糖尿病是发展中国家面临的最严重的卫生保健问题之一。一些用于2 型糖尿病(T2D)的成功的可商业获得的口服治疗法被认为通过调节PPARγ 受体发挥作用。
这些药物的施用伴有不希望的有害作用，所述有害作用有时包括低血 糖、肝损伤、胃肠疾病、体重增加或其他可能与PPARγ活性有关的不希 望的作用。需要提供更合乎需要的安全特性的用于控制T2D的新的治疗选 择以便有效治疗或预防更多的患者的糖尿病。具体而言，尤其需要基于新 机制的、可最小化或避免与PPARγ激活相关的作用的治疗方法。
GPR40是G蛋白偶联受体，据报道其在啮齿动物胰岛β细胞、胰岛 素瘤细胞系和人类胰岛中以高水平优势表达。该受体通过中链脂肪酸和长 链脂肪酸激活，因此该受体还被称为FFAR1(游离脂肪酸受体1)。参见， Briscoe CP等人，孤儿G蛋白偶联受体GPR40通过中链脂肪酸和长链脂 肪酸激活(The orphan G protein-coupled receptor GPR40 is activated by medium and long chain fatty acids)，Journal Biological Chemistry 278： 11303-11311，2003。胰岛素分泌的葡萄糖依赖性是激活GPR40的一个重 要特征，使得该受体成为开发具有所需要的安全特性的用于治疗T2D的有 效的治疗法的极好的靶点。具有有效性和与已有的治疗法诸如胰岛素和磺 脲类相比更合乎需要的安全特性的此类化合物会尤其合乎需要。
最近公开的US专利申请US 2009/0170908A1(“’908”)，概括地公开了 具有烃螺基团特征的化合物，且申明具有作为G蛋白偶联受体40 (“GPR-40”)调节剂的活性。然而，‘908公开物没有提及针对PPAR γ的选 择性。此外，‘908公开物的化合物为要求在螺官能团中不存在杂原子的烃 螺基团的化合物。相反，许多的本发明要求的螺哌啶化合物提供了所需要 的对GPR40的选择性激活而没有可检测出的PPAR活性。
本发明的化合物为强效的GPR-40激活剂。本发明提供了通过独特的 (与可商业获得的治疗法相比)药理学机制发挥作用的所需要的新治疗选 择，且进一步提供了与PPARγ相比选择性激活GPR-40的化合物。本发 明的化合物作为选择性的GPR-4激活剂的药理学特性可以特别合乎需要 地用于治疗T2D。此外，通过避免与PPARγ调节相关的作用，该选择性 的GPR-40调节在用于治疗T2D时可提供特别合乎需要的安全特性。
本发明涉及下式的化合物或其可药用盐：
其中：
R1选自H、F和Cl；
R2选自H、C1-3烷基、CF3、OCH3、F和Cl；
R4和R4a各自独立地选自H、OCH3、C1-3烷基、CF3和F，其中R4和R4a中的至少一个是H；
R5是H或C≡CCH3；
X选自-CH(R3)CH2-、-C(R3)＝CH-、-N(R7)CH2-和-C(O)CH2-；
R3选自H和C1-3烷基；且
R7选自H、C1-3烷基和苯基。
本发明提供了下式的中间体化合物或其盐：
其中：
R1选自H、F和Cl；
R2选自H、C1-3烷基、CF3、OCH3、F和Cl；
R4和R4a各自独立地选自H、OCH3、C1-3烷基、CF3和F，其中R4和R4a中的至少一个是H；
R5是H或C≡CCH3；
R6选自C1-3烷基；
X选自-CH(R3)CH2-、-C(R3)＝CH-、-N(R7)CH2-和-C(O)CH2-；
R3选自H和C1-3烷基；且
R7选自H、C1-3烷基、C(O)OC1-4烷基和苯基。
其中的R6选自C1-C3烷基的式II化合物可在所述螺哌啶化合物的合 成中用作中间体，。
本发明另一个实施方案提供了本发明要求的化合物或其可药用盐在制 备药物中的应用。本发明的另一个实施方案是其中药物用于治疗糖尿病的 实施方案。本发明的进一步的实施方案是用作治疗法的如本文所要求的化 合物或其可药用盐的应用。本发明进一步的实施方案是用于治疗糖尿病的 本发明所要求的化合物或其可药用盐。此外，本发明涉及用作药物的本发 明所要求的化合物。
本发明的进一步的实施方案提供了在哺乳动物中治疗糖尿病的方法， 所述方法包括向哺乳动物施用本发明所要求的化合物或其可药用盐的步 骤。
在另一个实施方案中，本发明还涉及包含本发明要求的化合物或其可 药用盐以及可药用载体的药物组合物。进一步的实施方案是本发明的药物 组合物，其还包含第二种药用活性剂。
优选的是本发明的化合物选择性激活GPR-40。实施例的化合物对 PPAR活性的相关IC50通常超过10uM，证实这些化合物不激活PPAR 同种型。
可优选实施例1的化合物，(3S)-3-(4-{[4-(1′H-螺[茚-1，4′-哌啶]-1′-基甲 基)苄基]氧基}苯基)己-4-炔酸或其盐。
可优选实施例24的化合物，(3S)-3-[4-({4-[(1-甲基-1，2，-二氢-1′H-螺[吲 哚-3，4′-哌啶]-1′-基)甲基]苄基}氧基)苯基]己-4-炔酸或其盐。
当R5是C≡CCH3时，式I化合物具有手性中心。本发明涉及外消旋 化合物以及单个异构形式。当R5是C≡CCH3时，通常优选S异构体。
可以优选其中R5是C≡CCH3的式I化合物。可以优选其中R5是H且 R1是F或Cl的化合物。可优选其中R5是H且R1是F的化合物。可以优 选其中R5是C≡CCH3和R1是H的化合物。可以优选其中R1是H的化合 物。优选其中X选自-C(R3)＝CH-、-CH(R3)CH2-和-N(R7)CH2-的化合物。 可以优选其中X是-C(R3)＝CH-的化合物。优选其中R3选自H和CH3的化 合物。可优选其中R3是H的化合物。优选其中R4a是H的化合物。优选 其中R2选自H、OCH3、CH3和CF3的化合物。可以优选其中R2是H的 化合物。优选其中R4选自H、OCH3、CH3、CF3和F的化合物。可以优 选其中R4选自OCH3、CH3、CF3和F的化合物。可以优选其中R4是H 的化合物。可以优选其中R4a选自H和Cl的化合物。可以优选其中R4和 R4a各自是H的化合物。可以优选其中X是-N(R7)CH2-的化合物。优选其 中R7选自H和C1-C3烷基的化合物。可以尤其优选其中R7是CH3的化 合物。
可以优选其中R5是C≡CCH3的式II化合物。
可以优选其中R1选自F和Cl且R5是H的式II化合物。
可优选式I化合物或其可药用盐，其中：
R1是H；R4和R4a各自是H；R5是C≡CCH3；-X是-C(R3)＝CH-，且 R3是H。
可以优选式I化合物或其可药用盐，其中：
R1是F或Cl；R4和R4a各自是H；R5是H；X是-C(R3)＝CH-。
可以优选式I化合物或其可药用盐，其中：
R1是F或Cl；R4和R4a各自是H；R5是C≡CCH3；X是C(R3)＝CH-。
可以优选式I化合物或其可药用盐，其中：
当R5是H时R1是F或Cl；当R5是C≡CCH3时R1选自H、F和Cl； R4和R4a各自是H；R2是CF3；X是-C(R3)＝CH-，且R3是H。
可以优选式I化合物或其可药用盐，其中：
当R5是H时R1是F或Cl；当R5是C≡CCH3时R1选自H、F和Cl； R4和R4a各自是H；R2是CF3；且X是-CH(R3)CH2-。
可以优选式I化合物或其可药用盐，其中：
当R5是H时R1是F或Cl；当R5是C≡CCH3时R1选自H、F和Cl； R2选自CH3、CF3、OCH3和F；R4是H；R5是H或C≡CCH3；且X是 -N(R7)CH2-。
可以优选可用作中间体的式II化合物或其可药用盐，其中
当R5是H时R1是F或Cl；当R5是C≡CCH3时R1选自H、F和Cl； R2选自CH3、CF3、OCH3、F和Cl；R4选自H、OCH3、CH3、CF3和F； R5是H或C≡CCH3；R6是C1-3烷基；X是-N(R7)CH2-，且R7是C(O)OC4烷基。
可以优选式I化合物或其可药用盐，其中：
当R5是H时R1是F或Cl；当R5是C≡CCH3时R1是H；R2选自CH3、 CF3、OCH3和F；R4和R4a各自是H；R5是H或C≡CCH3；且X是 -N(R7)CH2-。
可以优选式I化合物或其可药用盐，其中：
当R5是H时R1是F或Cl；当R5是C≡CCH3时R1选自H；R2是H； R4选自OCH3、CH3、CF3和F；R5是H或C≡CCH3；且X是-N(R7)CH2-。
可以优选式I化合物或其可药用盐，其中：
当R5是H时R1是F或Cl；当R5是C≡CCH3时R1选自H；R2是H； R4选自H、OCH3、CH3、CF3和F；R5是H或C≡CCH3；X是-N(R7)CH2-； 且R7是CH3。
通常优选其中的R5是C≡CCH3的式I化合物的S-异构体。通常优选 本发明的化合物的S-异构体。
本发明化合物优选被配制为通过多种途径施用的药物组合物。最优选 地，所述组合物用于口服施用。所述药物组合物和制备所述组合物的方法 为本领域所熟知。参见，例如，Remington：药剂学科学与实践(The Science and Practice of Pharmacy)(A.Gennaro等人，编辑，第21版，Mack Publishing Co.，2005)。
“可药用盐”是指被认为可用于临床和/或兽医用途的本发明化合物的 盐。可药用盐和用于制备它们的通用方法论为本领域所熟知。参见，例如， P.Stahl，等人，药用盐手册：性质，选择和应用(Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection and Use)，(VCHA/Wiley-VCH， 2002)；S.M.Berge，等人，药用盐(Pharmaceutical Salts)，Journal of Pharmaceutical Sciences，第66卷，第1期，1977年1月。
术语“可药用载体”意指载体、稀释剂、赋形剂和盐与所述组合物的其 他成分是药学上兼容的。
为了清楚起见，在下列反应流程中某些立体化学中心未指定，且某些 取代基被除去，并且旨在不以任何方式限制这些反应流程的教导。此外， 单一异构体、对映异构体或非对映异构体可以在式I的化合物合成中的任 何适当的点通过诸如手性色谱法的方法来分离。此外，在以下反应流程中 所述的中间体含有许多氮、羟基和酸保护基团。根据特定的反应条件和所 要进行的特定转化，该可变的保护基团在每次出现时可以是相同或不同的。 该保护和脱保护条件是技术人员所熟知的，并且在文献中述及。参见，例 如，Greene和Wuts，有机合成中的保护基团(Protective Groups in Organic Synthesis)，(T.Greene和P.Wuts编撰，第二版1991)。
本文使用的缩写依据Aldrichimica Acta，第17卷，第1期，1984进行定 义。其它的缩写定义如下：“Prep”是指制备例；“Ex”是指实施例；“min” 是指分钟；“ACN”是指乙腈；“ADDP”是指1，1’-(偶氮二甲酰)二哌啶；“boc” 或“t-boc”是指叔丁氧羰基；“DCM”是指二氯甲烷；“Et2O”是指乙醚； “EtOAc”是指乙酸乙酯；“EtOH”是指乙醇；“IPA”是指异丙醇；“MeOH” 是指甲醇；“TFA”是指三氟乙酸；“THF”是指四氢呋喃；“TR”是指保留时 间；“IC50”是指产生对活性剂而言可能产生的最大抑制响应的50％的该活 性剂的浓度；“DMEM”是指达尔伯克改良伊格尔培养基；“DTT”是指二硫 苏糖醇；“F12”是指Ham氏F12培养基；“FBS”是指胎牛血清；“HEK” 是指人胚肾；“PPAR”是指过氧化物酶体增殖物激活受体；“PPRE”是指过 氧化物酶体增殖物响应元件；“RPMI”是指洛斯维公园纪念研究所；“TK” 是指胸苷激酶，“RFU”是指相对荧光单位；和“ESI”是指电喷射离子化。
在以下流程中，除非另外指出，否则所有的取代基如之前所定义。本 领域普通技术人员通常可容易地获得试剂和原料。其它的物质可通过与已 知的结构相似的化合物的合成类似的有机化学和杂环化学的标准技术和下 文的包括任何新的方法的制备例和实施例中描述的方法进行制备。
流程I
式I化合物可以依据流程I中所述的反应进行制备。流程I(步骤1a) 描述了将被取代的苄基溴(1)用适合的被取代的哌啶(3)进行烷基化，在步骤 2中将酯还原后，得到被取代的苄醇(5)。化合物(5)可以在羟基上进一步延 伸，得到式I化合物，或者化合物可以进一步被脱保护，得到式I化合物。 “PG”是用于酸的保护基团诸如酯，也是用于氨基的保护基团诸如氨基甲酸 酯和酰胺。此类保护基团为本领域所熟知和理解。参见，例如上文的Greene 和Wuts，有机合成中的保护基团(Protective Groups in Organic Synthesis)。
式(1)化合物与式(3)化合物在烷基化反应条件下反应(步骤1a)。本领域 的技术人员将认识到有多种方法和试剂用于由苄基溴和胺类的反应所引起 的胺的烷基化。例如，适合的式(1)化合物与式(3)的适合的胺或胺盐诸如三 氟乙酸盐或HCl盐在碱诸如二异丙基乙胺或碳酸铯的存在下进行反应将得 到式(4)化合物。可以如在步骤2中使用还原剂诸如二异丁基氢化铝、氢化 铝锂或硼氢化钠将式4的酯的羰基还原，得到化合物(5)。然后化合物(5) 可以在Mitsunobu反应条件下进一步与式(7)化合物进行烷基化反应，得到 式(I)化合物。Mitsunobu反应条件为本领域所熟知，且涉及使用膦(诸如三 丁基膦、三苯基膦或三乙基膦)和偶氮二甲酰化合物(诸如ADDP)或偶氮二 羧酸酯(诸如偶氮二甲酸二乙酯(DEAD))进行醇(5)与亲核试剂诸如酚(7)的 反应。或者，使用适合的溴化剂诸如三溴化磷将化合物5转化为苄基溴(6， 步骤3)。化合物(6)可以在步骤4b中使用适合的碱诸如碳酸钾与(7)进行烷 基化反应，并将其脱保护(如果需要的话)，得到式I化合物。在另一个变通 的方案中，如在步骤1b中所示可以使用还原剂诸如氢化二异丁基铝将式(1) 化合物还原为溴代苄基羟基(2)，或化合物(2)可商购，将其在碱诸如二异丙 基乙胺或碳酸铯的存在下与式(3，步骤1c)的适合的胺或胺盐进行烷基化反 应，得到化合物(5)，然后如以上所述进行操作，得到式(I)化合物。
在一个任选的步骤中，式(I)化合物的可药用盐可以通过将适合的式(I) 的酸与适合的可药用碱在标准条件下在适合的溶剂中进行反应而形成。此 外，所述盐的形成可以在酯一经水解即同时发生。所述盐的形成为本文领 域所熟知和理解。
流程II
在流程II的步骤1中，将被保护的哌啶-4-甲醛(8)与被取代的苯肼(9) 进行酸催化的成环反应，得到被取代的螺[二氢吲哚-3，4’-哌啶](10)，然后 可以将其烷基化，并脱保护，进一步烷基化，得到式(I)化合物。例如，向 苯肼(9)或被取代的苯肼(9)和适合的酸诸如三氟乙酸中加入氮被保护的-4- 甲酰基-哌啶(8)。在适合的反应时间后，加入还原剂诸如硼氢化钠和醇诸如 甲醇，得到所需的被取代的螺{二氢吲哚-3，4’-被保护的哌啶](10)。在步骤 2中，(10)的二氢吲哚氮可以在适合的酸诸如乙酸和醇诸如甲醇中、使用适 合的醛和适合的还原剂诸如氰基硼氢化钠通过还原性烷基化反应被烷基 化。接着进行脱保护，可以分离出化合物(11)。或者，可以用保护基团诸 如boc(使用二碳酸二叔丁酯)保护二氢吲哚胺(10)，或在标准条件下使用烷 基化剂诸如溴苯和适合的碱诸如碳酸铯可以烷基化所述二氢吲哚胺。接着 进行哌啶氮脱保护，可以分离出化合物(11)。可以在本领域熟知的标准条 件诸如氢化或酸性条件下除去哌啶氮上的保护基团，得到化合物(11)。然 后在步骤3中，可以使用如上文所述的(1)将化合物(11)烷基化，得到化合 物(12)，并将其如之前在流程I(步骤1a和2)中所述那样在步骤4中进行还 原，得到化合物(5’)。然后可以如对流程I所述那样(与化合物(5)基本相同) 对化合物(5’)进行操作，得到式(I)化合物。
流程III
在流程III中，在步骤1中，使用还原剂诸如DIBAL-H将被取代的苯 甲酸在本领域熟知的条件下还原，得到化合物(14)。在步骤2中，使用碱 诸如咪唑和叔丁基氯二甲基硅烷(tert-butylchlorodimethylsilane)，用保护基 团诸如叔丁基-二甲基硅烷，可以对羟基化合物(14)进行保护，得到(15)。 在步骤3中，使用碱诸如碳酸钾，用化合物(7)可以将化合物(15)烷基化， 并将其脱保护，得到化合物(16)。在步骤4中，使用溴化条件诸如三溴化 磷可以将化合物(16)的羟基转化为溴化物，得到化合物(17)。然后在本领域 熟知的条件下，使用碱诸如碳酸铯或N，N-二异丙基乙胺，用化合物(3，流 程I)可以将化合物(17)烷基化，并将其脱保护，得到式(I)化合物。
流程IV
或者，如流程IV中所示，使用碱诸如碳酸铯，用化合物(7)可以将1，4- 二(溴甲基)苯(18)单烷基化，得到化合物(17)。然后在本领域熟知的条件下， 使用碱诸如碳酸铯或N，N-二异丙基乙胺，用化合物(3，流程I)可以将化合 物(17)烷基化，并将其脱保护，得到式(I)化合物。
流程V
有多种本领域所熟知的构建式(I)化合物的组件的方法。如在流程V中 所示，一个实例是在步骤1a中，例如使用麦德鲁姆(Meldrum)酸(2，2-二甲 基-1，3-二烷-4，6-二酮)(20)在克内文纳格尔(Knoevenagel)缩合反应中对 取代的苯甲醛(19)的醛基团进行保护，得到(21)。醛类可以商购或通过本领 域熟知的标准方法制备。苯甲醛(19)可以用羟基取代，或该羟基可以通过 本领域熟知的保护基团进行保护。然后可以使用典型的格氏试剂诸如1-丙 炔基溴化镁完成格氏反应，得到(22，步骤2a)。使用碱诸如吡啶-水对麦德 鲁姆酸中间体(22)脱保护，并进行酸后处理，得到化合物(23，步骤3a)，即 羧酸。可以使用三溴化硼将被保护的羟基脱保护，并可以对该酸进行保护， 当R5是C≡CCH3时得到(7”，步骤4a)。应该注意到可以在该方法中的多 个步骤诸如在步骤3a完成手性分离。然后可以如流程I那样(与化合物(7) 基本相同)使用化合物(7”)，得到式(I)化合物。
或者，羟基被保护的苯甲醛(19)可以与盐诸如膦酰基乙酸三乙酯 (triethyl phosphoacetate)和碱诸如氢化钠反应以形成魏悌希(Wittig)试剂， 从而得到乙基被保护的丙烯酸酯(24，步骤1b)。在步骤2b中，可以在氢化 条件下使用通常的催化剂诸如10％Pd/C和氢气将双键还原，随后使用三 溴化硼对羟基脱保护，得到化合物(7’)。然后可以如流程I那样(与化合物(7) 基本相同)使用化合物(7”)，得到式(I)化合物。
制备例和实施例
以下制备例和实施例进一步阐述本发明，并代表了式(I)化合物的典型 合成。通常通过IUPACNAME ACDLABS和Symyx Draw 3.2提供本发明 化合物的名称。
制备例1
螺[二氢吲哚-3，4′-哌啶]-1′-甲酸苄基酯
将苯肼(1.29g，12.0mmol)和三氟乙酸(3.0mL)在甲苯∶乙腈的49∶1的 溶液(50mL)中的溶液在35℃加热。将4-甲酰基-哌啶-1-甲酸苄基酯(2.7g， 10.91mmol)溶于甲苯∶乙腈的49∶1的溶液(10mL)中，并滴加至所述混合液 中(WO2005046682)。将该混合液在35℃搅拌过夜。将得到的溶液冷却至 0℃，并加入甲醇(5mL)。向该溶液中分批加入NaBH4(0.619g，16.38 mmol)，并将该混合液搅拌45分钟。将该反应混合液用NH4OH水溶液(6％， 25mL)和盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，并蒸发至干燥，得到黄色固体。 将该粗制固体从EtOAc中再结晶，得到黄色固体(1.25g，第一批)。将母 液蒸发，并经硅胶色谱用己烷∶乙酸乙酯(8∶2)洗脱纯化，得到标题化合物， 为浅黄色固体(1.2g，第二批)，总收率(2.4g，76％)。ESI/MS m/z 323 (M+H)+。
基本上通过制备例1所述的方法制备以下化合物。
制备例7
1-甲基螺[二氢吲哚-3，4′-哌啶]-1′-甲酸苄基酯
向螺[二氢吲哚-3，4’-哌啶]-1’-甲酸苄基酯(1.15g，3.56mmol)、甲醛 (37％水溶液，1.44mL，17.83mmol)和乙酸(1.02mL，17.83mmol)在甲醇 (25mL)中的0℃的溶液中加入氰基硼氢化钠(0.67g，10.68mmol)。使该 反应混合液温至室温过夜。使用10％NaHCO3溶液将该混合液的pH调节 至约8，并用EtOAc萃取(3x50mL)。将合并的萃取物用水(50mL)和盐水 (50mL)洗涤，干燥，过滤，并蒸发至干燥。将粗制物质经硅胶色谱用己烷∶ 乙酸乙酯(85∶15)洗脱纯化，得到标题化合物，为米白色固体(0.9g，75％)。 ESI/MS m/z 337.2(M+H)+。
基本上通过制备例7所述的方法使用适合的醛制备以下化合物。
制备例14
1-苯基螺[二氢吲哚-3，4′-哌啶]-1′-甲酸苄基酯
在0℃向螺[二氢吲哚-3，4′-哌啶]-1′-甲酸苄基酯(1.5g，4.65mmol)在 1，4-二烷(5mL)中的溶液中加入溴苯(0.803g，5.115mmol)、4，5-(二苯基 -膦)-9，9-二甲基呫吨(0.807g，1.395mmol)和碳酸铯(4.54g，13.95mmol)。 将该反应混合液用氮气净化15分钟，并加入乙酸钯(0.062g，0.279mmol)。 将该混合液在100℃搅拌5小时，过滤，用氯化铵溶液稀释，用EtOAc 萃取，用硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗制物质经硅胶色谱用己烷∶乙酸乙 酯(9.0∶1.0)洗脱纯化，得到标题化合物(1.6g，86.48％)。ESI/MS m/z 399.4 (M+H)+。
制备例15
1-甲基螺[二氢吲哚-3，4′-哌啶]
向1-甲基螺[二氢吲哚-3，4′-哌啶]-1′-甲酸苄基酯(0.85g，2.52mmol)在 甲醇(50mL)中的溶液中加入Pd(OH)2/C(10％，0.15g)，并使用气球将该混 合液氢化16小时。将该反应混合液经由硅藻土过滤，用甲醇(50mL)洗涤， 并蒸发至干燥，得到标题化合物(0.5g，98％)。ESI/MS m/z 203.4(M+H)+。
基本上通过制备例15所述的方法制备以下化合物。
制备例22
7-氯-1-甲基-螺[二氢吲哚-3，4′-哌啶]
将7-氯-1-甲基-螺[二氢吲哚-3，4′-哌啶]-1′-甲酸苄基酯(1.1g，2.96mmol) 在三氟乙酸(10mL)中的溶液回流3小时。将该反应混合液浓缩，使用10％ NaHCO3(20mL)将残余物的pH调节至碱性，并用EtOAc萃取(3x20 mL)。将合并的萃取物用10％NaHCO3(20mL)、水(20mL)和盐水溶液(20 mL)洗涤，用干燥剂干燥，过滤，并蒸发至干燥，得到标题化合物，为棕 色液体(0.73g，103.9％粗品)。ESI/MS m/z 237.1(M+H)+。
制备例23
5-[(4-羟基苯基)亚甲基]-2，2-二甲基-1，3-二烷-4，6-二酮
在75℃向4-羟基苯甲醛(20g，163mmol)在水(250mL)中的溶液中加 入麦德鲁姆酸(2，2-二甲基-1，3-二烷-4，6-二酮)(24.78g，171mmol)在水 (250mL)中的浆液。将该反应混合液搅动2小时，在冰浴中冷却，并用 EtOAc萃取(2x400mL)。将合并的萃取物用饱和盐水洗涤，经硫酸钠干 燥，过滤，并浓缩为黄色固体(39g，97％)。ESI/MS m/z 247.1(M-H)-。
基本上通过制备例23所述的方法制备以下化合物。
制备例25
5-[1-(4-羟基苯基)丁-2-炔基]-2，2-二甲基-1，3-二烷-4，6-二酮
在氮气气氛下通过插管向1-丙炔基溴化镁在THF中的溶液(0.5N，322 mL，161.28mmol)中加入5-(4-羟基-苯亚甲基)-2，2-二甲基-[1，3]二烷-4，6- 二酮(20g，80.64mmol)在THF(200mL)中的溶液。经过添加过程，该反 应混合液变为稠密的黄色混悬液。添加完成后，将该反应混合液在50℃ 搅拌15分钟，用NH4Cl水溶液淬灭，并用2N HCl酸化至pH～2。将该 混合液用EtOAc萃取(2x300mL)，并将合并的萃取物用饱和盐水洗涤， 经MgSO4干燥，过滤，并浓缩为黄色固体(20g，86％)。以粗品形式使用 该产物。
基本上通过如制备例25所述的方法制备以下化合物。
制备例27
3-(4-羟基苯基)己-4-炔酸
将5-[1-(4-羟基苯基)丁-2-炔基]-2，2-二甲基-1，3-二烷-4，6-二酮(20g， 69.44mmol)在吡啶-水(5∶1，390mL)中的溶液在回流下加热16小时，并将 冷却后用5N HCl将其酸化至pH～2，并用EtOAc萃取(2x300mL)。将 合并的萃取物用饱和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并浓缩，得到米白 色固体(13.5g，96％)。ESI/MS m/z 203(M-H)-。
基本上通过如制备例27所述的方法制备以下化合物。
制备例29
(3S)-3-(4-羟基苯基)己-4-炔酸
将3-(4-羟基苯基)己-4-炔酸对映异构体通过手性色谱法[柱chiralpak IA(250mm X 4.6mm)，流动相(A)正己烷，流动相(B)含有0.01％TFA 的异丙醇；组成(85∶15)，流速1.0mL/在，检测225nm)分离，得到标题化 合物，(4.2g，50.58％)，保留时间7.96。ESI/MS m/z 203(M+H)-。将所述 对映异构体的混合物使用如WO2005086661中描述的相似的方法经手性拆 分，也分离得到标题化合物。
制备例30
(3S)-3-(4-羟基苯基)己-4-炔酸乙酯
向(3S)-3-(4-羟基苯基)己-4-炔酸(2.7g，13.2mmol)在乙醇(135mL)中的 0℃的溶液中加入硫酸(2.7mL)，并将该混合液在回流下加热4小时，浓缩， 用水稀释，并用EtOAc萃取(2x100mL)。将合并的萃取物用饱和盐水洗 涤，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩为黄色油状物(2.1g，68％)。1H NMR (400MHz，CDCl3)δ7.23(d，J＝8.0Hz，2H)，6.76(d，J＝8.0Hz，2H)，4.9(bs， 1H)，4.11(q，J＝6.8Hz，2H)，4.04(m，1H)，2.60-2.75(m，2H)，1.82(s，3H)， 1.21(t，J＝6.8Hz，3H)。
基本上通过如制备例30所述的方法制备以下化合物
a.1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.25(s，1H)，7.01(d，J＝8.4Hz， 2H)，6.65(d，J＝8.4Hz，2H)，3.97-4.02(m，2H)，3.9(m，1H)，2.59(d，J＝7.6 Hz，1H)，2.46(m，1H)，1.7(s，3H)，1.09(t，J＝7.6Hz，3H)。
32b.将3-(2-氟-4-羟基-苯基)己-4-炔酸甲酯通过手性HPLC (Chiralpak IA，流速0.6mL/分钟，检测225nm，90∶10庚烷∶IPA)分离，得 到3-(2-氟-4-羟基-苯基)己-4-炔酸甲酯，异构体-1。
制备例33
3-(2-氟-4-羟基-苯基)己-4-炔酸
将3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)己-4-炔酸(0.250g，1.12mmol)溶于DCM(5 mL)中，并在-10℃加入三溴化硼(0.5mL，3.7mmol)。将该混合液在环境 温度搅拌1小时。将该溶液减压浓缩，用水稀释，并用EtOAc萃取，用干 燥剂干燥，并减压浓缩，得到标题化合物，为淡棕色液体(0.180g，76％)。 ESI/MS m/z 212(M-H)-。
制备例34
3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)丙酸乙酯
使用气球在氢气氛下将(E)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)丙-2-烯酸乙酯(11 g，49mmol)和10％Pd/C催化剂(1.1g)在乙醇(120mL)中的混合液搅拌过 夜。将该混合液经由硅藻土过滤，用乙醇洗涤，并将滤液蒸发至干燥，得 到标题化合物(10g，90％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.17(t，J＝ 8.8Hz，1H)，6.74(d，J＝12.4Hz，1H)，6.69(d，J＝8.4Hz，1H)，4.02(q，J＝ 7.2Hz，2H)，3.71(s，3H)，2.77(t，J＝7.6Hz，2H)，2.53(t，J＝7.6Hz，2H)， 1.13(t，J＝7.2Hz，3H)。
基本上通过制备例34所述的方法制备以下化合物。
制备例36
[4-(溴甲基)苯基]甲醇
在-78℃向4-溴甲基-苯甲酸甲酯(5g，21.82mmol)在DCM(200mL) 中的溶液中滴加DIBAL-H(1.0M在己烷中，54.56mL，54.56mmol)。使 该反应混合液温至室温，并搅拌16小时。将该反应混合液用酒石酸钠钾 (10％溶液，8mL)淬灭，并用DCM(100mL)稀释。将合并的有机层用水(50 mL)、盐水(25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，并蒸发，得到标题化合物，为米 白色固体(3.5g，81％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.23-7.21(m，2H)， 7.4-7.3(m，2H)，4.5-4.3(bs，2H)，4.68(s，2H)。
基本上通过如制备例36所述的方法制备以下化合物。
a.1H NMR(400MHz，CDCl3)7.25-7.24(d，J＝4Hz，1H)，6.98-6.96(d， J＝8Hz，1H)，6.91(s，1H)，4.67(s，2H)，4.48(s，2H)，3.88(s，3H)。
制备例39
(3S)-3-[4-[[4-(溴甲基)苯基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸乙酯
在0℃向(3S)-3-(4-羟基苯基)己-4-炔酸乙酯(0.1g，0.43mmol)和1，4- 二(溴甲基)苯(0.227g，0.861mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入Cs2CO3(0.28g，0.861mmol)。历经2小时使该反应混合液温至室温。将该反应混 合液用水(25mL)稀释，并用EtOAc萃取(3x10mL)。将合并的有机层用 水(10mLx3)和饱和的盐水溶液(10mL)洗涤，干燥，过滤，并蒸发至干燥。 将粗制产物经硅胶色谱用己烷∶乙酸乙酯(9.0∶1.0)洗脱纯化，得到标题化合 物(0.1g，55.9％)。ESI/MS m/z(M+H)+415.4。
基本上通过制备例39所述的方法制备以下化合物。
a.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.42-7.36(m，4H)，7.12-7.07(m，1H)， 6.68-6.3(m，2H)，5.01(s，2H)，4.50(s，2H)，4.10-4.09(m，2H)，2.92-2.88(m， 2H)，2.60-2.58(m，2H)，1.24-1.21(m，3H)。
制备例41
4-(螺[茚-1，4’-哌啶]-1’-基甲基)苯甲酸乙酯
向螺[茚-1，4-哌啶]三氟乙酸酯(4g，14mmol)在乙醇(25mL)中的溶液 中加入4-(溴甲基)-苯甲酸乙酯(2.9g，12.6mmol)，随后加入二异丙基乙胺 (9.6mL，56mmol)。将该反应混合液在85℃回流过夜。减压除去乙醇， 并将残余物在EtOAc(150mL)和水(50mL)之间分配。将有机层用盐水洗 涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物经硅胶色谱用己烷∶ 乙酸乙酯(8.0∶2.0)洗脱纯化，得到标题化合物，为棕色固体(2.8g，60％)。 1H NMR(400MHz)7.94(d，J＝8Hz，2H)，7.51(d，J＝8Hz，2H)，7.43(d，J ＝7.2Hz，1H)，7.31(d，J＝7.2Hz，1H)，7.18(m，J＝7.2Hz，2H)，6.94(d，J＝ 5.6Hz，1H)，6.78(d，J＝5.6Hz，1H)，4.30(q，J＝7.2Hz，2H)，3.67(s，2H)， 2.85(d，J＝11.6Hz，2H)，2.38(t，J＝11.6Hz，2H)，2.09(t，J＝10.4Hz，2H)， 1.31(t，J＝7.2Hz，2H)，1.19(d，J＝12.8Hz，2H)。
基本上通过如制备例41所述的方法制备以下化合物。
制备例48
(4-(螺[茚-1，4’-哌啶]-1’-基甲基)苯基)甲醇
向4-(螺[茚-1，4’-哌啶]-1-基甲基)苯甲酸乙酯(2.8g，80mmol)在DCM (50mL)中的-78℃的溶液中加入二异丁基氢化铝(1M THF中，40mL，40 mmol)。将该混合液在-78℃搅拌2小时。将该反应液用水(25mL)淬灭， 并在室温搅拌30分钟。将该反应混合液经由硅藻土过滤，并用DCM萃取 (25mLx2)。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并 浓缩，得到标题化合物，为白色固体(1.5g，46％)。1H NMR7.94(d，J＝ 8Hz，2H)，7.51(d，J＝8Hz，2H)，7.43(d，J＝7.2Hz，1H)，7.31(d，J＝7.2Hz， 1H)，7.18(m，2H)，6.94(d，J＝5.6Hz，1H)，6.78(d，J＝5.6Hz，1H)，5.37(t， J＝6Hz，1H)，4.57(d，J＝6Hz，2H)，3.47(s，2H)，2.93(d，J＝12Hz，2H)， 2.36(d，J＝11.6Hz，2H)，2.06(t，J＝12.8Hz，2H)，1.19(d，J＝10.4Hz， 2H)。
基本上通过如制备例48所述的方法制备以下化合物
制备例55
[4-(螺[茚满-1，4′-哌啶]-1′-基甲基)苯基]甲醇
向2，3-二氢螺[茚-1，4′-哌啶](0.4g，1.78mmol)在DMF(12mL)中的搅 拌的溶液中加入Cs2CO3(1.4g，4.4mmol)和[4-(溴甲基)苯基]甲醇(0.36g， 1.78mmol)，并将该反应混合液在室温搅拌过夜。将该反应混合液倾入冷 水中，并用EtOAc萃取(3x50mL)。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经 Na2SO4干燥，并在真空下浓缩。将粗制物质经硅胶色谱(梯度DCM/MeOH 8/2)纯化，得到标题化合物(0.6g，98％)。ESI/MS m/z 308.40(M+H)+。
制备例56
1′-[[4-(溴甲基)苯基]甲基]螺[茚-1，4′-哌啶]
向[4-(螺[茚-1，4’-哌啶]-1’-基甲基)苯基]甲醇(1.5g，4.91mmol)在DCM (50mL)中的0℃的溶液中加入三溴化磷(0.667mL，6.8mmol)。将该反应 混合液在0℃搅拌15分钟。将该反应混合液在0℃用水(100mL)稀释， 并用DCM萃取(2×200mL)。将合并的萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥， 过滤，并浓缩，得到标题化合物，为米白色固体(1.1g，61％)。ESI/MS m/z 369(M+H)+。
基本上通过如制备例56所述的方法制备以下化合物。
制备例62
[4-(溴甲基)-2-甲氧基-苯基]甲氧基-叔丁基-二甲基-硅烷
在0℃向(4-溴甲基-2-甲氧基-苯基)-甲醇(1.1g，4.76mmol)在二氯甲烷 (15mL)中的溶液中加入咪唑(0.861g，5.71mmol)和叔丁基氯二甲基硅烷 (0.971g，12.98mmol)。使该反应混合液温至室温，并搅拌1小时。将该 反应混合液淬灭用水，并浓缩。将残余物用DCM稀释，用水(15mL)和盐 水(15mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩，得到标题化合物(1.1g， 66.9％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.43-7.41(d，J＝8Hz，1H)，7.00-6.98 (d，J＝8Hz，1H)，6.94(s，1H)，4.73(s，2H)，4.50(s，2H)，3.83(s，3H)，0.95(s， 9H)，0.10(s，6H)。
基本上通过制备例62所述的方法制备以下化合物。
制备例64
3-[4-[[4-[(叔丁基(二甲基)硅烷基)氧基甲基]-3-甲氧基-苯基]甲氧基]-2- 氟-苯基]丙酸乙酯
在室温向3-(2-氟-4-羟基-苯基)-丙酸乙酯(0.54g，3.188mmol)在ACN (20mL)中的溶液中加入碳酸钾(1.32g，9.56mmol)和4-溴甲基-2-甲氧基- 苄基氧基)-叔丁基-二甲基-硅烷(1.1g，3.188mmol)，并将该反应混合液在 25℃搅拌16小时。将该反应混合液浓缩，用水稀释，并用EtOAc萃取(2 x50mL)。将合并的萃取物用水(15mL)和饱和的盐水(15mL)洗涤，经 Na2SO4干燥，过滤，并浓缩，得到标题化合物，为无色凝胶(1g，66.66％)。 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.47-7.45(d，J＝8Hz，1H)，7.11-7.07(t，J＝8 Hz，1H)，7.00-6.98(d，J＝8Hz，1H)，6.87(s，1H)，6.69-6.65(t，J＝5.2Hz， 2H)，5.00(s，2H)，4.74(s，2H)，4.14-4.09(q，2H)，3.83(s，3H)，2.91-2.88(t， 3H)，2.59-2.26(t，2H)，1.25-1.22(t，2H)，0.95(s，9H)，0.10(s，6H)。
基本上通过如制备例64所述的方法制备以下化合物。
a.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.46-7.44(d，J＝8Hz，1H)，7.28-7.25 (d，J＝12Hz，2H)，7.00-6.98(d，J＝8Hz，1H)，6.92-6.88(t，J＝12Hz，3H)， 5.01(s，2H)，4.74(s，2H)，4.12-4.05(m，3H)，3.81(s，3H)，2.71-2.64(m，2H)， 1.81(s，3H)，1.25-1.21(t，J＝8Hz，3H)，0.95(s，9H)。
制备例67
3-[2-氟-4-[[4-(羟基甲基)-3-甲氧基-苯基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯
在0℃向3-{4-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-3-甲氧基-苄基氧 基]-2-氟-苯基}-丙酸乙酯(1g，2.1mmol)在THF(15mL)中的溶液中加入四 正丁基氟化铵(1M在THF中，3.15mL，3.15mmol)，并将该反应混合液 在25℃搅拌2小时。将该反应混合液用水淬灭，并浓缩。将残余物用EtOAc 稀释，用水(15mL)和盐水(15mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩， 得到标题化合物(1.0g，粗品)。将粗制产物未经进一步纯化地使用。
基本上通过如制备例67所述的方法制备以下化合物。
a.1H NMR(d6-DMSO，400 MHz)δ7.37-7.35(d，J＝8Hz，1H)，7.30- 7.29(m，2H)，7.259-7.24(m，2H)，6.92-6.89(dd，J＝12Hz，2H)，5.00(s， 2H)，4.70(s，2H)，4.13-4.11(q，J＝8Hz，2H)，2.72-2.65(m，2H)，2.36(s，1H)， 2.18(s，2H)，1.82(s，3H)，1.27-1.23(t，J＝8Hz，3H)，1.087(s，9H)。
制备例71
3-[4-[[4-(溴甲基)-3-甲氧基-苯基]甲氧基]-2-氟-苯基]丙酸乙酯
在0℃向3-[2-氟-4-(4-羟基甲基-3-甲氧基-苄基氧基)-苯基]-丙酸乙酯 (1.0g，2.76mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液中加入三溴化磷(0.4mL， 4.41mmol)，并将该反应混合液在0℃搅拌15分钟。将该混合液冷却至 0℃，用水稀释，并用二氯甲烷萃取(2×100mL)。将合并的萃取物用饱和 盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并浓缩，得到标题化合物(1.1g，粗品)。 1H NMR(DMSO，400MHz)δ7.34-7.32(d，J＝8Hz，1H)，7.12-7.08(t，J＝8 Hz，1H)，6.96-6.94(d，J＝8Hz，2H)，6.67-6.64(d，J＝12Hz，2H)，4.98(s， 2H)，4.55(s，2H)，4.12-4.09(q，2H)，2.90-2.88(t，2H)，2.60-2.56(t，J＝8Hz， 2H)，1.25-1.22(t，J＝8Hz，3H)。
基本上通过如制备例71所述的方法制备以下化合物。
制备例75
4-[(叔丁基(二苯基)硅烷基)氧基甲基]-3-甲基-苯甲醛
在-78℃在氮气气氛下向(4-溴甲基-2-甲基-苄基氧基)-叔丁基-二苯基- 硅烷(3g，6.83mmol)在四氢呋喃中的搅拌的溶液中加入仲丁基锂。将该反 应混合液温至0℃，并搅拌30分钟。将该反应混合液冷却至-78℃，加入 N-甲酰基哌啶(1.13mL，10.24mmol)，并将该反应混合液在室温搅拌3小 时。将该反应混合液在0℃用水淬灭，并用EtOAc萃取(50mLx3)。将合 并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸镁干燥，并在真空下浓缩，得到标题 化合物(3g，46％)。ESI/MS m/z 389.1(M+H)+。
制备例76
[4-[(叔丁基(二苯基)硅烷基)氧基甲基]-3-甲基-苯基]甲醇
在-78℃向4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)-3-甲基-苯甲醛(0.1g， 0.257mmol)在无水DCM中的搅拌的溶液中缓慢加入二异丁基氢化铝(1.0 M在己烷中，0.3mL，0.3mmol)。添加完成后，将该反应混合液温至室温， 并搅拌2小时。将2N酒石酸钠钾四水合物的水溶液(10mL)加入该反应混 合液中，并将该混合液搅动30分钟。将该反应产物用DCM萃取(20mL)， 经硫酸镁干燥，并浓缩至干燥，得到标题化合物(0.3g，30％)。ESI/MS m/z 391.1(M+H)+。
制备例77
[4-(溴甲基)-2-甲基-苯基]甲氧基-叔丁基-二苯基-硅烷
在0℃向[4-[(叔丁基(二苯基)硅烷基)氧基甲基]-3-甲基-苯基]甲醇(0.3 g，0.76mmol)在DCM(30mL)中的搅拌的溶液中加入三溴化磷(0.072mL， 0.76mmol)，并将该反应混合液搅拌1小时。将该反应混合液用二氯甲烷 (50mL)稀释，用碳酸氢钠水溶液洗涤，经硫酸镁干燥，并在真空下浓缩， 得到标题化合物，为淡黄色液体(0.3g，粗品)。ESI/MS m/z 438.1(M+H)+。
制备例78
(3S)-3-[4-[[4-[(叔丁基(二苯基)硅烷基)氧基甲基]-3-甲基-苯基]甲氧基] 苯基]己-4-炔酸乙酯
在0-5℃向1，1′-(偶氮二甲酰)二哌啶(0.770g，3.075mmol)在THF中 的溶液中加入三丁基膦(50％在EtOAc中，7.17mL，3.58mmol)。将该反 应混合液在室温搅拌30分钟。在0℃加入[4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基 甲基)-3-甲基-苯基]-甲醇(0.8g，2.05mmol)。将该反应混合液搅拌30分钟， 并加入3-(4-羟基-苯基)-己-4-炔酸乙酯(0.523g，2.25mmol)。将该混合液温 至室温，并搅拌过夜。向该反应混合液中加入己烷(75mL)，并过滤形成的 沉淀。将滤液减压浓缩。将残余物纯化经硅胶柱色谱(梯度10至30％EtOAc∶ 己烷)，得到标题化合物(1.3g，83％)。1H(d6-DMSO，400MHz)δ7.70-7.68 (d，J＝8Hz，3H)，7.53-7.51(d，J＝8Hz，1H)，7.42-7.41(m，5H)，7.39-7.35 (m，4H)，7.29-7.25(d，J＝16Hz，2H)，6.93-6.91(d，J＝8Hz，2H)，5.00(s， 2H)，4.72(s，2H)，4.13-4.11(q，J＝8Hz，2H)，2.72-2.65(m，2H)，2.36(s，1H)， 2.18(s，2H)，1.82(s，3H)，1.27-1.23(t，J＝8Hz，3H)，1.087(s，9H)。
制备例79
(3S)-3-[4-[[4-(螺[茚-1，4′-哌啶]-1′-基甲基)苯基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸 乙酯
向(3S)-3-(4-羟基苯基)己-4-炔酸乙酯(0.350g，1.5mmol)在乙腈(25mL) 中的溶液中加入碳酸钾(0.621g，4.5mmol)和1′-[4-(溴甲基)苄基]螺[茚-1，4′- 哌啶](0.77g，2.1mmol)。将该反应混合液在90℃加热16小时。将该混 合液浓缩，用水稀释，并用EtOAc萃取(2x200mL)。将合并的萃取物用 水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩至干燥，得 到标题化合物(0.3g，38％)。ESI/MS m/z 520(M+H)+。
基本上通过如制备例79所述的方法制备以下化合物。
制备例86
3-[2-氟-4-[[4-(螺[茚满-1，4′-哌啶]-1′-基甲基)苯基]甲氧基]苯基]丙酸乙 酯
将1′-[4-(溴甲基)苄基]-2，3-二氢螺[茚-1，4′-哌啶](0.35g，0.94mmol)、 3-(2-氟-4-羟基苯基)丙酸乙酯(0.2g，0.94mmol)和K2CO3(0.32g，2.3mmol) 在DMF(15mL)中的混合液在室温搅拌过夜。将该反应混合液用冷水稀释， 并用DCM萃取(3x50mL)。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，并在真空下浓缩。将粗制物质经硅胶色谱(梯度DCM/MeOH 8/2)纯 化，得到标题化合物，为米白色固体(0.22g，粗品)。ESI/MS 502(M+H)+。
制备例87
3-[2-氟-4-[[4-(螺[茚-1，4′-哌啶]-1′-基甲基)苯基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸 甲酯，异构体1
在0℃向ADDP(0.302g，1.2mmol)在THF(2mL)中的溶液中加入三 丁基膦(0.291g，1.44mmol)，并在0℃搅拌15分钟。加入[4-(1′H-螺[茚-1，4′- 哌啶]-1′-基甲基)苯基]甲醇(0.219g，0.9mmol)在THF(2mL)中的溶液，并 将该反应混合液在0℃搅拌15分钟。在0℃加入3-(2-氟-4-羟基-苯基)-己 -4-炔酸甲酯(异构体-1，0.200g，0.8mmol)在THF(2mL)中的溶液，并将 该反应混合液在室温搅拌16小时。将该反应混合液用己烷稀释，经硅藻土 过滤，并将滤液蒸发。将粗制物质经硅胶色谱使用乙酸乙酯梯度(6∶4)洗脱 纯化，得到标题化合物，为液体(0.220g，42％)。ESI/MS m/z 524(M+H)+。
基本上通过如制备例87所述的方法制备以下化合物。
制备例94
(3S)-3-[4-[[4-[(1-甲基螺[二氢吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)甲基]苯基]甲氧基] 苯基]己-4-炔酸乙酯
将1-甲基螺[二氢吲哚-3，4′-哌啶](0.0486g，0.204mmol)、 (3S)-3-(4-{[4-(溴甲基)苄基]氧基}苯基)己-4-炔酸乙酯(0.100g，0.24mmol) 和Cs2CO3(0.156g，0.48mmol)在DMF(5mL)中的混合液在室温搅拌16 小时。将该反应混合液用水(30mL)稀释，并用EtOAc萃取(3x25mL)。 将合并的有机层用水(3x25mL)和饱和的盐水溶液(25mL)洗涤，用干燥剂 干燥，过滤，并蒸发至干燥，得到液体。将粗制产物纯化经硅胶色谱(梯度 EtOAc/己烷30％)，得到标题化合物，为无色液体(0.095g，73.3％)。 ESI/MS m/z 537(M+H)+。
基本上通过如制备例94所述的方法制备以下化合物。
制备例110
(3S)-3-[4-[[4-(螺[茚满-1，4′-哌啶]-1′-基甲基)苯基]甲氧基]苯基]己-4-炔 酸乙酯
在室温向2，3-二氢螺[茚-1，4’-哌啶](0.37g，1.68mmol)在乙腈(20.0mL) 中的溶液中加入Cs2CO3(1.37g，4.21mmol)，随后加入3-[4-(4-溴甲基-苄 基氧基)-苯基]-己-4-炔酸乙酯(0.70g，1.68mmol)。将该反应混合液在室温 搅拌过夜。将该反应混合液经由硅藻土过滤，并将滤液蒸发。将粗制产物 经硅胶柱色谱(梯度，3％在DCM中的甲醇)纯化，得到标题化合物，为无 色凝胶，(0.82g，93.7％)。ESI/MS 522.2(M+H)+。
制备例111
3-[2-氟-4-[[3-甲氧基-4-(螺[茚-1，4′-哌啶]-1′-基甲基)苯基]甲氧基]苯基] 丙酸乙酯
在室温向螺[茚-1，4′-哌啶](0.515g，2.58mmol)在EtOH(15mL)中的 溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(1.4mL，2.589mmol)和3-[4-(4-溴甲基-2- 三氟甲基-苄基氧基)-2-氟-苯基]-丙酸乙酯(1.1g，2.58mmol)，并将该反应 混合液在80℃搅拌16小时。将该混合液浓缩，用水稀释，并用EtOAc 萃取(2x50mL)。将合并的萃取物用水(20mL)和饱和的盐水(20mL)洗涤， 经Na2SO4干燥，过滤，并浓缩。将粗制物质经硅胶柱色谱纯化，得到标 题化合物，为无色凝胶(0.650g，47.7％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.42-7.35(m，2H)，7.31-7.29(d，J＝8Hz，1H)，7.20-7.01(m，3H)，7.05(s， 1H)，7.01-6.99(d，J＝8Hz，1H)，6.64-6.93(d，J＝4Hz，1H)，6.86-6.83(d，J ＝12Hz，1H)6.77(s，1H)，5.05(s，2H)，4.03-3.98(m，2H)，3.79(s，3H)，3.57 (s，2H)，2.89-2.86(d，J＝12Hz，2H)，2.79-2.76(t，J＝8Hz，2H)，2.55-2.53(d， J＝8Hz，2H)，2.41-2.35(t，J＝12Hz，2H)，2.10-2.05(t，J＝8Hz，2H)， 1.22-1.17(t，J＝8Hz，3H)。
基本上通过如制备例111所述的方法制备以下化合物。
制备例117
3-[4-[[4-[(1-叔丁氧羰基螺[二氢吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)甲基]苯基]甲氧 基]-2-氟-苯基]丙酸
将1′-[[4-[[4-(3-乙氧基-3-氧代-丙基)-3-氟-苯氧基]甲基]苯基]甲基]螺 [二氢吲哚-3，4′-哌啶]-1-甲酸叔丁基酯(0.32g，0.53mmol)和KOH(0.148g， 2.65mmol)在乙醇∶水(3∶1，4mL)中的混合物在室温搅拌16小时。将该反应 混合液蒸发至干燥。将残余物再溶于水(8mL)中，冷却至0℃，用1.5N HCl 酸化至pH～6，并用EtOAc萃取(3x15mL)。将合并的有机层用水(15mL) 和饱和的盐水溶液(15mL)洗涤，用干燥剂干燥，过滤，并蒸发至干燥，得 到标题化合物，为米白色固体(0.22g，72.1％)。ESI/MS m/z 575.6(M+H)+。
制备例118
3-[2-氟-4-[[4-(螺[二氢吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基甲基)苯基]甲氧基]苯基]丙 酸甲酯盐酸盐
在0℃向螺[吲哚-3，4′-哌啶]-1(2H)，-甲酸叔丁酯-3-{2-氟-4-[(4-甲基苄 基)氧基]苯基}丙酸(0.12g，0.208mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中加入在甲 醇中的HCl(4M，5mL)。使该反应混合液温至室温，并搅拌1小时。将 该反应混合液蒸发至干燥，得到标题化合物，为浅黄色固体(0.07g，64％)。 ESI/MS m/z 489.6(M+H)+。
实施例1
(3S)-3-(4-{[4-(1′H-螺[茚-1，4′-哌啶]-1′-基甲基)苄基]氧基}苯基)己-4-炔 酸
向(3S)-3-[4-[[4-螺[茚-1，4’-哌啶]-1’-基甲基)苯基]甲氧基]苯基]己-4-炔 酸乙酯(0.3g，0.58mmol)在乙醇(12mL)中的搅拌的溶液中加入5.0M氢氧 化钠(0.231mL，1.156mmol)。将该反应混合液用微波辐射在90℃辐照5 分钟。将该反应混合液浓缩至干燥，用水稀释，并用2N HCl酸化至pH～4， 得到沉淀，将其通过过滤收集。将该固体用水(5mL)和己烷(10mL)洗涤， 并干燥，得到标题化合物，为白色固体(0.210g，73％)。ESI/MS m/z 492.1 (M+H)+。
该物质可以直接被纯化，或与其他批次一起经硅胶色谱纯化，使用 10％MeOH/DCM，得到标题化合物，为白色固体(0.31g)。ESI/MS m/z 492.1(M+H)+。
基本上通过实施例1的方法制备以下化合物。
实施例24
(3S)-3-[4-({4-[(1-甲基-1，2-二氢-1′H-螺[吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)甲基]苄 基}氧基)苯基]己-4-炔酸
向(3S)-3-[4-[[4-[(1-甲基螺[二氢吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)甲基]苯基]甲氧 基]苯基]己-4-炔酸乙酯(0.09g，0.167mmol)在乙醇∶水(3∶1，2mL)中的溶液 中加入KOH(0.047g，0.838mmol)，并在室温搅拌2小时。将该反应混合 液蒸发至干燥。将残余物再溶于水(5mL)中，并用Et2O(3x5mL)洗涤。 将水层用1.5N HCl酸化至pH～6。将固体沉淀过滤，用水洗涤，并干燥。 将该固体溶于二氯甲烷(40mL)中，用10％NaHCO3(15mL)、水(15mL) 和饱和的氯化铵溶液(15mL)洗涤，干燥，过滤，并蒸发至干燥，得到标题 化合物，为米白色固体(0.05g，58.2％)。ESI/MS m/z 509(M+H)+。
基本上通过如实施例24所述的方法制备以下化合物。
实施例38
3-(4-{[4-(2，3-二氢-1′H-螺[茚-1，4′-哌啶]-1′-基甲基)苄基]氧基}-2-氟苯 基)丙酸
向3-[2-氟-4-[[4-(螺[茚满-1，4′-哌啶]-1′-基甲基)苯基]甲氧基]苯基]丙酸 乙酯(0.22g，0.43mmol)在MeOH(15mL)中的搅拌的溶液中加入 LiOH·H2O(0.20g，4.8mmol)，并在微波炉中将该混合液在85℃加热45 分钟。将甲醇蒸发，并将残余物溶于水中。将pH调节至约6，并将固体沉 淀过滤，收集，并干燥，得到标题化合物，为米白色固体(0.12g，55.0％)。 ESI/MS 474.6(M+H)+。
实施例39
3-[4-({4-[(1，5-二甲基-1，2-二氢-1′H-螺[吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)甲基]苄基} 氧基)-2-氟苯基]丙酸
向1，5-二甲基螺[二氢吲哚-3，4′-哌啶](0.30g，1.38mmol)和3-(4-{[4-(溴 甲基)苄基]氧基}-2-氟苯基)丙酸乙酯(0.60g，1.52mmol)在DMF(10mL) 中的搅拌着的溶液中加入Cs2CO3(0.89g，2.76mmol)。将该反应混合液在 室温搅拌12小时，用水(100mL)稀释，并用Et2O萃取。将有机层分离， 经Na2SO4干燥，并在真空下浓缩，得到(0.2g，0.376mmol)。将该物质溶 于乙醇/水(4mL/1mL)中，并加入KOH(0.063g，1.12mmol)。将该混合 液在室温搅拌4小时，并将乙醇蒸发。用1N HCl溶液将pH调节至约5， 并将形成的沉淀过滤，得到标题化合物，为米白色固体(0.13g，18.6％)。 ESI/MS m/z 503(M+H)+。
T2D的原因被认为是双重的，胰岛素抵抗和胰岛β细胞在产生足够量 胰岛素以降低循环血糖水平的方面的进行性失效。当正常胰岛素水平不能 使循环血糖进入靶组织(包括骨骼肌和脂肪组织)时，出现胰岛素抵抗。由 于胰腺产生更多的胰岛素以代偿由于胰岛素抵抗而出现的过高的血糖水 平，所以胰岛β细胞最终变得衰竭，并且没有额外的胰岛素可分泌。久而 久之，胰岛β细胞完全失效，患有T2D的患者变得与患有1型糖尿病的患 者相似。循环葡萄糖的高水平是糖尿病的标志，且最终导致严重的并发症， 诸如心脏病和中风、高血压、失明、肾和神经损害、感染和龈疾病(gum disease)。因此，对控制和治疗T2D而言重要的是：尽可能早地采取锻炼； 适当的饮食；口服的抗糖尿病治疗法；和最终使用胰岛素。本发明要求的 化合物提供了另外的治疗选择。选择性调节GPR40的化合物可能是特别 合乎需要的。
GPR40：资料
最近由Nagasumi报道的使用过表达在胰岛素II启动子控制下的人 GPR40基因的转基因小鼠进行的研究的结果，进一步证实在体内GPR40 对GDIS和血糖水平的调节中起重要作用，尤其在啮齿类动物的胰岛素抵 抗模型中如此。Nagasumi K，等人，在正常和糖尿病小鼠中胰细胞中 GPR40的过表达增加葡萄糖刺激的胰岛素分泌并改善葡萄糖耐量 (Overexpression of GPR40 in pancreatic -cells augments glucose-stimulated insulin secretion and improves glucose tolerance in normal and diabetic mice)Diabetes 58：1067-1076，2009。这些发现进一步证 实新的GPR40调节剂化合物的开发对于用于治疗T2D而言可能是特别期 望的。
钙流初步试验
基本如下文所述测试本文实施例的化合物，且对于钙流初步试验所述 化合物显示的EC50值低于1μM。
使用该试验通过测定当配体结合并激活GPR40时产生的细胞内钙水 平的增加而筛选化合物，因而证明GPR40激动剂的强度和效力。采用过 表达人GPR40 cDNA的HEK293细胞(在37℃和5％CO2的条件下保持 在补充有10％FBS和800μg/ml遗传霉素的比率为3∶1的达尔伯克改良伊 格尔培养基和F12培养基中)进行研究。在无脂肪酸BSA存在(0.1％)或不 存在的情况下使用钙4染料分析试剂盒(Molecular Devices)在试验缓冲液 (1X HBSS(汉克氏平衡盐溶液)和20mM HEPES(4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙 磺酸)中进行激动剂试验。使用荧光成像读板仪(FLIPR)测定受体激活(细胞 内钙的增加)。使用相对于基线的荧光的最大变化来确定激动剂响应。使用 Excel Fit软件(第4版；IDBS)通过将浓度和相对荧光单位(RFU)作图来计 算化合物的EC50(最大效应的一半时的有效浓度)值。基于化合物相比于天 然配体亚油酸所展现的最大效应计算百分比效力。当在该试验中检测时， 实施例1的测试化合物EC50为186+/-93nM，效力为91+/-10％。这些结 果进一步证实了作为GPR-40激动剂的所期望的强度和效力。
葡萄糖依赖性胰岛素分泌(GDIS)试验
因为已知GPR40的激活导致依赖于高葡萄糖浓度的胰岛素分泌，所 以开发了两个单独的试验系统(胰岛素瘤细胞系和原代啮齿类动物胰岛)以 进一步表征已知在上文讨论的GPR40初步试验中增加细胞内钙的化合物。
使用小鼠胰岛素瘤细胞系Min6进行GDIS试验。将Min6细胞在37℃ 加5％CO2的条件下保持在含非必需氨基酸、10％FBS、50mM 2-巯基乙 醇和1％青霉素和链霉素的达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)中。在实 验的当天，将细胞用200μl预温的无葡萄糖的Krebs-ringer缓冲液洗涤两 次。加入200μL预温的含2.5mM葡萄糖的Krebs-ringer缓冲液，用于使 细胞饥饿，随后在高浓度的葡萄糖(25mM)的存在下加入化合物。将板在 37℃孵育2小时。在2小时孵育的末尾，将上清液轻缓地转移至Millipore 滤板，并在200g(重力)旋转3分钟。使用Mercodia胰岛素评测试剂盒分 析胰岛素。与单独使用25mM葡萄糖所能达到的结果相比，将1μM的实 施例1化合物加25mM的葡萄糖添加至Min6细胞导致胰岛素分泌的统计 学上显著的两倍增加。
使用原代啮齿类动物胰岛的GDIS试验也用于表征实施例的化合物。 通过胶原酶消化和Histopaque密度梯度分离法将胰岛从雄性SD(Sprague Dawley)大鼠分离。将胰岛在带有GlutaMAXn(稳定的，L-谷氨酰胺的二 肽形式(Invitrogen目录号61870-010))的RPMI-1640培养基中培养过夜， 以有助于从分离过程中回收。通过在48-孔板在EBSS(Earle平衡盐溶液) 缓冲液中孵育90分钟测定胰岛素分泌。简言之，将胰岛首先在带有2.8mM 葡萄糖的EBSS中预孵育30分钟，然后将其转移至含150μl2.8mM葡萄 糖的48-孔板(4个胰岛/孔)，并与150μl带有2.8或11.2mM葡萄糖的EBSS 一起在测试化合物存在或不存在的情况下孵育90分钟。在孵育的末尾将缓 冲液从孔中移去，并使用大鼠胰岛素ELISA试剂盒(Mercodia)分析胰岛素 水平。在该试验系统中，与单独使用11.2mM葡萄糖所能达到的结果相比， 施用不同浓度的实施例1化合物导致胰岛素增加2-至4-倍。
选择性试验：
过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α、δ和γ结合和功能试验：
因为已知GPR40被配体活化为PPARγ，所以在PPARα、PPARδ和 PPARγ结合和功能试验中检测实施例的化合物以测定实施例的化合物对 GPR40的选择性。基本如下文对PPAR结合试验所述那样测试本文实施例 的化合物，在测试化合物浓度为10μM时，所述化合物的结合值通常超过 1000nM，因此认为实施例化合物对PPAR活性是阴性的。
使用闪烁亲近测定法(SPA)技术评测化合物对PPARα、δ和γ受体的 亲合力。生物素酰化的寡核苷酸同向重复2(DR2)用于使受体结合于涂覆 有硅酸钇链霉抗生物的SPA小珠。HEK293细胞中PPARα、δ、γ和类视 色素X受体(RXR)α过表达，且在单个试验中使用含所述特定受体的细胞 裂解物。在含10mM HEPES pH 7.8、80mM KCl、0.5mM MgCl2、1mM DTT、0.5％3[(3-胆酰氨基丙基)二甲基铵基]-丙磺酸(CHAPS)和4.4％牛血 清的结合缓冲液中历经30分钟的时间将DR2结合于SPA小珠。在用于α 和δ受体试验的放射标记的(～0.033.8μCi 3H)PPAR α/δ双重激动剂参考化 合物和用于γ受体试验的放射标记的(～0.037.3μCi 3H)PPARγ激动剂参考 化合物、110.3μg的涂覆钇SPA链霉抗生物素的小珠、0.126nM HD寡核 苷酸DR2的存在下，以及在带有0.5μgRXRα的0.3μg 带有0.5 μg RXRα的0.5μg PPARδ或带有3.03μg RXRα的1.25μg PPARγ的存在 下，在加了14％甘油和5μg剪切过的鲑鱼精子DNA的以上的结合缓冲液 中，将所述细胞裂解物在每个孔中与11个浓度的化合物中之一共同孵育。 在10,000nM用于α和δ受体试验的未标记的PPAR α/δ双重激动剂参考 化合物和用于γ受体试验的PPARγ激动剂参考化合物的存在下测定非特 异性结合。将结合反应(在96孔[Costar 3632]板上，每孔100μl)孵育10小 时，并在Wallac Microbeta计算每分钟衰变(dpm)。通过使用4-参数逻辑 斯谛方程(Logistic Equation)拟合11点浓度-响应曲线来测定化合物的受体 亲合力(IC50)。使用Cheng-Prussoff方程从IC50确定Ki，并通过饱和结合 确定Kd。对于实施例1的化合物而言，在其浓度高至10μM时，在三个 PPAR结合试验中的任何一个中没有检测到结合。因而，本文阐述的试验 证实实施例1的化合物选择性激活GPR-40，同时避免了不想要的PPAR 活性。对于PPAR同种型，实施例的化合物相关的IC50通常超过10uM， 证实化合物避免了PPAR活性，同时提供了所需要的GPR-40活化作用。
Gal4PPARα、Gal4PPARδ和PPARγ报告蛋白功能试验也用于监测 实施例的化合物的选择性。使用Fugene用各种受体和报告基因质粒转染 源自非洲绿猴肾组织的CV1细胞。对于Gal4PPARα和PPARδ试验而言， 将含酵母转录蛋白Gal4响应元件的五个串联拷贝(在其上游克隆了由腺病 毒的主要晚期启动子驱动的荧火虫荧光素酶基因)的报告基因质粒与组成 性表达含Gal4DNA结合域(DBD)和PPARα或PPARδ配体结合域的杂交 蛋白的猿猴病毒40(SV40)驱动的质粒共转染。对于PPARγ试验而言，将 均由巨细胞病毒(CMV)启动子驱动的编码PPARγ和RXRα的质粒与包含 由TK启动子驱动的萤光素酶受体cDNA和受体响应元件(2X PPRE)的质 粒共转染。在T225cm2细胞培养瓶中在带有5％经活性炭处理的FBS的 DMEM培养基中转染细胞。孵育过夜后，使转染的细胞受胰蛋白酶消化， 置于不透明的96孔板(15,000细胞/孔)的含5％经活性炭处理的FBS的 DMEM培养基中，孵育4小时，并暴露于0.17ηM至10μM的测试化合 物或参考化合物(半对数稀释)。与化合物孵育24小时后，裂解细胞，并通 过发光而测定萤光素酶活性，作为受体激活的测定。将数据拟合到四参数- 拟合逻辑斯谛模型以测定EC50值。与使用10μM的适合的PPAR激动剂 参考化合物获得的最大刺激相比测定最大百分比刺激。在上文所述的特定 PPAR共转染(CTF)/功能试验中，当检测使用的实施例1的化合物高至10 μM时，没有检测到PPARα、PPARδ或PPARγ的功能性激活。因而，该 试验证实实施例的化合物如所期望地那样避免了PPAR激动剂活性。
在体内的效力：腹膜内葡萄糖耐量测试(IPGTT)
为检测实施例的化合物在体内激活GPR40而产生抗糖尿病效力(即胰 岛素增加和葡萄糖水平降低)的能力，使用以下所列的各化合物完成4-天的 腹膜内葡萄糖耐量测试(ipGTT)研究。
将雄性Balb/c(Albino小鼠)小鼠(8-9周龄)各自单独安置，并饲喂正常 啮齿动物饲料和水(无限制)。将动物称重，依据体重随机化，并记录每日 体重。研究开始后，对动物每日口服施用带有甲基纤维素和吐温-80的制剂 一次，持续三天。在该4-天IPGTT研究前一晚，将动物在干净的笼中禁 食过夜。在IPGTT(第4天)的早上，在IPGTT(葡萄糖2g/kg，腹膜内) 之前60分钟使动物单独口服施用化合物或介质。由葡萄糖负荷之后的0、 3、7、15、30和60分钟抽取的尾部血测定血糖水平。将血浆分离，并用 于评价各自的胰岛素水平。使用从t＝0至t＝60分钟的血糖波动曲线来积分 每次治疗的曲线下面积(AUC)。由相对于介质组的AUC数据的化合物的 AUC数据计算葡萄糖降低的百分比。以0.03、0.1、0.3、1.0或3.0mg/kg 口服施用测试化合物，并以10mg/kg施用阳性对照。在GTT期间的3分 钟的时间点没有任何浓度的实施例1的化合物或阳性对照显著降低血糖水 平。相反，0.3、1.0和3.0mg/kg剂量的实施例1的化合物和阳性对照在7 分钟的时间点，和0.1、0.3、1.0和3.0mg/kg剂量的实施例1的化合物和 使用阳性对照在15分钟的时间点，显著降低血糖水平。在30和60分钟的 时间点所有剂量的实施例1的化合物和阳性对照显著降低血糖水平。基于 葡萄糖降低的AUC的实施例1的化合物的ED50是0.09mg/kg。在该研究 中，使用1.0和3.0mg/kg剂量的实施例1的化合物时，在3分钟的时间点 胰岛素水平显著提高，这与GPR40的激活一致。该试验的结果证实化合 物对GPR-40的激活，其结果产生体内抗糖尿病效力。