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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201510147547.9 (22)申请日 2015.03.31 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 104725445 A (43)申请公布日 2015.06.24 (73)专利权人 桂林市一峰食品有限公司 地址 541004 广西壮族自治区桂林市七星 区桂磨大道桂林国家高新区大学科技 园601号 (72)发明人 覃永亮 (74)专利代理机构 桂林市持衡专利商标事务所 有限公司 45107 代理人 汤凌志 (51)Int.Cl. C07H 15/256(2006.。
2、01) C07H 1/08(2006.01) 审查员 郭军霞 (54)发明名称 一种从甜茶中制备甜茶素的方法 (57)摘要 本发明公开了一种从甜茶中制备甜茶素的 方法， 包括下述步骤:原料处理、 高压微射流超微 粉碎处理、 发酵处理， 收集发酵后得到的发酵液， 离心， 上清液进行HP20SS树脂柱层析， 再用50- 60的乙醇溶液洗脱， 经浓缩、 喷雾干燥， 得到甜 茶素。 具有含量高， 提取率高， 工艺简单， 适合生 产， 生产成本低等优点。 权利要求书1页 说明书3页 CN 104725445 B 2017.11.24 CN 104725445 B 1.一种从甜茶中制备甜茶素的方法， 其特。
3、征在于， 包括如下步骤： 1)原料处理： 将甜茶的叶片粉碎； 2)高压微射流超微粉碎处理： 将粉碎后的甜茶按照1:8-10的重量比加入纯净水， 用高 速剪切乳化机处理10-20min， 转速为8000-12000r/min， 然后用高压微射流超微粉碎设备于 25进行处理， 处理压力为80-120MPa， 处理次数为2-4次， 得到膏状浆液； 3)发酵： 将步骤2)得到的膏状浆液经过超高温瞬时灭菌， 然后调整pH6.5-7.0， 按体积 百分比为10-15接入培养成熟的乳酸菌液体菌种， 放入发酵罐中发酵， 发酵温度在35-37 ， 发酵时间3-4h； 4)步骤3)得到的发酵液经过超高温瞬时灭菌，。
4、 离心， 上清液进行HP20SS树脂柱层析， 再 用50-60的乙醇溶液洗脱， 经浓缩、 喷雾干燥， 得到甜茶素。 2.根据权利要求1所述的一种从甜茶中制备甜茶素的方法， 其特征在于： 步骤3)中乳酸 菌为保加利亚乳杆菌、 嗜酸乳杆菌、 嗜热链球菌、 乳脂链球菌、 两歧双歧杆菌、 婴儿双歧杆 菌、 长双歧杆菌。 3.根据权利要求1所述的一种从甜茶中制备甜茶素的方法， 其特征在于： 步骤4)所述的 HP20SS树脂柱， 树脂用量为上清液重量的40-60倍。 权利要求书 1/1 页 2 CN 104725445 B 2 一种从甜茶中制备甜茶素的方法 技术领域 0001 本发明涉及生物技术领域的制备。
5、方法， 具体说是一种从甜茶中制备甜茶素的方 法。 背景技术 0002 甜茶， 又名广西甜茶， 学名Rubus Suavissmus S,Gee.英文名Sweet tea， 是蔷薇科 悬钩子属植物中的一种， 为多年生有刺落叶灌木， 高1-2m， 单叶， 矩圆状卵形， 长5-10m， 叶柄 长1.5-4cm。 花单生叶腋， 白色， 直径2-3cm， 垂生； 萼裂片长矩圆状卵形， 渐尖， 无毛。 聚合果 球形、 黄色。 它和普通悬钩子不同之处是叶子味甜。 甜茶全身是宝， 根、 茎、 叶、 果实均可入茶 入药。 甜茶叶常用来作为甜味剂加工食品， 民间入药用于补肾降压， 被誉为神茶， 与罗汉果、 合浦珍。
6、珠、 广西香料等齐名为广西十大名品。 甜茶鲜果别名树莓， 营养丰富， 红里透亮， 果肉 甜， 清香味鲜， 肉味独特， 特别是富含抗癌物质鞣花酸， 被称为第三代水果； 其干果实可作 为中药覆盘子(或覆盆子)使用。 甜茶叶虽然在广西民间应用已久， 但我国八十年代初药物 调查时才发现这个新变种。 广西甜茶生长在海拔800-1000m左右的荒山上， 主产区在广西大 瑶山地区， 主要分布在广西其它地区及广东、 湖南、 江西等省。 悬钩子在我国其它地方都可 见到， 却没有这种甜味。 因此， 学者们认为甜茶应定为一个新变种。 0003 据 广西中药标准 记载， 广西甜茶有 “清热降火、 润肺、 祛痰、 止咳。
7、的功效” 。 被誉为 “神茶” ， 其药用性和食用性已为地方医药和民间所证实， 广西甜茶中还含有3.2以上的黄 酮、 8.94的甜茶茶多酚和4-5的甜茶素。 甜茶茶多酚有明显抗氧化、 抗突变、 防癌、 降低 胆固醇、 降低血液中低密度脂蛋白、 抑制血压上升、 抑制血糖上升、 抑制血小板凝集、 抗菌、 抗食物过敏、 改善肠胃微生物环境、 消臭的作用， 是目前发现最理想的纯天然抗氧化剂， 用 途十分广泛。 研究发现， 甜茶素是一种高甜度的甜味剂， 其甜度为蔗糖的300倍， 它是斯替维 醇(Steviol)和葡萄搪结合而成的二萜甙。 甜茶素分子式C32H50O12， 在化学结构上与甜叶菊 甙(Ste。
8、vioside， 斯替维甙)相似， 均由相同的甙元组成， 其区别仅在C13位上少接一分子葡萄 搪。 广西甜茶中甜茶素的含量一般在4-6； 广西甜茶中的甜茶素主要存在于甜茶叶中， 其 含量受多种因素的影响： 首先受产地的影响， 不同地区所产的甜茶叶中的甜茶素含量不一 样， 广西金秀县所产的甜茶叶中甜茶素的含量最高， 其含量高达8.07。 此外， 广西甜茶中 甜茶素的含量与其生长时期有关， 不同生长发育阶段叶子中甜茶素的含量有着明显的差 异， 嫩叶中最高， 成叶次之， 落叶最低； 甜茶叶中甜茶素的含量与季节也有关系， 5月底较高， 6月底开始上升， 7、 8两月达到最高， 9月底以后开始下降， 1。
9、2月底降到最低值。 0004 甜茶素是一种低热量甜味剂， 是能替代糖的高甜度而低热能且无毒的天然甜味 剂。 通过对甜茶的深加工， 得到天然健康的活性成分具有很好的市场前景， 也符合人们对自 然健康的追求。 发明内容 0005 本发明的目的是提供一种从甜茶中制备甜茶素的方法， 具有工艺简单， 适合生产， 说明书 1/3 页 3 CN 104725445 B 3 生产成本低等优点。 0006 本发明通过以下技术方案实现， 具体包括如下步骤： 0007 1)原料处理： 将甜茶的叶片粉碎； 0008 2)高压微射流超微粉碎处理： 将粉碎后的甜茶按照1:8-10的重量比加入纯净水， 用高速剪切乳化机处理。
10、10-20min， 转速为8000-12000r/min， 然后用高压微射流超微粉碎设 备于25进行处理， 处理压力为80-120MPa， 处理次数为2-4次， 得到膏状浆液； 0009 3)发酵： 将步骤2)得到的膏状浆液经过超高温瞬时灭菌， 然后调整pH6.5-7.0， 按 体积百分比为10-15接入培养成熟的乳酸菌液体菌种， 放入发酵罐中发酵， 发酵温度在 35-37， 发酵时间3-4h； 0010 4)步骤3)得到的发酵液经过超高温瞬时灭菌， 离心， 上清液进行HP20SS树脂柱层 析， 再用50-60的乙醇溶液洗脱， 经浓缩、 喷雾干燥， 得到甜茶素。 0011 本发明步骤3)中乳酸。
11、菌为保加利亚乳杆菌、 嗜酸乳杆菌、 嗜热链球菌、 乳脂链球 菌、 两歧双歧杆菌、 婴儿双歧杆菌、 长双歧杆菌。 0012 步骤4)所述的HP-20ss树脂柱， 树脂用量为上清液重量的40-60倍。 0013 本发明得到的甜茶素， 为白色粉末， 经HPLC检测， 含量在99以上。 0014 与现有技术相比， 本发明的优点： 0015 1、 现有技术在进行甜茶素等成分的提取时， 前处理一般都是以水或乙醇等为溶 剂， 通过加热提取来将有效成分溶出， 而本发明采用高压微射流超微粉碎来处理甜茶原料， 结合乳酸菌发酵， 相比加热提取， 经过高压超微粉碎作用， 使得甜茶茶中含有的咖啡碱、 皂 甙、 鞣质、 。
12、苦味质等成分能充分溶出， 利于后续工艺的处理， 利于提高活性成分的收率， 而 且， 避免了高温对甜茶有效成分的破坏。 0016 2、 现有技术得到的甜茶素含量一般不超过95之间， 本发明采用高压微射流超微 粉碎技术、 乳酸菌发酵处理和柱层析吸附技术的结合， 使得本发明的技术结合出现质的提 高， 相比水提或醇提后柱层析， 本发明时间短， 甜茶素含量高； 相比超临界CO2流体萃取加柱 层析， 本发明得到的甜茶素含量99以上， 提取率90以上。 0017 3、 本发明避免了无水乙醇、 甲醇等大量有机溶剂的使用， 更加环保。 具体实施方式 0018 下面以实施例对本发明作进一步说明， 但本发明并不局限。
13、于这些实施例。 0019 实施例1： 0020 一种从甜茶中制备甜茶素的方法， 具体包括如下步骤： 0021 1)原料处理： 将甜茶的叶片100kg粉碎； 0022 2)高压微射流超微粉碎处理： 将粉碎后的甜茶加入800kg纯净水， 用高速剪切乳化 机处理10min， 转速为12000r/min， 然后用高压微射流超微粉碎设备于25进行处理， 处理 压力为100MPa， 处理次数为3次， 得到膏状浆液； 0023 3)发酵： 将步骤2)得到的膏状浆液经过超高温瞬时灭菌， 然后调整pH7.0， 按体积 百分比为10接入培养成熟的保加利亚乳杆菌液体菌种， 放入发酵罐中发酵， 发酵温度在 35-37。
14、， 发酵时间4h； 0024 4)步骤3)得到的发酵液经过超高温瞬时灭菌， 离心， 上清液进行HP20SS树脂柱层 说明书 2/3 页 4 CN 104725445 B 4 析， 再用50-60的乙醇溶液洗脱， 经浓缩、 喷雾干燥， 得到甜茶素。 0025 实施例2： 0026 一种从甜茶中制备甜茶素的方法， 具体包括如下步骤： 0027 1)原料处理： 将甜茶的叶片100kg粉碎； 0028 2)高压微射流超微粉碎处理： 将粉碎后的甜茶加入纯净水1000kg， 用高速剪切乳 化机处理15min， 转速为10000r/min， 然后用高压微射流超微粉碎设备于25进行处理， 处 理压力为80MP。
15、a， 处理次数为4次， 得到膏状浆液； 0029 3)发酵： 将步骤2)得到的膏状浆液经过超高温瞬时灭菌， 然后调整pH6.5， 按体积 百分比为12接入培养成熟的嗜酸乳杆菌液体菌种， 放入发酵罐中发酵， 发酵温度在35-37 ， 发酵时间3h； 0030 4)步骤3)得到的发酵液经过超高温瞬时灭菌， 离心， 上清液进行HP20SS树脂柱层 析， 再用50-60的乙醇溶液洗脱， 经浓缩、 喷雾干燥， 得到甜茶素。 0031 实施例3： 0032 一种从甜茶中制备甜茶素的方法， 具体包括如下步骤： 0033 1)原料处理： 将甜茶的叶片100kg粉碎； 0034 2)高压微射流超微粉碎处理： 将。
16、粉碎后的甜茶加入纯净水900kg， 用高速剪切乳化 机处理20min， 转速为8000r/min， 然后用高压微射流超微粉碎设备于25进行处理， 处理压 力为120MPa， 处理次数为2次， 得到膏状浆液； 0035 3)发酵： 将步骤2)得到的膏状浆液经过超高温瞬时灭菌， 然后调整pH7.0， 按体积 百分比为15接入培养成熟的乳脂链球菌液体菌种， 放入发酵罐中发酵， 发酵温度在35-37 ， 发酵时间4h； 0036 4)步骤3)得到的发酵液经过超高温瞬时灭菌， 离心， 上清液进行HP20SS树脂柱层 析， 再用50-60的乙醇溶液洗脱， 经浓缩、 喷雾干燥， 0037 得到甜茶素。 0038 结果： 0039 说明书 3/3 页 5 CN 104725445 B 5 。