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1、(10)申请公布号 CN 102532276 A (43)申请公布日 2012.07.04 CN 102532276 A *CN102532276A* (21)申请号 201010623002.8 (22)申请日 2010.12.18 C07K 7/64(2006.01) C07K 1/20(2006.01) C07K 1/16(2006.01) A61K 38/12(2006.01) A61P 31/04(2006.01) (71)申请人 西北农林科技大学农药研究所 地址 712100 陕西省杨凌示范区西北农林科 技大学 ( 西农校区 )61 号信箱 (72)发明人 姬志勤 吴文君 魏少鹏 。
2、(54) 发明名称 一种环六肽抗菌化合物及其制备方法 (57) 摘要 本发明提供了一种新的环六肽抗菌化合物 yanglingmycin D， 属药物技术领域。本发明涉 及的化合物其结构式如下所示， 其氨基酸组成 包括缬氨酸， 2- 甲氨基丙酸、 哌嗪 -3- 羧酸以 及 3- 羟基 -1， 2， 3， 3， 8， 8- 六氢吡咯 2， 3- 并 吲哚 -2- 羧酸， 各氨基酸的构型为 L- 型或 D- 型。本发明涉及的化合物对蜡状芽孢杆菌， 枯 草杆菌， 金黄色葡萄球菌以及耐甲氧西林的金黄 色葡萄球菌等多种革兰氏阳性细菌具有强烈的抑 制作用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书。
3、 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1 页 2 1. 一种新的环六肽抗菌化合物 yanglingmycin D， 其结构式如下所示 ： 2. 如权利要求 1 所述， yanglingmycin D 由一分子缬氨酸、 2- 甲氨基丙酸、 3- 羟 基 -1， 2， 3， 3， 8， 8- 六氢吡咯 2， 3- 并 吲哚 -2- 羧酸和三分子哌嗪 -3- 羧酸共计四种 氨基酸组成， 各氨基酸的构型为 L- 型或 D- 型。 3. 如权利要求 1， 2 所述的化合物可采用大孔吸附树脂层析和制备高效液相色谱技术 制得。 4. 如。
4、权利要求 1， 2 所述的化合物可用于治疗由金黄色葡萄球菌以及耐甲氧西林的金 黄色葡萄球菌等细菌感染引起的疾病。 权 利 要 求 书 CN 102532276 A 2 1/4 页 3 一种环六肽抗菌化合物及其制备方法 技术领域 ： 0001 本发明属于药物技术领域， 具体涉及一种环六肽抗菌化合物及其制备方法。 背景技术 ： 0002 抗生素是二十世纪人类的一项重要发明， 自从青霉素出现以来， 抗生素已经挽救 了数以亿计的人类生命， 但是随着抗生素的普遍应用， 人们也日渐认识到其负面作用， 耐药 性细菌的出现即是其中一个重要问题。为了克服细菌的抗药性， 必须开发结构更为新颖的 新抗生素。 000。
5、3 申请人在发明专利 “环六肽抗菌化合物” ( 申请号 ： 200910127994.2) 中公开了一 类新型环六肽抗菌化合物， 主要包括 yanglingmycin A， B 和 C 三个组分， 其氨基酸组成包 括缬氨酸和其它非常见氨基酸， 如 2- 甲氨基丙酸、 哌嗪 -3- 羧酸以及 6- 氯 -3- 羟基 -1， 2， 3， 3， 8， 8- 六氢吡咯 2， 3- 并 吲哚 -2- 羧酸等。Yanglingmycins 对蜡状芽孢杆菌 (Bacillus cereus)， 枯草杆菌 (B.subtilis)， 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 以及耐甲氧西。
6、林的金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus)等 多种革兰氏阳性细菌具有强烈的抑制作用。 0004 在后续的研究过程中， 又从同一生物资源 (Streptomyces alboflavus 发酵液 ) 中获得了一个新化合物， 命名为 Yanglingmycin D。上文述及的 yanglingmycin A， B 和 C， 以及与此结构类似的抗生素 ( 如 himastatin 和 chloptosin) 其结构中均含有一个相同 的氨基酸， 即 ： 6- 氯 -3- 羟基 -1， 2， 3， 3， 8， 8- 六氢吡咯 2， 3- 。
7、并 吲哚 -2- 羧酸， Yanglingmycin D 为该类抗生素中首个结构中不含卤素的化合物。 发明内容 ： 0005 本发明的目的在于提供一种新环六肽抗菌化合物 yanglingmycin D， 它具有新颖 的分子结构， 而且对多种病原细菌具有很高的抑制活性。 0006 本发明的另一个目的是提供制备该抗菌化合物的方法。 0007 采用高分辨质谱和核磁共振等波谱技术， 确定了本发明所涉及化合物的化学结 构， 其结构式如下所示。 0008 说 明 书 CN 102532276 A 3 2/4 页 4 0009 Yanglingmycin D 由一分子缬氨酸、 2- 甲氨基丙酸、 3- 羟基。
8、 -1， 2， 3， 3， 8， 8- 六氢吡咯 2， 3- 并 吲哚 -2- 羧酸和三分子哌嗪 -3- 羧酸共计四种氨基酸组成， 各氨 基酸的构型为 L- 型或 D- 型。 0010 本发明的优点是 ： Yanglingmycin D 对蜡状芽孢杆菌 (Bacillus cereus)， 枯草杆 菌 (B.subtilis)， 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 等多种革兰氏阳性细菌具有 强烈的抑制作用， 尤其是对重要的抗性菌， 如耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌 (Methicillin- resistantStaphylococcus aureus， MRSA) 具。
9、有很好的抑制活性。 具体实施方式 0011 通过下述实施例有助于理解本发明， 但并不限制本发明的内容。 0012 实施例一 0013 Yanglingmycin D 的分离及结构鉴定 0014 Streptomyces alboflavus发酵液(100L)经200目筛网过滤后， 用草酸调pH 3.5， 静置、 过滤， 加 NaOH 调滤液至中性， 用 2kg HPD-400 大孔吸附树脂静态吸附过夜。将吸附 好的大孔吸附树脂装入层析柱中， 先用去离子水洗脱 5000mL， 洗脱液弃去。再用水甲醇 7 3， 6 4， 5 5， 4 6(V/V) 及纯甲醇五种洗脱液进行梯度洗脱， 每种洗脱液洗脱。
10、 5000mL， 收集水甲醇 5 5(V/V) 洗脱的馏分， 减压浓缩至 50mL。浓缩液经 0.45m 滤 膜过滤后用制备液相色谱纯化， 得到 yanglingmycin D 1.8g。 0015 采用高分辨质谱和核磁共振波谱技术鉴定 yanglingmycin D 的化学结构， 其主要 物理常数如下 ： 0016 Yanglingmycin D， 无 色 微 晶， 熔 点 ： 192 193 ，(c1.0， -85 ， MeOH)， UVmax： 218nm，IR ： 3428， 1636， 1530， 1442， 1406， 1072， 660cm-1。HR-ESI-MS ： m/z 7。
11、23.3875M+H+， (C35H51N10O7， 计算值 723.3872)， 结合 1H NMR 和13C NMR 数据， 确定化合物的 分子式为 C35H50N10O7。Yanglingmycin D 的核磁波谱数据见表 2。 0017 实施例二 0018 Yanglingmycin D 的抑菌活性 0019 采用微量稀释法测定yanglingmycin D对蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)， 枯草 杆菌 (B.subtilis)， 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)， 大肠杆菌 (Escherichia coil)， 绿脓杆菌 (Pseudo。
12、monas aeruginosa) 以及耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌 (Methici llin-resistantStaphylococcus aureus， MRSA) 等六种供试细菌的抑菌活性， 耐甲氧西林 金黄色葡萄球菌由南京医科大学提供， 其余菌种购自中国普通微生物菌种保藏中心。 0020 以 接 种 环 自 培 养 平 皿 上 挑 取 4 5 个 相 同 形 态 的 供 试 菌 菌 落， 接 入 Mueller-Hinton 肉汤中， 35培养至轻度混浊后 ( 约 3 5h) 转入 0.9生理盐水中， 调整 到麦氏浊度为 0.5( 使其在 650nm 波长下吸光度为 0.020， 此。
13、时相当于 1.5108CFUmL-1)， 再用 Mueller-Hinton 肉汤稀释 200 倍， 其接种量则相当于 7.5105CFUmL-1。将稀释好 的接种液转入 96 孔板中， 每孔加液量 100L， 再分别加入无菌水配制的不同浓度待测药液 100L， 每板另设不加任何药剂的空白对照和加药不接菌对照， 实验中每个处理设三次重 复。氨苄青霉素为阳性对照药剂。将处理好的 96 孔板置培养箱中， 35培养 20h， 650nm 测 定透光率， 记录不同药剂对供试细菌的 MIC 值。以透光率大于 85为抑制生长的标准， MIC 说 明 书 CN 102532276 A 4 3/4 页 5 为抑制生长的最低浓度。实验结果见表 1。 0021 Yanglingmycin D 对蜡状芽孢杆菌、 枯草杆菌、 金黄色葡萄球菌以及耐甲氧西林的 金黄色葡萄球菌均具有很强的抑制作用， 其活性明显优于对照药剂氨苄青霉素， 但对革兰 氏阴性菌无明显活性。 0022 表 1Yanglingmycin D 对六种供试细菌的抑菌活性 0023 0024 表 2Yanglingmycin D 的核磁波谱数据 (CD3OD， 500MHz) 0025 说 明 书 CN 102532276 A 5 4/4 页 6 说 明 书 CN 102532276 A 6 。