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1、(10)申请公布号 CN 103966103 A (43)申请公布日 2014.08.06 CN 103966103 A (21)申请号 201410222839.X (22)申请日 2014.05.26 C12N 1/12(2006.01) C12R 1/89(2006.01) (71)申请人 临沂大学 地址 276000 山东省临沂市双岭路中段临沂 大学 (72)发明人 王培磊 (54) 发明名称 利用啤酒厂废水培养雨生红球藻的培养基及 培养方法 (57) 摘要 本发明涉及利用啤酒厂废水培养雨生红球藻 的培养基, 配方如下 : 啤酒厂废水 80 毫升, 柠檬酸 三钠 28 毫克, 尿素 2。
2、0 毫克, 磷酸二氢钾 12 毫克, 果糖 150 毫克, 酵母浸粉 45 毫克, 胰酪蛋白胨 50 毫克, 柠檬酸铵 12 毫克, 乳清粉 25 毫克, 乳糖 30 毫克, 葡萄糖 60 毫克, 马粪浸出液 1.8 毫升, 豆汁 2 毫升, 山梨醇 100 毫克, 可溶性淀粉 24 毫克, 大 豆胨 25 毫克, - 甘油磷酸钠 28 毫克, 乙二胺四 乙酸 12 毫克, 维生素 B110 微克, 维生素 B121 微克, 土壤抽出液 1.8 毫升, 人尿 1.5 毫升, 鸡粪浸出液 2.4毫升, 次氯酸钠消毒后的纯净淡水1000毫升。 可以获得重要生物活性物质 - 虾青素。成本低, 不易污。
3、染可重复利用, 有机肥和无机肥混合使用, 雨生红球藻生长速度和虾青素含量大幅度提高, 产量提高 270。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 6 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书6页 附图1页 (10)申请公布号 CN 103966103 A CN 103966103 A 1/2 页 2 1. 一种利用啤酒厂废水培养雨生红球藻的培养基, 其特征在于配方如下 : 啤酒厂废水 80 毫升, 柠檬酸三钠 28 毫克, 尿素 20 毫克, 磷酸二氢钾 12 毫克, 果糖 150 毫克, 酵母浸粉 45 毫克, 胰酪蛋白。
4、胨 50 毫克, 柠檬酸铵 12 毫克, 乳清粉 25 毫克, 乳糖 30 毫 克, 葡萄糖 60 毫克, 马粪浸出液 1.8 毫升, 豆汁 2 毫升, 山梨醇 100 毫克, 可溶性淀粉 24 毫 克, 大豆胨 25 毫克, - 甘油磷酸钠 28 毫克, 乙二胺四乙酸 12 毫克, 维生素 B110 微克, 维生 素 B121 微克, 土壤抽出液 1.8 毫升, 人尿 1.5 毫升, 鸡粪浸出液 2.4 毫升, 次氯酸钠消毒后的 纯净淡水 1000 毫升。 2. 一种利用啤酒厂废水培养雨生红球藻培养方法, 其特征在于具体步骤如下 : 培养容器为卧式蓄水罐, 容积 1.5 立方米, 高密度聚乙。
5、烯材料制成, 白色, 有较好的透 光性, 以利藻类进行光合作用, 蓄水罐为一体式构造, 具有很大的强度和坚固性且设计为平 底, 以便安装在硬质水泥地面上, 蓄水罐顶部有一圆形盖子, 上有旋丝, 可旋转而密封, 盖子 直径 35 厘米, 盖子打上 2 个孔, 一个孔插入充气管, 另一个孔插入排气管, 充气管和排气管 都是玻璃管, 内径 10 毫米, 将反应器洗刷干净, 后用蒸馏水润洗 3 遍, 装入权利要求 1 所述 的培养基 900 升, 充气混合 5 分钟, 选择生命力旺盛、 无污染的雨生红球藻接种, 接种密度 2104cell/mL, 盖子上插入两根干净玻璃管, 一根较长, 35 厘米, 。
6、顶端露出盖子 12 厘米, 下 端通过料管与散气石连接, 用以充气, 所述散气石的作用是形成很小的气泡, 避免大气泡或 翻滚的波浪打碎藻细胞 ; 另一根较短, 16 厘米, 两端露出盖子即可, 用以排气, 两根玻璃管 同样粗细, 内径 10 毫米, 用干净的透明胶带将两根玻璃管固定, 长的玻璃管上端用料管与 充气泵相连, 充入混合气体, 混合气体成分和体积比例是空气纯二氧化碳二氧化硫 苯乙烯 92 6 1 1, 连续充气, 充气量不宜太大, 以藻细胞浮起不下沉即可, 室外培养, 太阳光照射, 最佳温度 232, 最佳光照强度 3000-8000Lux ; 培养的前 5 天, 蓄水罐上方搭建一简。
7、易棚, 上放置帘子遮挡光线, 较弱的光照有利于营养细胞的生长和繁 殖, 第 6 天撤掉帘子, 强光照射有利于虾青素的合成和积累 ; 培养至第 7 天, 停止充气, 拿开 盖子, 补充新鲜培养基 50 升, 盖上盖子, 充气, 继续培养, 至第 9 天, 雨生红球藻密度增加至 60104cell/mL, 停止培养, 从底部的水龙头放出藻液, 将反应器洗刷干净后, 加入中药消 毒液消毒 30 分钟, 后进入下一轮培养 ; 所述中药消毒液由以下重量比的物质组成 : 每 100 份 85乙醇中加入以下重量份的 中药材 : 板蓝根 30 50 份、 柴胡 15 25 份、 薄荷 15 25 份、 栀子 。
8、5 15 份、 艾叶 5 15 份, 中药消毒液制作方法 : 将新鲜板蓝根、 柴胡、 薄荷叶、 艾叶、 山栀果切碎, 于 60-70下 烘干, 再用中药材粉碎机分别粉碎至 70 目备用, 用托盘天平分别称取烘干并粉碎的板蓝根 120 克, 柴胡 60 克, 薄荷叶 60 克, 艾叶 30 克, 山栀果 30 克, 置于三角烧瓶中充分混合后, 加 入 1000 毫升 85 乙醇, 浸泡 48 小时, 200 筛绢过滤, 将清液静置沉淀 36 小时, 撇去液面漂 浮物, 取中上层的清液, 即为复方中药消毒液, 密封于黑色试剂瓶中, 贴上标签, 置于 4冰 箱备用。 3. 根据权利要求 2 所述的一。
9、种利用啤酒厂废水培养雨生红球藻培养方法, 其特征在 于, 对选用的所述的反应器, 洗刷干净后进行消毒, 使用紫外灯消毒, 消毒 10-20 分钟。 4. 根据权利要求 2 所述的一种利用啤酒厂废水培养雨生红球藻培养方法, 其特征在 于, 对选用的所述的反应器, 洗刷干净后进行消毒, 使用高压氮气喷射消毒, 消毒 5-10 分 钟。 权 利 要 求 书 CN 103966103 A 2 2/2 页 3 5. 根据权利要求 2 所述的一种利用啤酒厂废水培养雨生红球藻培养方法, 其特征在 于, 对选用的所述的反应器, 洗刷干净后进行消毒, 使用高压二氧化碳喷射消毒, 消毒 5-6 分钟。 6. 根据。
10、权利要求 2 所述的一种利用啤酒厂废水培养雨生红球藻培养方法, 其特征在 于, 对选用的所述的反应器, 洗刷干净后分两个阶段消毒, 先使用高压氮气喷射消毒, 消毒 2-3 分钟, 使用高压二氧化碳喷射消毒, 消毒 2-3 分钟, 消毒完毕后再进行藻类培养。 权 利 要 求 书 CN 103966103 A 3 1/6 页 4 利用啤酒厂废水培养雨生红球藻的培养基及培养方法 技术领域 0001 本发明属于水产养殖领域, 尤其涉及一种利用啤酒厂废水培养雨生红球藻的培养 基及培养方法。 背景技术 0002 啤酒酿造过程产生的废水具有废水量大、 悬浮物和有机物含量高的特点。废水本 身并无毒性, 但含有。
11、的大量可生物降解有机物直接排入水体, 会大量消耗水中溶氧, 造成水 体缺氧, 导致包括鱼类在内的水生生物死亡, 而且废水含有大量 N、 P 无机盐, 导致水体富 营养化, 恶化水质, 污染环境。啤酒废水分为三部分 : 一是冷却水, 占总水量 70 ; 二是酿 造涮洗水, 占 5-6, 属高浓度有机废水 ; 三是包装车间洗瓶、 冲冼、 杀菌水, 占 20。冷却 水可以循环使用, 需要处理的主要是后两部分。目前我国生产统计显示, 生产 1 吨啤酒消 耗 10-30 吨水。一个年产 5 万吨啤酒厂, 年耗水 80-100 万吨, 工业废水排放量在 50-80 万 吨。啤酒厂总排水属于中、 高浓度有机。
12、废水, 呈酸性, pH 值 4.5-6.5, 主要污染因子是化学 需氧量 (CODcr)、 生化需氧量 (BOD5) 和悬浮物 (SS), 浓度分别为 1000-1500, 500-1000 和 220-440mg/L。啤酒废水可生化性 (BOD5/CODcr) 较大, 为 0.4-0.6, 故现在主要采用生化法 处理。 根据处理过程中是否需要曝气, 把生物法分为好氧生物处理和厌氧生物处理两大类。 0003 好氧生物处理是在氧气充足的条件下, 利用好氧微生物的生命活动氧化啤酒污水 中的有机物, 其产物是二氧化碳、 水及能量。 活性污泥法、 生物膜法、 深井曝气法是有代表性 的好氧生物处理方法。。
13、但这类方法没有考虑到污水中有机物利用问题, 因此成本较高。 0004 厌氧生物处理适用于高浓度有机污水 (CODcr 2000mg/L, BOD5 1000mg/L), 是 在无氧条件下, 靠厌气细菌分解有机物。 在此过程中, 参加生物降解有机质50-90转化为 沼气, 发酵后的剩余物可作为优质肥料和饲料。 厌氧生物处理方法有多种, 以升流式厌氧污 泥床 (UASB) 技术最成熟。UASB 主要组成是反应器, 其底部为絮凝和沉淀性能良好的厌氧 污泥构成的污泥床, 上部设置了一个专用的气 - 液 - 固分离系统。污水从反应器底部加入, 在向上穿过生物颗粒组成的污泥床时得到降解, 同时生成沼气。气。
14、、 液、 固一同升入三相分 离室, 气体被收集在气罩里, 而污泥颗粒受重力作用下沉至反应器底部, 水经出流堰排出。 实践证明, UASB 技术关键是培养出沉降性能良好的厌氧颗粒污泥。颗粒污泥的形成是厌氧 细菌群不断繁殖、 积累的结果, 较多的污泥负荷有利于细菌获得充足的营养基质, 故对颗粒 污泥形成和发展有决定作用 ; 较高的水力负荷将产生污泥的水力筛选, 淘汰沉降性能差的 絮体污泥而留下沉降性能好的, 同时产生剪切力, 使污泥不断旋转, 有利于丝状菌互相缠绕 成球。总之, UASB 具有效能高, 费用低, 电耗省, 投资少, 占地少等优点, 但不足之处是出水 CODcr 浓度仍较高, 达 5。
15、00mg/L。 0005 为了克服上述两种方法的缺点, 本人发明了一种利用啤酒厂废水培养雨生红球藻 的方法, 不仅可低费用处理废水, 废物利用, 变废为宝, 而且可以获得有重要药用及营养保 健价值的生物活性物质 - 虾青素, 实在是巧妙之极, 妙不可言。 0006 雨生红球藻 Haematococcus pluvialis 是一种淡水单细胞藻类, 隶属绿藻门 说 明 书 CN 103966103 A 4 2/6 页 5 Chlorophata、 绿藻纲 Chlorophyceae、 团藻目 Volvocales、 红球藻科 Haematococcaceae、 红 球藻属 Haematococc。
16、us。该藻在不利生长环境, 如氮、 磷缺乏或强光照射下, 细胞生长趋于 缓慢, 促进次生代谢产物虾青素 astaxanthin 大量积累, 细胞迅速变红, 虾青素含量可高达 细胞干重的 2-5, 为螺旋藻类胡萝卜素含量的 10-50 倍, 被公认为自然界天然虾青素含量 最高生物, 受到微藻学界重视。 天然虾青素具有极强的抗氧化、 维护动物肌体健康及增色作 用。国际市场上天然虾青素主要用作保健品和饲料添加剂, 需求量很大, 价格高达 3000 美 元 /kg, 雨生红球藻成为螺旋藻、 盐藻后又一高价值微藻。 0007 近年研究表明, 虾青素还有抗肿瘤和增强免疫力重要功能, 在食品添加剂、 化妆 。
17、品、 保健品和医药上有广阔应用前景。在养殖业, 天然虾青素主要用作鲍鱼、 鲟鱼、 鲑鱼、 虹 鳟鱼、 真鲷、 甲壳类动物及观赏鱼类和各种禽类、 生猪的饲料添加剂, 主要作用有 : 抗氧化、 消除自由基、 促进抗体产生、 增强动物免疫力并产生艳丽色彩。雨生红球藻生活史较复杂, 环境条件会诱导细胞变形。 在弱光、 氮磷丰富有利条件下以游动的绿色营养细胞存在, 处于 营养生长时期 ; 而在强光、 营养缺乏等不利条件下, 则以不动厚壁孢子形式存在, 细胞内大 量积累虾青素, 细胞呈圆形。 0008 雨生红球藻的培养传统上使用 BBM 培养基并使用开放水泥池, 生长慢、 产量低、 虾 青素含量低、 投资。
18、大、 易污染、 效益低。现在我采用容积为 1.8 立方米的高密度聚乙烯制成 的具有极好透光性的蓄水罐培养, 成本低, 不易污染, 洗刷方便, 可重复利用, 易于操作, 而 且我在基本培养基 - 啤酒厂废水中增加了柠檬酸三钠, 尿素, 磷酸二氢钾, 果糖, 酵母浸 粉, 胰酪蛋白胨, 柠檬酸铵, 乳清粉, 山梨醇, 大豆胨, - 甘油磷酸钠, 乙二胺四乙酸, 维生素 B1, 维生素 B12, 土壤抽出液, 人尿, 鸡粪浸出液等营养成分, 有机肥和无机肥混合使用, 营养 更加全面、 均衡, 雨生红球藻生长速度大幅提高, 培养周期缩短, 产量提高 270。 0009 有益结果 : 为了克服传统处理啤。
19、酒废水方法缺点, 本人发明了一种利用啤酒厂废 水培养雨生红球藻的方法, 不仅废物利用, 变废为宝, 而且可获得有重要医疗和营养保健价 值的生物活性物质 - 虾青素, 一举两得, 实在是巧妙之极, 妙不可言。雨生红球藻培养传统 上使用 BBM 培养基并使用开放水泥池式培养, 生产速率低、 产量不高、 虾青素含量偏低、 投 资大、 易污染、 效益低, 现在我采用容积为 1.5 立方米的高密度聚乙烯制成的具有极好透光 性的蓄水罐培养, 成本低, 不易污染, 洗刷方便, 可重复利用, 易于操作, 而且我在基本培养 基 - 啤酒废水中增加了柠檬酸三钠, 尿素, 磷酸二氢钾, 果糖, 酵母浸粉, 胰酪蛋白。
20、胨, 柠檬 酸铵, 乳清粉, 山梨醇, - 甘油磷酸钠, 乙二胺四乙酸, 复合维生素, 土壤抽出液, 人尿, 鸡粪 浸出液等营养成分, 有机肥和无机肥混合使用, 营养更加全面、 均衡, 雨生红球藻生长速度 和虾青素含量大幅度提高, 培养周期缩短, 产量提高 270。 发明内容 0010 为了克服目前技术的不足, 本发明提供了一种利用啤酒厂废水培养雨生红球藻的 培养基, 配方如下 : 0011 啤酒厂废水 80 毫升, 柠檬酸三钠 28 毫克, 尿素 20 毫克, 磷酸二氢钾 12 毫克, 果 糖 150 毫克, 酵母浸粉 45 毫克, 胰酪蛋白胨 50 毫克, 柠檬酸铵 12 毫克, 乳清粉 。
21、25 毫克, 乳 糖 30 毫克, 葡萄糖 60 毫克, 马粪浸出液 1.8 毫升, 豆汁 2 毫升, 山梨醇 100 毫克, 可溶性淀 粉 24 毫克, 大豆胨 25 毫克, - 甘油磷酸钠 28 毫克, 乙二胺四乙酸 12 毫克, 维生素 B110 微 说 明 书 CN 103966103 A 5 3/6 页 6 克, 维生素 B121 微克, 土壤抽出液 1.8 毫升, 人尿 1.5 毫升, 鸡粪浸出液 2.4 毫升, 次氯酸钠 消毒后的纯净淡水 1000 毫升。 0012 一种雨生红球藻培养方法, 具体步骤如下 : 0013 培养容器为卧式蓄水罐, 容积 1.5 立方米, 高密度聚乙烯。
22、材料制成 ( 市场有售 ), 白色, 有较好的透光性, 以利藻类进行光合作用, 蓄水罐为一体式构造, 具有很大的强度和 坚固性且设计为平底, 以便安装在硬质水泥地面上。蓄水罐顶部有一圆形盖子, 上有旋丝, 可旋转而密封。盖子直径 35 厘米, 盖子打上 2 个孔, 一个孔插入充气管, 另一个孔插入排气 管, 充气管和排气管都是玻璃管, 内径 10 毫米。将反应器洗刷干净, 后用蒸馏水润洗 3 遍, 装入权利要求 1 所述的培养基 900 升, 充气混合 5 分钟, 选择生命力旺盛、 无污染的雨生红 球藻接种, 接种密度 2104cell/mL ; 盖子上插入两根干净玻璃管, 一根较长, 35 。
23、厘米, 顶端 露出盖子 12 厘米, 下端通过料管与散气石连接, 用以充气 ( 散气石的作用是形成很小的气 泡, 避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞 ) ; 另一根较短, 16 厘米, 两端露出盖子即可, 用以 排气 ; 两根玻璃管同样粗细, 内径10毫米 ; 用干净的透明胶带将两根玻璃管固定 ; 长的玻璃 管上端用料管与充气泵相连, 充入混合气体, 混合气体成分和体积比例是空气纯二氧化 碳二氧化硫苯乙烯 92 6 1 1; 连续充气, 充气量不宜太大, 以藻细胞浮 起不下沉即可 ; 室外培养, 太阳光照射, 最佳温度 232, , 最佳光照强度 3000-8000Lux ; 培养的前 5 天,。
24、 蓄水罐上方搭建一简易棚, 上放置帘子遮挡光线, 较弱的光照有利于营养细 胞的生长和繁殖, 第6天撤掉帘子, 强光照射有利于虾青素的合成和积累 ; 培养至第7天, 停 止充气, 拿开盖子, 补充新鲜培养基50升, 盖上盖子, 充气, 继续培养, 至第9天, 雨生红球藻 密度增加至 60104cell/mL, 停止培养, 从底部的水龙头放出藻液, 将反应器洗刷干净后, 加入中药消毒液消毒 30 分钟, 后进入下一轮培养 ; 0014 所述中药消毒液由以下重量比的物质组成 : 每 100 份 85乙醇中加入以下重量份 的中药材 : 板蓝根 30 50 份、 柴胡 15 25 份、 薄荷 15 25。
25、 份、 栀子 5 15 份、 艾叶 5 15 份, 中药消毒液制作方法 : 将新鲜板蓝根、 柴胡、 薄荷叶、 艾叶、 山栀果切碎, 于 60-70下 烘干, 再用中药材粉碎机分别粉碎至 70 目备用, 用托盘天平分别称取烘干并粉碎的板蓝根 120 克, 柴胡 60 克, 薄荷叶 60 克, 艾叶 30 克, 山栀果 30 克, 置于三角烧瓶中充分混合后, 加 入 1000 毫升 85乙醇, 浸泡 48 小时, 200 筛绢过滤, 将清液静置沉淀 36 小时, 撇去液面漂 浮物, 取中上层的清液, 即为复方中药消毒液, 密封于黑色试剂瓶中, 贴上标签, 置于 4冰 箱备用。 0015 优选地, 。
26、对选用的所述的反应器, 洗刷干净后进行消毒, 使用紫外灯消毒, 消毒 10-20 分钟。 0016 优选地, 对选用的所述的反应器, 洗刷干净后进行消毒, 使用高压氮气喷射消毒, 消毒 5-10 分钟 ; 0017 优选地, 对选用的所述的反应器, 洗刷干净后进行消毒, 使用高压二氧化碳喷射消 毒, 消毒 5-6 分钟 ; 0018 优选地, 对选用的所述的反应器, 洗刷干净后分两个阶段消毒, 先使用高压氮气喷 射消毒, 消毒 2-3 分钟 ; 使用高压二氧化碳喷射消毒, 消毒 2-3 分钟 ; 消毒完毕后再进行藻 类培养。 说 明 书 CN 103966103 A 6 4/6 页 7 附图说。
27、明 0019 图 1 为一种利用啤酒厂废水培养雨生红球藻方法图。 0020 其中附图标记为 : 1 充气管 2 培养容器 3 藻液 4 排气管。 具体实施方式 0021 1) 啤酒废水预处理方法 : 啤酒废水用于养藻前需要进行预处理, 方法是 : 先用 60 目的筛绢过滤废水, 除去漂浮物、 玻璃渣子、 毛发、 泥沙、 树叶、 塑料袋等体积较大固形物, 后 将污水引入长 30 米、 宽 15 米、 深 0.8 米的水泥曝气池中, 池子呈东西走向, 以接受更多的阳 光照射 ; 水深保持在65厘米 ; 按每立方米污水加入45克生石灰的量均匀泼洒生石灰(生石 灰最好预先按 1 公斤加入 5 升纯水的。
28、量在塑料桶中溶解、 稀释、 搅拌均匀, 再全池泼洒 ), 隔 30分钟, 再按每立方米污水加入25克的量全池泼洒明矾(明矾最好预先按100克加2升纯 水的量在塑料桶中溶解、 稀释并搅拌均匀, 再全池泼洒 ), 然后用耙子搅动或充气搅拌 60 分 钟, 使石灰和明矾充分溶解、 混合并与污水中有机物充分发生化学反应, 然后自然沉淀、 发 酵、 曝光72小时, 撇去水面泡沫等漂浮物, 勿搅动池底, 取中上层的污水, 煮沸5分钟, 冷却, 装入不透光的黑色塑料桶中, 密封, 4冰箱或冷库, 保存, 备用 ; 0022 2) 马粪浸出液制备方法 : 取新鲜马粪 50 公斤, 加入麸皮 2 公斤, 玉米面。
29、 1 公斤, 自 来水 4 升, 充分搅拌, 堆成圆锥状, 自然发酵 20 天, 后摊成薄层, 阳光下暴晒 4 天, 后取 3 公 斤放入水桶中, 加入 15 升蒸馏水, 充分搅匀, 静置, 48 小时后 400 目筛绢过滤, 取滤液加热, 煮沸 15 分钟, 杀死其中的细菌、 霉菌、 病毒等, 冷却, 沉淀 24 小时, 取上清液, 即得牛粪浸出 液, 装入磨口塞试剂瓶, 密封, 贴上标签, 置于 4冰箱备用 ; 0023 3) 豆汁制备 : 选择洁净、 无虫蛀大豆 500 克, 洗净, 加水 2000 毫升, 浸泡 8 小时, 豆浆机磨碎, 加热, 煮沸 15 分钟, 冷却, 用纱布过滤得。
30、滤汁, 静置、 沉淀 12 小时, 取上清液即 得 ; 0024 4) 次氯酸钠消毒淡水方法 : 1 立方米淡水中加入漂白粉 50-100 克, 使淡水中有效 氯含量达到10-20mg/L, 充气8-12小时后, 用硫代硫酸钠中和余氯。 硫代硫酸钠量由余氯的 多少来确定, 直到滴入淀粉碘化钾液不变色为止 ; 0025 5) 过氧乙酸消毒液制备方法和使用注意事项 : 市售过氧乙酸原液含量 35 ( 以 重量计 ), 无色液体, 有强烈刺激性气味。使用时应用洁净自来水稀释成 0.2溶液, 浸泡蓄 水罐 2 小时。该品对眼睛、 皮肤、 粘膜和上呼吸道有强烈刺激作用, 吸入后可引起喉、 支气管 炎症、。
31、 水肿、 痉挛, 化学性肺炎、 肺水肿, 接触可引起烧灼感、 咳嗽、 喘息、 喉炎、 气短、 头痛、 恶 心和呕吐。该品易燃, 具爆炸性、 强腐蚀性、 强刺激性, 可致人体灼伤, 加热至 100即猛烈 分解, 遇火或受热、 受震都可起爆。与还原剂、 促进剂、 有机物、 可燃物等接触会发生剧烈反 应, 有燃烧、 爆炸危险, 腐蚀性较强, 不可直接用手接触 ; 操作时应带胶皮手套、 口罩和眼镜, 对金属有腐蚀性, 不可用于金属器械的消毒 ;“原液” 长期放置可分解, 注意保质期, 应贮于 塑料桶内凉暗处保存, 远离可燃性物质。 0026 6) 接种用的雨生红球藻预先进行提纯 ( 本领域常规方法, 。
32、只要可实现提纯即可, 例如凯氏提取法 ), 以确保接种时藻种处于指数生长期 ; 0027 7) 各种营养盐要按配方中提供的顺序加入, 以免发生化学反应 ; 0028 8) 各种营养盐均需预先配成母液且置于 4冰箱冷藏保存备用, 放置时间不要超 说 明 书 CN 103966103 A 7 5/6 页 8 过 60 天 ; 0029 9) 全部营养盐加完后要充气混合 15 分钟, 使营养盐混合均匀后再接种 ; 0030 10) 鸡粪浸出液制备方法 : 把干鸡粪、 青草、 豆饼、 米糠、 颖壳 ( 五谷杂粮的外壳 ) 和腐殖土按 60 10 12 15 2 1 的重量比例混合, 搅拌均匀, 装入缸。
33、内密闭进行发 酵, 30 天后, 倒出, 在干净水泥地上, 摊成薄层, 晾干 48 小时, 后取 2 公斤, 置于塑料水桶, 加 自来水 10 公斤, 搅拌均匀, 用 200 目筛绢过滤, 将清液煮沸 5 分钟, 冷却, 静置 24 小时, 取上 清液, 装入试剂瓶, 贴上标签, 置于 4冰箱, 备用 ; 0031 11) 土壤抽出液制备方法 : 到树林中取松散、 富含有机质的上层土壤 1 公斤, 加自 来水 5 升, 煮沸 20 分钟, 将泥浆倒入烧杯中, 静置 24 小时, 后吸取上清液, 倒入三角烧瓶中, 加棉花塞, 煮沸 15 分钟, 冷却, 静置沉淀 12 小时, 取上清液即得土壤抽。
34、出液, 装入磨口塞试 剂瓶, 密封, 贴上标签, 置于 4冰箱备用 ; 0032 12) 人尿制备方法 : 取人尿 1000 毫升, 烧瓶煮沸 5 分钟后, 冷却备用 ; 0033 13) 所用化学药品纯度均需化学纯级别 ; 0034 14) 一种利用啤酒厂废水培养雨生红球藻的培养基, 配方如下 : 0035 啤酒厂废水 80 毫升, 柠檬酸三钠 28 毫克, 尿素 20 毫克, 磷酸二氢钾 12 毫克, 果 糖 150 毫克, 酵母浸粉 45 毫克, 胰酪蛋白胨 50 毫克, 柠檬酸铵 12 毫克, 乳清粉 25 毫克, 乳 糖 30 毫克, 葡萄糖 60 毫克, 马粪浸出液 1.8 毫升,。
35、 豆汁 2 毫升, 山梨醇 100 毫克, 可溶性淀 粉 24 毫克, 大豆胨 25 毫克, - 甘油磷酸钠 28 毫克, 乙二胺四乙酸 12 毫克, 维生素 B110 微 克, 维生素 B121 微克, 土壤抽出液 1.8 毫升, 人尿 1.5 毫升, 鸡粪浸出液 2.4 毫升, 次氯酸钠 消毒后的纯净淡水 1000 毫升。 0036 15) 一种利用啤酒厂废水培养雨生红球藻的方法, 具体步骤如下 : 0037 培养容器为卧式蓄水罐, 容积 1.5 立方米, 高密度聚乙烯材料制成 ( 市场有售 ), 白色, 有较好的透光性, 以利藻类进行光合作用, 蓄水罐为一体式构造, 具有很大的强度和 坚。
36、固性且设计为平底, 以便安装在硬质水泥地面上。蓄水罐顶部有一圆形盖子, 上有旋丝, 可旋转而密封。盖子直径 35 厘米, 盖子打上 2 个孔, 一个孔插入充气管, 另一个孔插入排气 管, 充气管和排气管都是玻璃管, 内径 10 毫米。将反应器洗刷干净, 后用蒸馏水润洗 3 遍, 装入权利要求 1 所述的培养基 900 升, 充气混合 5 分钟, 选择生命力旺盛、 无污染的雨生红 球藻接种, 接种密度 2104cell/mL ; 盖子上插入两根干净玻璃管, 一根较长, 35 厘米, 顶端 露出盖子 12 厘米, 下端通过料管与散气石连接, 用以充气 ( 散气石的作用是形成很小的气 泡, 避免大气。
37、泡或翻滚的波浪打碎藻细胞 ) ; 另一根较短, 16 厘米, 两端露出盖子即可, 用以 排气 ; 两根玻璃管同样粗细, 内径10毫米 ; 用干净的透明胶带将两根玻璃管固定 ; 长的玻璃 管上端用料管与充气泵相连, 充入混合气体, 混合气体成分和体积比例是空气纯二氧化 碳二氧化硫苯乙烯 92 6 1 1; 连续充气, 充气量不宜太大, 以藻细胞浮 起不下沉即可 ; 室外培养, 太阳光照射, 最佳温度 232, 最佳光照强度 3000-8000Lux ; 培 养的前 5 天, 蓄水罐上方搭建一简易棚, 上放置帘子遮挡光线, 较弱的光照有利于营养细胞 的生长和繁殖, 第6天撤掉帘子, 强光照射有利于。
38、虾青素的合成和积累 ; 培养至第7天, 停止 充气, 拿开盖子, 补充新鲜培养基50升, 盖上盖子, 充气, 继续培养, 至第9天, 雨生红球藻密 度增加至 60104cell/mL, 停止培养, 从底部的水龙头放出藻液, 将反应器洗刷干净后, 加 入 0.2过氧乙酸消毒溶液浸泡消毒 2 小时, 再用蒸馏水润洗一遍, 后进入下一轮培养 ; 说 明 书 CN 103966103 A 8 6/6 页 9 0038 16) 优选地, 对选用的所述的反应器, 洗刷干净后进行消毒, 使用紫外灯消毒, 消毒 10-20 分钟 ; 0039 优选地, 对选用的所述的反应器, 洗刷干净后进行消毒, 使用高压氮。
39、气喷射消毒, 消毒 5-10 分钟 ; 0040 优选地, 对选用的所述的反应器, 洗刷干净后进行消毒, 使用高压二氧化碳喷射消 毒, 消毒 5-6 分钟 ; 0041 优选地, 对选用的所述的反应器, 洗刷干净后分两个阶段消毒, 先使用高压氮气喷 射消毒, 消毒 2-3 分钟 ; 使用高压二氧化碳喷射消毒, 消毒 2-3 分钟 ; 消毒完毕后再进行藻 类培养。 0042 最后应说明的是 : 以上实施例仅用以说明本发明的技术方案, 而非对其限制 ; 尽 管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明, 本领域的普通技术人员应当理解 : 其依然 可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改, 或者对其中部分技术特征进行等同替换 ; 而这些修改或者替换, 并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范 围。 说 明 书 CN 103966103 A 9 1/1 页 10 图 1 说 明 书 附 图 CN 103966103 A 10 。