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一系列具有抗菌活性的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物.pdf

上传人：宁*** 文档编号：8888680 上传时间：2021-01-10 格式：PDF 页数：12 大小：676.81KB
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摘要
申请专利号：

CN201610330149.5

 申请日：

20160518
公开号：

CN105968081B

 公开日：

20181116
当前法律状态：

有效性：

审查中
法律详情：

IPC分类号：

C07D311/96,A61P31/04

 主分类号：

C07D311/96,A61P31/04
申请人：

沈阳药科大学
发明人：

李达翃,徐进宜,华会明,徐盛涛,李占林
地址：

110016 辽宁省沈阳市沈河区文化路103号
优先权：

CN201610330149A
专利代理机构：

沈阳杰克知识产权代理有限公司

 代理人：

靳玲
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内容摘要

本发明涉及天然药物及药物化学领域，具体涉及一系列具有抗菌活性的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其制备方法和应用，所述的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物具有如下结构：其中，R1为氧代、含有1‑8个碳原子的脂肪酰基、卤素取代含有1‑8个碳原子的脂肪酰基、含有1‑12个碳原子的芳香酰基或卤素取代芳香酰基；R2为含有1‑8个碳原子的烷基，3‑8个碳原子的环烷基，含有5‑12个碳原子的芳香环或卤代芳香环、5‑12个碳原子芳杂环或卤代芳杂环，所述的芳杂环中包含1‑3个N、O、或S的杂原子。

权利要求书

1.通式(I)所示的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其药学上可接受的盐在制备抗枯草芽孢杆菌或金黄色葡萄球菌药物中的应用；其中，R为氧代；R为含有1-8个碳原子的烷基，3-8个碳原子的环烷基，含有5-12个碳原子的芳香环或卤代芳香环、5-12个碳原子芳杂环或卤代芳杂环，所述的芳杂环中包含1-3个N、O、或S的杂原子。 2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其药学上可接受的盐中：R为氧代；R为含有1-8个碳原子的烷基，3-8个碳原子的环烷基，含有6个碳原子的芳香环或卤代芳香环、5-12个碳原子芳杂环或卤代芳杂环，所述的芳杂环中包含1-3个N原子。 3.螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其药学上可接受的盐在制备抗枯草芽孢杆菌或金黄色葡萄球菌药物中的应用，其特征在于，所述的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其药学上可接受的盐的结构如下： 4.如权利要求1-3任何一项所述的应用，其特征在于，所述的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体组成药物组合物。

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物及药物化学领域，具体涉及一系列螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物。本发明公开了这些化合物的制备方法及在制备抗菌药物中应用。

背景技术

螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物结构复杂而新颖，活性优良。但对其生物活性研究主要集中在抗肿瘤方向，其他相关领域几乎没有报道。

本发明以冬凌草甲素为先导化合物，设计并合成了螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物，并测试了合成衍生物在抗菌方面的生物活性。

发明内容

发明要解决的技术问题是寻找抗菌活性好的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其药学上可接受的盐，并进一步提供一种药物组合物。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

本发明所述的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其药学上可接受的盐具有如下的结构通式：

其中，R1为氧代、含有1-8个碳原子的脂肪酰基、卤素取代含有1-8个碳原子的脂肪酰基、含有6-12个碳原子的芳香酰基或卤素取代芳香酰基；R2为含有1-8个碳原子的烷基，3-8个碳原子的环烷基，含有5-12个碳原子的芳香环或卤代芳香环、5-12个碳原子芳杂环或卤代芳杂环，所述的芳杂环中包含1-3个N、O、或S的杂原子。

优选地，R1为氧代、含有1-8个碳原子的脂肪酰基、卤素取代含有1-8个碳原子的脂肪酰基；R2为含有1-8个碳原子的烷基，3-8个碳原子的环烷基，含有6个碳原子的芳香环或卤代芳香环、5-12个碳原子芳杂环或卤代芳杂环，所述的芳杂环中包含1-3个N原子。

更优选地，R1为氧代或乙酰基；R2为甲基、4-氟苯基、3-氟苯基、2-氟苯基、2,3,4,5-四氟苯基或4-三氟甲基苯基。

本发明还具体公开了结构如下所示的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其药学上可接受的盐：

所涉及的化合物名称为：

ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14β-O-乙酰基-6,7-开环-16-贝壳杉烯(4a)

ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14β-O-(4-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(4b)

ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14β-O-(3-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(4c)

ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14β-O-(2-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(4d)

ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14β-O-(2,3,4,5-四氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(4e)

ent-1α-O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14β-O-(4-三氟甲基苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(4f)

ent-1α-O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14β-O-乙酰基-6,7-开环-16-贝壳杉烯(9a)

ent-1α-O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14β-O-(4-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(9b)

ent-1α-O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14β-O-(3-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(9c)

ent-1α-O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14β-O-(2-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(9d)

ent-1α-O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14β-O-(2,3,4,5-四氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(9e)

ent-1α-O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14β-O-(4-三氟甲基苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(9f)

本发明的衍生物可用下列方法制备得到：

制备得到的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其药学上可接受的盐具有如下的结构通式：

其中，R1为氧代、含有1-8个碳原子的脂肪酰基、卤素取代含有1-8个碳原子的脂肪酰基、含有1-12个碳原子的芳香酰基或卤素取代芳香酰基；R2为含有1-8个碳原子的烷基，3-8个碳原子的环烷基，含有5-12个碳原子的芳香环或卤代芳香环、5-12个碳原子芳杂环或卤代芳杂环，所述的芳杂环中包含1-3个N、O、或S的杂原子。

优选地，R1为氧代、含有1-8个碳原子的脂肪酰基、卤素取代含有1-8个碳原子的脂肪酰基；R2为含有1-8个碳原子的烷基，3-8个碳原子的环烷基，含有6个碳原子的芳香环或卤代芳香环、5-12个碳原子芳杂环或卤代芳杂环，所述的芳杂环中包含1-3个N原子。

更优选地，R1为氧代或乙酰基；R2为甲基、4-氟苯基、3-氟苯基、2-氟苯基、2,3,4,5-四氟苯基或4-三氟甲基苯基。

冬凌草甲素(1)用琼斯试剂选择性地将1-位羟基氧化为酮羰基得到化合物(2)，将化合物2溶解于四氢呋喃中，加入碳酸钠和四乙酸铅，室温搅拌。TLC监测反应，约10min，反应完全，过滤，蒸除四氢呋喃，加入水并用二氯甲烷萃取三次，合并有机层，再用饱和食盐水洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到1-位羰基螺内酯型6,7-开环冬凌草甲素(3)，粗产物不用经过柱层析可直接用于下一步衍生化反应。将螺内酯型化合物(3)与不同的酸(乙酸、4-氟苯甲酸、3-氟苯甲酸、2-氟苯甲酸、2,3,4,5-四氟苯甲酸或4-三氟甲基苯甲酸)在DMAP，EDCI作用下，反应生成1-位羰基螺内酯型6,7-开环冬凌草甲素14-位衍生物4a-f。由冬凌草甲素(1)出发，经过7,14-位丙酮叉保护(5)，1-位乙酰化(6)，再脱丙酮叉保护，得到1-O-乙酰基冬凌草甲素即毛栲利素(7)，将其溶解于四氢呋喃中，加入碳酸钠和四乙酸铅，室温搅拌，TLC监测反应。约10min，反应完全，过滤，蒸除四氢呋喃，加入水并用二氯甲烷萃取三次，合并有机层，再用饱和食盐水洗两次，无水硫酸钠干燥有机层，过滤，浓缩，得到1-位乙酰氧基螺内酯型6,7-开环冬凌草甲素(8)，粗产物不用经过柱层析可直接用于下一步衍生化反应。将螺内酯型化合物(8)与不同的酸在DMAP、EDCI作用下，反应生成1-位乙酰氧基螺内酯型6,7-开环冬凌草甲素14-位衍生物9a-f。

所述的酸为：乙酸、4-氟苯甲酸、3-氟苯甲酸、2-氟苯甲酸、2,3,4,5-四氟苯甲酸、4-三氟甲基苯甲酸。

药理试验证明，本发明的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物具有很好的抗菌作用，可以用于进一步制备抗菌药物。

具体实施方式：

实施例1

ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14β-O-乙酰基-6,7-开环-16-贝壳杉烯(4a)

将冬凌草甲素72mg(0.2mmol)溶解于丙酮中，加入琼斯试剂氧化，至不再产生新的斑点，过滤蒸干溶剂，得1-位氧化冬凌草甲素2。将100mg化合物2(0.28mmol)溶于约20ml四氢呋喃中，加入240mg的Na2CO3(2.26mmol)和425mg的四乙酸铅(1mmol)，室温搅拌反应约10min，TLC监测反应，待反应完全，过滤，收集滤液。减压蒸除四氢呋喃，加入约15ml水，用二氯甲烷萃取三次，每次10ml，合并有机相，再用饱和食盐水洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝300:1)，得到淡黄色固体3。将72mg1-位氧化螺内酯型冬凌草甲素衍生物3(0.2mmol)溶于10ml无水二氯甲烷中，加入相应的酸(0.3mmol)、EDCI(93mg，0.6mmol)、催化量的DMAP，室温搅拌12h。TLC监测反应，待反应完全或不继续进行时，停止反应。水洗后分液，有机相用饱和食盐水洗，再用无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝500:1至100:1)，得到目标化合物，产率69％:mp.96-97℃；IR(KBr)υmax 3440,2962,2025,1771,1732,1648,1463,1373,1176cm–1；1H NMR(CDCl3,300MHz),δ(ppm):9.85(1H,s,-CHO),6.21(1H,s,17-CH2),5.72(1H,s,14-CH),5.62(1H,s,17-CH2),4.95,4.73(each 1H,dd,JA＝JB＝11.7Hz,20-CH2),3.14(1H,d,J＝9.3Hz,13-CH)；ESI MS m/z:420.2[M+NH4]+,403.1[M+H]+,437.5[M+Cl]-；HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C22H27O7:403.1751,found 403.1762。

实施例2

ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14β-O-(4-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(4b)

白色粉末状固体,产率12％:mp.244-246℃；IR(KBr)υmax 2963,1763,1724,1604,1505,1283,1261,1151,1093,1050,1016,854,802,761,686,612cm–1；1H NMR(CDCl3,500MHz),δ(ppm):9.90(1H,s,-CHO),7.97(2H,m,Ar-H),7.07(2H,m,Ar-H),6.31(1H,s,17-CH2),6.16(1H,s,14-CH),5.63(1H,s,17-CH2),4.88,4.50(each 1H,dd,JA＝JB＝12.5Hz,20-CH2),3.34(1H,d,J＝7.5Hz,13-CH)；13C NMR(CDCl3,125MHz),δ(ppm):210.12,204.03,198.11,166.15,163.87,147.10,132.05,127.31,125.90,120.98,115.72,74.61,67.41,60.70,59.92,52.20,45.23,41.53,36.56,33.21,30.34,29.16,23.90,17.94；ESI MS m/z:483.1[M+H]+,500.1[M+NH4]+；HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C27H28FO7:483.1814,found 483.1811。

实施例3

ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14β-O-(3-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(4c)

白色粉末状固体,产率14％:mp.118-120℃；IR(KBr)υmax 2961,1763,1725,1591,1486,1448,1384,1286,1269,1201,1098,751cm–1；1H NMR(CDCl3,500MHz),δ(ppm):9.88(1H,s,-CHO),7.73(1H,m,Ar-H),7.61(1H,m,Ar-H),7.37(1H,m,Ar-H),7.23(1H,m,Ar-H),6.32(1H,s,17-CH2),6.18(1H,s,14-CH),5.65(1H,s,17-CH2),4.88,4.51(each 1H,dd,JA＝JB＝12.5Hz,20-CH2),3.33(1H,d,J＝7.5Hz,13-CH),2.64(1H,m,12-CH2),2.53(1H,m,12-CH2),2.46(2H,m,11-CH2),1.86(1H,m,9-CH),1.80(2H,m,2-CH2),1.72(2H,m,3-CH2),1.48(1H,m,5-CH2),1.27(3H,s,18-CH3),1.25(3H,s,19-CH3)；MS ESI m/z:483.2[M+H]+,500.2[M+NH4]+,505.2[M+Na]+,521.1[M+K]+；HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C27H28FO7:483.1814,found483.1803。

实施例4

ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14β-O-(2-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(4d)

白色粉末状固体,产率13％:mp.206-208℃；IR(KBr)υmax 2924,2853,1701,1686,1655,1615,1561,1466,1384,1257,1090,775,649cm–1；1H NMR(CDCl3,500MHz),δ(ppm):9.87(1H,s,-CHO),7.85(1H,m,Ar-H),7.50(1H,m,Ar-H),7.15(1H,m,Ar-H),7.07(1H,m,Ar-H),6.29(1H,s,17-CH2),6.19(1H,s,14-CH),5.62(1H,s,17-CH2),4.90,4.50(each 1H,dd,JA＝JB＝12.3Hz,20-CH2),3.33(1H,d,J＝7.5Hz,13-CH),2.64(1H,m,12-CH2),2.53(1H,m,12-CH2),2.46(2H,m,11-CH2),1.89(1H,m,9-CH),1.86(2H,m,2-CH2),1.68(2H,m,3-CH2),1.48(1H,m,5-CH2),1.26(3H,s,18-CH3),1.25(3H,s,19-CH3)；13C NMR(CDCl3,125MHz),δ(ppm):210.16,204.13,198.13,166.07,163.66,162.76,160.81,147.08,131.68,125.35,121.23,120.61,115.64,74.90,67.44,60.58,59.93,52.23,45.26,41.49,36.46,33.26,30.14,29.19,23.93,17.94；ESI MS m/z:483.1[M+H]+,500.3[M+NH4]+；HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C27H28FO7:483.1814,found 483.1807。

实施例5

ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14β-O-(2,3,4,5-四氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(4e)

白色粉末状固体,产率31％:mp.82-84℃；IR(KBr)υmax 2961,2924,2852,1728,1629,1528,1488,1375,1286,1261,1219,1098,1036,921,875,800,689cm–1；1H NMR(CDCl3,300MHz),δ(ppm):9.87(1H,s,-CHO),7.52(1H,m,Ar-H),6.30(1H,s,17-CH2),5.65(1H,s,17-CH2),4.90,4.58(each 1H,dd,JA＝JB＝12.0Hz,20-CH2),3.28(1H,d,J＝6.9Hz,13-CH),2.64(1H,m,12-CH2),2.53(1H,m,12-CH2),2.46(2H,m,11-CH2),1.87(1H,m,9-CH),1.77(2H,m,2-CH2),1.53(2H,m,3-CH2),1.29(1H,m,5-CH2),1.26(3H,s,18-CH3),1.22(3H,s,19-CH3)；MS ESI m/z:537.1[M+H]+；HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C27H25F4O7:537.1531,found537.1520。

实施例6

ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14β-O-(4-三氟甲基苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(4f)

将100mg冬凌草甲素1(0.27mmol)溶于3ml无水丙酮中，加入0.4ml的2,2-二甲氧基丙烷和催化量的对甲基苯磺酸，在氮气保护条件下，回流反应约1h，反应液冷却至室温后，加入10ml饱和NaHCO3溶液，用二氯甲烷萃取三次，每次10ml，合并有机相，用饱和食盐水洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，硅胶柱层析(石油醚﹕丙酮＝3﹕1)，得5白色固体94mg。将80mg化合物5(0.20mmol)溶于约10ml无水二氯甲烷中，加入0.3ml乙酸酐和催化量的DMAP，室温条件下搅拌反应1h，TLC监测反应，待反应完全，停止反应。用饱和食盐水洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，粗品6直接用于下一步反应。将80mg化合物6(0.2mmol)溶解于15ml四氢呋喃中，加入15ml的10％盐酸水溶液，室温搅拌1h。蒸除四氢呋喃，用二氯甲烷萃取三次，每次约10ml，合并有机相，饱和食盐水洗有机相两次，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，硅胶柱层析(石油醚∶丙酮＝2﹕1)，得白色固体7。将100mg的1-位乙酰化冬凌草甲素(0.28mmol)溶于约20ml四氢呋喃中，加入240mg的Na2CO3(2.26mmol)和425mg四乙酸铅(1mmol)，室温搅拌10min，TLC监测反应，待反应完全，过滤，收集滤液。减压蒸除四氢呋喃，加入约15ml水，二氯甲烷萃取三次，每次10ml，合并有机相。再用饱和食盐水洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝300:1)，得到96mg淡黄色粉末8。将80mg 9(0.2mmol)溶于10ml无水二氯甲烷中，加入相应的酸(0.3mmol)、EDCI(93mg，0.6mmol)、催化量的DMAP，室温搅拌12h。TLC监测反应，待反应完全或不继续进行时，停止反应。水洗后分液，有机相用饱和食盐水洗，再用无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝500:1至100:1)，得到目标化合物。白色粉末状固体,产率37％:mp.252-254℃；IR(KBr)υmax 2968,1761,1732,1710,1412,1383,1325,1291,1261,1281,1127,1101,1065,1051,1018,768,701cm–1；1H NMR(CDCl3,500MHz),δ(ppm):9.85(1H,s,-CHO),8.04(1H,d,J＝8.1Hz,Ar-H),7.80(1H,d,J＝8.1Hz,Ar-H),7.65(1H,d,J＝8.1Hz,Ar-H),7.17(1H,d,J＝8.1Hz,Ar-H),6.29(1H,s,17-CH2),6.22(1H,s,14-CH),5.61(1H,s,17-CH2),4.88,4.50(each 1H,dd,JA＝JB＝12.5Hz,20-CH2),3.32(1H,d,J＝7.5Hz,13-CH),2.62(1H,m,12-CH2),2.10(1H,m,12-CH2),1.91(2H,m,11-CH2),1.72(1H,m,9-CH),1.69(2H,m,2-CH2),1.57(2H,m,3-CH2),1.27(1H,m,5-CH2),1.25(3H,s,18-CH3),1.24(3H,s,19-CH3)；13C NMR(CDCl3,125MHz),δ(ppm):210.14,204.16,198.08,166.10,163.78,133.12,132.76,130.14,129.95,125.81,121.32,75.00,67.45,60.49,59.97,52.29,45.32,41.49,36.52,33.27,30.36,29.27,23.85,17.94；ESI MS m/z:533.1[M+H]+,550.3[M+NH4]+；HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C28H28F3O7:533.1782,found 533.1784。

实施例7

ent-1α-O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14β-O-乙酰基-6,7-开环-16-贝壳杉烯(9a)

白色粉末状固体,产率69％:mp.128-130℃；IR(KBr)υmax 3441,2956,2025,1746,1455,1372,1239cm–1；1H NMR(CDCl3,300MHz),δ(ppm):9.79(1H,d,J＝4.2Hz,-CHO),6.25(1H,s,17-CH2),5.90(1H,s,14-CH),5.63(1H,s,17-CH2),5.22,5.12(each 1H,dd,JA＝JB＝12.3Hz,20-CH2),4.66(1H,m,1-CH),3.09(1H,d,J＝9.0Hz,13-CH),2.04(3H,s,-CH3),1.17(3H,s,-CH3),1.09(3H,s,-CH3),1.03(3H,s,-CH3)；ESI MS m/z:464.3[M+NH4]+,447.2[M+H]+；HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C34H32O8:447.2013,found 447.2019。

实施例8

ent-1α-O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14β-O-(4-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(9b)

白色粉末状固体,产率18％:mp.221-223℃；1H NMR(CDCl3,500MHz),δ(ppm):9.81(1H,s,-CHO),7.95(2H,m,Ar-H),7.06(2H,m,Ar-H),6.30(1H,s,17-CH2),6.15(1H,s,14-CH),5.63(1H,s,17-CH2),5.09,4.86(each 1H,dd,JA＝JB＝12.0Hz,20-CH2),3.26(1H,d,J＝8.0Hz,13-CH)；ESI MS m/z:527.2[M+H]+；HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C29H32FO8:527.2076,found 527.2053。

实施例9

ent-1α-O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14β-O-(3-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(9c)

白色粉末状固体,产率19％:mp.116-117℃；1H NMR(CDCl3,500MHz),δ(ppm):9.78(1H,s,-CHO),7.70(1H,m,Ar-H),7.64(1H,m,Ar-H),7.33(1H,m,Ar-H),7.25(1H,m,Ar-H),6.33(1H,s,17-CH2),6.17(1H,s,14-CH),5.62(1H,s,17-CH2),5.07,4.87(each 1H,dd,JA＝JB＝12.5Hz,20-CH2),3.23(1H,d,J＝7.0Hz,13-CH)；MS ESI m/z:527.2[M+H]+；HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C29H32FO8:527.2076,found 527.2066。

实施例10

ent-1α-O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14β-O-(2-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(9d)

白色粉末状固体,产率17％:mp.203-204℃；1H NMR(CDCl3,500MHz),δ(ppm):9.82(1H,s,-CHO),7.79(1H,m,Ar-H),7.53(1H,m,Ar-H),7.12(1H,m,Ar-H),7.11(1H,m,Ar-H),6.29(1H,s,17-CH2),6.19(1H,s,14-CH),5.64(1H,s,17-CH2),4.98,4.85(each 1H,dd,JA＝JB＝12.0Hz,20-CH2),3.26(1H,d,J＝7.5Hz,13-CH)；ESI MS m/z:527.2[M+H]+；HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C29H32FO8:527.2076,found 527.2075。

实施例11

ent-1α-O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14β-O-(2,3,4,5-四氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(9e)

白色粉末状固体,产率27％:mp.108-110℃；1H NMR(CDCl3,500MHz),δ(ppm):9.80(1H,s,-CHO),7.49(1H,m,Ar-H),6.31(1H,s,17-CH2),5.64(1H,s,17-CH2),5.17,4.98(each 1H,dd,JA＝JB＝12.5Hz,20-CH2),3.25(1H,d,J＝7.0Hz,13-CH)；MS ESI m/z:581.2[M+H]+；HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C29H29F4O8:581.1793,found 581.1788。

实施例12

ent-1α-O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14β-O-(4-三氟甲基苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉烯(9f)

淡黄色粉末状固体,产率28％:mp.226-228℃；IR(KBr)υmax 2927,2855,1729,1466,1412,1375,1326,1278,1129,1066,863,772cm–1；1H NMR(CDCl3,300MHz),δ(ppm):9.79(1H,s,-CHO),8.06(2H,m,Ar-H),7.67(2H,m,Ar-H),6.32(1H,s,17-CH2),5.98(1H,s,14-CH),5.66(1H,s,17-CH2),5.14,4.76(each 1H,dd,JA＝JB＝12.0Hz,20-CH2),3.13(1H,d,J＝8.4Hz,13-CH),1.26(3H,s,18-CH3),1.22(3H,s,19-CH3)；13C NMR(CDCl3,75MHz),δ(ppm):202.36,170.44,131.35,128.71,121,78,74.55,73.29,66.39,62.59,45.78,42.29,39.45,32.90,29.68,21.43,17.46；MS ESI m/z:577.1[M+H]+；HR-MS(ESI,M+NH4)m/z:calcd for C30H35F3NO8:577.2044,found 577.2059。

实施例13：

下面是本发明部分化合物的药理实验结果：

实验设备与试剂

仪器 超净工作台(苏净集团安泰公司)

灭菌锅(日本株式会社平山制作所)

恒温培养箱(Thermo electron Corporation)

恒温培养震荡器(上海智城分析仪器制造有限公司)

磁力搅拌器(北京欣维尔)

试剂 均购置于禹王和莱博试剂公司

菌株 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis(CMCC 63501)，金黄色

葡萄球菌Staphylococcus aureus(ATCC 29213)

实验方法

体外抑菌活性实验方法

分别配制枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的菌悬液，首先菌种活化传代培养至F2代，用灭菌蒸馏水和培养基稀释菌悬液分别至1×107CFU/mL，备用。氯霉素用作阳性对照药，将待测化合物和阳性对照药均配置成1mg/mL浓度，无菌条件下，将不同浓度药物及菌悬液依次加入96孔板中，同时设立阳性对照组和溶媒空白对照组，之后置37℃培养箱中培养18-24h，观察有无菌落生长，以未见细菌生长的最低药物浓度为最低抑菌浓度(MIC)。

实验结果

表1实施例对2种菌株抑制活性的MIC值(μg/ml)

样品 B.subtilis S.aureus 实施例1 16 64 实施例2 2 8 实施例3 2 4 实施例4 4 4 实施例5 32 32 实施例6 32 64 实施例7 16 32 实施例8 4 4 实施例9 2 8 实施例10 4 8 实施例11 32 64 实施例12 16 32 氯霉素 8 4

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资源描述

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201610330149.5 (22)申请日 2016.05.18 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105968081 A (43)申请公布日 2016.09.28 (73)专利权人 沈阳药科大学 地址 110016 辽宁省沈阳市沈河区文化路 103号 (72)发明人 李达翃徐进宜华会明徐盛涛 李占林 (74)专利代理机构 沈阳杰克知识产权代理有限 公司 21207 代理人 靳玲 (51)Int.Cl. C07D 311/96(2006.01)(续) (56)对比。

2、文件 CN 102002051 A,2011.04.06, CN 102295649 A,2011.12.28, CN 102002051 A,2011.04.06, CN 102295649 A,2011.12.28, CN 102850369 A,2013.01.02, JP 特开平7-69886 A,1995.03.14, Lei Wang等.The conversion of oridonin to spirolactone-type or enmein-type diterpenoid: Synthesis and biological evaluation of ent-6,7-s。

3、eco-oridonin derivatives as novel potential anticancer agents. European Journal of Medicinal Chemstry .2012,第52卷第242-250页. Dahong Li等.Synthesis of spirolactone-type diterpenoid derivatives from kaurene-type oridonin with improved antiproliferative effects and their apoptosis-inducing activity in hum。

4、an hepatoma Bel-7402 cells. European Journal of Medicinal Chemstry .2012,第59卷第322- 328页. Lei Wang等.The conversion of oridonin to spirolactone-type or enmein-type diterpenoid: Synthesis and biological evaluation of ent-6,7-seco-oridonin derivatives as novel potential anticancer agents. European Journ。

5、al of Medicinal Chemstry .2012,第52卷第242-250页.(续) 审查员 王楠 (54)发明名称 一系列具有抗菌活性的螺内酯型对映贝壳 杉烷衍生物 (57)摘要 本发明涉及天然药物及药物化学领域， 具体 涉及一系列具有抗菌活性的螺内酯型对映贝壳 杉烷衍生物及其制备方法和应用， 所述的螺内酯 型对映贝壳杉烷衍生物具有如下结构： 其中， R1 为氧代、 含有1-8个碳原子的脂肪酰基、 卤素取代 含有1-8个碳原子的脂肪酰基、 含有1-12个碳原 子的芳香酰基或卤素取代芳香酰基； R2为含有1- 8个碳原子的烷基， 3-8个碳原子的环烷基， 含有 5-12个碳原子的芳。

6、香环或卤代芳香环、 5-12个碳 原子芳杂环或卤代芳杂环， 所述的芳杂环中包含 1-3个N、 O、 或S的杂原子。 转续页 权利要求书1页 说明书9页 CN 105968081 B 2018.11.16 CN 105968081 B (51)Int.Cl. A61P 31/04(2006.01) (56)对比文件 Dahong Li等.Synthesis of spirolactone-type diterpenoid derivatives from kaurene-type oridonin with improved antiproliferative effects and their。

7、 apoptosis-inducing activity in human hepatoma Bel-7402 cells. European Journal of Medicinal Chemstry .2012,第59卷第322- 328页. KENJI OSAWA等.Antibacterial trichorabdal diterpenes from Rabdosia Trichocarpa. Phytochemistry .1994,第36卷 (第5期),第1287-1291页. Dahong Li等.Antitumor and Antibacterial Derivatives of。

8、 Oridonin: A Main Composition of Dong-Ling-Cao. Molecules .2016,第21卷 2/2 页 2 接上页 CN 105968081 B 1.通式(I)所示的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其药学上可接受的盐在制备抗枯草 芽孢杆菌或金黄色葡萄球菌药物中的应用； 其中， R1为氧代； R2为含有1-8个碳原子的烷基， 3-8个碳原子的环烷基， 含有5-12个碳原 子的芳香环或卤代芳香环、 5-12个碳原子芳杂环或卤代芳杂环， 所述的芳杂环中包含1-3个 N、 O、 或S的杂原子。 2.如权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述的螺内酯型对映贝壳。

9、杉烷衍生物及其药 学上可接受的盐中： R1为氧代； R2为含有1-8个碳原子的烷基， 3-8个碳原子的环烷基， 含有6个碳原子的芳香 环或卤代芳香环、 5-12个碳原子芳杂环或卤代芳杂环， 所述的芳杂环中包含1-3个N原子。 3.螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其药学上可接受的盐在制备抗枯草芽孢杆菌或金 黄色葡萄球菌药物中的应用， 其特征在于， 所述的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其药学 上可接受的盐的结构如下： 4.如权利要求1-3任何一项所述的应用， 其特征在于， 所述的螺内酯型对映贝壳杉烷衍 生物及其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体组成药物组合物。 权利要求书 1/1 页 2 CN 105。

10、968081 B 3 一系列具有抗菌活性的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物 技术领域 0001 本发明涉及天然药物及药物化学领域， 具体涉及一系列螺内酯型对映贝壳杉烷衍 生物。 本发明公开了这些化合物的制备方法及在制备抗菌药物中应用。 背景技术 0002 螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物结构复杂而新颖， 活性优良。 但对其生物活性研究 主要集中在抗肿瘤方向， 其他相关领域几乎没有报道。 0003 本发明以冬凌草甲素为先导化合物， 设计并合成了螺内酯型对映贝壳杉烷衍生 物， 并测试了合成衍生物在抗菌方面的生物活性。 发明内容 0004 发明要解决的技术问题是寻找抗菌活性好的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其 药。

11、学上可接受的盐， 并进一步提供一种药物组合物。 0005 为解决上述技术问题， 本发明提供如下技术方案： 0006 本发明所述的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其药学上可接受的盐具有如下的 结构通式： 0007 0008 其中， R1为氧代、 含有1-8个碳原子的脂肪酰基、 卤素取代含有1-8个碳原子的脂肪 酰基、 含有6-12个碳原子的芳香酰基或卤素取代芳香酰基； R2为含有1-8个碳原子的烷基， 3-8个碳原子的环烷基， 含有5-12个碳原子的芳香环或卤代芳香环、 5-12个碳原子芳杂环或 卤代芳杂环， 所述的芳杂环中包含1-3个N、 O、 或S的杂原子。 0009 优选地， R1为氧代、 含。

12、有1-8个碳原子的脂肪酰基、 卤素取代含有1-8个碳原子的脂 肪酰基； R2为含有1-8个碳原子的烷基， 3-8个碳原子的环烷基， 含有6个碳原子的芳香环或 卤代芳香环、 5-12个碳原子芳杂环或卤代芳杂环， 所述的芳杂环中包含1-3个N原子。 0010 更优选地， R1为氧代或乙酰基； R2为甲基、 4-氟苯基、 3-氟苯基、 2-氟苯基、 2,3,4,5- 四氟苯基或4-三氟甲基苯基。 0011 本发明还具体公开了结构如下所示的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其药学上 可接受的盐： 说明书 1/9 页 3 CN 105968081 B 4 0012 0013 所涉及的化合物名称为： 0014 。

13、ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14 -O-乙酰基-6,7-开环-16-贝壳杉烯(4a) 0015 ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14 -O-(4-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉 烯(4b) 0016 ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14 -O-(3-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉 烯(4c) 0017 ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14 -O-(2-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉 烯(4d) 0018 ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14 -O-(2,3,4,5-四氟苯。

14、甲酰基)-6,7-开环- 16-贝壳杉烯(4e) 0019 ent-1 -O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14 -O-(4-三氟甲基苯甲酰基)-6, 7-开环-16-贝壳杉烯(4f) 0020 ent-1 -O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14 -O-乙酰基-6,7-开环-16-贝壳 杉烯(9a) 0021 ent-1 -O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14 -O-(4-氟苯甲酰基)-6,7-开 说明书 2/9 页 4 CN 105968081 B 5 环-16-贝壳杉烯(9b) 0022 ent-1 -O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7。

15、,20-内酯-14 -O-(3-氟苯甲酰基)-6,7-开 环-16-贝壳杉烯(9c) 0023 ent-1 -O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14 -O-(2-氟苯甲酰基)-6,7-开 环-16-贝壳杉烯(9d) 0024 ent-1 -O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14 -O-(2,3,4,5-四氟苯甲酰基)- 6,7-开环-16-贝壳杉烯(9e) 0025 ent-1 -O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14 -O-(4-三氟甲基苯甲酰基)-6, 7-开环-16-贝壳杉烯(9f) 0026 本发明的衍生物可用下列方法制备得到： 0027。

16、 0028 制备得到的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物及其药学上可接受的盐具有如下的结 构通式： 0029 0030 其中， R1为氧代、 含有1-8个碳原子的脂肪酰基、 卤素取代含有1-8个碳原子的脂肪 说明书 3/9 页 5 CN 105968081 B 6 酰基、 含有1-12个碳原子的芳香酰基或卤素取代芳香酰基； R2为含有1-8个碳原子的烷基， 3-8个碳原子的环烷基， 含有5-12个碳原子的芳香环或卤代芳香环、 5-12个碳原子芳杂环或 卤代芳杂环， 所述的芳杂环中包含1-3个N、 O、 或S的杂原子。 0031 优选地， R1为氧代、 含有1-8个碳原子的脂肪酰基、 卤素取代含有1-8。

17、个碳原子的脂 肪酰基； R2为含有1-8个碳原子的烷基， 3-8个碳原子的环烷基， 含有6个碳原子的芳香环或 卤代芳香环、 5-12个碳原子芳杂环或卤代芳杂环， 所述的芳杂环中包含1-3个N原子。 0032 更优选地， R1为氧代或乙酰基； R2为甲基、 4-氟苯基、 3-氟苯基、 2-氟苯基、 2,3,4,5- 四氟苯基或4-三氟甲基苯基。 0033 冬凌草甲素(1)用琼斯试剂选择性地将1-位羟基氧化为酮羰基得到化合物(2)， 将 化合物2溶解于四氢呋喃中， 加入碳酸钠和四乙酸铅， 室温搅拌。 TLC监测反应， 约10min， 反 应完全， 过滤， 蒸除四氢呋喃， 加入水并用二氯甲烷萃取三次。

18、， 合并有机层， 再用饱和食盐水 洗两次， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩， 得到1-位羰基螺内酯型6,7-开环冬凌草甲素(3)， 粗 产物不用经过柱层析可直接用于下一步衍生化反应。 将螺内酯型化合物(3)与不同的酸(乙 酸、 4-氟苯甲酸、 3-氟苯甲酸、 2-氟苯甲酸、 2,3,4,5-四氟苯甲酸或4-三氟甲基苯甲酸)在 DMAP， EDCI作用下， 反应生成1-位羰基螺内酯型6,7-开环冬凌草甲素14-位衍生物4a-f。 由 冬凌草甲素(1)出发， 经过7,14-位丙酮叉保护(5)， 1-位乙酰化(6)， 再脱丙酮叉保护， 得到 1-O-乙酰基冬凌草甲素即毛栲利素(7)， 将其溶解于四氢。

19、呋喃中， 加入碳酸钠和四乙酸铅， 室温搅拌， TLC监测反应。 约10min， 反应完全， 过滤， 蒸除四氢呋喃， 加入水并用二氯甲烷萃 取三次， 合并有机层， 再用饱和食盐水洗两次， 无水硫酸钠干燥有机层， 过滤， 浓缩， 得到1- 位乙酰氧基螺内酯型6,7-开环冬凌草甲素(8)， 粗产物不用经过柱层析可直接用于下一步 衍生化反应。 将螺内酯型化合物(8)与不同的酸在DMAP、 EDCI作用下， 反应生成1-位乙酰氧 基螺内酯型6,7-开环冬凌草甲素14-位衍生物9a-f。 0034 所述的酸为： 乙酸、 4-氟苯甲酸、 3-氟苯甲酸、 2-氟苯甲酸、 2,3,4,5-四氟苯甲酸、 4-三氟。

20、甲基苯甲酸。 0035 药理试验证明， 本发明的螺内酯型对映贝壳杉烷衍生物具有很好的抗菌作用， 可 以用于进一步制备抗菌药物。 具体实施方式： 0036 实施例1 0037 ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14 -O-乙酰基-6,7-开环-16-贝壳杉烯(4a) 0038 将冬凌草甲素72mg(0.2mmol)溶解于丙酮中， 加入琼斯试剂氧化， 至不再产生新的 斑点， 过滤蒸干溶剂， 得1-位氧化冬凌草甲素2。 将100mg化合物2(0.28mmol)溶于约20ml四 氢呋喃中， 加入240mg的Na2CO3(2.26mmol)和425mg的四乙酸铅(1mmol)， 室温搅拌。

21、反应约 10min， TLC监测反应， 待反应完全， 过滤， 收集滤液。 减压蒸除四氢呋喃， 加入约15ml水， 用二 氯甲烷萃取三次， 每次10ml， 合并有机相， 再用饱和食盐水洗两次， 无水硫酸钠干燥， 过滤、 浓缩， 硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇300:1)， 得到淡黄色固体3。 将72mg1-位氧化螺内酯型 冬凌草甲素衍生物3(0.2mmol)溶于10ml无水二氯甲烷中， 加入相应的酸(0.3mmol)、 EDCI (93mg， 0.6mmol)、 催化量的DMAP， 室温搅拌12h。 TLC监测反应， 待反应完全或不继续进行时， 停止反应。 水洗后分液， 有机相用饱和食盐水洗， 再用。

22、无水硫酸钠干燥、 过滤、 浓缩， 硅胶柱 说明书 4/9 页 6 CN 105968081 B 7 层析(二氯甲烷： 甲醇500:1至100:1)， 得到目标化合物， 产率69:mp.96-97； IR(KBr) max 3440,2962,2025,1771,1732,1648,1463,1373,1176cm1； 1H NMR(CDCl3,300MHz), (ppm):9.85(1H,s,-CHO),6.21(1H,s,17-CH2),5.72(1H,s,14-CH),5.62(1H,s,17-CH2), 4.95,4.73(each 1H,dd,JAJB11.7Hz,20-CH2),3.。

23、14(1H,d,J9.3Hz,13-CH)； ESI MS m/z:420.2M+NH4+,403.1M+H+,437.5M+Cl-； HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C22H27O7: 403.1751,found 403.1762。 0039 实施例2 0040 ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14 -O-(4-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉 烯(4b) 0041 白色粉末状固体,产率12:mp.244-246； IR(KBr) max 2963,1763,1724,1604, 1505,1283,1261,1151,1093,1050,。

24、1016,854,802,761,686,612cm1； 1H NMR(CDCl3, 500MHz), (ppm):9.90(1H,s,-CHO),7.97(2H,m,Ar-H),7.07(2H,m,Ar-H),6.31(1H,s,17- CH2),6.16(1H,s,14-CH),5.63(1H,s,17-CH2),4.88,4.50(each 1H,dd,JAJB12.5Hz, 20-CH2),3.34(1H,d,J7.5Hz,13-CH)； 13C NMR(CDCl3,125MHz), (ppm):210.12,204.03, 198.11,166.15,163.87,147.10,13。

25、2.05,127.31,125.90,120.98,115.72,74.61,67.41, 60.70,59.92,52.20,45.23,41.53,36.56,33.21,30.34,29.16,23.90,17.94； ESI MS m/z: 483.1M+H+,500.1M+NH4+； HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C27H28FO7:483.1814,found 483.1811。 0042 实施例3 0043 ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14 -O-(3-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉 烯(4c) 0044 白色粉末状固体,。

26、产率14:mp.118-120； IR(KBr) max 2961,1763,1725,1591, 1486,1448,1384,1286,1269,1201,1098,751cm1； 1H NMR(CDCl3,500MHz), (ppm):9.88 (1H,s,-CHO),7.73(1H,m,Ar-H),7.61(1H,m,Ar-H),7.37(1H,m,Ar-H),7.23(1H,m,Ar-H), 6.32(1H,s,17-CH2),6.18(1H,s,14-CH),5.65(1H,s,17-CH2),4.88,4.51(each 1H,dd,JA JB12.5Hz,20-CH2),3.3。

27、3(1H,d,J7.5Hz,13-CH),2.64(1H,m,12-CH2),2.53(1H,m,12- CH2),2.46(2H,m,11-CH2),1.86(1H,m,9-CH),1.80(2H,m,2-CH2),1.72(2H,m,3-CH2),1.48 (1H,m,5-CH2),1.27(3H,s,18-CH3),1.25(3H,s,19-CH3)； MS ESI m/z:483.2M+H+,500.2 M+NH4+,505.2M+Na+,521.1M+K+； HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C27H28FO7: 483.1814,found483.1803。 。

28、0045 实施例4 0046 ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14 -O-(2-氟苯甲酰基)-6,7-开环-16-贝壳杉 烯(4d) 0047 白色粉末状固体,产率13:mp.206-208； IR(KBr) max 2924,2853,1701,1686, 1655,1615,1561,1466,1384,1257,1090,775,649cm1； 1H NMR(CDCl3,500MHz), (ppm): 9.87(1H,s,-CHO),7.85(1H,m,Ar-H),7.50(1H,m,Ar-H),7.15(1H,m,Ar-H),7.07(1H,m,Ar- H),6.29。

29、(1H,s,17-CH2),6.19(1H,s,14-CH),5.62(1H,s,17-CH2),4.90,4.50(each 1H,dd, JAJB12.3Hz,20-CH2),3.33(1H,d,J7.5Hz,13-CH),2.64(1H,m,12-CH2),2.53(1H,m, 12-CH2),2.46(2H,m,11-CH2),1.89(1H,m,9-CH),1.86(2H,m,2-CH2),1.68(2H,m,3-CH2), 说明书 5/9 页 7 CN 105968081 B 8 1.48(1H,m,5-CH2),1.26(3H,s,18-CH3),1.25(3H,s,19-CH3。

30、)； 13C NMR(CDCl3,125MHz), (ppm):210.16,204.13,198.13,166.07,163.66,162.76,160.81,147.08,131.68,125.35, 121.23,120.61,115.64,74.90,67.44,60.58,59.93,52.23,45.26,41.49,36.46,33.26, 30.14,29.19,23.93,17.94； ESI MS m/z:483.1M+H+,500.3M+NH4+； HR-MS(ESI,M+H)m/ z:calcd for C27H28FO7:483.1814,found 483.1807。

31、。 0048 实施例5 0049 ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14 -O-(2,3,4,5-四氟苯甲酰基)-6,7-开环- 16-贝壳杉烯(4e) 0050 白色粉末状固体,产率31:mp.82-84； IR(KBr)max 2961,2924,2852,1728, 1629,1528,1488,1375,1286,1261,1219,1098,1036,921,875,800,689cm1； 1H NMR(CDCl3, 300MHz), (ppm):9.87(1H,s,-CHO),7.52(1H,m,Ar-H),6.30(1H,s,17-CH2),5.65(1H,s, 。

32、17-CH2),4.90,4.58(each 1H,dd,JAJB12.0Hz,20-CH2),3.28(1H,d,J6.9Hz,13-CH), 2.64(1H,m,12-CH2),2.53(1H,m,12-CH2),2.46(2H,m,11-CH2),1.87(1H,m,9-CH),1.77(2H, m,2-CH2),1.53(2H,m,3-CH2),1.29(1H,m,5-CH2),1.26(3H,s,18-CH3),1.22(3H,s,19-CH3)； MS ESI m/z:537.1M+H+； HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C27H25F4O7:537.153。

33、1, found537.1520。 0051 实施例6 0052 ent-1,6,7,15-四氧代-7,20-内酯-14 -O-(4-三氟甲基苯甲酰基)-6,7-开环-16- 贝壳杉烯(4f) 0053 将100mg冬凌草甲素1(0.27mmol)溶于3ml无水丙酮中， 加入0.4ml的2,2-二甲氧基 丙烷和催化量的对甲基苯磺酸， 在氮气保护条件下， 回流反应约1h， 反应液冷却至室温后， 加入10ml饱和NaHCO3溶液， 用二氯甲烷萃取三次， 每次10ml， 合并有机相， 用饱和食盐水洗 两次， 无水硫酸钠干燥， 过滤、 浓缩， 硅胶柱层析(石油醚 丙酮3 1)， 得5白色固体94mg。。

34、 将 80mg化合物5(0.20mmol)溶于约10ml无水二氯甲烷中， 加入0.3ml乙酸酐和催化量的DMAP， 室温条件下搅拌反应1h， TLC监测反应， 待反应完全， 停止反应。 用饱和食盐水洗， 分液， 有机 相用无水硫酸钠干燥， 过滤、 浓缩， 粗品6直接用于下一步反应。 将80mg化合物6(0.2mmol)溶 解于15ml四氢呋喃中， 加入15ml的10盐酸水溶液， 室温搅拌1h。 蒸除四氢呋喃， 用二氯甲 烷萃取三次， 每次约10ml， 合并有机相， 饱和食盐水洗有机相两次， 无水硫酸钠干燥， 过滤、 浓缩， 硅胶柱层析(石油醚 丙酮2 1)， 得白色固体7。 将100mg的1-。

35、位乙酰化冬凌草甲素 (0.28mmol)溶于约20ml四氢呋喃中， 加入240mg的Na2CO3(2.26mmol)和425mg四乙酸铅 (1mmol)， 室温搅拌10min， TLC监测反应， 待反应完全， 过滤， 收集滤液。 减压蒸除四氢呋喃， 加入约15ml水， 二氯甲烷萃取三次， 每次10ml， 合并有机相。 再用饱和食盐水洗两次， 无水硫 酸钠干燥， 过滤、 浓缩， 硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇300:1)， 得到96mg淡黄色粉末8。 将 80mg 9(0.2mmol)溶于10ml无水二氯甲烷中， 加入相应的酸(0.3mmol)、 EDCI(93mg， 0.6mmol)、 催化量的D。

36、MAP， 室温搅拌12h。 TLC监测反应， 待反应完全或不继续进行时， 停止反 应。 水洗后分液， 有机相用饱和食盐水洗， 再用无水硫酸钠干燥、 过滤、 浓缩， 硅胶柱层析(二 氯甲烷： 甲醇500:1至100:1)， 得到目标化合物。 白色粉末状固体,产率37:mp.252-254 ； IR(KBr)max 2968,1761,1732,1710,1412,1383,1325,1291,1261,1281,1127,1101, 1065,1051,1018,768,701cm1； 1H NMR(CDCl3,500MHz), (ppm):9.85(1H,s,-CHO),8.04 说明书 6/。

37、9 页 8 CN 105968081 B 9 (1H,d,J8.1Hz,Ar-H),7.80(1H,d,J8.1Hz,Ar-H),7.65(1H,d,J8.1Hz,Ar-H),7.17 (1H,d,J8.1Hz,Ar-H),6.29(1H,s,17-CH2),6.22(1H,s,14-CH),5.61(1H,s,17-CH2), 4.88,4.50(each 1H,dd,JAJB12.5Hz,20-CH2),3.32(1H,d,J7.5Hz,13-CH),2.62(1H, m,12-CH2) ,2.10(1H,m,12-CH2),1.91(2H,m,11-CH2),1.72(1H,m,9-CH。

38、),1.69(2H,m,2- CH2),1.57(2H,m,3-CH2),1.27(1H,m,5-CH2),1.25(3H,s,18-CH3),1.24(3H,s,19-CH3)； 13C NMR(CDCl3,125MHz), (ppm):210.14,204.16,198.08,166.10,163.78,133.12,132.76, 130.14,129.95,125.81,121.32,75.00,67.45,60.49,59.97,52.29,45.32,41.49,36.52, 33.27,30.36,29.27,23.85,17.94； ESI MS m/z:533.1M+H+,5。

39、50.3M+NH4+； HR-MS(ESI,M +H)m/z:calcd for C28H28F3O7:533.1782,found 533.1784。 0054 实施例7 0055 ent-1 -O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14 -O-乙酰基-6,7-开环-16-贝壳 杉烯(9a) 0056 白色粉末状固体,产率69:mp.128-130； IR(KBr) max 3441,2956,2025,1746, 1455,1372,1239cm1； 1H NMR(CDCl3,300MHz), (ppm):9.79(1H,d,J4.2Hz,-CHO),6.25 (1H,s,17。

40、-CH2),5.90(1H,s,14-CH),5.63(1H,s,17-CH2),5.22,5.12(each 1H,dd,JAJB 12.3Hz,20-CH2),4.66(1H,m,1-CH),3.09(1H,d,J9.0Hz,13-CH),2.04(3H,s,-CH3),1.17 (3H,s,-CH3),1.09(3H,s,-CH3),1.03(3H,s,-CH3)； ESI MS m/z:464.3M+NH4+,447.2M+H +； HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C34H32O8:447.2013,found 447.2019。 0057 实施例8 0058 。

41、ent-1 -O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14 -O-(4-氟苯甲酰基)-6,7-开 环-16-贝壳杉烯(9b) 0059 白色粉末状固体,产率18:mp.221-223； 1H NMR(CDCl3,500MHz), (ppm):9.81 (1H,s,-CHO),7.95(2H,m,Ar-H),7.06(2H,m,Ar-H),6.30(1H,s,17-CH2),6.15(1H,s,14- CH),5.63(1H,s,17-CH2),5.09,4.86(each 1H,dd,JAJB12.0Hz,20-CH2),3.26(1H,d,J 8.0Hz,13-CH)； ESI M。

42、S m/z:527.2M+H+； HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C29H32FO8: 527.2076,found 527.2053。 0060 实施例9 0061 ent-1 -O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14 -O-(3-氟苯甲酰基)-6,7-开 环-16-贝壳杉烯(9c) 0062 白色粉末状固体,产率19:mp.116-117； 1H NMR(CDCl3,500MHz), (ppm):9.78 (1H,s,-CHO),7.70(1H,m,Ar-H),7.64(1H,m,Ar-H),7.33(1H,m,Ar-H),7.25(1H,m,Ar-。

43、H), 6.33(1H,s,17-CH2),6.17(1H,s,14-CH),5.62(1H,s,17-CH2),5.07,4.87(each 1H,dd,JA JB12.5Hz,20-CH2),3.23(1H,d,J7.0Hz,13-CH)； MS ESI m/z:527.2M+H+； HR-MS(ESI, M+H)m/z:calcd for C29H32FO8:527.2076,found 527.2066。 0063 实施例10 0064 ent-1 -O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14 -O-(2-氟苯甲酰基)-6,7-开 环-16-贝壳杉烯(9d) 0065 白色。

44、粉末状固体,产率17:mp.203-204； 1H NMR(CDCl3,500MHz), (ppm):9.82 (1H,s,-CHO),7.79(1H,m,Ar-H),7.53(1H,m,Ar-H),7.12(1H,m,Ar-H),7.11(1H,m,Ar-H), 说明书 7/9 页 9 CN 105968081 B 10 6.29(1H,s,17-CH2),6.19(1H,s,14-CH),5.64(1H,s,17-CH2),4.98,4.85(each 1H,dd,JA JB12.0Hz,20-CH2),3.26(1H,d,J7.5Hz,13-CH)； ESI MS m/z:527.2M+。

45、H+； HR-MS(ESI, M+H)m/z:calcd for C29H32FO8:527.2076,found 527.2075。 0066 实施例11 0067 ent-1 -O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14 -O-(2,3,4,5-四氟苯甲酰基)- 6,7-开环-16-贝壳杉烯(9e) 0068 白色粉末状固体,产率27:mp.108-110； 1H NMR(CDCl3,500MHz), (ppm):9.80 (1H,s,-CHO),7.49(1H,m,Ar-H),6.31(1H,s,17-CH2),5.64(1H,s,17-CH2),5.17,4.98(each。

46、 1H,dd,JAJB12.5Hz,20-CH2),3.25(1H,d,J7.0Hz,13-CH)； MS ESI m/z:581.2M+H+； HR-MS(ESI,M+H)m/z:calcd for C29H29F4O8:581.1793,found 581.1788。 0069 实施例12 0070 ent-1 -O-乙酰基-6,7,15-三氧代-7,20-内酯-14 -O-(4-三氟甲基苯甲酰基)-6, 7-开环-16-贝壳杉烯(9f) 0071 淡黄色粉末状固体,产率28:mp.226-228； IR(KBr)max 2927,2855,1729, 1466,1412,1375,132。

47、6,1278,1129,1066,863,772cm1； 1H NMR(CDCl3,300MHz), (ppm): 9.79(1H,s,-CHO),8.06(2H,m,Ar-H),7.67(2H,m,Ar-H),6.32(1H,s,17-CH2),5.98(1H,s, 14-CH),5.66(1H,s,17-CH2),5.14,4.76(each 1H,dd,JAJB12.0Hz,20-CH2),3.13(1H, d,J8.4Hz,13-CH),1.26(3H,s,18-CH3),1.22(3H,s,19-CH3)； 13C NMR(CDCl3,75MHz), (ppm):202.36,170。

48、.44,131.35,128.71,121,78,74.55,73.29,66.39,62.59,45.78,42.29, 39.45,32.90,29.68,21.43,17.46； MS ESI m/z:577.1M+H+； HR-MS(ESI,M+NH4)m/z:calcd for C30H35F3NO8:577.2044,found 577.2059。 0072 实施例13： 0073 下面是本发明部分化合物的药理实验结果： 0074 实验设备与试剂 0075 仪器 超净工作台(苏净集团安泰公司) 0076 灭菌锅(日本株式会社平山制作所) 0077 恒温培养箱(Thermo elec。

49、tron Corporation) 0078 恒温培养震荡器(上海智城分析仪器制造有限公司) 0079 磁力搅拌器(北京欣维尔) 0080 试剂 均购置于禹王和莱博试剂公司 0081 菌株 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis(CMCC 63501)， 金黄色 0082 葡萄球菌Staphylococcus aureus(ATCC 29213) 0083 实验方法 0084 体外抑菌活性实验方法 0085 分别配制枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的菌悬液， 首先菌种活化传代培养至F2 代， 用灭菌蒸馏水和培养基稀释菌悬液分别至1107CFU/mL， 备用。 氯霉素用作阳性对照 药， 将待测化合物和阳性对照药均配置成1mg/mL浓度， 无菌条件下， 将不同浓度药物及菌悬 液依次加入96孔板中， 同时设立阳性对照组和溶媒空白对照组， 之后置37培养箱中培养 18-24h， 观察有无菌落生长， 以未见细菌生长的最低药物浓度为最低抑菌浓度(MIC)。 说明书 8/9 页 10 CN 105968081 B 11 。

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