滴眼液 本发明涉及含有式(I)表示的化合物作为活性成分的滴眼液。
按日本专利公开号55513/88报导，已知一些式I所示化合物在治疗长期或气候变应性鼻炎，慢性寻麻诊等中作为抗过敏药和非镇静的抗组胺药。然而，至今为止对式I化合物抗组胺作用的研究一直限制在口服给药方面，对其它给药途径产生的作用未给予适当研究。特别是，甚至未提到用于眼的液体制剂，不了解有关滴眼液的效力或适宜组成。
本发明的一个目的是提供一种含有式(I)化合物作为活性成分的滴眼液。在组合物可用作滴眼液前该活性化合物必须以至少有效浓度存在于组合物中。然而，由于式(I)化合物水溶解度低至3ppm，其只是极微略溶于水，所以当与普通溶剂混合时，它不能提供有效浓度的组合物。
另外，滴眼液应刺激小，并不引起使用上的不适。因眼睛对刺激特别敏感，应仔细研究滴眼液的组成以便具有比其它制剂形式更少的刺激。同时还要求滴眼液高效稳定且保存时间长。
因此，在配制滴眼液前要解决很多问题，应对不同条件的组合及新因素的加入进行研究。然而，没有单独的报导对这些主题给予有用的提示，式(I)化合物仍没有用于滴眼液。
本发明首先提供了含式(I)化合物的滴眼液。
本发明公开了含式(I)所示的化合物的滴眼液：其中X代表卤原子或氢原子；Y代表-COOR1或-SO2R2，其中R1代表取代或未取代烷基，取代或未取代环烷基，取代或未取代链烯基，取代或未取代芳基，或取代或未取代杂环；R2代表取代或未取代烷基，取代或未取代环烷基，或取代或未取代芳基。
式(I)化合物包括其光学异构体(即D-或和L-式)及其混合物。可按现有技术方法，例如日本专利公开号55513/88，美国专利3326924和比利时专利647,043中公开的方法制备式(I)化合物。
式(I)所示化合物中，优选用作滴眼液地是这些：
其中X代表卤原子或氢原子；Y代表-COOR1或-SO2R2，其中R1代表含1-12个碳原子的烷基，其可被-NR3R4(其中R3和R4每个代表氢原子或低级烷基)或卤原子取代，含3-7个碳原子的环烷基，含4-12个碳原子的环烷基烷基，含3-12个碳原子的链烯基，可被卤原子或低级烷基取代的苯基，在其烷基部分含1-4个碳原子且其苯基部分可被卤原子或低级烷基取代的苯基-低级烷基，或在其氮原子上可被低级烷基取代的2-，3-或4-哌啶基；R2代表含1-12个碳原子的烷基，含3-7个碳原子的环烷基，可被卤原子或低级烷基取代的苯基，或在其烷基部分含1-4个碳原子且在其苯基部分可被卤原子或低级烷基取代的苯基-低级烷基。
其中X为卤原子或氢原子且Y为-COO-烷基的那些化合物是更优选的，其中X为在8位的氯原子且Y为COOC2H5的化合物叫做氯雷他定，活性等于或优于氯雷他定的化合物是特别优选的。
式(I)所示化合物以产生有效抗组胺活性的量，通常为0.01-100mg/ml，用于滴眼液。
本发明滴眼液可含增溶剂，稳定剂，防腐剂，等渗剂和pH调节剂。有用的增溶剂包括多乙氧基醚，丙二醇，聚乙烯吡咯烷酮K30和泊洛沙姆188。其中多乙氧基醚80是优选的，这是因为其极好的溶解能力及保持滴眼液在适当渗透压的能力，这将在此后的试验实施例3中得到证实。有用的稳定剂包括亚硫酸氢钠，甘油，乙二胺四乙酸钠，柠檬酸钠和丁基化羟基苯甲醚。其中乙二胺四乙酸钠是优选的，这是因为其对变色有极好的抑制作用，能稳定保持规定的pH并保持活性化合物的高活性的能力，这将在试验实施例4中得到证实。氯化苄烷铵浓度越高，滴眼液的pH和活性越稳定。因此，氯化苄烷铵优选以药品添加剂确定目录中所述的最大浓度(0.127％)作为防腐剂。有用的等渗剂包括氯化钠，D-甘露糖醇，葡萄糖和甘油。D-甘露糖醇是优选的，这是因为其对变色极好的抑制作用，能稳定保持规定的pH及保持活性化合物的高活性的能力，这将在试验实施例5中证实。没有观测D-甘露糖醇的这些活性的浓度依赖情况，D-甘露糖醇优选以使滴眼液等渗于生理盐水的浓度(1.53％)使用。有用的pH调节剂包括磷酸盐化合物，例如磷酸一元钠(磷酸二氢钠)和磷酸二元钠(磷酸氢二钠)，氢氧化钠和盐酸。为了缓解给药刺激，优选磷酸盐浓度不高于0.01M，如果可能，并建议使用除磷盐酸外的pH调节剂，这将在试验实施例8中描述。尽管滴眼液pH可为约4-8，但为了保持活性化合物的稳定性pH最好为约4-5。
本发明滴眼液显示了极好的抗过敏活性且对结膜炎、杜草热、春季结膜炎等有效。特别是本发明公开的氯雷他宁制剂已被证实是常用作抗过敏滴眼液ELICSTM或INTALTM活性的约40倍，这将在试验实施例1中说明。另外，滴入眼睛时对角膜、虹膜或结膜没有可察觉的扰乱，证明本发明制剂的高度安全性，见试验实施例2所述。
用于本发明的滴眼液优选贮存且用在聚丙烯容器内。在聚丙烯容器内贮存具有极好的稳定性，因此与用其它材料制成的容器相比，使用聚丙烯容器是有利的。
虽然不受限制，但本发明滴眼液根据情况一般每天1-4次，每次1-12-滴给药。
实施例
现在参考实施例更详细地说明本发明实施例1-3
在蒸馏水中溶解23g多乙氧基醚80，制备大约300ml溶液。在该溶液中按顺序溶解0.5g氯雷他定，1.0ml 10％氯化苄烷铵，1.27g乙二胺四乙酸钠和15.3g D-甘露糖醇。向该溶液中加入600ml蒸馏水，将溶液进行下面步骤(i)-(iii)中任一个以制备滴眼液1-3。(i)向该溶液中加入15.6g磷酸二氢钠，用0.1M磷酸氢二钠将pH调至5.0，向其中加蒸馏水至1000ml，制备滴眼液1。(ii)向该溶液中加入1.56g磷酸二氢钠，用0.1M磷酸氢二钠将pH调至5.0。向其中加蒸馏水至1000ml，制备滴眼液2。(iii)用盐酸和1N氢氧化钠将溶液pH调至5.0，加蒸馏水至1000ml，制备滴眼液3。实施例4
在蒸馏水中溶解23g乙氧基醚80，制备大约300ml溶液。在该溶液中按顺序溶解0.5g氯雷他定，1.0ml 10％氯化苄烷铵，1.27g乙二胺四乙酸钠和2.6g氯化钠。向该溶液中加600ml蒸馏水，用磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠调节pH至5.0。再向其中加蒸馏水至1000ml，制备滴眼液4。实施例5
在蒸馏水中溶解46g多乙氧苄醚80，制备大约300ml溶液。在溶液中按顺序溶解1.0g氯雷他定，1.0ml 10％氯化苄烷铵，1.27g乙二胺四乙酸钠和2.6g氯化钠。向该溶液中加600ml蒸馏水，用磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将pH调至5.0。再加蒸馏水至1000ml，制备滴眼液5。
试验实施例1
按如下检测前面制备的滴眼液1，4和5，滴眼液1的安慰剂，ELICSTM(活性成分：氨氯地平)和INTALTM(活性成分色甘酸)的抗结膜炎活性。
豚鼠抗卵白蛋白血清制备如下。通过腹内注射卵白蛋白在1ml生理盐水中的1mg/ml溶液和1ml百日咳-白喉-破伤风疫苗(2×1010细胞/ml)致敏体重200-300g的豚鼠。四周后，将动物断头，取血。室温保持30分钟及4℃或更低温度保持4-5小时后，以3000rpm将血离心，得到抗血清。
给重300-500g雄性Hartley豚鼠上眼皮结膜皮内注射上面制备的豚鼠抗卵白蛋白血清(在PCA反应中抗体滴定：1.32)(0.05ml)以进行被动致敏。致敏7天后，为了观察对同种IgE抗体反应往后肢的后静脉注射1ml 1％卵白蛋白和1％Evans’Blue的1∶1混合物以便在结膜上诱发同种PCA。诱发反应30分钟后，将动物断头，分割并切碎染料渗出的结缔组织。用丙酮和0.5％硫酸钠的7∶3混合物萃取染料过夜，用分光光度计(波长625nm)测量渗出染料的量。在诱发PCA反应前0.5小时及PCA诱发后立即向动物3，2，1的双眼内滴1滴滴眼液。
所得结果示于下表1。表中，渗出染料的量表示成平均值(n＝8)±标准偏差，基于生理盐水组的结果计算抑制百分数
表1 滴眼液活性成分浓度(％)外渗染料量(μg/部位)抑制百分数(％)生理盐水 0 10.0±0.7 -滴眼液1 0.05 6.8±1.0 37.5滴眼液4 0.05 6.3±1.2 42.1滴眼液5 0.1 6.3±0.8 42.3安慰剂 0 10.2±1.0 7.0ELICS 0.25 11.2±1.7 -1.3INTAL 2.0 1.2±2.1 -1.4
以上述相同方式检查滴眼液2，其安慰剂，ZADITENTM(活性成分：甲哌噻庚酮富马酸盐)，和INTALTM的抗炎活性。所得结果示于下表2。
表2 滴眼液 剂量(％) 渗出染料量(μ/部位) 抑制百分数(％)生理盐水 0 15.7±0.8 -滴眼液2 5 11.1±1.3 29.6安慰剂 0 16.3±1.3 -3.4ZADITEN 5 9.7±1.0 38.3INTAL 200 12.9±1.1 17.9试验实施例2
用前面实施例制备的滴眼液1，4和5进行对眼粘膜的刺激试验。
每个样品每组使用眼睛未发现异常的4只日本白兔。分别以每30分钟2滴的剂量在左右眼内滴每个样品和生理盐水。滴入后1小时，1，2，5和7天观察眼睛，并按Draize方法判断。结果，对每个样品未发现角膜，虹膜或结膜异常，证明短期滴入对眼睛无刺激问题。试验实施例3
用不同增溶剂进行增溶性试验。
规定量的下表3所示增溶剂溶于蒸馏水，制备大约300ml溶液。向该溶液中按顺序加入0.5g氯雷他定和1.0ml 10％氯化苄烷铵，随后搅拌。再向混合物中加600ml蒸馏水，然后再加入5.6g磷酸二氢钠和2.8g磷酸氢二钠。最后加蒸馏水至1000ml，观测混合物的情况(pH6.3-6.6)
表3样品号 增溶剂1 多乙氧基醚80(23g)2 多乙氧基醚80(4g)+丙二醇(50g)3 多乙氧基醚80(23g)+丙二醇(50g)4 聚乙烯吡咯烷酮K30(3g)+丙二醇(50g)5 聚乙烯吡咯烷酮K30(10g)6 聚乙烯吡咯烷酮K30(50g)7 聚乙烯吡咯烷酮K30(100g)8 泊洛沙姆188(PluronicTMF68)(50g)9 泊洛沙姆188(PluronicTMF68)(200g)10 泊洛沙姆235(PluronicTMF85)(50g)11 泊洛沙姆235(PluronicTMF85)(200g)
观察结果示于下表4
表4样品号氯雷他定状况渗透压*1溶解0.542悬浮2.923溶解3.024悬浮2.895悬浮0.516悬浮0.607悬浮0.788悬浮0.689悬浮≥3.510悬浮0.7211溶解≥3.5
注释：*取生理盐水渗透压为1
试验实施例4
用不同稳定剂进行稳定性试验。
在蒸馏水中溶解23g多乙氧基醚80，制备大约300ml溶液。向溶液中按顺序加入0.5g氯雷他定和下表5所示浓度的稳定剂(药品添加剂确定目录中的最大浓度)，随后搅拌。加蒸馏水至1000ml，于60℃保存所得溶液。在保存开始及保存1，2和5周后检测APHA号，pH和氯雷他定保留值(用HPLC测量)。
表5样品号 稳定剂1 亚硫酸氢钠(5g)2 甘油(200g)3 氯化苄烷铵(1.0ml)4 乙二胺四乙酸钠(1.27g)5 柠檬酸钠(20g)6 丁基化羟基苯甲醚(2g)7 无8 无*
注释*不含氯雷他定
所得结果示于下表6。
表6样品号试验项目初始1周1周5周1APHA号29353991pH3.622.742.692.62氯雷他定保留值(％)10098.397.794.42APHA号184580127pH6.293.943.753.62氯雷他定保留值(％)10082.075.965.3APHA号195691188pH6.103.783.573.42氯雷他定保留值(％)10076.867.448.64APHA号22313146pH5.075.135.054.72氯雷他定保留值(％)100100.198.092.25APHA号22264390pH7.617.346.976.77氯雷他定保留值(％)10095.979.863.26APHA号70513386874pH6.384.553.583.68氯雷他定保留值(％)10098.3100.196.67APHA号264970194pH6.413.783.583.44氯雷他定保留值(％)10075.267.951.58APHA号23151822pH6.473.553.393.27氯雷他定保留值(％)----试验实施例5用不同的等渗剂进行检测。在蒸馏水中溶解23g多乙氧基醚80，制备大约300ml溶液。在该溶液中按顺序溶解0.5g氯雷他定，1.0ml 10％氯化苄烷铵和1.27g乙二胺四乙酸钠。下面所示等渗剂以所示量加入溶液，构成与生理盐水等渗的溶液。
样品1 氯化钠(2.6g)
样品2 D-甘露糖醇(15.3g)
样品3 葡萄糖(14.5g)
样品4 甘油(7.5g)
向该溶液中加600ml蒸馏水，用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠将溶液pH调至5.0。再加蒸馏水至1000ml。于40℃保存每个样品，在保存开始及保存2，4和6个月后以与试验实施例3相同的方式测量APHA号，pH和氯雷他定保留值。也进行60℃下的保存试验，保存1，2和5周及2月后测量。所得结果示于下表7和8。
表7
40℃保存样品号 试验项目 初始值 2个月 4个月 6个月1 APHA号 23 30 26 29
pH 4.98 4.94 4.89 4.87
氯雷他定保留值(％) 100 97.7 95.3 94.52 APHA号 22 28 27 29
pH 4.98 4.95 4.93 4.90
-氯雷他定保留值(％) 100 98.0 96.8 97.03 APHA号 19 30 27 28
pH 4.97 4.95 4.90 4.88
氯雷他定保留值(％) 100 97.9 96.3 95.54 APHA号 25 30 29 27
pH 4.98 4.96 4.90 4.89
氯雷他定保留值(％) 100 98.4 93.8 95.5
表8
60℃下保存样品号 试验项目 1周 2周 5周 2月1 APHA号 35 27 49 71
pH 4.91 4.93 4.80 4.31
氯雷他定保留值(％) 98.7 94.5 87.1 68.72 APHA号 31 31 40 56
pH 4.92 4.94 4.88 4.60
氯雷他定保留值(％) 98.2 97.1 94.2 80.53 APHA号 40 31 46 59
pH 4.92 4.92 4.80 4.50
氯雷他定保留值(％) 98.6 97.5 91.0 78.54 APHA号 35 26 46 58
pH 4.91 4.92 4.81 4.44
氯雷他定保留值(％) 97.8 96.6 90.7 74.3
试验实施例6
用不同pH的滴眼液进行稳定性试验
在蒸馏水中溶解23g多乙氧基醚80，制备大约300ml溶液。在该溶液中按顺序溶解0.5g氯雷他定，1.0ml 10％氯化苄烷铵，1.27g乙二胺四乙酸钠和2.6g氯化钠。
向该溶液中加600ml蒸馏水，用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠将溶液pH调至4，5，6，7或8。再加蒸馏水至1000ml。于40℃保存所得样品，在保存开始及保存2，4和6个月后以与试验实施例3上同的方式测量APHA号，pH和氯雷他定保留值。也进行60℃下的保存试验，保存1，2和5周后测量。所得结果示于下表9和10。
表9
40℃下保存pH 试验项目 开始 2个月 4个月 6个月4 APHA号 26 29 19 27
pH 4.04 4.04 4.04 3.98
氯雷他定保留值(％) 100 99.1 99.0 95.1 5 APHA号 25 40 17 28
pH 5.03 5.00 4.98 4.95
氯雷他定保留值(％) 100 98.8 98.1 94.2 6 APHA号 25 38 28 46
pH 6.03 5.99 5.98 5.92
氯雷他定保留值(％) 100 96.5 85.2 64.6 7 APHA号 25 40 62 80
pH 7.00 6.98 6.95 6.92
氯雷他定保留值(％) 100 80.8 67.4 56.3 8 APHA号 24 50 54 82
pH 7.98 7.82 7.68 7.57
氯雷他定保留值(％) 100 79.7 64.6 54.8
表10
60℃下保存 pH 试验项目 1周 2周 5周 4 APHA号 58 40 44
pH 4.00 4.04 3.96
氯雷他定保留值(％) 99.0 97.2 91.3 5 APHA号 49 41 48
pH 4.97 5.02 4.78
氯雷他定保留值(％) 98.8 97.8 87.1 6 APHA号 56 40 100
pH 5.97 6.02 5.87
氯雷他定保留值(％) 97.2 90.5 59.7 7 APHA号 63 72 136
pH 1.95 6.98 6.95
氯雷他定保留值(％) 92.2 76.6 63.5 8 APHA号 46 54 171
pH 7.87 7.77 7.56
氯雷他定保留值(％) 96.3 83.1 63.7
试验实施例7
除用15.3g D-甘露糖醇替换2.6g氯化钠外，以与试验实施例6相同方式制备具有不同pH值的滴眼液，并使用与试验实施例6相同的试验。于40℃稳定试验中，保存2个月进行测量，于60℃试验中，保存1，2和5周及2个月进行测量，所得结果示于下表11和12。
表11
40℃下保存pH 试验项目 初始 2月4 APHA号 29 26
pH 4.00 3.95
氯雷他定保留值(％) 100 99.15 APHA号 25 25
pH 5.01 4.99
氯雷他定保留值(％) 100 98.86 APHA号 24 23
pH 5.99 5.99
氯雷他定保留值(％) 100 96.97 APHA号 27 24
pH 6.97 6.95
氯雷他定保留值(％) 100 89.1 8 APHA号 27 27
pH 7.95 7.80
氯雷他定保留值(％) 100 98.7
表12
60℃下保存pH 试验项目 1周 2周 5周 2月4 APHA号 29 27 33 46
pH 4.03 3.97 3.87 3.84
氯雷他定保留值(％) 100.5 98.1 93.0 86.15 APHA号 25 25 33 49
pH 5.03 5.05 4.88 4.67
氯雷他定保留值(％) 99.6 98.0 91.0 80.96 APHA号 30 28 58 110
pH 6.01 6.02 5.89 5.76
氯雷他定保留值(％) 97.8 96.2 68.8 50.07 APHA号 30 33 106 197
pH 7.00 6.97 6.87 6.81
氯雷他定保留值(％) 97.0 86.8 60.4 51.78 APHA号 28 30 116 211
pH 7.93 9.82 7.49 7.36
氯雷他定保留值(％) 101.3 92.4 64.9 57.2
试验实施例8
检查滴眼液对眼睛的刺激。
以与实施例1相同方式制备磷酸盐缓冲液浓度为0.1M，0.05M，0.02M，0.01M和0.005M的滴眼液(指定为样品1-5)。在患者一只眼中滴两滴样品1-5的每一种样品、实施例3制备的滴眼液3、INTALTM和ZADITENTM，滴定10分钟后按下面打分系统评价眼痛。
0…无痛
1…微弱痛
2…弱痛
3…中等痛
4…强痛
5…极强痛
5个患者的平均分数示于下表13
表13滴眼液 平均分数 评价样品1(0.1M*) 4 强痛样品2(0.05M*) 3 中等痛样品3(0.02M*) 2 弱痛样品4(0.01M*) 2 弱痛样品5(0.005M*) 2 弱痛滴眼液3 1 微弱痛INTAL 1 微弱痛ZADITEN 2 弱痛
试验实施例9
试验在不同容器内贮存稳定性。
在低密度聚乙烯容器(LDPE)，聚乙烯对苯二酸酯容器(PET)，聚丙烯容器(PP)和带丁基橡胶塞的5ml玻璃瓶容器(VIAL)中贮存按实施例1-3所述方法制备的滴眼液1-3。于25℃贮存3和6个月后及在40℃贮存1，3和6个月后，称重容器和溶液的重量，用HPLC测定溶液中氯雷他定浓度。当使用LDPE时，容器和溶液重量无明显改变，但氯雷他定浓度最大损失为20.0％。这表明当LDPE用作容器时，氯雷他定吸附在LDPE中。当使用PET时，容器和溶液的最大重量损失为15.2％，氯雷他定浓度最大增加为17.0％。这表明PET用作容器时，贮存过程中水从容器中挥发，浓缩了氯雷他定。当使用VIAL时，氯雷他定浓度的最大损失为7.6％，这表明当VIAL用作容器时，氯雷他定吸附在丁基橡胶塞中。另一方面，当PP用作容器时，未观察到容器和溶液的重量改变及氯雷他定浓度方面的问题。