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1、(10)申请公布号 CN 102492035 A (43)申请公布日 2012.06.13 CN 102492035 A *CN102492035A* (21)申请号 201110420124.1 (22)申请日 2011.12.15 C07K 16/02(2006.01) C07K 1/14(2006.01) (71)申请人 天津济命生生物科技有限公司 地址 300384 天津市南开区兰苑路五号 4 号 楼 B 座 303 室 (72)发明人 张伟 赵钢 王国新 王智佳 (54) 发明名称 一种精制卵黄抗体的制备方法 (57) 摘要 本发明提供了一种精制卵黄抗体的制备方 法。 本发明包括下列。
2、步骤 ： (1)收集经抗原强化免 疫的产蛋鸡所产的鸡蛋 ； (2) 分离出鸡蛋中的卵 黄 ； (3) 将聚乙二醇溶解于生理盐水中与高免卵 黄按比例充分混合搅拌均匀， 沉淀， 取上清 ； (4) 再按比例加入甲醛对卵黄抗体液进行再次脱脂， 同时对卵黄抗体内微生物进行灭活， 所得即为卵 黄抗体。 此方法既保留了卵黄内的抗体， 又对残留 微生物进行了灭活。大大提高卵黄抗体使用的安 全性。此方法成本低， 获得卵黄抗体纯度高， 操作 简单。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 2 页 1/1 。
3、页 2 1. 一种精制卵黄抗体的制备方法， 其特征在于 ： 无菌取出高免蛋的卵黄， 按比例加入 聚乙二醇溶液， 充分混合搅拌后静止取出上层清液， 再在上层清液中按比例加入甲醛溶液 进行灭活， 制成去除卵黄磷脂， 灭活卵黄内残留的其他微生物， 制成安全有效副作用小的精 制卵黄抗体。 2. 一种精制卵黄抗体的制备方法， 根据权利要求 1 所述， 其特征是 ： 具体步骤为 ： (1) 高免蛋的消毒 ： 高免蛋消毒 ： 35新洁尔灭消毒液浸泡30分钟， 取出后用碘酊溶液再次进行表面消 毒， 最后用 75乙醇溶液进行脱碘及消毒。放入超净台内晾干， 备用 ； (2) 无菌分离卵清与卵黄 ： 在无菌条件下对。
4、步骤 (1) 消毒处理后的鸡蛋从中间敲裂， 打开， 将卵清与卵黄分离开， 将卵黄收集于灭菌容器内， 封口 ； (3) 称重卵黄 ： 对步骤 (2) 的卵黄原液进行称重， 得到 y 克 ； (4) 聚乙二醇溶液的配制 ： 在无菌条件按步骤 (3) 中卵黄原液体积量取 n 倍的无菌生理盐水 (1 n 5) ； 按卵 黄原液重量 y克， 称取 x 克 (m y x， 1 m 5) 的聚乙二醇。将聚乙二醇充分溶解于 无菌生理盐水中， 配制成聚乙二醇溶液， 高压灭菌， 放置至室温， 备用 ； (5) 聚乙二醇卵黄溶液的配制 ： 在无菌条件下将步骤 (3) 与步骤 (4) 中的两种溶液混合， 充分搅拌 3。
5、0 40 分钟， 待两 种液体完全混合均匀后， 4静置 8 12 小时， 溶液分为两层， 取出上清液 ； (6) 甲醛再沉淀和灭活 ： 在无菌条件下将步骤(5)所获得卵黄抗体原液加入0.1甲醛， 沉淀48小时， 甲醛同时 具有灭活卵黄抗体液其他存在的微生物的功能。 3. 一种精制卵黄抗体的制备方法， 根据权利要求 2 所述， 其特征是 ： 所述步骤 (1) 中， 高免蛋的来源为在产蛋周期中健康的产蛋鸡， 经过 21 天强化免疫后， 所产的鸡蛋， 为高免 蛋。 4. 一种精制卵黄抗体的制备方法， 根据权利要求 2 所述， 其特征是 ： 所述步骤 (4) 中， 聚乙二醇的加入量。 5. 一种精制卵。
6、黄抗体的制备方法， 根据权利要求 2 所述， 其特征是 ： 高压灭菌后必须放 置至室温， 原因为， 温度高于 50时， 卵黄抗体中有效成分 Ig 开始遭到破坏。 权 利 要 求 书 CN 102492035 A 2 1/2 页 3 一种精制卵黄抗体的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及生物工程技术领域， 尤其是一种精制卵黄抗体的制备方法。 背景技术 0002 高免卵黄抗体目前被广泛应用于很多禽类烈性传染病的治疗和紧急预防， 应用效 果良好。卵黄中主要成分为蛋白质和脂肪， 其质量比例为 1 2， 由此说明卵黄中脂肪含量 相当大的， 一般卵黄抗体制备方法由于脂肪去除不完全， 对治疗效果影响很大。
7、， 常常会使禽 体注射部位肿大， 吸收缓慢， 从而是卵黄抗体应用受到限制。 发明内容 0003 本发明解决的技术问题是 ： 提供一种精制卵黄抗体的制备方法， 使其制出的卵黄 抗体纯度高， 安全性高。 0004 为了解决上述技术问题， 本发明包括如下步骤 ： 0005 (1) 收集经抗原强化免疫的产蛋鸡所产的高免鸡蛋 ； 0006 (2) 无菌分离出鸡蛋中的卵黄 ； 0007 (3)用生理盐水配置的聚乙二醇溶液与卵黄原液混合， 充分搅拌均匀， 静止812 小时， 取上清液 ； 0008 (4) 再用灭菌纱布过滤上清液， 加入 0.1的甲醛溶液沉淀 48 小时， 取上清， 即为 所得卵黄抗体。 0。
8、009 为了提高卵黄抗体提取的纯度， 所述步骤 (3) 中卵黄原液体积量取 n 倍的无菌生 理盐水 (1 n 5) ； 按卵黄原液重量 y 克， 称取 x 克 (m y x， 1 m 10) 的聚乙二 醇。 将聚乙二醇充分溶解于无菌生理盐水中， 配制成聚乙二醇溶液， 高压灭菌， 放置至室温， 备用。 0010 为了保证卵黄抗体使用的安全性， 所述步骤 (4) 中所获得卵黄抗体原液用 0.1 甲醛， 沉淀 48 小时。提高了卵黄抗体的使用安全性。 0011 本发明所得卵黄抗体其保存温度为 0 20， 这样保证使了用中抗体的活性。 0012 本发明原材料简单易购， 成本低廉， 操作简单副作用小， 。
9、提高效益。 0013 3、 本发明中高免蛋的来源为在产蛋周期中健康的产蛋鸡只， 经过 21 天强化免疫 后， 所产的鸡蛋， 为高免蛋。 0014 具体实施方式 1 0015 本具体实施例包括下列步骤 ： 0016 (1) 用新城疫油乳剂灭活疫苗免疫产蛋集群， 共免三次， 每次免疫间隔 7 天， 抗原 用量为每次每只鸡 1ml， 采用肌肉注射。最后一次免疫两周后， 收集鸡蛋。 0017 (2) 高免蛋消毒 ： 3 5新洁尔灭消毒液浸泡 30 分钟， 取出后用碘矴溶液再次进 行表面消毒， 最后用 75乙醇溶液进行脱碘及消毒。放入超净台内晾干， 备用。 0018 (3) 在无菌条件下对步骤 (2) 。
10、消毒处理后的鸡蛋从中间敲裂， 打开， 将卵清与卵黄 说 明 书 CN 102492035 A 3 2/2 页 4 分离开， 将卵黄收集于灭菌容器内， 封口。 0019 (4) 对步骤 (3) 的卵黄原液进行称重， 得到 y 克。 0020 (5) 在无菌条件按步骤 (4) 中卵黄原液体积量取 n 倍的无菌生理盐水 (1 n 5) ； 按卵黄原液重量 y 克， 称取 x 克 (m y x， 1 m 5) 的聚乙二醇。将聚乙二醇 充分溶解于无菌生理盐水中， 配制成聚乙二醇溶液， 高压灭菌， 放置至室温， 备用。 0021 (6)在无菌条件下将步骤(4)与步骤(5)中的两种溶液混合， 充分搅拌304。
11、0分 钟， 待两种液体完全混合均匀后， 4静置 8 12 小时， 溶液分为两层， 取出上清。 0022 (7) 在无菌条件下将步骤 (6) 所获得卵黄抗体原液用 0.1甲醛， 再沉淀 48 小时， 取上清。 0023 (8) 制成成品， 0 20保存。 0024 具体实施方式 2 0025 本具体实施例包括下列步骤 ： 0026 (1) 用新城疫油乳剂灭活疫苗免疫产蛋集群， 共免三次， 每次免疫间隔 7 天， 抗原 用量为每次每只鸡 1ml， 采用肌肉注射。最后一次免疫两周后， 收集鸡蛋。 0027 (2) 高免蛋消毒 ： 35新洁尔灭消毒液浸泡 30 分钟， 取出后用碘矴溶液再次进行 表面消。
12、毒， 最后用 75乙醇溶液进行脱碘及消毒。放入超净台内晾干， 备用。 0028 (3) 在无菌条件下对步骤 (2) 消毒处理后的鸡蛋从中间敲裂， 打开， 将卵清与卵黄 分离开， 将卵黄收集于灭菌容器内， 封口。 0029 (4) 对步骤 (3) 的卵黄原液读取体积， 得到 Xml。 0030 (5) 在无菌条件按步骤 (4) 中卵黄原液体积量取 n(2-5) 倍的无菌生理盐水 ； 按卵 黄原液体积Y(5-10)， 称w克的聚乙二醇6000。 将聚乙二醇充分溶解于无菌生理盐水中， 配制成聚乙二醇溶液， 高压灭菌， 放置至室温， 备用。 0031 (6)在无菌条件下将步骤(4)与步骤(5)中的两种溶液混合， 充分搅拌3040分 钟， 待两种液体完全混合均匀后， 4静置 8 12 小时， 溶液分为两层， 取出上清。对上清液 离心， 再次取上清。 0032 (7) 在无菌条件下将步骤 (6) 所获得卵黄抗体原液用 0.1甲醛， 37灭活 48 小 时。 0033 灌装制成成品， 0 20保存。 0034 此方法既保留了卵黄内的抗体， 又对残留微生物进行了灭活。大大提高卵黄抗体 使用的安全性。此方法成本低， 获得卵黄抗体纯度高， 操作简单， 适合量产。 说 明 书 CN 102492035 A 4 。