具有血管生成抑制活性的异喹啉衍生物 本发明涉及新的异喹啉衍生物、它们的制备方法和其在人或动物体的治疗方法中的应用、它们单独或与一种或多种其它的药物活性化合物联合治疗疾病(尤其是增殖性疾病)如肿瘤疾病的用途、治疗动物尤其是人类的这类疾病的方法、以及这类化合物单独或与一种或多种其它药物活性化合物联合用于制备治疗尤其是增殖性疾病如肿瘤的药物组合物(药物)的用途。
【发明背景】
动物器官与组织的血管系统的生长以及例如月经周期、妊娠或伤口愈合期间新血管形成的短暂期涉及两种过程，即在发育的胚胎中由分化的内皮细胞或成血管细胞从头形成血管(血管发生)和由已存在的血管发育成新毛细血管(血管生成)。另一方面，已知有许多疾病与血管生成失调有关，例如眼部新血管形成所致的疾病，尤其是视网膜病(糖尿病性视网膜病，年龄相关性黄斑退化)；牛皮癣、成血管细胞瘤，如“草莓斑”(=血管瘤)；各种炎症性疾病，如关节炎，尤其是类风湿性关节炎，动脉粥样硬化和移植后发生的动脉粥样硬化，子宫内膜炎或慢性哮喘；以及尤其是肿瘤病(实体瘤，以及白血病和其它液体瘤，因为许多原始血细胞和白血病细胞表达c-kit,KDR和flt-1)。
最近的研究表明，无论是在胚胎发育和正常生长过程中，还是在各种病理性异常和疾病中，在控制血管系统及其组成部分的生长与分化地调控网状结构中心都存在着称为“血管内皮生长因子”(=VGEF)的血管生成因子及其细胞受体(参见Breier,G．等，细胞生物学趋势(Trends in Cell Biology)6,454-456(1996)和其中引用的文献)。
VEGF是一种由二硫键连接的46kDa二聚糖蛋白，它与血小板衍生生长因子(PDGF)有关。它由正常细胞系和肿瘤细胞系的细胞分泌，是一种内皮细胞特异性促细胞分裂剂，在体内试验系统(如兔角膜)中表现出血管生成活性，对内皮细胞和单核细胞具有趋化活性，并在内皮细胞中诱导纤溶酶原激活物，随后参与毛细血管形成期间胞外基质的蛋白水解降解作用。已知有许多同种型VEGF，它们表现出可比的生物活性，但分泌它们的细胞类型却不相同，并且结合肝素的能力也不相同。此外，VEGF家族中还有其它成员，如胎盘生长因子(PIGF)和VEGF-C。
相反，VEGF受体是跨膜受体酪氨酸激酶，具有含七个免疫球蛋白样结构域的胞外域和胞内酪蛋白激酶结构域。不同类型的VEGF受体是已知的，如VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3。
许多人类肿瘤，例如神经胶质瘤和癌均能表达VEGF，并能大规模地诱导形成其受体。由此产生了这样一种假说，即肿瘤细胞释放的VEGF能以旁分泌方式刺激毛细血管的生长和肿瘤内皮细胞的增殖，而这种血液供给的改善结果促进了肿瘤生长。VEGF表达增高还能解释神经胶质瘤患者发生脑水肿的原因。事实上，由其中VEGF表达或VEGF活性受到抑制的研究已经获得了VEGF在体内作为肿瘤血管生成因子所起作用的直接证据。这一结果可使用抑制VEGF活性的抗体、使用抑制信号转导的显性失活的VEGFR-2突变体或使用反义VEGF-RNA技术获得。由于抑制了肿瘤血管生成，所有治疗方法都能减缓体内神经胶质瘤细胞系或其它肿瘤细胞系的肿瘤生长。
低氧及许多生长因子和细胞因子，如表皮生长因子、转化生长因子α，转化生长因子β、白介素1和白介素6都能在细胞实验中诱导VEGF的表达。血管生成被认为是那些生长至最大直径超过约1-2mm的肿瘤的必要先决条件；达到该极限，氧和营养物仍可通过扩散提供给肿瘤细胞。因此，对每一种肿瘤来讲，无论其起源及起因，在达到一定尺寸后，其生长都取决于血管生成作用。
就血管生成抑制剂对抗肿瘤的效力而言，以下三种主要机理是重要的：1)抑制血管，尤其是毛细血管生长到具有无血管基质的肿瘤内，结果由于细胞程序性死亡与增殖间达到平衡，肿瘤不再生长；2)由于对肿瘤供血不足，阻止对转移形成肿瘤细胞的清洗；和3)抑制通常排列在血管上的内皮细胞生长，由此避免了它们对外围组织的旁分泌生长刺激作用。
发明概述
令人惊奇的是，现已发现下文所示的式Ⅰ异喹啉衍生物具有有益的药理学性质，例如能抑制例如VEGF受体酪氨酸激酶和VEGF依赖性细胞增殖的活性。其它活性详见下文。
式Ⅰ化合物例如提供了一种意想不到的的新治疗方法，尤其是对下述疾病：即在对该疾病的治疗过程中以及对该疾病的预防而言，对血管生成和/或VEGF受体酪氨酸激酶的抑制显示出有益作用。发明详述
本发明涉及式Ⅰ化合物或其N-氧化物(其中一个或多个N原子带有氧原子)或它们的盐：其中r为0-2；n为0-2；m为0-4；A,B,D和E各自独立地为N或CH，条件是这些基团中至多两个为N；G为低级亚烷基，-CH2-O-,-CH2-S-,-CH2-NH-，氧杂(-O-)，硫杂(-S-)或亚氨基(-NH-)，或为被酰氧基或羟基取代的低级亚烷基；Q为低级烷基，尤其是甲基；R为H或低级烷基；X为亚氨基，氧杂或硫杂；Y为低级烷基，或者尤其是芳基、杂芳基或未取代或取代的环烷基；并且Z为氨基，单-或二-取代的氨基，卤素，烷基，取代烷基，羟基，醚化或酯化的羟基，硝基，氰基，羧基，酯化羧基，链烷酰基，氨基甲酰基，N-单-或N,N-二-取代的氨基甲酰基，脒基，胍基，巯基，磺基，苯硫基，苯基-低级烷硫基，烷基苯硫基，苯亚磺酰基，苯基-低级烷基亚磺酰基，烷基苯基亚磺酰基，苯磺酰基，苯基-低级烷基磺酰基或烷基苯磺酰基，其中当存在多于一个基团Z(m≥2)时，取代基Z彼此相同或不同；并且以波折线表示的键为单键或双键。
在本发明内容的范围内，除非另有说明，上下文中使用的通用术语优选具有下面的含义。
术语“低级”是指含至多7个并且包括第7个碳原子在内，尤其是含至多4个并包括第4个碳原子在内的基团，所述基团可以是直链或带有一个或多个分支的支链基团。
提及复数形式的化合物或盐等时，应始终理解为包括单个化合物或盐等。
式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)中可能存在的不对称碳原子(例如，其中n=1且R为低级烷基时的情况)可以具有(R),(S)或(R,S)构型，优选(R)或(S)构型。位于双键或环上的取代基可以以顺式(=Z)或反式(=E)形式存在。因此本发明化合物可以以异构体混合物形式或者为纯净异构体形式存在，优选以对映体纯的非对映体形式存在。
指数r优选为0或1。
指数n优选为0或1，尤其是0。它也可以为2。
指数m优选为0,1或2，尤其是0或1。
式Ⅰ的环元素A、B、D和E中，至多两个为N，其它两个为CH。优选环元素A、B、D和E均为CH。
当G为二价基团-CH2-O-,-CH2-S-或-CH2-NH-时，其中的亚甲基基团在每种情况下都与具有环元素A、B、D和E的环键连，而杂原子(O,S或NH)则与Ⅰ中的酞嗪环相连。
低级亚烷基G可以是支链或直链形式(优选后一种形式)，尤其是支链或优选直链的C1-C4亚烷基，尤为亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、三亚甲基(-CH2-CH2-CH2-)或四亚甲基(-CH2-CH2-CH2-CH2-)。G优选为亚甲基。
酰氧基取代的低级亚烷基中的酰基优选为芳基羰氧基，其中的芳基如下定义，尤其是苯甲酰氧基或低级链烷酰氧基，更特别的是苯甲酰氧基；酰氧基取代的低级亚烷基尤为苯甲酰氧基取代的亚甲基。
羟基取代的低级亚烷基优选羟基亚甲基(-CH(OH)-)。
优选酰氧基-或羟基-取代的低级亚烷基G，或者上下文中所提到的G的其它定义在每种情况下也都是特别优选的。
Q优选与A或D键连(r=1)或者与二者同时键连(r=2)，因此在键连Q的情况下，A和/或D为C(-Q)。
低级烷基尤为C1-C4烷基，例如正丁基，仲丁基，叔丁基，正丙基，异丙基，或者尤其是甲基或乙基，或者在Y为低级烷基的情况下，还特别是异戊基。
芳基优选为具有6-14个碳原子的芳族基，尤其是苯基、萘基、芴基或菲基，所述基团可以是未取代的或被一个或多个，优选至多三个，尤其是一个或两个的取代基取代，所述取代基尤其选自氨基、单-或二-取代氨基、卤素、烷基、取代烷基、羟基、醚化或酯化羟基、硝基、氰基、羧基、酯化羧基、链烷酰基、氨基甲酰基、N-单-或N,N-二-取代的氨基甲酰基、眯基、胍基、巯基、磺基、苯硫基、苯基-低级烷硫基、烷基苯硫基、苯基亚磺酰基、苯基-低级烷基亚磺酰基、烷基苯基亚磺酰基、苯磺酰基、苯基-低级烷基磺酰基、烷基苯基磺酰基、低级链烯基(如乙烯基)、苯基、低级烷硫基(如甲硫基)、低级链烷酰基(如乙酰基)、低级烷硫基(如甲硫基(-S-CH3))、卤代-低级烷硫基(如三氟甲硫基(-S-CF3))、低级烷烃磺酰基、卤代-低级烷烃磺酰基(例如尤其是三氟甲磺酰基)、二羟硼基(-B(OH)2)、杂环基和键合在环的邻位碳原子上的低级亚烷二氧基(如亚甲二氧基)；芳基优选为未取代的或被一个或两个选自如下的相同或不同取代基取代的苯基：氨基；低级链烷酰基氨基，尤其是乙酰基氨基；卤素，尤其是氟，氯或溴；低级烷基，尤其是甲基、乙基或丙基；卤代低级烷基，尤其是三氟甲基；羟基；低级烷氧基，尤其是甲氧基或乙氧基；苯基-低级烷氧基，尤其是苄氧基；和氰基，或者(作为另外的选择或除上述取代基之外)还选自C8-C12烷氧基(尤其是正癸氧基)，氨基甲酰基，低级烷基氨基甲酰基(如N-甲基-或N-叔丁基-氨基甲酰基)，低级链烷酰基(如乙酰基)，苯氧基，卤代低级烷氧基(如三氟甲氧基或1,1,2,2-四氟乙氧基)，低级烷氧基羰基(如乙氧基羰基)，低级烷硫基(如甲硫基)，卤代低级烷硫基(如三氟甲硫基)，羟基低级烷基(如羟甲基或1-羟基甲基)，低级烷基磺酰基(如甲磺酰基)，卤代低级烷基磺酰基(如三氟甲磺酰基)，苯磺酰基，二羟硼基(-B(OH)2),2-甲基-嘧啶-4-基，噁唑-5-基，2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基，1H-吡唑-3-基，1-甲基-吡唑-3-基，和与两个相邻碳原子键连的低级亚烷二氧基(如亚甲二氧基)，更优选被一个或两个选自如下的相同或不同取代基取代：低级烷基(尤其是甲基)，卤素(尤其是氯或溴)，和卤代低级烷基(尤其是三氟甲基)。芳基还优选为萘基。
杂芳基在结合环中优选为不饱和杂环基，并且优选为单-或双-或三-环的；其中与式Ⅰ分子的基团结合的环中至少一个或多个，优选1-4个，尤其是一个或两个相应芳基的碳原子被选自氮、氧和硫的杂原子置换，并且结合环优选具有4-12个，尤其是5-7个环原子；其中杂芳基为未取代的或被一个或多个，尤其是1-3个选自上面芳基的取代基部分所述的相同或不同取代基所取代；并且尤其是选自如下的杂芳基：咪唑基、噻吩基、呋喃基、吡喃基、噻蒽基、异苯并呋喃基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、2H-吡咯基、吡咯基、低级烷基取代的咪唑基、苯并咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吲嗪基、异吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、三唑基、四唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、咔唑基、菲啶基、吖啶基萘嵌二氮杂苯基、菲咯啉基和呋咱基，这些基团各自经由具有至少一个杂原子的环与式Ⅰ分子基团相连；尤其优选吡啶基。特别优选被卤素、尤其是被氟取代的吲哚基，特别是6-氟吲哚-3-基。
单-或二-取代的氨基尤其是被一个或两个选自如下的相同或不同基团取代的氨基：低级烷基，如甲基；羟基低级烷基，如2-羟基乙基；苯基-低级烷基；低级链烷酰基，如乙酰基；苯甲酰基；取代苯甲酰基，其中的苯基为未取代的或者特别是被一个或多个，优选一个或两个取代基取代，所述取代基选自硝基和氨基，或者还选自卤素、氨基、N-低级烷基氨基、N,N-二-低级烷基氨基、羟基、氰基、羧基、低级烷氧基羰基、低级链烷酰基和氨基甲酰基；以及苯基-低级烷氧基羰基，其中的苯基为未取代的或者特别是被一个或多个，优选一个或两个取代基取代，所述取代基选自硝基和氨基，或者还选自卤素、氨基、N-低级烷基氨基、N,N-二-低级烷基氨基、羟基、氰基、羧基、低级烷氧基羰基、低级链烷酰基和氨基甲酰基；并且优选N-低级烷基氨基(如N-甲基氨基)，羟基-低级烷基氨基(如2-羟基乙基氨基)，苯基-低级烷基氨基(如苄氨基)，N,N-二-低级烷基氨基，N-苯基-低级烷基-N-低级烷基氨基，N,N-二-低级烷基苯基氨基，低级链烷酰基氨基(如乙酰氨基)，或选自苯甲酰基氨基和苯基-低级烷氧基羰基氨基的取代基，其中在每种情况下苯基是未取代的或者特别是被硝基或氨基取代，或者被卤素、氨基、N-低级烷基氨基、N,N-二-低级烷基氨基、羟基、氰基、羧基、低级烷氧基羰基、低级链烷酰基或氨基甲酰基取代，或者作为另外的选择或除前述基团之外还被氨基羰基氨基取代。
卤素尤为氟、氯、溴或碘，更特别的是氟、氯或溴。
烷基优选具有至多12个碳原子，并且特别是低级烷基，更特别的是甲基、或乙基、正丙基、异丙基或叔丁基。
取代烷基为刚才所定义的烷基，尤其是低级烷基，优选甲基，它可含有一个或多个，尤其是至多三个的取代基，所述取代基尤其选自卤素(尤其是氟)以及氨基、N-低级烷基氨基、N,N-二-低级烷基氨基、N-低级链烷酰基氨基、羟基、氰基、羧基、低级烷氧基羰基和苯基-低级烷氧基羰基。特别优选三氟甲基。
醚化羟基尤其是C8-C20烷氧基，如正癸氧基，低级烷氧基(优选)，如甲氧基、乙氧基、异丙氧基或正戊氧基，苯基-低级烷氧基(如苄氧基)，或者还为苯氧基，或者作为另外的选择或除上述基团外还为C8-C20烷氧基(如正癸氧基)，卤代-低级烷氧基，如三氟甲氧基或1,1,2,2-四氟乙氧基。
酯化羟基尤其是低级链烷酰氧基，苯甲酰氧基，低级烷氧基羰氧基(如叔丁氧基羰氧基)，或苯基-低级烷氧基羰氧基(如苄氧基羰氧基)。
酯化羧基尤其是低级烷氧基羰基(如叔丁氧羰基或乙氧基羰基)，苯基-低级烷氧基羰基或苯氧基羰基。
链烷酰基尤其为烷基-羰基，更优选低级链烷酰基，例如乙酰基。
N-单-或N,N-二-取代的氨基甲酰基尤其为末端氮上被一个或两个取代基低级烷基、苯基-低级烷基或羟基-低级烷基取代的基团。
烷基苯硫基尤其是低级烷基苯硫基。
烷基苯亚磺酰基尤其是低级烷基苯亚磺酰基。
烷基苯磺酰基尤其是低级烷基苯磺酰基。
吡啶基Y优选为3-或4-吡啶基。
未取代或取代的环烷基优选为未取代的或以与芳基相同的方式(特别是如苯基所述)取代的C3-C8环烷基。优选环己基，或环戊基或环丙基。还优选4-低级烷基-环己基，如4-叔丁基环己基。
Z优选为氨基、羟基-低级烷基氨基(如2-羟基乙基氨基)、低级链烷酰基氨基(如乙酰氨基)、硝基苯甲酰基氨基(如3-硝基苯甲酰基氨基)、氨基苯甲酰基氨基(如4-氨基苯甲酰基氨基)、苯基-低级烷氧基羰基氨基(如苄氧基羰基氨基)，或卤素(如溴)；优选仅存在一个取代基(m=1)，特别是最后所提及的取代基之一，尤其是卤素。更特别优选其中Z不存在(m=0)的式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)。
杂环基尤其为具有1或2个选自氮、氧和硫的杂原子的五或六元杂环，该杂环可以是不饱和的或完全或部分饱和的，并且是未取代的或取代的，尤其是被低级烷基(如甲基)取代；优选选自2-甲基-吡啶-4-基，噁唑-5-基，2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基，1H-吡唑-3-基和1-甲基-吡唑-3-基。
被键连于两个相邻碳原子的低级亚烷二氧基(如亚甲二氧基)取代的苯基形式的芳基优选为3,4-亚甲二氧基苯基。
式Ⅰ中以波折线表示的键为单键或双键。优选它们二者同时为单键或双键。
式Ⅰ化合物的N-氧化物优选为异喹啉环氮或具有环元素A、B、D和E的环中的氮带有氧原子，或者多于一个所述氮原子带有氧原子的N-氧化物。
盐尤指式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)的可药用盐。
这类盐为例如由具有碱性氮原子的式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)形成的酸加成盐，优选与有机或无机酸形成，尤其是形成可药用盐。适宜的无机酸为例如氢卤酸，如盐酸；硫酸或磷酸。适宜的有机酸为例如羧酸、膦酸、磺酸或氨基磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二烷酸、乙醇酸、乳酸、2-羟基丁酸、葡糖酸、葡萄糖一羧酸、富马酸、琥珀酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、葡糖二酸、半乳糖二酸、氨基酸(如谷氨酸、天冬氨酸、N-甲基甘氨酸、乙酰基氨基乙酸、N-乙酰基天冬酰胺或N-乙酰基半胱氨酸)、丙酮酸、乙酰乙酸、磷酸丝氨酸、2-或3-甘油磷酸、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、环己烷羧酸、苯甲酸、水杨酸、1-或3-羟基萘-2-羧酸、3,4,5-三甲氧基苯甲酸、2-苯氧基苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、4-氨基水杨酸、邻苯二甲酸、苯乙酸、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、甲烷-或乙烷-磺酸、2-羟基乙烷磺酸、乙烷-1,2-二磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、1,5-萘二磺酸、N-环己基氨基磺酸、N-甲基-,N-乙基-或N-丙基-氨基磺酸、或其它有机质子酸，如抗坏血酸。
当存在阴性电荷基团，如羧基或磺基时，也可以与碱形成盐，如金属或铵盐，例如碱金属或碱土金属盐，例如钠、钾、镁或钙盐；或者与氨或适宜的有机胺，如三元单胺(如三乙胺或三(2-羟乙基)胺)或杂环碱，例如N-乙基哌啶或N,N′-二甲基-哌嗪形成铵盐。
当碱性基团与酸性基因存在于同一分子中时，式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)还可形成内盐。
为分离或纯化目的，也可以使用药学上不能接收的盐，例如苦味酸盐或高氯酸盐。只有可药用盐或游离化合物(任选为药物组合物形式)才能在治疗上使用，并且优选这些。
鉴于游离形式的新化合物与其盐形式的化合物(包括例如在新化合物的纯化或其鉴定中那些可用作中间体的盐)之间的密切关系，本文中有关游离化合物的任何描述在适当和有利时都应理解为还包括其相应的盐。
如本文开头和以下所述，式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)具有有价值的药理学特性。
本发明化合物作为VEGF受体酪氨酸激酶活性抑制剂的效力可证实如下：
抗VEGF受体酪氨酸激酶活性试验：试验采用Flt-1 VEGF受体酪氨酸激酶进行。详细步骤如下：将在20mM Tris.HCl pH 7.6,6.3mM二氯化锰(MnCl2),3mM氯化镁(MgCl2)和3μg/ml聚(Glu,Tyr)4∶1(Sigma,Buchs,Swtizerland)中的30μl激酶溶液(10ng Flt-1激酶结构域，Shibuya等，癌基因(Oncogene),5,519-524(1990))、8μM [33P]-ATP(0.2μCi/批)、1％二甲亚砜和0-50μM试验化合物一起室温温育15分钟。然后加10μl 0.25M乙二胺四乙酸(EDTA)pH 7终止反应。利用多通道分配器(LAB SYSTEMS，美国)，将20μl等份试样加入到PVDF(=聚二氟乙烯)Immobilon P膜(Millipore，美国)上，进而置于Millipore微滴过滤歧管内，并与真空连接。待液体完全消除后，在振摇下，将膜在含0.5％磷酸(H3PO4)的浴液中连续温育4次，每次10分钟，然后安放在Hewlett Packard TopCount Manifold上并在加入10μlMicroscint(β-闪烁计数液；Packard，美国)后测量放射活性。通过线性回归分析每一化合物在三种浓度(通常为0.01,0.1和1μM)下的抑制百分值，测定IC50值。发现抑制值(即与无式Ⅰ抑制剂的对照组相比具有一半最大抑制的IC50)尤为10nmol/升-100μmol/升，更特别的为20-2000nmol/升。
同样，采用KDR酪氨酸受体激酶也测得在相同范围内的IC50抑制值。
本发明化合物的抗肿瘤活性可如下所述在体内证实：
裸鼠异种移植模型的体内活性：使雌性Balb/c裸鼠(8-12周龄，如Novartis Animal Farm,Sisseln，瑞士)在无菌条件下自由饮水与进食。通过皮下注射肿瘤细胞(人上皮肿瘤细胞系A-431；美国典型培养物保藏中心(ATCC)，Rockville,MD.，美国，保藏号：ATCC CRL1555；细胞系来自85岁妇女；表皮样瘤癌细胞系)在载体鼠体内诱发肿瘤。在开始治疗前，将所得肿瘤进行至少三次连续移植。在Forene(Abbott，瑞士)麻醉下，利用13规套管针将肿瘤碎片(约25mg)皮下植入动物的左胁腹下。等肿瘤长至100mm3平均体积大小时就开始用相应的试验化合物处理。通过测定两个垂直轴的长度每周测量肿瘤生长情况2-3次，每次都是在最后一次处理24小时后开始。按照公开方法(参见Evans等，英国癌症杂志(Brit.J.Cancer 45,466-468(1982)计算肿瘤体积。以处理动物的肿瘤体积平均增长值除以未处理动物(对照组)的肿瘤体积的平均增长值，之后乘以100计算抗肿瘤效力(T/C％)。以最小平均肿瘤体积对处理开始时的平均肿瘤体积表示肿瘤消退率(％)。采用管饲法每日给药试验化合物。
类似地，也可以使用其它肿瘤细胞系来代替肿瘤细胞系A-431,例如：
-MCF-7乳腺癌细胞系(ATCC No.HTB 22；还可参见《国立癌症研究所杂志》(J.Nati.Cancer Inst.)(Bethesda)51,1409-1416(1973))；
-MDA-MB 468乳腺癌细胞系(ATCC No.HTB132；还可参见InVitro 14,911-915(1978))；
-MDA-MB 231乳腺癌细胞系(ATCC No.HTB 26；还可参见《国立癌症研究所杂志》(Bethesda)53,661-674(1974))；
-Colo 205结肠癌细胞系(ATCC No.CCL222；还可参见《癌症研究》(Cancer Res.)38,1345-1355(1978))；
-HCT 116结肠癌细胞系(ATCC No.CCL 247；还可参见《癌症研究》41,1751-1756(1981))；
-DU 145前列腺癌细胞系DU145(ATCC No.HTB 81；还可参见《癌症研究》37,4049-4058(1978))；和
-PC-3前列腺癌细胞系PC-3(ATCC No.CRL 1435；还可参见《癌症研究》40,524-534(1980))。
对VEGF诱导的KDR自磷酸化的抑制作用可用进一步的体外细胞实验证实：将永久表达人VEGF受体(KDR)的固定CHO细胞分配到6孔细胞培养板的培养基内(含10％胎牛血清(=FCS))，在37℃，5％CO2下温育至它们大约80％汇合。然后在培养基(不含FCS，但含0.1％牛血清白蛋白=BSA)中稀释试验化合物，并在移去含FCS的培养基后，加到到细胞中(对照组中加不合试验化合物的培养液)。37℃温育2小时后，向其中加入重组VEGF；VEGF的终浓度为20ng/mL。进一步在37℃温育5分钟后，细胞以冰冷的PBS(磷酸缓冲生理盐水)洗涤两次，随即在100μl(每孔)裂解缓冲液中进行裂解。4℃(置于冰上)保持15分钟后，离心裂解物以除去细胞核，并采用商业化的蛋白质分析(BIORAD)测定上清液中蛋白质浓度。裂解物尔后可随即进一步使用，或者视需要在-20℃下贮存。
为了测定KDR磷酸化作用，如下所述进行“夹心式ELISA”。将抗KDR的单克隆抗体(例如Mab 1495.12.14；由H.Towbin制得)固定在黑色ELISA板上(OptiPlateTM HTRF-96,Packard生产)(50ng/孔，在50μl PBS中)。然后洗涤上述板，并用1％BSA/PBS饱和残留的游离蛋白结合部位。然后将细胞裂解物(20μg蛋白/孔)连同与碱性磷酸酶偶联的抗磷酸酪氨酸抗体(PY20:AP，购自Transducion Labroatories)一起4℃温育过夜。随后采用发光AP底物(与Emerald Ⅱ一起现用的CDP-Star；TROPIX)证实抗磷酸酪氨酸抗体的结合。发光强度采用Packard Top Count Microplate Scintillation Counter(TOP Count)测量。阳性对照组(用VEGF刺激)与阴性对照组(不用VEGF刺激)信号强度之间的差异对应于VEGF诱导的KDR磷酸化作用(=100％)。受试物质的活性以对VEGF诱导的KDR磷酸化的％抑制计算，并将能产生大约一半最大抑制的物质浓度称作ED50(50％抑制的有效剂量)。式Ⅰ化合物显示出5nM-10μM，特别是5nM-500nM的ED50值。
式Ⅰ化合物或其N-氧化物还能不同程度地抑制其它与信号转导有关的、由营养因子介导的酪氨酸激酶，例如abl激酶、src家族的激酶，尤其是c-src激酶、lck、fyn；还有EGF家族激酶，例如c-erbB2激酶(HER-2)、c-erbB3激酶、c-erbB4激酶；胰岛素样生长因子受体激酶(IGF-1激酶)，尤其是PDGF受体酪氨酸激酶家族成员，如PDGF受体激酶、CSF-1受体激酶、Kit-受体激酶和VEGF受体激酶，尤其是KDR和Flk；以及丝氨酸/苏氨酸激酶，它们在包括人细胞在内的哺乳动物细胞的生长调节和转化中均起作用。
c-erbB2酪氨酸激酶(HER-2)的抑制作用例如可采用测定EGF-R蛋白激酶的类似方式进行测定(参见House等，《欧洲生物化学杂志》(Europ.J.Biochem.)140,363-367(1984))。C-erbB2激酶的分离及其活性的测定可采用本领域已知的方法完成(参见例如Akiyama等，《科学》232,1644(1986))。
对PDGF受体激酶的抑制作用还可以按照Trinks等人描述的方法测定(参见《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)37(7)；1015-1027(1994))。
基于这些试验，本发明的式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)呈现出治疗活性，尤其是对蛋白激酶依赖性疾病(特别是增殖性疾病)。
基于本发明式Ⅰ化合物，尤其是式ⅠA新化合物作为VEGF受体酪氨酸激酶活性抑制剂的功效，它们主要抑制血管的生长，因而可有效地对抗许多与血管生成失调有关的疾病，尤其是眼部新血管形成所致疾病，尤为视网膜病(如糖尿病性视网膜病或年龄相关性黄斑变性)，增殖性或剥脱性皮肤病，如牛皮癣；成血管细胞瘤，如“草莓斑”(=血管瘤)；小球膜细胞增殖性病症，如慢性或急性炎症性肾病，比如糖尿病性肾病变、恶性肾硬化、血栓性微血管病综合征或移植排斥，或者尤其是炎症性肾病，如肾小球性肾炎，特别是肾小球膜增殖性肾小球性肾炎，溶血性尿毒综合征，糖尿病性肾病，高血压性肾硬化，动脉粥样化，动脉再狭窄，自身免疫病，急性炎症，纤维变性病(如肝硬化)，糖尿病，子宫内膜异位，慢性哮喘，动脉或移植后动脉粥样硬化，神经变性病症以及尤其是肿瘤病(实体瘤，以及白血病和其它“液体瘤”；特别是表达c-kit,KDR和flt-1的那些肿瘤病)，例如尤其是乳腺癌、结肠癌、肺癌(特别是小细胞肺癌)，或者前列腺癌，卡波济肉瘤，CNS瘤，卵巢癌，肾瘤或VHL瘤。式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)能抑制肿瘤的生长，特别适于预防肿瘤的扩散转移和微转移瘤的生长。另外，它们还可用于治疗炎症性风湿或类风湿病和/或疼痛，更特别适合治疗类风湿性关节炎和/或疼痛。
式Ⅰ化合物在某些情形下还能抑制其它生长因子(例如PDGF或bFGF)诱导的血管生成过程。另外，它们还能不同程度地抑制其它激酶，因而也可用于控制其它综合征。
式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)可单独给药或与一种或多种其它治疗剂联合给药，这种联合给药可以使用固定的组合或者以时间交错方式或彼此独立地给药本发明化合物和一种或多种其它治疗剂，或者可以联合给药固定组合与一种或多种其它治疗剂。特别是，对于肿瘤的治疗，式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)的给药可以一起或另外与化学疗法(与一种或多种化学治疗剂(尤其是细胞抑制剂)或与激素或具有激素样活性的化合物联合给药)、放射疗法、免疫疗法、外科手术或者其组合方式联合进行。如上所述，作为其它治疗手段中的辅助疗法一样，长期治疗也是可行的。其它可行的治疗是维持肿瘤消退后患者状况的治疗，甚至是例如处在危险阶段的患者的化学预防性治疗。
作为治疗剂，本发明化合物可以考虑与一种或多种抗增殖化合物、细胞抑制化合物或细胞毒化合物联合使用，例如与一种或多种选自如下的化学治疗剂联合使用：多胺生物合成抑制剂，蛋白激酶抑制剂，特别是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(如蛋白激酶C)或酪氨酸蛋白激酶(如表皮生长因子受体蛋白酪氨酸激酶)的抑制剂、细胞因子、负性生长调节剂(如TGF-β或IFN-β)，芳香酶抑制剂，激素或激素类似物，以及常规细胞抑制剂。
本发明化合物不仅可用于人的(预防性以及(优选)治疗性)治疗，而且还用于其它温血动物的治疗，例如有商业用途的动物，比如啮齿动物，如小鼠、兔子或大鼠，或豚鼠。它们还可在上述试验体系中用作标准化合物以与其它化合物进行对比。
一般来说，本发明还涉及式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)在抑制VEGF-R酪氨酸激酶活性方面的用途。
式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)还可用于诊断目的，例如将得自原始“宿主”温血动物(尤其是人)的肿瘤移植到小鼠内，加入这类化合物后检测肿瘤生长的降低，研究它们对所述化合物的敏感性，以便确定和决定更好的对原始宿主肿瘤疾病的可能治疗方法。
在下文所述的优选式Ⅰ化合物组中，前述一般定义中的取代基定义可以合理地加以使用，例如用更具体的定义或尤其是表示优选部分的定义替换更一般的定义。在每种情况下均优选上述优选部分的定义或举例提到的定义。
优选这样的式Ⅰ化合物或其盐，其中r为0-2，优选0；n为0或1；m为1或者尤其是0；A,B,D和E各自为CH，或者A,D和E各自为CH且B为N；G为低级亚烷基，尤其是亚甲基或亚乙基(-CH2-CH2-),-CH2-NH-,-CH2-O-，羟基亚甲基或苯甲酰氧基-亚甲基；Q为甲基，它键连于A、D或A与D二者上；R为H或低级烷基，尤其是H或甲基；X为亚氨基，氧杂或硫杂；Y为苯基，该苯基为未取代的或被一个或两个选自如下的相同或不同取代基取代：氨基；低级链烷酰基氨基，尤其是乙酰基；卤素，尤其是氟，氯或溴；低级烷基，尤其是甲基，或乙基或丙基；卤代低级烷基，尤其是三氟甲基；羟基；低级烷氧基，尤其是甲氧基，或乙氧基；苯基-低级烷氧基，尤其是苄氧基；以及氰基，或者(作为另外的选择或除上述取代基之外)还选自低级链烯基，如乙烯基，C8-C12烷氧基(尤其是正癸氧基)，低级烷氧基羰基(如叔丁氧羰基)，氨基甲酰基，低级烷基氨基甲酰基(如N-甲基-或N-叔丁基-氨基甲酰基)，低级链烷酰基(如乙酰基)，苯氧基，卤代低级烷氧基(如三氟甲氧基或1,1,2,2-四氟乙氧基)，低级烷氧基羰基(如乙氧基羰基)，低级烷硫基(如甲硫基)，卤代低级烷硫基(如三氟甲硫基)，羟基低级烷基(如羟甲基或1-羟基甲基)，低级烷基磺酰基(如甲磺酰基)，卤代低级烷基磺酰基(如三氟甲磺酰基)，苯磺酰基，二羟硼基(-B(OH)2),2-甲基-嘧啶-4-基，噁唑-5-基，2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基，1H-吡唑-3-基，1-甲基-吡唑-3-基，和与两个相邻碳原子键连的低级亚烷二氧基(如亚甲二氧基)，尤其是被一个或两个选自卤素(如氯或溴)，低级烷基(如甲基)和卤代低级烷基(如三氟甲基)的取代基所取代；或者Y为吡啶基，尤其是3-吡啶基；Y特别为苯基，2-,3-或4-氨基苯基，2-,3-或4-乙酰氨基苯基，2-,3-或4-氟苯基，2-,3-或4-氯苯基，2-,3-或4-溴苯基，2,3-，2,4-,2,5-或3,4-二氯苯基，氯-氟-苯基，如3-氯-4-氟-苯基，或4-氯-2-氟苯胺基，2-,3-或4-甲基苯基，2-,3-或4-乙基苯基，2-,3-或4-丙基苯基，甲基-氟-苯基，如3-氟-4-甲基苯基，2-,3-或4-三氟甲基苯基，2-,3-或4-羟基苯基，2-,3-或4-甲氧基苯基，2-,3-或4-乙氧基苯基，甲氧基-氯-苯基，如3-氯-4-甲氧基羰基，2-,3-或4-苄氧基苯基，2-,3-或4-氰基苯基，或者还为2-,3-或4-吡啶基；或者Y较特别地为4-氯苯基，2-,3-或4-甲基苯基，4-氯-5-三氟甲基苯基，3-溴-5-三氟甲基苯基，或者Y更特别地为3,5-二甲基苯基；或者还特别地为4-甲基-3-碘苯基，3,4-双(三氟甲基)苯基，3-溴-4-乙基苯基或3-氯苄基苯基；Z为氨基；N-低级烷基氨基，如N-甲基氨基；羟基-低级烷基氨基，如2-羟基乙基氨基；苯基-低级烷基氨基，如苄基氨基；N,N-二-低级烷基氨基；N-苯基-低级烷基-N-低级烷基氨基；N,N-二-低级烷基苯基氨基；低级链烷酰基氨基，如乙酰氨基；或选自苯甲酰基氨基和苯基-低级烷氧基羰基氨基的取代基，其中的苯基在每种情况下均为未取代的或者尤其是被硝基或被氨基，或者还被卤素，氨基，N-低级烷基氨基，N,N-二-低级烷基氨基，羟基，氰基，羧基，低级烷氧基羰基，低级链烷酰基或被氨基甲酰基取代；或者Z为卤素，尤其是溴；更特别的是氨基，乙酰氨基，硝基苯甲酰基氨基，氨基苯甲酰基氨基，2-羟基乙基氨基，苄氧基羰基氨基或溴；并且以波折线表示的键各自为双键，或者还各自为单键。
特别优选这样的式Ⅰ化合物或其盐，其中r为0；n为0；m为0；A,B,D和E各自为CH；G为低级亚烷基，尤其是亚甲基；X为亚氨基；Y为苯基，该苯基为未取代的或被一个或两个选自如下的相同或不同取代基所取代：卤素，尤其是氟，或者更尤其是氯或溴；低级烷基，尤其是甲基；以及卤代-低级烷基，尤其是三氟甲基；Y尤为4-氯苯基，2-,3-或4-甲基苯基，4-氯-5-三氟甲基苯基，3-溴-5-三氟甲基苯基，或者更尤其为3,5-二甲基苯基；或者还为4-甲基-3-碘苯基，3,4-双(三氟甲基)苯基或3-溴-4-乙基-苯基；以及以波折线表示的键为双键。
还特别优选这样的式Ⅰ化合物或其盐(当存在成盐基团时)，其中r为0；n为0-2；m为0；A,B,D和E各自为CH；G为亚甲基；R为H；X为亚氨基(NH)；和Y为未取代的或被卤素(尤其是氯)，或被低级烷氧基(尤其是甲氧基)取代的苯基，如4-氯苯基或4-甲氧基苯基；萘基；未取代的或被低级烷基(尤其是叔丁基)取代的环己基，如4-叔丁基-环己基；未取代的或被卤素(尤其是氟)取代的吲哚基，尤其是6-氟吲哚-3-基；或低级烷基，尤其是异戊基。
特别优选下面实施例(尤其是实施例1-5)提到的式Ⅰ(尤其是式ⅠA)的化合物或其可药用盐，特别是实施例中具体提及的化合物或其盐。
还特别优选实施例80中其IC50小于1μM的所有式Ⅰ化合物。
还特别优选选自下列实施例所述的化合物或其盐：实施例8,17,42,45,46,47,58,60,62,68,69,70,87,100,111,112,113,115,116,117,118和132。
更特别优选其名称为N-(3,5-二甲基-苯基)-[4-(吡啶-4-基甲基)-异喹啉-1-基]胺的化合物(其中，基于式Ⅰ，各符号具有下述含义：r=n=m=0；A=B=D=E=CH；G=CH2；X=NH；Y=3,5-二甲基苯基)；或其盐。
本发明化合物可采用本领域公知的制备其它化合物的方法制备，尤其是通过：a)使式Ⅱ化合物：其中r,m,A,B,D,E,G,Q和Z以及波折线表示的键如式Ⅰ化合物所定义，且L为离核离去基团，与式Ⅲ化合物反应制备：其中n,R,X和Y如式Ⅰ化合物所定义，式Ⅱ与式Ⅲ化合物中不参与反应的官能团必要时为被护形式，然后除去任何存在的保护基，其中方法a)中所述的起始化合物也可以为盐形式，条件是其中存在成盐基团并且以盐形式反应是可行的；并且如果需要，将所得式Ⅰ化合物或其N-氧化物转化为不同的式Ⅰ化合物或其N-氧化物，将游离的式Ⅰ化合物或其N-氧化物转化为盐，将所得到的式Ⅰ化合物或其N-氧化物的盐转化为游离化合物或其它盐，和/或将式Ⅰ化合物或其N-氧化物的异构体混合物分离为单一异构体。各种方法详述
除非另有说明，在下面更详细的制备方法描述中，r,n,m,A,B,D,E,G,Q,R,X,Y和Z以及波折线表示的键均如式Ⅰ化合物所定义。方法a)
在式Ⅱ化合物中，离核离去基团L特别为卤素，更特别地为溴，碘，或最特别地为氯。
式Ⅱ化合物与式Ⅲ化合物之间的反应在适宜的惰性极性溶剂中进行，尤其是醇，例如低级链烷醇，像甲醇、丙醇或者尤其为乙醇或正丁醇，或者无需加入溶剂而在熔融态下进行(特别是当反应物之一为液体形式的情况下)。反应可以在高温下进行，优选的温度为大约60℃-回流温度，例如在回流条件下或者在大约90-大约110℃下进行。式Ⅲ化合物还可以以盐形式使用，例如以与强酸形成的酸加成盐形式(如氢卤酸盐，像盐酸盐)，或者可以将相应的酸例如盐酸加到适宜的溶剂例如醚(如二噁烷)中。
当式Ⅱ和/或Ⅲ化合物中的一个或多个其它官能团例如羧基、羟基、氨基或巯基以被护形式存在，或者因它们不参与反应而必须以被护形式存在时，这些保护基为肽化合物、头孢菌素和青霉素以及核酸衍生物和糖的合成中通常使用的那些基团。保护基也可以早已存在于前体中，并用于保护所述官能团防止发生不希望的副反应，如酰化、醚化、酯化、氧化、溶剂分解作用等。用于原料中应避免发生反应的官能团，尤其是羧基、氨基、羟基和巯基的保护基尤其包括在肽化合物、头孢菌素、青霉素或核酸衍生物和糖的合成中通常使用这些保护基(常规保护基)。保护基可以早已存在于前体中，并用于保护所述官能团防止发生不希望的副反应，如酰化、醚化、酯化、氧化、溶剂分解作用等。在某些情况下，保护基可能会导致反应选择性例如立体选择性进行。保护基的特征在于它们易于除去(即不会发生不希望的副反应)，例如通过溶剂分解、还原、光解或酶促反应除去，或者还可以在例如类似于生理条件的条件下除去。保护基的另一特征是不会存在于终产物中。本领域技术人员晓得或能够容易地确定适于本文所述反应用的保护基。
利用这类保护基对官能团进行的保护反应、保护基本身以及它们的去除反应例如记载于标准专著内，如J.F.w.McOmie，“有机化学中的保护基”，Plenum Press,London and New York 1973；Th.W.Greene，“有机合成中的保护基”，Wiley,New York 1981；“肽化合物”(The Peptides)；Volume 3(E.Gross and J.Meienhofer,eds.),Academic Press,London and New York 1981；“有机化学方法”HoubenWeyl，第4版，Volume 15/I,Georg,Thieme Verlag,Stuttgart 1974；H.-D.Jakubke and H.Jescheit，“氨基酸、肽、蛋白质：Verlag Chemie,Weinheim,Deerfield Beach and Basle 1982；和Jochen Lehmann，糖化学：单糖及其衍生物”，Georg Thieme Verlag,Stuttgart 1974。
实施例中所述的保护基优选以与所述方法类似的方式引入并在需要时除去。附加方法步骤
在按需进行的附加方法步骤中，起始化合物中不参与反应的官能团可以以未保护形式或被护形式存在，例如被一个或多个上面方法a)中提到的保护基保护。然后利用方法a)中所述方法之一全部或部分地去除保护基。
具有成盐基团的式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)可以按照本领域公知的方法成盐。例如，通过用酸或适当的阴离子交换剂处理，可以获得式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)的酸加成盐。具有两个酸分子的盐(例如式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)的二卤化物)也可以转化为每一式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)具有一个酸分子的盐(例如转化为一卤化物)；这种转化可以通过例如加热至熔融态完成，或者通过在高真空下高温(例如130-170℃)加热固体而完成，这样就能够从每一式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)的分子中去除一分子酸。
盐可以常规方式转化为游离化合物，例如通过用适宜的碱性试剂处理，如用碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱金属氢氧化物(例如碳酸钾或氢氧化钠)处理。
立体异构体混合物(如非对映体混合物)可按照本领域公知的方式利用适宜的分离方法分离为其相应的异构体。例如，非对映体混合物可通过分级结晶、层析、溶剂分配等方法分离为它们的单一的非对映体。分离可对原料化合物之一或式Ⅰ化合物本身来进行。对映体可通过形成非对映体盐(例如与对映体纯的手性酸形成盐)，或通过色谱法(如在含手性配体的色谱载体上进行的HPLC色谱法)进行分离。
式Ⅰ化合物可转化为相应的N-氧化物。该反应采用适宜的氧化剂(优选过氧化物，像间氯过苯甲酸)在适宜的溶剂，例如卤代烃，如氯仿或二氯甲烷、或在低级链烷羧酸(如乙酸)中进行，优选的反应温度为0℃至反应混合物的沸点温度，尤其是在大约室温的温度。
其中Z是低级链烷酰氨基的式Ⅰ化合物(或其N-氧化物>可水解为相应的氨基化合物(Z=氨基)，例如通过用无机酸(尤其是盐酸(HCl))在水溶液中(也可加入其它溶剂)，优选在高温如回流下水解进行。
式Ⅰ化合物或其N-氧化物<其中Z是被一个或两个选自低级烷基、羟基-低级烷基和苯基低级烷基的相同或不同基团取代的氨基>，可通过例如与低级烷基卤化物、羟基-低级烷基卤化物(如果需要为羟基被护形式，参见方法a))或苯基-低级烷基卤化物在方法a>所述的类似反应条件下反应，而转化为氨基被相应取代的化合物。为了在氨基Z上引入2-羟基低级烷基取代基，还可以以环氧化物(例如环氧乙烷)为原料进行加成反应。该加成反应优选在水溶液中和/或在极性溶剂，如醇(如甲醇、乙醇、异丙醇或乙二醇)、醚(如二氧六环)、酰胺(如二甲基甲酰胺)或酚类(如苯酚)存在下，也可在无水条件下在非极性溶剂(如苯和甲苯)中，或在苯/水乳液中，任选地在酸或碱催化剂，例如碱溶液(如氢氧化钠溶液)存在下，或者在掺杂肼的固相催化剂(如氧化铝)的存在下，在醚(如乙醚)中，通常在约0℃至所述反应混合物的沸点，优选20℃至回流温度下进行，如果合适的话，反应可在高压条件下，例如在密封管中进行(由此反应温度也可超出沸点)，和/或在惰性气体如氮气或氩气中进行。还可以使用低级链烷醛、苯基-低级链烷醛或羟基-低级链烷醛(如果需要，该化合物为羟基被护形式)对氨基Z进行还原烷基化反应。还原烷基化优选在催化剂，尤其是在贵金属催化剂(如铂或尤为钯，并且优选它们与载体材料如碳结合)或重金属催化剂如阮氏镍的存在下在常压或0.1-10兆帕斯卡(MPa)下通过氢化进行，或者利用复合氢化物如氢化硼，尤其是碱金属氰基硼氢化物(例如氰基硼氢化钠)在适当酸，优选相对较弱的酸(如低级链烷羧酸或尤其是磺酸，如对-甲苯磺酸)中通过还原进行；上述氢化或还原反应是在常规溶剂例如醇(如甲醇或乙醇)或醚(例如环状醚，如四氢呋喃)中，在有或无水存在下完成。
在式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)中，氨基Z可通过酰化转化为被低级链烷酰基、苯甲酰基、取代的苯甲酰基或苯基-低级烷氧羰基(其中苯基是未取代或取代的)取代的氨基。相应的酸包含游离羧基或者为其活性酸衍生物，例如衍生形成的活化酯或活性酸酐形式，也可以为活性环状酰胺形式。活性酸衍生物也可就地形成。活化酯尤为是指待酯化基团的连接碳原子处为不饱和的酯，例如乙烯基酯类，如乙烯基酯(例如通过乙酸乙烯酯对相应的酯进行酯交换反应获得，活化乙烯基酯法)，氨基甲酰基酯(例如通过用异噁唑鎓试剂处理相应的酸获得；1,2-噁唑鎓或Woodward法)，或1-低级烷氧基乙烯基酯(例如，通过用低级烷氧基乙炔处理相应的酸获得；乙氧基乙炔法)，或脒基酯类，如N，N-二取代的脒基酯(例如，通过用适宜的N,N′-二取代碳二亚胺，如N，N′-二环己基碳二亚胺或者尤为N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺处理相应的酸获得；碳二亚胺法)，或N,N-二取代脒基酯(例如，通过用N,N-二取代氨基化氰处理相应的酸获得；氰氨法)，适宜的芳基酯，尤其是被亲电性取代基适当取代的苯基酯(例如，通过在缩合剂如N,N′-二环己基碳二亚胺存在下，用适当取代的苯酚如4-硝基苯酚、4-甲磺酰基苯酚、2,4,5-三氯苯酚、2,3,4,5,6-五氯苯酚或4-苯基重氮苯酚处理相应的酸获得；活化芳基酯法)，氰甲基酯(可通过例如在碱存在下用氯乙腈处理相应的酸获得；氰甲基酯法)，硫酯，尤其是未取代的或取代的(例如硝基取代的)苯硫酯(例如，可通过尤其是利用酸酐或碳二亚胺的方法，用未取代或取代的(例如硝基取代的)苯硫酚处理相应的酸获得；活化硫酯法)，或者，尤其是氨基或酰氨基酯(例如，按照酸酐或碳二亚胺方法，用N-羟基氨基或N-羟基酰氨基化合物处理相应的酸获得，其中的N-羟基氨基或N-羟基酰氨基的化合物如N-羟基琥珀酰亚胺，N-羟基哌啶，N-羟基邻苯二甲酰亚胺，N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二羧酸酰亚胺，1-羟基苯并三唑或3-羟基-3,4-二氢-1,2,3-苯并三嗪-4-酮；活化的N-羟基酯法)。内酯，例如也可以使用γ-内酯。酸酐可以是对称的或者优选这些酸的混合酐；例如，与无机酸如酰卤，特别是酰氯形成的酸酐(例如可通过用亚硫酰氯、五氯化磷、光气或草酰氯处理相应的酸制得，酰氯法)，与叠氮化物形成的酸酐(例如可由相应的酸酯经由相应的酰肼并通过用亚硝酸处理而获得；叠氮化法)，与碳酸半酯例如碳酸低级烷基半酯(尤其是氯甲酸甲酯)形成的酸酐(可通过例如用氯甲酸低级烷基酯或1-低级烷氧基羰基-2-低级烷氧基-1,2-二氢喹啉处理相应的酸获得；混合O-烷基碳酸酐法)，或与二卤代(尤其是二氯的)磷酸形成的酸酐(可通过例如用磷酰氯处理相应的酸获得；磷酰氯法)，与其它磷酸衍生物(例如可由N-苯基氯化磷酰胺酸苯酯获得，或通过在磺酸酐和/或降低外消旋化的添加剂如N-羟基苯并三唑存在下，或者在氰基磷酸二乙酯存在下反应烷基磷酸酰胺获得)或与磷酸衍生物形成的酸酐，或与有机酸形成的酸酐，例如与有机羧酸形成的混合酐(可通过例如用未取代的或取代的低级链烷烃-或苯基低级链烷烃-羧酰卤，例如苯乙酸、新戊酸或三氟乙酸的酰氯，处理相应的酸获得；混合羧酸酐法)或与有机磺酸形成的酸酐(可通过例如用适宜的有机磺酰卤如低级链烷烃-或芳基-，例如甲烷-或对-甲苯-磺酰氯处理相应酸的盐例如碱金属盐而获得；混合磺酸酐法)以及对称酸酐(可通过例如在碳二亚胺或1-二乙基氨基丙炔存在下缩合相应的酸而获得；对称酸酐法)。适宜的环状酰胺尤其是与具有芳香性的五元二氮杂环反应形成的酰胺，例如与咪唑类如咪唑形成的酰胺(可通过用N,N′-羰基二咪唑处理相应的酸获得；咪唑法)，或与吡唑例如3,5-二甲基吡唑形成的酰胺(可经由用乙酰基丙酮处理酰肼获得；吡唑酯(pyrazolide)法)。正如本文所述，用作酰化剂的羧酸衍生物也可就地形成。例如，N,N′-二取代的脒基酯可通过式Ⅰ原料和用作酰化剂的酸的混合物在适当N,N-二取代碳二亚胺如N,N′-二环己基碳二亚胺或者尤其是N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺存在下反应而就地形成。而且，用作酰化剂的酸的氨基或酰氨基酯也可在欲酰化的式Ⅰ原料存在下形成，例如通过在N,N′-二取代的碳二亚胺例如N,N′-二环己基碳二亚胺和N-羟基胺或N-羟基酰胺例如N-羟基琥珀酰亚胺存在下，任选地在适宜的碱如4-二甲氨基吡啶存在下反应相应的酸与氨基原料的混合物而形成。另外，活化也可以通过与N,N,N′,N′-四烷基脲鎓化合物如与O-苯并三唑-1-基-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、O-(1,2-二氢-2-氧代-1-吡啶基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(在有或无1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯-(1,5,5)存在下)或与O-(3,4-二氢-4-氧代-1,2,3-苯并三唑啉-3-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐反应就地实现。最后，羧酸的磷酸酐可通过下述反应就地制备：在磺酸酐如4-甲苯磺酸酐存在下，使烷基磷酰胺如六甲基磷酰三胺与盐如四氟硼酸盐(例如四氟硼酸钠)或与六甲基磷酰酰三胺的其它衍生物如苯并三唑-1-基氧基-三(二甲氨基)磷鎓六氟化物反应，反应优选在有降低外消旋作用的添加剂如N-羟基苯并三唑存在下进行。如果需要，可加入有机碱，优选叔胺，例如三-低级烷基胺，特别是乙基二异丙基胺或更特别是三乙胺，和/或杂环碱，例如4-二甲氨基吡啶或者更优选N-甲基吗啉或吡啶。缩合反应优选在惰性、非质子性且优选无水的溶剂或溶剂混合物中进行，例如，在羧酰胺(例如甲酰胺或二甲基甲酰胺)、卤代烃(例如二氯甲烷、四氯化碳或氯苯)、酮类(例如丙酮)、环状醚类(例如四氢呋喃或二噁烷)、酯类(例如乙酸乙酯)或腈类(例如乙腈)或它们的混合物中进行，如果合适的话，反应可以在低温或高温下进行，例如大约-40℃至+100℃，优选-10℃至+70℃；当使用芳基磺酰基酯时还可以在大约+100℃至+200℃，尤其是10-30℃温度下进行，并且如果合适的话，此反应是在惰性气氛如氮气或氩气氛中进行。还可以使用水性(例如醇类)溶剂，如乙醇，或芳族溶剂如苯或甲苯。
式Ⅰ化合物中的硝基基团Z可通过下述方式还原为氨基：例如，用金属还原或通过选择性氢化；例如通过与镁/硫酸铵在水/醇混合物，如甲醇/水中于高温，例如30-60℃下反应(参见《合成通讯》(Svnth.Commun.)25(2),4025-4028(1995))；通过在酰胺如二甲基甲酰胺中于低于室温的温度下(例如大约0℃)与锌/氢硼化物反应；通过与1,1’-二辛基-4,4’-联吡啶鎓二溴化物/连四硫酸纳/碳酸钾在水/卤代烃混合物，例如水/二氯甲烷混合物中于高温，例如25-35℃下反应<参见《四面体通讯》,34(46),7445-7446(1993)>；与Amberlyte IRA-400离子交换剂(氯离子型)上的硼氢化钠在醇如甲醇/水中于0-40℃的优选温度下反应(参见《合成通讯》,19(5/6),805-811(1989))；与硼氢化钾在卤代烃/醇混合物(例如二氯甲烷/甲醇)中于10-35℃的优选温度下反应(参见《合成通讯》,19(17),3047-3050(1989))；与硼氢化钠在二噁烷中反应；与硼烷在四氢呋喃中反应；在Pd/C以及甲酸铵存在下，于0-35℃的优选温度下在醇中进行氢化(参见《四面体通讯》,25(32),3415-3418(1989))；与四氯化钛/氢化铝锂或四氯化钛/镁在醚如四氢呋喃中反应(参见《比利时化学学会学报》(Bull.Chem.Soc.Belg.)97(1),51-53(1988))；或与氯化铁氨/水在高温，优选回流温度下反应(《合成通讯》,22,3189-3195(1992))。
在其中G为酰氧基取代的低级烷基且其它基团如式Ⅰ定义的式Ⅰ化合物中，酰基可通过水解除去，从而获得其中G为羟基取代的低级亚烷基的相应式Ⅰ化合物。水解优选在常规条件下进行，例如在酸或碱如HCl或NaOH存在下，在水溶液或在适当溶剂或溶剂混合物中进行。
由其中G为酰氧基取代的低级烷基的式Ⅰ化合物开始，还可以制备其中G为低级亚烷基的式Ⅰ化合物。该反应优选在常规溶剂或溶剂混合物中以催化氢化方式进行(在适当催化剂存在下使用氢)。通用方法的条件
本文叙及的所有方法步骤均可在本领域已知的反应条件下(优选在这些具体描述的条件下)进行，在没有或通常是在有溶剂或稀释剂(优选对所用试剂呈惰性并可溶解它们的溶剂或稀释剂)存在下；在没有或有催化剂、缩合剂或中和剂，例如离子交换剂，典型的是阳离子交换剂<如H+型>存在下，根据反应的类型和/或反应物的性质在低温、常温或高温下，例如大约-100℃至大约190℃，优选在约-80℃至大约150℃，例如在-80℃至-60℃、室温、在-20℃至40℃、或所用溶剂的沸点的温度下；在大气压或在封闭容器中，合适的话在加压下；和/或在惰性气氛，例如在氮气或氨气氛下进行。
如果原料和中间体化合物中存在成盐基团，则它们可以盐形式存在。在这类化合物的反应过程中，也可以使用盐，前提是它们不能干扰反应。
在反应的各阶段中，所生成的异构体混合物都可分离为单一异构体，如非对映体或对映体，或分离形成所希望的异构体混合物(如外消旋体或非对映体混合物)，例如采用“附加方法步骤”中所述的类似方法。
在某些情况下，例如在氢化情况下，可实现立体选择性反应，从而能够更加容易地获得例如单一异构体。
除非本发明方法中另有说明，所能选择的适合具体反应的溶剂包括，例如水；酯类，如低级链烷酸的低级烷基酯，例如乙酸乙酯；醚类，如脂族醚(例如乙醚)，或环状醚，例如四氢呋喃；液体芳烃，如苯或甲苯；醇类，如甲醇、乙醇或1-或2-丙醇；腈类，如乙腈；卤代烃，如二氯甲烷；酰胺，如二甲基甲酰胺，碱类，如含氮杂环碱，例如吡啶；羧酸类，如低级链烷羧酸，例如乙酸；羧酸酐，如低级链烷羧酸酐，例如乙酸酐；环状、直链或支链烃类，如环己烷，己烷或异戊烷，或这些溶剂的混合物，例如水溶液。这些溶剂混合物还可用于例如通过色谱或分配进行的后处理中。
本发明还涉及这样一些方法形式，即任何阶段所获得的可作为中间体的化合物都可用作原料并进行剩余步骤，或在任意阶段终止反应过程，或在反应条件下形成原料，或使用反应性衍生物或盐形式的所述原料，或在本发明方法的条件下生产通过本发明的方法可获得的化合物并就地进一步处理所得化合物。优选使用这些原料，即利用它们能制得上文所优选的、特别优选的、更特别优选的和/或最特别优选的化合物。
式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)的制备优选按照实施例部分所述的类似方法和类似方法步骤进行。
式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)，包括它们的盐，还可以水合物的形式获得，或者它们的结晶也可包含例如结晶用的溶剂(以溶剂化物形式存在)。药物组合物、方法和应用
本发明还涉及包含式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)作为活性成分的药物组合物，它们特别适用于治疗本文开头所述的疾病。对于温血动物，尤其是人的给药而言，特别优选适于经肠给药(如经鼻、颊、直肠)或尤其是口服给药和非肠道给药(如静脉内、肌内或皮下给药)的组合物是特别优选的。所述组合物可仅包含活性成分本身，但优选还含有可药用载体。活性成分的剂量取决于所治疾病、患者种类、年龄、体重和患者健康状况、个体药代动力学数据以及给药方式。
本发明还涉及在预防性或尤其是治疗性治疗人或动物体的方法中使用的药物组合物、制备这类组合物的方法(尤其是治疗肿瘤用的组合物形式)以及治疗上述疾病，特别是肿瘤疾病，更特别的是上文所述那些肿瘤的方法。
本发明还涉及制备包含式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)作为活性组分(活性成分)的药物组合物的方法、以及式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)在制备这种药物组合物方面的应用。
优选的药物组合物包含抑制血管生成或VEGF受体酪氨酸激酶有效量的式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)或其可药用盐(如果存在成盐基团的话)与至少一种可药用载体，所述组合物适于给药于患有对血管生成或VEGF-受体酪氨酸激酶的抑制作用有反应的疾病如牛皮癣或尤其是肿瘤疾病的温血动物，尤其是人或有商业用途的哺乳动物。
用于预防或尤其是治疗需此治疗、尤其是患有此类疾病的温血动物、尤其是人类或有商业价值的哺乳动物的肿瘤和其它增殖性疾病并且含有有效预防或尤其是治疗所述疾病的量的式Ⅰ新化合物(或其N-氧化物)作为活性成分的药物组合物也是优选的。
药物组合物包含大约1％-大约95％的活性成分，单剂量制剂形式中优选含有大约20％-大约90％的活性成分，非单剂量制剂形式中优选含有大约5％-大约20％的活性成分。单位制剂形式例如为糖锭剂、片剂、安瓿、小瓶、栓剂或胶囊剂。其它剂型为例如软膏剂、霜剂、糊剂、泡沫剂、酊剂、唇膏、滴剂、喷雾剂、分散液等。其实例是包含大约0.05g-大约1.0g活性成分的胶囊剂。
本发明的药物组合物按照本领域公知的方式制备，例如利用常规的混合、制粒、糖膏化、溶解或冻干方法制备。
优选使用活性成分的溶液，还有悬浮液或分散液，尤其是等渗水溶液、分散液或悬浮液，它们可以在临用前用例如仅含活性成分或含有活性成分与载体(如甘露醇)的冻干组合物制备。药物组合物可以是灭菌的和/或含有赋形剂，例如防腐剂、稳定剂、湿润剂和/或乳化剂、增溶剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂，并可以本领域公知的方式制备，例如采用常规的溶解和冻干方法。所述溶液或悬浮液可含有增粘剂，例如羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮或明胶，或者还可以含有增溶剂，例如吐温80[聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯；ICI Americas,Inc(USA)的商标]。
油悬液包含常用于注射目的的植物性、合成或半合成油作为油基组分。为此，可特别提及液体脂肪酸酯，它们含有具8-22个(尤其是12-22个)碳原子的长链脂肪酸作为酸成分，例如月桂酸、十三烷酸、肉桂酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、花生酸、二十二烷酸或相应的不饱和酸，例如油酸、反油酸、芥酸、巴西烯酸或亚油酸，并任选地加入抗氧剂，如维生素E、β一胡萝卜素或3,5-二叔丁基-4-羟基甲苯。这类脂肪酸酯的醇组分至多含有6个碳原子，并且可以是一元或多元醇，比如一元、二元或三元醇，如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇或它们的异构体，但优选乙二醇和甘油。因此可提及的脂肪酸酯实例有：油酸乙酯，肉豆蔻酸异丙酯，棕榈酸异丙酯，“Labrafil M2375”(聚氧乙烯甘油三油酸酯，Gattefosse，巴黎),“Labrafil M 1944CS”(不饱和的聚乙二醇化甘油酯，通过杏仁油的醇解制备，组成为甘油酯和聚乙二醇酯，Gattefosse，法国),“Labrasol”(饱和的聚乙二醇化甘油酯，通过醇解TCM制备，其组成为甘油酯和聚乙二醇酯，Gattefosse．法国)和/或“Miglyol 812”(具有C8-C12链长的饱和脂肪酸的甘油酯，德国Huls AG生产)，但优选植物油，如棉籽油、杏仁油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、大豆油，且更优选花生油。
注射给药组合物的制备以常规方法在无菌条件下进行，并将它们填充到例如安瓿或小瓶内，然后密封容器。
口服药物组合物可通过例如将活性成分与一种或多种固体载体混合，如果需要将所得混合物制粒，并加工这种混合物或颗拉，如果需要，可通过加入其它赋形剂以形成片剂或糖锭剂核芯。
适宜的载体尤其为填充剂，如糖类，例如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇，纤维素制品和/或磷酸钙，例如磷酸三钙或磷酸氢钙；还有粘合剂，如淀粉，例如玉米、小麦、稻米或马铃薯淀粉，甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；和/或(如果需要的话)崩解剂，如上述的淀粉，以及羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、藻酸或其盐，如藻酸钠。其它赋形剂优选为流动性调节剂和润滑剂，例如硅酸、滑石、硬脂酸或其盐，如硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或乙二醇或其衍生物。
糖锭剂核芯可以覆有适当(任选肠溶性)包衣，所述包衣可特别使用含有阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛的浓糖溶液或处于适当有机溶剂或溶剂混合物中的包衣溶液，或者为了制备肠溶衣，可使用适宜的纤维素制品(如乙酸邻苯二甲酸纤维素或邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素)的溶液。例如为区别目的或区分不同剂量的活性成分，可将颜料或色素加到片剂或糖锭剂包衣中。
口服药物组合物还包括硬明胶胶囊和由明胶和增塑剂(如甘油或山梨醇)组成的密封软胶囊。硬明胶胶囊中可包含例如与填充剂(如玉米淀粉)、粘合剂和/或助流剂(如滑石或硬脂酸镁)混合的颗粒形式活性成分，其中还任选含有稳定剂。在软胶囊中，活性成分优选溶在或悬浮在适宜的液态赋形剂，如脂肪油、石蜡油或液体聚乙二醇或乙二醇或丙二酵的脂肪酸酯中，同样也可加入稳定剂和去污剂，如聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯类。
适合直肠给药的药物组合物例如为由活性成分和栓剂基质组成的栓剂。合适的栓剂基质是，例如，天然或合成甘油三酯、链烷烃、聚乙二醇或高级链烷醇。
对于非肠道给药，其合适形式有水溶性(如水溶性盐形式)活性成分的水溶液，或含有增粘物质(如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇和/或葡聚糖)以及稳定剂(如果需要的话)的水性注射悬浮液。活性成分(任选与赋形剂一起)也可以是冻干物形式，它们可以在非肠道给药前通过加入合适溶剂而制成溶液。
非肠道给药用的溶液也可用作输注液。
优选的防腐剂有，例如，抗氧剂(如抗坏血酸)或杀微生物剂(如山梨酸或苯甲酸)。
本发明还涉及治疗上述病症方法，所述病症特别是对VEGF-受体酪氨酸激酶的抑制作用或血管生成的抑制作用有应答反应的疾病，尤其是相应的肿瘤疾病或还可以是牛皮癣。式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)可以以其原有形式或以药物组合物的形式对需此治疗的温血动物，尤其是人类优选以对抗所述疾病有效的量预防或治疗性地给药，本发明化合物优选以药物组合物形式使用。对于体重约70kg的患者而言，所施用的日剂量为大约0.1g-大约5g(优选大约0.5g-大约2g)本发明化合物。
本发明还特别涉及式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)或其可药用盐(尤其是所述的优选式Ⅰ化合物或其可药用盐)本身或以与至少一种可药用载体形成的药剂形式在治疗和预防一种或多种上疾病方面的应用，特别是当所述疾病对对血管生成的抑制作用或对VEGF-受体酶氨酸激酶的抑制作用作出反应时，所述疾病尤指肿瘤疾病或牛皮癣。
本发明还特别涉及式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)或其可药用盐(尤其是所述的优选式Ⅰ化合物或其可药用盐)本身或以与至少一种可药用载体形成的药物制剂形式在治疗和预防一种或多种上述疾病方面的用途(特别是当所述疾病对对血管生成的抑制作用或对VEGF-受体酶氨酸激酶的抑制作用作出反应时)，所述疾病优选是对血管生成的抑制作用或对VEGF受体酪氨酸激酶的抑制作用作出反应的疾病，尤其是肿瘤疾病或者还可以为牛皮癣。
本发明还特别涉及式Ⅰ化合物(或其N-氧化物)或其可药用盐(尤其是所述的优选式Ⅰ化合物或其可药用盐)在制备用于治疗和预防一种或多种上述疾病的药物制剂中的用途，所述疾病尤指肿瘤疾病或牛皮癣，特别是对VEGF-受体路氨酸激酶或血管生成的抑制作用作出反应的疾病。
上面描述了各种具体情况下使用的药物制剂(药物)的优选剂量、组成和制备。原料
本发明还涉及新的原料和/或中间体以及它们的制备方法。优选所用原料和选择的反应条件能够获得优选化合物。
式Ⅱ和Ⅲ原料是已知的，它们可用本领域已知的方法制备或从市场购得；特别是，它们可采用实施例中所的类似方法制得。
在原料的制备过程中，如果需要，那些不参与反应的任一官能团应加以保护。优选的保护基、它们的引入和除去记载于方法a)或实施例中。当所述原料和中间体中存在成盐基团并且使用这种盐也能进行反应时，还可以采用其盐代替反应进行反应。因此，本文中凡是叙及原料的地方都还包括它们的盐，只要它们的使用是适宜并且可行的。
其中G是-CH2-O-,-CH2-S-,-CH2-NH-，氧杂，硫杂或亚氨基，并且其它符号如式Ⅰ所定义的式Ⅱ合物可制备如下：例如，使式Ⅳ化合物：其中L*为离核离去基团，尤其是卤素(如溴)，且m和Z以及以波折线表示的键如式Ⅰ化合物所定义(尤其是m=0，即Z不存在-其中L*为溴的相应Ⅳ化合物购自SPECS＆BIOSPECS,Rijskwijk,Holland),与式Ⅴ化合物反应：其中G为-CH2-O-,-CH2-S-或-CH2-NH-，或为氧杂，硫杂或亚氨基，并且A,B,D,E,Q和r如式Ⅰ化合物所定义，上述反应优选在方法a)中式Ⅱ化合物与式Ⅲ化合物反应所述的类似条件下进行，或者在含pd0的钯配合物催化剂例如四(三苯膦基)钯配合物、钯(0)-P(邻-甲苯基)3配合物、具有螯合双(膦)的钯(0)配合物(例如参见：有机化合杂志(J.Org.Chem.)61,7240-7251(1996))等存在下(优选pd0)，并在碱金属碳酸盐如碳酸钾存在下，在适当溶剂(如甲苯)于高温(优选回流)下进行。随后得到式Ⅱ*化合物：其中m、Z和以波折线表示的键，以及A,B,D,E,Q和r如式Ⅰ化合物定义，并且其中的G为-CH2-O-,-CH2-S-或-CH2-NH-，或为氧杂，硫杂或亚氨基。
通过使用相应的酸酐或下文中式Ⅻ化合物转化为式Ⅱ化合物所述的不同试剂引入式Ⅱ中所定义的离核基团L，例如，为引入L=Cl，需使用三氯氧化磷(POCl3)，可由上面所得化合物制得相应的式Ⅱ化合物。
式Ⅳ和Ⅴ的原料是已知的，它们可采用本领域公知的方法制得或从市场上购得；特别是它们可用与实施例所述类似的方法制得。
其中G是亚甲基并且其它符号如式Ⅰ化合物所定义的式Ⅱ化合物可通过下述反应制备：例如，使式Ⅵ内酯：其中Z和m如式Ⅰ化合物定义，与碱金属氰化物(尤其是氰化钾)在高温(例如100-200℃)下反应(参见Org.Synthesis Coll.Vol.3,174)，产生式Ⅶ的氰甲基苯甲酸：其中的各基团如式Ⅵ所定义；然后通过例如在适当溶剂(例如卤代低级烷烃，像二氯甲烷)中向式Ⅶ化合物内加入适宜的二-低级烷基甲酰胺二-低级烷基乙酰基(di-lower alkylformamide di-lower alkylacetyl)如二甲基甲酰胺二甲基乙酰基，并优选在0-60℃(例如大约室温)的温度下搅拌所述混合物以完成反应，从而将式Ⅶ化合物转化为低级烷基酯。结果获得相应的式Ⅷ低级烷基酯：其中Alk为低级烷基，尤其是甲基，而其它基团如式Ⅵ所定义。随后在醇(如甲醇)及相应的醇盐(如碱金属醇盐，例如甲醇钠)存在下，在0℃-回流温度的优选温度下(优选约5-30℃)，使上述酯在适当溶剂，例如醚(如四氢呋喃)或酯(如丙酸乙酯)或其混合物中与式Ⅸ的醛反应：其中A,B,D,E,Q和r如式Ⅰ化合物中定义，产生式Ⅹ化合物：其中基团A,B,D,E,Q和Z以及指数r和m如式Ⅰ化合物定义；进而将该化合物转化为相应的式Ⅺ的低级烷基酯(反应条件与式Ⅷ低级烷基酯的制备类似)：其中Alk为低级烷基，尤其是甲基，并且其它基团如式Ⅹ定义。接着在适当催化剂，尤其是骨架催化剂如阮内钴或特别是阮氏镍存在下，在适当溶剂如醚(例如四氢呋喃)或醇(例如甲醇)或其混合物中，于10-80℃的优选温度和0.5-100巴压力下(特别是在大约常压下)进行氢化，得式Ⅻ异喹啉化合物：其中基团A,B,D,E,Q和Z以及指数r和m如式Ⅰ化合物定义。
随后在无溶剂存在或在适当溶剂例如乙腈中，在无或优选有相应的酸例如氢卤酸(如氢氯酸)存在下，在40℃-回流温度的优选温度下(优选在大约40-60℃下)，利用用来引入离核离去基团的适当试剂，例如磷酰卤或五卤化磷，尤其是三氯氧化磷(POCl3)或五氯化磷，将上述式Ⅱ化合物转化为相应的式Ⅱ化合物或其盐。
同样，可以使用与式Ⅸ类似的化合物(但其中的-CHO-基团被相应的低级链烷醛基团置换)经由与式Ⅹ-Ⅻ类似的化合物(只是其中的次甲基基团(式Ⅹ,Ⅺ)或亚甲基基团(式Ⅻ)被相应的低级烷叉基团或低级烷撑基团置换)制备相应的式Ⅱ中G为低级亚烷基的化合物。
其它原料是已知的，它们可采用本领域公知的方法制得或从市场上购得；特别是它们可用实施例中所述的类似方法制得。
实施例：
下列实施例用于说明本发明，而不是对本发明的范围构成限制。
温度以摄氏度测量。除非另有说明，反应均在室温下进行。
HPLC梯度：
grad20-100 20％→100％a)/b)13分钟+5分钟100％a)．
grad5-40 5％→40％a)/b)7.5分钟+7分钟40％a)．
洗脱液a)：乙腈+0.05％TFA；洗脱液b)：水+0.05％TFA．色谱柱(250×4.6mm)，填充有C18-Nucleosil反相材料(5μm平均粒度，十八烷基硅烷共价键合硅胶，Macherey&Nagel,Duren,FRG)。254nm处UV吸收检测。保留时间(tret)以分钟给出。流速1ml/min。
所用的其它短语和缩写含义如下：abs. 绝对(溶剂无水)Anal.calc. 元素分析中元素的计算(理论)含量Anal.found 元素分析中实际测得的元素含量DMSO 二甲亚砜ether 乙醚FAB-MS 快原子轰击质谱found 参见Anal.foundm.p. 熔点brine 氯化钠饱和溶液THF 四氢呋喃(经钠/二苯酮蒸馏)
下列原料由所示生产商提供：
3,5-二甲基苯胺，4-氯苯胺，3-甲基苯胺，3-氯苯胺，苯胺，苄胺，4-甲氧基苯胺，3-甲氧基苯胺，4-氨基-N-乙酰苯胺，(S)-1-苯基乙胺，(R)-1-苯并乙胺，4-三氟甲基苯胺，4-氟苯胺，1,3-苯二胺，甲磺酸，3,4-二氯苯胺，4-溴苯胺：Fluka,Buchs，瑞士。
3-苄氧基苯胺，2-氨基苯酚，4-氨基苯酚：Aldrich,Buchs，瑞士。
3-溴-5-三氟甲基苯胺(Fluorochem.Old Glossop，大不列颠)；4-氯-3-三氟甲基苯胺(Fluka,Buchs，瑞士)。实施例1:1-(3,5-二甲基苯胺基)-4-[(吡啶-4-基)-甲基]-异喹啉(=N-(3,5-二甲基-苯基)-[(4-(吡啶-4-基-甲基)-异喹啉-1-基)-胺]
排除湿气，将100mg(0.825mmol)3,5-二甲基-苯胺溶于4ml乙醇，加入196μl(0.784mmoL)HCL(4N二噁烷溶液)。然后加入200mg(0.785mmol)1-氯-4-[(吡啶-4-基)-甲基]-异喹啉，并于90℃加热此混合物8小时。然后蒸发浓缩，将残留物吸收到4ml水、1ml饱和氨溶液和20mlCH2Cl2之内，分出有机相，用硫酸钠(无水)干燥，进而再次蒸发浓缩。柱层析(SiO2；乙酸乙酯/己烷3∶1)并从乙酸乙酯/己烷结晶，从而获得标题化合物：m.p.156-158℃；1H NMR(DMSO-d6)9.00(s,HN),8.54(d,1H),8.42(d,2H),8.00(s,1H),7.80(d,1H),7.65(m,2H),7.50(s,2H),7.26(d,2H),6.64(s,1H),4.25(s,2H),2.27(s,6H)；FAB-MS:(M+H)+=340；元素分析(C23H21N3·0.1 H2O)C 80.95％,H 6.26％,N12.31％；实测值：C 80.9％,H 6.2％,N 12.4％.原料制备如下：1a) 2-氰甲基-苯甲酸甲酯
微热下,将175g(1.08mol)2-氰甲基苯甲酸(其制备参见：Org.Synthesis,Coll,Vol.3,174)溶于1.7升CH2Cl2；然后在室温下逐滴加入242ml(≈90％,1.6mol)二甲基甲酰胺缩二甲醇，并搅拌38小时以完成反应。反应混合物用2×1.2升饱和NaHCO3溶液及brine洗涤。水相用2份CH2Cl2萃取，进而干燥(硫酸钠)有机相并蒸发浓缩。柱层析(SiO2∶乙酸乙酯/己烷1∶4，以在乙酸乙酯/己烷/CH2Cl2中的形式上柱)获得标题化合物：m.p.49-50℃；1H NMR(DMSO-d6)7.96(d,1H),7.66(t,1H),7.57(d,1H),7.51(t,1H),4.26(s,2H),3.86(s,3H)；元素分析(C10H9NO2)C 68.56％,H 5.18％,N 8.00％；实测值：C 68.5％,H5.1％,N 7.9％.1b) 2-[(1-氰基-2-(吡啶-4-基)-乙烯基)-苯甲酸
排除空气，将127.7ml(1.35 mol)吡啶-4-甲醛(Fluka,Buchs，瑞士)加到215.6g(1.23mol)2-氰甲基-苯甲酸甲酯在1.8升THF中的溶液内。冷却此混合物至8-9℃,20分钟内逐滴加入297ml(1.6mol)5.4M甲醇钠的甲醇溶液，并在10-15℃下搅拌所得混合物1.5小时。然后利用大约350ml 4N HCl调节混合物的pH至6.0，进而5℃搅拌1小时。结晶析出标题化合物，抽滤并用THF/水(2∶1)和THF充分洗涤：m.p.218-219℃；FAB-MS:(M+H)+=251；1H NMR(DMSO-d6)13.4(sb,1H),8.76(d,2H),7.98(d,1H),7.77(d,2H),7.72(t,1H),7.62(m,2H),7.52(s,1H)；元素分析(C15H10N2O2)C 71.99％,H 4.03％,N 11.19％；实测值：C 71.9％,H 4.1％,N 11.1％.1c) 2-[(1-氰基-2-(吡啶-4-基)-乙烯基)-苯甲酸甲酯
排除湿气，将211g(0.843mol)2-[(1-氰基-2-(吡啶-4-基)-乙烯基)-苯甲酸悬浮于3.3升CH2Cl2；室温加入169ml(≈90％,1.1mol)二甲基甲酰胺缩二甲醇(Fluka,Buchs，瑞士)，搅拌22小时以完成反应。然后过滤反应混合物，残留物用CH2Cl2充分洗涤并弃之。通过蒸发浓缩滤液，层析(SiO2；乙酸乙酯)并从乙酸乙酯/己烷结晶，从而得到标题化合物：m.p.102-104℃；FAB-MS:(M+H)+=265；1H NMR(DMSO-d6)8.76(d,2H),7.97(d,1H),7.76(m,3H),7.65(m,2H),7.60(s,1H),3.86(s,3H)；元素分析(C16H12N2O2)C 72.72％,H 4.58％,N 10.60％；实测值：C 72.7％,H 4.8％,N 10.5％．1d) 4-(吡啶-4-基-甲基)-2H-异喹啉-1-酮
在5×40g阮氏镍存在下(以固定间隔分批加入)，在3升THF中40℃氢化163g(617mmol)2-[(1-氰基-2-(吡啶-4-基)-乙烯基)-苯甲酸甲酯90小时。过滤反应混合物，并通过蒸发浓缩滤液，进而从乙腈/乙酸乙酯结晶(→标题化合物)。通过层析(SiO2；乙酸乙酯→丙酮)，可以自母液中进一步获得产物：m.p.189-190℃；FAB-MS:(M+H)+=237；1HNMR(DMSO-d6)11.27(sb,HN),8.45(d,2H),8.23(d,1H),7.65(t,1H),7.48(m,2H),7.27(d,2H),7.18(s,1H),4.05(s,2H)；元素分析(C15H12N2O·0.05 H2O)C 75.96％,H 5.14％,N 11.81％；实测值：C75.8％,H 5.2％,N 11.9％.1e) 1-氯-4-(吡啶-4-基甲基)-异喹啉
排除空气，将32.7g(139mmol)4-(吡啶-4-基-甲基)-2H-异喹啉-1-酮在560ml乙腈中制成浆液，加入69.2ml(277mmol)4N HCl/二噁烷和31.7ml(346mmol)POCl3。50℃搅拌此混合物22小时，然后在冰浴中冷却，并在30分钟内加入128.6g NaHCO3的1.64升水溶液。加料期间，首先形成清亮溶液，继而沉淀出标题化合物，15分钟后，滤出沉淀物并用水及乙醚充分洗涤，然后在60℃下高真空干燥：m.p.119-120℃；FAB-MS:(M+H)+=255；1H NMR(DMSO-d6)8.43(d,2H),8.33(s,1H),8.31(d,1H),8.07(d,1H),7.85(m,2H),7.25(d,2H),4.45(s,2H).
以与实施例1或本文所述方法类似的方式制备下列化合物：原料 式Ⅰ产物*所述元素的元素分析值与计算值之间存在0.4％的偏差。
按照上述方法制备下列化合物：
原料 式Ⅰ产物*所述元素的元素分析值与计算值之间存在0.4％的偏差*化合物16尤其可如下制备：***原料制备如下：111a)5-氯-3-三氟甲基-硝基苯
(亦可参见EP0516297A1)30分钟内，向90g(374mmol)4-氨基-3-氯-5-硝基-三氟甲苯(Maybridge；Tintagel/England)的500ml乙醇棕色溶液内加入56.7ml 96％硫酸(反应放热)。加热至75℃后，在1小时内分批加入64.53g(935mmol)亚硝酸钠(有气体逸出)。75℃搅拌混合物2.5小时，然后冷却至室温。将反应混合物倒入1.5升冰水内，用乙醚萃取四次。有机相用0.1NHCl、饱和NaHCO3溶液及brine洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发浓缩，从而得到一棕色油状物。柱层析(SiO2；己烷)得油状形式标题化合物：1H-NMR(DMSO-d6)8.62(m,1H),8.46(m,2H),MS 225(M)+,179(M-NO2)+.111b) 5-氨基-3-氯-三氟甲苯
在10.17g阮氏镍存在下，在1升甲醇中氢化92g(0.408mol)5-氯-3-三氟甲基-硝基苯。反应混合物通过硅藻土/活性炭过滤，并用甲醇洗涤残渣。蒸发浓缩滤液，获得油状标题化合物：1H-NMR(DMSO-d6)6.80(m,3H),5.92(s,H2N)；FAB-MS(M+H)+=196.115a) 4-碘-3-三氟甲基-硝基苯
在保护气体存在下，将20g(97mmol)2-氨基-5-硝基三氟甲苯(Fluka；Buchs，瑞士)置于250ml H2SO4/H2O 1∶1内，冷却至0℃，并在此温度下加入6.69g(97mmol)亚硝酸钠的39ml水溶液。在冰浴中搅拌2小时后，分批加入36.94g(194mmol)CuI，随后形成亮黄色悬浮液。30分钟后，缓慢加热混合物至80℃(有大量气体逸出！)，并在80℃下搅拌1小时。然后将反应混合物倒入1升冰水内，过滤得到芥黄结晶。将它们用2×150ml甲醇萃取，并且每次都进行过滤。蒸发浓缩滤液，柱层析(SiO2；甲苯)并以甲苯结晶，从而得标题化合物：1HNMR(DMSO-d6)8.45(d,J=8.6 Hz,1H),8.36(d,J=2.7Hz,1H),8.16(dd,J=8.6/2.7 Hz,1H)；FAB-MS:(M)+=317；元素分析(C7H3NO2F3I)C26.52％,H 0.95％,N 4.42％,I 40.03％；实测值：C 26.53％,H 0.98％,N 4.50％,I 39.94％.115b) 3-氨基-6-碘代三氟甲苯
在1.7g阮氏镍存在下，在170ml甲醇中氢化8.6g(27mmol)4-碘代-3-三氟甲基-硝基苯。然后通过硅藻土过滤反应混合物。蒸发浓缩滤液得到油状标题化合物，放置后缓慢结晶：1H-NMR(CDCl3)7.63(d,1H),6.98(d,1H),6.54(dd,1H),5.75(s,H2N)；FAB-MS(M+H)+=288.
类似地，按照上述方法之一可制得下列式Ⅰ化合物：
类似地，按照上述方法制备下述化合物：实施例131:1-(4-氯-苯胺基)-4-(4-吡啶基-甲基)-5,6,7,8-四氢-异喹啉实施例132:1-(3-氯苄基氨基)-4-[(吡啶-4-基)-甲基]-异喹啉
排除湿气，在150℃下搅拌1.6ml(13.1mmol)3-氯苄胺与800mg(3.14mmol)1-氯-4-(吡啶-4-基甲基)-异喹啉(实施例1e)2小时。然后将此混合物悬浮在乙酸乙酯内，加入1ml浓氨水溶液，用水和brine洗涤，进而干燥(Na2SO4)有机相并通过蒸发浓缩。柱层析(SiO2；乙酸乙酯)得标题化合物：m.p.141-142℃；1H NMR(DMSO-d6)8.39(d,2H),8.31(d,1H),8.03(t,HN),7.82(s,1H),7.69(d,1H),7.61(t,1H),7.50(t,1H),7.40(s,1H),7.33(m,2H),7.26(m,1H),7.20(d,2H),4.73(d,2H),4.14(s,2H)；FAB-MS:(M+H)+=360；元素分析(C22H18N3Cl)C 73.43％,H 5.04％,N 11.68％,Cl 9.85％；实测值：C 73.2％,H 5.1％,N 11.6％,Cl 9.9％.
以与实施例132或本文所述方法类似的方式制备下列化合物：原料 式Ⅰ产物实施例141：抗Flt-1 VEGF受体酪氨酸激酶的活性试验
如上所述，使用Flt-1 VEGF受体酪氨酸激酶进行试验。下面给出了精确计算得到的IC50值。
实施例的标题化合物 IC50(μM)
1 0.802
2 0.346
3 ＞1
4 ＞1
5 0.344
实施例142：软胶囊剂
如下所述制备5000粒软明胶胶囊，每粒含0.05g前述实施例提及的式Ⅰ化合物之一作为活性成分：组成：活性成分 250gLauroglykol 2升
制备方法：将粉状活性成分悬浮于Lauroglykol(丙二醇月桂酸酯，Gattefosse S.A.,Saint Priest，法国)，并在湿磨机内研磨成大约1-3μm粒度，然后利用胶囊填充机将每份0.419g的混合物填充到软明胶胶囊内。