋酸乙酯(200毫升)及过滤混合物。该有机层以硫酸钠干燥且在真空下去除溶剂。产生之固体从2-丙醇中结晶以产生6.0克(77％产量)之具有熔点126-129℃之白色结晶产物。
该产物具有下列之分析数据：NMR(CDCl3)：δ6.69ppm(1H，d，J＝9Hz，芳基)；δ7.13ppm(2H，d，J＝9Hz，芳基)；δ7.19ppm(1H，d，J＝6Hz，芳基)；δ7.26ppm(1H，s，芳基)；δ7.28ppm(1H，d，J＝8Hz，芳基)；δ7.36ppm(7H，m，芳基)；δ7.46ppm(1H，d，J＝9Hz，芳基)；δ10.49ppm(1H，s，CHO)。
分析.C20H18ClO(CHCl计算：78.30，4.93，11.56；发现：77.90，5.28，11.39)。
6.6三苯基乙醛之合成
一种较佳之三苯基乙醛(化合物16)之合成方法如下：1克(0.003摩尔)2-氯苯基-二苯基乙腈及8毫升(0.008摩尔)于15毫升甲苯中之DIBAL-H之混合物在-78℃搅拌1小时。加入醋酸乙酯(4毫升)，硅胶(10克)及水(0.5毫升)且该混合物在-78℃搅拌30分钟。该混合物然后被温暖至室温及在室温下搅拌4小时。加入醋酸乙酯(100毫升)及过滤混合物。该有机层以硫酸钠干燥。蒸发产生0.9克(95％产量)之具有熔点91-96℃之白色粉末。
该产物具有下列之分析数据：NMR(CDCl3)：δ7.05ppm(6H，d，J＝9Hz，芳基)；δ7.44ppm(9H，m，芳基)；δ10.28ppm(1H，s，CHO)。
分析.C20H15O(CH计算：88.20，5.92；发现：88.06，5.99)。
6.72-氯苯基-二苯基甲烷之合成
一种较佳之2-氯苯基-二苯基甲烷(化合物17)之合成方法如下：5克(0.017摩尔)2-氯苯基-二苯基甲醇(化合物6)，15克(0.1摩尔)碘化钠，12.7毫升(0.1摩尔)氯三甲基硅烷及5毫升(0.1摩尔)于30毫升二氯甲烷中之乙腈之混合物在室温下搅拌2天。该反应混合物以50毫升水稀释且以醋酸乙酯萃取。该结合的有机相以硫酸钠干燥且在真空下去除溶剂。该产生之油通过使用醋酸乙酯∶己烷(1∶5)作为洗提剂之硅胶管柱。在真空下去除溶剂后，获得固体之包含产物之所收集的第一部份。此固体自乙醇/水中结晶以产生3.67克(78％产量)之具有熔点74-76℃之白色结晶产物。
该产物具有下列之分析数据：NMR(DMSO-d6)：δ5.91ppm(1H，s，CH)；δ6.92ppm(1H，d，J＝9Hz，芳基)；δ7.06ppm(4H，d，J＝8Hz，芳基)；δ7.24ppm(8H，m，芳基)；δ7.48ppm(1H，d，J＝9Hz，芳基)。
分析.C19H15Cl(CH计算：81.86，5.42；发现：81.69，5.51)。
6.8三(4-氯苯基)丙酰胺之合成
一种较佳之三(4-氯苯基)丙酰胺(化合物30)之合成方法如下：5.2克(0.012摩尔)于25毫升四氢呋喃中之三(4-氯苯基)丙酸氯化物之混合物被冷却至0-5℃且加入25毫升氢氧化铵(0.4摩尔氨)。该溶液在0-5℃中搅拌15分钟且然后以醋酸乙酯(5×25毫升)萃取。该结合的有机相以硫酸镁干燥。蒸发产生4.5克(91％产量)之非纯白粉末其从己烷中结晶以产生3.7克(74％产量)之具有熔点158-160℃之白色粉末。
该产物具有下列之分析数据：NMR(CDCl3)：δ3.50ppm(2H，s，CH2)；δ4.91ppm(1H，s，NH2)；δ5.29ppm(1H，s，NH2)；δ7.15ppm(6H，d，J＝8Hz，芳基)；δ7.26ppm(6H，d，J＝8Hz，芳基)。
分析.C21H16Cl3NO(CHNCl计算：62.53，4.00，3.47，26.03；发现：62.31，4.03，3.45，26.20)。
6.9(2-氟苯基)-二苯基乙腈之合成
一种较佳之(2-氟苯基)-二苯基乙腈(化合物32)之合成方法如下：0.5克(0.002摩尔)氯-(2-氟苯基)-二苯基甲烷及0.15克(0.002摩尔)氰化铜之混合物在无溶剂150℃下加热2小时。该混合物被温和地冷却，加入10毫升甲苯，过滤该混合物，且在真空下去除溶剂。该产生之非纯白固体从2-丙醇中结晶以产生0.31克(64％产量)之具有熔点144-145℃之澄清结晶产物。
该产物具有下列之分析数据：NMR(CDCl3)：δ6.67ppm(1H，t，J＝9Hz，芳基)；δ7.03-7.17ppm(4H，m，芳基)；δ7.24ppm(3H，m，芳基)；δ7.48ppm(6H，m，芳基)。
分析.C20H14FN(CHN计算：83.60，4.91，4.87；发现：83.41，4.97，4.84)。
6.10 3-(2-氯苯基)-3，3-二苯基丙酸之合成
一种较佳之3-(2-氯苯基)-3，3-二苯基丙酸(化合物36)之合成方法如下：1.7克(0.07摩尔)镁及11.2克(0.07摩尔)于25毫升无水乙醇中之二乙基丙二酸酯之混合物回流加热直到所有的镁被消耗(大约2小时)。溶剂之蒸发产生澄清油，加入20克(0.064摩尔)氯-(2-氯苯基)-二苯基甲烷及100毫升苯。该混合物回流5分钟且然后在周围温度下搅拌3小时。加入水(90毫升)及10毫升1.0M氢氯酸及该混合物在室温下搅拌14小时。分离有机层，以水洗涤且以硫酸钠干燥。蒸发产生14.6克(51％产量)之淡黄色固体。在最终步骤中，12.5克(0.028摩尔)之此固体及9.5克(0.17摩尔)氢氧化钾于100毫升乙醇中回流9小时。在真空下去除溶剂，加入400毫升水且该溶液在65℃搅拌1小时。冷却后之溶液以1.0M氢氯酸进行酸化造成白色固体沉淀。经由过滤，在己烷中沸腾及热过滤收集该固体。该产生之白色固体重8.5克(90％产量)且具有熔点180-182℃。
该产物具有下列之分析数据：NMR(DMSO-d6)：δ4.01ppm(2H，s，CH3)；δ6.98ppm(1H，d，J＝9Hz，芳基)；δ7.19ppm(6H，m，芳基)；δ7.28ppm(6H，m，芳基)；δ7.36ppm(1H，d，J＝9Hz，芳基)；δ11.92ppm(1H，br，COOH)。
分析.C21H17ClO2·0.1H2O(CH计算：74.49，5.12；发现：74.37，5.27)。
6.11二乙基-(α，α-二苯基)-2-氟苄基)丙二酸酯之合成
一种较佳之二乙基-(α，α-二苯基)-2-氟苄基)丙二酸酯(化合物55)之合成方法如下：0.1克(0.0035摩尔)镁，0.64克(0.004摩尔)二甲基丙二酸酯，催化量之碘，及一滴于10毫升无水乙醇中之四氯化碳之混合物回流加热直到所有的镁被消耗(2小时)。溶剂之蒸发产生一澄清油，加入1克(0.0034摩尔)氯-(2-氟苯基)-二苯基甲烷及40毫升苯。该混合物回流5分钟且然后在周围温度下搅拌4小时。加入水(10毫升)及1毫升1.0M氢氯酸及该混合物在室温下搅拌14小时。分离有机层，以水洗涤且以硫酸钠干燥及在真空下去除溶剂。该产生之红色固体自乙醇中结晶以产生淡黄色固体重1.0克(67％产量)且具有熔点133.5-135℃。
该产物具有下列之分析数据：NMR(CDCl3)：δ1.03ppm(6H，t，J＝8Hz，CH3)；δ3.92ppm(4H，m，CH2)；δ5.50ppm(1H，s，CH)；δ6.87ppm(1H，dd，J＝9，11Hz，芳基)；δ7.06ppm(1H，m，芳基)；δ7.26ppm(8H，m，芳基)；δ7.42ppm(4H，d，J＝9Hz，芳基)。
分析.C16H25FO4·0.25H2O(CH计算：73.48，6.05；发现：73.44，5.96)。
6.12 4，4，4-三苯基丁腈之合成
一种较佳之4，4，4-三苯基丁腈(化合物64)之合成方法如下：5.0克(0.017摩尔)3，3，3-三苯基丙醇，2.2克(0.019摩尔)甲烷磺酰基氯化物，及3.6毫升(0.026摩尔)于100毫升二氯甲烷中之三乙胺之混合物在-15℃搅拌30分钟。该反应混合物然后被连续地以50毫升水，100毫升1.0M氢氯酸，100毫升饱和碳酸钠溶液，及100毫升盐水洗涤。溶剂之蒸发产生6.4克(80％产量)之白色固体(3，3，3-三苯基丙基甲磺酰酯)。5.3克(0.0145摩尔)之此甲磺酰酯及0.85克(0.017摩尔)氰化钠于100毫升二甲亚砜中回流2.5小时。对此经冷却之反应混合物加入500毫升水及500毫升醋酸乙酯，该层被分离且该水层每一次以100毫升醋酸乙酯萃取三次。该结合的有机相以200毫升水洗涤且以硫酸镁干燥。在真空下去除溶剂且该产生之白色固体从2-丙醇中结晶以产生2.3克(45％产量)之具有熔点130-133℃之白色结晶。
该产物具有下列之分析数据：NMR(DMSO-d6)：δ2.06ppm(2H，t，J＝8.5Hz，CH2)；δ3.00ppm(2H，t，J＝8.5Hz，CH2)；δ7.20-7.36ppm(15H，m，芳基)。
红外线(KBr)3018cm-1；2246cm-1；1592cm-1；1489cm-1。
分析.C22H19N·0.1H2O(CHN计算：88.32，6.46，4.68；发现：88.24，6.45，4.35)。
6.13(2-氯苯基)-二苯基乙酰胺之合成
一种较佳之(2-氯苯基)-二苯基乙酰胺(化合物75)之合成方法如下：(2-氯苯基)-二苯基乙腈(化合物14)，2.0克(0.007摩尔)，被溶解于15毫升硫酸及15毫升醋酸中且在100℃加热12小时。经冷却之反应混合物以氢氧化铵中和且以二氯甲烷萃取。该有机层以硫酸钠干燥且在真空下去除溶剂。该产生之褐色固体从丙酮中结晶以产生0.9克(42％产量)之具有熔点197-198.5℃之淡褐色固体。
该产物具有下列之分析数据：NMR(CDCl3)：δ5.90ppm(1H，s，NH2)；δ6.07ppm(1H，s，NH2)；δ6.93ppm(1H，d，J＝7Hz，芳基)；δ7.20ppm(1H，t，J＝8Hz，芳基)；δ7.31ppm(11H，m，芳基)；δ7.49ppm(1H，d，J＝7Hz，芳基)。
红外线(KBr)1690cm-1；1240cm-1；1020cm-1。
分析.C20H16ClN·0.3H2O(CHN计算：73.41，5.11，4.28；发现：73.13，5.12，4.24)。
6.14 3-(2′-氯苯基)-3，3-二苯基丙醛之合成
一种较佳之3-(2′-氯苯基)-3，3-二苯基丙醛(化合物79)之合成方法如下：1.8克(0.0053摩尔)3-(2-氯苯基)-3，3-二苯基丙酸(化合物36)，0.68克(0.007摩尔)N-甲基-N-甲氧基羟基胺氢氯化物，0.91克(0.0059摩尔)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基-羰基二酰亚胺氢氯化物及0.97毫升(0.007摩尔)于25毫升二甲基甲酰胺中之三乙胺之混合物在0-5℃搅拌2小时接着在室温下搅拌15小时。加入水(15毫升)且该混合物在另外之30毫升水加入前于室温下搅拌1.5小时及该混合物以醋酸乙酯(3×50毫升)萃取，其然后以硫酸钠干燥。溶剂之蒸发产生一橘色油(0.99克，0.0026摩尔，49％产量之N-甲基-N-甲氧基-3-(2′-氯苯基)-3，3-二苯基丙基酰胺)。此酰胺溶解于25毫升四氢呋喃中且被冷却至0-5℃搅拌。于5毫升四氢呋喃中之0.20克(0.0053摩尔)氢化锂铝淤浆被逐滴加入此冷的搅拌溶液中。该混合物在0-5℃搅拌1小时且以于70毫升水中之9.9克(0.073摩尔)硫酸氢钾溶液淬火。加入醋酸乙酯(50毫升)及层被分离。该水层以30毫升醋酸乙酯萃取且该结合的有机部份以硫酸钠干燥。在真空下去除溶剂且该黄色残留物从醋酸乙酯中结晶以产生0.29克(91％产量)之具有熔点92-93℃之白色结晶产物。
该产物具有下列之分析数据：NMR(CDCl3)：δ3.99ppm(2H，d，J＝3Hz，CH2)；δ6.94ppm(1H，d，J＝9Hz，芳基)；δ7.10ppm(4H，d，J＝8Hz，芳基)；δ7.18ppm(1H，d，J＝9Hz，芳基)；δ7.29ppm(8H，m，芳基)；δ7.40ppm(1H，d，J＝8Hz，芳基)；δ9.48ppm(1H，t，J＝3Hz，CHO)。
分析.C21H17ClO(CH计算：78.62，5.34；发现：78.46，5.53)。
6.15 4-(2-氯苯基)-4，4-二苯基-2-丁酮之合成
一种较佳之4-(2-氯苯基)-4，4-二苯基-2-丁酮(化合物82)之合成方法如下：1.05克(0.0027摩尔)N-甲基-N-甲氧基-3-(2-氯苯基)-3，3-二苯基丙酰胺之溶液，于20毫升四氢呋喃中，被冷却至0℃且1.01毫升甲基溴化镁(3.0M于四氢呋喃中之溶液，0.00303摩尔)被加入该冷却溶液中。该混合物在室温下搅拌过夜。该反应以冷水性氢氯酸溶液(25毫升，1.0M)淬火且然后以二氯甲烷(2×20毫升)萃取。该有机溶液以20毫升饱和水性碳酸氢钠及15毫升盐水洗涤。该有机层以硫酸钠干燥。蒸发产生0.89克黄色固体之粗产物。该粗产物经由急骤管柱层析(硅胶，1∶5醋酸乙酯∶己烷)纯化产生0.385克(41％产量)之具有熔点120-123℃之白色固体。
该产物具有下列之分析数据：NMR(CDCl3)：δ2.20ppm(3H，s，CH3)；δ2.20ppm(3H，s，CH3)；δ4.28ppm(2H，s，CH2)；δ6.85ppm(1H，m，芳基)；δ7.04-7.32ppm(13H，m，芳基)。
分析.C22H19ClO(CH计算：78.91，5.72；发现：78.52，5.65)。
6.16 α-(2-氯苯基)-α-(4-羟基苯基)苄醇之合成
一种较佳之α-(2-氯苯基)-α-(4-羟基苯基)苄醇(化合物84)之合成方法如下：0.5克(0.0015摩尔)α-(2-氯苯基)-α-(4-甲氧基苯基)苄醇之溶液，于10毫升二氯甲烷中，被冷却至-15℃且4.5毫升三溴化硼(1.0M于二氯甲烷中之溶液，0.0045摩尔)被加入该冷却溶液中。该混合物在室温下搅拌过夜且然后回流8小时。该反应混合物以水淬火及经由添加水性碳酸氢钠中和。该混合物以二氯甲烷(3×20毫升)萃取。该有机层以硫酸镁干燥。蒸发产生0.47克深红油状之粗产物。该粗产物经由急骤管柱层析(硅胶，1∶5醋酸乙酯∶己烷)纯化产生0.182克(39％产量)之具有熔点56.5-60℃之黄色固体。
该产物具有下列之分析数据：NMR(CDCl3)：δ5.76ppm(1H，bs，OH)；δ6.45ppm(2H，dd，芳基)；δ6.78ppm(2H，m，芳基)；δ7.12ppm(4，m，芳基)；δ7.24-7.62ppm(5H，m，芳基)。
6.17环己基-二苯基甲醇之合成
一种较佳之环己基-二苯基甲醇(化合物88)之合成方法如下：3.0克(0.0021摩尔)甲基环己基羧基酯于20毫升四氢呋喃(THF)中之溶液被逐滴加入，且搅拌，在室温下加入至46毫升(0.0046摩尔)溴化苯基镁(1.0M于THF中)。该溶液被回流6小时且然后被冷却。加入水(15毫升)造成白色沉淀形成。该混合物以醋酸乙酯(3×25毫升)萃取且该结合的有机相以硫酸钠干燥。溶剂之蒸发产生澄清油其自乙醇中结晶。该白色结晶经由过滤收集以产生4.0克(75％产量)之具有熔点76-78℃之产物。
该产物具有下列之分析数据：NMR(CDCl3)：δ1.00-1.40ppm(5H，m，脂肪族)；δ1.58ppm(2H，d，J＝12Hz，脂肪族)；δ1.64-1.82ppm(3H，m，脂肪族)；δ1.58ppm(1H，s，OH)；δ2.45ppm(1H，t，J＝13Hz，CH)；δ7.16ppm(2H，t，J＝9Hz，芳基)；δ7.30ppm(4H，m，芳基)；δ7.48ppm(4H，d，J＝9Hz，芳基)。
分析.C19H22O·0.75乙醇(CH计算：82.83，8.44；发现：82.07，8.62)。
6.18环己基-二苯基乙腈之合成
一种较佳之环己基-二苯基乙腈(化合物89)之合成方法如下：0.94克(0.024摩尔)氨基钠及3.85克(0.02摩尔)若二苯基乙腈于25毫升甲苯之混合物回流搅拌3小时。对此回流混合物加入2.6毫升(0.022摩尔)环己基氯化物。该混合物回流搅拌另外之3小时且然后冷却。对该冷溶液加入50毫升1.0M氯化氢溶液。该层被分离且有机层以盐水洗涤且以硫酸钠干燥。在真空下去除甲苯以产生黄色固体(4.9克)。此固体自乙醇中结晶以产生3.6克具有熔点117.5-119℃之白色结晶产物。
该产物具有下列之分析数据：NMR(CDCl3)：δ1.29ppm(5H，m，脂肪族)；δ1.73ppm(5H，m，脂肪族)；δ2.50ppm(1H，t，J＝12Hz，CH)；δ7.26ppm(2H，d，J＝9Hz，芳基)；δ7.32ppm(4H，t，J＝9Hz，芳基)；δ7.50ppm(4H，d，J＝9Hz，芳基)。
分析.C20H21N(CHN计算：87.23，7.69，5.09；发现：87.28，7.68，5.05)。
6.19环己基-二苯基乙酰胺之合成
一种较佳之环己基-二苯基乙酰胺(化合物90)之合成方法如下：环己基-二苯基乙腈(化合物89)，0.155克(0.0056摩尔)，于1毫升硫酸及1毫升醋酸中搅拌且在110℃中加热9小时。该冷却的反应混合物以等体积的水稀释且以二氯甲烷萃取。产物自未反应之起始物质中的分离系经由急骤层析法(于硅胶上7∶3己烷∶醋酸乙酯)完成。在真空下部分之蒸发产生0.044克(27％产量)之白色固体。
该产物具有下列之分析数据：NMR(CDCl3)：δ0.60ppm(2H，q，J＝9Hz，CH2)；δ0.93ppm(1H，q，J＝9Hz，CH2)；δ1.42ppm(2H，q，J＝12Hz，CH2)；δ1.67ppm(3H，m，CH2)；δ1.83ppm(2H，d，J＝10Hz，CH2)；δ2.89ppm(1H，t，J＝12Hz，CH2)；δ5.58ppm(1H，brs，NH)；δ6.00ppm(1H，brs，NH)；δ7.23-7.48ppm(10H，m，芳基)。
6.20其他化合物
本发明之其他化合物可用前述合成之途径修饰，或经由此技艺中熟知之其他方法而被合成。化合物1，3，4，5，7，8，9，10，11，12，19，20，21，23，24，25，26，28，34，37，38，39，42，43，44，45，46，47，48，50，51，54，57，59，60，61，62，66，67，69，71，72，73，76，77及87为可自Aldrich Chemical Co.中可购得。
化合物49及52为可自Maybridge Chemical Co.中可购得。
实施例：活体外活性
此实施例证明数个式(I)之列举化合物于活体外对抑制红细胞之Gardos通道及/或有丝分裂因子诱导细胞增殖之活性。该分析为一般应用于证明于活体外式(I)之其他化合物的活性。
7.1实验程序
Gardos通道(10μM化合物)之抑制百分比及IC50之测定为如Brugnara等人，1993，J.Biol.Chem.268(12)：8760-8768中所描述。与3T3鼠纤维组织母细胞(ATCCNo.CRL 1658)之有丝分裂因子诱导细胞增殖(10μM化合物)之抑制百分比及IC50之测定为如Benzaquen等人(1995，Nature Medicine1：534-540)中所描述。被报告之氯三苯甲咪唑作为比较之目的。其他细胞系，例如，癌细胞，内皮细胞及纤维组织母细胞，及同样地许多其他细胞，可被使用于细胞增殖分析。特别细胞系之选择将视一部份所欲应用，及一般熟于此技艺人士之能力内而定。
7.2结果
于活体外分析之结果为下列表1所提供。所有的测试化合物显示在至少一个分析中具有明显的活性。大部分的测试化合物显示在两者分析中具有明显的活性。
表1
不同化合物之医药活性(在10μM测量抑制)化合物编号 有丝分裂因子诱导细胞增殖 Gardos通道 IC50(μM) 抑制％ IC50(μM) 抑制％氯三苯甲咪唑 0.626 93.0 0.046 99.3 (1) - - 0.755 97.0 (2) - 64.8 0.459 99.4 (3) - 53.0 1.205 86.6 (4) - 37.7 2.86 91.0 (5) 1.28 66.0 1.653 86.0 (6) 2.10 31.0 0.961 98.0 (7) - 6.6 0.410 98.2 (8) - 28.3 2.851 95.6 (9) - 32.7 21.803 77.2 (10) 4.80 25.5 0.957 89.7 (11) 2.31 52.0 2.16 99.2 (12) 1.70 72.8 0.252 99.0 (13) 0.92 87.0 0.133 72.4 (14) 2.20 95.8 0.048 98.8 (15) 2.60 88.63 0.0968 100.0 (16) 0.40-2.0 99.4 0.087 98.0 (17) 3.90 91.8 0.860 100.0 (18) 10.0 76.09 0.431 98.0 (19) 5.8 80.0 1.129 97.0 (20) - 39.0 0.795 98.1 (21) 2.8 99.0 0.725 97.3 (22) 6.8 85.0 0.302 82.0 (23) 3.8 77.0 0.216 97.9 (24) - 29.0 0.135 97.9 (25) - 70.0 - 34.4 (26) 1.30 99.0 - 10.0 (27) 3.00 99.0 0.449 100.0 (28) 0.70 99.0 5.22 98.0 (29) 3.10 99.0 0.649 100.0 (30) 0.90 99.0 0.272 97.0 (31) 2.60 89.0 0.445 99.0 (32) - 54.0 0.068 95.7 (33) - 45.0 0.125 100.0 (34) -68.0 0.939 96.3 (35) - 38.0 0.430 95.8 (36) 0.60 92.0 3.11 78.6 (37) - 31.0 0.057 100.0 (38) 0.80-2.30 99.0 0.22 92.0 (39) 3.30 99.0 1.682 97.0 (40) 1.0-1.20 99.0 - (16.9) (41) 1.40 99.0 2.071 97.0 (42) 3.30 99.0 0.615 99.0 (43) 0.80 99.0 0.061 99.0 (44) - 82.0 0.388 79.4 (45) 0.80 99.0 0.320 98.0 (46) 2.20 99.0 0.076 99.5 (47) 0.80 99.0 0.193 100.0 (48) 0.40 98.0 1.29 100.0 (49) 0.30 94.0 0.336 88.0 (50) 0.50 99.0 0.288 100.0 (51) - 37.0 0.551 100.0 (52) 1.70 93.0 0.255 94.0 (53) - 74.0 0.101 98.0 (54) 0.20 99.0 - 17.4 (55) - 5.0 0.058 98.0 (56) 3.20 99.0 0.275 91.0 (57) - 21.0 1.506 89.0 (58) - 99.0 0.247 99.6 (59) 3.00 98.0 0.489 100.0 (60) - 31.0 0.304 98.0 (61) 1.6 99.0 2.372 85.0 (62) - 31.0 0.098 98.0 (63) -37.0 1.017 69.0 (64) 5.80 63.0 0.088 100.0 (65) 1.60 99.0 0.435 98.0 (66) - 73.0 0.384 67.2 (67) 1.40 98.0 0.43 96.1 (68) 3.1 98.0 0.236 97.5 (69) - 99.0 0.025 100.0 (70) 1.20 92.0 0.459 99.6 (71) 1.10 97.0 - 0.4 (72) 2.40 99.0 1.075 72.6 (73) 2.50 99.0 0.371 98.9 (74) - 70.0 1.405 97.5 (75) - 90.0 0.006 98.0 (76) - 84.0 - (30.4) (77) - 93.0 - 16.4 (78) - 72.0 0.22 95.0 (79) 2.70 99.0 0.083 96.0 (80) - 62.0 0.206 97.0 (81) - 53.0 0.187 100.0 (82) 5.0 98.0 0.027 99.5 (83) 6.4 80.0 0.918 96.7 (84) 1.0 99.0 1.274 95.3 (85) 7.0 91.0 0.739 98.0 (86) 2.4 99.0 0.237-0.455 93.9 (87) 2.2 96.0 0.068 99.0 (88) 9.5 94.0 0.862 99.0 (89) 0.90 98.0 6.128 70.2 (90) 3.0 86.0 0.072 98.3
8.实施例：氯三苯甲咪唑代谢物B(化合物6)置换不游离125I-ChTX
Charybdotoxin(ChTX)，一种37个氨基酸长度之肽，为许多Ca2+活化及电压-门K+通道之有效抑制剂，包括Gardos通道(Miller等人，1985，Nature 313：316-318；Bontems等人，1992，Biochemistry 31：7756-7764；Park等人，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.88：2046-2050；Vazquez等人，1989，J.Biol.Chem.264：20902-20909；Grinstein及Smith，1990，J.Gen.Physiol 95：97-120；Brugnara等人，1993，J.Biol.Chem.268：8760-8768)。因为不游离ChTX抑制剂可经由其他Gardos通道抑制剂而被竞争性地置换，ChTX为一了解Gardos通道功能及活化之重要的工具。此实施例证明ChTX经由CLT代谢物B(化合物6)之置换。此处所描述之方法为一般应用于证明其他式(I)化合物对竞争性地置换ChTX之能力。
8.1 125ChTX键结至红细胞
白血球细胞经由将0.8毫升之装满的红细胞通过5毫升之包含等量α-纤维素及微晶纤维素之混合物的注射筒而被去除，其为如经由Beutler及West，1976，J.Lab.Clin.Med.88：328-333之原始描述。红细胞在包含18mM氯化钠，2mM氯化钾，10mM tris-HCl，pH8.0，230mM蔗糖及0.25％牛血清蛋白之键结培养基中洗涤三次。然后以同样的培养基在15％血细胞比容(HCt)下制备悬浮液。在无或有指定药物的存在下，细胞被加入至3.5毫升包含125IchTX之键结培养基至最终浓度为1×107细胞/毫升。包含细胞悬浮液之试管在室温下被轻轻地旋转90分钟。在培养的终点，1毫升等分的量经由微离(microfuge)作成小球且在4℃以包含200mM氯化钠，10mMtris-HCl，pH8.0之溶液洗涤三次。该洗涤过的红细胞小球然后于1毫升0.01％之Acationox(American Scientific Products)中溶解，且于伽马计数器内计数。在键结分析之终点时，等分的键结培养基在加入细胞前被计数。
8.2经由代谢物B(化合物6)之置换
代谢物B(化合物6)自于乙腈中之基本溶液被加入至红细胞中。小量之乙腈被加入至每一个控制组试管。专一键结在125I-ChTX经由50nM未标记的ChTX之置换的基础上而被评估。在125I-ChTX加入前，不同浓度的代谢物B(化合物6)或未标记的ChTX被加入至细胞悬浮液中(1×107细胞/毫升)。
8.3结果
该分析之结果描述于表2中。代谢物B(化合物6)专一地置换125IChTX键结。 表2
经由代谢物B(化合物6)置换125I-ChTX键结 125I-ChTX键结 置换 σ (％) σ(％) 控制组 50nM ChTX 10μM CLT 1nM B 10nM B 100nM B 500nM B 1μM B 5μM B 10μM B 1.279 0.608 1.000 1.403 1.399 1.239 1.134 1.327 1.016 0.790 0.030 0.002 0.06 0.13 0.15 0.35 0.07 0.05 0.07 0.04 0.0 100.0 41.6 (18.5) (17.9) 6.0 21.6 (7.2) 39.2 72.9 2.3 0.3 6.0 9.3 10.7 28.1 6.1 4.1 7.0 5.1
σ为标准偏差
b为CLT代谢物B(化合物6)
9.实施例：氯三苯甲咪唑及其代谢物在人类活体中抑制Ca2+活化钾通道运输
此实施例证明氯三苯甲咪唑(CLT)及代谢物A及B(化合物17及6)在人类活体中抑制红细胞之Gardos通道的能力。此处所描述之方法为一般应用于证明其他式(I)化合物当被施与至人体时，在活体内之活性。
9.1实验程序
两个受验者，一位男性(A，72公斤)及一位女性(D，56公斤)，每12小时摄取一个500毫克CLT锭剂持续六天，其相当于个别每日CLT剂量14及18毫克/公斤。在第3天及第6天之CLT之AM剂量6小时后，收集血液以测量红细胞钙-活化钾运输之抑制。
9.2结果
表3叙述在两个正常的受验者中红细胞钙-活化钾运输之测量结果。如同表3所显示，在CLT施与期间，有明显的抑制钙-活化钾运输，其在药物中断后仍持续至少7天。在第6天，血浆CLT浓度为0.2μM及具有2.9μM(受验者A)及3.85μM(受验者D)之组合代谢物等级。其并没有在血浆中之CLT或CLT-代谢物在CLT施与停止后两天之证据。
表3
六天期间在两个受验者中口服氯三苯甲咪唑血液等级
及红细胞Ca2+活化K+运输之作用
CLT等级 Ca2+活化
血浆 血球 84Rb流入
CLT 代谢物-B代谢物-A CLT 代谢物 抑制
μM μM μM 微摩尔/升细胞 A+BμM受验者A基线 0 0 0 0 0 0±4CLT第3天 0.2 1.1 0.7 0.45 4.45 74±5CLT第6天 0.2 1.1 1.8 0.8 4.15 73±4冲洗第6天 0 ＜0.1 ＜0.1 0.4 0 71±7冲洗第10天 0 ＜0.1 ＜0.1 ND 0 75±11冲洗第13天 0 0 0 0.85 0 58±9冲洗第20天 0 0 0 0 0 0±10受验者B基线 0 0 0 0 0 0±10CLT第3天 0.25 0.8 1.65 0.2 4.2 80±28CLT第6天 0.2 1.35 2.5 1.1 7.3 83±7冲洗第8天 0 ＜0.1 ＜0.1 0.6 0 79±21冲洗第10天 0 ＜0.1 ＜0.1 0.65 0 82±4冲洗第13天 0 0 0 0.7 0 37±30冲洗第20天 0 0 0 0.25 0 0±13
全血CLT等级之测量给予评估“血球相关”CLT等级。如同表3所显示，“血球相关”CLT之明显等级直到第7天(受验者A)及第14天(受验者D)被侦测到接着CLT断除。在CLT中断后两天，在血球中并没有代谢物可侦测到。这些数据建议红细胞或其他血液元素键结或包含明显量之CLT一段延长时间，即使是在无可测量的血浆等级时。CLT代谢物显示不同的行为，在同一时间自血浆及血球中消失。
在血球中CLT及其代谢物之总计等级及在全血中计算之Gardos通道之抑制百分比间为明显相关[％抑制＝31.71og(CLT+代谢物A+代谢物B，μM)+56.4；r2＝0.439，t＝3.06，p＜0.02，n＝14]。
代谢物B(化合物6)藉由红细胞Gardos通道专一地抑制钾运输。CLT及代谢物B(化合物6)与红细胞悬浮液在20％Hct中培养。比较在CLT及代谢物B(化合物6)之红细胞Gardos通道之抑制效果显示对CLT为310±63nM之IC50值及对代谢物B(化合物6)为720±190nM之IC50值。经由代谢物B(化合物6)抑制K+运输之数值为二至三倍低于经由代谢物B(化合物6)置换125I-ChTX之IC50值。其先前以显示，(Brugnara，1993，之前)对于ChTX其经由ChTX置换125I-ChTX之IC50值与经由ChTX抑制K+运输之抑制相比增加二至三倍。
经由不同浓度之代谢物B(化合物6)及CLT测量K+运输之抑制，且该结果描述于表4。当细胞以500nMCLT或1μM代谢物B(化合物6)处理时，K+运输之抑制百分比大于50％且在5μMCLT及10μM代谢物B(化合物6)达到最大等级。
CLT之口服施与在任何一个受验者研究中并没有明显的副作用。特别是没有噁心，呕吐或腹泻被观察到。在肝功能试验，血浆肌胺酸或血尿氮(BUN)中并没有变化被观察到。
表4[药物] 流出 控制％ 抑制％控制组 1.152 100.0％ 0.0％CLT：1nM 1.155 100.3％ -0.3％10nM 1.124 97.6％ 2.4％100nM 0.892 77.4％ 22.6％500nM 0.518 45.0％ 55.0％1μM 0.248 21.5％ 78.5％5μM 0.038 3.3％ 96.7％10μM 0.043 3.7％ 96.3％2-氯苯基-双-苯基-甲醇(化合物6)1nM 1.444 125.3％ -25.3％10nM 1.115 96.8％ 3.2％100nM 0.952 82.6％ 17.4％500nM 0.717 62.2％ 37.8％1μM 0.437 37.9％ 62.1％5μM 0.25 21.7％ 78.3％10μM 0.113 9.8％ 90.2％
10.实施例：代谢物B(化合物6)在不同细胞系玻管内抑制产生有丝分裂诱导细胞增殖
此实施例证明氯三苯甲咪唑(CLT)及代谢物B(化合物6)在不同细胞系中抑制产生有丝分裂诱导细胞增殖。此处之分析为一般应用于证明其他式(I)化合物在不同细胞系中之活性。
10.1实验程序
人类黑色瘤细胞(MM-RU)及结肠腺癌细胞(HT29)被培养于有或无10μMCLT代谢物B(化合物6)中，如同于Benzaquen等人，1995，Nature Medicine1：534-540中所描述且经由测量[3H]胸腺核苷摄入测定DNA合成之等级。
10.2结果
CLT代谢物B(化合物6)为在玻管内之这些细胞系增生之有效的抑制剂。更精确地，CLT代谢物B(化合物6)抑制[3H]胸腺核苷摄入在MM-RU细胞中大约60％对控制组及在HT29细胞中大约50％对控制组。
11.实施例：CLT抑制在活体内之细胞增殖
此实施例证明氯三苯甲咪唑(CLT)抑制在人类黑色瘤之动物模式中活体内之细胞增殖。此动物模式为意欲被应用于证明其他式(I)化合物抑制在玻管内MM-RU细胞之活体内活性。
11.1实验程序
具有严重混合型免疫缺乏(SCID)之老鼠经由测尾静脉接种约2.5×106MM-RU人类黑色瘤细胞，一种细胞系其仅在肺中产生转移(Byers等人，1993，MelanomaRes.3：247-255)。开始于接种日，每天施与赋形剂(控制组，n＝9)或CLT(120毫克/公斤；治疗组，n＝10)之皮下注射10周。在10周治疗时间结束后，杀死老鼠及检查转移。
11.2结果
在接种MM-RU细胞后十周，所有控制组之动物具有发展的胸膜肉眼可见的及显微镜可见的肺转移。在完全对比下，一半经CLT处理之动物无肉眼可见的转移，且两只动物甚至没有显示显微镜可见之转移的证据。
虽然在每一组中所观察到的转移数目不同，在经CLT处理组中之动物比那些在控制组中之动物显示出明显地较少胸膜(14±4于控制组中对2±1在经处理的动物中；P＜0.05)及显微镜可见(27±9在控制组对7±2在经处理的动物中；P＜0.05)转移。在显微镜切片中比在胸膜表面上被计数的转移数目较多，为典型的SCID-老鼠/MM-RU细胞模式。在两种计数方法间为极好的相关(r＝0.90)。MM-RU黑色瘤细胞对肺组织之高等器官专一性为一致，其他器官并没有显示任何转移病灶之组织学上的证据。
在控制组及经处理组之动物并没有显示任何系统转移疾病或毒性之证据；控制组及经CLT处理之动物皆以可相比的量增加体重。
在此老鼠黑色瘤模式中活体内功效可以其他在玻管内抑制MM-RU细胞之式(I)化合物而同样地被证明。
12.实施例：配方
下列实施例提供列举，但不因而限制，施用本发明之化合物至哺乳动物，尤其是人类，患者之配方。此处所描述之任何化合物，或其医药盐类或水合物，可被制成如下列实施例所提供之配方。
12.1锭剂配方
每一个包含60毫克之活性成分之锭剂被制备如下：
活性化合物 60毫克
淀粉 45毫克
微晶纤维素 45毫克
羧甲基淀粉钠 4.5毫克
滑石 1毫克
聚乙烯吡咯烷酮(10％于水中) 4毫克
硬脂酸镁 0.5毫克
150毫克
该活性成分，淀粉及纤维素被通过No.45孔美国筛且彻底混合。该聚乙烯吡咯烷酮之溶液与通过No.14孔美国筛所产生之粉末混合。该颗粒在50-60℃干燥且通过No.18孔美国筛。羧甲基淀粉钠，硬脂酸镁及滑石，预先通过No.60孔美国筛，然后被加入至颗粒中，其，在混合后，经由锭剂机压制以产生每一个重150毫克之锭剂。
锭剂可自所列成分经由湿式制粒接着压制而被制备。
12.2明胶胶囊
硬明胶胶囊使用下列成分制备：
活性化合物 250毫克/胶囊
干燥淀粉 200毫克/胶囊
硬脂酸镁 10毫克/胶囊
前述活性成分被混合且以460毫克量填充入硬明胶胶囊内。
12.3气溶胶溶液
制备包含下列成分之气溶胶：
活性化合物 0.25％(W/W)
乙醇 29.75％(W/W)
推进剂(Propellant)22(氯二氟甲烷) 77.00％(W/W)
该活性化合物与乙醇混合且该混合物加入至推进剂(propellant)22之部分，冷却至-30℃且转移至填充装置。然后将所需量给致不锈钢容器内且以推进剂(propellant)之剩余物稀释。然后瓣膜单位被安装于容器。
12.4栓剂
每一个包含每225毫克活性成分之栓剂被制备如下：
活性化合物 225毫克
饱和脂肪酸甘油脂 2,000毫克
该活性成分被通过No.60孔美国筛且悬浮于使用最小必须热而预先溶解之饱和脂肪酸甘油之中。该混合物然后被倒入公称2克容量之栓剂膜内且被冷却。
12.5悬浮液
每一个包含每5毫升剂量50毫克药剂悬浮液被制备如下：
活性化合物 50毫克
钠 50毫克
羧甲基纤维素
糖浆 1.25毫升
苯甲酸溶液 0.10毫升
调味剂 随意量
色素 随意量
纯水 5毫升
该活性成分被通过No.45孔美国筛且与羧甲基纤维素钠及糖浆混合以形成平滑糊剂。苯甲酸溶液，调味剂及一些色素以一些水稀释且加入，搅拌。然后加入足量的水以产生所需体积。
前述所写之说明书被认为已足以使一熟于此技艺人士实行本发明。前述进行本发明之模式之不同的修饰，为那些熟于此医药或相关领域技艺人士显而易知，且为意欲属于下列申请专利范围之范畴内。
由此所引证之参考文献皆完全并于此处作为参考。