技术领域
本发明属于药物化学和药物治疗学领域，具体涉及一种酰胺基取代的橙皮素类衍生物及其作为制备抗肝纤维化的药物中的应用。
背景技术
自古以来炎症都是人类和动物生活中的一大杀手，它的定义是：具有血管系统的活体组织对各种原因引起的局部损伤所产生的一种防御反应.经过医学技术的不断发展和人们的不断研究，终于找到了一些能够抵抗炎症折磨的药物，但是这些药物的在医学临床上的应该远远不够的。1929年，美国病理学家亨齐最先研究发现甾类抗炎药“可的松”，这是人类在抗炎药领域的一大重要突破。但是抗炎药的服用会用一定副作用并且时间长久会有耐受性。比如，COX-2选择性抑制剂增加心肌梗塞和中风的发生率，阿司匹林等对胃有一定程度的伤害。克服这些副作用成为了研究抗炎药的一个重要的难题，所以抗炎药的发展研究永不停止也是医药领域瞩目的热点。
炎症是具有血管系统的生物机体对损伤因子所发生的复杂的防御反应。当机体受到炎症因子侵犯时，机体自身通过炎症反应消除致炎因子，这是一个损伤和抗损伤的过程。许多常见的疾病(如自身免疫疾病、动脉粥样硬化、创伤修复等)都属于炎症范畴。凡是能够消除炎症的药物都称为抗炎类药物，它能够抑制或阻断炎症介质的产生和释放，抑制炎性反应。近年来，随着人们对炎症机制认识的不断研究深入和分子生物技术的广泛应用，抗炎药物的研究已从器官组织水平逐渐发展到细胞、分子水平，已经逐渐制备出更多品种，范围更广的药物。
炎症是由一些促炎的细胞因子和炎症分子介导的一个复杂的过程。比如研究发现，血管内皮细胞经大肠杆菌脂多糖刺激后NO分泌增加，目前针对NO的分泌抑制的新药研究逐步展开。当机体受到感染时，腹腔巨噬细胞受到大量脂多糖刺激，产生大量的IL-1、IL-6和TNF-a,它们相互诱生，相互协同。由于这些细胞因子的过量存在，加速了花生四烯酸代谢，释放血栓素A2、前列腺素、白三烯等炎症介质，导致过度炎症反应。在新药设计和研发过程中，可以根据药物活性是否可以抑制炎症因子NO，IL-6和TNF-α的释放为基本，设计出一些新的可能成为抗炎的化合物，然后再根据其化合物的特性研究它可能成为抗炎药的机制，比如炎症通NF-KB和MAPK通路，这些都是初步筛选的主要基本依据为在医药研究邻域的发展提供了不可估量的实验基础。
发明内容
为实现上述目的，本发明提供一种酰胺基取代的橙皮素类衍生物及其制备方法及应用。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种酰胺基取代的橙皮素类衍生物，其特征在于结构式为：
其中R1表示对二乙胺基，正丙胺基，正丁胺基，异丁胺基，吡咯烷基，糖氨基，N-甲基哌嗪基，N-乙基哌嗪基，吗啡啉基，苯乙氨基，邻氯苯乙氨基，邻氟苯乙氨基，间氯苯乙氨基，对溴苯乙氨基，对氯苯乙氨基，对氟苯乙胺基，对甲氧基苯乙氨基，苄氨基，邻甲氧基苄胺基，间甲氧基苄胺基，对甲氧基苄胺基，邻氟苄氨基，邻氯苄氨基，对氯苄氨基，对氟苄氨基，对溴苄氨基，三氟甲基苄氨基中的一种。
所述的酰胺基取代的橙皮素类衍生物的制备方法，其特征在于：
制备方法包括以下步骤：
(1)将橙皮素与3-5倍量的巴豆酸乙酯在弱碱作用下搅拌后得到产物
(2)将步骤(1)所得产物进行水解反应后，再与各种胺混合，酰胺基化反应得到终产物酰胺基取代的橙皮素类衍生物其中R1为二乙胺基，正丙胺基，正丁胺基，异丁胺基，吡咯烷基，糖氨基，N-甲基哌嗪基，N-乙基哌嗪基，吗啡啉基，苯乙氨基，邻氯苯乙氨基，邻氟苯乙氨基，间氯苯乙氨基，对溴苯乙氨基，对氯苯乙氨基，对氟苯乙胺基，对甲氧基苯乙氨基，苄氨基，邻甲氧基苄胺基，间甲氧基苄胺基，对甲氧基苄胺基，邻氟苄氨基，邻氯苄氨基，对氯苄氨基，对氟苄氨基，对溴苄氨基，三氟甲基苄氨基中的一种。
所述的酰胺基取代的橙皮素类衍生物的制备方法，其特征在于：步骤(1)中弱碱为K2CO3，搅拌，搅拌时间为6小时，反应溶剂为DMF。
所述的酰胺基取代的橙皮素类衍生物的制备方法，其特征在于步骤(2)中水解在碱性条件下，催化剂为氢氧化钠，溶剂为水和甲醇；氨基取代化反应温度为室温，在HOBT和EDC盐酸盐的催化下进行，溶剂为氯仿。
所述的酰胺基取代的橙皮素类衍生物的应用，其特征在于作为制备抗抗炎药物中的应用。
所述的应用，所述的药物为注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、悬浮剂或乳剂。
本发明所述的该酰胺基取代的橙皮素类衍生物的制备方法，主要合成路线为：
其具体步骤为：
(1)将橙皮素与20倍量的DMF溶剂混合，加入3-5倍量的巴豆酸乙酯，在K2CO3的作用下搅拌1小时后，用乙酸乙酯饱和食盐水多次萃取除去DMF，干燥，旋蒸回收乙酸乙酯，固体依次用乙酸乙酯甲醇、石油醚乙酸乙酯重结晶，得产物
(2)将上述产物溶于水与甲醇中，将反应装置放于冰浴条件，加入适量10％NaOH调PH到12到13左右，反应5h，终止反应，加酸析出，抽滤得到水解产物，干燥。用氯仿溶解，再加5倍量的脂肪胺，适量的HOBT和EDC盐酸盐，搅拌反应过夜。停止反应，干燥，硅胶柱层析，得到最终产物酰胺基取代的橙皮素衍生物R1为二乙胺基，正丙胺基，正丁胺基，异丁胺基，吡咯烷基，糖氨基，N-甲基哌嗪基，N-乙基哌嗪基，吗啡啉基，苯乙氨基，邻氯苯乙氨基，邻氟苯乙氨基，间氯苯乙氨基，对溴苯乙氨基，对氯苯乙氨基，对氟苯乙胺基，对甲氧基苯乙氨基，苄氨基，邻甲氧基苄胺基，间甲氧基苄胺基，对甲氧基苄胺基，邻氟苄氨基，邻氯苄氨基，对氯苄氨基，对氟苄氨基，对溴苄氨基，三氟甲基苄氨基中的一种。
有益效果：
本发明所涉及的酰胺基取代的橙皮素类衍生物能够抑制NO的释放，减少炎症介质IL-6和TNF-α的产生,同时还明显抑制一氧化氮合酶(iNOS)和COX-2的表达。因此表明该类化合物能够发展成为抗炎的药物。
具体的实施方式：
下面结合具体实施例进一步详细说明本发明。除非特别说明，本发明采用的试剂、设备和方法为本技术领域常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。
实施例一：化合物2的合成
将化合物1，即橙皮素(11.44g，约0.04mol)溶于200mL无水DMF中，加入2倍摩尔量的K2CO3，随后加入3到5倍量的巴豆酸乙酯，常温搅拌1h。终止反应，用乙酸乙酯饱和食盐水反复萃取，除去DMF，得到黄色粗制品。将黄色粗制品用少量乙酸乙酯溶解，加热状态下加入5倍量的甲醇，静置冷却，析出淡黄色固体，抽滤，干燥后，用乙酸乙酯石油醚重结晶，静置冷却，有白色针状晶体析出，抽滤，干燥，得白色晶体，即化合物2(9.62g)，产率68％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,1H,5-OH),9.08(s,1H,3’-OH),6.99–6.91(m,3H,C＝OC＝CH,2’-H,4’-H),6.88(dd,J＝8.4,1.8Hz,1H,5’-H),6.16(d,J＝2.2Hz,1H,8-H),6.14(d,J＝2.2Hz,1H,6-H),6.07(d,J＝15.8Hz,1H,C＝OCH＝C),5.49(dd,J＝12.5,2.9Hz,1H,2-H),4.87(dd,J＝3.9,1.7Hz,2H,C＝CCH2O),4.14(q,J＝7.1Hz,2H,OCH2),3.78(s,3H,OCH3),3.27(dd,J＝17.2,12.6Hz,1H,3-H),2.75(dd,J＝17.1,3.1Hz,1H,3-H),1.21(t,J＝7.1Hz,3H,OCCH3).13C NMR(101MHz,DMSO)δ196.86,165.70,165.08,163.14,162.76,147.93,146.46,142.72,130.91,121.19,117.70,114.09,111.96,102.89,95.20,94.34,78.44,66.47,60.14,55.65,42.11,14.04.TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C22H23O8:415.1396；found:415.1396.
化合物2的化学式如下：
实施例二：化合物3的合成
化合物2(3.72g，10mmol)，溶于甲醇水溶液中，冰浴，滴加10％NaOH，调PH至12到13左右，反应2h，加稀盐酸调PH至2到3左右，终止反应，加水析出，抽滤，得到黄色粗制品；粗制品用乙醇重结晶，等淡黄色固体，即化合物3。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.48(s,1H,COOH),12.09(s,1H,5-OH),9.09(s,1H,3’-OH),6.96–6.84(m,4H,2’-H,4’-H,5’-H,C＝OC＝CH),6.16(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.13(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.99(dt,J＝15.7,1.6Hz,1H,C＝OCH＝C),5.49(dd,J＝12.5,2.9Hz,1H,2-H),4.85(dd,J＝4.1,1.7Hz,2H,C＝CCH2O),3.78(s,3H,OCH3),3.27(dd,J＝17.2,12.5Hz,1H,3-H),2.75(dd,J＝17.1,3.1Hz,1H,3-H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ196.85,166.49,165.76,163.14,162.76,147.92,146.46,141.94,130.92,122.38,117.71,114.09,111.96,102.87,95.22,94.35,78.44,66.52,55.65,42.11.TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C20H18O8:386.1074；found:386.1071.
化合物3的化学式如下：
实施例三：化合物3a的合成
称取取化合物3(0.39g，1mmol)，溶于30ml氯仿，加3倍量的苄胺，加适量HOBT和EDC盐酸盐，室温搅拌过夜。停止反应，将反应液转移至萃取瓶中，调PH至弱酸，用饱和食盐水洗涤(40mL×3)，有机相用无水氯化钙干燥，过滤，滤液减压蒸馏的浅黄色油状物。用硅胶柱层析纯化[V(三氯甲烷)：V(石油醚)＝3：1]得白色固体3a。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.98(s,1H,5-OH),7.37–7.26(m,5H,Ar-H),7.03(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.97(dt,J＝15.3,4.0Hz,1H,C＝OC＝CH),6.92(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H,5’-H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.10(dt,J＝15.3,1.9Hz,1H,C＝OCH＝C),6.05(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.03(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.86(t,J＝5.3Hz,1H,NH),5.32(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.70(dd,J＝3.9,2.0Hz,2H,C＝CCH2O),4.52(d,J＝5.7Hz,2H,Ar-CH2N),3.91(s,3H,OCH3),3.06(dd,J＝17.2,12.9Hz,1H,3-H),2.78(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C27H26NO7:476.1704；found:476.1710.
化合物3a的化学式如下：
实施例四：化合物3b的合成
方法同实施例二，所不同的是用对氯苄胺代替苄胺，得白色固体3b。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,1H,5-OH),9.08(s,1H,3’-OH),8.64(t,J＝5.9Hz,1H,NH),7.37(d,J＝8.4Hz,2H,Ar-H),7.27(d,J＝8.4Hz,2H,Ar-H),6.94(m,2H,2’-H,4’-H),6.88(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H,5’-H),6.75(dt,J＝15.6,4.3Hz,1H,C＝OC＝CH),6.20(d,J＝15.6Hz,1H,C＝OCHC＝C),6.14(d,J＝2.1Hz,1H,8-H),6.11(d,J＝2.1Hz,1H,6-H),5.49(dd,J＝12.5,2.8Hz,1H,2-H),4.84(d,J＝2.7Hz,2H,Ar-CH2N),4.32(d,J＝5.9Hz,2H,C＝CCH2O),3.78(s,3H,OCH3),3.26(dd,J＝17.2,12.6Hz,1H,3-H),2.75(dd,J＝17.1,3.0Hz,1H,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+Na]+calcd for C27H24ClNNaO7:532.1134；found:532.1135.
化合物3b的化学式如下：
实施例五：化合物3c的合成
方法同实施例二，所不同的是用对氟苄胺代替苄胺，得白色固体3c。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,1H,5-OH),9.08(s,1H,3’-OH),8.61(t,J＝5.9Hz,1H,NH),7.31–7.26(m,2H,Ar-H),7.18–7.10(m,2H,Ar-H),6.96–6.85(m,3H,2’-H,4’-H,5’-H),6.75(dt,J＝15.6,4.3Hz,1H,C＝OC＝CH),6.23–6.16(dt,J＝15.5,1.4Hz,C＝OCH＝C),6.13(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.11(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.49(dd,J＝12.4,2.9Hz,1H,2-H),4.84(dd,J＝4.1,1.5Hz,2H,C＝CCH2O),4.31(d,J＝5.9Hz,2H,Ar-CH2N),3.78(s,3H,OCH3),3.26(dd,J＝17.2,12.5Hz,1H,3-H),2.75(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+Na]+calcd for C27H24FNNaO7:516.1429；found:514.1429.
化合物3c的化学式如下：
实施例六：化合物3d的合成
方法同实施例二，所不同的是用对溴苄氨代替苄胺，得白色固体3d。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,1H,5-OH),9.08(s,1H,3’-OH),8.64(t,J＝6.0Hz,1H,NH),7.53–7.48(m,2H,Ar-H),7.23–7.18(m,2H,Ar-H),6.96–6.91(m,2H,2’-H,4’-H),6.88(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H,5’-H),6.75(dt,J＝15.6,4.3Hz,1H,C＝OC＝CH),6.20(dt,J＝15.4,1.6Hz,1H,C＝OCH＝C),6.14(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.11(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.49(dd,J＝12.5,3.0Hz,1H,2-H),4.84(dd,J＝4.2,1.6Hz,2H,C＝CCH2O),4.30(d,J＝5.9Hz,2H,Ar-CH2N),3.78(s,3H,OCH3),3.26(dd,J＝17.2,12.5Hz,1H,3-H),2.75(dd,J＝17.1,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C27H24BrNNaO7:576.0630；found:576.0630.
化合物3d的化学式如下：
实施例七：化合物3e的合成
方法同实施例二，所不同的是用对甲氧基苄胺代替苄氨，得白色固体3e。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.08(s,1H,5-OH),9.08(s,1H,3’-OH),8.52(t,J＝5.9Hz,1H,NH),7.20–7.15(m,2H,Ar-H),6.97–6.91(m,2H,2’-H,4’-H),6.91–6.84(m,3H,Ar-H,5’-H),6.73(dt,J＝15.6,4.4Hz,1H,C＝OC＝CH),6.19(d,J＝15.6Hz,1H,C＝OCH＝C),6.13(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.10(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.48(dd,J＝12.5,3.0Hz,1H,2-H),4.83(dd,J＝4.1,1.4Hz,2H,C＝CCH2O),4.25(d,J＝5.8Hz,2H,Ar-CH2N),3.77(s,3H,OCH3),3.72(s,3H,OCH3),3.26(dd,J＝17.2,12.5Hz,1H,3-H),2.74(dd,J＝17.1,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C28H28NO8:506.1809；found:506.1813.
化合物3e的化学式如下：
实施例八：化合物3f的合成
方法同实施例二，所不同的是用4-三氟甲基苄氨代替苄氨，得白色固体3f。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,1H,5-OH),9.08(s,1H,3’-OH),8.72(t,J＝6.0Hz,1H,NH),7.69(d,J＝8.2Hz,2H,Ar-H),7.47(d,J＝8.1Hz,2H,Ar-H),6.96–6.91(m,2H,2’-H,4’-H),6.88(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H,5’-H),6.76(dt,J＝15.6,4.3Hz,1H,C＝OC＝CH),6.22(d,J＝15.6Hz,1H,C＝OCH＝C),6.14(d,J＝2.2Hz,1H,8-H),6.11(d,J＝2.2Hz,1H,6-H),5.49(dd,J＝12.5,2.9Hz,1H,2-H),4.85(d,J＝2.7Hz,2H,C＝CCH2O),4.42(d,J＝5.9Hz,2H,Ar-CH2N),3.78(s,3H,OCH3),3.27(dd,J＝17.2,12.6Hz,1H,3-H),2.75(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C28H25F3NO7:544.1578；found:544.1580.
化合物3f的化学式如下：
实施例九：化合物3g的合成
方法同实施例二，所不同的是用邻氯苄氨代替苄氨，得白色固体3g。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.99(s,1H,5-OH),7.44–7.34(m,2H,Ar-H),7.25–7.21(m,2H,Ar-H),7.03(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.96(dt,J＝15.7,4.1Hz,1H,C＝OC＝CH),6.92(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H,5’-H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.12(dt,J＝15.3,1.9Hz,1H,C＝OCH＝C),6.05(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.04(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),6.00(t,J＝5.9Hz,1H,NH),5.33(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.69(dd,J＝3.9,2.0Hz,2H,C＝CCH2O),4.61(d,J＝6.0Hz,2H,Ar-CH2N),3.92(s,3H,OCH3),3.07(dd,J＝17.2,12.9Hz,1H,3-H),2.79(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+Na]+calcd for C27H24ClNNaO7:532.1134；found:532.1137.
化合物3g的化学式如下：
实施例十：化合物3h的合成
方法同实施例二，所不同的是用邻氟苄氨代替苄氨，得白色固体3h。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,1H,5-OH),9.08(s,1H,3’-OH),8.60(t,J＝5.8Hz,1H,NH),7.35–7.27(m,2H,Ar-H),7.20–7.13(m,2H,Ar-H),6.96–6.91(m,2H,2’-H,4’-H),6.88(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H,5’-H),6.74(dt,J＝15.6,4.3Hz,1H,C＝OC＝CH),6.21(dt,J＝15.4,1.6Hz,1H,C＝OCH＝C),6.13(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.11(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.49(dd,J＝12.5,3.0Hz,1H,2-H),4.84(dd,J＝4.2,1.6Hz,2H,C＝CCH2O),4.37(d,J＝5.7Hz,2H,Ar-CH2N),3.78(s,3H,OCH3),3.26(dd,J＝17.2,12.5Hz,1H,3-H),2.75(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C27H25FNO7:494.1610；found:494.1606.
化合物3h的化学式如下：
实施例十一：化合物3i的合成
方法同实施例二，所不同的是用2-甲氧基苄氨代替苄氨，得白色固体3i。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,1H,5-OH),9.08(s,1H,3’-OH),8.41(t,J＝5.8Hz,1H,NH),7.27–7.20(m,1H,Ar-H),7.14(dd,J＝7.4,1.4Hz,1H,Ar-H),6.93(ddd,J＝22.1,14.0,7.3Hz,3H,Ar-H,2’-H),6.73(dt,J＝15.6,4.4Hz,1H,C＝OC＝CH),6.25(d,J＝15.6Hz,1H,C＝OCH＝C),6.14(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.11(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.49(dd,J＝12.5,2.9Hz,1H,2-H),4.83(d,J＝2.8Hz,2H,C＝CCH2O),4.29(d,J＝5.8Hz,2H,Ar-CH2N),3.79(s,3H,OCH3),3.78(s,3H,OCH3),3.26(dd,J＝17.2,12.6Hz,1H,3-H),2.75(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C28H28NO8:506.1809；found:506.1816.
化合物3i的化学式如下：
实施例十二：化合物3j的合成
方法同实施例二，所不同的是用3-甲氧基苄氨代替苄氨，得白色固体3j。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,1H,5-OH),9.08(s,1H,3’-OH),8.58(t,J＝5.9Hz,1H,NH),7.26–7.20(m,1H,Ar-H),6.96–6.92(m,2H,2’-H,4’-H),6.88(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H,5’-H),6.84–6.79(m,3H,Ar-H),6.74(dt,J＝15.6,4.4Hz,1H,C＝OC＝CH),6.21(d,J＝15.6Hz,1H,C＝OCH＝C),6.14(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.11(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.49(dd,J＝12.5,3.0Hz,1H,2-H),4.84(dd,J＝4.2,1.5Hz,2H,C＝CCH2O),4.30(d,J＝5.9Hz,2H,Ar-CH2N),3.78(s,3H,OCH3),3.72(s,3H,OCH3),3.26(dd,J＝17.2,12.5Hz,1H,3-H),2.75(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C28H28NO8:506.1809；found:506.1816，
化合物3j的化学式如下：
实施例十三：化合物3k的合成
方法同实施例二，所不同的是用苯乙胺代替苄氨，得白色固体3k。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.99(s,1H,5-OH),7.31(dd,J＝10.1,4.5Hz,2H,Ar-H),7.22(ddd,J＝16.0,6.8,4.1Hz,3H,Ar-H),7.03(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.95–6.90(m,2H,5’-H,C＝OC＝CH),6.88(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.02(ddd,J＝11.8,4.1,2.1Hz,3H,8-H,6-H,C＝OCH＝C),5.57(t,J＝5.3Hz,1H,NH),5.32(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.68(dd,J＝3.9,1.9Hz,2H,C＝CCH2O),3.92(s,3H,OCH3),3.61(dd,J＝12.9,6.8Hz,2H,NCH2),3.07(dd,J＝17.2,12.9Hz,1H,3-H),2.85(t,J＝6.9Hz,2H,Ar-CH2),2.79(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C28H28NO7:490.1860；found:490.1865，
化合物3k的化学式如下：
实施例十四：化合物3l的合成
方法同实施例二，所不同的是用对甲氧基苯乙胺代替苄氨，得白色固体3l。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.99(s,1H,5-OH),7.13–7.08(m,2H,Ar-H),7.03(d,J＝2.0Hz,1H,2’-OH),6.95–6.82(m,5H,Ar-H,4’-H,5’-H,C＝OC＝CH),6.06–5.98(m,3H,6-H,8-H,C＝OCH＝C),5.53(t,J＝5.6Hz,1H,NH),5.33(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2H),4.68(dd,J＝4.0,2.0Hz,2H,＝CCH2O),3.92(s,3H,OCH3),3.79(s,3H,OCH3),3.57(q,J＝6.8Hz,2H,NCH2),3.07(dd,J＝17.2,12.9Hz,1H,3-H),2.83–2.75(m,3H,Ar-CH2,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C29H30NO8:520.1966；found:520.1959.
化合物3l的化学式如下：
实施例十五：化合物3m的合成
方法同实施例二，所不同的是用对氯苯乙胺代替苄氨，得白色固体3m。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,1H,5-OH),9.08(s,1H,3’-OH),8.16(t,J＝5.6Hz,1H,NH),7.35–7.30(m,2H,Ar-H),7.25–7.20(m,2H,Ar-H),6.96–6.92(m,2H,2’-H,4’-H),6.88(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H,5’-H),6.68(dt,J＝15.6,4.4Hz,1H,C＝OC＝CH),6.11(m,3H,8-H,6-H,C＝OCH＝C),5.49(dd,J＝12.5,3.0Hz,1H,2-H),4.82(dd,J＝4.1,1.4Hz,2H,C＝CCH2O),3.78(s,3H,OCH3),3.37 3.36(dd,J＝12.1,5.3Hz,2H,NCH2),3.26(dd,J＝17.2,12.5Hz,1H,3-H),2.74(m,3H,3-H,Ar-CH2C).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C18H27ClNO7:524.1471；found:524.1481.
化合物3m的化学式如下：
实施例十六：化合物3n的合成
方法同实施例二，所不同的是用对溴苯乙胺代替苄氨，得白色固体3n。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,1H,5-OH),9.08(s,1H,3’-OH),8.16(t,J＝5.6Hz,1H,NH),7.48–7.43(m,2H,Ar-H),7.16(m,2H,Ar-H),6.96–6.91(m,2H,2’-H,4’-H),6.88(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H,5’-H),6.68(dt,J＝15.6,4.4Hz,1H,C＝OC＝CH),6.15–6.05(m,3H,8-H,6-H,C＝OCHC＝C),5.49(dd,J＝12.5,3.0Hz,1H,2-H),4.81(dd,J＝4.1,1.4Hz,2H,C＝CCH2O),3.78(s,3H,OCH3),3.36(dd,J＝12.2,5.3Hz,2H,NCH2),3.26(dd,J＝17.2,12.5Hz,1H,3-H),2.74(dd,J＝17.2,3.0Hz,1H,3-H),2.70(t,J＝7.1Hz,1H,Ar-CH2).TOF-HRMS:m/z[M+Na]+calcd for C28H26BrNNaO7:590.0785；found:590.0799.
化合物3n的化学式如下：
实施例十七：化合物3o的合成
方法同实施例二，所不同的是用对氟苯乙胺代替苄氨，得白色固体3o。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,1H,5-OH),9.09(s,1H,3’-OH),8.16(t,J＝5.6Hz,1H,NH),7.26–7.19(m,2H,Ar-H),7.13–7.05(m,2H,Ar-H),6.97–6.91(m,2H,2’-H,4’-H),6.89(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H,5’-H),6.68(dt,J＝15.6,4.3Hz,1H,C＝OC＝CH),6.15–6.08(m,3H,C＝OCH＝C,6-H,8-H),5.49(dd,J＝12.5,3.0Hz,1H,2-H),4.86–4.77(dd,J＝4.3,1.0Hz,2H,C＝CCH2O),3.78(s,3H,OCH3),3.34(dd,J＝7.4,5.7Hz,2H,NCH2),3.26(dd,J＝17.2,12.6Hz,1H,3-H),2.74(m,3H,3-H,Ar-CH2C).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C28H27FNO7:508.1766；found:508.1767.
化合物3o的化学式如下：
实施例十八：化合物3p的合成
方法同实施例二，所不同的是用邻氯苯乙胺代替苄氨，得白色固体3p。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,1H,5-OH),9.09(s,1H,3’-OH),8.23(t,J＝5.7Hz,1H,NH),7.41(dd,J＝7.3,1.8Hz,1H,Ar-H),7.26(m,3H,Ar-H),6.97–6.91(m,2H,2’-H,4’-H),6.89(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H,5’-H),6.69(dt,J＝15.6,4.4Hz,1H,C＝OC＝CH),6.16–6.07(m,3H,C＝OCH＝C,6-H,8-H),5.49(dd,J＝12.5,3.0Hz,1H,2-H),4.85–4.79(m,2H,C＝CCH2O),3.78(s,3H,OCH3),3.37(dd,J＝13.2,7.0Hz,2H,NCH2),3.26(dd,J＝17.2,12.6Hz,1H,3-H),2.86(t,J＝7.2Hz,2H,Ar-CH2CN),2.75(dd,J＝17.1,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C28H27ClNO7:524.1471；found:524.1466.
化合物3p的化学式如下：
实施例十九：化合物3q的合成
方法同实施例二，所不同的是用邻氟苯乙胺代替苄氨，得白色固体3q。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.99(s,1H,5-OH),7.25–7.16(m,2H,Ar-H),7.11–6.99(m,3H,Ar-H,2’-H),6.96–6.86(m,3H,C＝OC＝CH,4’-H,5’-H),6.04(m,3H,C＝OCH＝C,6-H,8-H),5.62(t,J＝5.1Hz,1H,NH),5.33(dd,J＝12.8,2.9Hz,1H,2-H),4.68(d,J＝1.0Hz,2H,C＝CCH2O),3.92(s,3H,OCH3),3.60(dd,J＝12.1,6.3Hz,2H,NCH2),3.07(dd,J＝17.2,12.9Hz,1H,3-H),2.91(t,J＝6.7Hz,2H,Ar-CH2CN),2.79(dd,J＝17.2,3.0Hz,1H,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C28H27FNO7:508.1766；found:508.1773.
化合物3q的化学式如下：
实施例二十：化合物3r的合成
方法同实施例二，所不同的是用间氯苯乙胺代替苄氨，得白色固体3r。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.99(s,1H,5-OH),7.25–7.15(m,3H,Ar-H),7.08(dd,J＝6.7,1.6Hz,1H,Ar-H),7.03(d,J＝1.9Hz,1H,2’-H),6.97–6.86(m,3H,C＝OC＝CH,4’-H,5’-H),6.11–5.99(m,3H,C＝OCH＝C,6-H,8-H),5.61(t,J＝4.9Hz,1H,NH),5.32(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.74–4.66(m,2H,C＝CCH2O),3.92(s,3H,OCH3),3.59(q,J＝6.7Hz,2H,NCH2),3.07(dd,J＝17.2,12.9Hz,1H,3-H),2.81(dt,J＝17.2,5.0Hz,3H,Ar-CH2CN,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C28H27ClNO7:524.1471；found:524.1471.
化合物3r的化学式如下：
实施例二十一：化合物3s的合成
方法同实施例二，所不同的是用吡咯烷代替苄氨，得白色固体3s。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.99(s,1H,5-OH),7.04(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.99(dt,J＝15.2,4.1Hz,1H,C＝OC＝CH),6.92(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H,5’-H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.43(dt,J＝15.3,1.7Hz,1H,C＝OCH＝C),6.08(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.06(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.33(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.71(dd,J＝4.0,1.8Hz,2H,C＝CCH2),3.92(s,3H,OCH3),3.54(t,J＝6.4Hz,4H,NCH2),3.08(dd,J＝17.2,12.8Hz,1H,3-H),2.80(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H),1.93(m,4H,NCCH2).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C24H26NO7:440.1704；found:440.1710.
化合物3s的化学式如下：
实施例二十二：化合物3t的合成
方法同实施例二，所不同的是用糠胺代替苄氨，得白色固体3t。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.99(s,1H,5-OH),7.35(dd,J＝1.7,0.6Hz,1H,Fu-H),7.03(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.96(dt,J＝15.4,4.4Hz,1H,C＝OC＝CH),6.92(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H,5’-H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.32(dd,J＝3.2,1.9Hz,1H,Fu-H),6.25(d,J＝3.2Hz,1H,Fu-H),6.09(dt,J＝15.4,1.9Hz,1H,C＝OCH＝C),6.05(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.03(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.87(t,J＝4.8Hz,1H,NH),5.33(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.70(dd,J＝3.9,2.0Hz,2H,NCH2),4.52(d,J＝5.5Hz,2H,C＝CCH2O),3.92(s,3H,OCH3),3.07(dd,J＝17.2,12.9Hz,1H,3-H),2.79(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C25H24NO8:466.1496；found:466.1489.
化合物3t的化学式如下：
实施例二十三：化合物3u的合成
方法同实施例二，所不同的是用正丙胺代替苄氨，得白色固体3u。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.99(s,1H,5-OH),7.04(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.96–6.86(m,3H,4’-H,5’-H,C＝OC＝CH),6.12–6.03(m,3H,C＝OCH＝C,6-H,8-H),5.59–5.51(t,J＝3.6Hz,1H,NH),5.33(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.70(dd,J＝4.0,2.0Hz,2H,C＝CCH2O),3.92(s,3H,OCH3),3.30(dd,J＝13.7,6.5Hz,2H,NCH2),3.08(dd,J＝17.2,12.9Hz,1H,3-H),2.80(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H),1.54(m,2H,NCCH2),0.94(t,J＝7.4Hz,3H,CH3).TOF-HRMS:m/z[M+Na]+calcd for C23H25NNaO7:450.1523；found:450.1529.
化合物3u的化学式如下：
实施例二十四：化合物3v的合成
方法同实施例二，所不同的是用正丁胺代替苄氨，得白色固体3v。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.99(s,1H,5-OH),7.04(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.96–6.86(m,3H,C＝OC＝CH,4’-H,5’-H),6.11–6.02(m,3H,C＝OCH＝C,6-H,8-H),5.56(t,J＝4.8Hz,1H,NH),5.33(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.69(dd,J＝4.0,2.0Hz,2H,＝CCH2O),3.92(s,3H,OCH3),3.34(dd,J＝13.0,7.0Hz,2H,NCH2),3.08(dd,J＝17.2,12.9Hz,1H,3-H),2.79(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H),1.57–1.46(m,2H,CH2),1.44–1.29(m,2H,CH2),0.93(t,J＝7.3Hz,3H,CH3).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C24H28NO7:442.1860；found:442.1869.
化合物3v的化学式如下：
实施例二十五：化合物3w的合成
方法同实施例二，所不同的是用异丁胺代替苄氨，得白色固体3w。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.99(s,1H,5-OH),7.04(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.96–6.90(m,2H,5’-H,C＝OC＝CH),6.88(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.10(dt,J＝15.3,2.0Hz,1H,C＝OCH＝C),6.06(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.04(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.62(t,J＝5.5Hz,1H,NH),5.33(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.69(dd,J＝4.0,2.0Hz,2H,C＝OC＝CCH2O),3.92(s,3H,OCH3),3.17(t,J＝6.5Hz,2H,NCH2),3.08(dd,J＝17.2,12.9Hz,1H,3-H),2.79(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H),1.81(dp,J＝13.5,6.7Hz,1H,NCCH),0.94(s,3H,CH3),0.92(s,3H,CH3).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C24H28NO7:442.1860；found:442.1863.
化合物3w的化学式如下：
实施例二十六：化合物3x的合成
方法同实施例二，所不同的是用N-甲基哌嗪代替苄氨，得白色固体3x。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.08(s,1H,5-OH),9.08(s,1H,3’-OH),6.95–6.92(m,2H,2’-H,4’-H),6.88(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H,5’-H),6.76(d,J＝15.3Hz,1H,C＝OC＝CH),6.69(dt,J＝15.2,4.5Hz,1H,C＝OCH＝C),6.17(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.14(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.49(dd,J＝12.4,3.0Hz,1H,2-H),4.81(d,J＝3.9Hz,2H,C＝CCH2O),3.78(s,3H,OCH3),3.51(m,4H,C＝ONCH2),3.26(dd,J＝17.2,12.5Hz,1H,3-H),2.75(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H),2.27(s,4H,NCH2),2.17(s,3H,NCH3).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C25H29N2O7:469.1969；found:469.1971.
化合物3x的化学式如下：
实施例二十七：化合物3y的合成
方法同实施例二，所不同的是用N-乙基哌嗪代替苄氨，得白色固体3y。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.08(s,1H,5-OH),9.08(s,1H,3’-OH),6.95–6.92(m,2H,2’-H,4’-H),6.88(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H,5’-H),6.76(d,J＝15.3Hz,1H,C＝OC＝CH),6.69(dt,J＝15.2,4.4Hz,1H,C＝OCH＝C),6.17(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.14(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.49(dd,J＝12.4,3.0Hz,1H,2-H),4.81(d,J＝4.0Hz,2H,C＝CCH2O),3.78(s,3H,OCH3),3.51(m,4H,C＝NCH2),3.26(dd,J＝17.2,12.5Hz,1H,3-H),2.76(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H),2.37–2.26(m,6H,N(CH2)3),0.99(t,J＝7.2Hz,3H,NCCH3).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C26H30N2O7:483.2126；found:483.2123.
化合物3y的化学式如下：
施例二十八：化合物3z的合成
方法同实施例二，所不同的是用吗啡啉代替苄氨，得白色固体3z。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.99(s,1H,5-OH),7.04(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),7.00–6.90(m,2H,5’-H,C＝OC＝CH),6.88(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.55(d,J＝15.2Hz,1H,C＝OCH＝C),6.08(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.06(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.34(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.71(dd,J＝3.7,1.7Hz,2H,C＝CCH2O),3.92(s,3H,OCH3),3.73–3.48(m,8H,NCH2CH2N),3.08(dd,J＝17.2,12.8Hz,1H,3-H),2.80(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C24H26NO8:456.1653；found:456.1654.
化合物3z的化学式如下：
施例二十九：化合物4a的合成
方法同实施例二，所不同的是用二乙胺代替苄氨，得白色固体3z。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.99(s,1H,5-OH),7.04(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.96(dt,J＝15.0,3.8Hz,1H,C＝OC＝CH),6.91(dd,J＝2.0,8.3Hz,1H,5’-H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.52(dt,J＝15.2,1.8Hz,1H,C＝OCH＝C),6.08(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.07(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.33(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.71(dd,J＝4.2,1.9Hz,2H,C＝CCH2O),3.92(s,3H,OCH3),3.40(dq,J＝31.1,6.7Hz,4H,NCH2),3.08(dd,J＝17.2,12.8Hz,1H,3-H),2.80(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H),1.17(q,J＝6.8Hz,6H,CH3).TOF-HRMS:m/z[M+H]+calcd for C24H28NO7:442.1860；found:422.1865.
化合物4a的化学式如下：
抗炎活性筛选实验步骤和结果
1)化合物溶液的配制：将测试化合物配成100μM浓度(溶剂：DMSO)，-20℃低温保存，使用时用所需的细胞培养基稀释到所需浓度。
2)细胞的培养
本实验所用的RAW264.7巨噬细胞为贴壁生长细胞株，采用含10％胎牛血清的DMEM培养液进行培养。培养环境为37℃，5％CO2培养箱，每天更换一次培养液，取处于对数生长期的细胞进行实验。
3)NO释放含量的测定
取对数增殖期的RAW264.7细胞，以每孔接种7万个细胞于24孔板种，培养箱中培养一天，然后每孔中加不同浓度的药物(5，10，20，30，40μM)继续培养2小时后，每孔加入1μg/mL的LPS刺激24小时，空白对照加入等量的培养基。吸取各孔的上清液，离心4℃，12000rpm/min的转速离心5分钟，收集上清液。一氧化氮的测定用Griess Reagent反应。加入Griess ReagentⅠ和Griess ReagentⅡ各50μL。反应10分钟，用酶标仪540nm测定吸光度值。
实验结果为三次独立实验的平均值,我们用一氧化氮的抑制率表示。
结果讨论：所合成的化合物都有很好的NO抑制效果，化合物2，3a-d，3h,3j-k，3o，3q-t，3x-y，4a对NO抑制率到达60％以上。证明这些药物在某种程度上对炎症因子NO的释放有一定的抑制效果。
4)IL-6和TNF-α分泌的抑制影响
同样取对数增殖期的巨噬细胞。以每孔7×104个/孔的细胞密度接种细胞于24孔板中。加不同浓度药物培养2小时(药物浓度：5，10，20，30，40μM),空白对照不做任何处理只加等量的培养基，再加入1ug/mL LPS溶液刺激，继续培养24小时。吸取各孔上清液，离心机4℃，10000rpm/min的转速离心5分钟，取上清液。按照ELISA试剂盒说明操作。然后450nm波长处测定各孔值。
实验结果为独立3次试验的平均值。
结果证明化合物3x和3h能够最明显的抑制炎症因子IL-6和TNF-α的释放。这些化合物中3x和3h最有可能发展成为抗炎药物。